JP2019142902A

JP2019142902A - Ｎ−［３−［（４ａｒ，７ａｓ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩

Info

Publication number: JP2019142902A
Application number: JP2019074951A
Authority: JP
Inventors: アンドリューコーテス，デイビッド; Andrew Coates David; ダニエルウルフエンジェル，クライグ; Daniel Wolfangel Craig
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2015-01-30
Filing date: 2019-04-10
Publication date: 2019-08-29
Also published as: SI3250575T1; ECSP17048768A; TW201636354A; AU2016211827B2; LT3250575T; US10080758B2; WO2016122968A1; RS59730B1; CN107108657A; CA2969475A1; AU2016211827A1; JP6723250B2; AR103406A1; DOP2017000159A; PT3250575T; PE20171333A1; MX2017009713A; EA201791229A1; CY1122548T1; SV2017005478A

Abstract

【課題】医薬処方物の製剤及び製造における有用性を高めるための、固形状態の安定性、及び化学的な安定性が改善された新規の形態のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの提供。【解決手段】Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩である化合物。【選択図】なし

Description

本発明は、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミ
ジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カル
ボキサミドのトルエンスルホン酸（トシル酸）塩、当該トシル酸塩を含有する医薬組成物
、生理学的障害を治療するための当該トシル酸塩の使用方法、ならびにその合成に有用な
中間体及び方法に関する。

本発明は、アルツハイマー病、ならびにアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ：ａｍｙ
ｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ）の神経毒性があり高度に凝集性のペプ
チド断片であるアミロイドβ（Ａベータ）ペプチドが関与する他の疾患及び障害の治療分
野に関する。アルツハイマー病は、世界で数百万人の患者が罹患している破壊的な神経変
性性疾患である。現在承認されている市販薬は患者に一過性で対症療法的な効果しかもた
らしていないことを鑑みると、アルツハイマー病の治療には大きなアンメットニーズが存
在する。

アルツハイマー病は脳内のＡベータの生成、凝集、及び沈着により特徴づけられる。β
−セクレターゼ（ＢＡＣＥ：アミロイド前駆体タンパク質βサイト切断酵素：β−ｓｉｔ
ｅａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｌｅａｖｉｎｇｅｎｚ
ｙｍｅ）の完全阻害または部分阻害は、マウスモデルにおいてプラーク関連の病態または
プラーク依存性の病態に対して著しい効果を有することが示されていることから、Ａベー
タペプチド値のわずかな低下であっても、プラーク量及びシナプス障害に長期間の大幅な
低減をもたらし得、特にアルツハイマー病の治療において多大な治療利益をもたらし得る
ことが示唆される。

米国特許第８，８４１，２９３号は、たとえばアルツハイマー病などのＡベータペプチ
ド介在性障害の治療のための特定のＢＡＣＥ阻害剤を開示しており、特にＢＡＣＥ阻害剤
のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
、及びその対応する塩酸塩を開示している。

医薬処方物の製剤及び製造における有用性を高めるために、固形状態の安定性、及び化
学的な安定性が改善された新規の形態のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−
６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［
３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メト
キシ−ピラジン−２−カルボキサミドが所望されている。したがって、本発明は、Ｎ−［
３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−
４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル
］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル
酸塩を提供するものである。さらに、本発明は結晶質であるＮ−［３−［（４ａＲ，７ａ
Ｓ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テ
トラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フ
ェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を提供するもので
ある。本発明はさらに、回析角に対し０．２°の許容誤差で、１９．６°、１３．８°、
及び１８．５°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、５
．０°の回析角２シータでのＸ線回析スペクトルの実質的なピークにより特徴づけられる
、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
のトシル酸塩を提供するものである。

本発明はまた、有効量のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フ
ルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］
［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジ
ン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を、かかる治療を必要としている患者に投与するこ
とを含む、患者のアルツハイマー病を治療する方法を提供する。本発明はさらに、Ｎ−［
３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−
４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル
］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル
酸塩の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者の軽度認
知機能障害からアルツハイマー病への進行を治療する方法を提供する。本発明はまた、Ｎ
−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル
）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−
イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのト
シル酸塩の有効量をかかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者におい
てＢＡＣＥを阻害する方法を提供する。本発明はまた、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）
−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラ
ヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニ
ル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の有効量をかかる治療
を必要としている患者に投与することを含む、アミロイド前駆タンパク質のＢＡＣＥ介在
性切断を阻害する方法を提供する。本発明はさらに、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−
２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒ
ドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル
］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の有効量をかかる治療を
必要としている患者に投与することを含む、Ａベータペプチドの産生を阻害する方法を提
供する。

さらに本発明は、治療、特にアルツハイマー病の治療、または軽度認知機能障害からア
ルツハイマー病への進行の治療における使用のためのＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−
２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒ
ドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル
］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を提供する。さらに本発
明は、アルツハイマー病の治療のための医薬品の製造、または軽度認知機能障害のアルツ
ハイマー病への進行の治療のための医薬品の製造のためのＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ
）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テト
ラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェ
ニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の使用を提供する。

さらに本発明は、回析角に対し０．２°の許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び
１８．５°からなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、５．０
°の回析角２シータでのＸ線回析スペクトルの実質的なピークにより特徴づけられる、Ｎ
−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル
）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−
イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのト
シル酸塩の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者のア
ルツハイマー病を治療する方法を提供する。本発明はまた、治療、特にアルツハイマー病
の治療、または軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行の治療における使用のた
めの、回析角に対し０．２°の許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°か
らなる群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、５．０°の回析角２
シータでのＸ線回析スペクトルの実質的なピークにより特徴づけられる、Ｎ−［３−［（
４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ
，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−
フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を提
供する。さらに本発明は、アルツハイマー病の治療のための医薬品の製造、または軽度認
知機能障害のアルツハイマー病への進行の治療のための医薬品の製造のための、回析角に
対し０．２°の許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°からなる群から選
択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、５．０°の回析角２シータでのＸ線
回析スペクトルの実質的なピークにより特徴づけられる、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ
）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テト
ラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェ
ニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩を提供する。

本発明はさらに、１つ以上の薬剤的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、Ｎ−
［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）
−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イ
ル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシ
ル酸塩を含有する医薬組成物を提供する。本発明はまた、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ
）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テト
ラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェ
ニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩の合成のための新規
の中間体及び方法を包含する。

軽度認知機能障害は、臨床所見、及び軽度認知機能障害を示す患者が徐々にアルツハイ
マー型認知症へと進行することに基づいた、アルツハイマー病に関連した認知症の潜在的
な前駆期として定義されている。（Morris, et al., Arch. Neurol., 58, 397-405 (2001
); Petersen, et al., Arch. Neurol., 56, 303-308 (1999)）。「軽度認知機能障害のア
ルツハイマー病への進行の治療」という用語は、患者において、軽度認知機能障害がアル
ツハイマー病へと進行することを遅延させること、食い止めること、または回復にむかわ
せることを含む。

本明細書において用いられる場合、「治療すること」（ｔｒｅａｔｉｎｇ、またはｔｏ
ｔｒｅａｔ）という用語は、既存の症状もしくは障害の進行または重症度を抑えること
、遅延させること、食い止めること、または回復にむかわせることを含む。

本明細書において用いられる場合、「患者」という用語は、ヒトを指す。

「Ａベータペプチド生成の阻害」という用語は、患者において、Ａベータペプチドのｉ
ｎｖｉｖｏレベルの低下を意味すると解釈される。

本明細書において用いられる場合、「有効量」という用語は、診断を受けた患者または
治療を受けている患者において、当該患者への単回投与または反復投与により所望される
効果をもたらす、本発明化合物もしくはその薬剤的に許容可能な塩の量または投与量を指
す。

有効量は、公知の技術を使用することにより、及び類似した環境下で得られた結果を観
察することにより、当業者としての担当診断医によって容易に決定することができる。患
者の有効量の決定において、限定されないが、患者の種；大きさ、年齢、及び一般健康状
態；関与する具体的な疾患または障害；疾患もしくは障害の程度、または関与、または重
症度；個々の患者の反応性；投与される特定の化合物；投与方法；投与される製剤のバイ
オアベイラビリティの特徴；選択される用法；併用薬の使用；及び他の関連状況をはじめ
とする多くの因子が担当診断医により考慮される。

本発明の化合物は、一般的に広範な用量域で有効である。たとえば、１日当たりの用量
は通常、約０．０１〜約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲内にある。一部の例において、前述の
範囲の下限値を下回る用量レベルがより適切である場合もあり、一方で他の場合において
は、許容可能な副作用と共にさらに多量の投与量が用いられる場合がある。従って、上述
の用量域は決して本発明の範囲を限定することを意図していない。

本発明化合物は、好ましくは、経口、経皮、及び非経口の経路をはじめとする、化合物
が生体利用可能となる任意の経路により投与される医薬組成物として製剤化される。最も
好ましくは、かかる組成物は経口投与用、または経皮投与用であり、経口投与が特に好ま
しい。かかる医薬組成物、及び同組成物の製剤方法は当分野に周知である。（たとえばRe
mington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, Editor, 21st Edition,
Lippincott, Williams & Wilkins, 2006を参照のこと）。

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
のトシル酸塩は、本発明の治療方法に特に有用であるが、特定の形態が好ましい。以下の
段落にかかる形態を記載する。これら好ましい実施形態は、本発明の医薬組成物、治療方
法、及び新規化合物に適用可能であることが理解されるであろう。

回析角に対し０．２°の許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°からな
る群から選択されるピークのうちの１つ以上と組み合わされた、５．０°の回析角２シー
タでのＸ線回析スペクトルの実質的なピークにより特徴づけられる、Ｎ−［３−［（４ａ
Ｒ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５
，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フル
オロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの結晶トシル酸塩が特
に好ましい。

当業者は、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミ
ジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カル
ボキサミドが、スキームＡに示される互変異性体で存在し得ることを認識するであろう。
本明細書において、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロ
ピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，
３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２
−カルボキサミドの特定の互変異性体のうちの１つに何らかの言及がされた場合、互変異
性体及びそれらのすべての混合物の両方が包含されることを理解されたい。
スキームＡ

さらに、以下のスキームに記載される特定の中間体は、１つ以上の窒素保護基を含有し
てもよい。その可変保護基は、実施される特定の反応条件及び特定の変換に依存して、各
場合で同じであっても、異なっていてもよい。保護条件及び脱保護条件は、当業者には周
知であり、文献中に記載されている（例えば、“Greene’s Protective Groups in Organ
ic Synthesis”, Fourth Edition, by Peter G.M. Wuts and Theodora W. Greene, John
Wiley and Sons, Inc. 2007を参照のこと）。

明確性を目的として、以下のスキームにおいて、ある立体化学中心は特定されないまま
であり、ある置換基は省略されているが、決して当該スキームの教示を限定することは意
図されていない。さらに個々の異性体、鏡像異性体、及びジアステレオマーは、本発明化
合物の合成における任意の都合のよいポイントで、たとえば選択的結晶化技術またはキラ
ルクロマトグラフィーなどの方法により、当業者により分離または分割されてもよい（た
とえば、J. Jacques, et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wile
y and Sons, Inc., 1981、及びE.L. Eliel and S.H. Wilen,” Stereochemistry of Orga
nic Compounds”, Wiley-Interscience, 1994を参照のこと）。「異性体１」及び「異性
体２」という記号はそれぞれ、キラルクロマトグラフィーから１番目、及び２番目に溶出
する化合物を指し、キラルクロマトグラフィーが合成の早い段階で開始された場合、この
同じ記号が、引き続く中間体及び実施例にも適用される。

以下のように、いくつかの略語を定義する。「アセトニトリル」とは、ＡＣＮを指す。
「ＡＰＰ」とは、アミロイド前駆タンパク質を指す。「ＣＳＦ」とは、脳脊髄液を指す。
「ＤＣＭ」とは、ジクロロメタンを指す。「ＤＩＰＥＡ」とは、ジイソプロピルエチルア
ミン、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピル−プロパン−２−アミン、またはＮ，Ｎ−ジイソプ
ロピルエチルアミンを指す。「ＤＭＥＭ」とは、ダルベッコ変法イーグル培地を指す。「
ＤＭＦ」とは、ジメチルホルムアミドを指す。「ＤＭＳＯ」とはジメチルスルホキシドを
指す。「ＥＤＣＩ」とは、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイ
ミド塩酸塩を指す。「ｅｅ」とは、鏡像体過剰率を指す。「ＥｔＯＡｃ」とは、酢酸エチ
ルを指す。「Ｅｘ」とは、実施例を指す。「Ｆ１２」とは、ハムＦ１２培地を指す。「Ｆ
ＢＳ」とは、ウシ胎児血清を指す。「ＦＲＥＴ」とは、蛍光共鳴エネルギー移動を指す。
「ＨＥＫ」とは、ヒト胎児腎細胞を指す。「ＨＯＡｃ」とは、酢酸を指す。「ＨＯＢｔ」
とは、１−ヒドロキシルベンゾトリアゾール水和物を指す。「ＨＰＬＣ」とは、高速液体
クロマトグラフィーを指す。「ＩＣ_５０」とは、その剤に可能な最大阻害反応の５０％を
生じさせる薬剤の濃度を指す。「ｍｉｎ」とは、分（複数含む）を指す。「ＭＴＢＥ」と
は、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを指す。「ＰＤＡＰＰ」とは、血小板由来アミロイ
ド前駆タンパク質を指す。「Ｐｒｅｐ」とは、製造を指す。「ＲＦＵ」とは、相対蛍光単
位を指す。「ＳＣＸ」とは、強カチオン交換を指す。「Ｒ_ｔ」とは、保持時間を指す。及
び「ＴＨＦ」とは、テトラヒドロフランを指す。

