JP2019532017A - がんを治療するための異なるエピトープ結合を示す複数の二重特異性結合ドメイン構築物 - Google Patents

がんを治療するための異なるエピトープ結合を示す複数の二重特異性結合ドメイン構築物 Download PDF

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Abstract

がんを治療するための二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループを記載する。グループにおける各ＢＳ−ＢＤＣは、該グループにおける別のＢＳ−ＢＤＣにより標的化されるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープとは異なるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープを標的化する。前記の異なるがん抗原エピトープは同一がん抗原上に存在しうる。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年７月１４日付け出願の第６２／３６２，３９７号及び２０１７年３月３１日付け出願の第６２／４８０，２３０号（それらのそれぞれの全体を、本明細書に完全に記載されているものとして、参照により本明細書に組み入れることとする）に基づく優先権を主張するものである。
本開示は、がんを治療するための複数の二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）を提供する。グループ内の各ＢＳ−ＢＤＣは、該グループ内の別のＢＳ−ＢＤＣにより標的化されるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープとは異なる、がん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープを標的化する。前記の異なるがん抗原エピトープは、同一がん抗原上に存在しうる。
がん治療の進歩にもかかわらず、該疾患に関連した死亡率は依然として極めて高い。例えば、多数の小児患者の臨床成績の改善にもかかわらず、米国においては、がんは依然として、乳児期を過ぎた小児における主要死亡原因である。したがって、小児がんを含むがんに対する有効な新規治療方法の必要性に疑問の余地はない。
抗体を使用してがん細胞を標的化することは、非特異的毒性を制限した、腫瘍細胞を排除する有力な手段として、高い期待を集めた。しかし、多数の患者にとって、単一抗体の使用は有効ではない。
二重特異性Ｔ細胞結合抗体は、Ｔ細胞をがん細胞に引き寄せてがん細胞を破壊することを目的として、腫瘍細胞上のがん抗原とＴ細胞活性化エピトープとの両方に結合する。例えば、ＵＳ ２００８／０１４５３６２を参照されたい。現在の二重特異性Ｔ細胞結合抗体治療薬は単一特異性の抗体由来結合ドメインのペアを含む。該ペアの一方のメンバーはがん抗原エピトープを標的化し、該ペアの他方のメンバーはＴ細胞活性化エピトープを標的化する。２つの異なるＴ細胞活性化エピトープ（例えば、ＣＤ３及びＣＤ２８）を標的化するそのような抗体を組合せて使用することを検討した研究者もいる。残念ながら、このアプローチも同様に、期待された治療効果を達成していない。したがって、当技術分野においては、特に、より難治性の又は治療困難ながん型を有する患者のための、より有効ながん治療方法が依然として緊急に必要とされている。
がん細胞のような望ましくない細胞型を標的化し殺傷するために免疫系のＴ細胞を遺伝的に操作することにおいて、進歩が達成されている。例えば、特定の標的抗原に結合する細胞外成分と、細胞外成分が標的抗原に結合した際にＴ細胞の作用を導く細胞内成分とを有する分子を発現するように、Ｔ細胞が遺伝的に操作されている。一例としては、細胞外成分は、がん細胞上で見出される標的抗原に結合するように設計されることが可能であり、結合したら、結合したがん細胞を破壊するように、細胞内成分がＴ細胞に指令する。そのような分子の例には、遺伝的に操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が含まれる。
ＴＣＲ及び／又はＣＡＲ修飾Ｔ細胞は、経時的に出現する再発性又は進行性のがん細胞を攻撃しうる、がん細胞に対する免疫記憶を該Ｔ細胞が生成しうるという点で、大きな利点をもたらすが、該Ｔ細胞が正常組織上の標的を異常又は外来性と認識すると、この免疫記憶は自己免疫毒性を招く可能性がある。
米国特許出願公開第２００８／０１４５３６２号明細書
開示の概要
本開示は、がんを治療するための複数の二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）を提供する。あるグループ内の各ＢＳ−ＢＤＣは、該グループ内の別のＢＳ−ＢＤＣによって結合されるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープとは異なるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープに結合する。前記の異なるがん抗原エピトープは、同一がん抗原上に存在することが可能であり、特定の実施形態においては、同一がん抗原上の非重複性の異なるがん抗原エピトープである。この進歩は、幾つかの利点をもたらす。第１に、あるグループ内のＢＳ−ＢＤＣは、異なるがん抗原エピトープに結合するため、結合に関する競合がより少なく、立体障害が減少する。第２に、異なる免疫細胞活性化エピトープに結合することにより、免疫細胞同時刺激シグナルが得られる。免疫細胞活性化エピトープ（例えば、Ｔ細胞受容体及び同時刺激受容体）を認識する結合ドメインは、あるグループ内の異なるＢＳ−ＢＤＣ上に位置するため、該グループは、がん細胞の存在下でのみ、Ｔ細胞活性化を誘導する。このアプローチは、多種多様ながんを標的化するために利用されうる汎用プラットフォームを提供する。
少なくとも２つのがん抗原エピトープ及び少なくとも２つの免疫細胞活性化エピトープを標的化するＢＳ−ＢＤＣの記載されているグループの使用は、がん細胞のＴ細胞媒介性殺傷に対する予想外の相乗効果をもたらした。更に、ＢＳ−ＢＤＣの記載されているグループの使用は、意外にも、単一の二重特異性Ｔ細胞結合抗体構築物に対するがん細胞耐性を克服した。
多数の現在利用可能な治療法と比較した場合の、開示されているアプローチの追加的な利点は、開示されているＢＳ−ＢＤＣが、自己免疫毒性を招きうるＣＡＲ修飾Ｔ細胞療法のような個別化遺伝子治療を要することなく、特定のがんを有する患者に普遍的に投与されうる「既製（ｏｆｆ−ｔｈｅ−ｓｈｅｌｆ）」療法として提供されうることを含む。更に、治療に対する個々の患者の応答がモニター可能であり、それに応じて投与量を調節して、治療の悪影響、例えばサイトカインストームを、回避することが可能である。注入された前活性化細胞の腫瘍ホーミングに基づく、活性化Ｔ細胞を患者の体内に注入することとは対照的に、該治療はまた、がんの部位において特異的にＴ細胞を活性化する。
開示されているＢＳ−ＢＤＣはまた、個々の患者の疾患の経過を経時的に追跡する組合せとしても使用されうる。例えば、ＣＤ２８は、Ｔ細胞上で発現される免疫細胞活性化エピトープを与える。しかし、継続的なＴ細胞活性化の後、（腫瘍微小環境の場合と同様に）Ｔ細胞はＣＤ２８の発現を経時的にダウンレギュレーションして、このエピトープを介したＴ細胞活性化の機会を減少させうる。したがって、ＣＤ２８に結合するＢＳ−ＢＤＣから治療が有益に開始されうるが、時間の経過と共に、このＢＳ−ＢＤＣは、抑制性Ｔ細胞エピトープの活性化を逆転させ又は遮断するエピトープに結合するもの（例えば、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ）で置換されうる。ＢＳ−ＢＤＣグループのそのような多数の有益で発展的な組合せが本明細書に記載されている。
前記理由の全てにより、ＢＳ−ＢＤＣの記載されているグループは、がんに対する進行中の闘いにおいて重要かつ顕著な進歩をもたらす。
図１Ａ。Ｔ細胞及びがん細胞に結合したＴ細胞結合性ＢＳ−ＢＤＣの同時多重相互作用の図示。この図示されている実施形態においては、グループ内の１つのＢＳ−ＢＤＣがＣＤ３及びＲＯＲ１上のエピトープに結合する。このグループ内の第２のＢＳ−ＢＤＣは、同じＴ細胞上のＣＤ２８及びＲＯＲ１上の異なるエピトープに結合する。 図１Ｂ。例示的なＢＳ−ＢＤＣフォーマット。 図２。Ｔ細胞同時刺激の際のがん細胞／Ｔ細胞ＢＳ−ＢＤＣの細胞傷害性。 図３Ａ及び３Ｂ。ＣＤ２８指向性ＢＳ−ＢＤＣによるＴ細胞同時活性化は標的抗原陽性がん細胞の存在に厳密に依存している。 図３Ａ及び３Ｂ。ＣＤ２８指向性ＢＳ−ＢＤＣによるＴ細胞同時活性化は標的抗原陽性がん細胞の存在に厳密に依存している。 図４Ａ〜４Ｄ。ＣＤ２８指向性ＢＳ−ＢＤＣによるＴ細胞同時活性化はＲＯＲ１／ＣＤ３抗体誘導性細胞傷害性を増強する。 図４Ａ〜４Ｄ。ＣＤ２８指向性ＢＳ−ＢＤＣによるＴ細胞同時活性化はＲＯＲ１／ＣＤ３抗体誘導性細胞傷害性を増強する。 図４Ａ〜４Ｄ。ＣＤ２８指向性ＢＳ−ＢＤＣによるＴ細胞同時活性化はＲＯＲ１／ＣＤ３抗体誘導性細胞傷害性を増強する。 図４Ａ〜４Ｄ。ＣＤ２８指向性ＢＳ−ＢＤＣによるＴ細胞同時活性化はＲＯＲ１／ＣＤ３抗体誘導性細胞傷害性を増強する。 図５。第２のがん細胞抗原を標的化するＣＤ２８指向性ＢＳ−ＢＤＣでのＴ細胞同時活性化は治療用二重特異性Ｔ細胞結合抗体の抗がん活性を増強する。 図６Ａ〜図６Ｃ。ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ２８抗体は二重特異性抗体に対するＰＤ−Ｌ１媒介性耐性を克服しうる。 図６Ａ〜図６Ｃ。ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ２８抗体は二重特異性抗体に対するＰＤ−Ｌ１媒介性耐性を克服しうる。 図６Ａ〜図６Ｃ。ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ２８抗体は二重特異性抗体に対するＰＤ−Ｌ１媒介性耐性を克服しうる。 図７。ＮＦκＢレポーターＪｕｒｋａｔ（ジャーカット）系を使用して測定した場合、Ｒ１１及び２Ａ２は、異なるが重複するＲＯＲ１エピトープに結合し、一方、Ｒ１２は、異なり非重複性のＲＯＲ１エピトープに結合する。 図８。裏づける配列。 図８。裏づける配列。 図８。裏づける配列。 図８。裏づける配列。 図８。裏づける配列。 図８。裏づける配列。 図８。裏づける配列。 図８。裏づける配列。 図８。裏づける配列。 図８。裏づける配列。 図８。裏づける配列。
詳細な説明
がん治療の進歩にもかかわらず、該疾患に関連した死亡率は依然として極めて高い。例えば、多数の小児患者の臨床成績の改善にもかかわらず、米国においては、がんは依然として、乳児期を過ぎた小児における主要死亡原因である。したがって、小児がんを含むがんに対する有効な新規治療方法の必要性に疑問の余地はない。
抗体を使用してがん細胞を標的化することは、限られた非特異的毒性を有する、腫瘍細胞を排除する有力な手段として、高い期待を集めた。しかし、多数の患者にとって、単一抗体の使用は有効ではない。
二重特異性Ｔ細胞結合抗体は、Ｔ細胞をがん細胞に引き寄せてがん細胞を破壊することを目的として、腫瘍細胞上のがん抗原とＴ細胞活性化エピトープとの両方に結合する。例えば、ＵＳ ２００８／０１４５３６２を参照されたい。現在の二重特異性Ｔ細胞結合抗体治療薬は単一特異性の抗体由来結合ドメインのペアを含む。該ペアの一方のメンバーはがん抗原エピトープを標的化し、該ペアの他方のメンバーはＴ細胞活性化エピトープを標的化する。２つの異なるＴ細胞活性化エピトープ（例えば、ＣＤ３及びＣＤ２８）を標的化するそのような抗体を組合せて使用することを検討した研究者もいる。残念ながら、このアプローチも同様に、期待された治療効果を達成していない。したがって、当技術分野においては、特に、より難治性の又は治療困難ながん型を有する患者のための、より有効ながん治療方法が依然として緊急に必要とされている。
本開示は、がんを治療するための複数の二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ；例えば、二重特異性抗体）を提供する。グループ内の各ＢＳ−ＢＤＣは、該グループ内の別のＢＳ−ＢＤＣによって結合されるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープとは異なるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープに結合する。前記の異なるがん抗原エピトープは同一がん抗原上に存在することが可能であり、特定の実施形態においては、同一がん抗原上の非反復性の異なるがん抗原エピトープである。この進歩は幾つかの利点をもたらす。第１に、グループ内のＢＳ−ＢＤＣは、異なるがん抗原エピトープに結合するため、結合に関する競合がより少なく、立体障害が減少する。第２に、異なる免疫細胞活性化エピトープに結合することにより、同時刺激シグナリングが達成される。Ｔ細胞受容体及び同時刺激受容体を認識する結合ドメインは、異なるＢＳ−ＢＤＣ上に位置するため、該ＢＳ−ＢＤＣグループは、がん細胞の存在下でのみ、Ｔ細胞活性化を誘導する。このアプローチは、多種多様ながんを標的化するために利用されうる汎用プラットフォームを提供する。
少なくとも２つのがん抗原エピトープ及び少なくとも２つの免疫細胞活性化エピトープを標的化するＢＳ−ＢＤＣの記載されているグループの使用は、がん細胞のＴ細胞媒介性殺傷に対する予想外の相乗効果をもたらした。更に、ＢＳ−ＢＤＣの記載されているグループの使用は、意外にも、単一の二重特異性Ｔ細胞結合抗体構築物に対するがん細胞耐性を克服した。
多数の現在利用可能な治療法と比較した場合の、開示されているアプローチの追加的な利点は、開示されているＢＳ−ＢＤＣが、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞療法のような個別化遺伝子治療を要することなく、特定のがんを有する患者に普遍的に投与されうる「既製（ｏｆｆ−ｔｈｅ−ｓｈｅｌｆ）」療法として提供されうることを含む。更に、治療に対する個々の患者の応答がモニター可能であり、それに応じて投与量を調節して、治療の悪影響、例えばサイトカインストームを回避することが可能である。注入された前活性化細胞の腫瘍ホーミングに基づく、活性化Ｔ細胞を患者の体内に注入することとは対照的に、該治療はまた、がんの部位において特異的にＴ細胞を活性化する。
開示されているＢＳ−ＢＤＣはまた、個々の患者の疾患の経過を経時的に追跡する組合せとしても使用されうる。特定の実施形態においては、投与されたＢＳ−ＢＤＣは、免疫系の状態（例えば、活性化の段階）、治療に対する応答の段階及び／又はがん細胞により発現されるがん抗原の変化に基づいて、治療レジメンの経過にわたって変化しうる。ＢＳ−ＢＤＣ間の変化は、最初のＢＳ−ＢＤＣの投与の少なくとも１時間後、又は最初のＢＳ−ＢＤＣの投与の数日後、数週間後若しくは数ヵ月後まで、生じうる。特定の実施形態においては、投与されたＢＳ−ＢＤＣの変化は、例えば、対象サンプルからのフィードバック（例えば、血液検査）による継続的な対象のモニターに基づく。特定の実施形態においては、投与されたＢＳ−ＢＤＣの変化は、免疫状態及び／若しくはがん周期における予測可能な変化又は治療に対する予想される応答に基づいて、予めプログラム（計画）されうる。特定の実施形態においては、投与されたＢＳ−ＢＤＣの変化は、例えばプログラム可能なポンプの使用に基づいて、予めプログラムされ、自動的に生成されうる。投与されたＢＳ−ＢＤＣの変化は急性的に生じる可能性があり、又は徐々に変化しうる。
特定の実施形態においては、患者は免疫活性化の変化に関してモニターされることが可能であり、投与されたＢＳ−ＢＤＣは、異なる免疫活性化エピトープを標的化するＢＳ−ＢＤＣへと変化されうる。一例としては、ＣＤ２８は、Ｔ細胞上で発現される免疫細胞活性化エピトープを与える。しかし、継続的なＴ細胞活性化の後、（腫瘍微小環境の場合と同様に）Ｔ細胞はＣＤ２８の発現を経時的にダウンレギュレーションして、このエピトープを介したＴ細胞活性化の機会を減少させうる。したがって、ＣＤ２８に結合するＢＳ−ＢＤＣから治療が有益に開始されうるが、時間の経過と共に、このＢＳ−ＢＤＣは、抑制性Ｔ細胞エピトープの活性化を逆転させ又は遮断するエピトープに結合するもの（例えば、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ）で置換されうる。ＢＳ−ＢＤＣグループのそのような多数の有益で発展的な組合せが本明細書に記載されている。
特定の実施形態においては、患者はがん抗原の発現の変化に関してモニターされることが可能であり、投与されたＢＳ−ＢＤＣは、異なるがん抗原を標的化するＢＳ−ＢＤＣへと交換されうる。がん抗原の発現は、しばしば、がんの経過中に変化する。一例としては、抗がん薬であるトラスツズマブの分子標的であるＨｅｒ−２は治療中にダウンレギュレーションされて、治療耐性を招きうる（Ｓｈｉら，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１４ １６：Ｒ３３）。特定の実施形態においては、Ｈｅｒ−２を標的化するＢＳ−ＢＤＣで治療されている患者はＨｅｒ−２のダウンレギュレーションに関してモニターされることが可能であり、それらのがんがＨｅｒ−２発現を喪失又は低減した場合には、該患者は、異なるがん抗原を標的化するＢＳ−ＢＤＣで治療されうる。ＥＧＦＲは、治療の経過中にダウンレギュレーションされるがん抗原のもう１つの例である。
治療の経過中、投与されたＢＳ−ＢＤＣグループは、標的化がん抗原、標的化免疫活性化エピトープ又はその両方を変化させるように進化しうる。変化は、標的化がん抗原及び／若しくは免疫細胞活性化エピトープの付加；標的化がん抗原及び／若しくは免疫細胞活性化エピトープの除去；並びに／又は標的化がん抗原及び／若しくは免疫細胞活性化エピトープの置換を反映しうる。
前記理由の全てにより、ＢＳ−ＢＤＣの記載されているグループは、がんに対する進行中の闘いにおいて重要かつ顕著な進歩をもたらす。
示されている「とは異なる」は、標的化エピトープが配列及び／又は構造において互いに異なることを意味する。特定の実施形態においては、異なることに加えて、標的化エピトープは非重複性でもある。「非重複性」は、あるグループにおける１つのＢＳ−ＢＤＣの、エピトープへの結合が、該グループにおける少なくとも１つの他のＢＳ−ＢＤＣの存在により、競合結合アッセイにおいて統計的に有意な度合では低減しないことを意味する。非重複性エピトープは、異なる分子上のエピトープであることが可能であり（例えば、ＲＯＲ１及びＣＤ３３；ＣＤ３及びＣＤ２８）、あるいは、同一分子上に位置する非重複性エピトープであることが可能である（例えば、非重複性ＲＯＲ１エピトープ；非重複性ＣＤ３エピトープ）。同一抗原上の、異なる非反復性エピトープは、空間的には互いに物理的に異なるが配列においては互いに反復性であるエピトープを除外する。例えば、ＭＵＣ１は反復配列を有し、本明細書において定義されているとおり、該配列内の反復は非反復性ではなく、異なっている。
Ｔ細胞の「同時刺激」は、ＢＳ−ＢＤＣグループの複数メンバーの存在下では、ＢＳ−ＢＤＣグループの単一メンバーのみの存在下よりも頑強なＴ細胞応答が観察されることを意味する。
特定の実施形態においては、本明細書に開示されているＢＳ−ＢＤＣグループは、ＳＭＩＴＥグループと称されうる。ＳＭＩＴＥは、「同時多重相互作用Ｔ細胞エンゲージ」結合ドメイン構築物（例えば、抗体、ｓｃＦｖ）を表す。この用語は、開示されているＢＳ−ＢＤＣグループが、２つの異なるがん抗原エピトープに結合した場合に、２つの異なる免疫細胞活性化エピトープにエンゲージ（結合）することを表す。免疫細胞活性化エピトープの結合は時間的に重複して、がん細胞の部位における頑強なＴ細胞活性化を引き起こす。
ＢＳ−ＢＤＣのグループは２つ、３つ又は４つのＢＳ−ＢＤＣを含みうる。グループが２つのＢＳ−ＢＤＣ（ペア）を含む場合、該ペアの各メンバーは、異なるがん抗原エピトープ及び異なる免疫細胞活性化エピトープに結合する。グループが３つのＢＳ−ＢＤＣを含む場合、該グループの各メンバーは、異なるがん抗原エピトープ及び異なる免疫細胞活性化エピトープに結合することが可能であり（３つのがん抗原エピトープ及び３つの免疫細胞活性化エピトープを標的化する）、あるいは、３メンバーグループ（すなわち、３つのメンバーからなるグループ）の２つのメンバーは同一がん抗原エピトープを標的化することが可能であり、該３メンバーグループの２つのメンバーは同一免疫細胞活性化エピトープを標的化することが可能である。同じ原理が４メンバーグループにも当てはまる。すなわち、あるグループが４つのＢＳ−ＢＤＣを含む場合、該グループの各メンバーは、異なるがん抗原エピトープ及び異なる免疫細胞活性化エピトープに結合しうる（４つのがん抗原エピトープ及び４つの免疫細胞活性化エピトープを標的化する）。あるいは、該グループのメンバーのサブセットは共通のがん抗原エピトープ及び／又は免疫細胞活性化エピトープを標的化しうる。メンバーの数にかかわらず、各グループは少なくとも２つの異なるがん抗原エピトープを標的化し、特定の実施形態においては、少なくとも２つの異なる免疫細胞活性化エピトープを標的化する。特定の実施形態においては、各グルーピングは少なくとも２つの異なるがん抗原エピトープ及び共通の免疫細胞活性化エピトープ（例えば、ＣＤ３又はＣＤ２８）を標的化する。
ＢＳ−ＢＤＣの開示されているグループは、多種多様ながん、例えば副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳腫瘍、乳がん、がん腫、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体がん、耳鼻咽喉（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、胃腸がん、頭頸部がん、ホジキン病、腸がん、腎臓がん、喉頭がん、白血病、肝臓がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、メラノーマ、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫瘍及びそれらの転移を標的化するために使用されうる、汎用プラットフォームを提供する。
本開示の態様を以下に更に詳細に記載する。
ＢＳ−ＢＤＣフォーマット。ＢＳ−ＢＤＣフォーマットは、がん抗原エピトープに結合する第１結合ドメインと免疫細胞活性化エピトープに結合する第２結合ドメインとを含有するタンパク質を含む。例示的な二重特異性抗体フォーマットは、例えば、ＷＯ２００９／０８０２５１、ＷＯ２００９／０８０２５２、ＷＯ２００９／０８０２５３、ＷＯ２００９／０８０２５４、ＷＯ２０１０／１１２１９３、ＷＯ２０１０／１１５５８９、ＷＯ２０１０／１３６１７２、ＷＯ２０１０／１４５７９３及びＷＯ２０１０／１４５７９３に記載されている。
種々の結合ドメインは、抗体、フィブロネクチン、アフィボディ、天然リガンド（例えば、ＣＤ２８に関するＣＤ８０及びＣＤ８６）などのような複数の起源に由来しうる。特定の実施形態において、結合ドメインは、がん抗原エピトープ又は免疫細胞活性化エピトープ（例えば、Ｔ細胞受容体）に特異的に結合する全抗体又はその結合フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ及び一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、若しくは免疫グロブリンの任意の生物学的に有効なフラグメントに由来しうる。抗体又は抗原結合性フラグメントには、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ミニボディ及び直鎖状抗体の全部又は一部が含まれる。
ヒト化抗体又はヒト由来の結合ドメインを含むＢＳ−ＢＤＣは、非ヒト抗体と比較して、ヒトにおいて低下した免疫原性を有し、少数の非免疫原性エピトープを有する。結合ドメインは、一般に、ヒト対象において低下した抗原性を示すように選択される。結合ドメインは、特に、選択されたがん抗原エピトープ又は免疫細胞活性化エピトープに特異的に結合する任意のペプチドを含みうる。結合ドメインの起源には、種々の種からの抗体可変領域（これは、抗体、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖに基づくグラバボディ（ｇｒａｂａｂｏｄｙ）、又は可溶性ＶＨドメイン若しくはドメイン抗体の形態でありうる）が含まれる。これらの抗体は、重鎖可変領域のみを用いて抗原結合領域を形成しうる。すなわち、これらの機能的抗体は重鎖のみのホモ二量体である（「重鎖抗体」と称される）（Ｊｅｓｐｅｒｓら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：１１６１，２００４；Ｃｏｒｔｅｚ−Ｒｅｔａｍｏｚｏら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４：２８５３，２００４；Ｂａｒａｌら，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．１２：５８０，２００６；及びＢａｒｔｈｅｌｅｍｙら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：３６３９，２００８）。
部分的又は完全合成抗体のファージディスプレイライブラリーが利用可能であり、選択されたエピトープに結合しうる抗体又はそのフラグメントに関してスクリーニングされうる。例えば、結合ドメインは、関心標的に特異的に結合するＦａｂフラグメントに関してＦａｂファージライブラリーをスクリーニングすることにより特定されうる（Ｈｏｅｔら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：３４４，２００５を参照されたい）。ヒト抗体のファージディスプレイライブラリーも利用可能である。また、簡便な系（例えば、マウス、ＨｕＭＡｂマウス（登録商標）、ＴＣマウス（商標）、ＫＭマウス（登録商標）、ラマ、ニワトリ、ラット、ハムスター、ウサギなど）において免疫原として関心標的を使用するハイブリドーマ開発の伝統的な方法が、結合ドメインを開発するために使用されうる。特定の実施形態においては、結合ドメインは、標的化がん細胞及び／又はＴ細胞により発現される選択されたエピトープに特異的に結合し、非特異的成分又は無関係な標的とは交差反応しない。結合ドメイン内のＣＤＲをコードするアミノ酸配列又はポリヌクレオチド配列は、一旦特定されると、単離及び／又は決定されうる。
結合ドメインの代替的起源には、ランダムペプチドライブラリーをコードする配列、又は代替的非抗体スカフォールドのループ領域における操作された多様性のアミノ酸をコードする配列、例えば、ｓｃＴＣＲ（Ｌａｋｅら，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：７４５，１９９９；Ｍａｙｎａｒｄら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３０６：５１，２００５；米国特許第８，３６１，７９４号）、ｍＡｂ２又はＦｃａｂ（商標）（例えば、ＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ ２００７／０９８９３４；ＷＯ ２００６／０７２６２０）、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質−４（Ｗｅｉｄｌｅら，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎ．Ｐｒｏｔｅｏ．１０：１５５，２０１３）及びその他（Ｎｏｒｄら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８：６０１，１９９５；Ｎｏｒｄら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：７７２，１９９７；Ｎｏｒｄら，Ｅｕｒｏ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６８：４２６９，２００１；Ｂｉｎｚら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１２５７，２００５；Ｂｏｅｒｓｍａ及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：８４９，２０１１）が含まれる。
特定の実施形態においては、抗体フラグメントは、ＢＳ−ＢＤＣにおける１以上の結合ドメインとして使用される。「抗体フラグメント」は、エピトープに結合する能力を保有する、完全又は全長抗体の一部を意味する。抗体フラグメントの例には、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ及び直鎖状抗体が含まれる。
一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）は、短いリンカーペプチドに連結された免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の可変領域の融合タンパク質である。Ｆｖフラグメントは抗体の単一アームのＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む。Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬ及びＶＨは別々の遺伝子によりコードされているが、それらは連結されることが可能であり、例えば、ＶＬ領域とＶＨ領域がペアになって１価分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））を形成している単一タンパク質としてそれらが生成されることを可能にする合成リンカーにより、組換え法を用いて、それらは連結されうる。Ｆｖ及びｓｃＦｖに関する更なる情報に関しては、例えば、Ｂｉｒｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２（１９８８）４２３−４２６；Ｈｕｓｔｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５（１９８８）５８７９−５８８３；Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ（編），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），（１９９４）２６９−３１５；ＷＯ１９９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；ならびに米国特許第５，５８７，４５８号を参照されたい。
