JP2933740B2 - タンパク質および他のアミン含有化合物を標識するのに有用なジオキシム配位子へのボロン酸付加物の金属錯体 - Google Patents

タンパク質および他のアミン含有化合物を標識するのに有用なジオキシム配位子へのボロン酸付加物の金属錯体

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アミンおよびタンパク
質標識試薬として有用な式： ＭＸ(Ｙ)3Ｚ (Ｉ) で示されるジオキシム配位子へのボロン酸付加物の金属
錯体に関する。
【０００２】
【発明の概要】本明細書を通じて、上記式(Ｉ)中の記号
の定義は下記の通りである。すなわち、Ｍはテクネチウ
ムまたはレニウムの同位体；Ｘはアニオン；Ｙは式： (式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立に水素、ハロゲ
ン、アルキル、アリールまたは５員または６員の窒素、
硫黄または酸素含有複素環であるかまたはＲ1とＲ2とが
一緒になって−(ＣＲ8Ｒ9)n−(式中、ｎは３、４、５ま
たは６であり、Ｒ8およびＲ9はそれぞれ独立に水素また
はアルキルである)を形成する)で示されるビシナルジオ
キシムである。
【０００３】Ｚは式： Ｂ−(Ａ1)p−Ｅ (ＩＩＩ) で示されるホウ素誘導体である。上記式中、Ｅはタンパ
ク質反応性の官能基または容易にタンパク質反応性の官
能基に変換し得る官能基を含有する芳香族残基である。
Ｅは水溶性付与官能基を任意に含んでいてよい。
【０００４】残基「Ｅ」は具体的には、式(ＩＶ)：
【化５】 で示される芳香族基である。上記式中、Ｒ3はアミノ基
と反応して共有結合を形成し得る官能基である。適当な
Ｒ3基の例としては、Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、アシル
ハライド、エステル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド誘
導体、またはアルキルハライド基などが挙げられる。イ
ソチオシアネート基(Ｎ＝Ｃ＝Ｓ)が好ましい。
【０００５】Ｒ4は、水素か、またはＣＯＯＨ、カルボ
キシアルキル、ヒドロキシアルキル、ＳＯ3Ｈ、アルキ
ルスルホネート、スルホンアミド、ヒドロキシなどの水
溶性付与官能基、または薬理学的に許容し得るその塩で
ある。
【０００６】式(ＩＶ)で示される残基「Ｅ」において、Ｒ
4はＲ3に対してオルト、メタまたはパラ位であってよ
い。Ｒ4は、Ｒ3およびスペーサー基(Ａ1)pの両方に対し
てメタ位にあるのが好ましい。
【０００７】上記式(ＩＩＩ)のホウ素誘導体中の(Ａ1)
は、「Ｅ」で示される残基を式(Ｉ)の錯体の残りの部分か
ら間隔を置くかまたは他の仕方で隔離する残基である。
たとえば、ｐが０よりも大きな整数である場合は、Ａ1
または直鎖または分枝鎖を形成する種々のＡ1ユニット
は、−ＣＨ2−、−ＣＨＲ6−、−ＣＲ6Ｒ10−、−ＣＨ
＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲ11−、−ＣＲ6＝ＣＲ12−、−
Ｃ≡Ｃ−、シクロアルキレン、シクロアルケニレン、ア
リーレン、ヘテロシクロ、酸素、硫黄、−ＣＯ−、−Ｈ
Ｃ＝Ｎ−、−ＣＲ6＝Ｎ−、−ＮＲ6−(式中、Ｒ6、
Ｒ10、Ｒ11およびＲ12は、アルキル、アルケニル、アル
コキシ、アリール、５員または６員の窒素原子含有複素
環、ハロゲン、ヒドロキシまたはヒドロキシアルキルか
ら独立に選ばれた基である)より独立に選ばれたもので
ある。
【０００８】本発明の錯体化合物において(Ａ1)pの好ま
しい残基は、アルキレン、アリーレン、オキサアルキレ
ン、ヒドロキシアルキレン、ヒドロキシアルコキシ、ア
ルケニレン、カルボキシアルキレン、アリールアルキレ
ン、アリールアルキレンアミド、アルキレンアミドおよ
びアルキレンスルホネートなどである。
【０００９】ｐは０または１〜１００の整数であり、０
〜２０が好ましい範囲である。本発明のＺで示されるホ
ウ素誘導体の好ましい例としては、式：
【化６】 で示されるものが挙げられる。上記式において、ｐは０
〜６であり、Ｒ3はアミノ基と反応して共有結合を形成
し得る官能基であり、Ｒ4は水素または上記で定義した
水溶性付与官能基である。
【００１０】ホウ素誘導体Ｚとして最も重要なものは、
式(ＶＩ)：
【化７】 [式中、ｐは０または１、Ｒ3はイソチオシアネート、Ｒ
4は水素か、またはＣＯＯＨ、カルボキシアルキル、ヒ
ドロキシアルキル、ＳＯ3Ｈ、アルキルスルホネート、
スルホンアミドまたはヒドロキシなどの水溶性付与官能
基である]で示される化合物である。
【００１１】「アニオン」とは、負の荷電を有するあらゆ
る残基をいう。その例としては、Ｃｌ-、Ｂｒ-、Ｆ-、
Ｉ-、ＯＨ-、ＳＲ-、Ｓ−Ｃ＝Ｎ-およびＮ＝Ｃ＝Ｓ-な
どが挙げられる。好ましいアニオン残基は、Ｃｌ-およ
びＯＨ-である。
【００１２】本発明の錯体化合物の記載に際して使用し
た語の定義を以下に挙げる。これら定義は、単独で用い
られた場合および一層大きな基の一部として用いられた
場合のいずれにおいても、本明細書中で用いられた語に
適用することができる(特別の場合に特に断らない限
り)。
【００１３】「アルキル」は、直鎖および分枝鎖基の両方
を包含する。炭素数１〜１０の基が好ましい。「アリー
ル」とは、フェニルおよび置換フェニルをいう。好まし
いのはフェニル、および１つ、２つまたは３つのアルキ
ル、ハロアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アルコ
キシ、アルコキシアルキル、ハロゲン、ヒドロキシまた
はホルミルで置換されたフェニルである。
【００１４】「５員または６員の窒素含有複素環」とは、
少なくとも１個の窒素原子を含有するすべての５員環お
よび６員環をいう。脂肪族基の例としては、式：
【化８】 [式中、ｍは０または１、Ａは酸素、硫黄、Ｎ−Ｒ13ま
たはＣＨ−Ｒ14(式中、Ｒ13はアルキル、アリールまた
はアリールアルキル、Ｒ14は水素、アルキル、アリール
またはアリールアルキルである)である]で示される化合
物のデヒドロ誘導体が挙げられる。「５員または６員の
窒素含有複素環」なる表現にはまた、芳香族基が含まれ
る。ヘテロ芳香族基の例としては、ピロリル、イミダゾ
リル、オキサゾリル、ピラゾリル、ピリジニルおよびピ
リミジニルなどが挙げられる。これら基は、ヘテロ原子
かまたは炭素原子を介して結合し得る。
【００１５】「５員または６員の窒素、硫黄または酸素
含有複素環」とは、少なくとも１個の窒素原子、硫黄原
子または酸素原子を含有するすべての５員または６員環
をいう。代表的な基としては、上記「５員または６員の
窒素含有複素環」のところで定義した基が挙げられる。