当業者は、「トシル酸」、「トルエンスルホン酸」、「ｐ−トルエンスルホン酸」、及
び「４−メチルベンゼンスルホン酸」という用語が、以下の構造の化合物を指すことを理
解している。

したがって、当業者は、本明細書において、以下の名称のいずれかに対する言及が、以
下の構造の塩を指すことを理解している：
「Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
のトシル酸塩」、
「Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
；トルエンスルホン酸」、
「Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
；ｐ−トルエンスルホン酸」、及び
「Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
；４−メチルベンゼンスルホン酸」。

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
のトシル酸塩は、当分野に公知の様々な方法により製造することができ、そのうちのいく
つかを以下の製造及び実施例において例示する。さらに、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ
）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テト
ラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェ
ニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの遊離塩基、及びその対応するＨ
Ｃｌ塩は、米国特許第８，８４１，２９３号に記載されるように、当業者により製造する
ことができる。記載されている各経路の特定の製造工程は、異なる方法で組み合わされて
もよく、または本発明化合物を製造するための異なる製造からの工程と併合されてもよい
。各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、ろ過、粉砕、または結晶
化をはじめとする当分野で周知の標準的な方法により回収することができる。試薬及び出
発物質は当業者が容易に入手可能である。

製造１
２−ブロモ−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン

Ｎ−ブロモスクシンイミド（９８４ｇ、５．５３モル）を、１−（５−ブロモ−２−フ
ルオロ−フェニル）エタノン（１０００ｇ、４．６モル）及びｐ−トルエンスルホン酸（
１３１５ｇ、７．６４モル）のＤＣＭ溶液（７Ｌ）に３５℃で分割して加える。混合物を
攪拌し、４時間、４０℃に加熱する。混合物を２４℃まで冷却し、７％ＮａＨＣＯ_３（５
Ｌ）を添加する。層を分離させ、有機層を１０％Ｎａ_２ＳＯ_３（５Ｌ）及び水（５Ｌ）を
用いて洗浄する。有機層を２〜３体積まで濃縮し、表題化合物を得て、それをさらなる精
製を行うことなく用いる。

別の製造１
１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン（８０ｇ、０．３７モル）をＤ
ＣＭ（８００ｍＬ）に溶解し、１０℃まで冷却する。臭素（６３ｇ、０．３９モル）を、
５時間かけてゆっくりと添加する。３０分後、追加の臭素（３．５ｇ、０．０６モル）を
添加する。３０分後、混合物を室温まで加温し、有機層を、ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ
）とＮａＨＣＯ_３水溶液（４００ｍＬ）の混合溶液を用いて洗浄する。有機層を、ＮａＨ
ＣＯ_３水溶液（４００ｍＬ）、ＮａＨＳＯ_３水溶液（２×４００ｍＬ）、及びＮａＣｌ水
溶液を用いて連続的に洗浄する。有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮して残留物を
得る。この残留物を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）と石油エーテル（５００ｍＬ）の混合溶液中
に溶解する。この溶液を０．５時間、−５０℃に冷却し、固形物をろ過により集め、表題
化合物を得る（８４ｇ、７７％）。¹H NMR (CDCl₃)δ4.46 (d, 2H), 7.07 (dd, 1H), 7.6
6 (m, 1H), 8.02 (dd, 1H)。

製造２
２−［アリル（ベンジル）アミノ］−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エ
タノン

２−ブロモ−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン（２５．１ｇ、８
４．８ミリモル）を、Ｎ−ベンジルプロパ−２−エン−１−アミン（１５．０ｇ、１０２
ミリモル）のトルエン（２００ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（５９ｍＬ、３３８ミリモル）の溶
液に室温で添加する。この混合物の表面下に窒素をスパージングしながら、１０分間、室
温で攪拌することにより、この混合物を脱酸素化する。反応物を４０℃まで加熱し、２．
５時間攪拌し、次いで追加のＮ−ベンジルプロ−２−エン−１−アミン（２．０ｇ、１３
．６ミリモル）を添加する。反応物を４．５時間、４０℃で攪拌し、その後室温まで冷却
する。この物質を、さらに精製を行うことなく使用する。この溶液を、以下のパラメータ
を使用するＨＰＬＣにより、表題化合物に関して解析する：ＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ
ＡｃｑｕｉｔｙＵｌｔｒａＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔ
ｏｇｒａｐｈｙ（ＵＰＬＣ（登録商標））Ｃ８２．１×１００ｍｍ１．７μｍ；移動相
Ａ：ＴＦＡ（４ｍＬ）とＡＣＮ（１０ｍＬ）を水（４Ｌ）に添加することにより調製され
る０．１％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ＴＦＡ水溶液＋０．２％ＡＣＮ（ｖｏｌ／ｖｏｌ）、移動
相Ｂ：ＴＦＡ（４ｍＬ）をＡＣＮ（４Ｌ）に添加することにより調製される０．１％ＴＦ
ＡのＡＣＮ溶液。勾配：％Ａ＝１０分間にわたり、９５％〜５３．１％、流速０．８５ｍ
Ｌ／分、カラム温度：４５℃。Ｒ_ｔ＝６．４３分（ＵＶ）。

製造３
５−アリル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−１−［（４−メトキシフ
ェニル）メチル−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール

２−ブロモ−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）エタノン（１３６３ｇ、４
．６１モル）のトルエン溶液（１０Ｌ）に、ジアリルアミン（５３７ｇ、５．５３モル）
及びＤＩＰＥＡ（２３８１ｇ、１８．４２モル）を添加する。この混合物を４０℃で４時
間攪拌し、単離されていない１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（ジア
リルアミノ）エタノンを得る。粗１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（
ジアリルアミノ）エタノンを含有するこの混合物に、Ｎ−（４−メトキシベンジル）ヒド
ロキシルアミン（８４７ｇ、５．５３モル）とチタン（ＩＶ）イソプロポキシド（１９６
５ｇ、６．９１モル）を添加する。この混合物を９０℃で２時間攪拌する。この混合物を
２０℃まで冷却し、５０％クエン酸一水和物（４Ｌ）と飽和Ｎａ_２ＣＯ_３（４Ｌ）を加え
る。層を分離させ、ＭＴＢＥ（５Ｌ）を用いて水層を抽出する。有機抽出物を、水（５Ｌ
）で洗浄し、珪藻土を通してろ過し、乾燥するまで濃縮する。この残留物にＥｔＯＡｃ（
１０Ｌ）及びシュウ酸（５８０ｇ）を加え、固形物をろ過し、１ＮＮａＯＨ（１３Ｌ）
に加える。ＭＴＢＥ（５Ｌ）を加え、この混合物を、珪藻土を通してろ過する。層を分離
させ、有機層を２体積まで濃縮する。ヘプタン（３Ｌ）を加え、溶液を１０℃まで冷却す
る。得られた固形物をろ過し、表題化合物を得る（１３３０ｇ、６４％）。¹H NMR(400 M
Hz, CDCl₃) δ 2.51-2.49(m, 3H), 3.09-3.04(m, 3H), 3.78-3.41(m, 6H), 4.01(m, 1H),
5.24-5.01(m, 2H), 5.89-5.85(m, 1H), 6.82-6.80(m, 2H), 7.51-7.13(m, 3H), 7.63-7.
62(m, 1H), 7.65-7.64(m, 1H)。

製造４
相対−（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェ
ニル）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピ
ロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール、シュウ酸

Ｎ−［（４−メトキシフェニル）メチル］ヒドロキシルアミン（１５．５ｇ、１０１ミ
リモル）を、２−［アリル（ベンジル）アミノ］−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フ
ェニル）エタノンの溶液に４０℃で加え、次いでチタン（ＩＶ）イソプロポキシド（５０
．３ｍＬ、１６９ミリモル）を加えた。この混合物を５分間、システムを通して窒素をス
パージングすることにより脱酸素化する。この混合物を攪拌しながら２時間、９０℃まで
加熱する。この反応混合物をクエン酸（３６ｇ、１８６ミリモル）の水溶液（３６ｇ）を
用いて洗浄し、室温で３０分間攪拌する。飽和水溶液として炭酸ナトリウム（１００ｇ、
９３９ミリモル）を加え、ｐＨをおよそ９に調節する。この混合物を必要に応じて水及び
トルエンで希釈し、層を分離させる。トルエンの層を水（２００ｍＬ）で希釈したＨＣｌ
の水溶液（５．１ｍＬの５ＮＨＣｌ）、次いで水（２００ｍＬ）を用いて洗浄する。ト
ルエン層を粘性のある油状物にまで濃縮する。この油状物をＥｔＯＡｃ（３７５ｍＬ）に
溶解し、ＥｔＯＡｃ（３７５ｍＬ）に溶解させたシュウ酸（１５．４ｇ、１６９ミリモル
）の溶液を室温で攪拌しながら滴下して加える。この混合物を２日間室温で攪拌し、ろ過
し、生成物のケークをＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で洗浄する。固形物を４０℃、真空内で
一晩乾燥させ、シスラセミ混合物（４１．７ｇ、８４％）として表題化合物を得る。ＥＳ
／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９８（Ｍ＋Ｈ）。

製造５
相対Ｎ−［３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−［（４−メトキシフェニル
）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド

相対−（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェ
ニル）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピ
ロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール、シュウ酸（２３．６ｇ、４０．２ミリモル）を、Ｄ
ＣＭ（４００ｍＬ）と５ＮＮａＯＨ水溶液（２００ｍＬ）の混合溶液に加える。この混
合物を１０分間攪拌し、次いで層を分離させる。有機層を濃縮して、相対−（３ａＲ，６
ａＳ）−５−ベンジル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−１−［（４−
メトキシフェニル）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イ
ソキサゾール（２０．０ｇ、４０．２ミリモル）を得る。この物質をジメチルスルホキシ
ド（３６０ｍＬ）、２、２、２−トリフルオロアセトアミド（７．８ｇ、６８ミリモル）
、ヨウ化ナトリウム（１０．３ｇ、６８．６ミリモル）、炭酸カリウム（９．５４ｇ、６
８．３ミリモル）、（１Ｒ、２Ｒ）−Ｎ、Ｎ’−ジメチル−１、２−シクロヘキサンジア
ミン（４．７ｇ、３２ミリモル）、及びヨウ化銅（Ｉ）（１．５３ｇ、８．０３ミリモル
）へと加える。この混合物を１０分間、システムを通して窒素をスパージングすることに
より脱酸素化する。この混合物を１１５℃まで加熱し、５．５時間攪拌し、室温まで冷却
する。ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）を加え、得られた混合物を１０〜
１５分間攪拌する。層を分離させ、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）を用いて水層を逆抽出する
。混合有機層を、塩化アンモニウム２０ｗｔ％水溶液（１００ｍＬ）、次いで塩化リチウ
ム２０ｗｔ％水溶液（１００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）を用いて洗浄する。有機層を硫
酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、乾固するまで濃縮し、シスラセミ混合物として粗表
題化合物を得る（２３．６ｇ、１１１％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３０（Ｍ＋Ｈ）。

製造６
相対−３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−（４−メトキシフェニル）メチ
ル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６ａ−イ
ル］−４−フルオロ−アニリン

相対Ｎ−［３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−［（４−メトキシフェニル
）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−２，２，２−トリフルオロ−アセトアミド（２
１．０ｇ、３９．７ミリモル）をメタノール（２５０ｍＬ）、５ＮＮａＯＨ水溶液（１
０５ｍＬ）、及びエタノール（１０５ｍＬ）に加え、得られた混合物を２時間、５０℃に
加熱する。反応混合物を減圧下、３５〜４０℃で濃縮し、メタノールとエタノールを除去
する。この物質を、ＭＴＢＥ（３２０ｍＬ）と水（３００ｍＬ）の混合溶液中に溶解する
。層を分離させ、有機層を水（１００ｍＬ）、次いで水（４００ｍＬ）と１２ＮＨＣｌ
水溶液（３．５ｍＬ）の混合溶液で洗浄する。水層を、ＭＴＢＥ（４００ｍＬ）、水（１
００ｍＬ）、及び５ＮＮａＯＨ水溶液（２５ｍＬ）の混合溶液に加え、層を分離させる
。水層をＭＴＢＥ（１００ｍＬ）で洗浄する。有機層を１つにまとめ、硫酸マグネシウム
で乾燥し、ろ過し、真空内で濃縮して、シスラセミ混合物として表題化合物を得る（９．
８ｇ、５７％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３５（Ｍ＋Ｈ）。

製造７
相対−Ｎ−３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−［（４−メトキシフェニル
）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド

