MD3250575T2 - Sare tosilat de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[ 3,4-d]][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă - Google Patents
Sare tosilat de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[ 3,4-d]][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă Download PDFInfo
- Publication number
- MD3250575T2 MD3250575T2 MDE20170309T MDE20170309T MD3250575T2 MD 3250575 T2 MD3250575 T2 MD 3250575T2 MD E20170309 T MDE20170309 T MD E20170309T MD E20170309 T MDE20170309 T MD E20170309T MD 3250575 T2 MD3250575 T2 MD 3250575T2
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- fluoro
- phenyl
- mmol
- mixture
- tetrahydropyrrolo
- Prior art date
Links
- VQSRKMNBWMHJKY-YTEVENLXSA-N n-[3-[(4ar,7as)-2-amino-6-(5-fluoropyrimidin-2-yl)-4,4a,5,7-tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazin-7a-yl]-4-fluorophenyl]-5-methoxypyrazine-2-carboxamide Chemical compound C1=NC(OC)=CN=C1C(=O)NC1=CC=C(F)C([C@@]23[C@@H](CN(C2)C=2N=CC(F)=CN=2)CSC(N)=N3)=C1 VQSRKMNBWMHJKY-YTEVENLXSA-N 0.000 title claims description 37
- 125000005490 tosylate group Chemical class 0.000 title claims 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 97
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 23
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 claims description 10
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 claims description 10
- 208000027061 mild cognitive impairment Diseases 0.000 claims description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- -1 5-fluoropyrimidin-2-yl Chemical group 0.000 abstract description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 143
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 120
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 85
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 83
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 74
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 70
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 66
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 62
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 52
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 45
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 44
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical class CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 38
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 30
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 29
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 26
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 20
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 20
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 20
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 101000894895 Homo sapiens Beta-secretase 1 Proteins 0.000 description 16
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 16
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 16
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 16
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 125000004575 3-pyrrolidinyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 13
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 12
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 12
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 12
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 12
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 description 10
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 9
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 9
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- 125000004172 4-methoxyphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(OC([H])([H])[H])=C([H])C([H])=C1* 0.000 description 7
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 7
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- ARXJGSRGQADJSQ-UHFFFAOYSA-N 1-methoxypropan-2-ol Chemical compound COCC(C)O ARXJGSRGQADJSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 6
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N Benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1 KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 5
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 5
- CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N isoxazole Chemical compound C=1C=NOC=1 CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 238000000634 powder X-ray diffraction Methods 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 238000012799 strong cation exchange Methods 0.000 description 5
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 5
- BHKKSKOHRFHHIN-MRVPVSSYSA-N 1-[[2-[(1R)-1-aminoethyl]-4-chlorophenyl]methyl]-2-sulfanylidene-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one Chemical compound N[C@H](C)C1=C(CN2C(NC(C3=C2C=CN3)=O)=S)C=CC(=C1)Cl BHKKSKOHRFHHIN-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 4
- AGYUQBNABXVWMS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-5-fluoropyrimidine Chemical compound FC1=CN=C(Cl)N=C1 AGYUQBNABXVWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 4
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 4
- 229910016523 CuKa Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- CPEKAXYCDKETEN-UHFFFAOYSA-N benzoyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC(=O)C1=CC=CC=C1 CPEKAXYCDKETEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 4
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 4
- 238000003821 enantio-separation Methods 0.000 description 4
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 102000044297 human BACE1 Human genes 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 4
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CMIBUZBMZCBCAT-HZPDHXFCSA-N (2r,3r)-2,3-bis[(4-methylbenzoyl)oxy]butanedioic acid Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(=O)O[C@@H](C(O)=O)[C@H](C(O)=O)OC(=O)C1=CC=C(C)C=C1 CMIBUZBMZCBCAT-HZPDHXFCSA-N 0.000 description 3
- CMIBUZBMZCBCAT-HOTGVXAUSA-M (2s,3s)-4-hydroxy-2,3-bis[(4-methylbenzoyl)oxy]-4-oxobutanoate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(=O)O[C@H](C(O)=O)[C@@H](C([O-])=O)OC(=O)C1=CC=C(C)C=C1 CMIBUZBMZCBCAT-HOTGVXAUSA-M 0.000 description 3
- CJXQGINGLFWTAH-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-1-(5-bromo-2-fluorophenyl)ethanone Chemical compound FC1=CC=C(Br)C=C1C(=O)CBr CJXQGINGLFWTAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YVGVOPNUEFTVQO-UHFFFAOYSA-N 5-methoxypyrazine-2-carboxylic acid Chemical compound COC1=CN=C(C(O)=O)C=N1 YVGVOPNUEFTVQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 3
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- ZCEKPVXATMBLCW-FVMDXXJSSA-N NC=1C=CC(=C(C=1)[C@@]12N=C(SC[C@@H]1CN(C2)C1=NC=C(C=N1)F)N)F Chemical compound NC=1C=CC(=C(C=1)[C@@]12N=C(SC[C@@H]1CN(C2)C1=NC=C(C=N1)F)N)F ZCEKPVXATMBLCW-FVMDXXJSSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- JRHPOFJADXHYBR-HTQZYQBOSA-N (1r,2r)-1-n,2-n-dimethylcyclohexane-1,2-diamine Chemical compound CN[C@@H]1CCCC[C@H]1NC JRHPOFJADXHYBR-HTQZYQBOSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XNRQIHIOKXQSPG-UHFFFAOYSA-N 1-(5-bromo-2-fluorophenyl)ethanone Chemical compound CC(=O)C1=CC(Br)=CC=C1F XNRQIHIOKXQSPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NRKYWOKHZRQRJR-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroacetamide Chemical compound NC(=O)C(F)(F)F NRKYWOKHZRQRJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 2-Methylpentane Chemical compound CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YCWIUCNULAFKFJ-UHFFFAOYSA-N 6a-(2-fluorophenyl)-5-prop-2-enyl-3,3a,4,6-tetrahydro-1h-pyrrolo[3,4-c][1,2]oxazole Chemical compound FC1=CC=CC=C1C1(NOC2)C2CN(CC=C)C1 YCWIUCNULAFKFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800001718 Amyloid-beta protein Proteins 0.000 description 2
- KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N Boron trifluoride etherate Chemical compound FB(F)F.CCOCC KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YVZYBVGRCVODMF-BTYIYWSLSA-N C(C)(=O)NC=1C=CC(=C(C=1)[C@@]12N=C(SC[C@@H]1CNC2)NC(C1=CC=CC=C1)=O)F Chemical compound C(C)(=O)NC=1C=CC(=C(C=1)[C@@]12N=C(SC[C@@H]1CNC2)NC(C1=CC=CC=C1)=O)F YVZYBVGRCVODMF-BTYIYWSLSA-N 0.000 description 2
- RRHAIJLUDZOCNV-GKVSMKOHSA-N CC(=O)NC1=CC(=C(F)C=C1)[C@]12CN(C[C@H]1CSC(NC(=O)C1=CC=CC=C1)=N2)C1=NC=C(F)C=N1 Chemical compound CC(=O)NC1=CC(=C(F)C=C1)[C@]12CN(C[C@H]1CSC(NC(=O)C1=CC=CC=C1)=N2)C1=NC=C(F)C=N1 RRHAIJLUDZOCNV-GKVSMKOHSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- GTHYZKKCZJZXCF-HJPURHCSSA-N FC1=C(C=CC=C1)[C@@]12N=C(SC[C@@H]1CN(C2)C1=NC=C(C=N1)F)NC(C1=CC=CC=C1)=O Chemical compound FC1=C(C=CC=C1)[C@@]12N=C(SC[C@@H]1CN(C2)C1=NC=C(C=N1)F)NC(C1=CC=CC=C1)=O GTHYZKKCZJZXCF-HJPURHCSSA-N 0.000 description 2
- WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine hydrochloride Chemical compound Cl.ON WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LEIOWIHKEQEYMT-IDISGSTGSA-N N-[3-[(3aR,6aS)-5-benzyl-1-[(4-methoxyphenyl)methyl]-3,3a,4,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c][1,2]oxazol-6a-yl]-4-fluorophenyl]-2,2,2-trifluoroacetamide Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)N1C[C@@]2(N(OC[C@@H]2C1)CC1=CC=C(C=C1)OC)C=1C=C(C=CC=1F)NC(C(F)(F)F)=O LEIOWIHKEQEYMT-IDISGSTGSA-N 0.000 description 2
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ULXRHWXLZQWWGO-UHFFFAOYSA-N benzyl 1-(benzoylcarbamothioyl)-6a-(5-bromo-2-fluorophenyl)-3,3a,4,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c][1,2]oxazole-5-carboxylate Chemical compound FC1=CC=C(Br)C=C1C1(N(OC2)C(=S)NC(=O)C=3C=CC=CC=3)C2CN(C(=O)OCC=2C=CC=CC=2)C1 ULXRHWXLZQWWGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JEGCOCKTVYVGSS-UHFFFAOYSA-N benzyl n-(2,2-dimethoxyethyl)-n-prop-2-enylcarbamate Chemical compound COC(OC)CN(CC=C)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 JEGCOCKTVYVGSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USNPGPXWVWTJSS-UHFFFAOYSA-N benzyl n-(2-hydroxyiminoethyl)-n-prop-2-enylcarbamate Chemical compound ON=CCN(CC=C)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 USNPGPXWVWTJSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUEMBLJTQGDMMM-UHFFFAOYSA-N benzyl n-(2-oxoethyl)-n-prop-2-enylcarbamate Chemical compound C=CCN(CC=O)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 XUEMBLJTQGDMMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTZCNXWZYVXIMZ-UHFFFAOYSA-M benzyl(triethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC[N+](CC)(CC)CC1=CC=CC=C1 HTZCNXWZYVXIMZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 125000001108 carbamothioyl group Chemical group C(N)(=S)* 0.000 description 2
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- DAZXVJBJRMWXJP-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylethylamine Chemical compound CCN(C)C DAZXVJBJRMWXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZPYPWDKUTWCHV-UHFFFAOYSA-N n-[(4-methoxyphenyl)methyl]hydroxylamine Chemical compound COC1=CC=C(CNO)C=C1 CZPYPWDKUTWCHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GABIDKKXKUYWMI-LIRRHRJNSA-N n-[(4ar,7as)-7a-(2-fluorophenyl)-4a,5,6,7-tetrahydro-4h-pyrrolo[3,4-d][1,3]thiazin-2-yl]benzamide Chemical compound FC1=CC=CC=C1[C@@]1(N=C(NC(=O)C=2C=CC=CC=2)SC2)[C@H]2CNC1 GABIDKKXKUYWMI-LIRRHRJNSA-N 0.000 description 2
- PNGMGASNTRNOKH-WNSKOXEYSA-N n-[(4ar,7as)-7a-(5-amino-2-fluorophenyl)-6-(5-fluoropyrimidin-2-yl)-4,4a,5,7-tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazin-2-yl]benzamide Chemical compound NC1=CC=C(F)C([C@@]23[C@@H](CN(C2)C=2N=CC(F)=CN=2)CSC(NC(=O)C=2C=CC=CC=2)=N3)=C1 PNGMGASNTRNOKH-WNSKOXEYSA-N 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N oxidanium;4-methylbenzenesulfonate Chemical compound O.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 2
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N thioacetamide Natural products CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VXUYXOFXAQZZMF-UHFFFAOYSA-N titanium(IV) isopropoxide Chemical compound CC(C)O[Ti](OC(C)C)(OC(C)C)OC(C)C VXUYXOFXAQZZMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- CSRZQMIRAZTJOY-UHFFFAOYSA-N trimethylsilyl iodide Chemical compound C[Si](C)(C)I CSRZQMIRAZTJOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 2
- UKSZBOKPHAQOMP-SVLSSHOZSA-N (1e,4e)-1,5-diphenylpenta-1,4-dien-3-one;palladium Chemical compound [Pd].C=1C=CC=CC=1\C=C\C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1.C=1C=CC=CC=1\C=C\C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 UKSZBOKPHAQOMP-SVLSSHOZSA-N 0.000 description 1
- FOTRUJUPLHRVNU-QNBGGDODSA-N (2r,3r)-2,3-bis[(4-methylbenzoyl)oxy]butanedioic acid;hydrate Chemical compound O.C1=CC(C)=CC=C1C(=O)O[C@@H](C(O)=O)[C@H](C(O)=O)OC(=O)C1=CC=C(C)C=C1 FOTRUJUPLHRVNU-QNBGGDODSA-N 0.000 description 1
- ZSDNRKKWWZZLDE-QFYYESIMSA-N (4ar,7as)-7a-(2-fluorophenyl)-6-(5-fluoropyrimidin-2-yl)-4,4a,5,7-tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazin-2-amine Chemical compound C([C@@]1(N=C(SC[C@@H]1C1)N)C=2C(=CC=CC=2)F)N1C1=NC=C(F)C=N1 ZSDNRKKWWZZLDE-QFYYESIMSA-N 0.000 description 1
- VVSASNKOFCZVES-UHFFFAOYSA-N 1,3-dimethyl-1,3-diazinane-2,4,6-trione Chemical compound CN1C(=O)CC(=O)N(C)C1=O VVSASNKOFCZVES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJUPKRYGDFTMTM-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole;hydrate Chemical compound O.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 PJUPKRYGDFTMTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UKFTXWKNVSVVCJ-UHFFFAOYSA-N 2-[(6-hydrazinylpyridazin-3-yl)-(2-hydroxyethyl)amino]ethanol;hydron;dichloride Chemical class Cl.Cl.NNC1=CC=C(N(CCO)CCO)N=N1 UKFTXWKNVSVVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WCXKKLQTELXPOV-UHFFFAOYSA-N 2-benzamido-7a-(5-bromo-2-fluorophenyl)-4,4a,5,7-tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazine-6-carboxylic acid Chemical compound N=1C2(C=3C(=CC=C(Br)C=3)F)CN(C(=O)O)CC2CSC=1NC(=O)C1=CC=CC=C1 WCXKKLQTELXPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 2-methyltetrahydrofuran Chemical compound CC1CCCO1 JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 2h-thiazine Chemical compound N1SC=CC=C1 AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 1
- JNETZJWWXCLUKM-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-1-fluoro-2-iodobenzene Chemical compound FC1=CC=C(Br)C=C1I JNETZJWWXCLUKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BCJVBDBJSMFBRW-UHFFFAOYSA-N 4-diphenylphosphanylbutyl(diphenyl)phosphane Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)CCCCP(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 BCJVBDBJSMFBRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 239000012583 B-27 Supplement Substances 0.000 description 1
- 229940126077 BACE inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N Citric acid monohydrate Chemical compound O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021595 Copper(I) iodide Inorganic materials 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- FMVRLURKCHAMOJ-GTNSWQLSSA-N N-[3-[(3S,4R)-3-amino-1-(5-fluoropyrimidin-2-yl)-4-(hydroxymethyl)pyrrolidin-3-yl]-4-fluorophenyl]acetamide Chemical compound C(C)(=O)NC1=CC(=C(C=C1)F)[C@@]1(CN(C[C@H]1CO)C1=NC=C(C=N1)F)N FMVRLURKCHAMOJ-GTNSWQLSSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N allyl bromide Chemical compound BrCC=C BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- RMCVUDJJGMGFDI-UHFFFAOYSA-N benzyl 2-benzamido-7a-(5-bromo-2-fluorophenyl)-4,4a,5,7-tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazine-6-carboxylate Chemical compound FC1=CC=C(Br)C=C1C1(N=C(NC(=O)C=2C=CC=CC=2)SC2)C2CN(C(=O)OCC=2C=CC=CC=2)C1 RMCVUDJJGMGFDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDIIBLIJJMGOKC-UHFFFAOYSA-N benzyl 3,3a,4,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c][1,2]oxazole-5-carboxylate Chemical compound C1C2CON=C2CN1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 HDIIBLIJJMGOKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PRNIMZARYMMMGG-UHFFFAOYSA-N benzyl 3-(benzoylcarbamothioylamino)-3-(5-bromo-2-fluorophenyl)-4-(hydroxymethyl)pyrrolidine-1-carboxylate Chemical compound OCC1CN(C(=O)OCC=2C=CC=CC=2)CC1(C=1C(=CC=C(Br)C=1)F)NC(=S)NC(=O)C1=CC=CC=C1 PRNIMZARYMMMGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SGVVZHZJVANCRU-UHFFFAOYSA-N benzyl n-(2,2-dimethoxyethyl)carbamate Chemical compound COC(OC)CNC(=O)OCC1=CC=CC=C1 SGVVZHZJVANCRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004296 chiral HPLC Methods 0.000 description 1
- 229960002303 citric acid monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 229940124301 concurrent medication Drugs 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M copper(i) iodide Chemical compound I[Cu] LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GBRBMTNGQBKBQE-UHFFFAOYSA-L copper;diiodide Chemical compound I[Cu]I GBRBMTNGQBKBQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000003618 cortical neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 239000012297 crystallization seed Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- FCZCIXQGZOUIDN-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-diethoxyphosphinothioyloxyacetate Chemical compound CCOC(=O)COP(=S)(OCC)OCC FCZCIXQGZOUIDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- XNXVOSBNFZWHBV-UHFFFAOYSA-N hydron;o-methylhydroxylamine;chloride Chemical compound Cl.CON XNXVOSBNFZWHBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-O isopropylaminium Chemical compound CC(C)[NH3+] JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- IXHBTMCLRNMKHZ-LBPRGKRZSA-N levobunolol Chemical compound O=C1CCCC2=C1C=CC=C2OC[C@@H](O)CNC(C)(C)C IXHBTMCLRNMKHZ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- RHUCQDQRNUUMKY-UHFFFAOYSA-N n-benzylprop-2-en-1-amine Chemical compound C=CCNCC1=CC=CC=C1 RHUCQDQRNUUMKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DYUWTXWIYMHBQS-UHFFFAOYSA-N n-prop-2-enylprop-2-en-1-amine Chemical compound C=CCNCC=C DYUWTXWIYMHBQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004172 nitrogen cycle Methods 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000001979 organolithium group Chemical group 0.000 description 1
- YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L palladium(ii) acetate Chemical compound [Pd+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O YJVFFLUZDVXJQI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 238000010956 selective crystallization Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 1
- PAYGMRRPBHYIMA-UHFFFAOYSA-N sodium;trihydrate Chemical compound O.O.O.[Na] PAYGMRRPBHYIMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000007617 synaptic impairment Effects 0.000 description 1
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KAQXSPNDFXYJBW-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-benzamido-7a-(5-bromo-2-fluorophenyl)-4,4a,5,7-tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazine-6-carboxylate Chemical compound N=1C2(C=3C(=CC=C(Br)C=3)F)CN(C(=O)OC(C)(C)C)CC2CSC=1NC(=O)C1=CC=CC=C1 KAQXSPNDFXYJBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QEAVJHVSTAOIOR-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2H-thiazine-6-carboxylate Chemical compound C(C)(C)(C)OC(=O)C1=CC=CNS1 QEAVJHVSTAOIOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDVCZULZSYGYLE-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 7a-(5-amino-2-fluorophenyl)-2-benzamido-4,4a,5,7-tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazine-6-carboxylate Chemical compound N=1C2(C=3C(=CC=C(N)C=3)F)CN(C(=O)OC(C)(C)C)CC2CSC=1NC(=O)C1=CC=CC=C1 QDVCZULZSYGYLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- QKSQWQOAUQFORH-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylimino]carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N=NC(=O)OC(C)(C)C QKSQWQOAUQFORH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- WADGHWKXQZVKFK-UHFFFAOYSA-N thiazin-2-amine Chemical compound NN1SC=CC=C1 WADGHWKXQZVKFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
- A61K31/542—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
- C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D513/04—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
Prezenta invenţie furnizează o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei.