その他の例としては、１,４−ジオキサニル、フラニル
およびチオフェニルなどが挙げられる。
【００１６】(Ａ1)p中の種々の残基、またはビシナルジ
オキシムのＲ1およびＲ2は、式(ＩＩＩ)または式(ＩＶ)
で示されるホウ素誘導体上のＲ3基と反応する官能基を
含有していてはならないことを理解すべきである。
【００１７】本発明のテクネチウム錯体化合物の調製
は、過テクネチウム酸塩(pertechnetate)イオンの形態
のテクネチウム−９９ｍを用いて最良に行うことができ
る。過テクネチウム酸塩イオンは、市販のテクネチウム
−９９ｍ親元素−娘核種発生剤(parent−daughter gene
rators)から得ることができる。そのようなテクネチウ
ムは＋７の酸化状態にある。この種の発生剤を用いて過
テクネチウム酸塩イオンを生成することは、当該技術分
野でよく知られており、米国特許第３,３６９,１２１号
および同第３,９２０,９９５号各明細書にさらに詳しく
記載されている。通常、これらの発生剤を食塩水で溶出
し、過テクネチウム酸塩イオンをナトリウム塩として得
る。
【００１８】Ｍがレニウムの同位体である本発明の錯体
化合物の調製は、＋３、＋４、＋５または＋７の酸化状
態にあるレニウムを用いて最良に行うことができる。レ
ニウムを＋３の酸化状態で利用することのできる化合物
の例としては、ＲｅＣｌ3(ＣＨ3ＣＮ)(ＰＰｈ3)2および
[Ｒｅ2Ｃｌ8](ＮＢｕ4)2[式中、Ｐｈはフェニル、Ｂｕ
はブチルである]などが挙げられる。Ｒｅ(ＩＶ)はＫ2Ｒ
ｅＣｌ6として利用でき、Ｒｅ(ＶＩＩ)はＮＨ4ＲｅＯ4
またはＫＲｅＯ4として利用できる。Ｒｅ(Ｖ)は、[Ｒｅ
ＯＣｌ4](ＮＢｕ4)および[ＲｅＯＣｌ4](ＡｓＰｈ4)と
して、およびＲｅＯＣｌ3(ＰＰｈ3)2およびＲｅＯ2(ピ
リジン)4 +として利用できる。当業者に知られた他のＲ
ｅ(ＩＩＩ)、Ｒｅ(ＩＶ)、Ｒｅ(Ｖ)、Ｒｅ(ＶＩＩ)試薬
もまた用いることができる。
【００１９】本発明の錯体化合物を調製するには、上記
金属イオン源を必要とし、これをアニオン源、式(ＶＩ
Ｉ)： (ＯＨ)2Ｂ(Ａ1)p−Ｅ (ＶＩＩ) で示されるボロン酸誘導体、および上記式(ＩＩ)で示さ
れるジオキシムまたは薬理学的に許容し得るその塩と結
合させる。
【００２０】別法として、本発明の錯体化合物は、上記
式(ＶＩＩ)のボロン酸誘導体を式：ＭＸ(ジオキシム)3
で示される化合物と反応させることによっても調製する
ことができる。式：ＭＸ(ジオキシム)3[式中、Ｍはテク
ネチウムである]で示される化合物は米国特許第４,７１
４,６０５号明細書に開示されている。
【００２１】Ｍがレニウムの同位体である式：ＭＸ(ジ
オキシム)3の錯体は、ＲｅＣｌ3(ＣＨ3ＣＮ)(ＰＰｈ3)2
または[Ｒｅ2Ｃｌ8](ＮＢｕ4)2などのＲｅ(ＩＩＩ)源を
式(ＩＩ)のジオキシム源およびアニオン源Ｘと結合する
ことにより調製することができる。ＲｅＸ(ジオキシム)
3錯体の生成反応は、出発物質であるＲｅ(ＩＩＩ)、ア
ニオン源、および式(ＩＩ)のジオキシム配位子からなる
混合物を２５〜１００℃で約２〜３０分間、約１〜約４
のｐＨにて加熱した場合に進行する。
【００２２】式(Ｉ)の錯体化合物を過テクネチウム酸塩
または過レニウム酸塩から調製する場合は、アニオン残
基源は水、または解離して適当なアニオンを放出する化
合物または塩であってよい。そのような化合物の例とし
ては、ＮａＣｌ、ＮａＢｒおよびチオール含有化合物な
どが挙げられる。
【００２３】式(Ｉ)の錯体化合物の生成は、金属イオ
ン、アニオン源、ボロン酸誘導体およびジオキシムの混
合物を約２５℃〜約１００℃で約２〜約３０分間加熱す
れば進行する。好ましい反応温度は約５０℃〜約１００
℃であり、好ましい加熱時間は約２分間〜約１５分間で
ある。上記反応の最適ｐＨは約１〜約４である。
【００２４】テクネチウムまたはレニウム源が過テクネ
チウム酸塩または過レニウム酸塩または＋３以上の酸化
状態にある他の出発物質である場合は、反応混合物には
また還元剤が含まれていなければならない。スズ(ＩＩ)
イオンが好ましい還元剤であり、ハロゲン化スズ(たと
えば、塩化スズやフッ化スズなど)などのスズ塩の形態
で導入することができる。還元剤は約１.５マイクロモ
ルから６.６マイクロモルの濃度で含有させる。
【００２５】種々の錯体化剤(技術分野ではキレート化
剤としても知られている)もまた錯体生成反応の一部と
して含有させてよい。もちろん、錯体化剤は薬理学的に
許容し得るものでなければならない。錯体化剤の例とし
ては、ジエチレントリアミン五酢酸(ＤＴＰＡ)、エチレ
ングリコール−ビス(β−アミノエチルエーテル)−Ｎ,
Ｎ,Ｎ',Ｎ'−四酢酸(ＥＧＴＡ)、エチレンジアミン四酢
酸(ＥＤＴＡ)、クエン酸、酒石酸、マロン酸などが挙げ
られる。
【００２６】錯体反応混合物にはまた、生成物の放射化
学的純度(すなわち、所望の化学形にある放射能の％)を
向上させる促進剤(触媒)も含まれていてよい。促進剤の
例としては、クエン酸、酒石酸およびマロン酸などのα
−ヒドロキシカルボン酸が挙げられる。ＤＴＰＡとクエ
ン酸の組み合わせが好ましいことがわかった。
【００２７】本発明の錯体化合物はそれを使用する部位
または使用する部位の近くで調製する必要があるので、
式(Ｉ)のジオキシム配位子へのボロン酸付加物の金属錯
体を調製するための全成分(テクネチウムまたはレニウ
ム源を除く)を含むキットは本発明の重要な部分を構成
する。そのようなキットには、アニオン源、式(ＶＩＩ)
のボロン酸誘導体(または反応後に該誘導体をその場で
生成し得る化合物)、または薬理学的に許容し得るその
塩、式(ＩＩ)のジオキシム、または薬理学的に許容し得
るその塩、および還元剤が含まれている。１種または２
種以上の錯体化剤、１種または２種以上の促進剤、可溶
化剤、および／または高い放射化学純度を得るに必要な
他の成分もまた任意に含まれていてよい。
【００２８】本発明の錯体化合物を調製するためにマル
チバイアルキットを用いることもできる。たとえば、キ
ット中の一つのバイアルにはアニオン源、式(ＩＩ)のジ
オキシム配位子、または薬理学的に許容し得るその塩、
還元剤、および任意に錯体化剤が含まれていてよい。こ
のキットにテクネチウムまたはレニウム源を加え、これ
を加熱して中間体のＭＸ(ジオキシム)3(Ｍ＝Ｔｃ、Ｒ
ｅ)を生成させる。このキットから中間体生成物を、式
(ＶＩＩ)のボロン酸誘導体(または反応後にその場で該
誘導体を生成し得る化合物)を入れた第二のバイアルに
加える。
【００２９】本発明のキットは、水溶液中に調製するこ
とができる。キットの安定性を最適化し、かつ放射生成
物の放射化学純度を最適化するため、薬理学的に許容し
得る酸または塩基(たとえば、塩酸や水酸化ナトリウム
など)を用いてキットのｐＨを約１.０〜４.０に調節す