相対−３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−（４−メトキシフェニル）メチ
ル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６ａ−イ
ル］−４−フルオロ−アニリン（９．４ｇ、２２ミリモル）をＤＣＭ（１１０ｍＬ）、４
−ジメチルアミノピリジン（０．０８ｇ、０．６５ミリモル）、及びトリエチルアミン（
６．１ｍＬ、４３ミリモル）に加え、反応物を０℃に冷却する。この溶液に無水酢酸（３
．４ｇ、３３ミリモル）を滴下して加える。反応物を室温まで加温し、２時間攪拌する。
反応物に水（１４０ｍＬ）を加え、混合物を室温で１０分間、攪拌する。層を分離させ、
水層をＤＣＭ（１００ｍＬ）で洗浄する。混合有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過
し、濃縮してシスラセミ混合物として表題化合物を得る（１０．１ｇ、１００％）。ＥＳ
／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７７（Ｍ＋Ｈ）。

製造８
５−アリル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テ
トラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール塩酸塩

ＴＦＡ（４Ｌ、５２．９モル）を、５−アリル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−
フェニル）−１−［（４−メトキシフェニル）メチル−３、３ａ、４、６−テトラヒドロ
ピロロ［３、４−ｃ］イソキサゾール（１９９０ｇ、４．４５モル）のＤＣＭ溶液（１２
Ｌ）に、温度が３５℃未満に維持される速度で滴下して加える。添加が完了した後、混合
物を３３〜４３℃に加温し、６時間攪拌する。ＮａＯＨ（２０％、１０Ｌ）を、温度が３
５℃未満に維持される速度で添加する。層を分離させ、有機層を水（６Ｌ）で洗浄する。
溶液を濃縮し、エタノール（１６Ｌ）を添加し、混合物を、珪藻土を通してろ過する。ろ
液を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１０Ｌ）を加える。４ＭＨＣｌのＥｔＯＡｃ溶液（８Ｌ）を
加え、得られた固形物をろ過し、乾燥させて表題化合物を得る（１３８５ｇ、８５．６％
）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２７．１（Ｍ＋Ｈ）。

製造９
［１−アリル−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）ピロリジン−
３−イル］メタノール

５−アリル−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テ
トラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール塩酸塩（１４００ｇ、３．８５
モル）のＤＣＭ溶液（７Ｌ）に、ｐＨ＞９となるよう炭酸ナトリウムの飽和水溶液を加え
る。層を分離させ、有機抽出物を１．５体積まで濃縮する。ＨＯＡｃ（１．３８Ｌ）を加
え、溶液を２Ｌまで濃縮する。ＨＯＡｃ（７Ｌ）及び亜鉛粉末（２．５ｋｇ、３８．５モ
ル）を加え、混合物を４０〜５０℃に加熱し、３時間攪拌する。ＥｔＯＡｃ（９．８Ｌ）
を加え、混合物を、珪藻土を通してろ過する。ろ過ケークをＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で洗浄す
る。ろ液を分離させ、水（７Ｌ）を混合有機物に加える。水酸化アンモニウムを、ｐＨ≧
９になるように加える。層を分離させ、有機層を２Ｌまで濃縮する。エタノール（２．８
Ｌ）を加え、溶液を２Ｌまで濃縮する。エタノール（１９Ｌ）を加え、混合物を、珪藻土
を通してろ過し、表題化合物のエタノール溶液を得て、それをさらなる精製を行わずに使
用する。

製造１０
［（３Ｓ，４Ｒ）−１−アリル−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−
（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル］アンモニウム；（２Ｓ，３Ｓ）−４−ヒド
ロキシ−２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］−４−オキソ−ブタン酸塩

ジ−ｐ−トルオイル−Ｌ−酒石酸一水和物（１．０４ｋｇ、２．６９モル）を、［１−
アリル−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）ピロリジン−３−イ
ル］メタノール（１２６４ｇ、３．８５ミリモル）のエタノール溶液（２１Ｌ）に加える
。混合物を６５〜７５℃に加熱し、３時間攪拌する。混合物を５〜１０℃に冷却し、［（
３Ｓ，４Ｒ）−１−アリル−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒド
ロキシメチル）ピロリジン−３−イル］アンモニウム；（２Ｓ，３Ｓ）−４−ヒドロキシ
−２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］−４−オキソ−ブタン酸塩の種晶（
１．０ｇ）を加え、混合物を３時間攪拌する。固形物をろ過し、ろ過ケークを冷エタノー
ル（１．４Ｌ）で洗浄する。ろ過ケークを乾燥し、白色固形物として表題化合物を得る。
第二の溶出異性体のキラル解析：カラム：ＩＣＣｈｉｒａｌｐａｋ、４．６ｍｍ×２５
０ｍｍ×５μｍ；溶離液：９０％ヘキサン（０．３％ジエチルアミン）：１０％エタノー
ル（０．３％ジエチルアミン）；流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２７０ｎｍによって、鏡像異
性的に富化された（９９％ｅｅ）、Ｒ_ｔ＝７．４分の鏡像異性体を確認する。¹H NMR(400
MHz, CD₃OD) δ 2.40(s, 6H), 3.05-3.04(m, 1H), 3.57-3.31(m, 3H), 3.66-3.58(m, 4H
), 3.75-3.74(m, 2H), 5.38-5.36(m, 1H), 5.50-5.46(m, 1H), 5.88(s, 2H), 5.97-5.91(
m, 1H), 7.10-7.05(m, 1H), 7.29(d, J=8.0 Hz, 4H), 7.53-7.51(m, 1H), 7.80-7.78(m,
1H), 8.01(d, J=8.0 Hz, 4H)。

製造１１
相対−１−［３−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジ
ン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］プロパン−２−オン、ジ−トルエンスルホン
酸

相対−Ｎ−３−［（３ａＲ，６ａＳ）−５−ベンジル−１−［（４−メトキシフェニル
）メチル］−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−６
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］アセトアミド（５．０ｇ、１１．０ミリモル）を
、水（７５ｍＬ）、１０％パラジウム炭素（２．５ｇ、２３ミリモル）、ｐ−トルエンス
ルホン酸（５．０ｇ、２６ミリモル）、及びエタノール（７５ｍＬ）に加え、混合物を、
２０時間、室温で５０ｐｓｉの水素雰囲気下、水素化する。混合物を、珪藻土を通してろ
過し、パッドをエタノール（１００ｍＬ）、次いでＤＣＭ（１００ｍＬ）で洗浄する。ろ
液を濃縮し、定量粗収率（８．１ｇ、＞１００％）で、シスラセミ混合物として表題化合
物を得る。この材料をさらなる精製を行うことなく直接使用する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）
：２６８（Ｍ＋Ｈ）。

製造１２
（（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェ
ニル）ピロリジン−３−イル）メタノール

１ＮＨＣｌ（５００ｍＬ、５００ミリモル）を、［（３Ｓ，４Ｒ）−１−アリル−３
−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３
−イル］アンモニウム；（２Ｓ，３Ｓ）−４−ヒドロキシ−２，３−ビス［（４−メチル
ベンゾイル）オキシ］−４−オキソ−ブタン酸塩（１００ｇ、１３９．４ミリモル）の０
℃のＥｔＯＡｃ溶液（５００ｍＬ）に加える。この混合物を１時間攪拌する。水層を分離
させ、ｐＨを、１ＮＮａＯＨを用いて８に調節する。水層を、ＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ
×２）を用いて抽出する。有機層を混合し、水（５００ｍＬ）で洗浄し、濃縮して表題化
合物を得る（４０ｇ、８７％）。第二の溶出異性体のキラル解析：カラム：ＩＣＣｈｉ
ｒａｌｐａｋ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ×５μｍ；溶離液：９０％ヘキサン（０．３％ジ
エチルアミン）：１０％エタノール（０．３％ジエチルアミン）；流速１．０ｍＬ／分、
ＵＶ２７０ｎｍによって、鏡像異性的に富化された（９９．７％ｅｅ）、Ｒ_ｔ＝７．４分
の鏡像異性体を確認する。¹H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ 2.78-2.70(m, 5H), 3.16-3.00(m,
3H), 3.87-3.75(m, 1H), 3.90-3.84(m, 1H), 5.24-5.11(m, 2H), 5.91-5.87(m, 1H), 6.
95-6.91(m, 1H), 7.35-7.32(m, 1H), 7.67- 7.65 (m, 1H)。

製造１３
相対−Ｎ−［３−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−１−（５−フルオロピリミジン−２
−イル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル
］アセトアミド

相対−１−［３−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジ
ン−３−イル］−４−フルオロ−フェニル］プロパン−２−オン、ジ−トルエンスルホン
酸（７．５グラム、１２．３ミリモル）を、ＡＣＮ（７５ｍＬ）に加える。２−クロロ−
５−フルオロピリミジン（２．４４ｇ、１８．４ミリモル）及びＤＩＰＥＡ（７．５ｍＬ
、４３ミリモル）を加え、混合物を２０時間、７０℃に加熱する。混合物を室温まで冷却
し、濃縮する。水（５０ｍＬ）を加え、混合物を１時間、スラリー形態として攪拌する。
混合物をろ過し、真空下、室温で乾燥させ、シスラセミ混合物として表題化合物を得る（
３．０ｇ）。残りの水溶液は、クロロホルム（３×２０ｍＬ）を用いて抽出し、硫酸ナト
リウムで乾燥し、乾固するまで濃縮し、真空内で乾燥させ、さらに表題化合物を得る（１
．８ｇ）。総粗収率（４．８ｇ、１１０％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６４（Ｍ＋Ｈ）
。

製造１４
Ｎ−（（（３Ｓ，４Ｒ）−１−アリル−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）
−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル）カルバモチオイル）ベンズアミド

イソチオシアン酸ベンゾイル（１５．０ｇ、９１．９ミリモル）を、（（３Ｒ，４Ｓ）
−１−アリル−４−アミノ−４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）ピロリジン−
３−イル）メタノール（３０ｇ、９１．１ミリモル）の０℃のＴＨＦ溶液（４００ｍＬ）
に加える。溶液を２５℃まで加温し、１時間攪拌して、表題化合物のＴＨＦ溶液を得て、
それをさらに精製することなく使用する。

製造１５
Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニ
ル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−
イル）ベンズアミド、ジヒドロクロリド

トリフェニルホスフィン（３６．８ｇ、１４０．３ミリモル）を、Ｎ−（（（３Ｓ，４
Ｒ）−１−アリル−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−（ヒドロキシメ
チル）ピロリジン−３−イル）カルバモチオイル）ベンズアミド（９１．１ミリモル）の
ＴＨＦ溶液（４００ｍＬ）に加える。アゾジカルボン酸ジ−ｔ−ブチル（３１．６ｇ、１
３７．２ミリモル）のＴＨＦ溶液（１００ｍＬ）を加える。混合物を２時間、２０〜３０
℃で攪拌する。混合物を濃縮し、ＭＴＢＥ（４００ｍＬ）を加える。溶液を、珪藻土を通
してろ過し、ケークをＭＴＢＥ（１３０ｍＬ）で洗浄する。ろ液を１つにまとめ、１Ｎ
ＨＣｌのＥｔＯＡｃ溶液（２００ｍＬ）を加える。混合物を２時間攪拌し、次いで５００
ｍＬに濃縮する。ＭＴＢＥ（３２０ｍＬ）を加え、溶液をろ過し、ヘプタン（１３０ｍＬ
）で洗浄する。固形物をＥｔＯＡｃ（６５０ｍＬ）中でスラリー化させ、２時間、５０〜
６０℃で攪拌する。熱いスラリーをろ過し、固形物をＥｔＯＡｃ（１３０ｍＬ）及びヘプ
タン（１３０ｍＬ）で洗浄する。固形物をＥｔＯＡｃ（６５０ｍＬ）中で再スラリー化さ
せ、２時間、５０〜６０℃で攪拌する。熱いスラリーをろ過し、ＥｔＯＡｃ（１３０ｍＬ
）及びヘプタン（１３０ｍＬ）で洗浄する。固形物を乾燥させ、二ＨＣｌ塩として表題化
合物を得る（４０ｇ、８０％、９９．５％ｅｅ）。第一の溶出異性体のキラル解析：カラ
ム：ＩＣＣｈｉｒａｌｐａｋ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ×５μｍ；溶離液：８５％ヘキ
サン（０．１％ジエチルアミン）：１５％イソプロピルアルコール（０．１％ジエチルア
ミン）；流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２８２ｎｍによって、鏡像異性的に富化された（９９
．５％ｅｅ）、Ｒ_ｔ＝１２．５分の鏡像異性体を確認する。

製造１６
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−［２−フルオロ−５−［（２，２，２
−トリフルオロアセチル）アミノ］フェニル］−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ
［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