Ｆａｂフラグメントは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインを含む１価抗体フラグメントである。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む２価フラグメントである。インビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントの考察に関しては、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。ダイアボディは、２価でありうる２つのエピトープ結合部位を含む。例えば、ＥＰ ０４０４０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；及びＨｏｌｌｉｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（１９９３）６４４４−６４４８を参照されたい。二重アフィニティ再標的化抗体（ＤＡＲＴ（商標）；ダイアボディ形態に基づくが、更なる安定化のためのＣ末端ジスルフィド架橋を特徴とする（Ｍｏｏｒｅら，Ｂｌｏｏｄ １１７，４５４２−５１（２０１１）））も使用されうる。抗体フラグメントは、単離されたＣＤＲをも含みうる。抗体フラグメントの総説は、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９（２００３）１２９−１３４を参照されたい。
抗体フラグメントは、本明細書に記載されているとおり、無傷抗体のタンパク質分解消化及び組換え宿主細胞（例えば、ヒト懸濁細胞株、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はファージ）による製造を含む種々の技術により製造されうる。抗体フラグメントは、無傷抗体の場合と同様にして、それらの結合特性に関してスクリーニングされうる。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣは結合ドメインとしてのエピトープに対する天然受容体又はリガンドをも含みうる。例えば、結合標的がＰＤ−Ｌ１を含む場合、結合ドメインはＰＤ−１（例えば、ＰＤ−１／抗ＣＤ３融合体を含む）を含みうる。結合のための受容体融合体の一例は、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）（Ａｍｇｅｎ）である。天然受容体又はリガンドはまた、結合を増強するために修飾されうる。例えば、ベータラセプト（ｂｅｔａｌａｃｅｐｔ）はアバタセプト（ａｂａｔａｃｅｐｔ）の修飾形態である。特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣは、食作用を誘導する天然受容体又はリガンドを含みうる。カルレティキュリン（ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ）（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｐ２７７９７）は、健常細胞の小胞体に局在するタンパク質であるが、瀕死細胞においては、それは細胞表面に移動し、マクロファージのような免疫細胞による食作用を誘導する。特定の実施形態においては、結合ドメインは、カルレティキュリン、又は食作用を誘導しうるカルレティキュリンの一部を含みうる。
結合は、結合ドメインの多量体化から生じるアビディティの増強によっても増強されうる。当技術分野で公知の任意のスクリーニング方法が、抗原エピトープに対するアビディティの増強を特定するために使用されうる。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣ形態は、特に標的化されるがん抗原及び免疫細胞活性化エピトープに関して選択された結合ドメインを含有するブリナツモマブ（ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）に基づくものでありうる。特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣ形態は、特に標的化されるがん抗原及び免疫細胞活性化エピトープに関して選択された結合ドメインを含有するＡＭＧ３３０に基づくものでありうる。
特定の実施形態において、ＢＳ−ＢＤＣ形態は、軽鎖のＣ末端に結合した一本鎖抗体を含みうる（例えば、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１７；６（３）：ｅ１２６７８９１を参照されたい）。Ｆｃ領域の存在は、タンパク質半減期の維持に役立ちうるため、この形態は有用でありうる。Ｆｃは幾つかの受容体と相互作用し、そして免疫応答に寄与しうるため、Ｆｃ領域の存在も有用でありうる。抗体−ｓｃＦｖ融合体もまた、有用でありうる。なぜなら、該抗体部分はそのエピトープに二量体様態で結合し（これはアビディティを増強する）、そして該ｓｃＦｖ部分はそのエピトープに単量体様態で結合する（これは、例えば、Ｔ細胞エピトープへの結合に有用でありかつ標的（例えば、がん細胞）の存在下でのみ多量体化を可能にするのに有用である）からである。これらの実施形態は、「三重特異性」でありうる。
使用されうる追加的なＢＳ−ＢＤＣ形態の総説としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ ＆ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，ｍＡｂｓ，２０１７．９：２，１８２−２１２，ＤＯＩ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１６．１２６８３０７を参照されたい。
「エピトープ」は、抗原結合性タンパク質、例えば抗体又はＴ細胞受容体より結合されうる任意の決定基を含む。エピトープは、その抗原を標的化する抗原結合性タンパク質により結合される抗原の領域であり、その抗原がタンパク質である場合には、該抗原結合性タンパク質と直接接触する特定の残基を含む。特定の実施形態においては、「エピトープ」は、対応する結合ドメインにより結合されるタンパク質標的上の結合部位を意味する。結合ドメインは、直鎖状エピトープ（例えば、５〜１２個の連続的アミノ酸の伸長を含むエピトープ）に結合するか、又は結合ドメインは、タンパク質標的の短い伸長の幾つかの空間的配置により形成される三次元構造に結合する。結合ドメインにより、例えば、抗体又は抗体フラグメントのエピトープ認識部位又はパラトープにより認識される三次元エピトープは、エピトープ分子の三次元の表面の特徴と考えられうる。これらの特徴は、結合ドメインの対応結合部位に厳密に嵌合し、それにより、結合ドメインとその標的タンパク質との結合が促進される。特定の実施形態においては、エピトープは以下の２つのレベルを有するとみなされうる：（ｉ）抗体又は結合ドメインが投じる暗影と考えられうる「被覆パッチ（ｃｏｖｅｒｅｄ ｐａｔｃｈ）」、及び（ｉｉ）個々の関与側鎖及びバックボーン（骨格）残基。したがって、結合はイオン相互作用、水素結合及び疎水性相互作用の集合体によるものである。
「結合する」は、１０−８Ｍ以下、特定の実施形態においては１０−５Ｍ〜１０−１３Ｍ、特定の実施形態においては１０−５Ｍ〜１０−１０Ｍ、特定の実施形態においては１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、特定の実施形態においては１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、又は特定の実施形態においては１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍの解離定数（１（Ｄ））で、結合ドメインがその標的エピトープと会合することを意味する。この語は更に、結合ドメインが、存在する他の生体分子に結合しないこと（例えば、それが、１０−４Ｍ以上、特定の実施形態においては１０−４Ｍ〜１Ｍの解離定数（ＫＤ）で、他の生体分子に結合すること）を示すために用いられうる。標的化エピトープは、適切なインビトロ条件下及び本明細書に記載されているインビボ条件下でその対応ＢＳ−ＢＤＣ結合ドメインにより結合されるエピトープである。特定の実施形態においては、結合のための適切なインビトロ条件は、室温又は３７℃でほぼ生理的ｐＨ（７．４）の緩衝化塩溶液を含みうる。
標的化がん抗原エピトープ。がん細胞抗原はがん細胞により発現される。本開示の重要な特徴の１つは、がん抗原ががん細胞によって優先的に発現される必要がないことである。これは、有意なＳＭＩＴＥ誘発性免疫細胞活性化ががん細胞の存在下でのみ生じるからである。一例として、ＰＤ−Ｌ１はがん細胞及び非がん細胞により発現される。
特定の実施形態においては、がん細胞抗原はがん細胞によって優先的に発現される。「優先的に発現される」は、がん細胞抗原が、他の細胞型と比較して、がん細胞上で、より高いレベルで見出されることを意味する。幾つかの例においては、がん抗原は標的化がん細胞型によってのみ発現される。他の例においては、がん抗原は、標的化がん細胞型上で、非標的細胞上よりも少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％、７５％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％多く発現される。
以下の表は、ＢＳ−ＢＤＣで標的化されうる特定のがん及びがん抗原の例を示す。
Figure 2019532017
より詳細な例においては、がん細胞抗原には以下のものが含まれる。
Figure 2019532017
Figure 2019532017
Figure 2019532017
当業者に理解されるとおり、標的化抗原は、シグナルペプチド、例えば、配列番号６〜８における代表的なＣＤ３３抗原の下線付き断片を欠いている可能性がある。更に、理解されるとおり、「同一（同じ）がん抗原」は、両方の標的化エピトープが同一がん抗原分子上に存在することを可能にし、必ずしもそれを必要としない。すなわち、例えば、ＲＯＲ１の２つの異なるエピトープが標的化される場合、グループにおける１つのＢＳ−ＢＤＣは第１ ＲＯＲ１分子上の第１エピトープに結合することが可能であり、該グループにおける第２ ＢＳ−ＢＤＣは、異なるＲＯＲ１分子上の第２エピトープに結合することが可能である。同様に、第１及び第２エピトープは同一ＲＯＲ１分子上の第１及び第２ ＢＳ−ＢＤＣにより結合されうる。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣグループ内に存在するがん抗原エピトープ結合ドメインはそれぞれ、異なるＲＯＲＩエピトープ（例えば、ＲＯＲ１−Ａ及びＲＯＲ１−Ｂ）を標的化する。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＡＳＧＦＤＦＳＡＹＹＭ（配列番号１２）を含むＣＤＲＬ１配列、ＴＩＹＰＳＳＧ（配列番号１３）を含むＣＤＲＬ２配列及びＡＤＲＡＴＹＦＣＡ（配列番号１４）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＤＴＩＤＷＹ（配列番号１５）を含むＣＤＲＨ１配列、ＶＱＳＤＧＳＹＴＫＲＰＧＶＰＤＲ（配列番号１６）を含むＣＤＲＨ２配列及びＹＩＧＧＹＶＦＧ（配列番号１７）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＱＡＳＱＳＩＤＳＮＬＡ（配列番号１８）を含むＣＤＲＬ１配列、ＲＡＳＮＬＡＳ（配列番号１９）を含むＣＤＲＬ２配列及びＬＧＧＶＧＮＶＳＹＲＴＳ（配列番号２０）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＤＹＰＩＳ（配列番号２１）を含むＣＤＲＨ１配列、ＦＩＮＳＧＧＳＴＷＹＡＳＷＶＫＧ（配列番号２２）を含むＣＤＲＨ２配列及びＧＹＳＴＹＹＣＤＦＮＩ（配列番号２３）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらはＲ１１抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＴＬＳＳＡＨＫＴＤＴＩＤ（配列番号２４）を含むＣＤＲＬ１配列、ＧＳＹＴＫＲＰ（配列番号２５）を含むＣＤＲＬ２配列及びＧＡＤＹＩＧＧＹＶ（配列番号２６）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＡＹＹＭＳ（配列番号２７）を含むＣＤＲＨ１配列、ＴＩＹＰＳＳＧＫＴＹＹＡＴＷＶＮＧ（配列番号２８）を含むＣＤＲＨ２配列及びＤＳＹＡＤＤＧＡＬＦＮＩ（配列番号２９）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらはＲ１２抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＫＡＳＱＮＶＤＡＡＶＡ（配列番号３０）を含むＣＤＲＬ１配列、ＳＡＳＮＲＹＴ（配列番号３１）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＹＤＩＹＰＹＴ（配列番号３２）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＤＹＥＭＨ（配列番号３３）を含むＣＤＲＨ１配列、ＡＩＤＰＥＴＧＧＴＡＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号３４）を含むＣＤＲＨ２配列及びＹＹＤＹＤＳＦＴＹ（配列番号３５）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは２Ａ２抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＱＡＳＱＳＩＧＳＹＬＡ（配列番号３６）を含むＣＤＲＬ１配列、ＹＡＳＮＬＡＳ（配列番号３７）を含むＣＤＲＬ２配列及びＬＧＳＬＳＮＳＤＮＶ（配列番号３８）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＳＨＷＭＳ（配列番号３９）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＩＡＡＳＧＳＴＹＹＡＮＷＡＫＧ（配列番号４０）を含むＣＤＲＨ２配列及びＤＹＧＤＹＲＬＶＴＦＮＩ（配列番号４１）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらはＹ３１抗体のＣＤＲ配列を表す。
ＲＯＲＩに特異的な多数の追加的な抗体が当業者に公知であり、配列、エピトープ結合及びアフィニティに関して容易に特徴づけられうる。例えば、ＷＯ２００８０７６８６８、ＷＯ／２００８１０３８４９、ＷＯ２０１００８０６９、ＷＯ２０１０１２４１８８、ＷＯ２０１１０７９９０２、ＷＯ２０１１０５４００７、ＷＯ２０１１１５９８４７、ＷＯ２０１２０７６０６６、ＷＯ２０１２０７６７２７、ＷＯ ２０１２０４５０８５及びＷＯ２０１２０９７３１３を参照されたい。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣグループ内に存在するがん抗原エピトープ結合ドメインはそれぞれ、異なるＣＤ１９エピトープを標的化する。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＣＤ１９に特異的なＶＨ及びＶＬ領域を含む結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。特定の実施形態においては、ＶＨ及びＶＬ領域はヒト体である。例示的なＶＨ及びＶＬ領域は抗ＣＤ１９特異的モノクローナル抗体ＦＭＣ６３のセグメントを含む。特定の実施形態においては、結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はヒト体又はヒト化体であり、ＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮ（配列番号４２）を含むＣＤＲＬ１配列、ＳＲＬＨＳＧＶ（配列番号４３）を含むＣＤＲＬ２配列及びＧＮＴＬＰＹＴＦＧ（配列番号４４）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はヒト体又はヒト化体であり、ＤＹＧＶＳ（配列番号４５）を含むＣＤＲＨ１配列、ＶＴＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号４６）を含むＣＤＲＨ２配列及びＹＡＭＤＹＷＧ（配列番号４７）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。ＳＪ２５Ｃ１及びＨＤ３７のような他のＣＤ１９標的化抗体が公知である（ＳＪ２５Ｃ１：Ｂｅｊｃｅｋら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００５，ＰＭＩＤ ７５３８９０１；ＨＤ３７：Ｐｅｚｕｔｔｏら，ＪＩ １９８７，ＰＭＩＤ ２４３７１９９）。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣグループ内に存在するがん抗原エピトープ結合ドメインはそれぞれ、異なるＰＳＭＡエピトープを標的化する。ＰＳＭＡに特異的な多数の抗体が当業者に公知であり、配列、エピトープ結合及びアフィニティに関して容易に特徴づけられうる。結合ドメインは抗メソテリンリガンド（卵巣がん、膵臓がん及び中皮腫の治療に関連している）をも含みうる。当業者に理解されるとおり、異なるがん抗原エピトープ結合ドメインは、（とりわけ）本明細書に開示されているがん抗原上の多数の異なるエピトープに結合しうる。既に示されているとおり、特定の実施形態においては、異なるエピトープが同一がん抗原上に存在する。特定の実施形態においては、異なるエピトープが、異なるがん抗原上に存在する。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣグループ内に存在するがん抗原エピトープ結合ドメインはそれぞれ、異なるＣＤ２０エピトープを標的化する。リツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ）（リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）はＣＤ２０陽性非ホジキンリンパ腫のＣＤ２０を標的化し、アルゼラ（Ａｒｚｅｒｒａ）（オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ），Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、ＣＤ２０の異なるエピトープを標的化する。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＲＡＳＳＳＶＳＹＩＨ（配列番号４８）を含むＣＤＲＬ１配列、ＡＴＳＮＬＡＳ（配列番号４９）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＷＴＳＮＰＰＴ（配列番号５０）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＳＹＮＭＨ（配列番号５１）を含むＣＤＲＨ１配列、ＡＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号５２）を含むＣＤＲＨ２配列及びＳＴＹＹＧＧＤＷＹＦＮＶ（配列番号５３）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは２Ｂ８抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷ（配列番号５４）を含むＣＤＲＬ１配列、ＹＳＡＳＦＬＥＳ（配列番号５５）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＨＹＴＴＰＴ（配列番号５６）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＳＧＦＮＴＫＤＴＹＩＨＷ（配列番号５７）を含むＣＤＲＨ１配列、ＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲ（配列番号５８）を含むＣＤＲＨ２配列及びＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＶ（配列番号５９）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは４Ｄ５抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣグループ内に存在するがん抗原エピトープ結合ドメインはそれぞれ、異なるＣＤ３３エピトープを標的化する。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣは全長ＣＤ３３（ＣＤ３３ＦＬ）のみに、又はエクソン２を欠くＣＤ３３のスプライス変異体（ＣＤ３３ΔＥ２）のみに、又は（ｉｉｉ）それがＣＤ３３ＦＬであるかＣＤ３３ΔＥ２であるかにかかわらず、ＣＤ３３に結合する。異なるＣＤ３３アイソフォームを標的化するＢＳ−ＢＤＣのグループは、より高い比率のＣＤ３３発現細胞を標的化しうる。なぜなら、それらは、ＣＤ３３ＦＬ及びＣＤ３３ΔＥ２を発現する細胞を標的化しうるからである。更に、ＣＤ３３ΔＥ２に結合するＢＳ−ＢＤＣは、ＣＤ３３ΔＥ２変異体を発現するがＣＤ３３ＦＬタンパク質を発現しない細胞に対する治療標的化をもたらす。
図８においては、以下の特異性を有するＢＳ−ＢＤＣに関して、以下の可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）が示されている。
Figure 2019532017
ＣＤＲの明確な描写及び抗体の結合部位を含む残基の特定は、抗体の構造を解明すること及び／又は抗体−エピトープ複合体の構造を解明することにより達成されうる。特定の実施形態においては、これはＸ線結晶学のような方法により達成されうる。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＲＡＳＥＶＤＮＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号７６）を含むＣＤＲＬ１配列、ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号７７）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＳＫＥＶＰＷ（配列番号７８）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化ＣＤ３３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＤＹＮＭＨ（配列番号７９）を含むＣＤＲＨ１配列、ＹＩＹＰＹＮＧＧＴＧＹＮＱＫＦＫＳ（配列番号８０）を含むＣＤＲＨ２配列及びＧＲＰＡＭＤＹ（配列番号８１）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化ＣＤ３３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらはＭ１９５又はＨｕＭ１９５抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、ＣＤ３３結合ドメインは、配列番号２５３を含むＣＤＲＬ１配列、配列番号２５４を含むＣＤＲＬ２配列及び配列番号２５５を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＣＤ３３結合ドメインは、配列番号２５６を含むＣＤＲＨ１配列、配列番号２５７を含むＣＤＲＨ２配列及び配列番号２５８を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。これらは１Ｈ７抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣグループ内に存在するがん抗原エピトープ結合ドメインはそれぞれ、異なるＰＤ−Ｌ１エピトープを標的化する。特定の実施形態においては、ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号２６７）を含むＣＤＲＬ１配列、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号２６８）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号２６９）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号２７０）を含むＣＤＲＨ１配列、ＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２７１）を含むＣＤＲＨ２配列及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号２７２）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号２７３）を含むＣＤＲＬ１配列、ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号２７４）を含むＣＤＲＬ２配列及びＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ（配列番号２７５）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＭ（配列番号２７６）を含むＣＤＲＨ１配列、ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＴＶＫＧ（配列番号２７７）を含むＣＤＲＨ２配列及びＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹ（配列番号２５９）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＰＤ−Ｌ１結合ドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬ（配列番号８２）を含むＣＤＲＬ１配列、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号８３）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＲＳＮＷＰＲＴ（配列番号８４）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＤＹＧＦＳ（配列番号８５）を含むＣＤＲＨ１配列、ＷＩＴＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ（配列番号８６）を含むＣＤＲＨ２配列及びＤＹＦＹＧＭＤＹ（配列番号８７）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは３Ｇ１０抗体のＣＤＲ配列を表す。ＰＤ−Ｌ１に結合する多数の追加的な配列は、例えば、ＵＳ ２０１６／０２２２１１７に記載されている。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣグループ内に存在するがん抗原エピトープ結合ドメインはそれぞれ、異なるＣＤ１２３エピトープを標的化する。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、抗ＣＤ１２３ ７Ｇ３抗体のＣＤＲを含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＮＴＦＭＨ（配列番号８８）を含むＣＤＲＬ１配列、ＲＡＳＮＬＥＳ（配列番号８９）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＳＮＥＤＰＰＴ（配列番号９０）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＮＹＧＭＮ（配列番号９１）を含むＣＤＲＨ１配列、ＷＩＮＴＹＴＧＥＳＴＹＳＡＤＦＫＧ（配列番号９２）を含むＣＤＲＨ２配列及びＳＧＧＹＤＰＭＤＹ（配列番号９３）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは、米国特許第８，１６３，２７９号に記載されている抗体３２７１６のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＲＳＮＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号９４）を含むＣＤＲＬ１配列、ＲＭＳＮＬＡＳ（配列番号９５）を含むＣＤＲＬ２配列及びＭＱＨＬＥＹＰＹＴ（配列番号９６）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのがん抗原エピトープ結合ドメインは、ＮＹＷＭＮ（配列番号９７）を含むＣＤＲＨ１配列、ＲＩＤＰＳＤＳＥＳＨＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号９８）を含むＣＤＲＨ２配列及びＹＤＹＤＤＴＭＤＹ（配列番号９９）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは、米国特許第８，１６３，２７９号に記載されている抗体３２７０３のＣＤＲ配列を表す。
免疫細胞活性化エピトープ。本開示のＳＭＩＴＥによる局所的活性化のために標的化されうる免疫細胞には、例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びマクロファージが含まれる。