る。好ましくは、キットのｐＨは約２.０である。キッ
トはまた凍結乾燥した形態であっても好ましい。「湿っ
た」キット(すなわち、すべての成分が溶液中にあるキッ
ト)を用いることもできるが、対応する凍結乾燥の形態
のキットほど有効ではない。
【００３０】式(ＶＩＩ)の化合物においてＲ3がＮＣＳ
であるものは新規であり、本発明の重要な部分を構成す
る。これら式(ＶＩＩ)で示されるボロン酸誘導体または
薬理学的に許容し得るその塩は２官能性であり、上記キ
ットの構成成分と反応して式(Ｉ)で示される錯体化合物
を生成する。反応性の基Ｒ3を、金属Ｍとの反応の前か
または後にタンパク質または他のアミン含有化合物と反
応させる。
【００３１】99テクネチウム同位体を用いて本発明の錯
体化合物の一つの構造を調べたところ、その構造は以下
のようであると思われる。
【化９】
【００３２】式(Ｉ)の金属錯体化合物と、タンパク質
(たとえば、モノクローナル抗体やポリクローナル抗体
などの抗体、アルブミン、ヘモグロビンおよびフィブリ
ノーゲンなど)、ポリペプチド(たとえば、インシュリン
など)、ホルモン類(たとえば、アンギオテンシン、アド
レナリン、およびアミン含有ステロイド誘導体など)、
アミノ酸(たとえば、グリシンやシステインなど)、ペニ
シルアミンやアルカロイドなどの薬物、または酵素や全
細胞などの他のアミン含有化合物とのカップリングは、
ホウ素誘導体(Ｚ)上のＲ3基とタンパク質または他のア
ミン含有化合物上の第一アミンまたは第二アミンとの反
応により起こる。Ｒ3がイソチオシアナト(Ｎ＝Ｃ＝Ｓ)
である場合は、生成するチオ尿素結合は非常に安定であ
る。それゆえ、安定な共有結合が生成することにより、
式(Ｉ)の金属錯体化合物がタンパク質または他のアミン
含有化合物に結合される。この反応の例を下記に示す。
【化１０】 ＤＭＧ＝ジメチルグリオキシム
【００３３】式(Ｉ)においてホウ素キャップ上の基Ｚが
最初は反応性の官能基ではない錯体化合物を生成するこ
とも可能である。この錯体化合物は、ついで錯体コアを
生成した後、反応性の基Ｚを含有する他の一層反応性の
化合物に変換することができる。たとえば、式：
【化１１】 のホウ素キャップを含有する化合物を、生成後、式：
【化１２】 (式中、Ｔｓ＝トシル)のホウ素キャップを含有する活性
化合物に変換することができる。ついで、この活性化合
物をタンパク質との反応に用いることができる。
【００３４】放射性標識した抗体および抗体断片も本発
明に包含され、これは診断または放射線療法に有用であ
る。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ')2およびＦａ
ｂ'が挙げられる。これらは、バーチール(S.W.Burchie
l)およびローデス(B.A.Rhodes)の編になるバーチールら
の「チューマー・イミジング、ザ・ラジオケミカル・デ
ィテクション・オブ・キャンサー(Tumor Imaging、The
Radiochemical Detection of Cancer)」(マッソンパブリ
ッシング、１９８２)中の第１３章、「イミュノファーモ
カイネティックス・オブ・ラジオラベルド・アンチボデ
ィーズ・アンド・ゼア・フラグメンツ(Immunopharmokin
etics of Radiolabeled Antibodies andtheir Fragment
s)」に記載されている。これら放射性標識した抗体およ
び抗体断片の用途としては、血塊の検出および癌の治療
などが挙げられる。本明細書に記載した方法を用いて放
射性標識した薬物、タンパク質またはホルモンなどの基
質は、器官系の診断解剖像、器官機能の造影、生化学プ
ロセスのプローブおよび癌の診断および治療に用いるこ
とができる。
【００３５】下記実施例でもさらに詳細に記載するよう
に、上記方法で標識したある種の抗体および抗体断片は
その生物学的活性を保持しており、それゆえ、特定の抗
体により認識される抗原を発現する腫瘍部位に優先的に
局在化し得ることが示された。このような放射性標識物
質の腫瘍部位での優先的な局在化のため、本発明で記載
した方法により標識した抗体および抗体断片は癌の診断
または治療に有用である。この抗体−ボロン酸−金属ジ
オキシム錯体結合体は、腫瘍または癌に関連しない組織
とは相対的に非反応性である。
【００３６】本発明の錯体化合物かまたは本発明の錯体
化合物で標識したタンパク質もしくは抗体は、ボーラス
(bolus)静脈注射により、または腹腔内に宿主に投与す
ることができる。宿主のサイズ、および使用した造影系
により、診断像を生成するのに必要な放射能の量が決定
される。ヒト宿主に対しては、注射する放射能の量は、
通常、約５〜２０ミリキュリーの範囲のテクネチウム−
９９ｍである。
【００３７】上記投与形態はまた、本発明の錯体化合物
自体または抗体もしくはタンパク質に結合した錯体化合
物を放射線療法に用いる場合にも適用できる。ヒト宿主
に対する放射線療法における放射線量は、約１０〜３０
ミリキュリーである。つぎに、本発明を実施例に基づい
てさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限られる
ものではない。
【００３８】実施例１ ｍ−イソチオシアナトフェニルボロン酸の調製：アセト
ン(５ｍｌ)中の３−アミノフェニルボロン酸(２.２４
ｇ、０.０１３モル)の冷(０℃)溶液に、クロロホルム
(５ｍｌ)中のチオホスゲン(１ｍｌ、０.０１３モル)の
溶液を０.５時間かけて滴下する。この反応混合物を０
℃で１時間、室温で１２時間撹拌する。溶媒を回転蒸発
器上で蒸発させ、残渣をエーテルでトリチュレートし、
濾過してトリエチルアミン塩酸塩を除去する。このエー
テル溶液を蒸発させて褐色の油状物とする。これをアセ
トン−クロロホルム(７：３)を溶離剤として用い、シリ
カゲル(３０ｇ)上のクロマトグラフィーにかける。生成
物を含有するフラクションを回収し、蒸発させて淡褐色
の固体を得る。この固体を酢酸エチル／ヘキサンから結
晶化する(融点：１６６〜６７℃)。
【００３９】元素分析(Ｃ7Ｈ6ＮＳＢＯ2・０.２５Ｈ2Ｏ
として)： 計算値(％)：Ｃ４６.００、Ｈ３.５９、Ｎ７.６７、Ｓ
１７.５４ 実測値(％)：Ｃ４６.１７、Ｈ３.４８、Ｎ７.５９、Ｓ
１７.７１
【００４０】実施例２ ３−イソチオシアナト−５−カルボキシフェニルボロン
酸の調製：実施例２Ａ ： ｍ−トリルボロン酸の調製：エーテル(２００ｍｌ)中の
ｍ−ブロモトルエン(２５ｇ、０.１４６モル)の溶液
を、エーテル(５０ｍｌ)中のマグネシウム(４.０ｇ、
０.１７モル)に窒素雰囲気下、室温にて３時間かけて滴
下する。添加完了後、反応混合物を室温で１２時間撹拌
する。エーテル(５００ｍｌ)中のトリメチルボレート