Description
Prezenta invenţie se referă la o sare de acid toluensulfonic (tosilat) a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin -7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei, la compoziţii farmaceutice cuprinzând sarea tosilat, la utilizarea sării tosilat în tratamentul tulburărilor fiziologice, şi la intermediari şi procedee utile în sinteza acesteia
Prezenta invenţie este în domeniul tratamentului bolii Alzheimer şi al altor boli şi tulburări care implică peptida de amiloid β (Abeta), un segment peptidic neurotoxic şi foarte agregant al proteinei precursoare a amiloidului (APP). Boala Alzheimer este o tulburare neurodegenerativă devastatoare care afectează milioane de pacienţi în întreaga lume. Având în vedere agenţii aprobaţi în prezent pe piaţă care oferă numai beneficii tranzitorii, simptomatice pacientului, există o necesitate semnificativă nesatisfăcută în tratamentul bolii Alzheimer.
Boala Alzheimer este caracterizată prin generarea, agregarea, şi depozitarea de Abeta în creier. S-a arătat că inhibarea completă sau parţială a β-secretazei (enzimă de clivare a proteinei precursoare a amiloidului la situsul β; BACE) are un efect semnificativ asupra patologiilor legate de placă şi dependente de placă în modelele la şoarece, sugerând că chiar şi reduceri mici în nivelurile de peptidă Abeta ar putea conduce la o reducere pe termen lung semnificativă a poverii plăcii şi a deficitelor sinaptice, furnizând astfel beneficii terapeutice semnificative, în special în tratamentul bolii Alzheimer.
Brevetul din Statele Unite nr. 8.841.293 divulgă anumiţi inhibitori BACE pentru tratamentul tulburărilor mediate de peptida Abeta, cum ar fi boala Alzheimer, şi în particular, divulgă de exemplu inhibitorul BACE N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluorofenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă şi sarea de clorhidrat corespunzătoare.
Sunt dorite noi forme de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă care să asigure o stabilitate îmbunătăţită a stării solide şi stabilitate chimică pentru o utilizare ameliorată în prepararea şi fabricarea formulărilor farmaceutice. Corespunzător, prezenta invenţie furnizează o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin -7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei. În plus, prezenta invenţie furnizează sarea tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluorofenil]-5-metoxi-pirazin-2-carbo-xamidei care este cristalină. Prezenta invenţie mai furnizează sarea tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tia-zin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei care este caracterizată printr-un vârf substanţial în spectrul de difracţie cu raze X, la unghiul de difracţie 2-teta de 5,0° în combinaţie cu unul sau mai multe dintre vârfurile selectate din grupul constând din 19,6°, 13,8°, şi 18,5°; cu o toleranţă pentru unghiurile de difracţie de 0,2 grade.
Prezenta invenţie furnizează de asemenea o sare tosilat a N-[3-[(4aR, 7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei pentru utilizare în tratamentul bolii Alzheimer la un pacient. Prezenta invenţie mai furnizează o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidro-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei pentru utilizare în tratamentul progresului deprecierii cognitive uşoare către boala Alzheimer la un pacient. Prezenta invenţie furnizează de asemenea o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei pentru utilizare în inhibarea BACE la un pacient. Prezenta invenţie furnizează de asemenea o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidro-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei, pentru utilizare în inhibarea clivării mediate de BACE a proteinei precursoare a amiloidului. Invenţia mai furnizează o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidro-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei, pentru utilizare în inhibarea producţiei de peptidă Abeta.
Mai mult, această invenţie furnizează o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro -fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei pentru utilizare în terapie, în particular pentru tratamentul bolii Alzheimer sau pentru tratamentul progresului deprecierii cognitive uşoare către boala Alzheimer. Chiar mai mult, această invenţie furnizează utilizarea unei sări tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei pentru fabricarea unui medicament pentru tratamentul bolii Alzheimer sau pentru tratamentul progresului deprecierii cognitive uşoare către boala Alzheimer.
În plus, invenţia furnizează o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei care este caracterizată printr-un vârf substanţial în spectrul de difracţie cu raze X, la unghiul de difracţie 2-teta de 5,0° în combinaţie cu unul sau mai multe dintre vârfurile selectate din grupul constând din 19,6°, 13,8°, şi 18,5°; cu o toleranţă pentru unghiurile de difracţie de 0,2 grade, pentru utilizare în tratamentul bolii Alzheimer la un pacient. Invenţia furnizează de asemenea o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropiro-lo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei care este caracterizată printr-un vârf substanţial în spectrul de difracţie cu raze X, la unghiul de difracţie 2-teta de 5,0° în combinaţie cu unul sau mai multe dintre vârfurile selectate din grupul constând din 19,6°, 13,8°, şi 18,5°; cu o toleranţă pentru unghiurile de difracţie de 0,2 grade pentru utilizare în terapie, în particular pentru tratamentul bolii Alzheimer sau pentru tratamentul progresului deprecierii cognitive uşoare către boala Alzheimer. Mai mult, invenţia furnizează o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin -7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei care este caracterizată printr-un vârf substanţial în spectrul de difracţie cu raze X, la unghiul de difracţie 2-teta de 5,0° în combinaţie cu unul sau mai multe dintre vârfurile selectate din grupul constând din 19,6°, 13,8°, şi 18,5°; cu o toleranţă pentru unghiurile de difracţie de 0,2 grade, pentru fabricarea unui medicament pentru tratamentul bolii Alzheimer sau pentru tratamentul progresului deprecierii cognitive uşoare către boala Alzheimer.
Invenţia mai furnizează o compoziţie farmaceutică, cuprinzând sarea tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropiro-lo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei cu unul sau mai mulţi purtători, diluanţi, sau excipienţi acceptabili farmaceutic. Această invenţie cuprinde de asemenea noi intermediari şi procedee pentru sinteza sării tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]-tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei.
Deprecierea cognitivă minoră a fost definită ca o potenţială fază prodromală a demenţei asociate cu boala Alzheimer pe baza prezentării clinice şi pe progresul pacienţilor care prezintă depreciere cognitivă minoră către demenţă Alzheimer în timp. (Morris, şi colab., Arch. Neurol., 58, 397-405 (2001); Petersen, şi colab., Arch. Neurol., 56, 303-308 (1999)). Termenul „tratamentul progresului deprecierii cognitive uşoare către boala Alzheimer« include încetinirea, oprirea, sau inversarea progresului deprecierii cognitive uşoare către boala Alzheimer la un pacient.
Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenii „tratarea« sau „a trata« includ restrângerea, încetinirea, oprirea, sau inversarea progresului sau severităţii unui simptom sau tulburări existente.
Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „pacient« se referă la un om.
Termenul „inhibarea producţiei de peptidă Abeta« înseamnă scăderea nivelurilor in vivo de peptidă Abeta la un pacient.
Aşa cum s-a utilizat în acest document, termenul „cantitate eficientă« se referă la cantitatea sau doza de compus al invenţiei, sau o sare acceptabilă farmaceutic a acestuia care, după administrarea unei singure doze sau mai multe la pacient, furnizează efectul dorit la pacientul aflat sub diagnostic sau tratament.
O cantitate eficientă poate fi determinată cu uşurinţă de către diagnosticianul curant, ca o persoană calificată în domeniu, prin utilizarea de tehnici cunoscute şi prin observarea rezultatelor obţinute în circumstanţe analoage. În determinarea cantităţii eficiente pentru un pacient, un număr de factori sunt luaţi în considerare de către diagnosticianul curant, incluzând, dar fără limitare la: specia pacientului; dimensiunea sa, vârsta, şi sănătatea generală; boala sau tulburarea specifică implicată; gradul sau implicarea sau severitatea bolii sau tulburării; răspunsul pacientului individual; compusul particular administrat; modul de administrare; caracteristicile privind biodisponibilitatea ale preparatului administrat; regimul de dozare selectat; utilizarea de medicaţie concomitentă; şi alte circumstanţe relevante.
Compuşii prezentei invenţii sunt în general eficienţi într-un interval de dozare larg. De exemplu, dozajele per zi cad în mod normal în intervalul de aproximativ 0,01 până la aproximativ 20 mg/kg din greutatea corporală. În unele cazuri nivelurile de dozare sub limita inferioară a intervalului menţionat mai sus pot fi mai mult decât adecvate, în timp ce în alte cazuri pot fi utilizate doze încă mai mari cu efecte secundare acceptabile, şi prin urmare intervalul de dozare de mai sus nu este menit a limita scopul invenţiei în nici un fel.
Compuşii prezentei invenţii sunt preferabil formulaţi precum compoziţii farmaceutice administrate pe orice cale care face compusul biodisponibil, incluzând căile orală, transdermală, şi parenterală. Cel mai preferabil, astfel de compoziţii sunt pentru administrare orală sau transdermală, cu administrarea orală fiind preferată în mod special. Astfel de compoziţii farmaceutice şi procedee pentru prepararea acestora sunt bine cunoscute în domeniu. (Vezi, de exemplu, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, Editor, Ediţia a 21-a, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006).
Sarea tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei este utilă în special în metodele de tratament ale invenţiei, dar sunt preferate anumite forme. Următoarele paragrafe descriu astfel de forme. Se va înţelege că aceste preferinţe sunt aplicabile compoziţiilor farmaceutice, metodelor de tratament, şi noilor compuşi ai invenţiei.
Sarea cristalină tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei care este caracterizată printr-un vârf substanţial în spectrul de difracţie cu raze X, la unghiul de difracţie 2-teta de 5,0° în combinaţie cu unul sau mai multe dintre vârfurile selectate din grupul constând din 19,6°, 13,8°, şi 18,5°; cu o toleranţă pentru unghiurile de difracţie de 0,2 grade este preferată în mod special.
Cineva având calificare obişnuită în domeniu va aprecia că N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluorofenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamida poate exista sub forme tautomerice, aşa cum s-a reprezentat în Schema A. Atunci când este dată orice referinţă în această cerere către unul dintre tautomerii specifici ai N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei, se înţelege că cuprinde ambele forme tautomerice şi toate amestecurile acestora.
Suplimentar, anumiţi intermediari descrişi în următoarele scheme pot conţine una sau mai multe grupări de protecţie la azot. Gruparea de protecţie variabilă poate fi identică sau diferită în fiecare apariţie în funcţie de condiţiile de reacţie particulare şi de transformările particulare de efectuat. Condiţiile de protejare şi deprotejare sunt bine cunoscute specialistului calificat şi sunt descrise în literatură (Vezi de exemplu „Greene's Protective Groups in Organic Synthesis«, ediţia a patra, de Peter G.M. Wuts şi Theodora W. Greene, John Wiley & Sons, Inc. 2007).
Anumite centre stereochimice au fost lăsate nespecificate şi anumiţi substituenţi au fost eliminaţi în următoarele scheme de dragul clarităţii şi nu sunt menite pentru a limita învăţămintele schemelor în nici un fel. Mai mult, izomerii, enantiomerii, şi diastereomerii individuali pot fi separaţi sau rezolvaţi de cineva având calificare obişnuită în domeniu la orice punct convenabil din sinteza compuşilor invenţiei, prin metode cum ar fi tehnicile de cristalizare selectivă sau cromatografia chirală (Vezi de exemplu, J. Jacques, şi colab., „Enantiomers, Racemates, and Resolutions«, John Wiley & Sons, Inc., 1981, şi E.L. Eliel şi S.H. Wilen, „Stereochemistry of Organic Compounds«, Wiley-Interscience, 1994). Desemnările „izomer 1« şi „izomer 2« se referă la compuşii care eluează din cromatografia chirală primul şi al doilea, în mod respectiv, şi dacă cromatografia chirală este iniţiată devreme în sinteză, este aplicată aceeaşi desemnare intermediarilor ulteriori şi exemplelor.
Anumite abrevieri sunt definite după cum urmează: „acetonitril« se referă la ACN; „APP« se referă la proteină precursoare a amiloidului; „CSF« se referă la fluid cerebrospinal; „DCM« se referă la diclorometan; „DIPEA« se referă la diizopropiletilamină, N-etil-N-izopropil-propan-2-amină, sau N,N-diizopropiletilamină; „DMEM« se referă la Mediu Dulbecco modificat Eagle; „DMF« se referă la dimetilformamidă; „DMSO« se referă la dimetil sulfoxid; „EDCI« se referă la clorhidrat de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimidă; „ee« se referă la exces enantiomeric; „EtOAc« se referă la acetat de etil; „Ex« se referă la exemplu; „F12« se referă la mediu F12 de Ham; „FBS« se referă la Ser fetal bovin; „FRET« se referă la transfer de energie prin rezonanţă fluorescentă; „HEK« se referă la rinichi embrionar uman; „HOAc« se referă la acid acetic; „HOBt« se referă la 1-hidroxilbenzotriazol hidrat; „HPLC» se referă la cromatografie de lichide de înaltă performanţă; „IC50« se referă la concentraţia unui agent care produce 50% din răspunsul inhibitor maxim posibil pentru acel agent; „min« se referă la minut sau minute; „MTBE« se referă la metil terţ-butil eter; „PDAPP« se referă la proteină precursoare a amiloidului derivată din trombocite; „Prep« se referă la preparare; „RFU« se referă la unitate de fluorescenţă relativă; „SCX« se referă la schimb puternic de cationi; „Rt« se referă la timp de retenţie; şi „THF« se referă la tetrahidrofuran.