Ｔ細胞活性化は２つの異なるシグナル［すなわち、抗原依存性一次活性化を開始させ、Ｔ細胞受容体様シグナルを与えるもの（一次細胞質シグナリング配列）、及び抗原非依存的に作用して、二次又は同時刺激シグナルを与えるもの（二次細胞質シグナリング配列）］によりもたらされうる。本明細書に開示されているＢＳ−ＢＤＣグループは、結合時にＴ細胞活性化を誘導するＴ細胞活性化エピトープの任意の組合せを標的化しうる。そのようなＴ細胞活性化エピトープの例は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ８３、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ及びＢ７−Ｈ３を含むＴ細胞マーカー上に存在する。遮断されうるＴ細胞抑制受容体には、４−１ＢＢ、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４及びＣＤ２００が含まれる。
ＣＤ３はＴ細胞受容体の一次シグナル伝達要素である。ＣＤ３は、ガンマ（γ）、デルタ（Δ）、イプシロン（ε）、ゼータ（Ζ）及びエータ（Η）鎖と称されるインバリアントタンパク質の一群から構成される。γ鎖、Δ及びε鎖は構造的に関連しており、それぞれは、Ｉｇ様細胞外定常ドメイン及びそれに続く膜貫通領域及び４０個を超えるアミノ酸の細胞質ドメインを含有する。Ζ鎖及びΗ鎖は、明らかに異なる構造を有し、両方は僅か９アミノ酸の非常に短い細胞外領域、膜貫通領域並びにΖ及びΗ鎖にそれぞれ１１３アミノ酸及び１１５アミノ酸を含む長い細胞質テールを有する。ＣＤ３複合体におけるインバリアントタンパク質鎖は会合して、ε鎖とγ鎖との非共有結合性ヘテロ二量体（εγ）、又はε鎖とΔ鎖との非共有結合性ヘテロ二量体（εΔ）、又はΖ鎖とΗ鎖との非共有結合性ヘテロ二量体（ΖΗ）、あるいは２つのΖ鎖のジスルフィド結合ホモ二量体（ΖΖ）を形成する。ＣＤ３３複合体の９０％はΖΖホモ二量体を含む。
ＣＤ３鎖の細胞質領域は、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）と称されるモチーフを含む。このモチーフは、ＩｇＥ及びＩｇＧに対するＦｃ受容体並びにＢ細胞受容体複合体のＩｇ−α／Ｉｇ−βヘテロ二量体を含む多数の他の受容体において見出される。ＩＴＡＭ部位は細胞質チロシンキナーゼと会合し、ＴＣＲ媒介誘発後のシグナル伝達に関与する。ＣＤ３においては、γ鎖、Δ鎖及びε鎖はそれぞれ、ＩＴＡＭの単一コピーを含有し、一方、Ζ鎖及びΗ鎖はそれらの長い細胞質領域内に３つのＩＴＡＭを含有する。実際、Ζ鎖及びΗ鎖はＴ細胞活性化シグナル伝達経路における主要な役割を担っている。
ＣＤ３は全ての成熟Ｔ細胞上で発現される。特定の実施形態においては、ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＯＫＴ３抗体（ブリナツモマブにおいて使用されているものと同じ）に由来する。ＯＫＴ３抗体は米国特許第５，９２９，２１２号に詳細に記載されている。それは、、ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮ（配列番号１００）を含むＣＤＲＬ１配列、ＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号１０１）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号１０２）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ３ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＴＭＨ（配列番号１０３）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号１０４）を含むＣＤＲＨ２配列及びＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号１０５）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。
以下の配列は、ＣＤ３に結合する能力を保有するＯＫＴ３に由来するｓｃＦｖである。
Figure 2019532017
 それはまた、ＣＤ３結合ドメインとして使用されうる。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ３ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＱＳＬＶＨＮＮＧＮＴＹ（配列番号１０７）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＶＳを含むＣＤＲＬ２配列及びＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号１０９）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ３ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＧＦＴＦＴＫＡＷ（配列番号１１０）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＫＤＫＳＮＳＹＡＴ（配列番号１１１）を含むＣＤＲＨ２配列及びＲＧＶＹＹＡＬＳＰＦＤＹ（配列番号１１２）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは２０Ｇ６−Ｆ３抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ３ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＱＳＬＶＨＤＮＧＮＴＹ（配列番号１１３）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＶＳを含むＣＤＲＬ２配列及びＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号１１５）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ３ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＧＦＴＦＳＮＡＷ（配列番号１１６）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＫＡＲＳＮＮＹＡＴ（配列番号１１７）を含むＣＤＲＨ２配列及びＲＧＴＹＹＡＳＫＰＦＤＹ（配列番号１１８）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは４Ｂ４−Ｄ７抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ３ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＱＳＬＥＨＮＮＧＮＴＹ（配列番号１１９）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＶＳを含むＣＤＲＬ２配列及びＧＱＧＴＱＹＰＦＴ（配列番号１２１）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ３ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＧＦＴＦＳＮＡＷ（配列番号１２２）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＫＤＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号１２３）を含むＣＤＲＨ２配列及びＲＹＶＨＹＧＩＧＹＡＭＤＡ（配列番号１２４）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは４Ｅ７−Ｃ９抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ３ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＱＳＬＶＨＴＮＧＮＴＹ（配列番号１２５）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＶＳを含むＣＤＲＬ２配列及びＧＱＧＴＨＹＰＦＴ（配列番号１２７）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ３ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＧＦＴＦＴＮＡＷ（配列番号１２８）を含むＣＤＲＨ１配列、ＫＤＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号１２９）を含むＣＤＲＨ２配列及びＲＹＶＨＹＲＦＡＹＡＬＤＡ（配列番号１３０）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらは１８Ｆ５−Ｈ１０抗体のＣＤＲ配列を表す。
抗ＣＤ３抗体、結合ドメイン及びＣＤＲの追加的な例はＷＯ２０１６／１１６６２６において見出されうる。ＴＲ６６も使用されうる。
ＣＤ２８は、ヒトにおける末梢Ｔ細胞の８０％に存在する表面糖タンパク質であり、休止Ｔ細胞及び活性化Ｔ細胞の両方に存在する。ＣＤ２８はＢ７−１（ＣＤ８０）及びＢ７−２（ＣＤ８６）に結合し、公知の同時刺激分子の中で最も強力である（Ｊｕｎｅら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １５：３２１（１９９４）；Ｌｉｎｓｌｅｙら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：１９１（１９９３））。特定の実施形態においては、ＣＤ２８結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＣＤ８０、ＣＤ８６又は９Ｄ７抗体に由来する。ＣＤ２８に結合する追加的な抗体には、９．３、ＫＯＬＴ−２、１５Ｅ８、２４８．２３．２及びＥＸ５．３Ｄ１０が含まれる。更に、１ＹＪＤは、分裂促進性抗体（５．１１Ａ１）のＦａｂフラグメントと複合体を形成したヒトＣＤ２８の結晶構造を与える。特定の実施形態においては、９Ｄ７と競合しない抗体が選択される。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはＣＤ２８のエピトープに結合する。特定の実施形態においては、ＣＤ２８結合ドメインはＴＧＮ１４１２抗体のＣＤＲを含む。特定の実施形態においては、ＣＤ２８結合ドメインは、ＨＡＳＱＮＩＹＶＷＬＮ（配列番号１３１）を含むＣＤＲＬ１配列、ＫＡＳＮＬＨＴ（配列番号１３２）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＧＱＴＹＰＹＴ（配列番号１３３）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＣＤ２８結合ドメインは、ＳＹＹＩＨ（配列番号１３４）を含むＣＤＲＨ１配列、ＣＩＹＰＧＮＶＮＴＮＹＮＥＫＦＫＤ（配列番号１３５）を含むＣＤＲＨ２配列及びＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶ（配列番号１３６）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはＣＤ８０／ＣＤ８６のエピトープに結合する。ＣＤ８０（Ｂ７−１、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｐ３３６８１、配列番号１３７とも称される）及びＣＤ８６（Ｂ７−２、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｐ４２０８１、配列番号１３８とも称される）は共に、Ｔ細胞活性化及び生存のための同時刺激シグナルを与える。特定の実施形態においては、ＣＤ８０／ＣＤ８６結合ドメイン（例えば、ｓｃＦＶ）は、米国特許第７，５３１，１７５号に記載されている１以上のモノクローナル抗体に由来する。特定の実施形態においては、ＣＤ８０／ＣＤ８６結合ドメインは、ＳＶＳＳＳＩＳＳＳＮＬＨ（配列番号１３９）を含むＣＤＲＬ１配列、ＧＴＳＮＬＡＳ（配列番号１４０）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＷＳＳＹＰＬＴ（配列番号１４１）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＣＤ８０／ＣＤ８６結合ドメインは、ＤＹＹＭＨ（配列番号１４２）を含むＣＤＲＨ１配列、ＷＩＤＰＥＮＧＮＴＬＹＤＰＫＦＱＧ（配列番号１４３）を含むＣＤＲＨ２配列及びＥＧＬＦＦＡＹ（配列番号１４４）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
活性化Ｔ細胞は４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）を発現する。Ｔ細胞は更に、ヘルパー細胞（ＣＤ４＋ Ｔ細胞）及び細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）（これは細胞溶解性Ｔ細胞を含む）に分類されうる。Ｔヘルパー細胞は、とりわけ、形質細胞へのＢ細胞の成熟並びに細胞傷害性Ｔ細胞及びマクロファージの活性化を含む免疫学的過程において他の白血球を補助する。これらの細胞は、それらの表面上でＣＤ４タンパク質を発現するため、ＣＤ４＋ Ｔ細胞としても公知である。ヘルパーＴ細胞は、それが、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上で発現されるＭＨＣクラスＩＩ分子によりペプチド抗原と共に提示されると、活性化される。それは、一旦活性化されると、急速に分裂し、活性免疫応答を調節又は補助するサイトカインと称される小さなタンパク質を分泌する。
特定の実施形態は、ＣＤ３、ＴＬＲ２若しくはＣＤ２８に結合することにより、並びに／又は４−１ＢＢ、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２００及び／若しくはＶＩＳＴＡに結合してＣＤ４ Ｔ細胞の抑制を遮断することにより、ＣＤ４ Ｔ細胞を活性化することを含みうる。
ＴＬＲ２（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｏ６０６０３、配列番号１４５）は細菌性リポタンパク質及び他の微生物細胞壁成分に対する自然免疫応答に関与する。特定の実施形態においては、ＴＬＲ２結合ドメインは抗ＴＬＲ２抗体に由来する。商業的に入手可能な抗ＴＬＲ２抗体には、抗ｈＴＬＲ２−ＩｇＡ及びｍＡｂ−ｈＴＬＲ２（共にＩｎｖｉｖｏｇｅｎから入手可能）が含まれる。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣは同時刺激受容体４−１ＢＢのエピトープに結合する。４−１ＢＢはＣＤ１３７又はＴＮＦＳＦ９（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｑ０７０１１、配列番号１４６）とも称され、Ｔ細胞同時刺激受容体である。特定の実施形態においては、４−１ＢＢ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、米国特許第９，３８２，３２８Ｂ２号に記載されているモノクローナル抗体に由来する。特定の実施形態においては、４−１ＢＢ結合ドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳ（配列番号１４７）を含むＣＤＲＬ１配列、ＡＳＮＲＡＴ（配列番号１４８）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＲＳＮＷＰＰＡＬＴ（配列番号１４９）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、４−１ＢＢ結合ドメインは、ＹＹＷＳ（配列番号１５０）を含むＣＤＲＨ１配列、ＩＮＨを含むＣＤＲＨ２配列及びをＹＧＰＧＮＹＤＷＹＦＤＬ（配列番号１５２）含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、４−１ＢＢ結合ドメインは、ＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨ（配列番号２６１）を含むＣＤＲＬ１配列、ＱＤＫＮＲＰＳ（配列番号２６２）を含むＣＤＲＬ２配列及びＡＴＹＴＧＦＧＳＬＡＶ（配列番号２６３）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、４−１ＢＢ結合ドメインは、ＧＹＳＦＳＴＹＷＩＳ（配列番号２６４）を含むＣＤＲＨ１配列、ＫＩＹＰＧＤＳＹＴＮＹＳＰＳ（配列番号２６５）を含むＣＤＲＨ２配列及びＧＹＧＩＦＤＹ（配列番号２６６）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）のエピトープに結合する。ＰＤ−１はＣＤ２７９（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｑ１５１１６、配列番号１５３）とも称され、Ｔ細胞免疫応答の調節に関与する抑制性細胞表面受容体である。特定の実施形態においては、ＰＤ−１結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、米国特許公開第２０１１／０２７１３５８号に記載されているモノクローナル抗体に由来する。特定の実施形態においては、ＰＤ−１結合ドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨ（配列番号１５４）を含むＣＤＲＬ１配列、ＦＧＳＮＬＥＳ（配列番号１５５）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＨＳＷＥＩＰＹＴ（配列番号１５６）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＰＤ−１結合ドメインは、ＳＳＷＩＨ（配列番号１５７）を含むＣＤＲＨ１配列、ＹＩＹＰＳＴＧＦＴＥＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号１５８）を含むＣＤＲＨ２配列及びＷＲＤＳＳＧＹＨＡＭＤＹ（配列番号１５９）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、ＰＤ−１結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、米国特許出願第２００９０２１７４０１Ａ１号に記載されているモノクローナル抗体に由来する。特定の実施形態では、ＰＤ−１結合ドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１６０）を含むＣＤＲＬ１配列、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号１６１）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＳＳＮＷＰＲＴ（配列番号１６２）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＰＤ−１結合ドメインは、ＮＳＧＭＨ（配列番号１６３）を含むＣＤＲＨ１配列、ＶＬＷＹＤＧＳＫＲＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６４）を含むＣＤＲＨ２配列及びＮＤＤＹ（配列番号１６５）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはリンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ３）のエピトープに結合する。ＬＡＧ３はＣＤ２２３（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｐ１８６２７、配列番号１６６）とも称され、ＨＬＡクラスＩＩ抗原に結合し、リンパ球の活性化に関与する。特定の実施形態においては、ＬＡＧ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＰＣＴ特許公開ＷＯ／２０１４／００８２１８に記載されているモノクローナル抗体に由来する。特定の実施形態においては、ＬＡＧ３結合ドメインは、ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＡ（配列番号１６７）を含むＣＤＲＬ１配列、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号１６８）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＲＳＮＷＰＬＴ（配列番号１６９）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＬＡＧ３結合ドメインは、ＤＹＹＷＮ（配列番号１７０）を含むＣＤＲＨ１配列、ＥＩＮＨＲＧＳＴＮＳＮＰＳＬＫＳ（配列番号１７１）を含むＣＤＲＨ２配列及びＧＹＳＤＹＥＹＮＷＦＤＰ（配列番号１７２）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはＴ細胞免疫グロブリンムチン受容体３（ＴＩＭ−３）のエピトープに結合する。ＴＩＭ−３はＨＡＶｃｒ−２又はＴＩＭＤ−３（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｑ９ＴＤＱ０；配列番号１７３）としても公知であり、自然免疫応答及び適応免疫応答において抑制的な役割を果たす細胞表面受容体である。特定の実施形態においては、ＴＩＭ−３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、米国特許公開第２０１５／０２１８２７４号に記載されているモノクローナル抗体に由来する。特定の実施形態においては、ＴＩＭ−３結合ドメインは、ＳＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬ（配列番号１７４）を含むＣＤＲＬ１配列、ＡＡＳを含むＣＤＲＬ２配列及びＳＲＫＤＰＳ（配列番号１７６）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＴＩＭ−３結合ドメインは、ＧＹＴＦＴＳＹ（配列番号１７７）を含むＣＤＲＨ１配列、ＹＰＧＮＧＤ（配列番号１７８）を含むＣＤＲＨ２配列及びＶＧＧＡＦＰＭＤＹ（配列番号１７９）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはＢ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）のエピトープに結合する。ＢＴＬＡはＣＤ２７２（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｑ７Ｚ６Ａ９、配列番号１８０）としても公知であり、リンパ球の免疫応答を抑制する抑制性受容体である。特定の実施形態においては、ＢＴＬＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、米国特許公開第２０１２／０２８８５００号に記載されている１以上のモノクローナル抗体に由来する。特定の実施形態においては、ＢＴＬＡ結合ドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１８１）を含むＣＤＲＬ１配列、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８２）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＹＧＳＳＩＴ（配列番号１８３）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＢＴＬＡ結合ドメインは、ＴＩＧＶＧＶＮ（配列番号１８４）を含むＣＤＲＨ１配列、ＬＩＹＷＤＤＤＫＲＹＳＰＳＬＫＲ（配列番号１８５）を含むＣＤＲＨ２配列及びＳＧＩＴＥＶＲＧＶＩＩＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号１８６）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、ＢＴＬＡ結合ドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１８７）を含むＣＤＲＬ１配列、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８８）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＹＧＳＳＰＰＩＴ（配列番号１８９）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＢＴＬＡ結合ドメインは、ＴＳＧＭＣＶＳ（配列番号１９０）を含むＣＤＲＨ１配列、ＬＩＤＷＤＤＶＫＹＹＳＳＳＬＫＴ（配列番号１９１）を含むＣＤＲＨ２配列及びＩＲＦＴＭＦＲＧＶＹＹＹＹＹＧＬＤＶ（配列番号１９２）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣは細胞傷害性Ｔリンパ球タンパク質５（ＣＴＬＡ−４）のエピトープに結合する。ＣＴＬＡ−４はＣＤ１５２（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｐ１６４１０、配列番号１９３）としても公知であり、Ｔ細胞応答の主要な負の調節因子である抑制性受容体である。特定の実施形態においては、ＣＴＬＡ−４結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、米国特許第６，９８４，７２０号に記載されているモノクローナル抗体に由来する。特定の実施形態においては、ＣＴＬＡ−４結合ドメインはＨｕ２６Ｂ抗体のＣＤＲを含む。特定の実施形態においては、ＣＴＬＡ−４結合ドメインは、ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＹＬＡ（配列番号１９４）を含むＣＤＲＬ１配列、ＧＡＦＳＲＡＴ（配列番号１９５）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＹＧＳＳＰＷＴ（配列番号１９６）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＣＴＬＡ−４結合ドメインは、ＳＹＴＭＨ（配列番号１９７）を含むＣＤＲＨ１配列、ＦＩＳＹＤＧＮＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１９８）を含むＣＤＲＨ２配列及びＴＧＷＬＧＰＦＤＹ（配列番号１９９）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、ＣＴＬＡ−４結合ドメインは、ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号２００）を含むＣＤＲＬ１配列、ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２０１）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＹＮＳＹＰＰＴ（配列番号２０２）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＣＴＬＡ−４結合ドメインは、ＳＹＧＭＨ（配列番号２０３）を含むＣＤＲＨ１配列、ＶＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２０４）を含むＣＤＲＨ２配列及びＡＰＮＹＩＧＡＦＤＶ（配列番号２０５）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、ＣＴＬＡ−４結合ドメインは、ＳＡＴＳＳＩＴＹＭＳ（配列番号２０６）を含むＣＤＲＬ１配列、ＤＴＳＮＬＡＳ（配列番号２０７）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＷＳＳＹＰＬＴ（配列番号２０８）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＣＴＬＡ−４結合ドメインは、ＳＹＧＶＹ（配列番号２０９）を含むＣＤＲＨ１配列、ＶＩＷＡＧＧＴＴＮＹＮＳＡＬＭＳ（配列番号２１０）を含むＣＤＲＨ２配列及びＧＰＰＨＡＭＭＫＲＧＹＡＭＤＹ（配列番号２１１）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。これらは、米国特許出願ＵＳ２００２００３９５８１Ａ１に記載されているＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはＣＤ２００のエピトープに結合する。ＣＤ２００（ｏｘ−２膜糖タンパク質としても公知である；ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｐ４１２１７、配列番号２１２）は、免疫細胞に抑制性シグナルを送達しうるタンパク質である。特定の実施形態においては、ＣＤ２００結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、米国特許公開第２０１３／０１８９２５８号に記載されている１以上のモノクローナル抗体に由来する。特定の実施形態においては、ＣＤ２００結合ドメインは、ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２１３）を含むＣＤＲＬ１配列、ＲＡＳＮＬＥＳ（配列番号２１４）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＳＮＥＤＰＲＴ（配列番号２１５）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＣＤ２００結合ドメインは、ＧＦＴＦＳＧＦＡＭＳ（配列番号２１６）を含むＣＤＲＨ１配列、ＳＩＳＳＧＧＴＴＹＹＬＤＳＶＫＧ（配列番号２１７）を含むＣＤＲＨ２配列及びＧＮＹＹＳＧＴＳＹＤＹ（配列番号２１８）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣは、Ｔ細胞活性化前駆体のＶ型免疫グロブリンドメイン含有抑制因子（ＶＩＳＴＡ；ＮＰ ０７１４３６．１；配列番号２１９）のエピトープに結合する。ＶＩＳＴＡに対する結合ドメインは、例えば、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ及びＡｂｃａｍから入手可能な抗体に由来しうる。特定の実施形態においては、ＶＩＳＴＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、米国特許出願第２０１７／００５１０６１号又は国際特許公開ＷＯ２０１５０９７５３６Ａ２に記載されている１以上のモノクローナル抗体に由来する。特定の実施形態においては、ＶＩＳＴＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＶＩＳＴＡに結合しＶＩＳＴＡシグナリングを抑制する抗体ＪＮＪ−６１６１０５８８に由来する。特定の実施形態においては、ＶＩＳＴＡ結合ドメインは、ＧＧＴＦＳＳＹ（配列番号２２０）を含むＣＤＲＬ１配列、ＩＩＰＩＦＧＴ（配列番号２２１）を含むＣＤＲＬ２配列及びＡＲＳＳＹＧＷ（配列番号２２２）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態においては、ＶＩＳＴＡ結合ドメインは、ＱＳＩＤＴＲ（配列番号２２３）を含むＣＤＲＨ１配列、ＳＡＳを含むＣＤＲＨ２配列及びＱＱＳＡＹＮＰ（配列番号２２５）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含む。