(１５.６ｇ、１７ｍｌ、０.１５モル)の溶液に上記グリ
ニャール試薬を−７８℃にて４時間かけてゆっくりと加
え、室温で１２時間撹拌する。この反応混合物を３０％
硫酸(５０ｍｌ)で加水分解する。エーテル層を分離し、
水(３×２５０ｍｌ)で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥する。
溶媒を回転蒸発器上で除去し、得られる固体を水から再
結晶させる(融点：１６０〜１６１℃)。
【００４１】実施例２Ｂ： ｍ−カルボキシフェニルボロン酸の調製：１０％水酸化
ナトリウム(２５０ｍｌ)中のｍ−トリルボロン酸(８.０
ｇ、０.０５９モル)の溶液に、過マンガン酸カリウム
(２０ｇ)を少しずつ加える。この反応混合物を室温で４
８時間撹拌する。沈殿した二酸化マンガンを濾去し、濾
液を１０％硫酸で酸性にし、冷却する。生成する白色沈
殿を濾過し、水から再結晶する(融点：２５０〜５２
℃)。
【００４２】実施例２Ｃ： ３−ニトロ−５−カルボキシフェニルボロン酸：濃硫酸
(１５ｍｌ)中のｍ−カルボキシフェニルボロン酸(５
ｇ、０.０３モル)の撹拌スラリーに発煙硝酸(１５ｍ
ｌ、ｄ＝１.５４)を加える。この反応混合物を室温で４
５分間撹拌し、氷(１５０ｇ)上に注ぐ。生成するニトロ
酸を濾過し、水で洗浄し、乾燥する(融点：２３５〜３
７℃)。
【００４３】実施例２Ｄ： ３−アミノ−５−カルボキシフェニルボロン酸の調製：
無水エタノール(２５ｍｌ)中の３−ニトロ−５−カルボ
キシボロン酸(３.３ｇ、０.０１６モル)の溶液をラネー
ニッケル(１ｇ)の存在下、パールシェーカー中で５０ポ
ンド／平方インチにて４時間水素化する。触媒を濾去
し、溶媒を回転蒸発器上で除去する。得られる固体を水
から再結晶する(融点：２１０〜１２℃)。
【００４４】実施例２Ｅ： ３−イソチオシアナト−５−カルボキシボロン酸の調
製：３Ｎ−ＨＣｌ(３ｍｌ)中の３−アミノ−５−カルボ
キシボロン酸(１５０ｍｇ、０.０８ミリモル)の溶液
に、３Ｎ−ＨＣｌ(３ｍｌ)中のチオホスゲン(９２ｍ
ｇ、０.０８ミリモル)を加え、反応混合物を室温で撹拌
する。２０分後に白色固体が生成する。これをヘキサン
／酢酸エチルから再結晶する(融点＞３５０℃)。
【００４５】元素分析(Ｃ8Ｈ6ＮＯ4ＢＳ・３Ｈ2Ｏとし
て)： 計算値(％)：Ｃ４２.０６、Ｈ２.９１、Ｎ６.１３ 実測値(％)：Ｃ４２.５１、Ｈ２.８７、Ｎ５.６８
【００４６】実施例３ ｐ−ブロモメチルベンゼンボロン酸の調製：実施例３Ａ ： ｐ−トリルボロン酸：オーブン乾燥しＮ2を通した２０
０ｍｌ容の丸底フラスコ中で、エーテル(３０ｍｌ)中の
Ｍｇ(２.５ｇ、０.１０５モル)の混合物にｐ−ブロモト
ルエン(１７.１ｇ、エーテル１５０ｍｌ中に０.１モル)
を滴下する。この反応混合物を室温で一夜撹拌する。つ
いで、Ｎ2圧を用い、得られた暗褐色の溶液を移動針に
より別の添加漏斗に移す。
【００４７】このグリニャール試薬を、Ｎ2下、−７８
℃にてエーテル(２００ｍｌ)中のトリメチルボレート
(１０.４ｇ、０.１モル)の溶液に１.５時間かけて滴下
する。室温で一夜撹拌した後、このオフホワイトの反応
混合物を水(２００ｍｌ)で加水分解し、３Ｎ硫酸(３５
ｍｌ)で酸性にする。水性層をエーテル(４×８０ｍｌ)
で抽出する。コンバインした有機層を洗浄し、Ｎａ2Ｓ
Ｏ4で乾燥させる。溶媒を除去して白色固体生成物を
得、これを水から再結晶させる(融点：２５１〜２５６
℃)。
【００４８】実施例３Ｂ： ｐ−ブロモメチルベンゼンボロン酸： 四塩化炭素(４０ｍｌ)中のｐ−トリルボロン酸(２.０
ｇ、１.４７×１-2モル)の溶液に、ＣＣｌ4(２０ｍｌ)
中に臭素(２.４ｇ、１.５×１０-2モル)を溶解させて調
製した臭素溶液(５ｍｌ)を加える。１５０ワットの電球
で照明して反応を開始させる。臭素の色は５分間で消え
る。１５分後に残りの臭素溶液を加える。生成した沈殿
を濾過により単離し、クロロホルムから再結晶させる
(融点：１５４〜１５６℃)。
【００４９】実施例４ 99m Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−イソチオ
シアナトフェニル)ホウ素の調製：５ｍｌ容のシリコー
ン処理した血清バイアル中のジメチルグリオキシム(２.
０ｍｇ)、塩化ナトリウム(１００ｍｇ)、クエン酸(１８
ｍｇ)、ジエチレントリアミン−五酢酸(ＤＴＰＡ；１ｍ
ｇ)、ガンマシクロデキストリン(５０ｍｇ)、および塩
化スズ(５０μｇ)の凍結乾燥混合物に、エタノール(５
０μｌ)中の３−イソチオシアナトフェニルボロン酸
(３.０ｍｇ)を加える。
【００５０】このバイアルに生理食塩水(１.０ｍｌ)中
の過テクネチウム酸ナトリウムを加え、これを１００℃
で５分間加熱する。高速液体クロマトグラフィー(ＨＰ
ＬＣ)により決定されるＴｃ(塩素)(ジメチルグリオキシ
ム)3(３−イソチオシアナトフェニル)ホウ素の収率は３
５〜４０％であった。この錯体化合物の試料は、下記の
ようにして調製した99Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリオキシ
ム)3(３−イソチオシアナトフェニル)ホウ素の真正の試
料とともにリクロソーブ(Lichrosorb)ＨＰＬＣカラムか
ら一緒に溶出する。
【００５１】実施例４Ａ：99 Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−イソチオシ
アナトフェニル)ホウ素：99Ｔｃ(ジメチルグリオキシ
ム)3(μ−ＯＨ)(ＳｎＣｌ3)・３Ｈ2Ｏ(９７ｍｇ、０.１
３８ミリモル)、３−イソチオシアナトボロン酸(３２ｍ
ｇ、０.１８ミリモル)、エタノール(１０ｍｌ)および１
Ｍ ＨＣｌ(２ｍｌ)を含有する溶液を、空気中、小さな
ビーカー中で１時間穏やかに沸騰させる。得られる赤−
オレンジ色の沈殿(６０％収率)を温ＣＨ2Ｃｌ2／ＥtＯ
Ｈ混合物(１：５)から再結晶する。Ｘ線構造品質結晶が
１日以内に生成する。
【００５２】元素分析(Ｃ19Ｈ24Ｎ7Ｏ6ＢＣｌＳＴｃと
して)：計算値(実測値)：Ｃ３６.３６(３６.５９)、Ｈ
３.８０(３.８９)、Ｎ１５.８８(１５.７２)。質量分析
(ｍ／ｚ＝６２４)により分子イオンＭＨ+が観察され
る。リクロソーブＨＰＬＣカラム(ＡＣＮ／０.１Ｍ Ｎ
Ｈ4ＯＡｃ＝７５：２５、ｐＨ４.６、１.５ｍｌ／分)上
での保持時間＝８.４分。この錯体化合物でのＸ線結晶
構造決定により構造が確認された。
【００５３】実施例５ 99m Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−イソチオ
シアナト−５−カルボキシフェニル)ホウ素の調製：３
−イソチオシアナトフェニルボロン酸の代わりに３−イ
ソチオシアナト−５−カルボキシフェニルボロン酸(３.