Se înţelege de către cineva având calificare obişnuită în domeniu că termenii „tosilat«, „acid toluensulfonic«, „acid p-toluensulfonic«, şi „acid 4-metilbenzen sulfonic« se referă la compusul cu următoarea structură:
Ca atare, se înţelege de către cineva având calificare obişnuită în domeniu că o referinţă în acest document la oricare dintre următoarele nume:
„sarea tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei«;
„N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4 -d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă;
acid toluensulfonic«;
„N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4 -d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă; acid p-tolu-ensulfonic«; şi
„N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4 -d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă; acid 4-metil-benzen sulfonic«; se referă la sarea cu următoarea structură:
Sarea tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei poate fi preparată printr-o varietate de proceduri cunoscute în domeniu, unele dintre acestea fiind ilustrate în Preparările şi Exemplele de mai jos. În plus, baza liberă de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă şi sarea de HCl corespunzătoare pot fi preparate de către cineva având calificare obişnuită în domeniu aşa cum s-a descris în Brevetul S.U.A. nr. 8.841.293. Etapele de sinteză specifice pentru fiecare dintre căile descrise pot fi combinate în diferite moduri, sau în conjuncţie cu etape din diferite preparări pentru a prepara compuşii invenţiei. Produsele fiecărei etape pot fi recuperate prin metode convenţionale bine cunoscute în domeniu, incluzând extracţia, evaporarea, precipitarea, cromatografia, filtrarea, triturarea, sau cristalizarea. Reactivii şi materiile prime sunt disponibile cu uşurinţă cuiva având calificare obişnuită în domeniu.
Prepararea 1
2-Bromo-1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)etanona
Se adaugă N-bromosuccinimidă (984 g, 5,53 mol) în porţii la o soluţie de 1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)etanonă (1000 g, 4,6 mol) şi acid p-toluensulfonic (1315 g, 7,64 mol) în DCM (7 L) la 35 °C. Amestecul este agitat şi încălzit la 40 °C timp de 4 ore. Este răcit amestecul până la 24 °C, şi se adaugă 7% NaHCO3 (5 L). Sunt separate straturile şi stratul organic este spălat cu 10% Na2SO3 (5 L) şi apă (5 L). Este concentrat stratul organic până la 2-3 volume pentru a da compusul din titlu care este utilizat fără purificare suplimentară.
Prepararea 1 alternativă
Se dizolvă 1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)etanonă (80 g, 0,37 mol) în DCM (800
mL) şi se răceşte la 10 °C. Se adaugă brom (63 g, 0,39 mol) încet timp de 5 ore. După 30 de minute, se adaugă brom suplimentar (3,5 g, 0,06 mol). După 30 de minute, amestecul este încălzit la temperatura camerei şi stratul organic este spălat cu un amestec de NaCl apoasă (500 mL) şi NaHCO3 apos (400 mL). Stratul organic este spălat succesiv cu NaHCO3 apos (400 mL), NaHSO3 apos (2Ч400 mL), şi NaCl apoasă. Stratul organic este uscat (Na2SO4) şi concentrat până la un reziduu. Reziduul este dizolvat într-un amestec de DCM (100 mL) şi eter de petrol (500 mL). Soluţia este răcită la -50 °C timp de 0,5 ore şi solidul este colectat prin filtrare pentru a da compusul din titlu (84 g, 77%). 1H RMN (CDCl3) δ 4,46 (d, 2H), 7,07 (dd, 1H), 7,66 (m, 1H), 8,02 (dd, 1H).
Prepararea 2
2- [Alil(benzil)amino]-1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)etanona
Se adaugă 2-bromo-1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)etanonă (25,1 g, 84,8 mmol) la o soluţie de N-benzilprop-2-en-1-amină (15,0 g, 102 mmol) în toluen (200 mL) şi DIPEA (59 mL, 338 mmol) la temperatura camerei. Amestecul este dezoxigenat prin agitare la temperatura camerei timp de 10 minute în timp ce se barbotează sub suprafaţă azot prin amestec. Masa de reacţie este încălzită la 40 °C, agitată timp de 2,5 ore, şi apoi se adaugă suplimentar N-benzilpro-2-en-1-amină (2,0 g, 13,6 mmol). Reacţia este agitată la 40 °C timp de 4,5 ore şi apoi răcită la temperatura camerei. Materialul este utilizat fără purificare suplimentară. Soluţia este analizată prin HPLC pentru compusul din titlu utilizând următorii parametri: coloană LC: Waters Acquity Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC®) C82,1 × 100 mm 1,7 µm; fază mobilă A: 0,1% (vol/vol) TFA în apă + 0,2% ACN (vol/vol), preparată prin adăugare de TFA (4 mL) şi ACN (10 mL) la apă (4 L), fază mobilă B: 0,1% TFA în ACN, preparată prin adăugare de TFA (4 mL) la ACN (4 L). Gradient: %A = 95% până la 53,1% în 10 minute, debit 0,85 mL/minut, temperatura coloanei: 45 °C. Rt = 6,43 minute (UV)
Prepararea 3
5-Alil-6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-1-[(4-metoxifenil)metil-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol
La o soluţie de 2-bromo-1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)etanonă (1363 g, 4,61 mol) în toluen (10 L) se adaugă dialilamină (537 g, 5,53 mol) şi DIPEA (2381 g, 18,42 mol). Amestecul este agitat timp de 4 ore la 40 °C pentru a da 1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(dialilamino)etanonă, care nu este izolată. Se adaugă N-(4-metoxi-benzil)hidroxilamină (847 g, 5,53 mol) şi izopropoxid de titan (IV) (1965 g, 6,91 mol) la amestecul conţinând 1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(dialilamino)etanonă brută. Amestecul este agitat la 90 °C timp de 2 ore. Amestecul este răcit până la 20 °C, şi se adaugă 50% acid citric monohidrat (4 L) şi Na2CO3 saturat (4 L). Sunt separate straturile şi este extras aposul cu MTBE (5 L). Extractul organic este spălat cu apă (5 L), şi filtrat prin pământ de diatomee şi concentrat la sec. Se adaugă EtOAc (10 L) şi acid oxalic (580 g) la reziduu şi este filtrat un solid şi adăugat la 1 N NaOH (13 L). Se adaugă MTBE (5 L) şi amestecul este filtrat prin pământ de diatomee. Sunt separate straturile şi stratul organic este concentrat până la 2 volume. Se adaugă heptan (3 L) şi soluţia este răcită până la 10 °C. Solidul rezultat este filtrat pentru a da compusul din titlu (1330 g, 64%). 1H RMN(400 MHz, CDC13) δ 2,51-2,49(m, 3H), 3,09-3,04(m, 3H), 3,78-3,41(m, 6H), 4,01(m, 1H), 5,24-5,01(m, 2H), 5,89-5,85(m, 1H), 6,82-6,80(m, 2H), 7,51-7,13(m, 3H), 7,63-7,62(m, 1H), 7,65-7,64(m, 1H).
Prepararea 4
Relativ-(3aR,6aS)-5-Benzil-6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-1-[(4-metoxifenil)metil]-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol, acid oxalic
Se adaugă N-[(4-metoxifenil)metil]hidroxilamină (15,5 g, 101 mmol) la soluţia de 2-[alil(benzil)amino]-1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)etanonă la 40 °C, urmată de izopropoxid de titan (IV) (50,3 mL, 169 mmol). Amestecul este dezoxigenat prin barbotare cu azot prin sistem timp de 5 minute. Amestecul este încălzit la 90 °C cu agitare timp de 2 ore. Amestecul de reacţie este spălat cu o soluţie de acid citric (36 g, 186 mmol) în apă (36 g) şi agitat timp de 30 de minute la temperatura camerei. Se adaugă carbonat de sodiu (100 g, 939 mmol) ca soluţie saturată în apă şi este ajustat pH-ul până la aproximativ 9. Amestecul este diluat cu apă şi toluen după cum este necesar pentru a separa straturile. Stratul de toluen este spălat cu o soluţie de HCl în apă (5,1 mL de 5 N HCl) este diluat cu apă (200 mL) urmată de apă (200 mL). Stratul de toluen este concentrat până la un ulei gros. Uleiul este dizolvat în EtOAc (375 mL) şi se adaugă o soluţie de acid oxalic (15,4 g, 169 mmol) dizolvat în EtOAc (375 mL) în picătură cu agitare la temperatura camerei. Amestecul este agitat la temperatura camerei timp de 2 zile, filtrat, şi turta produsului este spălată cu EtOAc (250 mL). Solidul este uscat peste noapte în vid la 40 °C pentru a da compusul din titlu ca un amestec racemic de cis (41,7 g, 84%). ES/MS (m/z): 498 (M+H).
Prepararea 5
Relativ N-[3-[(3aR,6aS)-5-Benzil-1-[(4-metoxifenil)metil]-3,3a,4,6-tetrahidro-pirolo[3,4-c]izoxazol-6a-il]-4-fluoro-fenil]-2,2,2-trifluoro-acetamidă
Se adaugă Relativ-(3aR,6aS)-5-benzil-6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-1-[(4-metoxifenil)metil]-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol, acid oxalic (23,6 g, 40,2 mmol) la un amestec de DCM (400 mL) şi soluţie apoasă de NaOH 5 N (200 mL). Amestecul este agitat timp de 10 minute şi apoi sunt separate straturile. Stratul organic este concentrat pentru a da relativ-(3aR,6aS)-5-benzil-6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-1-[(4-metoxifenil)metil]-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol (20,0 g, 40,2 mmol). Acest material se adaugă la dimetil sulfoxid (360 mL), 2,2,2-trifluoroacetamidă (7,8 g, 68 mmol), iodură de sodiu (10,3 g, 68,6 mmol), carbonat de potasiu (9,54 g, 68,3 mmol), (1R,2R)-N,N'-dimetil-1,2-ciclohexandiamină (4,7 g, 32 mmol), şi iodură de cupru (I) (1,53 g, 8,03 mmol). Amestecul este dezoxigenat prin barbotare cu azot prin sistem timp de 10 minute. Amestecul este încălzit la 115 °C, agitat timp de 5,5 ore, şi răcit la temperatura camerei. Se adaugă EtOAc (250 mL) şi apă (200 mL) şi amestecul rezultat este agitat timp de 10-15 minute. Sunt separate straturile şi stratul apos este extras înapoi cu EtOAc (200 mL). Straturile organice combinate sunt spălate cu soluţie de clorură de amoniu 20 g% apoasă (100 mL) urmată de soluţie de clorură de litiu 20 g% apoasă (100 mL) şi apă (100 mL). Stratul organic este uscat pe sulfat de magneziu, filtrat, şi concentrat până la sec pentru a da compusul brut din titlu ca un amestec racemic de cis (23,6 g, 111%). ES/MS (m/z): 530 (M+H).
Prepararea 6
Relativ-3-[(3aR,6aS)-5-Benzil-1-(4-metoxifenil)metil]-3,3a,4,6-tetrahidro-pirolo[3,4-c]izoxazol-6a-il]-4-fluoro-anilină
Se adaugă Relativ N-[3-[(3aR,6aS)-5-benzil-1-[(4-metoxifenil)metil]-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol-6a-il]-4-fluoro-fenil]-2,2,2-trifluoro-acetamidă (21,0 g, 39,7 mmol) la metanol (250 mL), NaOH apos 5 N (105 mL), şi etanol (105 mL) şi amestecul rezultant este încălzit la 50 °C timp de 2 ore. Amestecul de reacţie este concentrat sub presiune redusă la 35-40 °C pentru a îndepărta metanolul şi etanolul. Materialul este dizolvat într-un amestec de MTBE (320 mL) şi apă (300 mL). Sunt separate straturile şi stratul organic este spălat cu apă (100 mL) urmată de un amestec de apă (400 mL) şi 12 N HCl apos (3,5 mL). Stratul apos se adaugă la un amestec de MTBE (400 mL), apă (100 mL), şi 5 N NaOH apos (25 mL) şi sunt separate straturile. Stratul apos este spălat cu MTBE (100 mL). Straturile organice sunt combinate, uscate pe sulfat de magneziu, filtrate, şi concentrate în vid pentru a da compusul din titlu ca un amestec racemic de cis (9,8 g, 57%). ES/MS (m/z): 435 (M+H).
Prepararea 7
Relativ-N-3-[(3aR,6aS)-5-Benzil-1-[(4-metoxifenil)metil]-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol-6a-il]-4-fluoro-fenil]acetamidă
Se adaugă Relativ-3-[(3aR,6aS)-5-benzil-1-(4-metoxifenil)metil]-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol-6a-il]-4-fluoro-anilină (9,4 g, 22 mmol) la DCM (110 mL), 4-dimetilaminopiridină (0,08 g, 0,65 mmol), şi trietilamină (6,1 mL, 43 mmol) şi reacţia este răcită la 0 °C. Se adaugă anhidridă acetică (3,4 g, 33 mmol) la soluţie în picătură. Masa de reacţie este încălzită la temperatura camerei şi agitată timp de 2 ore. Se adaugă apă (140 mL) la reacţie şi amestecul este agitat la temperatura camerei timp de 10 minute. Sunt separate straturile şi stratul apos este spălat cu DCM (100 mL). Straturile organice combinate sunt uscate pe sulfat de magneziu, filtrate, şi concentrate pentru a da compusul din titlu ca un amestec racemic de cis (10,1 g, 100%). ES/MS (m/z): 477 (M+H).
Prepararea 8
Clorhidrat de 5-alil-6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3,3a,4,6-tetrahidro-1H-pirolo[3,4-c]izoxazol
Se adaugă TFA (4 L, 52,9 mol) în picătură la o soluţie de 5-alil-6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-1-[(4-metoxifenil)metil-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol (1990 g, 4,45 mol) în DCM (12 L) la o rată pentru a menţine temperatura mai jos de 35 °C. După ce adăugarea este completă, amestecul este încălzit la 33-43 °C şi agitat timp de 6 ore. Se adaugă NaOH (20%, 10 L) la o rată pentru a menţine temperatura mai jos de 35 °C. Sunt separate straturile şi stratul organic este spălat cu apă (6 L). Este concentrată soluţia, se adaugă etanol (16 L), şi este filtrat amestecul prin pământ de diatomee. Este concentrat filtratul şi se adaugă EtOAc (10 L). Se adaugă 4 M HCl în EtOAc (8 L) şi solidul rezultat este filtrat şi uscat pentru a da compusul din titlu (1385 g, 85,6%). ES/MS (m/z): 327,1 (M+H)
Prepararea 9
[1-Alil-4-amino-4-(5-bromo-2-fluoro-fenil)pirolidin-3-il]metanol
Se adaugă o soluţie apoasă saturată de carbonat de sodiu la o soluţie de clorhidrat de 5-alil-6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3,3a,4,6-tetrahidro-1H-pirolo[3,4-c]izo-xazol (1400 g, 3,85 mol) în DCM (7 L) pentru a ajunge la un pH>9. Sunt separate straturile şi extractul organic este concentrat până la 1,5 volume. Se adaugă HOAc (1,38 L) şi soluţia este concentrată până la 2 L. Se adaugă HOAc (7 L) şi pulbere de zinc (2,5 kg, 38,5 mol) şi amestecul este încălzit la 40-50 °C şi agitat timp de 3 ore. Se adaugă EtOAc (9,8L) şi amestecul este filtrat prin pământ de diatomee. Turta de filtru este spălată cu EtOAc (4 L). Este separat filtratul şi se adaugă apă (7 L) la organicele combinate. Se adaugă hidroxid de amoniu pentru a atinge un pH ≥9. Sunt separate straturile şi stratul organic este concentrat până la 2 L. Se adaugă etanol (2,8 L) şi soluţia este concentrată până la 2 L. Se adaugă etanol (19 L) şi amestecul este filtrat prin pământ de diatomee pentru a da o soluţie de etanol a compusului din titlu, care este utilizată fără purificare suplimentară.