細胞傷害性Ｔ細胞は腫瘍細胞を破壊する。これらの細胞は、それらの表面にＣＤ８糖タンパク質を発現するため、ＣＤ８＋ Ｔ細胞としても公知である。これらの細胞は、身体のほぼ全ての細胞の表面上に存在するＭＨＣクラスＩに関連する抗原に結合することにより、それらの標的を認識する。特定の実施形態は、ＣＤ３、ＣＤ２８若しくは４−１ＢＢに結合することにより、及び／又はＰＤ−１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３若しくはＶＩＳＴＡに結合してＣＤ８ Ｔ細胞の抑制を遮断することにより、ＣＤ８ Ｔ細胞を活性化することを含みうる。
ＣＤ８上のエピトープに結合する結合ドメインを含む、本明細書に開示されている特定の実施形態。特定の実施形態においては、ＣＤ８結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）はＯＫＴ８抗体に由来する。例えば、特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ８ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＲＴＳＲＳＩＳＱＹＬＡ（配列番号２２６）を含むＣＤＲＬ１配列、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号２２７）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＨＮＥＮＰＬＴ（配列番号２２８）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態においては、グループにおける少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのＣＤ８ Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、ＧＦＮＩＫＤ（配列番号２２９）を含むＣＤＲＨ１配列、ＲＩＤＰＡＮＤＮＴ（配列番号２３０）を含むＣＤＲＨ２配列及びＧＹＧＹＹＶＦＤＨ（配列番号２３１）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖を含むヒト又はヒト化結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）である。これらはＯＫＴ抗体のＣＤＲ配列を表す。
特定の実施形態においては、結合ドメインは、関心のある標的エピトープに特異的なＶα−Ｃα、Ｖβ−Ｃβ、Ｖα−Ｖβペアを含む、又はＶα／β及びＣα／β鎖（例えば、Ｖα−Ｃα、Ｖβ−Ｃβ、Ｖα−Ｖβ）を含む一本鎖Ｔ細胞受容体（ｓｃＴＣＲ）である。特定の実施形態においては、Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは公知ＴＣＲ（例えば、高アフィニティＴＣＲ）のＶα、Ｖβ、Ｃα又はＣβに由来する又は基づくことが可能である。
特定の実施形態においては、Ｔ細胞活性化エピトープ結合ドメインは、公知ＴＣＲのＶα、Ｖβ、Ｃα又はＣβと比較した場合の１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の挿入、１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の欠失、１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換又は非保存的アミノ酸置換）又は前記変化の組合せを含む。挿入、欠失又は置換はＶα、Ｖβ、Ｃα又はＣβ領域（これらの領域のアミノ若しくはカルボキシ末端又は両端を含む）のどこに存在していてもよいが、ただし、各ＣＤＲは変化を含まないか、又は多くとも１つ、２つ若しくは３つの変化を含み、Ｖα、Ｖβ、Ｃα又はＣβ領域を含む結合ドメインは、野生型に類似したアフィニティでその標的に尚も特異的に結合しうる。
特定の実施形態においては、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞、Ｋ細胞及びキラー細胞としても公知である）はＳＭＩＴＥによる局所的活性化のために標的化される。ＮＫ細胞は、細胞膜を破壊する顆粒を放出することによりアポトーシス又は細胞溶解を誘導することが可能であり、サイトカインを分泌して他の免疫細胞をリクルートしうる。
ＮＫ細胞の表面上で発現される活性化タンパク質の例には、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ及び天然細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）ファミリーの幾つかのメンバーが含まれる。リガンド結合の際にＮＫ細胞を活性化するＮＣＲの例には、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０及びＤＮＡＭ−１が含まれる。
ＮＫ細胞受容体に結合し、ＮＫ細胞の活性化を誘導及び／又は増強する商業的に入手可能な抗体の例には、ＮＣＧ２Ｄに結合しそれを活性化する５Ｃ６及び１Ｄ１１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから入手可能）、ＫＩＲ２ＤＬ４に結合しそれを活性化するｍＡｂ ３３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）から入手可能）、ＮＫｐ４４に結合しそれを活性化するＰ４４−８（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）から入手可能）、ＣＤ８に結合しそれを活性化するＳＫ１、並びにＣＤ１６に結合しそれを活性化する３Ｇ８が含まれる。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣはＮＫ細胞抑制性受容体に結合し、それを遮断して、ＮＫ細胞活性化を増強しうる。結合及び遮断されうるＮＫ細胞抑制性受容体の例には、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＮＫＧ２Ａ及びＫＬＲＧ１が含まれる。特定の実施形態においては、ＮＫ細胞抑制性受容体ＫＩＲ２ＤＬ１及びＫＩＲ２ＤＬ２／３に結合し、それらを遮断する結合ドメインは、配列
Figure 2019532017
 の可変軽鎖領域、及び配列
Figure 2019532017
 の可変重鎖領域を含む。
追加的なＮＫ細胞活性化抗体はＷＯ／２００５／０００３１７２及び米国特許第９，４１５，１０４号に記載されている。
特定の実施形態においては、マクロファージはＳＭＩＴＥによる局所的活性化のために標的化される。マクロファージは、食作用として公知の過程で細胞、細胞片及び／又は異物を飲み込み消化しうる一種の白血球（又は白血球細胞）である。
ＢＳ−ＢＤＣグループは、マクロファージの表面上で発現されるタンパク質に結合するように設計されうる。マクロファージ（及びそれらの前駆体、単球）の表面上で発現される活性化タンパク質の例には、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ６４、ＣＤ６８、ＣＤ１１９、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＤ２０９、Ｆ４／８０、ＩＦＧＲ２ Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）１〜９、ＩＬ−４Ｒα及びＭＡＲＣＯが含まれる。マクロファージの表面上で発現されるタンパク質に結合する商業的に入手可能な抗体には、ＣＤ１１ｂに結合しそれを活性化するＭ１／７０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）から入手可能）、ＣＤ６８に結合しそれを活性化するＫＰ１（ＡＢＣＡＭ（登録商標），Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍから入手可能）、及びＣＤ１６３に結合しそれを活性化するａｂ８７０９９（ＡＢＣＡＭ（登録商標）から入手可能）が含まれる。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはＣＤ４０のエピトープに結合する。ＣＤ４０（又は腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｐ２５９４２、配列番号２３４）は、マクロファージにおいて活性化シグナルを伝達しうる受容体である。特定の実施形態においては、ＣＤ４０結合ドメインはＣＤ４０活性化抗体ＣＰ−８７０，８９３に由来する。
特定の実施形態においては、マクロファージ（及びそれらの前駆体、単球）により発現される抑制性タンパク質の例には、プログラム細胞死リガンド１及び２（ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）及びガレクチン９（Ｇａｌ−９）が含まれる。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはＰＤ−Ｌ１に結合し、それを抑制する。ＰＤ−Ｌ１（ＣＤ２７４又はＢ７−Ｈ１としても公知；ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｑ９ＮＺＱ７、配列番号２３５）はＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を抑制しうる。特定の実施形態においては、ＰＤ−Ｌ１結合ドメインは抗ＰＤ−Ｌ１抗体に由来しうる。ＰＤ−Ｌ１を遮断する商業的に入手可能な抗体の一例はニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）である。ＰＤ−Ｌ１に結合し、それを中和する中和抗体の一例はモノクローナル抗体７１２１３（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから入手可能）である。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはＰＤ−Ｌ２のエピトープに結合する。ＰＤ−Ｌ２（ＣＤ２７３としても公知；ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｑ９ＷＵＬ５、配列番号２３６）はＴＩＭ−３と相互作用し、調節性Ｔ細胞の増殖を誘導し、細胞傷害性Ｔ細胞のアポトーシスを誘導しうる。特定の実施形態においては、ＰＤ−Ｌ２結合ドメインは抗ＰＤ−Ｌ２抗体に由来する。商業的に入手可能なＰＤ−Ｌ２抗体の一例には、ＴＹ２５（Ａｂｃａｍから入手可能なａｂ２１１０７）が含まれる。
特定の実施形態においては、グループ内の少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣはＧａｌ−９（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｏ００１８２、配列番号２３７）のエピトープに結合する。特定の実施形態においては、Ｇａｌ−９結合ドメインは、ＴＩＭ−３への結合を遮断する抗Ｇａｌ−９抗体に由来しうる。ＴＩＭ−３結合を遮断する商業的に入手可能な抗Ｇａｌ−９抗体の一例は９Ｍ１−３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから入手可能）である。
特定の実施形態においては、ＳＭＩＴＥは病原体認識受容体（ＰＲＲ）を標的化しうる。ＰＲＲは、危険なシグナルを認識し、自然免疫応答を活性化及び／又は増強するタンパク質又はタンパク質複合体である。ＰＲＲの例には、グラム陰性菌を認識するＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体、真菌及び他の病原体上のマンノース部分を認識するデクチン（Ｄｅｃｔｉｎ）−１及びデクチン−２、グラム陽性菌を認識するＴＬＲ２／ＴＬＲ６又はＴＬＲ２／ＴＬＲ１ヘテロ二量体、フラジェリンを認識するＴＬＲ５、ならびにＤＮＡにおけるＣｐＧモチーフを認識するＴＬＲ９（ＣＤ２８９）が含まれる。特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣはＴＬＲ４／ＭＤ−２、デクチン−１、デクチン−２、ＴＲＬ２／ＴＬＲ６、ＴＬＲ２／ＴＬＲ１、ＴＬＲ５及び／又はＴＬＲ９に結合し、活性化しうる。
特定の実施形態においては、ＳＭＩＴＥは補体系を標的化しうる。補体系は、抗原結合抗体により誘導され補体タンパク質のシグナル伝達に関与して免疫認識及び抗体被覆抗原の排除をもたらす免疫経路を意味する。特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣは補体活性化抗体に結合しうる。
示されているとおり、特定の実施形態においては、本開示の結合ドメインＶＨ領域は、公知モノクローナル抗体のＶＨに由来又は基づくことが可能であり、公知モノクローナル抗体のＶＨと比較した場合の１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の挿入、１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の欠失、１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換又は非保存的アミノ酸置換）又は前記変化の組合せを含みうる。挿入、欠失又は置換はＶＨ領域（この領域のアミノ若しくはカルボキシ末端又は両端を含む）のどこに存在していてもよいが、ただし、各ＣＤＲは変化を含まないか、又は多くとも１つ、２つ若しくは３つの変化を含み、修飾ＶＨ領域を含む結合ドメインは、野生型結合ドメインに類似したアフィニティでその標的に尚も特異的に結合しうる。
特定の実施形態においては、本開示の結合ドメインにおけるＶＬ領域は、公知モノクローナル抗体のＶＬに由来又は基づくことが可能であり、公知モノクローナル抗体のＶＬと比較した場合の１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の挿入、１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の欠失、１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換又は非保存的アミノ酸置換）又は前記変化の組合せを含む。挿入、欠失又は置換はＶＬ領域（この領域のアミノ若しくはカルボキシ末端又は両端を含む）のどこに存在していてもよいが、ただし、各ＣＤＲは変化を含まないか、又は多くとも１つ、２つ若しくは３つの変化を含み、修飾ＶＬ領域を含む結合ドメインは、野生型結合ドメインに類似したアフィニティでその標的に尚も特異的に結合しうる。
特定の実施形態においては、結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）又は重鎖可変領域（ＶＨ）又は両方の既知アミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％又は１００％同一である配列を含む又は該配列であり、ここで、各ＣＤＲは、関心のある標的に特異的に結合するモノクローナル抗体又はそのフラグメント若しくは誘導体からの変化を含まないか、又は多くとも１つ、２つ若しくは３つの変化を含む。
特定の実施形態は、２つの異なるがん抗原エピトープ並びにＣＤ３及びＣＤ２８に結合するＢＳ−ＢＤＣグループを含む。特定の実施形態は、異なるがん抗原エピトープ並びにＣＤ３、ＣＤ２８及びＣＤ１３７（４−１ＢＢ）に結合するＢＳ−ＢＤＣグループを含む。特定の実施形態は、異なるがん抗原エピトープ、並びに（ｉ）ＣＤ３上の２つの異なるエピトープ及び（ｉｉ）ＣＤ２８に結合するＢＳ−ＢＤＣ基を含む。特定の実施形態は、異なるがん抗原エピトープ、並びに（ｉ）ＣＤ２８上の２つの異なるエピトープ及び（ｉｉ）ＣＤ３に結合するＢＳ−ＢＤＣグループを含む。
特定の実施形態は、ＲＯＲ１／ＣＤ３、ＲＯＲ１／ＣＤ２８、ＣＤ３３／ＣＤ３、ＣＤ１９／ＣＤ３、ＣＤ１２３／ＣＤ３、ＣＤ３３／ＣＴＬＡ−４、ＣＤ３３／ＣＤ２８、ＣＤ１２３／ＣＤ２８、及びＰＤ−Ｌ１／ＣＤ２８に結合するＢＳ−ＢＤＣを含む。特定の実施形態は、以下の表１に示されているとおり、Ｔ細胞活性化エピトープと組合されたがん抗原エピトープを使用しうる。
Figure 2019532017
この表及び本明細書の他の部分においては、ＲＯＲ１−ＡはＲ１１と同義に解釈されることが可能であり、ＲＯＲ１−Ｂは２Ａ２と同義に解釈されることが可能であり、ＲＯＲ１−ａはＲ１２と同義に解釈されることが可能である。Ｒ１２抗体は、Ｒ１１及び２Ａ２により結合されるエピトープとは異なる非重複性であるエピトープを標的化する。Ｒ１１及び２Ａ２は、異なる非競合性であるエピトープを標的化し、したがって、これらの２つはＲＯＲ−１に同時に結合しうる。
前記表におけるＲＯＲ１エピトープは、本明細書に開示されている他のがん抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＰＳＭＡ、メソテリン、ＣＤ１２３、ＰＤ−Ｌ１）由来のエピトープで置換されうる。特定の実施形態はＢＳ−ＢＤＣグループ内にＲＯＲ１／ＣＤ３及びＲＯＲ１／ＣＤ２８ ＢＳ−ＢＤＣを含む。特定の実施形態はＢＳ−ＢＤＣグループ内にＲＯＲ１／ＣＤ２８及びＣＤ３３／ＣＤ３ ＢＳ−ＢＤＣを含む。特定の実施形態はＢＳ−ＢＤＣグループ内にＣＤ３３／ＣＤ３及びＰＤ−Ｌ１／ＣＤ２８ ＢＳ−ＢＤＣを含む。特定の実施形態はＢＳ−ＢＤＣグループ内にＣＤ１９／ＣＤ３及びＰＤ−Ｌ１／ＣＤ２８ ＢＳ−ＢＤＣを含む。特定の実施形態はＢＳ−ＢＤＣグループ内にＣＤ１２３／ＣＤ２８及びＣＤ１２３／ＣＤ３ ＢＳ−ＢＤＣを含む。特定の実施形態はＢＳ−ＢＤＣグループ内にＣＤ３３／ＣＤ３及びＣＤ１２３／ＣＤ２８ ＢＳ−ＢＤＣを含む。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣの各グループは同一がん抗原上の少なくとも２つの異なるエピトープを標的化する。追加的なエピトープが標的化される場合、該追加的エピトープは同一がん抗原上に存在することが可能であり、又は異なるがん抗原上に存在することが可能である。
本明細書に記載されているＢＳ−ＢＤＣグループ内で使用されうる二重特異性Ｔ細胞結合抗体の特定の例には、とりわけ、ＭＤＴ００００９８（配列番号２３８；ｂＡｂ＿２Ａ２−ＣＤ２８−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ００００９９（配列番号２３９；ｂＡｂ＿２Ａ２−ＣＤ８−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００１００（配列番号２４０；ｂＡｂ＿Ｒ１１−ＣＤ３−Ｍｙｃ−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００３２７（配列番号２４１；ｂＡｂ＿Ｒ１１−ＣＤ３−Ｈｉｓ（ＭＤＴ０００１００の形態２））、ＭＤＴ０００３４６（配列番号２４２；ｂＡｂ＿Ｒ１１−ＣＤ２８−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００３２０（配列番号２４３；ｂＡｂ＿Ｒ１２−ＣＤ３−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００３４７（配列番号２４４；＿ｂＡｂ＿Ｒ１２−ＣＤ２８−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００３１９（配列番号２４５；＿ｂＡｂ＿２Ａ２−ＣＤ３−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００３５９（配列番号２４６；＿ｂＡｂ＿ＰＤＬ１−ＣＤ２８−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００４７９（配列番号２４７；＿ｓｃＦｖ＿ＣＤ２８＿ＴＧＮ１４１２−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００４８０（配列番号２４８；＿ｓｃＦｖ＿ＰＤＬ１＿Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００２４４（配列番号２４９；＿ｂＡｂ＿Ｂｌｉｎｃｙｔｏ−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００２４５（配列番号２５０；ｂＡｂ＿ＡＭＧ３３０−Ｈｉｓ）、ＭＤＴ０００４７０（配列番号２５１；＿ｂＡｂ＿Ｂｌｉｎｃｙｔｏ−ＣＤ２８−Ｈｉｓ）、ＲＯＲ１及び４−１ＢＢを標的化するＢＳ−ＢＤＣ（配列番号２５２；ｂＡｂ＿Ｒ１２−ＣＤ１３７−Ｈｉｓ）、ＷＯ２０１４／１６７０２２に記載されているＲＯＲ１／ＣＤ３二重特異性抗体、ＣＤ１９／ＣＤ３抗体（ブリナツモマブ）、ＵＳ ２０１６／０２０８００１に記載されているＣＤ１９／ＣＤ３抗体、並びに／又はＵＳ ２０１４／０３０２０３７及びＵＳ ２０１４／０３０８２８５に記載されているＨｅｒ２／ＣＤ３抗体が含まれる。
示されているとおり、ＢＳ−ＢＤＣの結合ドメインはリンカーを介して連結されうる。リンカーは、ＢＳ−ＢＤＣの結合ドメイン間のコンホメーション移動のための柔軟性及び空間を提供しうるアミノ酸配列である。任意の適切なリンカーが、使用されうる。リンカーの例は、Ｃｈｅｎら，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１３ Ｏｃｔ １５；６５（１０）：１３５７−１３６９において見出されうる。リンカーは、標的に対する所望の機能ドメイン提示に応じて、柔軟性、剛性又は半剛性でありうる。一般的に使用される柔軟性（可動性）リンカーには、Ｇｌｙ−Ｓｅｒリンカー、例えば、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１２０）、ＧＧＳＧＧＧＳＧＳＧ（配列番号１５１）及びＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１７５）が含まれる。追加的な例には、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２４）、ＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１０８）及びＧＧＳＧＧＳ（配列番号１１４）が含まれる。１以上の抗体ヒンジ領域及び／又は免疫グロブリン重鎖定常領域、例えばＣＨ３のみ又はＣＨ２ＣＨ３配列を含むリンカーも使用されうる。
幾つかの場合には、柔軟性リンカーは、個々の用途に必要な結合ドメインの距離又は配置を維持し得ない可能性がある。これらの場合には、剛性又は半剛性リンカーが有用でありうる。剛性又は半剛性リンカーの例には、プロリンに富むリンカーが含まれる。特定の実施形態においては、プロリンに富むリンカーは、偶然のみに基づいて予想されるものより多数のプロリン残基を有するペプチド配列である。特定の実施形態においては、プロリンに富むリンカーは、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４８％、少なくとも５０％又は少なくとも５１％のプロリン残基を有するものである。プロリンに富むリンカーの特定の例には、プロリンに富む唾液タンパク質（唾液Ｐｒ蛋白）（ＰＲＰ）の断片が含まれる。
特定の実施形態においては、本明細書に開示されているＢＳ−ＢＤＣは、Ｐｅｃｈｍａｎら，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２９４：Ｒ１２３４−Ｒ１２３９，２００８に記載されているようなダイダロス（Ｄａｅｄａｌｕｓ）発現系を使用して形成される。ダイダロス系は、ゲノムサイレンシングを低減又は予防し、デシグラムレベルの発現の安定性を維持するのを助けるために、導入ベクターにおける最小化遍在性クロマチンオープニングエレメントの含有を利用する。この系は、２９３ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅのような無血清適応ヒト懸濁細胞株の分泌経路を使用することによる他のタンパク質製造方法の、面倒で時間のかかる工程を回避しうる。最適化レンチウイルスベクターを使用して、７０ｋＤａまでのサイズの適切にフォールディングした翻訳後修飾エンドトキシン非含有タンパク質が、２０〜１００ｍｇ／ｌの収量で、通常の小規模（１００ｍｌ）の培養において得られうる。これらの収量においては、ほとんどのタンパク質は、構造的、生物物理学的又は治療的用途での使用に直接的に適した単一のサイズ排除クロマトグラフィー工程を用いて精製されうる。Ｂａｎｄａｒａｎａｙａｋｅら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２０１１（Ｎｏｖ）；３９（２１）。幾つかの場合には、本明細書に記載されている方法による製造の純度ゆえに、クロマトグラフィーによる精製は不要かもしれない。
特定の実施形態は、適切な調節配列に機能的に連結された１以上の目的タンパク質をコードする核酸配列を含むＤＮＡ構築物（例えば、キメラ遺伝子、発現カセット、発現ベクター、組換えベクターなど）を使用する。そのようなＤＮＡ構築物は、天然に存在するＤＮＡ分子ではなく、目的の選択されたタンパク質を発現させるためにＤＮＡを宿主細胞内に導入するのに有用である。
機能的に連結（された）は、コードされたタンパク質が発現されるようにＤＮＡ配列を連結すること（配列の順序、配列の配向及び種々の配列の相対的間隔を含む）を意味する。発現制御配列をコード配列に機能的に連結する方法は当技術分野においてよく知られている。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８２；及びＳａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９を参照されたい。
発現制御配列は、転写又は翻訳の制御に何らかの形で関与するＤＮＡ配列である。適切な発現制御配列並びにそれらを製造及び使用する方法は当技術分野においてよく知られている。発現制御配列は一般にプロモーターを含む。プロモーターは誘導性又は構成的でありうる。それは、天然に存在するものであることが可能であり、天然に存在する種々のプロモーターの一部分から構成されることが可能であり、又は部分的若しくは全体的に合成物であることが可能である。プロモーター設計のための指針は、プロモーター構造の研究、例えば、Ｈａｒｌｅｙ及びＲｅｙｎｏｌｄｓ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１５，２３４３−２３６１，１９８７の研究により示されている。また、転写開始位置に対するプロモーターの位置が最適化されうる。例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７６：７６０−７６４，１９７９を参照されたい。
プロモーターは１以上のエンハンサーエレメントを含むことが可能であり、又は１以上のエンハンサーエレメントを含むように修飾されうる。特定の実施形態においては、プロモーターは複数のエンハンサーエレメントを含む。エンハンサーエレメントを含むプロモーターは、それらを含まないプロモーターと比較して高いレベルの転写をもたらしうる。
効率的な発現のためには、コード配列は３’非翻訳配列に機能的に連結されうる。特定の実施形態においては、３’非翻訳配列は転写終結配列及びポリアデニル化配列を含みうる。３’非翻訳領域は、例えば、遺伝子の隣接領域から得られうる。
特定の実施形態では、５’非翻訳リーダー配列も使用されうる。５’非翻訳リーダー配列は、５’ＣＡＰ部位から翻訳開始コドンまで伸長するｍＲＮＡの一部である。
特定の実施形態においては、Ａｖｉｔａｇ（アビタグ）アミノ酸配列“ＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ”（配列番号１２６）をコードするヌクレオチド、及び６×ヒスチジンタグコード配列“ＨＨＨＨＨＨ（配列番号２６０）”を付加することにより、「ｈｉｓａｖｉ」タグが遺伝子のＮ末端又はＣ末端に付加されうる。Ａｖｉｔａｇアビディティータグは、タンパク質精製のためのビオチン−アビジン又はビオチン−ストレプトアビジンに基づく相互作用、ならびに抗ビオチン抗体を使用する免疫生物学的方法（例えば、免疫ブロット法又は免疫蛍光法）を可能にするためにビオチンリガーゼによりビオチン化されうる。６×ヒスチジンタグは、Ｎｉ−２＋アフィニティークロマトグラフィーを用いるタンパク質精製を可能にする。
本明細書に開示されているタンパク質をコードする核酸配列は、当業者により誘導されうる。核酸配列はまた、種々の配列多型、突然変異及び／又は配列変異体の１以上を含みる。特定の実施形態においては、配列多型、突然変異及び／又は配列変異体は、コードされたタンパク質の機能に影響を及ぼさない。配列はまた、天然配列の縮重コドン、又はコドン優先性を付与するために導入されうる配列を含みうる。