０ｍｇ)を用いる他は実施例４に記載の方法に従い、標
記錯体化合物を３５〜４０％の収率で得た。この錯体化
合物の試料は、下記実施例５Ａで調製する99Ｔｃ(塩素)
(ジメチルグリオキシム)3(３−イソチオシアナト−５−
カルボキシフェニル)ホウ素の真正の試料とともにヌク
レオシル(Nucleosil)ＨＰＬＣカラムから一緒に溶出す
る。
【００５４】実施例５Ａ：99 Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−イソチオシ
アナト−５−カルボキシフェニル)ホウ素 ＣＨ3ＣＮ(３ｍｌ)中の錯体化合物Ｔｃ(塩素)(ジメチル
グリオキシム)3[ＴｃＣｌ(ＤＭＧ3)](２３.８ｍｇ、０.
０４９ミリモル)に、１Ｍ ＨＣｌ(３滴)および３−イソ
チオシアナト−５−カルボキシフェニルボロン酸(１１.
５ｍｇ、０.０５１ミリモル)を加える。この反応混合物
を１５分間撹拌しながら５０℃に加熱する。ついで、等
容量の１Ｍ ＨＣｌで処理し、室温に冷却する。得られ
る赤−オレンジ色の沈殿をＣＨ3ＣＮ／１Ｍ ＨＣｌから
再結晶して分析的に純粋な針状晶(７５.５％収率)を
得、１.５Ｈ2Ｏ水和物として単離する。
【００５５】元素分析(Ｃ20Ｈ24Ｎ7ＢＣｌＯ8ＳＴｃ・
１.５Ｈ2Ｏとして)：計算値(実測値)：Ｃ３４.７６(３
４.５７)、Ｈ３.９０(３.９２)、Ｎ１３.９０(１４.１
１)。保持時間＝２.８５分、ヌクレオシルＨＰＬＣカラ
ム(ＡＣＮ／０.１Ｍ クエン酸＝６５：３５、１.５ｍｌ
／分)。
【００５６】実施例６ 99m Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシ
ム)3(３−イソチオシアナトフェニル)ホウ素の調製：５
ｍｌ容のシリコーン処理した血清バイアル中の１,２−
シクロヘキサンジオンジオキシム(１.５ｍｇ)、塩化ナ
トリウム(１００ｍｇ)、クエン酸(９ｍｇ)、ジエチレン
トリアミン五酢酸(ＤＴＰＡ；２ｍｇ)、ガンマシクロデ
キストリン(５０ｍｇ)および塩化スズ(５０μｇ)の凍結
乾燥混合物に、エタノール(５０μｌ)中の３−イソチオ
シアナトフェニルボロン酸(２.４ｍｇ)を加える。
【００５７】このバイアルに生理食塩水(１.０ｍｌ)中
の過テクネチウム酸ナトリウムを加え、ついで、これを
１００℃にて１５分間加熱する。高速液体クロマトグラ
フィー(ＨＰＬＣ)により決定されるＴｃ(塩素)(１,２−
シクロヘキサンジオンジオキシム)3(３−イソチオシア
ナトフェニル)ホウ素の収率は３３％であった。この錯
体化合物の試料は、下記実施例６Ａに記載のようにして
調製した99Ｔｃ標準の真正の試料とともにリクロソーブ
ＨＰＬＣカラムから一緒に溶出する。
【００５８】実施例６Ａ：99 Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシ
ム)3(３−イソチオシアナトフェニル)ホウ素：99Ｔｃ
(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシム)3(μ−ＯＨ)
ＳｎＣｌ3・３Ｈ2Ｏ(７７ｍｇ、０.０９５ミリモル)、
３−イソチオシアナトフェニルボロン酸(２２ｍｇ、０.
１２ミリモル)、エタノール(１０ｍｌ)および１Ｍ ＨＣ
ｌ(２ｍｌ)を含有する溶液を、空気中、小さなビーカー
中で１時間沸騰させる。この間に溶液の容量は２ｍｌま
で減少し、生成物のオレンジ色の結晶が沈殿する(６６
％収率)。この生成物をシリカゲルカラム上で精製し、
５％ＡＣＮ／９５％ＣＨ2Ｃｌ2で溶離し、溶媒を蒸発さ
せて分析的に純粋な生成物を得る。
【００５９】元素分析(Ｃ25Ｈ30Ｎ7ＢＣｌＯ6ＳＴｃと
して)：計算値(実測値)：Ｃ４２.６５(４２.７８)、Ｈ
４.４４(４.３１)、Ｎ１４.２６(１３.８７)。この錯体
化合物の試料は、８分の保持時間でリクロソーブＨＰＬ
Ｃカラムから溶出する(ＡＣＮ／０.１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ＝
９０／１０、ｐＨ４.６、１.５ｍｌ／分)。
【００６０】実施例７ 99m Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシ
ム)3(３−イソチオシアナト−５−カルボキシフェニル)
ホウ素の調製：３−イソチオシアナトフェニルボロン酸
の代わりに３−イソチオシアナト−５−カルボキシフェ
ニルボロン酸(３.０ｍｇ)を用いる他は実施例６に記載
の方法に従い、標記錯体化合物を３５％の収率で得た。
この錯体化合物の試料は、下記実施例１２Ａで調製する
標記錯体化合物の99Ｔｃ標準と同じ保持時間でヌクレオ
シルＨＰＬＣカラムから一緒に溶出する。
【００６１】実施例８ 99m Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3の調製：ボロン
酸誘導体を全く用いず、キットを１００℃で２.５分間
加熱する他は実施例４に記載の方法に従い、錯体化合物
99mＴｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3を７６％の収率
で得る。
【００６２】実施例９ 99m Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−イソチオ
シアナト−５−カルボキシフェニル)ホウ素の調製：実
施例８で調製した99mＴｃ(塩素)(ジメチルグリオキシ
ム)3に、エタノール(５０μｌ)中の３−イソチオシアナ
ト−５−カルボキシフェニルボロン酸(３.０ｍｇ)を加
える。この混合物を１００℃で５分間加熱して標記化合
物を６２％の収率で得る。この錯体化合物の試料は、実
施例５Ａの記載に従って調製した錯体化合物の真正の99
Ｔｃ標準と同じ保持時間でヌクレオシルＨＰＬＣカラム
から一緒に溶出する。
【００６３】実施例１０ 99m Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシ
ム)3の調製：ボロン酸を全く用いない他は実施例６に記
載の方法に従い、99mＴｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサ
ンジオンジオキシム)3を９２％の収率で得る。
【００６４】実施例１１ 99m Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシ
ム)3(３−イソチオシアナトフェニル)ホウ素の調製：実