Prepararea 10
[(3S,4R)-1-alil-3-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4-(hidroximetil)pirolidin-3-il] amoniu; (2S,3S)-4-hidroxi-2,3 -bis [(4-metilbenzoil)oxi] -4-oxo-butanoat
Se adaugă monohidrat de acid di-p-toluoil-L-tartric (1,04 kg, 2,69 mol) la o soluţie de [1-alil-4-amino-4-(5-bromo-2-fluoro-fenil)pirolidin-3-il]metanol (1264 g. 3,85 mmol) în etanol (21 L). Amestecul este încălzit la 65-75 °C şi agitat timp de 3 ore. Amestecul este răcit la 5-10 °C, se adaugă un cristal sămânţă de [(3S,4R)-1-alil-3-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4-(hidroximetil)pirolidin-3-il]amoniu;(2S,3S)-4-hidroxi-2,3-bis[(4-metilbenzoil)oxi]-4-oxo-butanoat (1,0 g), şi amestecul este agitat timp de 3 ore. Este filtrat solidul şi turta de filtru este spălată cu etanol rece (1,4 L). Turta de filtru este uscată pentru a da compusul din titlu ca solid alb. Analiza chirală a celui de-al doilea izomer de eluare: Coloană: IC Chiralpak, 4,6 mm * 250 mm * 5 µm; eluent: 90% hexan (0,3% dietilamină): 10% etanol (0,3% dietilamină); debit de 1,0 mL/min la UV 270 nm confirmă enantiomerul îmbogăţit enantiomeric (99% ee) cu Rt = 7,4 minute, (1050 g, 38%). 1H RMN(400 MHz, CD3OD) δ 2,40(s, 6H), 3,05-3,04(m, 1H), 3,57-3,31(m, 3H), 3,66-3,58(m, 4H), 3,75-3,74(m, 2H), 5,38-5,36(m, 1H), 5,50-5,46(m, 1H), 5,88(s, 2H), 5,97-5,91(m, 1H), 7,10-7,05(m, 1H), 7,29(d, J=8,0 Hz, 4H), 7,53-7,51(m, 1H), 7,80-7,78(m, 1H), 8,01(d, J=8,0 Hz, 4H).
Prepararea 11
Relativ-1-[3-[(3S,4R)-3-Amino-4-(hidroximetil)pirolidin-3-il]-4-fluoro-fenil]propan-2-onă, acid di-toluensulfonic
Se adaugă Relativ-N-3-[(3aR,6aS)-5-benzil-1-[(4-metoxifenil)metil]-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol-6a-il]-4-fluoro-fenil]acetamidă (5,0 g, 11,0 mmol) la apă (75 mL), 10% paladiu pe carbon (2,5 g, 23 mmol), acid p-toluensulfonic (5,0 g, 26 mmol), şi etanol (75 mL) şi amestecul este hidrogenat sub atmosferă de hidrogen de 50 psi la temperatura camerei timp de 20 de ore. Amestecul este filtrat prin pământ de diatomee şi patul este spălat cu etanol (100 mL) urmat de DCM (100 mL). Filtratul este concentrat pentru a da compusul din titlu ca un amestec racemic de cis în randament brut cantitativ (8,1 g, >100%). Materialul este utilizat direct fără purificare suplimentară. ES/MS (m/z): 268 (M+H).
Prepararea 12
((3R,4S)-1-Alil-4-amino-4-(5-bromo-2-fluoro-fenil)pirolidin-3-il)metanol
Se adaugă HCl 1N (500 mL, 500 mmol) la o soluţie de 0 °C de [(3S,4R)-1-alil-3-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4-(hidroximetil)pirolidin-3-il]amoniu;(2S,3S)-4-hidroxi-2,3-bis[(4-metilbenzoil)oxi]-4-oxo-butanoat (100 g, 139,4 mmol) în EtOAc (500 mL). Amestecul este agitat timp de 1 oră. Este separat stratul apos şi este ajustat pH-ul la 8 cu 1 N NaOH. Este extras stratul apos cu EtOAc (350 mL × 2). Straturile organice sunt combinate, spălate cu apă (500 mL) şi concentrate pentru a da compusul din titlu (40 g, 87%). Analiza chirală a celui de-al doilea izomer de eluare: Coloană: IC Chiralpak, 4,6 mm * 250 mm * 5 µm; eluent: 90% hexan (0,3% dietilamină): 10% etanol (0,3% dietilamină); debit de 1,0 mL/min la UV 270 nm confirmă enantiomerul îmbogăţit enantiomeric (99,7% ee) cu Rt = 7,4 minute. 1H RMN(400 MHz, CDC13) δ 2,78-2,70(m, 5H), 3,16-3,00(m, 3H), 3,87-3,75(m, 1H), 3,90-3,84(m, 1H), 5,24-5,11(m, 2H), 5,91-5,87(m, 1H), 6,95-6,91(m, 1H), 7,35-7,32(m, 1H), 7,67-7,65 (m, 1H).
Prepararea 13
Relativ-N-[3-[(3S,4R)-3-Amino-1-(5-fluoropirimidin-2-il)-4-(hidroximetil)pirolidin -3-il]-4-fluoro-fenil]acetamidă
Se adaugă Relativ-1-[3-[(3S,4R)-3-amino-4-(hidroximetil)pirolidin-3-il]-4-fluoro-fenil]propan-2-onă, acid ditoluensulfonic (7,5 grame, 12,3 mmol) la ACN (75 mL). Se adaugă 2-cloro-5-fluoropirimidină (2,44 g, 18,4 mmol) şi DIPEA (7,5 mL, 43 mmol) şi amestecul este încălzit la 70 °C timp de 20 de ore. Este răcit amestecul la temperatura camerei şi concentrat. Se adaugă apă (50 mL) şi este agitat amestecul timp de 1 oră pe măsură ce se formează o suspensie. Amestecul este filtrat şi uscat la temperatura camerei sub vid pentru a da compusul din titlu ca un amestec racemic de cis (3,0 g). Soluţia apoasă rămasă este extrasă cu cloroform (3 × 20 mL), uscată pe sulfat de sodiu, concentrată la sec şi uscată sub vid pentru a da compusul din titlu suplimentar (1,8 g), pentru un randament brut total (4,8 g, 110%). ES/MS (m/z): 364 (M+H).
Prepararea 14
N-(((3S,4R)-1-Alil-3-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4-(hidroximetil)pirolidin-3-il)carbamotioil)benzamidă
Se adaugă izotiocianat de benzoil (15,0 g, 91,9 mmol) la o soluţie de 0 °C de ((3R,4S)-1-alil-4-amino-4-(5-bromo-2-fluoro-fenil)pirolidin-3-il)metanol (30g, 91,1 mmol) în THF (400 mL). Soluţia este încălzită la 25 °C şi agitată timp de 1 oră pentru a da o soluţie de THF a compusului din titlu, care este utilizată fără purificare suplimentară.
Prepararea 15
N-((4aR,7aS)-6-Alil-7a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzamidă, diclorhidrat
Se adaugă trifenilfosfină (36,8 g, 140,3 mmol) la o soluţie de THF (400 mL) cu N-(((3S,4R)-1-alil-3-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4-(hidroximetil)pirolidin-3-il)carbamotioil)benzamidă (91,1 mmol). Se adaugă di-t-butil azodicarboxilat (31,6 g, 137,2 mmol) în THF (100 mL). Amestecul este agitat la 20-30 °C timp de 2 ore. Este concentrat amestecul şi se adaugă MTBE (400 mL). Soluţia este filtrată prin pământ de diatomee şi turta este spălată cu MTBE (130 mL). Filtratele sunt combinate şi se adaugă HCl 1N în EtOAc (200 mL). Amestecul este agitat timp de 2 ore şi apoi concentrat până la 500 mL. Se adaugă MTBE (320 mL) şi soluţia este filtrată şi spălată cu heptan (130 mL). Solidul este suspendat în EtOAc (650 mL) şi agitat la 50-60 °C timp de 2 ore. Suspensia fierbinte este filtrată şi solidul este spălat cu EtOAc (130 mL) şi heptan (130 mL). Solidul este resuspendat în EtOAc (650 mL) şi agitat timp de 2 ore la 50-60 °C. Suspensia fierbinte este filtrată şi spălată cu EtOAc (130 mL) şi heptan (130 mL). Solidul este uscat pentru a da compusul din titlu ca sare de di-HCl (40 g, 80%, 99,5% ee). Analiza chirală a primului izomer de eluare: Coloană: IC Chiralpak, 4,6 mm * 250 mm * 5 µm; eluent: 85% hexan (0,1% dietilamină): 15% alcool izopropilic (0,1% dietilamină); debit de 1,0 mL/min la UV 282 nm confirmă enantiomerul îmbogăţit enantiomeric (99,5% ee) cu Rt = 12,5 minute.
Prepararea 16
N-[(4aR,7aS)-6-Alil-7a-[2-fluoro-5-[(2,2,2-trifluoroacetil)amino]fenil]-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă
Se adaugă 15% carbonat de sodiu (440 mL) la o soluţie de N-((4aR,7aS)-6-alil-7a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzami-dă, diclorhidrat (495 g, 717,88 mmol) în EtOAc (3 L) şi apă (784 mL). Amestecul este agitat timp de 1-2 ore. Sunt separate straturile şi stratul organic este filtrat prin silica gel (40 g) şi spălat cu EtOAc (600 mL). Filtratul este concentrat la sec pentru a da N-((4aR,7aS)-6-alil-7a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzamidă. Se adaugă trifluoroacetamidă (136,7 g, 1,21 mol), NaI (182,5 g, 1,22 mol), site moleculare de 4 A (342 g), şi K2CO3 (170,9 g, 1,24 mol) la o soluţie de N-((4aR,7aS)-6-alil-7a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzamidă (341 g, 494,54 mmol) în DMSO (525 mL) şi 1,4-dioxan (1,025 L). Se adaugă trans-N,N'-dimetilciclohexan (81,6 g, 573,66 mmol) şi iodură de cupru (27,3 g, 143,34 mmol) în DMSO (500 mL) la amestecul de reacţie. Amestecul este agitat timp de 5 minute. Este încălzit amestecul la 100 °C şi este agitat timp de 8 ore şi răcit la 24 °C. Se adaugă apă (5,9 L) şi DCM (5,91), este filtrat amestecul, şi sunt separate straturile. Stratul organic este spălat cu apă (5,9 L) pentru a obţine compusul din titlu într-o soluţie de DCM, care este utilizată fără purificare suplimentară.
Prepararea 17
Relativ-N-[(4aR,7aS)-7a-5-(Acetamido)-2-fluoro-fenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă
Se adaugă THF (30 mL) la relativ-N-[3-[(3S,4R)-3-amino-1-(5-fluoropirimidin-2-il)-4-(hidroximetil)pirolidin-3-il]-4-fluoro-fenil]acetamidă (4,1 g, 11,0 mmol). Ameste-cul este răcit într-o baie cu gheaţă până la 0 °C şi se adaugă izotiocianat de benzoil (1,50 mL, 11,0 mmol). Amestecul este lăsat apoi să se încălzească la temperatura camerei în 30 de minute. Se adaugă 1,1'-carbonildiimidazol (1,9 g, 11,0 mmol) şi amestecul este agitat la temperatura camerei timp de 2 ore. Amestecul este apoi încălzit la 55 °C şi agitat încă 18 ore. Se adaugă apă (50 mL) şi amestecul este extras cu EtOAc (50 mL). Stratul apos este extras cu EtOAc suplimentar (25 mL) şi este concentrat la sec. Reziduul brut este purificat prin cromatografie rapidă pe coloană cu silica gel eluând cu 50% DCM în EtOAc, urmată de 100% EtOAc. Fracţiunile adecvate sunt concentrate şi uscate sub vid pentru a da compusul din titlu ca un amestec racemic de cis (1,33 g, 26%). ES/MS (m/z): 509 (M+H).
Prepararea 18
N-((4aR,7aS)-6-Alil-7a-(5-amino-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzamidă, clorhidrat
Se adaugă NaOH (28,7 g) şi apă (2,7 L) la o soluţie de DCM a N-[(4aR,7aS)-6-alil-7a-[2-fluoro-5-[(2,2,2-trifluoroacetil)amino]fenil]-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidei (250 g, 494,4 mmol) şi amestecul este agitat la 24 °C timp de 68 de ore. Se adaugă HCl 1N (3,5 L) pentru a obţine un pH de 1-3. Sunt separate straturile şi stratul apos este spălat cu DCM (680 mL). Se adaugă DCM (4 L) la cel apos urmat de 21% hidroxid de amoniu pentru a obţine un pH de 8-10. Sunt separate straturile şi extractele organice sunt combinate, filtrate prin silica gel (170 g) şi spălate cu DCM (1,4 L). Solventul este concentrat la sec şi diluat cu EtOAc (4 L). Se adaugă HCl 1N în EtOAc (700 mL) la o temperatură mai joasă de 25 °C şi amestecul este agitat timp de 1 oră. Amestecul este concentrat până la aproximativ 7-8 volume şi se adaugă EtOAc (2,8 L). Precipitatul rezultat este filtrat şi spălat cu EtOAc (400 mL). Solidul este uscat pentru a da compusul din titlu (246 g, 52%).
Prepararea 19
N-((4aR,7aS)-7a-(5-Acetamido-2-fluoro-fenil)-6-alil-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzamidă
Se adaugă anhidridă acetică (23,5g, 0,23 mol) la o soluţie de N-((4aR,7aS)-6-alil-7a-(5-amino-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzami-dă, clorhidrat (100 g, 0,153 mol) şi trietilamină (54,3 g, 0,535 mol) în DCM (800 mL). După agitare timp de 1 oră la 20 - 25 °C, se adaugă NaHCO3 saturat (700 mL) şi apă (600 mL). Sunt separate straturile pentru a da compusul din titlu, care este utilizat fără purificare suplimentară ca soluţie în DCM.
Prepararea 20
N-((4aR,7aS)-7a-(5-Acetamido-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzamidă
Se adaugă trifenilfosfină (4,0g, 0,015 mol) şi acid 1,3-dimetilbarbituric (15,2 g, 0,097 mol) la o soluţie de DCM a N-((4aR,7aS)-7a-(5-acetamido-2-fluorofenil)-6-alil-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzamidei (0,153 mol). Se adaugă acetat de paladiu (1,7g, 7,7 mmol) şi amestecul este agitat la 20 până la 30 °C timp de 1 oră. Se adaugă 25% hidroxid de amoniu şi sunt separate straturile. Stratul organic este spălat cu HOAc (3,0 echiv în 500 mL de apă) şi este ajustat pH-ul până la 8-9 cu 25% hidroxid de amoniu. Stratul apos este extras cu DCM (2 × 500 mL). Extractele organice sunt combinate şi concentrate până la 3-4 volume. Se adaugă MTBE (1 L) şi este filtrat amestecul. Este concentrat amestecul şi se adaugă heptan (1 L). Solidul rezultat este filtrat, colectat, şi uscat pentru a da compusul din titlu (48 g, 76%). 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ 2,15 (s, 3H), 2,87-2,83(m, 1H), 3,43-3,23(m, 5H), 3,70-3,67(m, 1H), 7,12-7,07 (m, 1H), 7,28-7,27 (m, 1H), 7,52-7,41(m, 4H), 7,79(m, 1H), 8,18-8,16(m, 2H), ES/MS (m/z): 413,1 (M+H).
Prepararea 21
N-((4aR,7aS)-7a-(5-Acetamido-2-fluoro-fenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d] [1,3]tiazin-2-il)benzamidă
Se adaugă 2-cloro-5-fluoropirimidină (28,9 g, 218 mmol) şi carbonat de potasiu (33,46 g, 242,1 mmol) la o soluţie de N-((4aR,7aS)-7a-(5-acetamido-2-fluorofenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzamidă (50 g, 121,22 mmol) în DMF (100 mL). Amestecul este încălzit la 80-85 °C timp de 8 ore. Este răcit amestecul la 24 °C, filtrat, şi spălat cu DMF (100 mL). Solidele sunt suspendate în apă (2 L) şi filtrate pentru a obţine compusul din titlu (68,5g, 98%). LC-MS: m/z=509,2 (M+H)+, 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm 1,22 (t, J = 7,28 Hz, 2 H) 1,92 - 2,07 (m, 6 H) 2,89 - 3,20 (m, 2 H) 3,36 - 3,44 (m, 1 H) 3,67 (t, J=9,54 Hz, 1 H) 3,84 (br. s., 1 H) 4,16 (br. s., 2 H) 7,23 (br. s., 2 H) 7,35 - 7,61 (m, 8 H) 7,77 (br. s., 2 H) 7,85 - 8,18 (m, 4 H) 8,48 (s, 4 H) 10,15 (br. s., 1 H) 10,46 - 10,59 (m, 1 H).