幾つかの態様においては、ＤＮＡ構築物は、真核細胞の核内に外来ＤＮＡを導入することを含む技術であるトランスフェクションにより導入されうる。幾つかの態様においては、タンパク質は一過性トランスフェクションにより合成されうる（ＤＮＡは真核細胞のゲノムに組込まれないが、遺伝子は２４〜９６時間発現される）。外来ＤＮＡを宿主細胞内に導入するためには種々の方法が使用可能であり、リン酸カルシウムによる方法、デンドリマーによる方法、リポソームによる方法及びカチオン性ポリマーの使用による方法を含む化学的手段により、トランスフェクションが達成されうる。トランスフェクションの非化学的方法には、エレクトロポレーション、ソノポレーション、光学的トランスフェクション、プロトプラスト融合、インパレフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）及び流体力学的運搬が含まれる。幾つかの実施形態においては、トランスフェクションは、遺伝子銃を含む、粒子に基づく方法により達成可能であり、この場合、ＤＮＡ構築物を不活性固体のナノ粒子に結合させ、ついでこれを標的細胞の核内に直接的に「射撃（ｓｈｏｔ）」する。粒子に基づく他のトランスフェクション方法には、磁石を利用するトランスフェクション及びインパレフェクションが含まれる。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣは、投与の利益をもたらすために修飾されうる。特定の実施形態においては、修飾ＢＳ−ＢＤＣは、１以上のアミノ酸が非アミノ酸成分で置換されているもの、又はアミノ酸が官能基にコンジュゲート化されている又は他の様態で官能基がアミノ酸に結合しているものを含む。修飾アミノ酸は、例えば、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分にコンジュゲート化されたアミノ酸、又は有機誘導体化物質にコンジュゲート化されたアミノ酸でありうる。アミノ酸は、例えば、組換え製造中に翻訳と同時に若しくは翻訳後に修飾されることが可能であり（例えば、哺乳類細胞における発現中のＮ−Ｘ−Ｓ／ＴモチーフにおけるＮ結合グリコシル化）、又は合成手段により修飾されうる。修飾アミノ酸は配列の内部又は配列の末端に存在しうる。修飾は亜硝酸化構築物をも含む。
ＰＥＧ化は、特に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー鎖がタンパク質のような他の分子に共有結合されるプロセスである。タンパク質をＰＥＧ化する幾つかの方法が文献に報告されている。例えば、タンパク質のＮ末端及びリシン残基の遊離アミン基をＰＥＧ化するために、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）−ＰＥＧが使用された。還元剤の存在下でタンパク質のアミノ末端をＰＥＧ化するために、アルデヒド基を含有するＰＥＧが使用されている。タンパク質中のシステイン残基の遊離チオール基を選択的にＰＥＧ化するために、マレイミド官能基を有するＰＥＧが使用されている。アセチル−フェニルアラニン残基の部位特異的ＰＥＧ化が行われうる。
ＰＥＧへのタンパク質の共有結合は、体内のタンパク質の半減期を延ばすための有用な方法であることが証明されている（Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ，Ａ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９８４，７：１７５−１８６；Ｈｅｒｓｈｆｉｅｌｄ，Ｍ．Ｓ．ら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９８７，３１６：５８９−５９６；及びＭｅｙｅｒｓ，Ｆ．Ｊ．ら，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１９９１，４９：３０７−３１３）。タンパク質へのＰＥＧの結合は、該分子を酵素分解から保護するだけでなく、身体からのそれらのクリアランス速度をも低下させる。タンパク質に結合したＰＥＧのサイズは、タンパク質の半減期に大きな影響を及ぼしている。クリアランスを減少させるＰＥＧ化の能力は、一般に、タンパク質に結合しているＰＥＧ基の数の関数ではなく、改変タンパク質の全分子量の関数である。通常、ＰＥＧが大きいほど、結合タンパク質のインビボ半減期は長くなる。また、ＰＥＧ化はタンパク質凝集を低減し（Ｓｕｚｕｋｉら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈ．Ａｃｔａ ｖｏｌ．７８８，ｐｇ．２４８（１９８４））、タンパク質の免疫原性を改変し（Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉら；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．ｖｏｌ．２５２ ｐｇ．３５８２（１９７７））、例えばＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１６２２１に記載されているとおり、タンパク質溶解度を増加させうる。
幾つかのサイズのＰＥＧが商業的に入手可能であり（Ｎｅｋｔａｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ Ｃａｔａｌｏｇ ２００５−２００６；及びＮＯＦ ＤＤＳ Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｖｅｒ ７．１）、それらは、目標循環半減期を有するタンパク質を製造するのに適している。種々の活性ＰＥＧが使用されており、それらには、ｍＰＥＧスクシンイミジルスクシナート、ｍＰＥＧスクシンイミジルカルボナート、及びＰＥＧアルデヒド、例えばｍＰＥＧ−プロピオンアルデヒドが含まれる。
公開データベースにより提供される配列情報を用いて、本明細書に開示されているシステム及び方法と共に使用されうる追加的な遺伝子及びタンパク質配列を特定することが可能である。
結合ドメイン配列及びコード遺伝子配列の考察に関して既に示されているとおり、本明細書に開示され及び参照されている配列の変異体も含まれる。タンパク質の変異体には、例えば、図４〜６に記載されている尺度においてタンパク質の機能に悪影響を及ぼさない１以上の保存的アミノ酸置換又は１以上の非保存的置換を有するものが含まれうる。「保存的置換」は、以下の保存的置換群のうちの１つに見出される置換を含む：群１：アラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）；群２：アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）；群３：アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）；群４：アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）；群５：イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、バリン（Ｖａｌ）；及び群６：フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、チロシン（Ｔｙｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）。
また、アミノ酸は、類似した機能又は化学構造若しくは組成（例えば、酸性、塩基性、脂肪族、芳香族、硫黄含有）により、保存的置換基に分類されうる。例えば、脂肪族群は、置換の目的では、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩｌｅを含みうる。互いに保存的置換と見なされるアミノ酸を含有する他の群は以下のものを含む：硫黄含有：Ｍｅｔ及びシステイン（Ｃｙｓ）；酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ及びＧｌｎ；小さな脂肪族、非極性又はわずかに極性の残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、及びＧｌｙ；極性負荷電残基及びそれらのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ及びＧｌｎ；極性正電荷残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ及びＬｙｓ；大きな脂肪族非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ及びＣｙｓ；並びに大きな芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ及びＴｒｐ。追加的な情報はＣｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙに見出される。
他の箇所に記載されているとおり、遺伝子配列の変異体は、統計的に有意な程度にはコード産物の機能に影響を及ぼさないコドン最適化変異体、配列多型、スプライス変異体及び／又は突然変異を含みうる。
本明細書に開示されているタンパク質及び核酸配列の変異体は、本明細書に記載又は開示されているタンパク質及び核酸配列に対して少なくとも７０％の配列同一性、８０％の配列同一性、８５％の配列、９０％の配列同一性、９５％の配列同一性、９６％の配列同一性、９７％の配列同一性、９８％の配列同一性又は９９％の配列同一性を有する配列をも含む。
「％の配列同一性（配列同一性の百分率）」は、配列を比較することにより決定される、２以上の配列間の関係を意味する。当技術分野においては、「同一性」は、一連の配列間のマッチ（一致）により決定される、タンパク質及び核酸配列間の配列関連性の度合をも意味する。「同一性」（「類似性」と称されることも多い）は、以下のものに記載されている方法（それらに限定されるものではない）を含む公知方法によって容易に計算されうる：Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編）Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．及びＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編）Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，ＮＪ（１９９４）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ，Ｇ．編）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；及びＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．及びＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編）Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９２）。同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列の間で最良のマッチを与えるように設計される。同一性及び類似性を決定するための方法は、公的に利用可能なコンピュータープログラムにおいて体系化されている。配列アラインメント及び同一性の割合の計算は、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥバイオインフォマティクスコンピューティングスイート（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）のＭｅｇａｌｉｇｎプログラムを使用して行われうる。また、配列の多重アラインメントは、デフォルトパラメーター（ＧＡＰ ＰＥＮＡＬＴＹ＝１０，ＧＡＰ ＬＥＮＧＴＨ ＰＥＮＡＬＴＹ＝１０）でＣｌｕｓｔａｌアラインメント法（Ｈｉｇｇｉｎｓ及びＳｈａｒｐ ＣＡＢＩＯＳ，５，１５１−１５３（１９８９））を使用して行われうる。関連プログラムには、ＧＣＧプログラム一式（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ ９．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）；ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）；ＤＮＡＳＴＡＲ（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）；及びＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを組み込んだＦＡＳＴＡプログラム（Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，［Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｓｙｍｐ．］（１９９４），Ｍｅｅｔｉｎｇ Ｄａｔｅ １９９２，１１１−２０．編者：Ｓｕｈａｉ，Ｓａｎｄｏｒ．出版社：Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）も含まれる。本開示の文脈においては、配列分析ソフトウェアが分析に使用される場合、分析の結果は、参照されるプログラムの「デフォルト値」に基づくと理解されるであろう。「デフォルト値」は、最初の初期化時にソフトウェアに最初にロードされた値又はパラメーターの任意の組合せを意味する。
ＢＳ−ＢＤＣは対象への投与のために単独で又は組合せて組成物へと製剤化（処方）されうる。特定の実施形態においては、組成物は、薬学的に許容される担体と共に製剤化された、本明細書に開示されている少なくとも２つのＢＳ−ＢＤＣを含む。
ＢＳ−ＢＤＣの塩及び／又はプロドラッグも使用されうる。
薬学的に許容される塩には、ＢＳ−ＢＤＣの活性を保持し、薬学的使用に許容される任意の塩が含まれる。薬学的に許容される塩は、酸、他の塩、又は酸若しくは塩に変換されるプロドラッグの投与の結果としてインビボで形成されうる任意の塩をも意味する。
適切な薬学的に許容される酸付加塩は無機酸又は有機酸から製造されうる。そのような無機酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸及びリン酸が挙げられる。適切な有機酸は、脂肪族、脂環式、芳香族、アリール脂肪族、複素環式、カルボン酸及びスルホン酸クラスの有機酸から選択されうる。
適切な薬学的に許容される塩基付加塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛から製造される金属塩、又はＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、リジン、アルギニン及びプロカインから製造される有機塩が含まれる。
プロドラッグは、投与後に、例えばＢＳ−ＢＤＣの開裂により又は生物学的に不安定な基の加水分解によって治療的に活性な化合物に変換される活性成分を含む。
特定の実施形態においては、組成物は、組成物の少なくとも０．１％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも１％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも１０％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも２０％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも３０％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも４０％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも５０％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも６０％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも７０％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも８０％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも９０％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、組成物の少なくとも９５％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗ、あるいは組成物の少なくとも９９％ ｗ／ｖ又はｗ／ｗのＢＳ−ＢＤＣを含む。
例示的な一般に使用される薬学的に許容される担体には、あらゆる吸収遅延剤、抗酸化剤、結合剤、緩衝剤、増量剤若しくは充填剤、キレート剤、コーティング、崩壊剤、分散媒体、ゲル、等張剤、潤滑剤、保存剤、塩、溶媒若しくは共溶媒、安定剤、界面活性剤、及び／又は運搬ビヒクルが含まれる。
例示的な抗酸化剤には、アスコルビン酸、メチオニン及びビタミンＥが含まれる。
例示的な緩衝剤には、シトラートバッファー、スクシナートバッファー、タルトラートバッファー、フマラートバッファー、グルコナートバッファー、オキサラートバッファー、ラクタートバッファー、アセタートバッファー、ホスファートバッファー、ヒスチジンバッファー及び／又はトリメチルアミン塩が含まれる。
例示的なキレート剤としては、ＥＤＴＡが挙げられる。
例示的な等張剤には、多価糖アルコール、例えば三価以上の糖アルコール、例えばグリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール又はマンニトールが含まれる。
例示的な保存剤には、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化ベンザルコニウム、塩化ヘキサメトニウム、アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール及び３−ペンタノールが含まれる。
安定剤は、増量剤から、ＢＳ−ＢＤＣを可溶化する又は変性若しくは容器壁への付着を防止するのを助ける添加剤までの機能を含みうる広範な範疇の賦形剤を意味する。典型的な安定剤には、多価糖アルコール；アミノ酸、例えばアルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸及びトレオニン；有機糖又は糖アルコール、例えばラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイニシトール、ガラクチトール、グリセロール及びシクリトール、例えばイノシトール；ＰＥＧ；アミノ酸ポリマー；硫黄含有還元剤、例えば尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、アルファ−モノチオグリセロール及びチオ硫酸ナトリウム；低分子量ポリペプチド（すなわち、１０残基未満）；タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；単糖類、例えばキシロース、マンノース、フルクトース及びグルコース；二糖類、例えばラクトース、マルトース及びスクロース；三糖類、例えばラフィノース；並びに多糖類、例えばデキストランが含まれうる。安定剤は、典型的には、治療剤の重量に対して０．１〜１０，０００重量部の範囲で存在する。
本明細書に開示されている組成物は、例えば注射、吸入、注入、灌流、洗浄又は摂取による投与用に製剤化されうる。本明細書に開示されている組成物は更に、静脈内、皮内、動脈内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、局所、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内、経口及び／又は皮下投与用に、より詳細には、静脈内、皮内、動脈内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内及び／又は皮下注射による投与用に製剤化されうる。
注射用には、組成物は、水溶液として、例えば、ハンクス液、リンガー液又は生理食塩水を含むバッファー緩衝液中で製剤化されうる。水溶液は、製剤化剤、例えば懸濁化剤、安定剤及び／又は分散剤を含みうる。あるいは、製剤は、適切なビヒクル、例えば発熱物質非含有無菌水で使用前に還元するための凍結乾燥形態及び／又は粉末形態でありうる。
経口投与には、組成物は錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などとして製剤化されうる。経口固形製剤、例えば散剤、カプセル剤及び錠剤の場合、適切な賦形剤には、結合剤（トラガカントガム、アラビアゴム、コーンスターチ、ゼラチン）、増量剤、例えば糖類、例えばラクトース、スクロース、マンニトール及びソルビトール；リン酸二カルシウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム；セルロース調製物、例えばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）；顆粒化剤；並びに結合剤が含まれる。所望により、崩壊剤、例えばコーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸、架橋ポリビニルピロリドン、寒天又はアルギン酸若しくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムが添加されうる。所望により、固形剤形は、標準的な技術を用いて、糖衣又は腸溶コーティングされうる。香味料、例えばペパーミント、ウィンターグリーンオイル、チェリーフレーバー、オレンジフレーバーなども使用されうる。
組成物はエアロゾルとして製剤化されうる。特定の実施形態においては、エアロゾルは、無水、液体又は乾燥粉末吸入器の一部として提供される。加圧パック又はネブライザーからのエアロゾルスプレーも、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切なガスと共に使用されうる。加圧エアロゾルの場合、投与単位は、定量を送達するための弁を設けることにより決定されうる。ＢＳ−ＢＤＣと適切な粉末基剤（例えば、ラクトース又はデンプン）との粉末混合物を含む、吸入器又は吹送器における使用のためのゼラチンのカプセル剤及びカートリッジも処方（製剤化）されうる。
組成物はデポー製剤としても製剤化されうる。デポー製剤は、適切なポリマー材料若しくは疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）又はイオン交換樹脂を使用して、あるいは難溶性誘導体、例えば難溶性塩として製剤化されうる。
また、組成物は、少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣグループを含む固体ポリマーの半透性マトリックスを利用する徐放系として製剤化されうる。種々の徐放性材料が確立されており、当業者によく知られている。徐放系は、それらの化学的性質に応じて、投与後に数週間から１００日以上にわたってＢＳ−ＢＤＣを放出しうる。デポー製剤は、注射；非経口注射；点眼；又は細い針を介した注射による軟組織、体腔若しくは時には血管内への移植により投与されうる。
デポー製剤は、所望のラクチド：グリコリド比、平均分子量、多分散性及び末端基化学のポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（カプロラクトン）及びポリ（ラクチド）−コ（グリコリド）（ＰＬＧ）を含む種々の生分解性ポリマーを含みうる。種々のグレードを使用して種々のポリマータイプを種々の比率で混合することにより、寄与するポリマーのそれぞれから取り入れられる特性が得られうる。
異なる溶媒（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、酢酸エチル、トリアセチン、Ｎ−メチルピロリドン、テトラヒドロフラン、フェノール又はそれらの組合せ）の使用は微粒子のサイズ及び構造を改変して、放出特性を調節しうる。他の有用な溶媒には、水、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、アセトン、メタノール、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、安息香酸エチル及び安息香酸ベンジルが含まれる。
例示的な放出修飾剤には、界面活性剤、洗剤、内相増粘剤、錯化剤、界面活性分子、共溶媒、キレート剤、安定剤、セルロースの誘導体、（ヒドロキシプロピル）メチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ＨＰＭＣアセタート、セルロースアセタート、プルロニック（例えば、Ｆ６８／Ｆ１２７）、ポリソルベート、Ｓｐａｎ（登録商標）（Ｃｒｏｄａ Ａｍｅｒｉｃａｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌａｗａｒｅ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、Ｂｒｉｊ（登録商標）（Ｃｒｏｄａ Ａｍｅｒｉｃａｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌａｗａｒｅ）、スクロースアセタートイソブチラート（ＳＡＩＢ）、塩及びバッファーが含まれうる。
ポリソルベート、ジオクチルスルホスクシナート、ポロキサマー、ＰＶＡを含む界面活性剤のような微粒子の外部相境界に分配する賦形剤はまた、粒子安定性及び侵食速度、水和及びチャネル構造、界面輸送並びに動力学を含む特性を、好ましい様態で改変しうる。
開示されている徐放性デポー製剤の追加的な加工は、トリス、シトラート又はヒスチジンのようなバッファー中、マンニトール、スクロース、トレハロース及びグリシンを含む安定化賦形剤を、ポリソルベート、ＰＶＡ及びジオクチルスルホスクシナートのような他の成分と共に利用しうる。元の懸濁液の類似サイズ及び性能特性に還元（再構成）される非常に低い水分の散剤（粉末）を製造するために、凍結乾燥サイクルも用いられうる。
本明細書に開示されている任意の組成物は、投与の利益を越える有意に有害なアレルギー性の又は他の有害な反応を引き起こさないものを含む任意の他の薬学的に許容される担体を有利に含みうる。例示的な薬学的に許容される担体及び製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０に開示されている。更に、製剤は、米国ＦＤＡ生物学的標準局（Ｕ．Ｓ．ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）及び／又は他の関連する外国の規制当局により要求される無菌性、発熱性、一般的安全性及び純度基準を満たすように製造されうる。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣ組成物には、免疫原性組成物が含まれる。免疫原性組成物は、対象において免疫応答を刺激する組成物を意味する。免疫応答は、例えばＴ細胞応答でありうる。Ｔ細胞応答は、例えば、ＩＬ−２のようなサイトカインの産生を測定することにより検出されうる。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣ組成物には、治療用組成物が含まれる。治療用組成物は、対象を治療する組成物を意味する。治療は、本明細書の他の箇所に記載されているとおり、対象の疾患又は症状の軽減により検出されうる。
キット。本明細書は、本明細書に記載されているＢＳ−ＢＤＣ及び／又は組成物の１以上を含む１以上の容器を含むキットをも開示する。そのような容器には、医薬品又は生物学的製品の製造、使用又は販売を規制する政府機関により規定された形式の注意書きが付随していてもよく、この注意書きは、ヒトへの投与のための製造、使用又は販売の、当局による承認を表す。特定の実施形態においては、キット内のＢＳ−ＢＤＣグループは、個々の対象の予想される疾患経過の評価に基づいて選択される。特定の実施形態においては、キット内のＢＳ−ＢＤＣは、対象の現在の病態の継続的な評価に基づいて個々の対象に関して更新される。
本明細書に開示されている方法は、対象（ヒト、獣医動物（イヌ、ネコ、爬虫類、鳥類など））、家畜（ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、ニワトリなど）及び研究動物（サル、ラット、マウス、魚類など）を、本明細書に開示されている組成物で治療することを含む。対象の治療は、治療的有効量を送達することを含む。治療的有効量には、有効量、予防的処置及び／又は治療的処置をもたらす量が含まれる。
「有効量」は、対象において所望の生理学的変化をもたらすのに必要な組成物の量である。例えば、有効量は免疫原性効果をもたらしうる。有効量は、しばしば、研究目的で投与される。本明細書に開示されている有効量は、がんの発生又は進行の評価に関連した動物モデル又はインビトロアッセイにおける統計的に有意な効果をもたらしうる。免疫原性組成物は有効量で提供されることが可能であり、この場合、有効量は免疫応答を刺激する。
「予防的処置」は、がんの徴候若しくは症状を示さず、又はがんの初期の徴候若しくは症状のみを示す対象に施される処置を含み、この場合、治療は、がんを更に進展させるリスクを低減又は減少させる目的で施される。したがって、予防的処置は、がんを予め防ぐ治療（処置）として機能する。特定の実施形態においては、予防的処置は、原発性がん腫瘍部位からの転移が生じるのを低減し、遅延させ、又は予防する。
「治療的処置」は、がんの症状又は徴候を示す対象に施される処置を含み、がんのそれらの徴候又は症状を軽減又は排除する目的で対象に施される。治療的処置は、がんの存在若しくは活性を低減、制御若しくは除去し、及び／又はがんの副作用を低減、制御若しくは除去しうる。
有効量としての機能、予防的処置又は治療的処置は相互に排他的ではなく、特定の実施形態においては、投与される用量は２以上の処置タイプを達成しうる。
特定の実施形態においては、治療的有効量は抗がん効果をもたらす。抗がん効果は、がん細胞数の減少、転移数の減少、腫瘍体積の減少、余命の延長、がん細胞における化学療法若しくは放射線感受性の誘発、がん細胞近傍の血管新生の抑制、がん細胞増殖の抑制、腫瘍成長の抑制、転移の予防若しくは低減、対象の寿命の延長、がん関連疼痛の軽減、及び／又は治療後のがんの再燃若しくは再発の低減を含む。
「腫瘍」は、細胞（新生細胞又は腫瘍細胞と称される）の異常増殖により形成される腫脹又は病変である。「腫瘍細胞」は、急速な無制御細胞増殖により増殖する異常細胞であって、新たな増殖を開始した刺激が停止した後も増殖し続ける異常細胞である。腫瘍は、正常組織との機能的協調及び構造的組織化の部分的又は完全な欠如を示し、通常、良性、前悪性又は悪性でありうる明瞭な組織塊を形成する。