１５％炭酸ナトリウム（４４０ｍＬ）を、Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７
ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ
［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド、ジヒドロクロリド（４９
５ｇ、７１７．８８ミリモル）のＥｔＯＡｃ（３Ｌ）及び水（７８４ｍＬ）の溶液に加え
る。混合物を１〜２時間攪拌する。層を分離させ、有機層を、シリカゲル（４０ｇ）を通
してろ過し、ＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）で洗浄する。ろ液を乾燥するまで濃縮し、Ｎ−（
（４ａＲ、７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４
、４ａ、５、７−テトラヒドロピロロ［３、４−ｄ］［１、３］チアジン−２−イル）ベ
ンズアミドを得る。トリフルオロアセトアミド（１３６．７ｇ、１．２１モル）、ＮａＩ
（１８２．５ｇ、１．２２モル）、４Ａ分子篩（３４２ｇ）、及びＫ_２ＣＯ_３（１７０．
９ｇ、１．２４モル）を、Ｎ−（（４ａＲ、７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（５−ブロモ
−２−フルオロ−フェニル）−４、４ａ、５、７−テトラヒドロピロロ［３、４−ｄ］［
１、３］チアジン−２−イル）ベンズアミド（３４１ｇ、４９４．５４ミリモル）のＤＭ
ＳＯ（５２５ｍＬ）及び１、４−ジオキサン（１．０２５Ｌ）の溶液に加える。トランス
−Ｎ、Ｎ’−ジメチルシクロヘキサン（８１．６ｇ、５７３．６６ミリモル）及びヨウ化
銅（２７．３ｇ、１４３．３４ミリモル）のＤＭＳＯ溶液（５００ｍＬ）をこの反応混合
物に加える。この混合物を５分間攪拌する。この混合物を１００℃まで加温し、８時間攪
拌し、２４℃まで冷却する。水（５．９Ｌ）及びＤＣＭ（５．９ｌ）を加え、混合物をろ
過し、層を分離させる。有機層を水（５．９Ｌ）で洗浄し、ＤＣＭ溶液で表題化合物を得
て、それをさらなる精製を行うことなく使用する。

製造１７
相対−Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−５−（アセトアミド）−２−フルオロ−フェ
ニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロ
ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

ＴＨＦ（３０ｍＬ）を、相対−Ｎ−［３−［（３Ｓ、４Ｒ）−３−アミノ−１−（５−
フルオロピリミジン−２−イル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３−イル］−
４−フルオロ−フェニル］アセトアミド（４．１ｇ、１１．０ミリモル）に加える。この
混合物を氷槽中で０℃まで冷却し、イソチオシアン酸ベンゾイル（１．５０ｍＬ、１１．
０ミリモル）を加える。次いで、この混合物を３０分以上室温に加温させる。１、１’−
カルボニルジイミダゾール（１．９ｇ、１１．０ミリモル）を加え、混合物を２時間、室
温で攪拌する。次いで、この混合物を５５℃まで加熱し、さらに１８時間攪拌する。水（
５０ｍＬ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出する。水層を、追加のＥｔＯ
Ａｃ（２５ｍＬ）で抽出し、乾燥するまで濃縮する。粗残留物を、ＥｔＯＡｃ中、５０％
ＤＣＭ、次いで１００％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラ
フィーにより精製する。適切な分画を濃縮し、真空下で乾燥させ、シスラセミ混合物とし
て表題化合物を得る（１．３３ｇ、２６％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０９（Ｍ＋Ｈ）
。

製造１８
Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニ
ル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−
イル）ベンズアミド、塩酸塩

ＮａＯＨ（２８．７ｇ）及び水（２．７Ｌ）を、Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリ
ル−７ａ−［２−フルオロ−５−［（２，２，２−トリフルオロアセチル）アミノ］フェ
ニル］−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２
−イル］ベンズアミド（２５０ｇ、４９４．４ミリモル）のＤＣＭ溶液に加え、この混合
物を２４℃で６８時間攪拌する。１ＮＨＣｌ（３．５Ｌ）を加え、ｐＨを１〜３とする
。層を分離させ、水層をＤＣＭ（６８０ｍＬ）で洗浄する。ＤＣＭ（４Ｌ）を水層に加え
、次いで２１％水酸化アンモニウムを加えて、ｐＨを８〜１０とする。層を分離させ、有
機抽出物を１つにまとめ、シリカゲル（１７０ｇ）を通してろ過し、ＤＣＭ（１．４Ｌ）
で洗浄する。溶媒を乾燥するまで濃縮し、ＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で希釈する。１ＮＨＣｌ
のＥｔＯＡｃ溶液（７００ｍＬ）を２５℃未満の温度で加え、この混合物を１時間攪拌す
る。この混合物を７〜８体積まで濃縮し、ＥｔＯＡｃ（２．８Ｌ）を加える。得られた沈
殿物をろ過し、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で洗浄する。固形物を乾燥させ、表題化合物を
得る（２４６ｇ、５２％）。

製造１９
Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−
６−アリル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン
−２−イル）ベンズアミド

無水酢酸（２３．５ｇ、０．２３モル）を、Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−
７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロ
ロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド、塩酸塩（１００ｇ、０
．１５３モル）及びトリエチルアミン（５４．３ｇ、０．５３５モル）のＤＣＭ溶液（８
００ｍＬ）に加える。２０〜２５℃で１時間攪拌した後、飽和ＮａＨＣＯ_３（７００ｍＬ
）及び水（６００ｍＬ）を加える。層を分離させ、表題化合物を得て、それをＤＣＭ溶液
としてさらなる精製を行うことなく使用する。

製造２０
Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−
４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）
ベンズアミド

トリフェニルホスフィン（４．０ｇ、０．０１５モル）及び１、３−ジメチルバルビツ
ール酸（１５．２ｇ、０．０９７モル）を、Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−ア
セトアミド−２−フルオロ−フェニル）−６−アリル−４，４ａ，５，７−テトラヒドロ
ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド（０．１５３モル）
のＤＣＭ溶液に加える。酢酸パラジウム（１．７ｇ、７．７ミリモル）を加え、この混合
物を１時間、２０〜３０℃で攪拌する。２５％水酸化アンモニウムを加え、層を分離させ
る。有機層をＨＯＡｃ（５００ｍＬの水中、３．０当量）で洗浄し、２５％水酸化アンモ
ニウムを用いてｐＨを８〜９に調節する。水層をＤＣＭ（２×５００ｍＬ）で抽出する。
有機抽出物を１つにまとめ、３〜４体積に濃縮する。ＭＴＢＥ（１Ｌ）を加え、この混合
物をろ過する。この混合物を濃縮し、ヘプタン（１Ｌ）を加える。得られた固形物をろ過
し、回収し、乾燥させて表題化合物を得る（４８ｇ、７６％）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃
) δ 2.15 (s, 3H), 2.87-2.83(m, 1H), 3.43-3.23(m, 5H), 3.70-3.67(m, 1H), 7.12-7.
07 (m, 1H), 7.28-7.27 (m, 1H), 7.52-7.41(m, 4H), 7.79(m, 1H), 8.18-8.16(m, 2H),
ES/MS (m/z): 413.1 (M+H)。

製造２１
Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−
６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［
３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド

２−クロロ−５−フルオロピリミジン（２８．９ｇ、２１８ミリモル）及び炭酸カリウ
ム（３３．４６ｇ、２４２．１ミリモル）を、Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−
アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３
，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル）ベンズアミド（５０ｇ、１２１．２２ミリモ
ル）のＤＭＦ溶液（１００ｍＬ）に加える。この混合物を８時間、８０〜８５℃に加熱す
る。この混合物を２４℃まで冷却し、ろ過し、ＤＭＦ（１００ｍＬ）で洗浄する。固形物
を水（２Ｌ）中でスラリー化させ、ろ過し、表題化合物を得る（６８．５ｇ、９８％）。
ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５０９．２（Ｍ＋Ｈ）^＋、¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ ppm 1.2
2 (t, J = 7.28 Hz, 2 H) 1.92 - 2.07 (m, 6 H) 2.89 - 3.20 (m, 2 H) 3.36 - 3.44 (m
, 1 H) 3.67 (t, J=9.54 Hz, 1 H) 3.84 (br. s., 1 H) 4.16 (br. s., 2 H) 7.23 (br.
s., 2 H) 7.35 - 7.61 (m, 8 H) 7.77 (br. s., 2 H) 7.85 - 8.18 (m, 4 H) 8.48 (s, 4
H) 10.15 (br. s., 1 H) 10.46 - 10.59 (m, 1 H)。

製造２２
（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フ
ルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］
［１，３］チアジン−２−アミン

水酸化リチウム（８．６ｇ、２０４．９ミリモル）を、Ｎ−（（４ａＲ，７ａＳ）−７
ａ−（５−アセトアミド−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−
２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン
−２−イル）ベンズアミド（８０ｇ、１５７．３ミリモル）のメタノール溶液（４００ｍ
Ｌ）に加える。この混合物を４時間、６０〜７０℃に加熱する。濃ＨＣｌ（１３２ｇ）を
加え、この混合物を１８時間、５５℃で攪拌する。この混合物を３０℃まで冷却し、濃縮
してメタノールを除去する。水を加え、水層をＤＣＭ（３×）で抽出し、９２０ｇの水溶
液として表題化合物を得て、その総量の５．６％が表題化合物であり、それをさらなる精
製を行うことなく使用する。

別の製造２２
硫酸（３３．４ｍｌ、６２６．６ミリモル）を、（４ａＲ、７ａＳ）−７ａ−（２−フ
ルオロフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４、４ａ、５、７−テ
トラヒドロピロロ［３、４−ｄ］［１、３］チアジン−２−アミン（４５．８ｇ、１２５
、３ミリモル）のＴＦＡ溶液（６２６ｍＬ）に加える。この混合物を０℃に冷却し、２０
分間攪拌する。発煙硝酸（６．２ｍＬ、１４４．１ミリモル）を加え、反応混合物を２２
℃に加温し、その温度で３時間攪拌する。反応混合物を蒸発させ、ＭＴＢＥを加え（２５
０ｍＬ）、２回蒸発させる。残留物を真空下で恒量まで乾燥させ、次いで水（１４７ｍＬ
）及びエタノール（８８５ｍＬ）に溶解させ、１５分間、窒素を泡立てながら脱気する。
溶液を耐圧反応容器に移し、１０％Ｐｄ／Ｃペーストタイプ８７Ｌ（６．６ｇ、６．２７
ミリモル）を加える。この混合物を追加のエタノール（７００ｍＬ）で希釈し、１６時間
、８０ｐｓｉで水素を用いて加圧する。この反応混合物をろ過し、次いで１０％Ｐｄ／Ｃ
ペーストタイプ８７Ｌ（６．６ｇ、６．２７ミリモル）の第二の触媒充填を加え、混合物
を８０ｐｓｉまで加圧し、耐圧反応容器中で３日間攪拌する。反応混合物に窒素をパージ
し、珪藻土を通してろ過する。ろ液を蒸発させ、残留物を水（２００ｍｌ）及びＥｔＯＡ
ｃ（２００ｍｌ）の間で分割させる。水層を分離させ、５℃まで冷却し、水酸化アンモニ
ウム１５％ｗ／ｗで中和する。水層を、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出する。有機
層を１つにまとめ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で蒸発させて、淡褐色
の固形物として表題化合物を得る（４７．７ｇ、残留ＥｔＯＡｃ含有９９％）。ＥＳ／Ｍ
Ｓ（ｍ／ｚ）：３６３（Ｍ＋Ｈ）。

製造２３
Ｎ−アリル−Ｎ−（２，２−ジメトキシエチル）カルバミン酸ベンジル

Ｎ−（２、２−ジメトキシエチル）カルバミン酸ベンジル（５０ｇ、２０８．９ミリモ
ル）のトルエン溶液（１８０ｍＬ）を、窒素雰囲気下で固形状水酸化カリウム（５１．６
ｇ、９１９．６９ミリモル）を用いて処置する。１０分後、塩化ベンジルトリエチルアン
モニウム（０．８ｇ、３．１ミリモル）を加える。さらに１０分後、臭化アリル（３３ｇ
、２７２．８ミリモル）のトルエン溶液（５０ｍＬ）を１０分にわたり滴下して加える。
得られた混合物を４８時間、５０℃で攪拌する。混合物を室温まで冷却し、水でクエンチ
する。有機層を分離させ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、乾固するまで
濃縮し、表題化合物を得る（４４ｇ、７５％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８０（Ｍ＋Ｈ
）。

製造２４
Ｎ−アリル−Ｎ−（２−オキソエチル）カルバミン酸ベンジル

Ｎ−アリル−Ｎ−（２，２−ジメトキシエチル）カルバミン酸ベンジル（３０ｇ、１０
７ミリモル）のギ酸（３６．８ｍＬ、８６０ミリモル）及び水（４．８４ｍＬ）の溶液を
室温で一晩攪拌する。混合物を濃縮し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：２）及び水で希釈す
る。有機層を分離させ、ｐＨ＝６までブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥する
。溶媒を蒸発させ、表題化合物を得る（２５ｇ、９９％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３
４（Ｍ＋Ｈ）。

製造２５
Ｎ−アリル−Ｎ−［２−ヒドロキシイミノエチル］カルバミン酸ベンジル

Ｎ−アリル−Ｎ−（２−オキソエチル）カルバミン酸ベンジル（２５ｇ、１０７ミリモ
ル）のＡＣＮ溶液（１５０ｍＬ）を、ヒドロキシルアミン塩酸塩（９．６８ｇ、１３９ミ
リモル）、及び酢酸ナトリウム三水和物（１６ｇ、１１７．９ミリモル）の水溶液（７５
ｍＬ）で処理する。混合物を室温で一晩攪拌する。ＡＣＮを蒸発させ、水溶液をＥｔＯＡ
ｃで抽出する。有機層を分離させ、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で濃縮して表題化
合物を得る（２４ｇ、９０％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）：２４９（Ｍ＋Ｈ）。