Prepararea 22
(4aR,7aS)-7a-(5-Amino-2-fluoro-fenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-amină
Se adaugă hidroxid de litiu (8,6 g, 204,9 mmol) la o soluţie de N-((4aR,7aS)-7a-(5-acetamido-2-fluoro-fenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il)benzamidă (80 g, 157,3 mmol) în metanol (400 mL). Amestecul este încălzit la 60-70 °C timp de 4 ore. Se adaugă HCl concentrat (132 g) şi este agitat amestecul la 55 °C timp de 18 ore. Este răcit amestecul la 30 °C şi concentrat pentru a îndepărta metanolul. Se adaugă apă şi este extras stratul apos cu DCM (3 Ч) pentru a obţine compusul din titlu ca o soluţie apoasă de 920 g din care 5,6% din masa totală este compusul din titlu care este utilizat fără purificare suplimentară.
Prepararea 22 alternativă
Se adaugă acid sulfuric (33,4 ml, 626,6 mmol) la o soluţie de (4aR,7aS)-7a-(2-fluorofenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-amină (45,8 g, 125,3 mmol) în TFA (626 mL). Amestecul este răcit la 0 °C şi agitat timp de 20 minute. Se adaugă acid azotic fumans (6,2 mL, 144,1 mmol) şi amestecul de reacţie este încălzit la 22 °C şi agitat timp de 3 ore. Amestecul de reacţie este evaporat şi se adaugă MTBE (250 mL) şi se evaporă de două ori. Reziduul este uscat sub vid până la o greutate constantă şi apoi este dizolvat în apă (147 mL) şi etanol (885 mL) şi degazat cu azot de barbotare timp de 15 minute. Soluţia este transferată într-un reactor de presiune şi se adaugă pastă de 10% Pd/C de tip 87 L (6,6 g, 6,27 mmol). Amestecul este diluat cu etanol suplimentar (700 mL) şi presurizat cu hidrogen la 80 psi timp de 16 ore. Amestecul de reacţie este filtrat şi apoi se adaugă o a doua încărcare de catalizator pastă de 10% Pd/C de tip 87 L (6,6 g, 6,27 mmol) şi amestecul este presurizat până la 80 psi şi agitat timp de 3 zile în reactorul de presiune. Amestecul de reacţie este purjat cu azot şi filtrat pe pământ de diatomee. Filtratul este evaporat şi reziduul este partiţionat între apă (200ml) şi EtOAc (200 ml). Stratul apos este separat, răcit la 5 °C, şi neutralizat cu hidroxid de amoniu 15% g/g. Stratul apos este extras cu EtOAc (3 Ч 150 mL). Organicele sunt combinate, uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi evaporate sub presiune redusă pentru a da compusul din titlu ca solid maro deschis (47,7 g, 99% conţinând EtOAc rezidual). ES/MS (m/z): 363 (M+H).
Prepararea 23
N-alil-N-(2,2-dimetoxietil)carbamat de benzil
O soluţie de N-(2,2-dimetoxietil)carbamat de benzil (50 g, 208,9 mmol) în toluen (180 mL) este tratată cu hidroxid de potasiu solid (51,6 g, 919,69 mmol) sub azot. După 10 minute, se adaugă clorură de benziltrietilamoniu (0,8 g, 3,1 mmol). După alte 10 minute se adaugă o soluţie de bromură de alil (33 g, 272,8 mmol) în toluen (50 mL) în picătură timp de 10 minute. Amestecul rezultant este agitat la 50 °C timp de 48 de ore. Amestecul este răcit la temperatura camerei şi stins cu apă. Stratul organic este separat, spălat cu saramură, uscat pe sulfat de magneziu, şi concentrat la sec pentru a da compusul din titlu (44 g, 75%). ES/MS (m/z): 280 (M+H).
Prepararea 24
N-alil-N-(2-oxoetil)carbamat de benzil
O soluţie de N-alil-N-(2,2-dimetoxietil)carbamat de benzil (30 g, 107 mmol) în acid formic (36,8 mL, 860 mmol) şi apă (4,84 mL) este agitată la temperatura camerei peste noapte. Amestecul este concentrat şi diluat cu hexani/EtOAc (1:2) şi apă. Stratul organic este separat, spălat cu soluţie de saramură până când pH=6, şi uscat pe sulfat de sodiu. Solventul este evaporat pentru a da compusul din titlu (25 g, 99%). ES/MS (m/z): 234 (M+H).
Prepararea 25
N-alil-N-[2-hidroxiiminoetil]carbamat de benzil
O soluţie de N-alil-N-(2-oxoetil)carbamat de benzil (25 g, 107 mmol) în ACN (150 mL) este tratată cu clorhidrat de hidroxilamină (9,68 g, 139 mmol) şi o soluţie de acetat de sodiu trihidrat (16 g, 117,9 mmol) în apă (75 mL). Amestecul este agitat la temperatura camerei peste noapte. Este evaporat ACN şi soluţia apoasă este extrasă cu EtOAc. Stratul organic este separat, uscat pe sulfat de magneziu, şi concentrat sub vid pentru a da compusul din titlu (24 g, 90%). ES/MS (m/e): 249 (M+H).
Prepararea 26
3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol-5-carboxilat de benzil
O soluţie de N-alil-N-[2-hidroxiiminoetil]carbamat de benzil (24 g, 96,6 mmol) în DCM (338 mL) este tratată în picătură timp de 10 minute cu o soluţie apoasă 5% g/g de hipoclorit de sodiu (106,08 mmol, 143,06 mL). Amestecul rezultant este agitat la temperatura camerei peste noapte. Reacţia este stinsă cu o soluţie apoasă 40 % de bisulfit de sodiu (7 g). Stratul organic este separat, uscat pe sulfat de magneziu, şi concentrat sub vid. Produsul brut este purificat pe silica gel eluând cu 5 % EtOAc în hexani pentru a da compusul din titlu (18 g, 75 %). ES/MS (m/z): 247 (M+H).
Prepararea 27
6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3,3a,4,6-tetrahidro-1H-pirolo[3,4-c]izoxazol-5-carboxilat de benzil
O soluţie de hexani 1,6 M cu n-butil litiu (25,4 mL, 40,6 mmol) se adaugă în picătură la o soluţie de -78 °C de 4-bromo-1-fluoro-2-iodobenzen (12,22 g, 40,6 mmol) în THF (60 mL) pentru a da o soluţie galbenă care este agitată la -78 °C timp de 15 minute. Se adaugă trifluorură eterat de bor (5,14 mL, 40,6 mmol) la o soluţie separată de -78 °C de 3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol-5-carboxilat de benzil (5 g, 20,3 mmol) în THF (60 mL) şi amestecul este agitat la -78 °C timp de 5 minute. Această soluţie se adaugă la amestecul de organolitiu de -78 °C preparat anterior prin canulă. Amestecul combinat este agitat timp de 30 de minute la -78 °C. Amestecul este stins cu clorură de amoniu saturată apoasă şi încălzit la temperatura camerei. Amestecul este extras cu EtOAc (3 Ч) şi extractele organice sunt combinate, uscate pe sulfat de sodiu, filtrate şi solventul este îndepărtat în vid. Produsul brut este purificat pe silica gel cu un gradient de 35 de minute de 5% până la 100% EtOAc în hexani pentru a da compusul din titlu (2,27 g, 27%). ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 421/423 (M+H).
Prepararea 28
1-(benzoilcarbamotioil)-6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol-5-carboxilat de benzil
Se adaugă izotiocianat de benzoil (2,87 mL, 21,28 mmol) în picătură la o soluţie de 6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3,3a,4,6-tetrahidro-1H-pirolo[3,4-c]izoxazol-5-carboxilat de benzil (5,977 g, 14,2 mmol) în THF (95 mL) şi se agită peste noapte sub azot. Solventul este îndepărtat în vid. Produsul brut este purificat pe silica gel cu un gradient de 30 de minute 5% până la 100% EtOAc în hexani pentru a da compusul din titlu (6,05 g, 73%). ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 584/586 (M+H).
Prepararea 29
3-(benzoilcarbamotioilamino)-3-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4-(hidroximetil)pirolidin-1-carboxilat de benzil
Un amestec de 1-(benzoilcarbamotioil)-6a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3,3a,4,6-tetrahidropirolo[3,4-c]izoxazol-5-carboxilat de benzil (6,05 g 10,4 mmol) şi zinc (praf, <10 microni) (6,77 g, 103,5 mmol) este agitat în HOAc (52 mL) la temperatura camerei peste noapte sub azot. Reacţia este diluată cu EtOAc şi filtrată prin pământ de diatomee. Solventul este îndepărtat în vid şi reziduul este diluat cu EtOAc, apă, şi bicarbonat de sodiu apos saturat. Amestecul este extras cu EtOAc (3 Ч), straturile organice combinate sunt combinate şi uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi solventul este îndepărtat în vid. Produsul brut este purificat pe silica gel cu un gradient de 30 de minute 5% până la 100% EtOAc în hexani pentru a da compusul din titlu (5,222 g, 86%). ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 586/588 (M+H).
Prepararea 30
2-benzamido-7a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-6-carboxilat de benzil
Se adaugă 1,1'-carbonildiimidazol (2,87 g, 17,7 mmol) la o soluţie de 3-(ben-zoilcarbamotioilamino)-3-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4-(hidroximetil)pirolidin-1-carboxilat de benzil (5,198 g, 8,86 mmol) în THF (52 mL). Amestecul este agitat timp de 1,5 ore la temperatura camerei şi apoi masa de reacţie este încălzită la reflux peste noapte sub azot. Reacţia este răcită, diluată cu apă, şi extrasă cu EtOAc (3 ×). Straturile organice sunt combinate, uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi solventul este îndepărtat în vid. Produsul brut este purificat pe silica gel cu un gradient de 30 de minute 5% până la 100% EtOAc în hexani pentru a da compusul din titlu (2,93 g, 58%). ES/MS (m/z): (79Br/81Br). 568/570 (M+H)
Prepararea 31
N-[7a-(5-Bromo-2-fluoro-fenil)-4a,5,6,7-tetrahidro-4H-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă
Se adaugă iodotrimetilsilan (2,21 mL, 15,46 mmol) în picătură la o soluţie la temperatura camerei de 2-benzamido-7a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidro-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-6-carboxilat de benzil (2,93 g, 5,15 mmol) în ACN (44 mL). Reacţia este agitată la temperatura camerei timp de două ore şi este îndepărtat solventul în vid. Produsul brut este purificat cu o coloană SCX utilizând 3:1 DCM:metanol şi apoi 2:1 DCM:7 N amoniac în metanol pentru a da compusul din titlu (2,098 g, 94%). ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 434/436 (M+H).
Prepararea 32
2-benzamido-7a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-6-carboxilat de terţ-butil
Se adaugă di-t-butildicarbonat (1,16 g, 5,31 mmol) şi trietilamină (1,01 mL, 7,25 mmol) la o soluţie de N-[7a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4a,5,6,7-tetrahidro-4H-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă (2,098 g, 4,83 mmol) în DCM (48 mL). Reacţia este agitată timp de 1 oră la temperatura camerei sub azot. Solventul este îndepărtat în vid şi produsul brut este purificat pe silica gel cu un gradient de 30 de minute 5% până la 100% EtOAc în hexani pentru a da compusul din titlu (2,556 g, 99%). ES/MS (m/z): (79Br/81Br) 534/536 (M+H).
Prepararea 33
7a-(5-amino-2-fluoro-fenil)-2-benzamido-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-6-carboxilat de terţ-butil
O soluţie de 2-benzamido-7a-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4,4a,5,7-tetrahidro-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-6-carboxilat de terţ-butil (2,556 g, 4,8 mmol) şi trans-N,N'-dimetil-1,2-ciclohexandiamină (150 mg, 1,1 mmol) în etanol (50 mL) este tratată cu azidă de sodiu (933 mg, 14,3 mmol). Se adaugă o soluţie apoasă de acid L-ascorbic sare de sodiu (0,66 M, 3,2 mL, 2,1 mmol) şi apă (1 mL) şi este purjată partea superioară a flaconului cu azot. Amestecul este tratat cu o soluţie apoasă de sulfat de cupru(II) pentahidrat (0,33 M, 3,2 mL, 1,1 mmol) şi amestecul este imediat încălzit pe o placă fierbinte preîncălzită la 80 °C timp de 1,5 ore sub azot. După încălzire este obţinut un amestec omogen. Reacţia este răcită, diluată cu apă cu gheaţă, şi amestecul este extras cu EtOAc (3 Ч). Extractele organice sunt combinate şi uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi solventul este îndepărtat în vid pentru a da produsul brut de azidă. Produsul brut de azidă este combinat cu 10% paladiu pe carbon (1 g) în etanol rece (150 mL) şi amestecul este purjat utilizând vid/azot şi apoi vid/hidrogen. Amestecul este agitat la temperatura camerei sub 30 psi de hidrogen timp de 5 ore. Reacţia este ventilată, filtrată prin pământ de diatomee, şi turta de filtru este clătită cu DCM. Solventul este îndepărtat din filtrat în vid şi produsul brut este purificat pe silica gel cu 50% EtOAc în DCM pentru a da compusul din titlu (2,014 g, 89%). ES/MS (m/z): 471 (M+H).
Prepararea 34
N-[7a-(5-Amino-2-fluoro-fenil)-4a,5,6,7-tetrahidro-4H-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă
Se adaugă TFA (10 mL) la o soluţie de 7a-(5-amino-2-fluoro-fenil)-2-benzamido-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-6-carboxilat de terţ-butil (2,013 g, 4,28 mmol) în DCM (30 mL) şi amestecul este agitat la temperatura camerei sub azot timp de 4 ore. Solventul este îndepărtat în vid şi produsul brut este purificat cu o coloană SCX utilizând 3:1 DCM:metanol şi apoi 2:1 DCM:7 N amoniac în metanol pentru a da compusul din titlu (1,555 g, 98%). ES/MS (m/z): 371 (M+H).
Prepararea 35
N-[7a-(5-Amino-2-fluoro-fenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d] [1,3]tiazin-2-il]benzamidă racemică
O soluţie de N-[7a-(5-amino-2-fluoro-fenil)-4a,5,6,7-tetrahidro-4H-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă (705 mg, 1,90 mmol), 5-fluoro-2-cloropirimidină (1,01 g, 7,61 mmol), şi DIPEA (1,66 mL, 9,52 mmol) este încălzită în 1,4-dioxan (20 mL) la reflux timp de 4 ore sub azot. Reacţia este răcită, diluată cu apă, şi extrasă cu EtOAc (3 ×). Straturile organice sunt combinate, uscate pe sulfat de sodiu, filtrate şi solventul este îndepărtat în vid pentru a da produsul brut. Produsul brut este purificat pe silica gel cu un gradient de 25 de minute 5% până la 100% EtOAc în hexani pentru a da compusul din titlu (590 mg, 66%). ES/MS (m/z): 467 (M+H).
Prepararea 36
N-[(4aR,7aS)-7a-(5-Amino-2-fluoro-fenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă, (izomerul 1)
N-[7a-(5-amino-2-fluoro-fenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropiro-lo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamida racemică (1,694 g, 3,63 mmol) este purificată prin HPLC chirală (Coloană: Chiralcel OJ, 8x35 cm; eluent: 90 % metanol (0,2 % dimetiletilamină) şi 10% ACN; flux 400 mL/min la UV 280 nm). Analiza primului izomer care eluează (Coloană: Chiralcel OJ-H 0,46 x 15 cm; eluent: 10:90 ACN:metanol (cu 0,2% dimetiletilamină); flux: 0,6 mL/min la UV 280 nm) confirmă enantiomerul îmbogăţit enantiomeric (99% ee) cu Rt = 6,70 minute, (723 mg, 43%). ES/MS (m/z): 467 (M+H).