施例１０で調製した99mＴｃ(塩素)(１,２−シクロヘキ
サンジオンジオキシム)3に、エタノール(５０μｌ)中の
３−イソチオシアナトフェニルボロン酸(２.４ｍｇ)を
加える。この混合物を１００℃で１５分間加熱する。こ
の方法で調製した標記錯体化合物の収率は４８.５％で
あった。この錯体化合物の試料は、実施例６Ａの記載に
従って調製した真正の99Ｔｃ標準と同じ保持時間でリク
ロソーブＨＰＬＣカラムから一緒に溶出する。
【００６５】実施例１２ 99m Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシ
ム)3(３−イソチオシアナト−５−カルボキシフェニル)
ホウ素の調製：99mＴｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサン
ジオンジオキシム)3の試料を実施例１０の記載と同様に
して調製する。この錯体化合物を単離し、下記のように
してハミルトン(Hamilton)ＰＲＰ−１樹脂上で精製する
ことにより、キット成分を除く。これらキット成分を上
記樹脂を含有する針−ハブ中に引き上げ、ついで、塩水
(１ｍｌ)、ＥｔＯＨ／塩水(２５／７５)(１ｍｌ)、Ｈ2
Ｏ(１ｍｌ)およびＥｔＯＨ(１ｍｌ)で濯ぐ。
【００６６】精製99mＴｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサ
ンジオンジオキシム)3を含有するエタノールフラクショ
ンの０.５ｍｌアリコートを、(３−イソチオシアナト−
５−カルボキシフェニル)ホウ素(１.５ｍｇ)および１Ｎ
−ＨＣｌ(５０μｌ)を入れたバイアルに加える。このキ
ットを１００℃で５分間加熱する。この手順により標記
錯体化合物が８１.７％の収率で得られる。この錯体化
合物の試料は、下記実施例１２Ａに記載するようにして
調製した錯体化合物の真正の99Ｔｃ標準と同じ保持時間
でＨＰＬＣカラムから一緒に溶出する。
【００６７】実施例１２Ａ：99 Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシ
ム)3(３−イソチオシアナト−５−カルボキシフェニル)
ホウ素：ＡＣＮ(３ｍｌ)中に溶解した99Ｔｃ(塩素)(１,
２−シクロヘキサンジオンジオキシム)3(４.０ｍｇ)
に、３−イソチオシアナト−５−カルボキシフェニルボ
ロン酸(１.５ｍｇ)および３Ｍ ＨＣｌ(３滴)を加える。
この溶液を穏やかに２０分間加熱する。錯体化合物99Ｔ
ｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシム)
3(３−イソチオシアナト−５−カルボキシフェニル)ホ
ウ素が定量的収率で得られる。この錯体化合物の試料
は、速原子衝撃の質量分析により強い分子イオンピーク
ＭＨ+が得られ、またヌクレオシルＨＰＬＣカラム上で
の保持時間は８.０分であった(ＡＣＮ／０.１Ｍクエン
酸＝６０／４０、１.５ｍｌ／分)。
【００６８】実施例１３ 99m Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(ｐ−ブロモメ
チルフェニル)ホウ素の調製：５ｍｌ容のシリコーン処
理した血清バイアル中のジメチルグリオキシム(２.０ｍ
ｇ)、塩化ナトリウム(１００ｍｇ)、クエン酸(１８ｍ
ｇ)、ジエチレントリアミン五酢酸(ＤＴＰＡ；１ｍ
ｇ)、ガンマシクロデキストリン(５０ｍｇ)および塩化
スズ(５０μｌ)の凍結乾燥混合物に、２.０ｍｇのｐ−
ブロモメチルフェニルボロン酸、(ＯＨ)2ＢＰｈ−ＣＨ2
Ｂｒを加える。
【００６９】このバイアルに生理食塩水(０.２５ｍｌ)
中のナトリウムパーテクネテートを加え、ついでメタノ
ール(１.０ｍｌ)を加える。このキットを１００℃で１
０分間加熱する。高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬ
Ｃ)により決定されるＴｃ(塩素)(ジメチルグリオキシ
ム)3(４−ブロモメチルフェニル)ホウ素の収率は５.７
％であった。
【００７０】実施例１４ 99m Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−イソチオ
シアナトフェニル)ホウ素(Ｔｃ−ＤＭＧ−ＢＰＩＴＣ)
を用いたグリシンの標識：実施例４の記載と同様にして
調製した99mＴｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−
イソチオシアナトフェニル)ホウ素(Ｔｃ−ＤＭＧ−ＢＰ
ＩＴＣ)の溶液を、逆相樹脂上に吸着させることにより
精製する(実施例１２と同様)。この樹脂を５０％エタノ
ール／５０％通常食塩水で洗浄して不純物および過剰の
ボロン酸を除去した後、所望の錯体化合物をエタノール
で樹脂から溶離する。このエタノール溶液の２００μｌ
アリコートを２００μｌのグリシン(０.１Ｍリン酸ナト
リウム緩衝液、ｐＨ９.０中、２０ｍｇ／ｍｌ)と混合す
る。この混合物を３７℃で１時間インキュベートする。
この反応物をＨＰＬＣにより分析したところ、この時点
で出発物質はすべて消失していた。Ｔｃ−標識グリシン
(Ｔｃ−ＤＭＧ−ＢＰＩＴＣ−グリシン)の収率は、ＨＰ
ＬＣによる測定で８８％であった。
【００７１】実施例１５ 99m Ｔｃ−ＤＭＧ−ＢＰＩＴＣを用いたポリリジンの標
識：実施例４に記載のようにして調製し実施例１４に記
載のようにして精製したＴｃ(塩素)(ジメチルグリオキ
シム)3(３−イソチオシアナトフェニル)ホウ素(Ｔｃ−
ＤＭＧ−ＢＰＩＴＣ)の試料を窒素流で蒸発乾固する。
この錯体化合物をＤＭＳＯ(５０μｌ)中に再溶解し、こ
のＤＭＳＯ溶液(１０μｌ)を、ポリリジン(平均分子量
＝１０２,０００；０.５ｍｇ)を含有する０.１Ｍリン酸
ナトリウム緩衝液(ｐＨ９.０、１００μｌ)に加える。
３７℃で２時間インキュベートした後、Ｔｃ−標識ポリ
リジン(Ｔｃ−ＤＭＧ−ＢＰＩＴＣ−ポリリジン)の収率
は、ピンカートン(Pinkerton)ＩＳＲＰカラム上のＨＰ
ＬＣによる評定で３６％であった。
【００７２】実施例１６ 99m Ｔｃ−ＤＭＧ−ＢＰＩＴＣを用いたマウスＩｇＧの
標識：実施例４に記載のようにして調製し実施例１４に
記載のようにして精製したＴｃ(塩素)(ジメチルグリオ
キシム)3(３−イソチオシアナトフェニル)ホウ素(Ｔｃ
−ＤＭＧ−ＢＰＩＴＣ)の試料を窒素流で蒸発乾固す
る。この錯体化合物をＤＭＳＯ(５０μｌ)中に再溶解
し、このＤＭＳＯ溶液(１０μｌ)を、マウスＩｇＧ(０.