製造２６
３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボン
酸ベンジル

Ｎ−アリル−Ｎ−［２−ヒドロキシイミノエチル］カルバミン酸ベンジル（２４ｇ、９
６．６ミリモル）のＤＣＭ溶液（３３８ｍＬ）を、５％ｗ／ｗの次亜塩素酸ナトリウム水
溶液（１０６．０８ミリモル、１４３．０６ｍＬ）を用いて１０分にわたり、滴下して処
理する。得られた混合物を室温で一晩攪拌する。４０％重亜硫酸ナトリウム（７ｇ）の水
溶液で反応をクエンチする。有機層を分離させ、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で濃
縮する。粗生成物を、ヘキサン中、５％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲル上で精製し、表
題化合物を得る（１８ｇ、７５％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４７（Ｍ＋Ｈ）。

製造２７
６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１
Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボン酸ベンジル

ｎ−ブチルリチウム（２５．４ｍＬ、４０．６ミリモル）の１．６Ｍヘキサン溶液を、
−７８℃の４−ブロモ−１−フルオロ−２−ヨードベンゼン（１２．２２ｇ、４０．６ミ
リモル）のＴＨＦ溶液（６０ｍＬ）に滴下して加え、黄色溶液を得て、それを１５分間、
−７８℃で攪拌する。三フッ化ホウ素エーテラート（５．１４ｍＬ、４０．６ミリモル）
を、別の−７８℃の３、３ａ、４、６−テトラヒドロピロロ［３、４−ｃ］イソキサゾー
ル−５−カルボン酸ベンジル（５ｇ、２０．３ミリモル）のＴＨＦ溶液（６０ｍＬ）に加
え、この混合物を５分間、−７８℃で攪拌する。この溶液を、前もって調製された−７８
℃の有機リチウム混合物にカニューレを介して加える。混合された混合物を３０分間、−
７８℃で攪拌する。この混合物を、飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、室温に加
温する。この混合物をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナ
トリウムで乾燥し、ろ過し、真空内で溶媒を除去する。粗生成物を、３５分で、ヘキサン
中、５％〜１００％ＥｔＯＡの勾配のシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（２．２
７ｇ、２７％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４２１／４２３（Ｍ＋
Ｈ）。

製造２８
１−（ベンゾイルカルバモチオイル）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル
）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボ
ン酸ベンジル

イソチオシアン酸ベンゾイル（２．８７ｍＬ、２１．２８ミリモル）を、６ａ−（５−
ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［
３，４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボン酸ベンジル（５．９７７ｇ、１４．２ミリモ
ル）のＴＨＦ溶液（９５ｍＬ）に滴下して加え、窒素雰囲気下で一晩攪拌する。溶媒を真
空内で除去する。粗生成物を、３０分で、ヘキサン中、５％〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配の
シリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（６．０５ｇ、７３％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ
）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）５８４／５８６（Ｍ＋Ｈ）。

製造２９
３−（ベンゾイルカルバモチオイルアミノ）−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェ
ニル）−４−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル

１−（ベンゾイルカルバモチオイル）−６ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル
）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール−５−カルボ
ン酸ベンジル（６．０５ｇ、１０．４ミリモル）と亜鉛（亜鉛末、＜１０ミクロン）（６
．７７ｇ、１０３．５ミリモル）の混合物を、窒素雰囲気下、一晩、室温で、ＨＯＡｃ（
５２ｍＬ）中で攪拌する。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、珪藻土を通してろ過する。溶媒
を真空内で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ、水及び飽和重炭酸ナトリウム水溶液で希釈する
。この混合物をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、混合有機層を１つにまとめ、硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、ろ過し、溶媒を真空内で除去する。粗生成物を、３０分で、ヘキサン中、５
％〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配のシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（５．２２２ｇ
、８６％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）５８６／５８８（Ｍ＋Ｈ）
。

製造３０
２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，
７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ベンジル

１、１’−カルボニルジイミダゾール（２．８７ｇ、１７．７ミリモル）を、３−（ベ
ンゾイルカルバモチオイルアミノ）−３−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４
−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル（５．１９８ｇ、８．８６
ミリモル）のＴＨＦ溶液（５２ｍＬ）に加える。この混合物を室温で１．５時間攪拌し、
次いで反応物を一晩、窒素雰囲気下で加熱還流する。反応物を冷却し、水で希釈し、Ｅｔ
ＯＡｃ（３×）で抽出する。有機層を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、
溶媒を真空で除去する。粗生成物を、３０分で、ヘキサン中、５％〜１００％ＥｔＯＡｃ
勾配のシリカゲル上で精製し、表題化合物を得る（２．９３ｇ、５８％）。ＥＳ／ＭＳ（
ｍ／ｚ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）．５６８／５７０（Ｍ＋Ｈ）。

製造３１
Ｎ−［７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒ
ドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

ヨードトリメチルシラン（２．２１ｍＬ、１５．４６ミリモル）を、室温の２−ベンズ
アミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，７−テトラヒ
ドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ベンジル２．９３ｇ、５
．１５ミリモル）のＡＣＮ溶液（４４ｍＬ）に滴下して加える。反応物を２時間、室温で
攪拌し、溶媒を真空で除去する。粗生成物を、３：１のＤＣＭ：メタノール、次いでメタ
ノール中、２：１のＤＣＭ：７Ｎアンモニアを用いたＳＣＸカラムで精製し、表題化合
物を得る（２．０９８ｇ、９４％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４
３４／４３６（Ｍ＋Ｈ）。

製造３２
２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，
７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−
ブチル

ジ−ｔ−ブチルジカルボン酸（１．１６ｇ、５．３１ミリモル）及びトリエチルアミン
（１．０１ｍＬ、７．２５ミリモル）を、Ｎ−［７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フ
ェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−２−イル］ベンズアミド（２．０９８ｇ、４．８３ミリモル）のＤＣＭ溶液（４
８ｍＬ）に加える。反応物を窒素雰囲気下で１時間、室温で攪拌する。溶媒を真空で除去
し、粗生成物を、３０分で、ヘキサン中、５％〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配のシリカゲル上
で精製し、表題化合物を得る（２．５５６ｇ、９９％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：（^７９
Ｂｒ／^８１Ｂｒ）５３４／５３６（Ｍ＋Ｈ）。

製造３３
７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−２−ベンズアミド−４，４ａ，５，
７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−
ブチル

２−ベンズアミド−７ａ−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４，４ａ，５，
７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−
ブチル（２．５５６ｇ、４．８ミリモル）とトランス−Ｎ、Ｎ’−ジメチル−１、２−シ
クロヘキサンジアミン（１５０ｍｇ、１．１ミリモル）のエタノール溶液（５０ｍＬ）を
、アジ化ナトリウム（９３３ｍｇ、１４．３ミリモル）で処理する。Ｌ−アスコルビン酸
ナトリウム塩（０．６６Ｍ、３．２ｍＬ、２．１ミリモル）及び水（１ｍＬ）の水溶液を
加え、フラスコの上部を窒素でパージする。この混合物を硫酸銅（ＩＩ）五水和物（０．
３３Ｍ、３．２ｍＬ、１．１ミリモル）の水溶液で処理し、この混合物を、前もって８０
℃に加熱されたホットプレート上で直ちに１．５時間、窒素雰囲気下で加熱する。均一な
混合物は加熱を行うことで得られる。反応物を冷却し、氷水で希釈し、混合物をＥｔＯＡ
ｃ（３×）で抽出する。有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥さし、ろ過し
、溶媒を真空で除去して粗アジ化生成物を得る。この粗アジ化生成物を、冷エタノール（
１５０ｍＬ）中、１０％パラジウム炭素と混合させ、真空／窒素、次いで真空／水素を用
いて混合物をパージする。この混合物を５時間、３０ｐｓｉの水素下、室温で攪拌する。
反応物をベントし、珪藻土を通してろ過し、ろ過ケークをＤＣＭでリンスする。真空内で
ろ液から溶媒を除去し、粗生成物を、ＤＣＭ中、５０％ＥｔＯＡｃのシリカゲル上で精製
し、表題化合物を得る（２．０１４ｇ、８９％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７１（Ｍ＋
Ｈ）。

製造３４
Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒド
ロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

ＴＦＡ（１０ｍＬ）を、７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−２−ベンズ
アミド−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−６
−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．０１３ｇ、４．２８ミリモル）のＤＣＭ溶液（３０
ｍＬ）に加え、混合物を４時間、窒素雰囲気下、室温で攪拌する。溶媒を真空内で除去し
、粗生成物を、３：１のＤＣＭ：メタノール、次いでメタノール中、２：１のＤＣＭ：７
Ｎアンモニアを用いたＳＣＸカラムで精製し、表題化合物を得る（１．５５５ｇ、９８
％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７１（Ｍ＋Ｈ）。

製造３５
ラセミ体Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロ
ピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，
３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−４ａ，５，６，７−テトラヒ
ドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（７０
５ｍｇ、１．９０ミリモル）、５−フルオロ−２−クロロピリミジン（１．０１ｇ、７．
６１ミリモル）、及びＤＩＰＥＡ（１．６６ｍＬ、９．５２ミリモル）の溶液を、１、４
−ジオキサン（２０ｍＬ）中で４時間、窒素雰囲気下で加熱還流する。反応物を冷却し、
水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出する。有機層を１つにまとめ、硫酸ナトリウム上
で乾燥させ、ろ過し、真空で溶媒を除去し、粗生成物を得る。この粗生成物を、２５分で
、ヘキサン中、５％〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配のシリカゲル上で精製し、表題化合物を得
る（５９０ｍｇ、６６％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６７（Ｍ＋Ｈ）。

製造３６
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（
５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４
−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド、（異性体１）

ラセミ体Ｎ−［７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロ
ピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，
３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（１．６９４ｇ、３．６３ミリモル）を、キラル
ＨＰＬＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌｃｅｌＯＪ、８ｘ３５ｃｍ；溶離液：９０％メタノー
ル（０．２％ジメチルエチルアミン）及び１０％ＡＣＮ；流速４００ｍＬ／分、ＵＶ２８
０ｎｍ）により精製する。最初に溶出された異性体の解析（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ
ＯＪ−Ｈ０．４６ｘ１５ｃｍ；溶離液：１０：９０のＡＣＮ：メタノール（０．２％ジ
メチルエチルアミン含有）；流速：０．６ｍＬ／分、ＵＶ２８０ｎｍ）により、鏡像異性
的に富化された（９９％ｅｅ）、Ｒ_ｔ＝６．７０分の鏡像異性体を確認する（７２３ｍｇ
、４３％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６７（Ｍ＋Ｈ）。

製造３７
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン
−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジ
ン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキ
サミド、異性体１

Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（
５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４
−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド、（異性体１）（０．３６１ｇ、０
．７７ミリモル）を、ＤＣＭ（４ｍＬ）とＤＭＦ（０．５ｍＬ）の混合液中に溶解させる
。５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（２４０ｍｇ、１．５５ミリモル）、ＨＯＢＴ
（２１０ｍｇ、１．５５ミリモル）及びＥＤＣＩ（３００ｍｇ、１．５５ミリモル）をこ
の混合液に加え、この混合液を室温で一晩攪拌する。反応溶液を１２ｇのシリカゲルロー
ディングカラム上に直接加え、４０ｇのシリカゲルカラムを用いて、０〜１００％ＥｔＯ
Ａｃ／ヘキサン勾配で溶出して精製する。生成物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に溶解さ
せ、１ＮＮａＯＨ（２×５０ｍＬ）とブライン（１×５０ｍＬ）で洗浄する。シリカゲ
ル精製を上述のように繰り返し、表題化合物を得る（３５０ｍｇ、７４％）。ＥＳ／ＭＳ
（ｍ／ｚ）：６０３（Ｍ＋Ｈ）。

製造３８
５−アリル−６ａ−（２−フルオロフェニル）−３，３ａ，４，６−テトラヒドロ−１
Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール

フローケミストリー反応工程：３４３ｍｌのシームレスなステンレススチールの菅型反
応装置（ＯＤ＝１／８インチ）をＧＣオーブン内に配置し、２０分間、２０ｍＬ／分で、
トルエンでフラッシュする。窒素背圧（７２０ｐｓｉｇ）を印加し、ＧＣの温度を２１０
℃に設定する。温度が２１０℃に達した後、２−（ジアリルアミノ）−１−（２−フルオ
ロフェニル）エタノンオキシム（４８０．５１ｇ、１．７４モル）のトルエン溶液（５．
８１Ｌ）を、連続モードで作動する高圧シリンジポンプのペアを用いて、２２．８６６ｍ
Ｌ／分で、反応装置にポンプで送り出し、１５分の滞留時間を得る。すべての原液が消費
された後、反応装置を３０分間、２２．８６６ｍＬ／分でトルエンを用いてフラッシュす
る。ＧＣオーブンの温度を２５℃に設定し、完了溶液を集め、真空下で濃縮する。溶媒を
蒸発させ、残留物をＤＣＭ（２．５Ｌ）及び水（５Ｌ）に溶解させる。ＨＣｌを用いてｐ
Ｈを１に調節し、水層を分離させ、ＮａＯＨを用いて中和し、ｐＨを１０に調節する。水
層を、ＭＴＢＥ（３×２．５Ｌ）を用いて抽出する。有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナ
トリウムで乾燥し、ろ過し、乾固するまで蒸発させ、粗表題化合物を得て（２４８ｇ、４
７％）、それをさらなる精製を行うことなく使用する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４９（
Ｍ＋Ｈ）。