Prepararea 37
N-[3-[(4aR,7aS)-2-Benzamido-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă, izomerul 1
N-[(4aR,7aS)-7a-(5-Amino-2-fluoro-fenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamida, izomerul 1 (0,361 g, 0,77 mmol) este dizolvată într-un amestec de DCM (4 mL) şi DMF (0,5 mL). Se adaugă acid 5-metoxipirazin-2-carboxilic (240 mg, 1,55 mmol), HOBT (210 mg, 1,55 mmol) şi EDCI (300 mg, 1,55 mmol) la amestec şi amestecul este agitat peste noapte la temperatura camerei. Se adaugă soluţia de reacţie direct pe o coloană de încărcare cu silica gel de 12 g şi este purificată utilizând o coloană cu silica gel de 40 g şi eluând cu un gradient de 0-100% EtOAc/hexani. Produsul este dizolvat în EtOAc (200 mL), spălat cu 1 N NaOH (2 × 50 mL), şi cu saramură (1 × 50 mL). Purificarea cu silica gel este repetată după cum s-a descris mai sus pentru a da compusul din titlu (350 mg, 74%). ES/MS (m/z): 603 (M+H).
Prepararea 38
5-Alil-6a-(2-fluorofenil)-3,3a,4,6-tetrahidro-1H-pirolo[3,4-c]izoxazol
Etapa de reacţie chimică a fluxului: Un reactor tubular de 343 ml din oţel inoxidabil neted (OD=1/8 inci) este plasat în interiorul unui cuptor GC şi spălat cu toluen la 20 mL/min timp de 20 de minute. Se aplică presiune din spate cu azot (720 psig) şi se setează temperatura GC la 210 °C. După ce temperatura a atins 210 °C, o soluţie de 2-(dialilamino)-1-(2-fluorofenil)etanonă oximă (480,51 g, 1,74 mol) în toluen (5,81 L) este pompată prin reactor la 22,866 mL/min utilizând o pereche de pompe cu seringă de înaltă presiune funcţionând în mod continuu pentru a da un timp de rezistenţă de 15 minute. După ce toată soluţia de stoc este consumată reactorul este spălat cu toluen la 22,866 mL/min timp de 30 de minute. Temperatura cuptorului GC este stabilită la 25 °C şi soluţia completă este colectată şi concentrată sub vid. Solventul este evaporat şi reziduul este dizolvat în DCM (2,5 L) şi apă (5 L). Este ajustat pH-ul la 1 cu HCl şi este separat stratul apos şi neutralizat cu NaOH pentru a ajusta pH-ul la 10. Stratul apos este extras cu MTBE (3 Ч 2,5 L). Extractele organice sunt combinate, uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi evaporate la sec pentru a da compusul brut din titlu (248 g, 47%) care este utilizat fără purificare suplimentară. ES/MS (m/z): 249 (M+H).
Prepararea 39
1-Alil-4-amino-4-(2-fluorofenil)pirolidin-3-il]metanol
Se adaugă praf de zinc (590 g, 9 mol) la o soluţie de 5-alil-6a-(2-fluorofenil)-3,3a,4,6-tetrahidro-1H-pirolo[3,4-c]izoxazol (3559 g, 1,29 mol) într-un amestec de metanol (2,85 L) şi soluţie apoasă saturată de clorură de amoniu (3,56 L) şi amestecul este încălzit timp de 16 ore la 70 °C. Reacţia este răcită la 60 °C, diluată cu THF (2,85 L), şi filtrată în timp ce este fierbinte pe pământ de diatomee. Filtratul este evaporat pentru a îndepărta solventul organic, şi amestecul apos este diluat cu acid citric 10% g/g soluţie apoasă (4 L) şi EtOAc (3,5 L). Stratul organic este separat şi stratul apos este spălat cu EtOAc (2×2 L). Stratul apos este neutralizat cu NaOH 50% g/g pentru a ajusta pH-ul la 10, şi apoi este extras cu EtOAc (2 Ч 1,5 L). Extractele organice sunt combinate, uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi evaporate la sec pentru a da compusul brut din titlu (299 g, 92%). ES/MS (m/z): 251 (M+H).
Prepararea 40
Acid [(3R,4S)-1-alil-4-amino-4-(2-fluorofenil)pirolidin-3-il]metanol;2,3-bis[(4-metilbenzoil)oxi]butandioic
Se adaugă o soluţie de acid di-p-toluoil-L-tartric (348,6 g, 884 mmol) în 1-metoxi-2-propanol (1,13 L) la o soluţie de [(3R,4S)-1-alil-4-amino-4-(2-fluorofenil)-pirolidin-3-il]metanol (225,9 g, 902 mmol), în 1-metoxi-2-propanol (1,13 L) încălzit anterior la 40 °C. Reacţia este răcită la 22 °C şi agitată timp de 18 ore. Este colectat un solid alb prin filtrare şi spălat cu 1-metoxi-2-propanol (600 ml). Solidul colectat este uscat pentru a da compusul din titlu (183,01 g, 31,8%). ES/MS (m/z): 251 (M+H).
Prepararea 41
[(3R,4S)-1-Alil-4-amino-4-(2-fluorofenil)pirolidin-3-il]metanol
Se dizolvă [(3R,4S)-1-alil-4-amino-4-(2-fluorofenil)pirolidin-3-il]metanol; acid 2,3-bis[(4-metilbenzoil)oxi]butandioic (211 g, 331 mmol) în apă (2,1 L) şi EtOAc (2,3 L). Se adaugă HCl 35% g/g pentru a ajusta pH-ul la 1. Este separat stratul apos şi este ajustat pH-ul la 10 cu NaOH 50% g/g şi se extrage cu EtOAc (2Ч). Este ajustat pH-ul stratului apos la 10 cu NaOH apos, şi este extras cu MTBE (3Ч) menţinând în acelaşi timp de asemenea pH-ul soluţiei apoase la pH=10. Extractele organice sunt combinate, uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi concentrate la sec pentru a da compusul brut din titlu, (73 g, 88%, 94,8% ee). Produsul este analizat prin cromatografie chirală: Coloană AS-H, eluent 10% alcool izopropilic, 2% izopropil amină; debit de 3 mL/min la UV 220; presiune de 100 bari la 35 °C pentru a da compusul din titlu ca al doilea izomer de eluare, Rf = 2,26 minute. ES/MS (m/z): 251 (M+H).
Prepararea 42
N-[(4aR,7aS)-6-Alil-7a-(2-fluorofenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă
O soluţie de [(3R,4S)-1-alil-4-amino-4-(2-fluorofenil)pirolidin-3-il]metanol (129,7 g, 414 mmol) în THF (2,3L) este răcită la 0 °C sub o atmosferă de azot. Se adaugă izotiocianat de benzoil (61,5 mL, 456 mmol) menţinând temperatura mai jos de 5 °C. Masa de reacţie este încălzită la temperatura camerei în 3 ore şi se adaugă 1,1'-carbonildiimidazol (87,4 g, 538,9 mmol) şi reacţia este agitată la 22 °C timp de 1 oră urmată de încălzirea la 70 °C timp de 16 ore. Amestecul de reacţie este răcit la 22 °C şi solventul este evaporat. Reziduul este partiţionat în EtOAc (1 L) şi apă (1 L). Stratul organic este separat şi stratul apos este extras cu EtOAc (2 Ч 400 mL). Organicele sunt combinate, uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi evaporate la sec pentru a da compusul brut din titlu. Produsul brut este purificat prin cromatografie pe silica gel eluând cu un gradient de EtOAc / DCM de la 0-40% DCM pentru a da compusul din titlu ca solid galben pal (170 g, 99%) conţinând solvent rezidual. ES/MS (m/z): 396 (M+H).
Prepararea 43
N-[(4aR,7aS)-7a-(2-Fluorofenil)-4a,5,6,7-tetrahidro-4H-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă
Se adaugă acid benzoic, 2-mercapto- (122 g, 793 mmol), bis(dibenzilidenaceton)paladiu (4,15 g, 7,21 mmol), şi 1,4-bis(difenilfosfino)butan (3,14 g, 7,21 mmol) la o soluţie de N-[(4aR,7aS)-6-alil-7a-(2-fluorofenil)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă (178,21 g, 360 mmol) în 2-metiltetra-hidrofuran anhidru (1,96 L) sub o atmosferă de azot. Soluţia este degazată prin cicluri de vid / azot de trei ori, şi apoi este barbotat azot prin reacţie timp de 15 minute. Amestecul de reacţie este încălzit la 40 °C în timp ce se barbotează azot prin masa de reacţie. Când reacţia atinge 40 °C este îndepărtată barbotarea şi amestecul de reacţie este agitat la 40 °C timp de 3 ore sub o atmosferă de azot. Reacţia este răcită la 22 °C şi diluată cu apă (2 L). Se adaugă soluţie de HCl (5 M) pentru a ajusta pH-ul la 1. Stratul apos este separat şi spălat cu EtOAc suplimentar (2 × 800 mL). Este ajustat pH-ul stratului apos la 10 cu NaOH 50% g/g şi apoi este extras cu EtOAc (10 L). Stratul apos este spălat cu EtOAc suplimentar (2 × 750 mL). Extractele organice sunt combinate, spălate cu saramură, uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi evaporate la sec pentru a da compusul brut din titlu ca solid galben pal (124,7 g, 97%). ES/MS (m/z): 356 (M+H).
Prepararea 44
N-[(4aR,7aS)-7a-(2-Fluorofenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă
O soluţie de N-[(4aR,7aS)-7a-(2-fluorofenil)-4a,5,6,7-tetrahidro-4H-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă (124,7 g, 256 mmol), DIPEA (67 mL), 5-fluoro-2-cloropirimidină (29,3 ml, 307 mmol) în N-metilpirolidonă (997 mL) este încălzită la 100 °C timp de 16 ore. Reacţia este răcită la 22 °C şi turnată în apă răcită la 10 °C (10 L) ţinând temperatura mai jos de 15 °C. Este colectat un solid crem pal prin filtrare şi este spălat cu apă suplimentară. Solidul umed este dizolvat în EtOAc (2 L) şi transferat la o pâlnie separatoare. Se adaugă soluţie apoasă de clorură de sodiu 5% g/g (1 L) şi este separat stratul organic, uscat pe sulfat de sodiu, filtrat, şi filtratul este evaporat sub presiune redusă. Produsul este purificat prin cromatografie pe silica gel utilizând un gradient de 0-40% EtOAc/izohexan pentru a da compusul din titlu ca solid galben pal (116 g, 70%). ES/MS (m/z): 452 (M+H).
Prepararea 45
(4aR,7aS)-7a-(2-Fluorofenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidro-pirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-amină
Se adaugă hidroxid de litiu (9,26 g, 386 mmol) la un amestec de N-[(4aR,7aS)-7a-(2-fluorofenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-il]benzamidă (158,6 g, 351,6 mmol), în metanol (1,6 L). Amestecul este încălzit la 70 °C timp de 4 ore şi apoi răcit la 22 °C. Amestecul de reacţie este evaporat sub vid până la un reziduu galben. Reziduul este partiţionat în apă (1 L) şi EtOAc (750 mL). Se adaugă HCl (5 M soluţie apoasă) pentru a ajusta pH-ul la 1. Este separat stratul apos şi este spălat stratul organic cu EtOAc (2 × 200 mL). Este ajustat pH-ul stratului apos cu soluţie apoasă de NaOH 50% g/g până la pH=10 şi este extras cu EtOAc (3 Ч 1 L). Extractele organice sunt combinate, uscate pe sulfat de sodiu, filtrate, şi evaporate sub presiune redusă pentru a da compusul brut din titlu ca solid galben pal (133,3 g, 99%, conţinând 12% EtOAc rezidual). ES/MS (m/z): 348 (M+H).
Prepararea 46
Clorhidrat de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă.
Se dizolvă N-[3-[(4aR,7aS)-2-benzamido-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă, izomerul 1 (0,350 g, 0,58 mmol) în THF (2 mL) şi apoi se adaugă metanol (4 mL) şi etanol (4 mL). Se adaugă clorhidrat de O-metilhidroxilamină (495 mg, 5,81 mmol) şi piridină (470 µL, 5,81 mmol) la amestec şi masa de reacţie este încălzită până la 50 °C şi este agitată peste noapte. Se adaugă silica gel (-10 g) la reacţie şi amestecul este concentrat. Mostra, uscată pe silica gel, este încărcată pe un cartuş gol şi purificată eluând cu un gradient de 0-10% de 7 N amoniac în metanol în DCM. Produsul este purificat o a doua oară pe o coloană SCX utilizând 3:1 DCM:metanol şi apoi 2:1 DCM:7 N amoniac în metanol. Produsul este purificat o ultimă dată pe silica gel cu un gradient de 0% până la 10% de 7 N amoniac în metanol în DCM pentru a da baza liberă a compusului din titlu. Acest material este dizolvat în DCM (5 mL) şi se adaugă 1 M HCl în dietil eter (0,20 mL, 660 µmol). Solventul este îndepărtat în vid pentru a da compusul din titlu (71 mg, 23%). ES/MS (m/z): 498 (M+H).
Difracţia de raze X în pulbere (XRD)
Tiparele XRD ale solidelor cristaline sunt obţinute pe un difractometru cu raze X pe pulbere Bruker D4 Endeavor, echipat cu o sursă de CuKa de λ = 1,54060 Е) şi un detector Vantec, care operează la 35 kV şi 50 mA. Mostra este scanată între 4 şi 40° în 2θ, cu o dimensiune a etapei de 0,009° în 2θ şi o rată de scanare de 0,5 secunde/etapă, şi cu divergenţă de 0,6 mm, anti-împrăştiere fixată de 5,28, şi fante detectoare de 9,5 mm. Pulberea uscată este ambalată pe un suport de cuarţ pentru mostră şi este obţinută o suprafaţă netedă utilizând o lamelă din sticlă. Tiparele de difracţie ale formei cristaline sunt colectate la temperatură ambiantă şi umiditate relativă. Este bine cunoscut în domeniul cristalografiei faptul că, pentru orice formă de cristal dată, intensităţile relative ale vârfurilor de difracţie pot varia din cauza orientării preferate care rezultă de la factori cum ar fi morfologia cristalului şi obişnuinţa. Acolo unde sunt prezente efectele orientării preferate, intensităţile vârfurilor sunt modificate, dar poziţiile caracteristice ale vârfurilor polimorfei sunt nemodificate. Vezi, de exemplu, Farmacopeea Statelor unite #23, National Formulary #18, paginile 1843-1844, 1995. Mai mult, este de asemenea bine cunoscut în domeniul cristalografiei faptul că pentru orice formă dată de cristal poziţiile angulare ale vârfurilor pot varia puţin. De exemplu, poziţiile vârfurilor se pot deplasa din cauza unei variaţii în temperatura sau umiditatea la care o mostră este analizată, deplasarea mostrei, sau prezenţa sau absenţa unui standard intern. În prezentul caz, o variabilitate a poziţiei vârfului de ± 0,2 în 2θ va lua în considerare aceste potenţiale variaţii fără a împiedica identificarea fără echivoc a formei indicate de cristal. Confirmarea unei forme de cristal poate fi făcută pe baza oricărei combinaţii unice de vârfuri distincte (în unităţi de ° 2θ), de obicei vârfurile mai prominente. Tiparele de difracţie ale formei cristaline, colectate la temperatură ambiantă şi umiditate relativă, sunt ajustate pe baza vârfurilor standard ale NIST 675 la 8,853 şi 26,774 grade 2-teta.
Prepararea 47
Forma cristalină 2 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă (hidratată)
Se adaugă clorură de oxalil (888 µL, 10,2 mmol) la o soluţie de acid 5-metoxipirazin-2-carboxilic (1,6 g, 10,2 mmol) în ACN (53 mL) şi DMF (848 µL). După 15 minute, soluţia proaspăt preparată se adaugă la o soluţie de (4aR,7aS)-7a-(5-amino-2-fluoro-fenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-amină (2,65 g, 7,3 mmol) într-un amestec de apă (53 mL) şi etanol (53 mL) încălzită anterior la 50 °C. Amestecul de reacţie este agitat la 50 °C timp de o oră, este răcit la 22 °C, şi apoi este agitat peste noapte la această temperatură. Solventul organic este evaporat sub vid şi amestecul apos este tratat cu soluţie apoasă de NaOH 50% g/g pentru ajustarea pH-ului la 10. Este izolat un solid crem pal şi spălat cu apă suplimentară. Solidul este diluat cu alcool izopropilic (2×) şi solventul este evaporat. Materialul brut este purificat prin cromatografie pe silica gel utilizând un gradient de metanol amoniacat (2 N) / DCM. Fracţiunile conţinând produsul dorit sunt combinate şi este evaporat solventul pentru a da compusul din titlu ca un solid alburiu (1,9 g, 52%). ES/MS (m/z): 499 (M+H).