投与の場合には、インビトロアッセイ及び／又は動物モデル研究からの結果に基づいて、治療的有効量（本明細書においては用量とも称される）が最初に推定されうる。そのような情報は、関心のある対象における有用な用量をより正確に決定するために用いられうる。特定の対象に投与される実際の投与量は、標的、体重、状態の重症度、がんの種類、がんの病期、過去の又は併用される治療的介入、対象の特発性及び投与経路を含む身体的及び生理学的要因のようなパラメータを考慮して、医師、獣医又は研究者により決定されうる。
有用な用量は、０．１〜５μｇ／ｋｇ又は０．５〜１μｇ／ｋｇの範囲でありうる。他の非限定的な例においては、用量は、１μｇ／ｋｇ、１５μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、５５μｇ／ｋｇ、７０μｇ／ｋｇ、９０μｇ／ｋｇ、１５０μｇ／ｋｇ、３５０μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ、７５０μｇ／ｋｇ、１０００μｇ／ｋｇ、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、又は０．５〜１ｍｇ／ｋｇを含みうる。他の非限定的な例においては、用量は、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上を含みうる。
治療的有効量は、治療レジメンの過程で単一又は複数の用量を（例えば、毎日、隔日、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、毎週、２週間ごと、３週間ごと、毎月、２か月ごと、３か月ごと、４か月ごと、５か月ごと、６か月ごと、７か月ごと、８か月ごと、９か月ごと、１０か月ごと、１１か月ごと又は毎年）投与することにより達成されうる。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣは、プログラム可能なポンプ（例えば、インスリンポンプ）のようなポンプにより投与されうる。特定の実施形態においては、例えばプログラムされたポンプを使用して、異なるＢＳ−ＢＤＣの段階的投与が達成されうる。
特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣは短い半減期（例えば、短いインビボ半減期）を有していて、該ＢＳ−ＢＤＣは、ポンプによる連続的注入を用いて投与される。特定の実施形態においては、５時間未満のインビボ半減期を有する任意のＢＳ−ＢＤＣが連続的注入により投与されうる。これとは対照的に、抗体は、それらのより大きなサイズ及びＦｃ部分ゆえに、数週間のインビボ半減期を有することが可能であり、Ｆｃ部分を含有する二重特異性形態も同様に、延長したインビボ半減期を有しうる。
特定の実施形態においては、自己免疫毒性を引き起こすことなくがんの再発を低減又は排除するために或る時間間隔で治療的有効量が投与される。
本明細書に記載されている医薬組成物は、注射、吸入、注入、灌流、洗浄又は摂取（これらに限定されるものではない）により投与されうる。投与経路には、静脈内、皮内、動脈内、非経口、鼻腔内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、局所、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内、経口、皮下及び／又は舌下投与、より詳細には、静脈内、皮内、動脈内、非経口、鼻腔内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、局所、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内、経口、皮下及び／又は舌下注射が含まれうる。
示されているとおり、特定の実施形態においては、ＢＳ−ＢＤＣの投与は対象の治療レジメンの経過中に経時的に進展する。ＢＳ−ＢＤＣのグループは、組合わされて多種多様なタイプのがんに対処可能であり、個々の対象に対して個別化されうる（例えば、Ａ＋Ｂ；Ａ＋Ｃ；Ａ＋Ｆ；Ｂ＋Ｆ；など）。同様に、ＢＳ−ＢＤＣグループの投与の非常に個別化された態様が存在しうる。その場合、新興（ｅｍｅｒｇｉｎｇ）クローンを特定するために、及びＢＳ−ＢＤＣのペアを選択して新興クローンを特異的に処理するために、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ディープシーケンシング、フローサイトメトリー又は免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて、対象サンプル（例えば、液体生検、標準生検）を評価する。この「カセット」アプローチは、耐性クローンの出現（新興出現）をモニターすること、及びＢＳ−ＢＤＣの新たな組合せによりそれらを迅速に処理することを含みうる。「新興クローン」は、クローンが由来するがん細胞の集団の優性遺伝子型とは異なる、１以上の対立遺伝子を有するがん細胞又はがん細胞のクローン集団を意味しうる。「薬物耐性クローン」は、１以上の抗がん薬に対する耐性を付与する新たな対立遺伝子を獲得したがん細胞又はがん細胞のクローン集団を意味しうる。患者のがんは、新たながんクローン及び／又は治療耐性クローンの出現に関して、例えば、患者由来のがんサンプルからのＤＮＡを配列決定することによりモニターされうる。
特定の実施形態においては、患者は腫瘍微小環境における免疫抑制及び／又はＴ細胞抑制に関してモニターされうる。微小環境における免疫抑制及び／又はＴ細胞抑制は、例えば、患者由来のサンプルにおけるサイトカインレベル及び／又はＴ細胞数を測定することによりモニターされうる。
特定の実施形態においては、本明細書に開示されている方法は腫瘍微小環境における免疫細胞を活性化することを含む。特定の実施形態においては、腫瘍微小環境における免疫細胞の活性化は腫瘍微小環境におけるＴ細胞抑制を低減又は逆転させることを含む。Ｔ細胞抑制は、例えば調節性Ｔ細胞により引き起こされうる、Ｔ細胞活性化の遮断又は低減を意味しうる。Ｔ細胞抑制を測定するための方法は、例えば、ＭｃＭｕｒｃｈｙ ＆ Ｌｅｖｉｎｇｓ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４２（１）：２７−３４において見出されうる。腫瘍微小環境におけるＴ細胞抑制の低減又は逆転は、ＣＤ２８結合性ＢＳ−ＢＤＣを、免疫細胞抑制因子の活性を低下させるＢＳ−ＢＤＣで置換することを含みうる。このアプローチは、腫瘍微小環境におけるＴ細胞が、継続的な活性化の後でＣＤ２８の発現を低減する場合に有益である。
例示的な実施形態
１．二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループ（群）であって、該グループにおける各ＢＳ−ＢＤＣが、該グループにおける別のＢＳ−ＢＤＣにより標的化されるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープとは異なるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープを標的化し、ただし、少なくとも２つの標的化がん抗原エピトープが同一がん抗原上に存在する、グループ。
２．前記の異なるがん抗原エピトープが非重複性及び／又は非反復性である、実施形態１記載のグループ。
３．前記の異なる標的化がん抗原エピトープの全てが同一がん抗原上に存在する、実施形態１又は２記載のグループ。
４．該同一がん抗原がＢＣＭＡ、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ１３３、ＥＲＢＢ２、葉酸受容体、ＨＥＲ２、ルイスＹ、Ｌ１−ＣＡＭ、メソテリン、ＭＵＣ−ＣＤ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＶ４０ Ｔ、ＷＴ−１、ＰＤ−Ｌ１又はＣＤ１２３である、実施形態３記載のグループ。
５．該同一がん抗原がＲＯＲ１であり、前記の異なる非重複性エピトープがＲＯＲ１−Ａ及びＲＯＲ１−Ｂにより標的化され、又はＲＯＲ１−ａ及びＲＯＲ１−Ｂにより標的化される、実施形態３記載のグループ。
６．ＢＳ−ＢＤＣグループが更に、異なるがん抗原上の異なるがん抗原エピトープを標的化する、実施形態１又は２記載のグループ。
７．前記の異なるがん抗原エピトープが
（ｉ）ＲＯＲ１及びＣＤ３３；
（ｉｉ）ＣＤ３３及びＰＤ−Ｌ１；
（ｉｉｉ）ＣＤ１９及びＰＤ−Ｌ１；
（ｉｖ）ＣＤ１２３及びＣＤ３３；
（ｖ）ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３及びＷＴ−１の２以上；
（ｖｉ）ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ＰＳＣＡ及びＳＶ４０ Ｔの２以上；
（ｖｉｉ）ＨＥＲ２、ＥＲＢＢ２及びＲＯＲ１の２以上；
（ｖｉｉｉ）Ｌ１−ＣＡＭ、ＭＵＣ−ＣＤ、葉酸受容体、ルイスＹ、ＲＯＲ１、メソテリン及びＷＴ−１の２以上；又は
（ｉｘ）メソテリン、ＣＥＡ、ＣＤ２４及びＲＯＲ１の２以上
に存在する、実施形態６記載のグループ。
８．前記の異なるがん抗原エピトープがＲＯＲ１、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣＤ１２３及び／又はＰＤ−Ｌ１上に存在する、実施形態６記載のグループ。
９．グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＲ１１、Ｒ１２、２Ａ２及び／又はＹ３１のＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜８のいずれか１項記載のグループ。
１０．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６及び配列番号１７から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜９のいずれか１項記載のグループ。
１１．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２及び配列番号２３から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜１０のいずれか１項記載のグループ。
１２．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜１１のいずれか１項記載のグループ。
１３．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜１２のいずれか１項記載のグループ。
１４．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０及び配列番号４１から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜１３のいずれか１項記載のグループ。
１５．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＦＭＣ６３、ＳＪ２５Ｃ１及び／又はＨＤ３７のＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜１４のいずれか１項記載のグループ。
１６．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜１５のいずれか１項記載のグループ。
１７．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜１６のいずれか１項記載のグループ。
１８．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜１７のいずれか１項記載のグループ。
１９．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）及び／又はハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）のＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜１８のいずれか１項記載のグループ。
２０．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜１９のいずれか１項記載のグループ。
２１．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７及び配列番号２５８から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜２０のいずれか１項記載のグループ。
２２．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜２１のいずれか１項記載のグループ。
２３．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜２２のいずれか１項記載のグループ。
２４．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜２３のいずれか１項記載のグループ。
２５．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、（ｉ）配列番号２６７、配列番号２６８、配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１及び配列番号２７２、又は（ｉｉ）配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７及び配列番号２５９から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４又は６〜２４のいずれか１項記載のグループ。
２６．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが全長ＣＤ３３（ＣＤ３３ＦＬ）を標的化する、又はエキソン２を欠くＣＤ３３のスプライス変異体（ＣＤ３３ΔＥ２）のみを標的化する、又は（ｉｉｉ）ＣＤ３３ＦＬであるかＣＤ３３ΔＥ２であるかにかかわらずＣＤ３３を標的化する、実施形態１〜４又は６〜２５のいずれか１項記載のグループ。
２７．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが５Ｄ１２、８５Ｆ、１２Ｂ１２、４Ｈ１０、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１Ｈ７又は１１Ｄ１１のＶＬ及びＶＨ鎖を含む、実施形態２６記載のグループ。
２８．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが５Ｄ１２、８５Ｆ、１２Ｂ１２、４Ｈ１０、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１Ｈ７、１１Ｄ１１又はＭ１９５のＶＬおよびＶＨ鎖からのＣＤＲ配列を含む、実施形態２５又は２６記載のグループ。
２９．免疫細胞がＴ細胞、ナチュラルキラー細胞又はマクロファージである、実施形態１〜２８のいずれか１項記載のグループ。
３０．前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが同一免疫細胞活性化因子上に存在する、実施形態１〜２９のいずれか１項記載のグループ。
３１．前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが、異なる免疫細胞活性化因子上に存在する、実施形態１〜２９のいずれか１項記載のグループ。
３２．前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが同一免疫細胞活性化因子上及び異なる免疫細胞活性化因子上に存在する、実施形態１〜２９のいずれか１項記載のグループ。
３３．免疫細胞活性化エピトープがＴ細胞上に存在する、実施形態１〜３２のいずれか１項記載のグループ。
３４．該同一免疫細胞活性化因子がＣＤ３であり、前記の異なるエピトープが、Ｔ細胞ＣＤ３二量体を含む異なるインバリアントタンパク質上に存在する、実施形態３２記載のグループ。
３５．前記の異なる免疫細胞活性化エピトープがＣＤ３及びＣＤ２８、ＣＤ３及びＣＤ８、又はＣＤ８及びＣＤ２８上に存在する、実施形態３１又は３２記載のグループ。
３６．前記の異なる免疫細胞活性化エピトープがＣＤ３、ＣＤ８及びＣＤ２８上に存在する、実施形態３１又は３２記載のグループ。
３７．前記の異なる免疫細胞活性化エピトープがＣＤ３、ＣＤ２８及びＣＤ１３７上に存在する、実施形態３１又は３２記載のグループ。
３８．前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが、（ｉ）ＣＤ３、（ｉｉ）ＣＤ３、及び（ｉｉｉ）ＣＤ２８上に存在する、実施形態３１又は３２記載のグループ。
３９．前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが、（ｉ）ＣＤ２８、（ｉｉ）ＣＤ２８、及び（ｉｉｉ）ＣＤ３上に存在する、実施形態３１又は３２記載のグループ。
４０．前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ８３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＬＦＡ−１、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ及びＢ７−Ｈ３の１以上に存在する、実施形態１〜３９のいずれか１項記載のグループ。
４１．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＯＫＴ３、ＯＫＴ８又は９Ｄ７のＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４０のいずれか１項記載のグループ。
４２．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＯＫＴ３、２０Ｇ６−Ｆ３、４Ｂ４−Ｄ７、４Ｅ７−Ｃ９及び／又は１８Ｆ５−Ｈ１０のＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４１のいずれか１項記載のグループ。
４３．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４及び配列番号１０５から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態４２記載のグループ。
４４．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１０７、ＫＶＳ、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１及び配列番号１１２から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態４２又は４３記載のグループ。
４５．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１１３、ＫＶＳ、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７及び配列番号１１８から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態４２〜４４のいずれか１項記載のグループ。
４６．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１１９、ＫＶＳ、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３及び配列番号１２４から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態４２〜４５のいずれか１項記載のグループ。
４７．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１２５、ＫＶＳ、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９及び配列番号１３０から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態４２〜４６のいずれか１項記載のグループ。
４８．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが９Ｄ７、９．３、ＫＯＬＴ−２、１５Ｅ８、２４８．２３．２、ＥＸ５．３Ｄ１０、５．１１Ａ１及び／又はＴＧＮ１４１２のＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜４７のいずれか１項記載のグループ。
４９．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５及び配列番号１３６から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５０記載のグループ。
５０．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＯＫＴ８を含む、実施形態１〜４９のいずれか１項記載のグループ。
５１．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２２６、配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０及び配列番号２３１から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５０記載のグループ。
５２．免疫細胞活性化エピトープがナチュラルキラー細胞上に存在する、実施形態１〜５１のいずれか１項記載のグループ。
５３．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが配列番号２３２の可変軽鎖領域及び配列番号２３３の可変重鎖領域を含む、実施形態５２記載のグループ。
５４．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが５Ｃ６、１Ｄ１１、ｍＡｂ ３３、Ｐ４４−８、ＳＫ１及び／又は３Ｇ８のＣＤＲ配列を含む、実施形態１〜５３のいずれか１項記載のグループ。
５５．免疫細胞活性化エピトープがマクロファージ上に存在する、実施形態１〜５４のいずれか１項記載のグループ。
５６．該グループにおけるのＢＳ−ＢＤＣがＭ１／７０、ＫＰ１及び／又はａｂ８７０９９のＣＤＲ配列を含む、実施形態５５記載のグループ。
５７．免疫細胞活性化エピトープの少なくとも１つが免疫細胞抑制因子上に存在する、実施形態１〜５６のいずれか１項記載のグループ。
５８．免疫細胞抑制因子が４−１ＢＢ、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２００及びＶＩＳＴＡの１以上を含む、実施形態５７記載のグループ。
５９．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、ＣＤＲ配列（ｉ）配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、ＩＮＨ及び配列番号１５２、又は（ｉｉ）配列番号２６１、配列番号２６２、配列番号２６３、配列番号２６４、配列番号２６５及び配列番号２６６を含む、実施形態５７又は５８記載のグループ。
６０．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８及び配列番号１５９から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜５９のいずれか１項記載のグループ。
６１．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４及び配列番号１６５から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜６０のいずれか１項記載のグループ。
６２．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０、配列番号１７１及び配列番号１７２から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜６１のいずれか１項記載のグループ。
６３．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１７４、ＡＡＳ、配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８及び配列番号１７９から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜６２のいずれか１項記載のグループ。
６４．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５及び配列番号１８６から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜６３のいずれか１項記載のグループ。
６５．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１８７、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１及び配列番号１９２から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜６４のいずれか１項記載のグループ。
６６．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜６５のいずれか１項記載のグループ。
６７．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜６６のいずれか１項記載のグループ。
６８．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜６７のいずれか１項記載のグループ。
６９．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２１３、配列番号２１４、配列番号２１５、配列番号２１６、配列番号２１７及び配列番号２１８から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜６８のいずれか１項記載のグループ。
７０．該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２２０、配列番号２２１、配列番号２２２、配列番号２２３、ＳＡＳ及び配列番号２２５から選択されるＣＤＲ配列を含む、実施形態５７〜６９のいずれか１項記載のグループ。
７１．該グループが２、３又は４個のＢＳ−ＢＤＣを含む、実施形態１〜７０のいずれか１項記載のグループ。
７２．二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが第１ ＲＯＲ１エピトープ及びＣＤ３を標的化し、該グループにおける第２ ＢＳ−ＢＤＣが第２ ＲＯＲ１エピトープ及びＣＤ２８を標的化する、グループ。
７３．二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＲＯＲ１エピトープ及びＣＤ２８を標的化し、該グループにおける第２ ＢＳ−ＢＤＣがＣＤ３３エピトープ及びＣＤ３を標的化する、グループ。
７４．二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＲＯＲ１エピトープ及びＣＤ３を標的化し、該グループにおける第２ ＢＳ−ＢＤＣがＣＤ３３エピトープ及びＣＤ２８を標的化する、グループ。
７５．二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＣＤ３３エピトープ及びＣＤ３を標的化し、該グループにおける第２ ＢＳ−ＢＤＣがＰＤ−Ｌ１エピトープ及びＣＤ２８を標的化する、グループ。
７６．二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＣＤ３３エピトープ及びＣＤ２８を標的化し、該グループにおける第２ ＢＳ−ＢＤＣがＰＤ−Ｌ１エピトープ及びＣＤ３を標的化する、グループ。
７７．二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＣＤ１９エピトープ及びＣＤ３を標的化し、該グループにおける第２ ＢＳ−ＢＤＣがＰＤ−Ｌ１エピトープ及びＣＤ２８を標的化する、グループ。
７８．二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＣＤ１９エピトープ及びＣＤ２８を標的化し、該グループにおける第２ ＢＳ−ＢＤＣがＰＤ−Ｌ１エピトープ及びＣＤ３を標的化する、グループ。
７９．二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＣＤ１２３エピトープ及びＣＤ３エピトープを標的化し、該グループにおける第２ ＢＳ−ＢＤＣがＣＤ１２３エピトープ及びＣＤ２８エピトープを標的化する、グループ。
８０．二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＣＤ３３エピトープ及びＣＤ３エピトープを標的化し、該グループにおける第２ ＢＳ−ＢＤＣがＣＤ１２３エピトープ及びＣＤ２８エピトープを標的化する、グループ。
８１．ＣＤ２８を標的化するＢＳ−ＢＤＣが、免疫細胞抑制因子エピトープを抑制するＢＳ−ＢＤＣで置換されている、実施形態７１〜８０のいずれか１項記載のグループ。
８２．免疫細胞抑制因子エピトープが４−１ＢＢ、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２００及び／又はＶＩＳＴＡ上に位置する、実施形態８１記載のグループ。
８３．該グループの投与が、腫瘍微小環境における免疫細胞抑制を低減又は逆転させる、実施形態８１記載のグループ。
８４．該グループの投与が、腫瘍微小環境におけるＴ細胞抑制を低減又は逆転させる、実施形態８１記載のグループ。