製造３９
１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル]メタ
ノール

亜鉛末（５９０ｇ、９モル）を、５−アリル−６ａ−（２−フルオロフェニル）−３，
３ａ，４，６−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］イソキサゾール（３５５９ｇ
、１．２９モル）の、メタノール（２．８５Ｌ）と飽和塩化アンモニウム水溶液（３．５
６Ｌ）の混合溶液に添加し、この混合溶液を１６時間、７０℃で加熱する。反応溶液を６
０℃に冷却し、ＴＨＦ（２．８５Ｌ）で希釈し、熱いうちに珪藻土を通してろ過する。ろ
液を蒸発して有機溶媒を取り除き、水性混合物をクエン酸１０％ｗ／ｗ水溶液（４Ｌ）と
ＥｔＯＡｃ（３．５Ｌ）で希釈する。有機層を分離させ、水層をＥｔＯＡｃ（２×２Ｌ）
で洗浄する。水層をＮａＯＨ５０％ｗ／ｗｔで中和し、ｐＨを１０に調節して、次いで
ＥｔＯＡｃ（２×１．５Ｌ）で抽出する。有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで
乾燥し、ろ過し、乾燥するまで蒸発させ、粗表題化合物を得る（２９９ｇ、９２％）。Ｅ
Ｓ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５１（Ｍ＋Ｈ）。

製造４０
［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジ
ン−３−イル］メタノール；２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］ブタン二
酸

ジ−ｐ−トルオイル−Ｌ−酒石酸（３４８．６ｇ、８８４ミリモル）の１−メトキシ−
２−プロパノール溶液（１．１３Ｌ）を、前もって４０℃に加熱されていた［（３Ｒ、４
Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジン−３−イル］
メタノール（２２５．９ｇ、９０２ミリモル）の１−メトキシ−２−プロパノール溶液（
１．１３Ｌ）に加える。反応物を２２℃に冷却し、１８時間攪拌する。白色固形物をろ過
により集め、１−メトキシ−２−プロパノール（６００ｍｌ）で洗浄する。集めた固形物
を乾燥させ、表題化合物を得る（１８３．０１ｇ、３１．８％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）
：２５１（Ｍ＋Ｈ）。

製造４１
［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジ
ン−３−イル］メタノール

［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジ
ン−３−イル］メタノール；２，３−ビス［（４−メチルベンゾイル）オキシ］ブタン二
酸（２１１ｇ、３３１ミリモル）を水（２．１Ｌ）とＥｔＯＡｃ（２．３Ｌ）に溶解させ
る。ＨＣｌ３５％ｗ／ｗを加え、ｐＨを１に調節する。水層を分離させ、ＮａＯＨ５０
％ｗ／ｗを用いてｐＨを１０に調節し、ＥｔＯＡｃ（２×）を用いて抽出する。水層のｐ
Ｈを、ＮａＯＨ水溶液を用いて１０に調節し、水溶液のｐＨもｐＨ＝１０に維持しながら
ＭＴＢＥ（３×）を用いて抽出する。有機抽出物を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥
し、ろ過し、乾燥するまで濃縮し、粗表題化合物を得る（７３ｇ、８８％、９４．８％ｅ
ｅ）。この生成物をキラルクロマトグラフィー：カラムＡＳ−Ｈ、溶離液１０％イソプロ
ピルアルコール、２％イソプロピルアミン；流速３ｍＬ／分、ＵＶ２２０；圧力は１００
バール、３５℃、により解析し、２番目に溶出する異性体として表題化合物を得る。Ｒ_ｆ
＝２．２６分。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５１（Ｍ＋Ｈ）。

製造４２
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（２−フルオロフェニル）−４，４ａ
，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズア
ミド

［（３Ｒ，４Ｓ）−１−アリル−４−アミノ−４−（２−フルオロフェニル）ピロリジ
ン−３−イル］メタノール（１２９．７ｇ、４１４ミリモル）のＴＨＦ溶液（２、３Ｌ）
を窒素雰囲気下で０℃に冷却する。イソチオシアン酸ベンゾイル（６１．５ｍＬ、４５６
ミリモル）を、５℃未満の温度を維持しながら加える。反応物を３時間にわたり室温に加
温し、１、１’−カルボニルジイミダゾール（８７．４ｇ、５３８．９ミリモル）を加え
、反応物を１時間、２２℃で攪拌し、次いで１６時間、７０℃に加熱する。反応混合物を
２２℃に冷却し、溶媒を蒸発させる。残留物を、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）及び水（１Ｌ）で分
割させる。有機層を分離させ、水層をＥｔＯＡｃ（２×４００ｍＬ）で抽出する。有機層
を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、乾固するまで蒸発させ、粗表題化合
物を得る。粗生成物を、０〜４０％のＤＣＭのＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ勾配で溶出するシリカ
ゲルクロマトグラフィーにより精製し、残留溶媒を含有する淡黄色の固形物として表題化
合物を得る（１７０ｇ、９９％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９６（Ｍ＋Ｈ）。

製造４３
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（２−フルオロフェニル）−４ａ，５，６，７−テ
トラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド

２−メルカプト−安息香酸（１２２ｇ、７９３ミリモル）、ビス（ジベンジリデンアセ
トン）パラジウム（４．１５ｇ、７．２１ミリモル）、及び１、４−ビス（ジフェニルホ
スフィノ）ブタン（３．１４ｇ、７．２１ミリモル）を、窒素雰囲気下でＮ−［（４ａＲ
，７ａＳ）−６−アリル−７ａ−（２−フルオロフェニル）−４，４ａ，５，７−テトラ
ヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド（１７８．２
１ｇ、３６０ミリモル）の無水２−メチルテトラヒドロフラン（１．９６Ｌ）溶液に加え
る。この溶液を、真空／窒素サイクルを３回行うことにより脱気し、次いで、この反応物
に１５分間、窒素を泡立たせる。この反応物に窒素を泡立たせながら、反応混合物を４０
℃に加熱する。反応物が４０℃に達した時点で、泡立てることを止め、反応混合物を窒素
雰囲気下で３時間、４０℃で攪拌する。反応物を２２℃に冷却し、水（２Ｌ）で希釈する
。ＨＣｌ（５Ｍ）溶液を加えてｐＨを１に調節する。水層を分離させ、追加のＥｔＯＡｃ
（２×８００ｍＬ）で洗浄する。水層のｐＨを、ＮａＯＨ５０％ｗ／ｗを用いて１０に調
節し、次いでＥｔＯＡｃ（１０Ｌ）を用いて抽出する。水層を追加のＥｔＯＡｃ（２×７
５０ｍＬ）で洗浄する。有機抽出物を１つにまとめ、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム
で乾燥し、ろ過し、乾固するまで蒸発させ、淡黄色の固形物として粗表題化合物を得る（
１２４．７ｇ、９７％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５６（Ｍ＋Ｈ）。

製造４４
Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（２−フルオロフェニル）−６−（５−フルオロピ
リミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３
］チアジン−２−イル］ベンズアミド

Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（２−フルオロフェニル）−４ａ，５，６，７−テ
トラヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミド
（１２４．７ｇ、２５６ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（６７ｍＬ）、５−フルオロ−２−クロ
ロピリミジン（２９．３ｍｌ、３０７ミリモル）のＮ−メチルピロリドン溶液（９９７ｍ
Ｌ）を１６時間、１００℃に加熱する。反応物を２２℃に冷却し、１５℃未満の温度を維
持しながら、１０℃に冷却された水（１０Ｌ）へと注ぐ。淡いクリーム状の固形物をろ過
により集め、追加の水で洗浄する。湿った固形物をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）に溶解させ、分離
漏斗に移す。塩化ナトリウム水溶液５％ｗ／ｗ（１Ｌ）を加え、有機層を分離させ、硫酸
ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を減圧下で蒸発させる。生成物を、０〜４０％ＥｔＯ
Ａｃ／イソヘキサンの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色
の固形物として表題化合物を得る（１１６ｇ、７０％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５２
（Ｍ＋Ｈ）。

製造４５
（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ−（２−フルオロフェニル）−６−（５−フルオロピリミジ
ン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チア
ジン−２−アミン

水酸化リチウム（９．２６ｇ、３８６ミリモル）を、Ｎ−［（４ａＲ，７ａＳ）−７ａ
−（２−フルオロフェニル）−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，
５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−２−イル］ベンズアミ
ド（１５８．６ｇ、３５１．６ミリモル）のメタノール混合物（１．６Ｌ）に加える。こ
の混合物を４時間、７０℃に加熱し、次いで２２℃に冷却する。反応混合物を真空下で黄
色残留物になるまで蒸発させる。この残留物を水（１Ｌ）及びＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）
で分割させる。ＨＣｌ（５Ｍ水溶液）を加え、ｐＨを１に調節する。水層を分離させ、有
機層をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で洗浄する。水層のｐＨをＮａＯＨ５０％ｗ／ｗ水
溶液を用いて、ｐＨ＝１０に調節し、ＥｔＯＡｃ（３×１Ｌ）を用いて抽出する。有機抽
出物を１つにまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で蒸発させ、淡黄色固形
物として粗表題化合物を得る（１３３．３ｇ、９９％、１２％の残留ＥｔＯＡｃを含有）
。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４８（Ｍ＋Ｈ）。

製造４６
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
塩酸塩

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ベンズアミド−６−（５−フルオロピリミジン
−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジ
ン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキ
サミド、異性体１（０．３５０ｇ、０．５８ミリモル）をＴＨＦ（２ｍＬ）に溶解させ、
次いでメタノール（４ｍＬ）及びエタノール（４ｍＬ）を加える。Ｏ−メチルヒドロキシ
ルアミン塩酸塩（４９５ｍｇ、５．８１ミリモル）及びピリジン（４７０μＬ、５．８１
ミリモル）をこの混合物に加え、反応物を５０℃に加温し、一晩攪拌する。シリカゲル（
約１０ｇ）を反応物に加え、混合物を濃縮する。シリカゲル上で乾燥されたサンプルを空
のカートリッジにロードし、ＤＣＭ中、７Ｎアンモニアメタノールの０〜１０％勾配で
溶出して精製する。生成物は、３：１のＤＣＭ：メタノール、次いでメタノール中、２：
１のＤＣＭ：７Ｎアンモニアを用いたＳＣＸカラムで二度目の精製を行う。生成物に、Ｄ
ＣＭ中、７Ｎアンモニアメタノールの０％〜１０％勾配を用いたシリカゲル上で最終的な
精製を行い、表題化合物の遊離塩基を得る。この物質をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解させ、１
ＭＨＣｌのジエチルエーテル溶液（０．２０ｍＬ、６６０μモル）を加える。溶媒を真
空内で除去して表題化合物を得る（７１ｍｇ、２３％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９８
（Ｍ＋Ｈ）。

粉末Ｘ線回析（ＸＲＤ）
結晶質固形物のＸＲＤパターンは、３５ｋＶ及び５０ｍＡで作動する、ＣｕＫａ線λ＝
１．５４０６０Åを備えたＢｒｕｋｅｒＤ４Ｅｎｄｅａｖｏｒ粉末Ｘ線回析装置及び
Ｖａｎｔｅｃ検出器で得る。サンプルは、工程サイズが２θの０．００９°、及びスキャ
ン速度が０．５秒／工程で、２θで４〜４０°の間で、ならびに０．６ｍｍの発散（ｄｉ
ｖｅｒｇｅｎｃｅ）、５．２８の固定アンチスキャッター（ａｎｔｉ−ｓｃａｔｔｅｒ）
、及び９．５ｍｍの検出スリットで、スキャンされる。乾燥粉末は石英の試料容器上にパ
ックされ、ガラススライドを用いて滑面を得る。結晶形の回析パターンはを周囲温度及び
相対湿度で集める。結晶学の分野において、任意の所与の結晶形に関し、回析ピークの相
対強度は、たとえば結晶形態及び傾向などの因子に起因する優先される方向性によって変
化しうることは周知である。優先される方向性の効果が存在する場合、ピーク強度は変化
するが、多形体の特徴的なピーク位置は変化しない。たとえば、The United States Phar
macopeia #23, National Formulary #18, pages 1843-1844, 1995を参照のこと。さらに
、結晶学分野において、任意の所与の結晶形に関し、角度のピーク位置は若干変化し得る
ことも周知である。たとえば、ピーク位置は、試料が分析される温度もしくは湿度の変動
、試料の移動、または内部標準の有無によって変わり得る。本件の場合、２θで±０．２
のピーク位置の変動性は、指定された結晶形の明確な特定を阻害することなく、これらの
潜在的な変化を考慮している。結晶形の確認は、特徴的なピーク（°２θの単位）、典型
的にはより突出したピークの任意の固有の組み合わせに基づき行われ得る。大気温度及び
相対湿度で集められた結晶形回析パターンは、８．８５３及び２６．７７４度２シータで
のＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づき調節される。