Prepararea alternativă a Formei cristaline 2 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolor3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă (hidratată)
Se adaugă ACN (500 mL) la DMF (19,2 mL, 248,9 mmol). Se adaugă clorură de oxalil (39,3 g, 309,63 mmol) urmată de acid 5-metoxipirazin-2-carboxilic (46,0 g, 298,4 mmol) la soluţia de DMF/ACN. Într-un flacon separat, se adaugă soluţia apoasă de (4aR,7aS)-7a-(5-amino-2-fluoro-fenil)-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-2-amină (56,8 g, 156,75 mmol) la ACN (500 mL) şi este ajustat pH-ul până la 9 cu hidroxid de amoniu (95 mL). Acest amestec este apoi încălzit la 50 -55 °C. Se adaugă soluţie de clorură de oxalil în picătură şi amestecul este agitat timp de 3 ore. Este ajustat pH-ul până la 8-9 cu hidroxid de amoniu. Precipitatul rezultat este filtrat, spălat cu apă, şi uscat pentru a obţine compusul din titlu (123 g). Solidul este suspendat în acetonă (250 mL) timp de 1,5 ore şi filtrat. Turta umedă este spălată cu acetonă pentru a obţine compusul din titlu (110 g cu 90,5% puritate prin HPLC). Se adaugă THF (1 L) şi carbon activat (9 g) la solid şi amestecul este încălzit la reflux peste noapte. Amestecul este filtrat prin pământ de diatomee şi spălat cu THF (150 mL). Soluţia organică este concentrată până la 10 volume şi încălzită la 60 °C. Se adaugă apă (430 mL) şi amestecul este agitat la 60 °C timp de 8 ore. Amestecul este răcit la temperatura camerei şi agitat timp de 10 ore. Solidul rezultat este filtrat, spălat cu THF/apă (7:6) şi uscat pentru a da compusul din titlu (69 g, 88%) LC-MS: (m/z) 499 (M+H), puritate: 98,3%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,99 - 3,07 (m, 2 H) 3,07 - 3,14 (m, 1 H) 3,58 - 3,67 (m, 1 H) 3,68 - 3,76 (m, 1 H) 3,76 - 3,84 (m, 1 H) 4,02 (s, 3 H) 4,07 (d, J=10,92 Hz, 1 H) 6,08 (s, 2 H) 7,19 (dd, J=11,98, 8,72 Hz, 1 H) 7,78 - 7,89 (m, 2 H) 8,41 (s, 1 H) 8,44 (s, 2 H) 8,88 (s, 1 H) 10,60 (s, 1 H).
Procedura generală pentru prepararea formei cristaline 2 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolor[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă (hidratată)
Se suspendă N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă în THF la aproximativ 23 °C până la o concentraţie de aproximativ 71 mg/mL solvent. Se încălzeşte suspensia cu agitare până la dizolvare care are loc la aproximativ 60 °C până la aproximativ 63 °C. Se adaugă apă la soluţia fierbinte pentru a furniza un raport al solvenţilor THF:apă de aproximativ 95:5. Se adaugă cristale de însămânţare ale Formei 2 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă (aproximativ 3 g % încărcare). Suspensia subţire rezultată este ţinută la aproximativ 60 °C până la aproximativ 63 °C timp de aproximativ 20 de minute, urmată de adăugarea de aproximativ 5,3 până la aproximativ 5,5 volume de apă în aproximativ 2 până la aproximativ 4 ore conducând la un raport al solvenţilor THF:apă de aproximativ 69:31. Suspensia este apoi ţinută la aproximativ 60 °C până la aproximativ 63 °C timp de aproximativ 30 de minute şi apoi răcită până la aproximativ 23 °C în aproximativ 1 oră, şi apoi agitată timp de aproximativ 8-12 ore. Suspensia este apoi filtrată, clătită uşor cu THF:apă (35:65), şi uscată timp de aproximativ 8-12 ore sub vid redus la aproximativ 40 °C pentru a furniza Forma cristalină dorită 2 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă care este hidratată.
O mostră preparată a Formei cristaline 2 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă este caracterizată printr-un tipar XRD utilizând radiaţie CuKa ca având vârfurile de difracţie (valori 2-teta) descrise în Tabelul 1 de mai jos. În mod specific, tiparul conţine un vârf la 11,8° în combinaţie cu unul sau mai multe dintre vârfurile selectate din grupul constând din 18,6°, 19,3°, şi 26,7°; cu o toleranţă pentru unghiurile de difracţie de 0,2 grade.
Tabelul 1: Vârfurile de difracţie în pulbere cu raze X ale Formei cristaline 2.
Vârf Unghi ( ° 2-Teta) +/- 0,2° Intensitate relativă (% al celui mai intens vârf) 1 11,8 100,0 2 18,6 71,4 3 19,3 45,5 4 26,7 41,9 5 20,6 27,3 6 9,0 19,0 7 24,8 18,5 8 22,4 15,5 9 31,9 14,3 10 10,6 11,2
Forma cristalină 2 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă este forma cristalină stabilă la temperatura camerei şi la umiditate relativă mai mare decât aproximativ 15%.
Prepararea 48
Forma cristalină 3 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă.
Este încărcată o tavă de analiză termogravimetrică cu N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluorofenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă şi încălzită la aproximativ 170 °C şi ţinută la 170 °C timp de aproximativ 5 minute. Amestecul este răcit la temperatura camerei pentru a furniza compusul din titlu.
Prepararea alternativă a Formei cristaline 3 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă.
Se combină N-[3-[(4aR, 7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă (121 mg) cu ACN (5 mL) într-o fiolă, şi se încălzeşte pe o placă de agitare la 90 °C. După aproximativ 30 de minute, majoritatea solidului se dizolvă, furnizând o soluţie tulbure. Se adaugă seminţe ale Formei 3 şi este agitată mostra timp de aproximativ 1 oră la aproximativ 90 °C. Este îndepărtată încălzirea şi este agitat amestecul pentru a furniza un solid alb deschis. Solidul este izolat prin filtrare în vid, este uscat sub un curent de aer timp de aproximativ 10 minute, şi apoi sub vid redus la aproximativ 80 °C timp de aproximativ 8 până la 12 ore pentru a furniza compusul din titlu.
O mostră preparată a Formei cristaline 3 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluorofenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă este caracterizată printr-un tipar XRD utilizând radiaţie CuKa ca având vârfurile de difracţie (valori 2-teta) descrise în Tabelul 2 de mai jos. În mod specific, tiparul conţine un vârf la 15,7° în combinaţie cu unul sau mai multe dintre vârfurile selectate din grupul constând din 18,1°, 27,0°, şi 19,7°; cu o toleranţă pentru unghiurile de difracţie de 0,2 grade.
Tabelul 2: Vârfurile de difracţie în pulbere cu raze X ale Formei cristaline 3.
Vârf Unghi ( ° 2-Teta) +/- 0,2° Intensitate relativă (% al celui mai intens vârf) 1 15,7 100,0 2 18,1 98,5 3 27,0 80,2 4 19,7 75,4 5 25,3 75,2 6 18,7 50,0 7 17,3 49,7 8 5,2 44,0 9 10,4 41,7 10 11,9 37,7
Exemplul 1
N-[3-[(4aR,7aS)-2-Amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă; acid toluensulfonic
Se adaugă Forma cristalină 2 de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin -2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă hidratată (149,15 mg) la acetat de etil (2 mL). Mostra este agitată la 1000 rpm la o temperatură de 80°C. Se adaugă acid p-toluensulfonic (70 mg dizolvate în acetat de etil (1 mL)) la soluţia în agitare, şi se agită peste noapte la 80°C pentru a produce o suspensie a unui solid alb care este izolat prin filtrare în vid pentru a furniza compusul din titlu.
Prepararea alternativă A de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă; acid toluensulfonic
Se adaugă N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetra-hidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă (9,5 g, 19 mmol) şi acid p-toluensulfonic (3,80 g, 19,8 mmol) la tetrahidrofuran (31 mL), apă (7,9 mL), şi 2-propanol (8,6 mL). Soluţia este încălzită la 40 °C. La soluţia caldă se adaugă 2-propanol (200,0 mL) în aproximativ 3 ore. Amestecul este însămânţat la scurt timp după începerea adăugării de 2-propanol cu o porţiune a compusului din titlu (500 mg, 0,75 mmol). După ce adăugarea solventului este completă, amestecul este răcit la aproximativ 20 °C în 1-3 ore. Amestecul este încălzit de la aproximativ 20 °C până la aproximativ 55 °C într-un timp ţintă de 2 ore. Temperatura este ţinută la 55 °C timp de 1 oră şi apoi răcită la aproximativ 20 °C în aproximativ 4 ore. Suspensia este agitată timp de cel puţin 10 ore la aproximativ 20 °C. Este filtrată suspensia şi este spălată turta umedă cu apă (57 mL). Produsul este uscat în vid la 45 °C timp de cel puţin 10 ore pentru a da compusul din titlu (10,4 g, 81%). ES/MS (m/z): 500 (M+H).
Prepararea alternativă B de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă; acid toluensulfonic
Este suspendată N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă hidratată (20,7 g) la 170 rpm în 60:40 THF:H2O (85 mL) într-un flacon cu fund rotund de 500 mL cu 3 gâturi echipat cu un barbotor de azot, un motor mecanic IKA®/agitator ataşat la un ax de sticlă având o lamă de teflon în formă de banană, şi un termocuplu conectat la un controlor de temperatură programabil J-KEM®. Este dizolvat acid p-toluensulfonic monohidrat (7,6 g, 1,03 eq) într-un amestec de 60:40 THF:H2O (20 mL) şi soluţia este adăugată toată odată la suspensia în agitare de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluorofenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă la 23 °C, conducând aproape imediat la o soluţie limpede cafenie roşiatică. Este crescută apoi rata de agitare până la 200 rpm în 15 minute, se adaugă apă (22 mL) la soluţie, care este apoi însămânţată cu N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă acid toluensulfonic (750 mg, 3 % din masă încărcare cu sămânţă) şi apoi este agitată la 23 °C timp de încă 15 minute. Peste 6 ore, se adaugă apă (226 mL, solvent total de 353 mL; sau 13,6 vol., raport al solvenţilor final de 17,5:82,5 THF:H2O) la suspensie, care este apoi agitată peste noapte (22 ore) la 23 °C. Suspensia este filtrată prin vid, clătită cu 15:85 THF:H2O (2×20 mL), apoi lăsată pe vid timp de 20 de minute în timp ce fisurile care se formează în turta umedă a produsului sunt închise manual prin presare. Solidele ude sunt uscate la 40 °C sub vid timp de aproximativ 72 ore pentru a da compusul din titlu ca solid alb cristalin (24,07 g, 90,0 % din masă).
Forma cristalină de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a, 5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxa-midă; acid toluensulfonic este caracterizată printr-un tipar XRD utilizând radiaţie CuKa ca având vârfurile de difracţie (valori 2-teta) descrise în Tabelul 3 de mai jos, şi în particular ca având vârfuri la unghiul de difracţie 2-teta de 5,0° în combinaţie cu unul sau mai multe dintre vârfurile selectate din grupul constând din 19,6°, 13,8°, şi 18,5°; cu o toleranţă pentru unghiurile de difracţie de 0,2 grade.
Tabelul 3: Vârfurile de difracţie în pulbere cu raze X ale cristalinei din Exemplul 1
Vârf Unghi (°2-Teta) +/-0,2° Intensitate relativă (% al celui mai intens vârf) 1 5,0 100,0 2 13,4 22,9 3 13,8 37,3 4 14,4 20,2 5 15,3 28,8 6 17,5 25,9 7 18,5 30,7 8 19,6 45,8 9 20,4 17,7 10 25,6 30,1
S-a descoperit că sub aproximativ 15% umiditate relativă, este prezentă forma cristalină 1 a bazei libere de N-{3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4a,5,6,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a(4H)-il]-4-fluoro-fenil}-5-metoxipirazin-2-carboxamidă, în timp ce peste aproximativ 15% umiditate relativă, predomină forma cristalină 2 de N-{3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4a,5,6,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a(4H)-il]-4-fluoro-fenil}-5-metoxipirazin-2-carboxamidă. O astfel de instabilitate fizică este indezirabilă, în special pentru o substanţă medicamentoasă farmaceutică sau produs medicamentos, ambele dintre acestea fiind subiectul controalelor regulate referitoare la formele din starea solidă. Spre deosebire de formele cristaline ale bazei libere, sarea tosilat posedă o stabilitate fizică îmbunătăţită într-un interval larg de umidităţi relative (5-95%). Ca atare, sarea tosilat a N-{3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4a,5,6,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a(4H)-il]-4-fluoro-fenil}-5-metoxipirazin-2-carboxamidei evită în mod esenţial transformările de fază dependente de umiditate asociate cu formele cristaline corespunzătoare de bază liberă. Mai mult, sarea tosilat a N-{3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4a,5,6,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a(4H)-il]-4-fluoro-fenil}-5-metoxipirazin-2-carboxamidei s-a descoperit că are o cantitate substanţial mai scăzută de solvent reţinut în cristal de aproximativ 1,3% în comparaţie cu aproximativ 7,7% solvent reţinut pentru sarea de HCl a N-{3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4a,5,6,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tia-zin-7a(4H)-il]-4-fluoro-fenil}-5-metoxipirazin-2-carboxamidei. Probabilitatea crescută a bazei libere de a suferi tranziţii de fază în timpul depozitării pe termen lung poate conduce la variabilitatea proprietăţilor, cum ar fi solubilitatea sau rata de dizolvare, care poate compromite performanţa produsului medicamentos. Aceasta prezintă de asemenea riscul suplimentar de colaps a structurii(lor) de cristal către o formă amorfă sau de acumulare de defecte şi de dezordine, care ar putea conduce la instabilitate chimică şi la durată la raft redusă a produsului medicamentos.
Procedurile testului in vitro:
Pentru testele in vitro enzimatice şi celulare, compuşii testaţi sunt preparaţi în DMSO pentru a face o soluţie stoc de 10 mM. Soluţia stoc este diluată serial în DMSO pentru a obţine o curbă de diluţie în zece puncte cu concentraţii finale ale compusului care variază de la 10 mM până la 0,05 nM într-o placă cu 96 de godeuri cu fund rotund înainte de efectuarea testelor in vitro enzimatice şi pe celule întregi.
Testele de inhibare a proteazei in vitro:
Expresia BACE1 umane
BACE1 umană (număr de acces: AF190725) este clonată din ADNc de creier total prin RT-PCR. Secvenţele nucleotidice corespunzătoare secvenţelor de aminoacizi #1 până la 460 sunt inserate în ADNc care codifică polipeptida de IgG1 umană (Fc) (Vasser, şi colab., Science, 286, 735-741 (1999)). Această proteină de fuziune dintre BACE1(1-460) şi Fc uman, denumită huBACE1:Fc, este construită în vectorul pJB02. BACE1 umană (1-460):Fc (huBACE1:Fc) este exprimată tranzitoriu în celulele HEK293. 250 µg de ADNc din fiecare construct sunt amestecate cu Fugene 6 şi adăugate la 1 litru de celule HEK293. La patru zile după transfectare, se recoltează mediul condiţionat pentru purificare.
Purificarea huBACE1:Fc.
huBACE1:Fc este purificată prin cromatografie cu Proteină A. Enzima este depozitată la - 80 °C în alicote mici.