５ｍｇ)を含有する０.１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液(ｐ
Ｈ９.５、１００μｌ)に加える。３７℃で２.５時間イ
ンキュベートした後、Ｔｃ−標識マウスＩｇＧの収率
は、ピンカートンＩＳＲＰカラム上のＨＰＬＣによる評
定で３４％であった。
【００７３】実施例１７ 99m Ｔｃ−ＤＭＧ−ＢＰＩＴＣを用いたモノクローナル
抗体Ｂ７２.３の標識：実施例４に記載のようにして調
製し実施例１４に記載のようにして精製したＴｃ(塩素)
(ジメチルグリオキシム)3(３−イソチオシアナトフェニ
ル)ホウ素(Ｔｃ−ＤＭＧ−ＢＰＩＴＣ)の試料を窒素流
で蒸発乾固する。この錯体化合物をＤＭＳＯ(５０μｌ)
中に再溶解し、このＤＭＳＯ溶液(１０μｌ)を、抗体Ｂ
７２.３(１.０ｍｇ)を含有する０.１Ｍリン酸ナトリウ
ム緩衝液(ｐＨ９.５、１００μｌ)に加える。この抗体
は、コルチャー(D.Colcher)らのNucl.Med.Biol.,Vol.１
４(３)２５１〜２６２頁(１９８７)に記載されている。
３７℃で２.０時間インキュベートした後、Ｔｃ−標識
Ｂ７２.３抗体の収率は、ＩＳＲＰ−ＴＳＫカラム上の
ＨＰＬＣによる評定で１０％であった。
【００７４】実施例１８ 99m Ｔｃ−ＤＭＧ−ＮＣＳ−ＣＯＯＨを用いたモノクロ
ーナル抗体Ｂ７２.３の標識：実施例５に記載のように
して調製し実施例１４に記載のようにして精製したＴｃ
(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−カルボキシ−５−
イソチオシアナトフェニル)ホウ素(Ｔｃ−ＤＭＧ−ＮＣ
Ｓ−ＣＯＯＨ)の試料を窒素流で蒸発乾固する。この錯
体化合物を、抗体Ｂ７２.３(１.０ｍｇ)を含有する０.
１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ９.５、１００μｌ)
に再溶解する。３７℃で２.０時間インキュベートした
後、Ｔｃ−標識Ｂ７２.３抗体の収率は、ＩＳＲＰ−Ｔ
ＳＫカラム上のＨＰＬＣによる評定で３４％であった。
【００７５】実施例１９ 99m Ｔｃ−ＤＭＧ−ＮＣＳ−ＣＯＯＨで標識したモノク
ローナル抗体Ｂ７２.３のアフィニティークロマトグラ
フィー：実施例１８に記載したようにして調製した99m
テクネチウム標識Ｂ７２.３の試料を一連に連結したＩ
ＳＲＰおよびＴＳＫカラムに通すことにより過剰の標識
試薬から精製する。この精製抗体のアリコート(約５０,
０００ｃｐｍ／１２８ｎｇタンパク質)をＴＡＧ−７２
アフィニティーカラム上に負荷し、室温でインキュベー
トする。カラムをＰＢＳ緩衝液で洗浄して非特異的結合
タンパク質を溶離する。ついで、活性標識抗体を６Ｍグ
アニジンを用いてカラムから溶離する。この抗体の免疫
反応性(％として表示)は、[(グアニジンで溶出したｃｐ
ｍ活性／カラムから溶出した全ｃｐｍ活性)×１００]と
定義される。７２％の免疫反応性が認められた。比較の
ため、125ヨウ素を用いて標準法で標識したＢ７２.３試
料は、ＴＡＧ−７２アフィニティーカラムを用いたアッ
セイで５５〜６０％であった。
【００７６】実施例２０ 腫瘍を有するマウス中での99mＴｃ−標識Ｂ７２.３の生
体内分布：腫瘍を有する(ＧＷ３９腫瘍株)ヌードマウス
に、実施例１８の記載により調製し実施例１９の記載に
より精製したＴｃ−標識Ｂ７２.３(１０〜２０μＣｉ)
を注射する。被験動物を２時間後または２４時間後に屠
殺し(各時点でｎ＝５動物)、目的臓器を切開し、放射能
をカウントする。比較のため、131ヨウ素標識Ｂ７２.３
を腫瘍を有するマウスのコントロール群に注射する。こ
の実験から得られたデータ(第１表に示す)は、ヨウ素お
よびＴｃ標識Ｂ７２.３の両方が腫瘍中に特異的に局在
していることを示していた。
【００７７】実施例２１ 99m Ｔｃ−ＤＭＧ−ＮＣＳ−ＣＯＯＨを用いたモノクロ
ーナル抗体ＮＰ−４の標識：実施例５に記載のようにし
て調製し実施例１４に記載のようにして精製したＴｃ
(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−カルボキシ−５−
イソチオシアナトフェニル)ホウ素(Ｔｃ−ＤＭＧ−ＮＣ
Ｓ−ＣＯＯＨ)の試料を窒素流で蒸発乾固する。この錯
体化合物を、抗体ＮＰ−４(ＣＭＭＩ、ニューアーク、
ニュージャージー；１.０ｍｇ)を含有する０.１Ｍリン
酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ９.５、１００μｌ)中に再溶
解する。３７℃で２.０時間インキュベートした後、Ｔ
ｃ−標識ＮＰ−４抗体の収率は、ＩＳＲＰ−ＴＳＫカラ
ム上のＨＰＬＣによる評定で４０％であった。
【００７８】実施例２２ 99m Ｔｃ−ＤＭＧ−ＮＣＳ−ＣＯＯＨで標識したモノク
ローナル抗体ＮＰ−４のアフィニティークロマトグラフ
ィー：実施例２１に記載したようにして調製した99mテ
クネチウム標識ＮＰ−４の試料をＩＳＲＰ−ＴＳＫ Ｈ
ＰＬＣカラムに通すことにより過剰の標識試薬から精製
する。この精製抗体のアリコート(約５０,０００ｃｐｍ
／１２８ｎｇタンパク質)を抗ＣＥＡ７２アフィニティ
ーカラム上に負荷し、室温でインキュベートする。カラ
ムをＰＢＳ緩衝液で洗浄して非特異的結合タンパク質を
溶離する。ついで、活性標識抗体を６Ｍグアニジンを用
いてカラムから溶離する。この抗体の免疫反応性(％と
して表示)は、[(グアニジンで溶出したｃｐｍ活性／カ
ラムから溶出した全ｃｐｍ活性)×１００]と定義され
る。９５.８％の免疫反応性が認められた。
【００７９】実施例２３ 腫瘍を有するマウス中での99mＴｃ−標識ＮＰ−４の生
体内分布：腫瘍を有する(ＧＷ３９腫瘍株)ヌードマウス
に、実施例２１の記載により調製し実施例２２の記載に
より精製したＴｃ−標識ＮＰ−４(５０μＣｉ)を注射す
る。被験動物を２時間後または２４時間後に屠殺し(各
時点でｎ＝６動物)、目的臓器を切開し、放射能をカウ
ントする。この実験から得られたデータ(第２表に示す)
は、腫瘍中での９９ｍ−Ｔｃ標識ＮＰ−４の特異的局在
を示していた。２４時間の時点で、腫瘍１ｇ当たり平均
１６.５６％の注射投与量が観察された。
【００８０】実施例２４ 99m Ｔｃ−ＤＭＧ−ＮＣＳ−ＣＯＯＨを用いたモノクロ
ーナル抗体ＮＰ−４のＦ(ａｂ')2断片の標識：実施例５
に記載のようにして調製し実施例１４に記載のようにし
て精製したＴｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−カ
ルボキシ−５−イソチオシアナトフェニル)ホウ素(Ｔｃ
−ＤＭＧ−ＮＣＳ−ＣＯＯＨ)の試料を窒素流で蒸発乾
固する。この錯体化合物を、抗体ＮＰ−４のＦ(ａｂ')2
断片(ＣＭＭＩ、ニューアーク、ニュージャージー；１.