製造４７
結晶形２Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミ
ジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カル
ボキサミド（水和物）
塩化オキサリル（８８８μＬ、１０．２ミリモル）を、５−メトキシピラジン−２−カ
ルボン酸（１．６ｇ、１０．２ミリモル）のＡＣＮ（５３ｍＬ）及びＤＭＦ（８４８μＬ
）の溶液に加える。１５分後、新たに調製した溶液を、前もって５０℃に加熱された（４
ａＲ、７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−（５−フルオロ
ピリミジン−２−イル）−４、４ａ、５、７−テトラヒドロピロロ［３、４−ｄ］［１、
３］チアジン−２−アミン（２．６５ｇ、７．３ミリモル）の水（５３ｍＬ）及びエタノ
ール（５３ｍＬ）の混合溶液に加える。反応混合物を１時間、５０℃で攪拌し、２２℃に
冷却し、次いでこの温度で一晩攪拌する。有機溶媒を真空下で蒸発させ、水性混合物をＮ
ａＯＨ５０％ｗ／ｗ水溶液で処理し、ｐＨ＝１０に調節する。淡いクリーム状の固形物を
単離させ、追加の水で洗浄する。固形物をイソプロピルアルコール（２×）で希釈し、溶
媒を蒸発させる。粗物質を、アンモニア処理メタノール（２Ｎ）／ＤＣＭの勾配を用いた
シリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。所望の生成物を含有する分画を１つにま
とめ、溶媒を蒸発させて、オフホワイトの固形物として表題化合物を得る（１．９ｇ、５
２％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９９（Ｍ＋Ｈ）。

結晶形２Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジ
ン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チア
ジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボ
キサミド（水和物）の別の調製法
ＡＣＮ（５００ｍＬ）をＤＭＦ（１９．２ｍＬ、２４８．９ミリモル）に加える。塩化
オキサリル（３９．３ｇ、３０９．６３ミリモル）、次いで５−メトキシピラジン−２−
カルボン酸（４６．０ｇ、２９８．４ミリモル）をこのＤＭＦ／ＡＣＮ溶液に加える。別
のフラスコで、（４ａＲ、７ａＳ）−７ａ−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−
６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４、４ａ、５、７−テトラヒドロピロロ［
３、４−ｄ］［１、３］チアジン−２−アミン（５６．８ｇ、１５６．７５ミリモル）の
水溶液をＡＣＮ（５００ｍＬ）に加え、水酸化アンモニウム（９５ｍＬ）を用いてｐＨを
９に調節する。この混合物を、次いで、５０〜５５℃に加熱する。塩化オキサリル溶液を
滴下して加え、混合物を３時間攪拌する。水酸化アンモニウムを用いてｐＨを８〜９に調
節する。得られた沈殿物をろ過し、水で洗浄し、乾燥させて表題化合物を得る（１２３ｇ
）。固形物をアセトン（２５０ｍＬ）中で１．５時間スラリー化させ、ろ過する。湿性ケ
ークをアセトンで洗浄し、表題化合物を得る（１１０ｇ、ＨＰＬＣによる純度は９０．５
％）。ＴＨＦ（１Ｌ）及び活性炭（９ｇ）をこの固形物に加え、混合物を一晩加熱還流す
る。混合物を、珪藻土を通してろ過し、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）で洗浄する。有機溶液を１
０体積まで濃縮し、６０℃に加熱する。水（４３０ｍＬ）を加え、混合物を８時間、６０
℃で攪拌する。混合物を室温まで冷却し、１０時間攪拌する。得られた固形物をろ過し、
ＴＨＦ／水（７：６）で洗浄し、乾燥させて表題化合物を得る（６９ｇ、８８％）ＬＣ−
ＭＳ：（ｍ／ｚ）４９９（Ｍ＋Ｈ）、純度：９８．３％。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆)δp
pm 2.99 - 3.07 (m, 2 H) 3.07 - 3.14 (m, 1 H) 3.58 - 3.67 (m, 1 H) 3.68 - 3.76 (m
, 1 H) 3.76 - 3.84 (m, 1 H) 4.02 (s, 3 H) 4.07 (d, J=10.92 Hz, 1 H) 6.08 (s, 2 H
) 7.19 (dd, J=11.98, 8.72 Hz, 1 H) 7.78 - 7.89 (m, 2 H) 8.41 (s, 1 H) 8.44 (s, 2
H) 8.88 (s, 1 H) 10.60 (s, 1 H)。

結晶形２Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミ
ジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カル
ボキサミド（水和物）の一般的な製造手順
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
を、約７１ｍｇ／ｍＬ溶媒の濃度、約２３℃で、ＴＨＦ中でスラリー化させる。約６０℃
〜約６３℃で発生する溶解まで、このスラリーを攪拌しながら加熱する。約９５：５のＴ
ＨＦ：水の溶媒比率を得るよう、この熱い溶液に水を加える。Ｎ−［３−［（４ａＲ，７
ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−
テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−
フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの結晶形２の種晶を加える（
約３重量％の投入量）。得られた薄いスラリーを、約２０分間、約６０℃〜約６３℃に維
持し、次いで約２〜約４時間にわたり、約５．３〜約５．５体積の水を加え、約６９：３
１のＴＨＦ：水の溶媒比率とする。次いでこのスラリーを約３０分間、約６０℃〜約６３
℃に維持し、その後、約１時間にわたり約２３℃に冷却し、次いで、約８〜１２時間、攪
拌する。次いでこのスラリーをろ過し、ＴＨＦ：水（３５：６５）を用いて軽くリンスし
、低真空下、約４０℃で約８〜１２時間乾燥させ、水和された所望の結晶形２のＮ−［３
−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４
，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］
−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドを得る。

結晶形２のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミ
ジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カル
ボキサミドの調製試料は、以下の表１に記載されるように、回析ピーク（２シータ値）を
有するとして、ＣｕＫａ線を用いたＸＲＤパターンにより特徴解析される。具体的には、
このパターンは、０．２度の回析角に対する許容誤差で、１８．６°、１９．３°、及び
２６．７°からなる群から選択されるピークのうち１つ以上と組み合わせて、１１．８°
でピークを有する。
表１：結晶形２の粉末Ｘ線回析ピーク

結晶形２のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミ
ジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カル
ボキサミドは、室温及び約１５％超の相対湿度で安定な結晶形である。

製造４８
結晶形３のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミ
ジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カル
ボキサミド
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
を熱重量分析のパンにロードし、約１７０℃に加熱して、約５分間、１７０℃で維持する
。この混合物を室温に冷却し、表題化合物を得る。

結晶形３のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミ
ジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カル
ボキサミドの別の製造。
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
（１２１ｍｇ）とＡＣＮ（５ｍＬ）をバイアル中で混合し、９０℃の攪拌プレート上で加
熱する。約３０分後、固形物のほとんどが溶解し、濁った溶液を得る。結晶形３の種晶を
加え、試料を約９０℃で約１時間、攪拌する。加熱器を取り除き、混合物を攪拌して、明
白色の固形物を得る。固形物を真空ろ過により単離し、約１０分間、エアースチーム下で
乾燥させ、次いで約８〜１２時間、約８０℃、低真空下で乾燥させ、表題化合物を得る。

結晶形３のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミ
ジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カル
ボキサミドの製造試料は、以下の表２に記載されるように、回析ピーク（２シータ値）を
有するとして、ＣｕＫａ線を用いたＸＲＤパターンにより特徴解析される。具体的には、
当該パターンは、０．２度の回析角に対する許容誤差で、１８．１°、２７．０°、及び
１９．７°からなる群から選択されるピークのうち１つ以上と組み合わせて、１５．７°
でピークを有する。
表２：結晶形３の粉末Ｘ線回析ピーク

実施例１
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
：トルエンスルホン酸

水和された結晶形２のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フル
オロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［
１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン
−２−カルボキサミド（１４９．１５ｍｇ）を酢酸エチル（２ｍＬ）に加える。試料を８
０℃の温度、１０００ｒｐｍで攪拌する。ｐ−トルエンスルホン酸（７０ｍｇを酢酸エチ
ル（１ｍＬ）に溶解）を、この攪拌溶液に加え、それを一晩、８０℃で攪拌して、白色固
形物のスラリーを生成し、それを真空ろ過により単離して、表題化合物を得る。

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イ
ル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ
−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド：
トルエンスルホン酸の別の製造Ａ
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
（９．５ｇ、１９ミリモル）及びｐ−トルエンスルホン酸（３．８０ｇ、１９．８ミリモ
ル）をテトラヒドロフラン（３１ｍＬ）、水（７．９ｍＬ）、及び２−プロパノール（８
．６ｍＬ）に加える。この溶液を４０℃に加熱する。加温された溶液に、およそ３時間か
けて２−プロパノール（２００．０ｍＬ）を加える。２−プロパノールの添加開始後すぐ
に、この混合物に表題化合物の一部（５００ｍｇ、０．７５ミリモル）を播種する。溶媒
添加が完了した後、この混合物を１〜３時間かけておよそ２０℃にまで冷却する。およそ
２０℃からおよそ５５℃にまで、２時間の目標時間をかけてこの混合物を加熱する。１時
間、５５℃に温度を維持し、次いでおよそ４時間かけて約２０℃まで冷却する。少なくと
も１０時間、およそ２０℃でスラリーを攪拌する。このスラリーをろ過し、湿性ケークを
水（５７ｍＬ）で洗浄する。生成物を４５℃、真空で少なくとも１０時間乾燥させ、表題
化合物を得る（１０．４ｇ、８１％）。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：５００（Ｍ＋Ｈ）。

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イ
ル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ
−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド：
トルエンスルホン酸の別の製造Ｂ
水和されたＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミ
ジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チ
アジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カル
ボキサミド（２０．７ｇ）を、窒素バブラー、テフロン(登録商標)バナナ刃を有するガラ
スシャフトに付加されたＩＫＡ（登録商標）機械電動機／撹拌機、及びプログラム可能Ｊ
−ＫＥＭ（登録商標）温度制御装置に連結された熱電温度計を備えた５００ｍＬの三つ首
丸底フラスコ中に、６０：４０のＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（８５ｍＬ）中、１７０ｒｐｍでスラリ
ー化させる。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（７．６ｇ、１．０３当量）を、６０：４
０のＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）の混合液中に溶解させ、この溶液を、攪拌中のＮ−［３
−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４
，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］
−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのスラリー
に２３℃で、一度にすべて加え、ほぼ瞬時に澄んだ赤色調の褐色溶液とさせる。次いで攪
拌速度を１５分かけて２００ｒｐｍに上げ、水（２２ｍＬ）をこの溶液に加え、次いでＮ
−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル
）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−
イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドトル
エンスルホン酸（７５０ｍｇ、３ｗｔ％の種投入量）を用いてそれに播種し、次いでさら
に１５分間、２３℃で攪拌する。６時間かけて、水（２２６ｍＬ、総溶媒量は３５３ｍＬ
；または１３．６体積。最終溶媒比率は１７．５：８２．５のＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ）をスラリ
ーに加え、次いでそれを一晩（２２時間）、２３℃で攪拌する。スラリーを、バキューム
を介してろ過し、１５：８５のＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（２×２０ｍＬ）を用いてリンスし、次い
で２０分間、生成物の湿性ケーク中に形成される亀裂を手でぴったりと押しながらバキュ
ーム上に置く。湿性固形物を約７２時間、真空下、４０℃で乾燥させ、白色結晶質固形物
として表題化合物を得る（２４．０７ｇ、９０．０ｗｔ％）。

結晶質のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジ
ン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チア
ジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボ
キサミド；トルエンスルホン酸は、以下の表３に示されるように回析ピーク（２シータ値
）を有するとして、特に、０．２度の回析角に対する許容誤差で、１９．６°、１３．８
°、及び１８．５°からなる群から選択されるピークのうち１つ以上と組み合わせて、５
．０°の回析角２シータでピークを有するとして、ＣｕＫａ線を用いたＸＲＤパターンに
より特徴解析される。
表３：実施例１の結晶の粉末Ｘ線回析ピーク

約１５％未満の相対湿度では、結晶形１のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミ
ノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロ
ロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−
メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドの遊離塩基が存在し、一方で約１５％を超える
相対湿度では、結晶形２のＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フ
ルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］
［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジ
ン−２−カルボキサミドが優勢を占めることが判明している。このような物理的不安定さ
は特に原薬または医薬品にとって望ましいものではなく、その両方とも固形状態の剤型に
関し、調節管理下におかれなければならない。遊離塩基の結晶形とは対照的に、トシル酸
塩は、広範な相対湿度（５〜９５％）にわたり改善された物理的安定性を有している。し
たがって、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジ
ン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チア
ジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボ
キサミドのトシル酸塩は、本質的に、その対応する遊離塩基の結晶形と関連した湿度依存
性の相変態を回避する。さらにＮ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５
−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−
ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピ
ラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩は、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−ア
ミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピ
ロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５
−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのＨＣｌ塩に保持される溶媒が約７．７％で
あるのに比較し、結晶形に保持される溶媒の量は約１．３％とかなり低い量であることが
判明している。遊離塩基が長期間の保存の間に相転移を経る可能性が増大することによっ
て、例えば溶解性または溶出速度などの特性に変動が生じ得、医薬品の性能を損なう場合
がある。また、結晶構造（複数含む）が非晶形へと崩壊するさらなるリスク、または欠陥
及び障害が蓄積するさらなるリスクをもたらし、これによって化学的不安定さが生じ、製
剤の保存可能期限が低下する。