Testul FRET al BACE1
Sunt preparate diluţii seriale ale compuşilor testaţi aşa cum s-a descris mai sus. Compuşii sunt diluaţi suplimentar de 20Ч în tampon de KH2PO4. Se adaugă zece µL din fiecare diluţie la fiecare godeu de la rândul A până la H al unei plăci negre cu legare scăzută a proteinei corespunzătoare conţinând amestecul de reacţie (25 µL de 50 mM KH2PO4, pH 4,6, 1 mM TRITON® X-100, 1 mg/mL Albumină din ser bovin, şi 15 µM de substrat FRET) (Vezi Yang, şi colab., J. Neurochemistry, 91(6) 1249-59 (2004)). Conţinutul este amestecat bine pe un agitator de placă timp de 10 minute. Cincisprezece µL din două sute pM de BACE1 umană (1-460):Fc (Vezi Vasser, şi colab., Science, 286, 735-741 (1999)) în tampon de KH2PO4 se adaugă la placa conţinând substratul şi compuşii testaţi pentru a iniţia reacţia. RFU a amestecului la momentul 0 este înregistrată la lungimea de undă a excitaţiei de 355 nm şi lungimea de undă a emisiei de 460 nm, după o amestecare scurtă pe un agitator de placă. Placa de reacţie este acoperită cu folie de aluminiu şi ţinută într-un cuptor umidificat la întuneric la temperatura camerei timp de 16 până la 24 de ore. RFU este înregistrată la sfârşitul incubării cu aceleaşi setări de excitaţie şi emisie utilizate la momentul 0. Diferenţa dintre RFU la momentul 0 şi la sfârşitul incubării reprezintă activitatea BACE1 sub tratamentul cu compusul. Diferenţele RFU sunt reprezentate grafic versus concentraţia inhibitorului şi este prevăzută o curbă cu o ecuaţie logistică cu patru parametri pentru a obţine valorile EC50 şi IC50. (Vezi Sinha, şi colab., Nature, 402, 537-540 (2000)).
Compusul din Prepararea 46 s-a testat în mod esenţial cum s-a descris mai sus şi a prezentat o IC50 a BACE1 de 0,615 nM (± 0,101, n=5) [Medie ± SEM; SEM = eroare standard a mediei]. Aceste date demonstrează că compusul din Prepararea 46 inhibă activitatea enzimei BACE1 recombinante purificate in vitro.
Testul neuronal primar cu PDAPP
Un test de confirmare cu celule întregi este de asemenea efectuat pe culturi neuronale primare generate de şoareci embrionari transgenici cu PDAPP. Neuronii corticali primari sunt preparaţi din embrionii cu PDAPP embrionară de Ziua 16 şi sunt cultivaţi în plăci cu 96 de godeuri (15 x 104 celule/godeu în DMEM/F12 (1:1) plus 10% FBS). După 2 zile in vitro, mediul de cultură este înlocuit cu DMEM/F12 (1:1) fără ser conţinând supliment de B27 şi 2 µM (final) de Ara-C (Sigma, C1768). În ziua 5 in vitro, neuronii sunt incubaţi la 37 °C timp de 24 de ore în prezenţa/absenţa inhibitorilor (diluaţi în DMSO) la concentraţia dorită. La sfârşitul incubării, sunt analizate mediile condiţionate pentru dovada activităţii beta-secretazei, de exemplu, prin analiza peptidelor Abeta. Peptidele Abeta totale (Abeta 1-x) sunt măsurate printr-o ELISA sandwich, utilizând monoclonalul 266 ca anticorp de captură şi biotinilatul 3D6 ca anticorp raportor. Alternativ, peptidele Abeta 1-40 şi Abeta 1-42 sunt măsurate printr-o ELISA sandwich, utilizând monoclonalul 2G3 ca anticorp de captură pentru Abeta 1-40, şi monoclonalul 21F12 ca anticorp de captură pentru Abeta 1-42. Ambele ELISA de Abeta 1-40 şi Abeta 1-42 utilizează biotinilatul 3D6 ca anticorp raportor. Concentraţia de Abeta eliberată în mediul condiţionat după tratamentul cu compusul corespunde cu activitatea BACE1 în astfel de condiţii. Curba de inhibare în 10 puncte este reprezentată grafic şi adaptată cu ecuaţia logistică cu patru parametri pentru a obţine valorile EC50 şi IC50 pentru efectul de scădere a Abeta. Compusul din Prepararea 46 s-a testat în mod esenţial cum s-a descris mai sus şi a prezentat următoarea activitate pentru efectul de scădere a Abeta:
Tabelul 4
Prepararea IC50 cu ELISA de A-beta (1-40) la neuronii cu PDAPP (nM) IC50 cu ELISA de A-beta (1-42) la neuronii cu PDAPP (nM) 46 0,275 (± 0,176, n=4) 0,228 (± 0,244, n=3)
Medie + SEM; SEM = eroare standard a mediei
Aceste date demonstrează că compusul din Prepararea 46 inhibă producţia de Abeta în celulele întregi.
Inhibarea beta-secretazei in vivo
Mai multe modele la animale, incluzând şoarecele, porcul de guinea, câinele, şi maimuţa, pot fi utilizate pentru a evalua inhibarea activităţii beta-secretazei in vivo după tratamentul cu compusul. Animalele utilizate în această invenţie pot fi animale de tip sălbatic, transgenice, sau cu gene knockout (eliminate). De exemplu, modelul la şoarece de PDAPP, preparat cum s-a descris în Games şi colab., Nature 373, 523-527 (1995), şi alte animale ne-transgenice sau cu gene knockout sunt utile pentru a analiza in vivo inhibarea Abeta şi producţia de sAPPbeta în prezenţa compuşilor inhibitori. În general, şoarecilor cu PDAPP în vârstă de 2 până la 12 luni, şoarecilor cu gene knockout sau animalelor ne-transgenice li se administrează compusul formulat în vehicule, cum ar fi ulei de porumb, ciclodextran, tampoane de fosfat, PHARMASOLVE®, sau alte vehicule adecvate. La una până la douăzeci şi patru de ore după administrarea compusului, animalele sunt sacrificate, şi creierul precum şi fluidul cerebrospinal şi plasma sunt îndepărtate pentru analiza proteinelor Abeta, C99, şi a fragmentelor sAPP. (Vezi May, şi colab., Journal of Neuroscience, 31, 16507-16516 (2011)).
Pentru studiile standard in vivo de farmacologie, animalele sunt dozate cu diferite concentraţii ale compusului şi comparate cu un grup de control tratat cu vehicul dozat în acelaşi timp. Pentru unele studii în cursul timpului, se obţine ţesut cerebral, plasmă, sau fluid cerebrospinal de la animalele selectate, începând de la momentul 0 pentru a stabili o linie de bază. Compusul sau vehiculul adecvat este administrat altor grupuri şi sunt sacrificate la diferite momente după dozare. Se obţine ţesutul cerebral, plasma, sau fluidul cerebrospinal de la animale selectate şi se analizează pentru prezenţa produşilor de clivare a APP, incluzând peptidele Abeta, sAPPbeta, şi alte fragmente de APP, de exemplu, prin testele specifice ELISA sandwich. La finalul perioadei testului, animalele sunt sacrificate şi se analizează ţesuturile cerebrale, plasma, sau fluidul cerebrospinal pentru prezenţa peptidelor Abeta, C99, şi sAPPbeta, după cum este adecvat. Ţesuturile cerebrale ale animalelor transgenice cu APP pot fi de asemenea analizate pentru cantitatea plăcilor de beta-amiloid după tratamentul cu compus. „Peptidă Abeta 1-x« aşa cum s-a utilizat în acest document se referă la suma speciilor de Abeta începând cu restul 1 şi terminând cu un C-terminal mai mare decât restul 28. Aceasta detectează majoritatea speciilor de Abeta şi este adesea denumită „Abeta totală«.
Animalele (şoareci transgenici cu PDAPP sau cu alte APP sau ne-transgenici) cărora li s-a administrat un compus inhibitor pot demonstra o reducere a Abeta sau sAPPbeta în ţesuturile cerebrale, plasmă sau fluidul cerebrospinal şi o scădere a plăcilor de amiloid beta în ţesutul cerebral, în comparaţie cu controalele tratate cu vehicul sau controalele de la momentul zero. Pentru Prepararea 46, la trei ore după administrarea dozei orale de 0,3, 1, sau 3 mg/kg de compus, nivelurile de peptidă Abeta 1-x sunt reduse aproximativ 31%, 39%, şi 61% în hipocampusul creierului, şi aproximativ 28%, 42%, şi 64% în cortexul creierului, comparate în mod respectiv cu şoarecii trataţi cu vehicul.
Dată activitatea Preparării 46 împotriva enzimei BACE in vitro, aceste efecte de scădere a Abeta sunt în concordanţă cu inhibarea BACE in vivo, şi demonstrează suplimentar penetrarea SNC a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei.
Claims (7)
1. Un compus care este o sare tosilat a N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[3,4-d][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidei.
2. Sarea tosilat în conformitate cu revendicarea 1 care este cristalină.
3. Sarea tosilat în conformitate fie cu revendicarea 1, fie cu revendicarea 2 care este caracterizată printr-un vârf substanţial în spectrul de difracţie cu raze X, la unghiul de difracţie 2-teta de 5,0° în combinaţie cu unul sau mai multe dintre vârfurile selectate din grupul constând din 19,6°, 13,8°, şi 18,5°; cu o toleranţă pentru unghiurile de difracţie de 0,2 grade.
4. Un compus în conformitate cu oricare dintre revendicările 1 până la 3 pentru utilizare în terapie.
5. Un compus în conformitate cu oricare dintre revendicările 1 până la 3 pentru utilizare în tratamentul bolii Alzheimer.
6. Un compus în conformitate cu oricare dintre revendicările 1 până la 3 pentru utilizare în tratarea progresului deprecierii cognitive uşoare către boala Alzheimer.
7. O compoziţie farmaceutică, cuprinzând un compus în conformitate cu oricare dintre revendicările 1 până la 3 cu unul sau mai mulţi purtători, diluanţi, sau excipienţi acceptabili farmaceutic.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562109733P | 2015-01-30 | 2015-01-30 | |
| PCT/US2016/014423 WO2016122968A1 (en) | 2015-01-30 | 2016-01-22 | Tosylate salt of n-[3-[(4ar,7as)-2-amino-6-(5-fluoropyrimidin-2-yl)-4,4a,5,7-tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazin-7a-yl]-4-fluoro-phenyl]-5-methoxy-pyrazine-2-carboxamide |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD3250575T2 true MD3250575T2 (ro) | 2020-03-31 |
Family
ID=55275232
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDE20170309T MD3250575T2 (ro) | 2015-01-30 | 2016-01-22 | Sare tosilat de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[ 3,4-d]][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă |
Country Status (41)
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AR103406A1 (es) * | 2015-01-30 | 2017-05-10 | Lilly Co Eli | Sal de tosilato |
| WO2019094608A1 (en) | 2017-11-08 | 2019-05-16 | Denali Therapeutics Inc. | Anti-bace1 antibodies and methods of use thereof |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT401651B (de) * | 1994-06-14 | 1996-11-25 | Biochemie Gmbh | 7-(2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(z)- hydroximinoacetamido)-3-n,n- dimethylcarbamoyloxymethyl-3-cephem-4- |
| CN101939306A (zh) * | 2007-12-07 | 2011-01-05 | 美国辉瑞有限公司 | 反式-n-异丁基-3-氟-3-[3-氟-4-(吡咯烷-1-基-甲基)-苯基]环丁烷甲酰胺的甲苯磺酸盐 |
| RU2476431C2 (ru) * | 2008-01-18 | 2013-02-27 | Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. | Конденсированное производное аминодигидротиазина |
| TWI593692B (zh) | 2013-03-12 | 2017-08-01 | 美國禮來大藥廠 | 四氫吡咯并噻嗪化合物 |
| TWI570127B (zh) * | 2014-09-15 | 2017-02-11 | 美國禮來大藥廠 | 結晶型N-[3-[(4aR,7aS)-2-胺基-6-(5-氟嘧啶-2-基)-4,4a,5,7-四氫吡咯并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-甲氧基-吡嗪-2-甲醯胺、其用途及醫藥組合物 |
| AR103406A1 (es) * | 2015-01-30 | 2017-05-10 | Lilly Co Eli | Sal de tosilato |
-
2016
- 2016-01-13 AR ARP160100076A patent/AR103406A1/es unknown
- 2016-01-13 TW TW105100973A patent/TWI574969B/zh not_active IP Right Cessation
- 2016-01-22 UA UAA201707108A patent/UA119581C2/uk unknown
- 2016-01-22 EA EA201791229A patent/EA031330B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2016-01-22 DK DK16702654.1T patent/DK3250575T3/da active
- 2016-01-22 CR CR20170287A patent/CR20170287A/es unknown
- 2016-01-22 KR KR1020177020943A patent/KR101950129B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2016-01-22 MX MX2017009713A patent/MX2017009713A/es unknown
- 2016-01-22 PE PE2017001211A patent/PE20171333A1/es unknown
- 2016-01-22 SI SI201630517T patent/SI3250575T1/sl unknown
- 2016-01-22 PL PL16702654T patent/PL3250575T3/pl unknown
- 2016-01-22 PT PT167026541T patent/PT3250575T/pt unknown
- 2016-01-22 ES ES16702654T patent/ES2768782T3/es active Active
- 2016-01-22 BR BR112017012149-2A patent/BR112017012149A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-01-22 JP JP2017540253A patent/JP6723250B2/ja active Active
- 2016-01-22 LT LTEP16702654.1T patent/LT3250575T/lt unknown
- 2016-01-22 NZ NZ732381A patent/NZ732381A/en not_active IP Right Cessation
- 2016-01-22 ME MEP-2019-347A patent/ME03581B/me unknown
- 2016-01-22 CN CN201680005234.2A patent/CN107108657B/zh active Active
- 2016-01-22 EP EP16702654.1A patent/EP3250575B1/en active Active
- 2016-01-22 CA CA2969475A patent/CA2969475C/en not_active Expired - Fee Related
- 2016-01-22 HR HRP20192240TT patent/HRP20192240T1/hr unknown
- 2016-01-22 SG SG11201706038PA patent/SG11201706038PA/en unknown
- 2016-01-22 AU AU2016211827A patent/AU2016211827B2/en not_active Ceased
- 2016-01-22 US US15/535,523 patent/US10080758B2/en active Active
- 2016-01-22 TN TNP/2017/000332A patent/TN2017000332A1/en unknown
- 2016-01-22 MD MDE20170309T patent/MD3250575T2/ro unknown
- 2016-01-22 MA MA41420A patent/MA41420B1/fr unknown
- 2016-01-22 RS RS20191663A patent/RS59730B1/sr unknown
- 2016-01-22 HU HUE16702654A patent/HUE048029T2/hu unknown
- 2016-01-22 WO PCT/US2016/014423 patent/WO2016122968A1/en not_active Ceased
-
2017
- 2017-06-07 IL IL252754A patent/IL252754A0/en unknown
- 2017-06-08 ZA ZA2017/03937A patent/ZA201703937B/en unknown
- 2017-07-03 DO DO2017000159A patent/DOP2017000159A/es unknown
- 2017-07-06 SV SV2017005478A patent/SV2017005478A/es unknown
- 2017-07-25 CL CL2017001899A patent/CL2017001899A1/es unknown
- 2017-07-27 GT GT201700166A patent/GT201700166A/es unknown
- 2017-07-28 PH PH12017501356A patent/PH12017501356A1/en unknown
- 2017-07-28 EC ECIEPI201748768A patent/ECSP17048768A/es unknown
- 2017-08-01 CO CONC2017/0007810A patent/CO2017007810A2/es unknown
-
2019
- 2019-04-10 JP JP2019074951A patent/JP2019142902A/ja not_active Ceased
-
2020
- 2020-01-15 CY CY20201100033T patent/CY1122548T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI468402B (zh) | 降低β－類澱粉生成之化合物 | |
| AU2016223072B2 (en) | Selective BACE1 inhibitors | |
| AU2010274913A1 (en) | Oxazine derivatives and their use as BACE inhibitors for the treatment of neurological disorders | |
| MD3250575T2 (ro) | Sare tosilat de N-[3-[(4aR,7aS)-2-amino-6-(5-fluoropirimidin-2-il)-4,4a,5,7-tetrahidropirolo[ 3,4-d]][1,3]tiazin-7a-il]-4-fluoro-fenil]-5-metoxi-pirazin-2-carboxamidă | |
| AU2015318256B2 (en) | A tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazine-derivative as BACE inhibitor | |
| MD3288949T2 (ro) | Derivați de aminohidrothiazină fuzionați cu tetrahidrofuran utili în tratamentul bolii Alzheimer | |
| EP3458461A1 (en) | N-[3-[2-amino-5-(1,1-difluoroethyl)-4,4a,5,7-tetrahydrofuro[3,4-d][1,3]oxazin-7a-yl]-4-fluoro-phenyl]-5-(trifluoromethyl)pyridine-2-carboxamide and its (4ar,5s,7as) isomer as a selective bace1 inhibitor for treating e.g. alzheimer's disease | |
| HK1233647B (en) | A tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazine-derivative as bace inhibitor | |
| HK1233647A1 (en) | A tetrahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazine-derivative as bace inhibitor |