８５．配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１及び配列番号２５２から選択される少なくとも２つの二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）を含む、二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループ。
８６．配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１及び配列番号２５２から選択される３個の二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）を含む、二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループ。
８７．配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１及び配列番号２５２から選択される４個の二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）を含む、二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループ。
８８．ＢＳ−ＢＤＣグループがｓｃＦｖを含む、実施形態１〜８７のいずれか１項記載のグループ。
８９．ＢＳ−ＢＤＣグループが二重特異性抗体を含む、実施形態１〜８８のいずれか１項記載のグループ。
９０．実施形態１〜８９のいずれか１項記載のグループを含む組成物。
９１．実施形態９０記載の組成物の治療量を対象に投与し、それにより、がんの治療を要する対象においてがんを治療することを含む、がんの治療を要する対象におけるがんの治療方法。
９２．該治療が治療に対するがん細胞の耐性を克服する、実施形態９１記載の方法。
９３．対象のがんの変化に関して対象をモニターすることを含む、実施形態９１又は９２記載の方法。
９４．異なるグループのＢＳ−ＢＤＣと共に組成物を投与することを含む、実施形態９１〜９３のいずれか１項記載の方法。
９５．異なるグループのＢＳ−ＢＤＣと共に該組成物を投与することが該モニターの結果に基づく、実施形態９４記載の方法。
９６．該モニターの結果がクローンの出現を示す、実施形態９５記載の方法。
９７．該モニターの結果が治療耐性クローンの出現を示す、実施形態９５又は９６記載の方法。
９８．該モニターの結果が腫瘍微小環境における免疫抑制を示す、実施形態９５〜９７のいずれか１項記載の方法。
９９．該モニターの結果が腫瘍微小環境におけるＴ細胞抑制を示す、実施形態９５〜９８のいずれか１項記載の方法。
１００．治療に対するがん細胞の耐性を克服するための、実施形態１〜９９のいずれか１項記載のグループ、組成物又は方法の使用。
１０１．耐性を克服することが、腫瘍微小環境における免疫抑制を低減又は逆転させることに基づく、実施形態１００記載の使用。
１０２．耐性を克服することが、腫瘍微小環境におけるＴ細胞抑制を低減又は逆転させることに基づく、実施形態１００又は１０１記載の使用。
１０３．対象において免疫応答を刺激するための、前記実施形態のいずれか１項記載のグループ又は組成物の使用。
１０４．免疫応答の刺激を要する対象において免疫応答を刺激する方法であって、それを要する対象に実施形態９０記載の組成物の治療量を投与し、それにより、それを要する対象において免疫応答を刺激することを含む方法。
［実施例１］
新規「クリニック対応（ｃｌｉｎｉｃ ｒｅａｄｙ）」ＳＭＩＴＥ抗体治療薬の開発及びヒト化のための合理的な計算タンパク質設計アプローチを可能にするために、フレッドハッチンソンがん研究センター（Ｆｒｅｄ Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ）（ＦＨＣＲＣ）抗体開発施設及び分子設計治療コア（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｆａｃｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｓｉｇｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｃｏｒｅ）を用いる。この研究で使用するヒト材料の説明を以下に示す。
健常ドナーＴ細胞： 過去の二重特異性抗体研究において用いたのと同様にして、ＩＲＢにより承認された研究プロトコルに基づくＦＨＣＲＣ造血細胞処理コア（Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｃｏｒｅ）により、白血球アフェレーシスにより、健常成人ボランティアから、刺激されていない単核細胞を集める。Ｔ細胞を磁気細胞選別により富化させ、ついでアリコートとして非識別様態で凍結し、使用するまで液体窒素中で保存する。解凍した細胞アリコートを、がん細胞からの分離が可能となるようＣｅｌｌＢｕｅ Ｂｕｒｇｕｎｄｙで標識する。
二重特異性Ｔ細胞結合抗体の最大活性にはＴ細胞同時刺激が必要である： 急性白血病細胞系及び遺伝子操作された亜系を使用して、ＣＤ３３／ＣＤ３及びＣＤ１９／ＣＤ３抗体、ＡＭＧ３３０並びにブリナツモマブのインビトロ活性に対する抑制性（ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）及び活性化（ＣＤ８０及びＣＤ８６）Ｔ細胞リガンドの影響を試験した。つぎに、これらの実験を、急性白血病患者から得たサンプルを使用して繰返した。結果は、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２の発現は二重特異性Ｔ細胞結合抗体の細胞溶解活性を低下させるが、ＣＤ８０又はＣＤ８６の発現はそれらの活性を増強することを示した。これに一致して、同時刺激性Ｔ細胞受容体ＣＤ２８に対する活性化抗体との同時処理は急性白血病細胞株における二重特異性Ｔ細胞結合抗体誘導性細胞傷害性を有意に増強した。１２個のＡＭＬ患者検体において、ＣＤ２８の同時活性化はまた、初代白血病細胞におけるＡＭＧ３３０の活性を増強した（Ｐ＝０．０２３）。総合すると、これらの知見は、二重特異性Ｔ細胞結合抗体の最大活性にはＴ細胞補助受容体活性化が必要であることを示しており、Ｔ細胞への同時刺激シグナルの供与がこれらの物質に対する耐性を克服しうることを示唆している。他の研究者による過去の研究は、ＣＤ３×ＣＤ２８交差反応性二重特異性抗体が大きな治療ウィンドウをもたらしうることを示しており、この場合、腫瘍細胞依存性Ｔ細胞活性化のみが誘導され、全身性腫瘍細胞非依存性Ｔ細胞活性化は回避される。
特定の実施形態においては、ＳＭＩＴＥ抗体アプローチは２つの二重特異性Ｔ細胞結合抗体（すなわち、一方はＣＤ３（又はＣＤ８）に対するものであり、他方はＣＤ２８に対するものである）の併用を要する。最大活性化シグナルをＴ細胞に伝達するためには、両方の抗体が時間重複様態でＲＯＲ１に結合する必要がある。これらの研究のためには、３つのＲＯＲ１抗体からの十分に確認された公的に利用可能な配列が使用されうる。関心のある初期抗体セットにおいては、ＲＯＲ１−Ａ抗体（クローン：Ｒ１１）及びＲＯＲ１−α抗体（クローン：２Ａ２）は同一エピトープに結合し、ＲＯＲ１への結合に関して互いに競合する。ＲＯＲ１−Ｂ抗体（クローン：Ｒ１２）は非重複性近位エピトープに結合し、その他の２つの抗体のうちのいずれか一方と同時にＲＯＲ１に結合しうる。これら３つのＲＯＲ１抗体のｓｃＦｖ、並びにＣＤ３（クローン：ＯＫＴ３）、ＣＤ８（クローン：ＯＫＴ８）及びＣＤ２８（クローン：９Ｄ７）を認識する公的に入手可能な抗体のｓｃＦｖを使用して、柔軟性ＲＯＲ１指向性ＳＭＩＴＥ抗体プラットフォームを形成する交換可能な結合モジュールを含有するビルディングブロックとして、二重特異性Ｔ細胞結合抗体を作製する（例えば、表１を参照されたい）。精製用の６×ヒスチジンタグとＢｉｒ−Ａリガーゼによる特異的ビオチン化のためのａｖｉｔａｇとを含む「ｈｉｓａｖｉ」構築物として、全ての抗体を作製する。
ＲＯＲ１−Ａ、ＲＯＲ１−ａ及びＲＯＲ１−Ｂ抗体由来のＲＯＲ１を標的化する一本鎖構築物が、発現されるとおりに設計されている。Ｂｉａｃｏｒｅチップを使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析により実証されるとおり、これらの一本鎖構築物はＲＯＲ１抗原に対する頑強なアフィニティを保有する。ついで、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて、ＲＯＲ１−Ａ及びＲＯＲ１−Ｂに由来する一本鎖構築物はＲＯＲ１に同時に結合することが実証された。ついで、２つの二重特異性Ｔ細胞結合抗体分子を設計し、成功裏に発現させた。２リットルの調製物を使用して、ａＲＯＲ１−ａ／ａＣＤ２８及びａＲＯＲ１−Ｂ／ａＣＤ３構築物に関して、それぞれ、２２．４ｍｇ及び１４．４ｍｇの収量を得た。どちらの製造においても、凝集、分解又はミスフォールディングはほとんど観察されず、ａＲＯＲ１−Ｂ／ａＣＤ３構築物はＲＯＲ１に結合することが確認され、これは抗体配列から高品質二重特異性Ｔ細胞結合抗体への変換の成功を示している。
実験的アプローチ： 抗体産生： 既に記載されている特製ダイダロス（Ｄａｅｄａｌｕｓ）レンチウイルス導入系を使用して、全ての抗体を作製する。簡潔に説明すると、各構築物を、切断可能なＣ末端６×Ｈｉｓ−Ａｖｉタグと共に親発現プラスミド（ＩＲＥＳ−ＧＦＰを含む）内にクローニングし、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して、ＢｉｒＡビオチンリガーゼを安定に発現する２９３Ｔ細胞内に（ｐｓＰＡＸ２及びｐＭＤ２Ｇと共に）コトランスフェクトする。得られたレンチウイルスを使用して、懸濁適応２９３Ｆ細胞への導入を行い、ＧＦＰを使用してタンパク質発現をモニターする。分泌された抗体を導入の２週間後に回収し、ついで、通常のアフィニティクロマトグラフィーを使用して馴化培地から精製する。ついで、サイズ排除クロマトグラフィー及びＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して、個々の分子の安定性及び凝集傾向を判定する。
ＳＰＲバイオセンサー上に捕捉されたＲＯＲ１への個々の二重特異性Ｔ細胞結合抗体の結合を、既に記載されているとおりにＢｉａｃｏｒｅ Ｔ１００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で定量し（例えば、Ｆｉｎｔｏｎら，Ａｕｔｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｅｘｃｅｐｔｉｏｎａｌ ＣＤＲ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ（ｂｕｔ ｎｏｔ ｕｎｕｓｕａｌ ｐｏｌｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）ｈｉｎｄｅｒ ｅｌｉｃｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉ−ＨＩＶ ａｎｔｉｂｏｄｙ ４Ｅ１０．ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ．２０１３；９（９）：ｅ１００３６３９、及びＦｉｎｔｏｎら，Ｏｎｔｏｇｅｎｙ ｏｆ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｂｒｏａｄｌｙ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉ−ＨＩＶ ａｎｔｉｂｏｄｙ ４Ｅ１０．ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ．２０１４；１０（９）：ｅ１００４４０３を参照されたい）、前記で要約されているとおりに、初期ＲＯＲ１ ｓｃＦｖに関して成功裏に行う。二重特異性Ｔ細胞結合抗体とＣＤ３、ＣＤ８又はＣＤ２８との間のＳＰＲ相互作用分析を可能にするための試薬は現在入手可能でないため、抗Ｈｉｓ抗体と共に適切な標的抗原陽性／陰性細胞株を使用して、フローサイトメトリーに基づくアッセイを用いてＴ細胞への抗体分子の結合を測定する。
全ての二重特異性Ｔ細胞結合抗体の細胞溶解特性を、他の二重特異性Ｔ細胞結合抗体を特徴づけるために成功裏に用いられている比較インビトロアッセイにおいて決定する。ＲＯＲ１＋ 初代腫瘍細胞（ＪｅＫｏ）及びトランスフェクト化細胞（Ｋ５６２／ＲＯＲ１）がこれらの研究に利用可能であり、必要に応じて、追加的な細胞株の作製を可能にするＲＯＲ１発現構築物も利用可能である。適切なＲＯＲ１−細胞（例えば、親Ｋ５６２細胞又はＭＫＮ４５細胞）は陰性対照として有用である。ＲＯＲ１＋又はＲＯＲ１− 細胞株を、種々のＥ：Ｔ細胞比で添加された健常ドナーＴの存在下又は非存在下、種々の濃度の個々の二重特異性Ｔ細胞結合抗体を含む２２５μＬの適切な培地において、５〜１０，０００細胞／ウェルで９６ウェル丸底プレート内でインキュベートする。４８時間後、非生存可能細胞を検出するために４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）を使用して、細胞数及び薬物誘発細胞傷害性を、ＬＳＲＩＩサイトメーターを使用して決定する。健常ドナーＴ細胞を添加する実験においては、前方／側方散乱特性及びＣｅｌｌＶｕｅブルゴーニュ色素に関する陰性度により、がん細胞を特定する。
得られたＢＳ−ＢＤＣグループ、特に、ＣＤ３に対するものは、単独で使用された場合に強力な細胞溶解特性を有する。しかし、予備的な知見に基づけば、それらがＴ細胞同時刺激シグナル伝達をも活性化するようにそれらをグループとして使用する場合に、二重特異性Ｔ細胞結合抗体の有効性が増強されうると予想される。ＣＤ３及びＣＤ２８指向性抗体の組合せが最良の応答をもたらすと予想されるが、このモジュラー系は、先験的に決定された分子セットに探索を限定することなく、最良の抗体の組合せを経験的に決定することを可能にする。これらの二重特異性Ｔ細胞結合抗体グループは、（１つ又は２つのＴ細胞抗原を標的化すると同時に）２つの非重複性ＲＯＲ１エピトープを同時に標的化することが、単一ＲＯＲ１エピトープを標的化することと比較した場合の利点をもたらすことを示すのにも有用である。最も好ましい生物物理学的及び細胞溶解的特性を有する抗体グループを特定する。次に、選択した抗体グループをヒト化する。現在の臨床におけるほとんどの抗体はマウス抗体のヒト化形態である。二重特異性Ｔ細胞結合分子のマウス形態は有用性を有しうるが、免疫原性が臨床開発における欠点となりうる。ヒト化は、中和抗体の生成を最小限にするための一般に認められている技術であるため、この工程はそれらの臨床開発に必須であると考えられており、したがって、候補分子開発の可能な限り早い段階に組み込まれるであろう。
実験的アプローチ： 二重特異性Ｔ細胞結合抗体のグループを、Ｔ細胞抗原（例えば、ＣＤ３及びＣＤ２８又はＣＤ８及びＣＤ２８）に対する特異性及び非重複性ＲＯＲ１エピトープ認識（例えば、ＲＯＲ１−Ａ及びＲＯＲ１−Ｂ又はＲＯＲ１−ａ及びＲＯＲ１−Ｂ）に基づいて合理的に選択した。潜在的に関心が持たれるこれらのグループに加えて、ＳＭＩＴＥ抗体としてはそれほど適していないと予想される少数のグループ（例えば、ＲＯＲ１−Ａ及びＲＯＲ１−ａ、又はＣＤ３及びＣＤ８）も試験する。次に、これらの抗体グループを標的抗原結合の分析及び薬物誘発性細胞傷害性の決定に付す。単独で使用される個々の抗体は比較分析に役立つ。また、ＲＯＲ１発現細胞の存在下でＳＭＩＴＥ細胞抗体構築物がＴ細胞サイトカイン放出を誘発する能力をＥＬＩＳＡ及び細胞内フローサイトメトリーによる共培養実験において評価する。ついで、抗体グループを生物物理学的特性及び細胞溶解特性に基づいてランク付けし、最も高い関心が持たれるグループを、ＦＨＣＲＣコア施設において常套的に利用可能な労働集約的な標準的な方法を用いて抗体ヒト化に付す。このアプローチは主に、多数のマウス・バーニアゾーン（ｖｅｒｎｉｅｒ ｚｏｎｅ）残基が必要だと判断された場合に、表面残基に焦点を絞って、結合を保持させるために必要に応じてマウスに戻されるバーニアゾーン残基の突然変異での相補性決定領域（ＣＤＲ）グラフティングに基づくものである。分子治療コア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｃｏｒｅ）は、多数の候補分子の作製に適した２４ウェルのロボットトランスダクション及び発現系を有する。
個別に使用した場合より良好な細胞溶解特性を併用時に示すＢＳ−ＢＤＣのグループを特定する。しかし、２つの二重特異性Ｔ細胞結合抗体の同時結合は少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣのリンカー長の調節を要すると考えられうる。ロボット発現施設の使用は、必要に応じて、リンカー設計の数回の反復を可能にする。
ヒト化ＲＯＲ１指向性抗体のグループを作製して、リード分子を特定し、ついで、それを（例えば、大型動物における毒性に関して）より広範な前臨床試験において試験し、最終的に臨床に移すことが可能である。
関心のある構築物を、血液腫瘍細胞モデル（ＪｅＫｏ）及び固形腫瘍細胞モデル（ＭＤＡ−ＭＢ２３１）に相当するヒトＴ細胞及びホタルルシフェラーゼ発現ＲＯＲ１＋ 腫瘍細胞（ＪｅＫｏ及びＭＤＡ−ＭＢ２３１）を移植したＮＳＧマウスにおいて抗腫瘍活性をもたらすそれらの能力に関して試験する。関心のある抗体の血清半減期を決定するための研究のために、ＮＳＧマウスも使用する。これらの研究においては、血液を安楽死時の心臓穿刺により採取し、質量分析又はシンチレーション計数により分析する。これらの研究は、更なる試験に使用されうるリード候補ヒト化抗体二重特異性Ｔ細胞結合分子を特定する。
［実施例２］
図３Ａ及び３Ｂは、ＣＤ２８指向性二重特異性抗体でのＴ細胞同時活性化が標的抗原陽性がん細胞の存在に厳密に依存することを示している。これらの実験では、ＲＯＲ１陰性親Ｋ５６２細胞又はＲＯＲ１発現Ｋ５６２細胞を、示されているとおりにモノクローナルＣＤ２８又はＲＯＲ１／ＣＤ２８抗体の存在下又は非存在下、１：１のＥ：Ｔ比で、健常ドナーＴ細胞と共にＣＤ３抗体（クローンＯＫＴ３）でコートされたウェル内でインキュベートした。４８時間後、ＣＤ６９及びＣＤ２５の細胞表面発現の測定によるフローサイトメトリーによりＴ細胞活性化を定量化した。Ｔ細胞活性化は、活性化ＣＤ３抗体が存在する場合に、ほぼ独占的に見られた。ＲＯＲ１陰性がん細胞の存在下では、Ｔ細胞同時活性化は活性化ＣＤ２８モノクローナル抗体では可能であったが、ＲＯＲ１／ＣＤ２８抗体ではそうではなかった。一方、ＲＯＲ１陽性がん細胞の存在下では、Ｔ細胞共活性化はモノクローナルＣＤ２８抗体及びＲＯＲ１／ＣＤ２８抗体の両方で可能であった。総合すると、これらのデータは、モノクローナルＣＤ２８抗体を使用した場合のがん細胞標的（「非特異的」）Ｔ細胞活性化の見解に一致しており、一方、ＣＤ２８指向性二重特異性Ｔ細胞結合抗体でのＴ細胞同時活性化は、モノクローナルＣＤ２８抗体で見られるものと同等に効率的であったが、標的抗原陽性がん細胞の存在に厳密に依存していた。
図４Ａ〜４Ｄは、ＣＤ２８指向性二重特異性抗体でのＴ細胞同時活性化がＲＯＲ１／ＣＤ３抗体誘導性細胞傷害性を増強することを示している。ＲＯＲ１を発現するように強制されたＫ５６２細胞（Ｋ５６２／ＲＯＲ１）を、示されているとおりの種々の濃度のＲＯＲ１／ＣＤ２８抗体ＭＤＴ３４７（ＲＯＲ１抗体クローンＲ１２からの可変ドメインを含む）又はモノクローナルＣＤ２８抗体（クローンＣＤ２８．２）（４Ｂ、４Ｄ）を伴って又は伴わずに、ＲＯＲ１／ＣＤ３抗体ＭＤＴ３１９（ＲＯＲ１抗体クローン２Ａ２からの可変ドメインを含む）（４Ａ、４Ｂ）又はＲＯＲ１／ＣＤ３抗体ＭＤＴ３４０（非交差反応性ＲＯＲ１抗体クローンＲ１２からの可変ドメインを含む）（４Ｃ、４Ｄ）の存在下、１：１のＥ：Ｔ比で健常ドナーＴ細胞と共にインキュベートした。４８時間後、細胞数及び薬物誘発性細胞傷害性を決定した。ＲＯＲ１／ＣＤ３抗体は共に、ＲＯＲ１導入Ｋ５６２細胞において用量依存的な細胞傷害性を引き起こす。この細胞傷害性は、モノクローナルＣＤ２８抗体又はＲＯＲ１／ＣＤ２８抗体のいずれかでの同時処理によって有意に増強されうる。この増強効果の大きさはモノクローナルＣＤ２８抗体とＲＯＲ１／ＣＤ２８抗体とにおいて同等である。
図５は、第２のがん細胞抗原を標的化するＣＤ２８指向性二重特異性抗体でのＴ細胞同時活性化が治療用二重特異性Ｔ細胞結合抗体の抗がん活性を増強することを示している。ＲＯＲ１を発現することを強制されたＣＤ３３ｄｉｍ＋ Ｋ５６２細胞（Ｋ５６２／ＲＯＲ１）を、示されているとおりに種々の濃度のＲＯＲ１／ＣＤ２８抗体（ＭＤＴ３４７）を伴って又は伴わずに、ＣＤ３３／ＣＤ３抗体の存在下、１：１のＥ：Ｔ比で健常ドナーＴ細胞と共にインキュベートした。４８時間後、細胞数及び薬物誘発性細胞傷害性を決定した。低レベルのＣＤ３３のみを発現するこれらのＫ５６２細胞において、ＣＤ３３／ＣＤ３抗体は、限られた単剤活性を有する。ＲＯＲ１を標的化しＣＤ２８を同時活性化する第２抗体との組合せはＣＤ３３／ＣＤ３抗体と用量依存的に相乗作用をもたらし、薬物誘発性細胞傷害性を実質的に増強する。
図６Ａ〜６Ｃは、ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ２８抗体が二重特異性抗体に対するＰＤ−Ｌ１媒介耐性を克服しうることを示している。親ＣＤ３３＋ ＴＦ−１細胞（６Ａ）、ＣＤ１９＋ ＲＣＶ−ＡＣＶ細胞（６Ｂ）又はＣＤ１９＋ ＲＥＨ細胞（６Ｃ）、及びＰＤ−Ｌ１を過剰発現する対応亜系を、示されているとおりにＰＤ−Ｌ１／ＣＤ２８抗体（ＭＤＴ３５９）を伴って又は伴わずに、適切な場合にはＣＤ３３／ＣＤ３又はＣＤ１９／ＣＤ３抗体の存在下、健常ドナーＴ細胞と共にＥ：Ｔの比でインキュベートした。４８時間後、細胞数及び薬物誘発性細胞傷害性を決定した。既に示されているとおり（Ｌａｓｚｌｏら，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ ２０１５）、ＰＤ−Ｌ１の過剰発現は二重特異性抗体誘導性細胞傷害性に対する白血病細胞の耐性の類縁事象を招く。ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ２８抗体はこの耐性を完全に克服しうる。
リード候補抗体が特定されたら、前臨床安全性及び初期ヒト臨床試験のための臨床等級の抗体の大規模製造を開始する。現在のグッド・マニュファクチャリング・プロセシーズ（Ｇｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）（ｃＧＭＰ）研究施設としてのＦＨＣＲＣの生物製剤製造施設（Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｆａｃｉｌｉｔｙ）はフェーズ１／２試験用の検証済みの生物製剤を製造可能であることに注目することが重要である。例えば、ＯＫＴ３抗体に由来するＣＤ３に対するｓｃＦｖは、ブリナツモマブにおいて使用されているものと同じであり、一方、ｓｃＦｖ配列から誘導されているＣＤ２８抗体はインビボでＴ細胞を活性化することが実証されている。
統計的な考慮： 主として、ペア分析に関する標準的な記述統計量を用い、これは生物統計学者と協議して行われる。
当業者に理解されるとおり、本明細書に開示されている各実施形態は、その特定の記載されている要素、工程、成分又は構成部分を含む、それらから本質的になる、又はそれらからなることが可能である。したがって、「含む」又は「含み」なる語は、「含む、からなる、又はから本質的になる」を表すと解釈されるべきである。「含む」なる移行句は、限定的なものではなく包含することを意味し、特定されていない要素、工程、成分又は構成部分を、たとえ大量であっても、包含することを可能にする。「からなる」なる移行句は、特定されていない任意の要素、工程、成分又は構成部分を除外する。「から本質的になる」なる移行句は、実施形態の範囲を、特定されている要素、工程、成分又は構成部分、及び該実施形態に実質的に影響を及ぼさないものに限定する。実質的効果はがん細胞へのＢＳ−ＢＤＣグループの結合の後でＴ細胞活性化における統計的に有意な減少を引き起こすであろう。
特に示されていない限り、本明細書及び特許請求の範囲において用いられている成分の量、特性、例えば分子量、反応条件などを表す全ての数は、全ての場合において、「約」なる語により修飾されていると理解されるべきである。したがって、特に断られていない限り、本明細書及び特許請求の範囲に記載されている数的パラメーターは、本発明により得られることが求められる所望の特性に応じて変動しうる近似値である。少なくとも、そして均等論の適用を特許請求の範囲に限定する試みとしてではなく、各数的パラメーターは、少なくとも、示されている有効桁数を考慮して、そして通常の丸め技法を適用することにより解釈されるべきである。更なる明確さが要求される場合、「約」なる語は、表示されている数値又は範囲と共に用いられる場合に当業者によって合理的にそれに帰される意味を有し、すなわち、表示値又は範囲より幾分多い又は幾分少ないことを示し、表示値の±２０％、表示値の±１９％、表示値の±１８％、表示値の±１７％、表示値の±１６％、表示値の±１５％、表示値の±１４％、表示値の±１３％、表示値の±１２％、表示値の±１１％、表示値の±１０％、表示値の±９％、表示値の±８％、表示値の±７％、表示値の±６％、表示値の±５％、表示値の±４％、表示値の±３％、表示値の±２％、又は表示値の±１％以内を示す。
本発明の広範な範囲を記載する数的範囲及びパラメータは近似値であるにもかかわらず、特定の実施例に記載されている数値は可能な限り正確に示されている。しかし、いずれの数値も、それらのそれぞれの試験測定値において見出される標準偏差から必然的に生じる或る誤差を本質的に含む。
本発明を説明する文脈において（特に、以下の特許請求の範囲の文脈において）用いられる単数形は、本明細書に特に示されていない限り又は文脈に明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方を含むと解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、該範囲内に含まれるそれぞれの別々の値を個々に指す簡潔な方法として機能することを単に意図している。本明細書に特に示されていない限り、各個の値は、本明細書において個別に列挙されている場合と同様に、本明細書に組み入れられる。本明細書に記載されている全ての方法は、本明細書に特に示されていない限り又は文脈に明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施されうる。本明細書に記載されている全ての例又は例示的な用語（例えば、「のような」）の使用は、単に本発明をより明瞭にすることを意図しており、別に特許請求されている本発明の範囲を限定しない。本明細書におけるいかなる語も、本発明の実施に必須の任意の特許請求されていない要素を示すと解釈されるべきではない。
本明細書に開示されている本発明の代替的要素又は実施形態のグループ分けは、限定的なものとして解釈されるべきではない。各グループメンバーは、個々に、又は該グループの他のメンバー若しくは本明細書に見出される他の要素との任意の組合せで言及され及び特許請求されうる。簡便性及び／又は特許性の理由により、グループのメンバーの１以上がグループに含まれうる又はグループから除外されうると予想される。いずれかのそのような包含又は除外が生じる場合、本明細書は、修正されたものとしてグループを含み、したがって、特許請求の範囲で用いられる全てのマーカッシュグループの、書面による記載を満たすと見なされる。
本発明を実施するための本発明者らに知られている最良の形態を含む、本発明の特定の実施形態が本明細書に記載されている。もちろん、これらの記載されている実施形態に対する変形は、前記の記載を読めば当業者に明らかになるであろう。本発明者は、当業者がそのような変形形態を適宜使用することを想定しており、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されている以外の様態で本発明が実施されることを意図している。したがって、本発明は、適用可能な法律によって許容されているとおり、本出願における特許請求の範囲に列挙されている内容の全ての修飾及び均等物を含む。更に、本明細書に特に示されていない限り又は文脈に明らかに矛盾しない限り、前記要素の、その全ての可能な変形における任意の組合せが本発明に包含される。
更に、本明細書全体にわたって、特許、印刷刊行物、学術論文及び他の文書によるテキスト（本明細書において参照されている資料）に対する多数の参照がなされている。参照されている資料のそれぞれの全体を、それらの参照されている教示のために、本明細書に個々に組み入れることとする。
最後に、本明細書に開示されている本発明の実施形態は本発明の原理の例示であると理解されるべきである。用いられうる他の修飾も本発明の範囲内である。したがって、限定的ではない例示として、本明細書の教示に従い、本発明の代替構成が用いられうる。したがって、本発明は、示され記載されている厳密にそのとおりのものには限定されない。
本明細書に示されている詳細は例示としてのものであり、本発明の好ましい実施形態の例示的説明を目的としたものであるに過ぎず、本発明の種々の実施形態の原理及び概念的態様の最も有用で容易に理解される説明であると考えられるものを提供するために示されている。この点において、本発明の基本的理解に必要なものより詳細に本発明の構造的詳細を示すための試みはなされておらず、図面及び／又は実施例と共になされている説明は、本発明の幾つかの形態がどのように実際に具体化されうるかを当業者に明らかにしている。
本開示において用いられている定義及び説明は、以下の実施例において明確かつ明白に修正されない限り、又はその意味の適用がいかなる構成をも無意味又は本質的に無意味にする場合を除き、将来のいかなる構成にも優先することを意味し及びそのように意図される。用語の構成がそれを無意味又は本質的に無意味にする場合、定義は、Ｗｅｂｓｔｅｒ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、又はＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｎｔｈｏｎｙ Ｓｍｉｔｈ編，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，２００４）のような当業者に公知の辞書から採用されるべきである。

Claims (116)

  1. 二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおける各ＢＳ−ＢＤＣが、