Ｉｎｖｉｔｒｏアッセイの手順
Ｉｎｖｉｔｒｏの酵素アッセイ及び細胞アッセイを行うために、被験化合物をＤＭＳ
Ｏ中で調製し、１０ｍＭのストック溶液を作製する。このストック溶液を９６ウェルの丸
底プレート中、ＤＭＳＯで連続希釈し、最終化合物濃度は１０ｍＭ〜０．０５ｎＭの範囲
で１０点の希釈曲線を得て、その後にｉｎｖｉｔｒｏ酵素アッセイ及び全細胞アッセイ
を行う。

Ｉｎｖｉｔｒｏプロテアーゼ阻害アッセイ
ヒトＢＡＣＥ１の発現
ヒトＢＡＣＥ１（アクセッション番号：ＡＦ１９０７２５）は、全脳ｃＤＮＡからＲＴ
−ＰＣＲによりクローニングされる。アミノ酸配列番号１〜４６０に対応するヌクレオチ
ド配列を、ヒトＩｇＧ_１（Ｆｃ）ポリペプチドをコードするｃＤＮＡへと挿入する（Vass
er, et al., Science, 286, 735-741 (1999)）。このＢＡＣＥ１（１〜４６０）とヒトＦ
ｃの融合タンパク質を、ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃと名付け、ｐＪＢ０２ベクター中に構築さ
せる。ヒトＢＡＣＥ１（１〜４６０）：Ｆｃ（ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃ）を、ＨＥＫ２９３
細胞中で一過性発現させる。各構築物のｃＤＮＡ２５０μｇをＦｕｇｅｎｅ６と混合し、
１リットルのＨＥＫ２９３細胞に添加する。トランスフェクションの４日後、精製のため
に馴化培地を回収する。

ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃの精製
ｈｕＢＡＣＥ１：Ｆｃは、プロテインＡクロマトグラフィーにより精製される。酵素は
、小分注物において、−８０℃で保存される。

ＢＡＣＥ１ＦＲＥＴ分析
被験化合物の連続希釈は上述のように調製される。ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液中で化合物はさ
らに２０倍に希釈される。各希釈の１０μＬを、反応混合液（２５μＬの５０ｍＭＫＨ_２
ＰＯ_４、ｐＨ４．６、１ｍＭＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ−１００、１ｍｇ／ｍＬウ
シ血清アルブミン、及び１５μＭのＦＲＥＴ基質）を含有する、対応するタンパク質低結
合黒色プレートのＡ列〜Ｈ列の各ウェルに加える（Yang, et. al., J. Neurochemistry,
91(6) 1249-59 (2004)を参照のこと）。内容物を１０分間、プレート振とう器上で良く混
合する。ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液に溶解した２００ｐＭヒトＢＡＣＥ（１〜４６０）：Ｆｃ
（Vasser, et al., Science, 286, 735-741 (1999)を参照のこと）の１５μＬを、基質と
被験化合物を含有するプレートに加え、反応を開始させる。０時点での混合物のＲＦＵを
、プレート振とう器上で軽く混合した後、励起波長３５５ｎｍ、及び発光波長４６０ｎｍ
で記録する。反応プレートをアルミホイルで覆い、１６〜２４時間、室温で、加湿された
暗いオーブン内で維持する。インキュベーション終了時のＲＦＵを、０時点で用いられた
ものと同じ励起及び発光の設定で記録する。０時点と、インキュベーション終了時のＲＦ
Ｕの差は、化合物処置下でのＢＡＣＥ１活性を表す。ＲＦＵの差は、阻害剤濃度に対して
プロットされ、曲線は、４パラメーターロジスティック方程式に適合され、ＥＣ_５０値及
びＩＣ_５０値を得る（Sinha, et al., Nature, 402, 537-540 (2000)を参照のこと）。

製造４６の化合物は、原則的に上述のように検証され、０．６１５ｎＭのＢＡＣＥ１
ＩＣ_５０（±０．１０１、ｎ＝５）［平均±ＳＥＭ；ＳＥＭ＝平均標準誤差］を示した。
このデータは、製造４６の化合物が、ｉｎｖｉｔｒｏで精製組み換えＢＡＣＥ１酵素活
性を阻害したことを示す。

ＰＤＡＰＰ初代神経細胞分析
また、確証的全細胞分析を、ＰＤＡＰＰトランスジェニック胎児マウスから作製された
初代神経細胞培養中で行う。初代皮質神経細胞は、胎児１６日目のＰＤＡＰＰの胚から調
製され、９６ウェルプレート中で培養される（１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ／Ｆ１２
（１：１）中、１５ｘ１０^４細胞／ウェル）。ｉｎｖｉｔｒｏで２日後、培養培地を、
Ｂ２７サプリメント及び２μＭ（最終）のＡｒａ−Ｃ（Ｓｉｇｍａ社、Ｃ１７６８）を含
有する無血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）と置き換える。ｉｎｖｉｔｒｏで５日目、神
経細胞を３７℃で２４時間、所望される濃度の阻害剤（ＤＭＳＯ希釈されている）の存在
下／非存在下でインキュベートする。インキュベーション終了時、馴化培地を、たとえば
Ａベータペプチドの分析により、ベータ−セクレターゼ活性の兆候に関して分析する。総
Ａベータペプチド（Ａベータ１−ｘ）を、捕捉抗体としてモノクローナル抗体２６６を
、及び報告抗体としてビオチニル化３Ｄ６を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡにより計測す
る。あるいは、Ａベータ１〜４０ペプチド及びＡベータ１〜４２ペプチドを、Ａベータ１
〜４０に対する捕捉抗体としてモノクローナル抗体２Ｇ３を、Ａベータ１〜４２に対する
捕捉抗体としてモノクローナル抗体２１Ｆ１２を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡにより計
測する。Ａベータ１〜４０及びＡベータ１〜４２の両方のＥＬＩＳＡとも、報告抗体とし
てビオチニル化３Ｄ６を使用する。化合物処置後の馴化培地中に放出されたＡベータの濃
度は、かかる条件下でのＢＡＣＥ１活性に相当する。１０点阻害曲線をプロットし、及び
４パラメーターロジスティック方程式に適合させることにより、Ａベータ低減効果に対す
るＥＣ_５０値及びＩＣ_５０値が得られる。製造４６の化合物は原則的に上述のように検証
され、Ａベータ低減効果に関し以下の活性を示した。
表４

平均±ＳＥＭ；ＳＥＭ＝平均の標準誤差。

これらのデータから、製造４６の化合物は全細胞において、Ａベータ産生を阻害するこ
とが示される。

ベータ−セクレターゼのＩｎｖｉｖｏ阻害
マウス、モルモット、イヌ、及びサルをはじめとする数種類の動物モデルを用いて、化
合物処置後のベータ−セクレターゼ活性のｉｎｖｉｖｏでの阻害に関しスクリーニング
を行ってもよい。本発明に用いられる動物は、野生型動物であっても、トランスジェニッ
ク動物であっても、または遺伝子ノックアウト動物であってもよい。たとえば、Games et
al., Nature 373, 523-527 (1995)に記載されるように作製されるＰＤＡＰＰマウスモデ
ル、ならびに他の非トランスジェニック動物または遺伝子ノックアウト動物が、阻害化合
物の存在下での、Ａベータ及びｓＡＰＰベータ産生のｉｎｖｉｖｏ阻害の解析に有用で
ある。一般的に、２〜１２か月齢のＰＤＡＰＰマウス、遺伝子ノックアウトマウス、また
は非トランスジェニック動物に、たとえばトウモロコシ油、シクロデキストラン、リン酸
緩衝液、ＰＨＡＲＭＡＳＯＬＶＥ（登録商標）、または他の適切なビヒクルなどのビヒク
ル内に製剤化された化合物が投与される。化合物投与の１〜２４時間後、動物は殺処分さ
れ、脳ならびに脳脊髄液及び血漿が、Ａベータ、Ｃ９９、及びｓＡＰＰ断片の解析のため
に回収される（May, et al., Journal of Neuroscience, 31, 16507-16516 (2011)参照）
。

標準的なｉｎｖｉｖｏ薬理学的実験に対し、動物は、様々な濃度の化合物を用いて投
与され、同時に投与されたビヒクル処置対照群と比較される。基準値を確立するための０
時点から始まり、実験経過の間、脳組織、血漿、または脳脊髄液が選択された動物から採
取される。化合物または適切なビヒクルが、他の群に投与され、投与後、様々な時点で殺
処分される。脳組織、血漿、または脳脊髄液は選択された動物から採取され、Ａベータペ
プチド、ｓＡＰＰベータ、及び他のＡＰＰ断片をはじめとするＡＰＰ開裂産物の存在に関
し、たとえば特異的サンドイッチＥＬＩＳＡ分析などにより解析される。検証期間の終了
時に動物は殺処分され、必要に応じて、脳組織、血漿または脳脊髄液がＡベータペプチド
、Ｃ９９、及びｓＡＰＰベータの存在に関し解析される。ＡＰＰトランスジェニック動物
の脳組織もまた、化合物処置後のベータ−アミロイドプラークの量に関し解析されてもよ
い。本明細書において用いられる場合、「Ａベータ１−ｘペプチド」とは、１残基から
始まり、２８残基超のＣ末端で終わるＡベータ種の総和を指す。これによりＡベータ種の
大部分が検出され、しばしば、「総Ａベータ」とも呼称される。

阻害化合物を投与される動物（ＰＤＡＰＰもしくは他のＡＰＰトランスジェニックマウ
ス、または非トランスジェニックマウス）は、ビヒクル処置対照またはゼロ時対照と比較
し、脳組織、血漿、または脳脊髄液中で、ＡベータまたはｓＡＰＰベータの低下を示すこ
とができ、及び脳組織におけるベータアミロイドプラークの減少を示すことができる。製
造４６に関し、０．３、１、または３ｍｇ／ｋｇの化合物の経口投与の３時間後、Ａベー
タ１−ｘペプチド値は、ビヒクル処置マウスと比較し、それぞれ脳の海馬においておよ
そ３１％、３９％、及び６１％低下し、大脳皮質においておよそ２８％、４２％、及び６
４％低下する。

ｉｎｖｉｔｒｏでのＢＡＣＥ酵素に対する製造４６の活性を考慮すると、これらＡベ
ータ低減効果はｉｎｖｉｖｏでのＢＡＣＥ阻害と一致しており、さらには、Ｎ−［３−
［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，
４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−
４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのＣＮＳ浸透
が示唆される。

ｉｎｖｉｔｒｏでのＢＡＣＥ酵素に対する製造４６の活性を考慮すると、これらＡベータ低減効果はｉｎｖｉｖｏでのＢＡＣＥ阻害と一致しており、さらには、Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのＣＮＳ浸透が示唆される。

本発明は、以下の態様を含む。
［１］
Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩である化合物。
［２］
結晶質である［１］に記載のトシル酸塩。
［３］
０．２度の回析角に対する許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°からなる群から選択されるピークのうち１つ以上と組み合わせて、５．０°の回析角２シータでのＸ線回析スペクトラムにおける実質的なピークにより特徴づけられる、［１］または［２］のいずれかに記載のトシル酸塩。
［４］
［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者のアルツハイマー病を治療する方法。
［５］
［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物の有効量を、かかる治療を必要としている患者に投与することを含む、患者の軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行を治療する方法。
［６］
治療における使用のための、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物。
［７］
アルツハイマー病の治療における使用のための、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物。
［８］
軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行の治療における使用のための、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物。
［９］
１つ以上の薬剤的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物を含む、医薬組成物。

Claims

Ｎ−［３−［（４ａＲ，７ａＳ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−
イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７
ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミド
のトシル酸塩である化合物。
結晶質である請求項１に記載のトシル酸塩。
０．２度の回析角に対する許容誤差で、１９．６°、１３．８°、及び１８．５°から
なる群から選択されるピークのうち１つ以上と組み合わせて、５．０°の回析角２シータ
でのＸ線回析スペクトラムにおける実質的なピークにより特徴づけられる、請求項１また
は２のいずれかに記載のトシル酸塩。
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の有効量を、かかる治療を必要としている
患者に投与することを含む、患者のアルツハイマー病を治療する方法。
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物の有効量を、かかる治療を必要としている
患者に投与することを含む、患者の軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行を治
療する方法。
治療における使用のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
アルツハイマー病の治療における使用のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の
化合物。
軽度認知機能障害からアルツハイマー病への進行の治療における使用のための、請求項
１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
１つ以上の薬剤的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、請求項１〜３のいずれ
か１項に記載の化合物を含む、医薬組成物。