    （ｉ）該グループ内の別のＢＳ−ＢＤＣにより標的化されるがん抗原エピトープとは非重複性及び非反復性であるがん抗原エピトープ、並びに
    （ｉｉ）該グループ内の別のＢＳ−ＢＤＣにより標的化される免疫細胞活性化エピトープとは非重複性及び非反復性である免疫細胞活性化エピトープ
    を標的化し、
    ここで、該非重複性及び非反復性がん抗原エピトープの２つがＲＯＲ１上に位置し、該非重複性及び非反復性免疫細胞活性化エピトープの１つがＣＤ３上に位置し、該非重複性及び非反復性免疫細胞活性化エピトープの１つがＣＤ２８上に位置する、グループ。
  2. 少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣが、Ｒ１１抗体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列を含むｓｃＦＶを含む、請求項１記載のグループ。
  3. 少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣが、Ｒ１２抗体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列を含むｓｃＦＶを含む、請求項１記載のグループ。
  4. 少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣが、２Ａ２抗体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列を含むｓｃＦＶを含む、請求項１記載のグループ。
  5. 少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣが、ＯＫＴ３抗体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列を含むｓｃＦＶを含む、請求項１記載のグループ。
  6. 少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣが、９Ｄ７抗体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列を含むｓｃＦＶを含む、請求項１記載のグループ。
  7. 少なくとも１つのＢＳ−ＢＤＣが、ＴＧＮ１４１２抗体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列を含むｓｃＦＶを含む、請求項１記載のグループ。
  8. 配列番号２３８を含む、請求項１記載のグループ。
  9. 配列番号２３９を含む、請求項１記載のグループ。
  10. 配列番号２４０を含む、請求項１記載のグループ。
  11. 配列番号２４１を含む、請求項１記載のグループ。
  12. 配列番号２４２を含む、請求項１記載のグループ。
  13. 配列番号２４３を含む、請求項１記載のグループ。
  14. 配列番号２４４を含む、請求項１記載のグループ。
  15. 二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおける各ＢＳ−ＢＤＣが、該グループにおける別のＢＳ−ＢＤＣにより標的化されるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープとは異なるがん抗原エピトープ及び免疫細胞活性化エピトープを標的化し、ただし、該がん抗原エピトープの少なくとも２つが同一がん抗原上に存在する、グループ。
  16. 前記の異なるがん抗原エピトープが非重複性及び／又は非反復性である、請求項１５記載のグループ。
  17. 前記の異なるがん抗原エピトープの全てが同一がん抗原上に存在する、請求項１５記載のグループ。
  18. 前記同一がん抗原がＲＯＲ１であり、前記の異なるエピトープがＲＯＲ１−Ａ及びＲＯＲ１−Ｂにより標的化され、又はＲＯＲ１−ａ及びＲＯＲ１−Ｂにより標的化される、請求項１５記載のグループ。
  19. 前記の異なるがん抗原エピトープの全てが同一がん抗原上に存在しない、請求項１５記載のグループ。
  20. 前記ＢＳ−ＢＤＣグループが更に、異なるがん抗原上の異なるがん抗原エピトープを標的化する、請求項１５記載のグループ。
  21. 前記の異なるがん抗原エピトープが、前記の少なくとも２つの標的化エピトープを含有するがん抗原とは異なるがん抗原上のがん抗原エピトープを含む、請求項２０記載のグループ。
  22. （ｉ）少なくとも２つの標的化エピトープを含有するがん抗原がＲＯＲ１であり、前記の異なるがん抗原がＣＤ３３である；
    （ｉｉ）少なくとも２つの標的化エピトープを含有するがん抗原がＣＤ３３であり、前記の異なるがん抗原がＰＤ−Ｌ１である；
    （ｉｉｉ）少なくとも２つの標的化エピトープを含有するがん抗原がＣＤ１９であり、前記の異なるがん抗原がＰＤ−Ｌ１である；又は
    （ｉｖ）少なくとも２つの標的化エピトープを含有するがん抗原がＣＤ１２３であり、前記の異なるがん抗原がＣＤ３３である、
    請求項２０記載のグループ。
  23. 前記の異なるがん抗原エピトープが、
    （ｉ）ＲＯＲ１及びＣＤ３３；
    （ｉｉ）ＣＤ３３及びＰＤ−Ｌ１；
    （ｉｉｉ）ＣＤ１９及びＰＤ−Ｌ１；
    （ｉｖ）ＣＤ１２３及びＣＤ３３；
    （ｖ）ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ＣＤ３３、ＣＤ１２３及びＷＴ−１の２以上；
    （ｖｉ）ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ＰＳＣＡ及びＳＶ４０ Ｔの２以上；
    （ｖｉｉ）ＨＥＲ２、ＥＲＢＢ２及びＲＯＲ１の２以上；
    （ｖｉｉｉ）Ｌ１−ＣＡＭ、ＭＵＣ−ＣＤ、葉酸受容体、ルイスＹ、ＲＯＲ１、メソテリン及びＷＴ−１の２以上；又は
    （ｉｘ）メソテリン、ＣＥＡ、ＣＤ２４及びＲＯＲ１の２以上
    に存在する、請求項２０記載のグループ。
  24. 前記同一がん抗原がＢＣＭＡ、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ１２３，ＣＤ１３３、ＥＲＢＢ２、葉酸受容体、ＨＥＲ２、ルイスＹ、Ｌ１−ＣＡＭ、メソテリン、ＭＵＣ−ＣＤ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＶ４０ Ｔ又はＷＴ−１である、請求項１５記載のグループ。
  25. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＲ１１、Ｒ１２、２Ａ２又はＹ３１のＶＨ、ＶＬ及び／又はＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  26. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが８Ｆ５、１２Ｂ１２、４Ｈ１０、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１Ｈ７、１１Ｄ１１又はＭ１９５のＶＨ、ＶＬ及び／又はＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  27. 前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが、異なるＴ細胞活性化因子上に存在する、請求項１５記載のグループ。
  28. 前記の異なるＴ細胞活性化因子がＣＤ３及びＣＤ２８；ＣＤ３及びＣＤ８；又はＣＤ８及びＣＤ２８である、請求項２７記載のグループ。
  29. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＯＫＴ３、ＯＫＴ８又は９Ｄ７のＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  30. 前記グループが４個以下のＢＳ−ＢＤＣを含む、請求項１５記載のグループ。
  31. 前記グループが、第１ ＲＯＲ１エピトープ及びＣＤ３を標的化するＢＳ−ＢＤＣと、第２ ＲＯＲ１エピトープ及びＣＤ２８を標的化するＢＳ−ＢＤＣとを含む、請求項１５記載のグループ。
  32. 前記グループが、ＲＯＲ１及びＣＤ２８を標的化するＢＳ−ＢＤＣと、ＣＤ３３及びＣＤ３を標的化するＢＳ−ＢＤＣとを含む、請求項１５記載のグループ。
  33. 前記グループが、ＣＤ３３及びＣＤ３を標的化するＢＳ−ＢＤＣと、ＰＤ−Ｌ１及びＣＤ２８を標的化するＢＳ−ＢＤＣとを含む、請求項１５記載のグループ。
  34. 前記グループが、ＣＤ１９及びＣＤ３を標的化するＢＳ−ＢＤＣと、ＰＤ−Ｌ１及びＣＤ２８を標的化するＢＳ−ＢＤＣとを含む、請求項１５記載のグループ。
  35. 前記グループが、ＣＤ１２３及びＣＤ３の第１エピトープを標的化するＢＳ−ＢＤＣと、ＣＤ１２３及びＣＤ２８の第２エピトープを標的化するＢＳ−ＢＤＣとを含む、請求項１５記載のグループ。
  36. 前記グループが、ＣＤ３３及びＣＤ３を標的化するＢＳ−ＢＤＣと、ＣＤ１２３及びＣＤ２８を標的化するＢＳ−ＢＤＣとを含む、請求項１５記載のグループ。
  37. 前記の異なるがん抗原エピトープがＲＯＲ１、ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＣＤ１２３上に存在する、請求項１５記載のグループ。
  38. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６及び配列番号１７から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  39. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２及び配列番号２３から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  40. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  41. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  42. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０及び配列番号４１から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  43. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＦＭＣ６３、ＳＪ２５Ｃ１及び／又はＨＤ３７のＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  44. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  45. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２及び配列番号５３から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  46. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８及び配列番号５９から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  47. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがリツキシマブ、オファツムマブ及び／又はハーセプチンのＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  48. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  49. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、ＣＤＲ配列（ｉ）配列番号２６７、配列番号２６８、配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１及び配列番号２７２、又は（ｉｉ）配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７及び配列番号２５９を含む、請求項１５記載のグループ。
  50. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  51. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  52. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＣＤ３３を標的化し、ここで、ＣＤ３３が、（ｉ）全長ＣＤ３３（ＣＤ３３ＦＬ）、（ｉｉ）エキソン２を欠くＣＤ３３のスプライス変異体（ＣＤ３３ΔＥ２）のみ、又は（ｉｉｉ）それがＣＤ３３ＦＬであるかＣＤ３３ΔＥ２であるかにかかわらず、ＣＤ３３である、請求項１５記載のグループ。
  53. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  54. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７及び配列番号２５８から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  55. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが５Ｄ１２、８５Ｆ、１２Ｂ１２、４Ｈ１０、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１Ｈ７、１１Ｄ１１又はＭ１９５のＶＬ及びＶＨ鎖を含む、請求項１５記載のグループ。
  56. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが５Ｄ１２、８５Ｆ、１２Ｂ１２、４Ｈ１０、１１Ｄ５、１３Ｅ１１、１Ｈ７、１１Ｄ１１又はＭ１９５のＶＬおよびＶＨ鎖からのＣＤＲ配列を含む、請求項１５記載のグループ。
  57. 二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループであって、該グループにおける各ＢＳ−ＢＤＣが、
    （ｉ）該グループ内の別のＢＳ−ＢＤＣにより標的化されるがん抗原エピトープとは非重複性及び非反復性であるがん抗原エピトープ、並びに
    （ｉｉ）該グループ内の別のＢＳ−ＢＤＣにより標的化される免疫細胞活性化エピトープとは非重複性及び非反復性である免疫細胞活性化エピトープ
    を標的化し、
    ここで、該非重複性及び非反復性がん抗原エピトープの２つがＣＤ３３上に位置し、該非重複性及び非反復性免疫細胞活性化エピトープの２つがＣＤ３上と４−１ＢＢ、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２００又はＶＩＳＴＡの１以上の上とに位置する、グループ。
  58. 免疫細胞がＴ細胞、ナチュラルキラー細胞又はマクロファージである、請求項５７記載のグループ。
  59. 前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが同一免疫細胞活性化因子上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  60. 前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが、異なる免疫細胞活性化因子上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  61. 前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが、同一免疫細胞活性化因子上及び異なる免疫細胞活性化因子上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  62. 免疫細胞活性化エピトープの少なくとも１つがＴ細胞上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  63. 前記同一免疫細胞活性化因子がＣＤ３であり、前記の異なるエピトープが、Ｔ細胞ＣＤ３二量体を含む異なるインバリアントタンパク質上に存在する、請求項６１記載のグループ。
  64. 前記の異なる免疫細胞活性化エピトープがＣＤ３及びＣＤ２８、ＣＤ３及びＣＤ８、又はＣＤ８及びＣＤ２８上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  65. 前記の異なる免疫細胞活性化エピトープがＣＤ３、ＣＤ８及びＣＤ２８上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  66. 前記の異なる免疫細胞活性化エピトープがＣＤ３、ＣＤ２８及びＣＤ１３７上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  67. 前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが、（ｉ）ＣＤ３、（ｉｉ）ＣＤ３、及び（ｉｉｉ）ＣＤ２８上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  68. 前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが、（ｉ）ＣＤ２８、（ｉｉ）ＣＤ２８、及び（ｉｉｉ）ＣＤ３上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  69. 前記の異なる免疫細胞活性化エピトープが、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ８３、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＬＦＡ−１、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ及びＢ７−Ｈ３の１以上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  70. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＯＫＴ３、ＯＫＴ８、９Ｄ７又はＨｕ２６ＢのＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  71. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＯＫＴ３、２０Ｇ６−Ｆ３、４Ｂ４−Ｄ７、４Ｅ７−Ｃ９及び／又は１８Ｆ５−Ｈ１０のＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  72. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４及び配列番号１０５から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  73. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１０７、ＫＶＳ、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１及び配列番号１１２から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  74. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１１３、ＫＶＳ、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７及び配列番号１１８から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  75. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１１９、ＫＶＳ、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３及び配列番号１２４から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  76. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１２５、ＫＶＳ、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９及び配列番号１３０から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  77. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが９Ｄ７、９．３、ＫＯＬＴ−２、１５Ｅ８、２４８．２３．２、ＥＸ５．３Ｄ１０及び／又は５．１１Ａ１のＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  78. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＯＫＴ８を含む、請求項５７記載のグループ。
  79. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２２６、配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０及び配列番号２３１から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  80. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２６１、配列番号２６２、配列番号２６３、配列番号２６４、配列番号２６５及び配列番号２６６から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  81. 免疫細胞活性化エピトープの少なくとも１つがナチュラルキラー細胞上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  82. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが５Ｃ６、１Ｄ１１、ｍＡｂ ３３、Ｐ４４−８、ＳＫ１及び／又は３Ｇ８のＣＤＲ配列を含む、請求項８１記載のグループ。
  83. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが配列番号２３２の可変軽鎖領域及び配列番号２３３の可変重鎖領域を含む、請求項８１記載のグループ。
  84. 免疫細胞活性化エピトープがマクロファージ上に存在する、請求項５７記載のグループ。
  85. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣがＭ１／７０、ＫＰ１及び／又はａｂ８７０９９のＣＤＲ配列を含む、請求項８４記載のグループ。
  86. 免疫細胞活性化エピトープの少なくとも１つが免疫細胞抑制因子上に存在する、請求項１５又は５７記載のグループ。
  87. 免疫細胞抑制因子が４−１ＢＢ、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２００及びＶＩＳＴＡの１以上を含む、請求項８５記載のグループ。
  88. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２６１、配列番号２６２、配列番号２６３、配列番号２６４、配列番号２６５及び配列番号２６６から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  89. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、ＩＮＨ及び配列番号１５２から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  90. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８及び配列番号１５９から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  91. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４及び配列番号１６５から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  92. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０、配列番号１７１及び配列番号１７２から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  93. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１７４、ＡＡＳ、配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８及び配列番号１７９から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  94. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５及び配列番号１８６から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  95. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１８７、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１及び配列番号１９２から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  96. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  97. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  98. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  99. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２１３、配列番号２１４、配列番号２１５、配列番号２１６、配列番号２１７及び配列番号２１８から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  100. 前記グループにおけるＢＳ−ＢＤＣが、配列番号２２０、配列番号２２１、配列番号２２２、配列番号２２３、ＳＡＳ及び配列番号２２５から選択されるＣＤＲ配列を含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  101. 前記グループが２、３又は４個のＢＳ−ＢＤＣを含む、請求項１５又は５７記載のグループ。
  102. 配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１及び配列番号２５２から選択される少なくとも２つの二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）を含む、二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループ。
  103. 配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１及び配列番号２５２から選択される３個の二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）を含む、二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループ。
  104. 配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４、配列番号２４５、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１及び配列番号２５２から選択される４個の二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）を含む、二重特異性結合ドメイン構築物（ＢＳ−ＢＤＣ）のグループ。
  105. ＢＳ−ＢＤＣがｓｃＦｖである、請求項１５、５７又は１０２記載のグループ。
  106. 請求項１５、５７又は１０２記載のグループを含む組成物。
  107. 請求項１０６記載の組成物の治療量を投与することにより、がんの治療を要する対象においてがんを治療することを含む、がんの治療を要する対象におけるがんの治療方法。
  108. 前記治療が治療に対するがん細胞の耐性を克服する、請求項１０７記載の方法。
  109. 対象のがんの変化に関して対象をモニターすることを含む、請求項１０７記載の方法。
  110. 異なるグループのＢＳ−ＢＤＣと共に組成物を投与することを含む、請求項１０７記載の方法。
  111. 異なるグループのＢＳ−ＢＤＣと共に組成物を投与することが、前記モニターの結果に基づく、請求項１１０記載の異なるグループのＢＳ−ＢＤＣと共に組成物を投与することを含む方法。
  112. 前記モニターの結果がクローンの出現を示す、請求項１１１記載の方法。
  113. 前記モニターの結果が治療耐性クローンの出現を示す、請求項１１１記載の方法。
  114. 前記モニターの結果が腫瘍微小環境における免疫抑制を示す、請求項１１１記載の方法。
  115. 前記モニターの結果が腫瘍微小環境におけるＴ細胞抑制を示す、請求項１１１記載の方法。
  116. 免疫応答の刺激を要する対象において免疫応答を刺激する方法であって、免疫応答の刺激を要する対象に請求項１０６記載の組成物の治療量を投与し、それにより、免疫応答の刺激を要する対象において免疫応答を刺激することを含む方法。
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