０ｍｇ)を含有する０.１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液(ｐ
Ｈ９.５、１００μｌ)中に再溶解する。３７℃で２.０
時間インキュベートした後、Ｔｃ−標識ＮＰ−４−Ｆ
(ａｂ')2の収率は、ＩＳＲＰ−ＴＳＫカラム上のＨＰＬ
Ｃによる評定で１５.２％であった。
【００８１】実施例２５ 99m Ｔｃ−ＤＭＧ−ＮＣＳ−ＣＯＯＨで標識したモノク
ローナル抗体ＮＰ−４のＦ(ａｂ')2断片のアフィニティ
ークロマトグラフィー：実施例２４に記載したようにし
て調製した99mテクネチウム標識ＮＰ−４−Ｆ(ａｂ')2
の試料をＩＳＲＰ−ＴＳＫ ＨＰＬＣカラムに通すこと
により過剰の標識試薬から精製する。この精製抗体のア
リコート(約３０,０００ｃｐｍ／１００ｎｇタンパク
質)を抗ＣＥＡ７２アフィニティーカラム上に負荷し、
室温でインキュベートする。ついで、カラムをＰＢＳ緩
衝液で洗浄して非特異的結合タンパク質を溶離する。つ
いで、活性標識抗体を６Ｍグアニジンを用いてカラムか
ら溶離する。この抗体の免疫反応性(％として表示)は、
[(グアニジンで溶出したｃｐｍ活性／カラムから溶出し
た全ｃｐｍ活性)×１００]と定義される。９４％の平均
免疫反応性が認められた。
【００８２】実施例２６ 腫瘍を有するマウス中での99mＴｃ−標識ＮＰ−４−Ｆ
(ａｂ')2断片の生体内分布：腫瘍を有する(ＧＷ３９腫
瘍株)ヌードマウスに、実施例２４の記載により調製し
実施例２５の記載によりＨＰＬＣ精製したＮＰ−４のＴ
ｃ−標識Ｆ(ａｂ')2断片(２０〜３０μＣｉ)を注射す
る。被験動物を２時間後または２４時間後に屠殺し(各
時点でｎ＝６動物)、目的臓器を切開し、放射能をカウ
ントする。この実験から得られたデータ(第３表に示す)
は、腫瘍中での９９ｍ−Ｔｃ標識ＮＰ−４Ｆ(ａｂ')2断
片の特異的局在を示していた。２４時間の時点で、腫瘍
１ｇ当たり平均１０.５％の注射投与量が観察された。
【００８３】実施例２７ Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシム)3
(３−イソチオシアナト−５−カルボキシフェニル)ホウ
素を用いたモノクローナル抗体Ｂ７２.３の標識： 99m
Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシム)3
(３−イソチオシアナト−５−カルボキシフェニル)ホウ
素の試料を実施例１２に記載のようにして調製し、通常
食塩水(２ｍｌ)で希釈し、実施例１４に記載のようにし
て精製し、窒素流で蒸発乾固する。この錯体化合物を、
モノクローナル抗体Ｂ７２.３(１.０ｍｇ)を含有する
０.１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ９.５、１００μ
ｌ)中に再溶解する。３７℃で２時間インキュベートし
た後、99mＴｃ−標識Ｂ７２.３の収率は、ＩＳＲＰ−Ｔ
ＳＫカラム上のＨＰＬＣによる評定で７.４％であっ
た。
【００８４】第１表：腫瘍(ＧＷ３９)を有するヌードマ
ウス中での99mＴｃ標識Ｂ７２.３(a)と131Ｉ標識Ｂ７
２.３(b)の生体内分布の比較 ａ．99mＴｃ−Ｂ７２.３(実施例１８から）
【表１】
【表２】
【００８５】第２表：腫瘍（ＧＷ３９)を有するヌード
マウス中での99mＴｃ−ＮＰ−４全抗体の生体内分布
【表３】
【００８６】第３表：腫瘍(ＧＷ３９)を有するヌードマ
ウス中での99mＴｃ−ＮＰ−４ Ｆ(ａｂ')2の生体内分布
【表４】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 コンデアディアー・ラマリンガム アメリカ合衆国ニュージャージー州ノー ス・ブランズウィック、クランベリー・ クロス・ロード743−ビー番 (56)参考文献 特開 昭61−238794（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−212099（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−132594（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−104992（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07F 13/00 G01N 33/58 G01N 33/534 ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ)

Claims (13)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式： ＭＸ(Ｙ)3Ｚ (Ｉ) [式中、Ｍはテクネチウムまたはレニウムの同位体； Ｘはアニオン； Ｙは式： 【化１３】 (式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立に水素、ハロゲ
    ン、アルキル、アリールまたは５員または６員の窒素、
    硫黄または酸素含有複素環であるかまたはＲ1とＲ2とが
    一緒になって−(ＣＲ8Ｒ9)n−(式中、ｎは３、４、５ま
    たは６であり、Ｒ8およびＲ9はそれぞれ独立に水素また
    はアルキルである)を形成する)で示されるビシナルジオ
    キシムまたは薬理学的に許容し得るその塩； Ｚは式： 【化１】 (式中、(Ａ1)は、アルキレン、アルケニレン、シクロア
    ルキレン、シクロアルケニレン、オキサアルキレン、ヒ
    ドロキシアルキレン、カルボキシアルキレン、アルキレ
    ンアミド、アルキレンスルホネート、アリーレン、アリ
    ールアルキレン、ヘテロシクロ、−ＣＨ2−、−ＣＨＲ6
    −、−ＣＲ6Ｒ10−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲ11
    −、−ＣＲ6＝ＣＲ12−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｏ−、−Ｓ
    −、−ＣＯ−、−ＨＣ＝Ｎ−、−ＣＲ6＝Ｎ−、または
    −ＮＲ6−(式中、Ｒ6、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12は、それ
    ぞれ独立にアルキル、アルケニル、アルコキシ、アリー
    ル、５員または６員の窒素原子含有複素環、ハロゲン、
    −ＯＨまたはヒドロキシアルキルから選ばれた基であ
    る)よりなる群から選ばれた残基；ｐは０または１〜１
    ００の整数、好ましくは１〜２０；Ｒ3は−ＮＣＳ、−
    ＮＣＯ、−Ｏ−トシル、−Ｏ−メシチルまたはアシルハ
    ライド，エステル、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミ
    ドよりなる群から選ばれた、アミンおよびタンパク質と
    反応性の官能基；Ｒ4は水素、または−ＯＨ、−ＣＯＯ
    Ｈ、−ＳＯ3Ｈ、アルキルスルホネート，−ＳＯ2Ｎ
    Ｈ2、カルボキシアルキル、およびヒドロキシアルキル
    よりなる群から選ばれた水溶性付与官能基)で示される
    ホウ素誘導体である]で示される、タンパク質およびア
    ミン標識試薬として有用なジオキシム配位子へのボロン
    酸付加物の金属錯体または薬理学的に許容しうるその
    塩。
  2. 【請求項２】 Ａ1が−ＣＨ2−であり、Ｒ3が３−イソ
    チオシアナトであり、Ｒ4が５−位に位置している、請
    求項１に記載の錯体。
  3. 【請求項３】 ＸがＣｌ-またはＯＨ-であり、ジオキシ
    ム部分がジメチルグリオキシム、１,２−エタンジオン
    ジオキシム、１,２−シクロペンタンジオンジオキシム
    または１,２−シクロヘキサンジオンジオキシムであ
    る、請求項１または２に記載の錯体。
  4. 【請求項４】 Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオ
    ンジオキシム)3(３−カルボキシ−５−イソチオシアナ
    トフェニルホウ素)、Ｔｃ(塩素)(１,２−シクロヘキサ
    ンジオンジオキシム)3(３−イソチオシアナトフェニル
    ホウ素)、Ｒｅ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジ
    オキシム)3(３−イソチオシアナトフェニルホウ素)、Ｒ
    ｅ(塩素)(１,２−シクロヘキサンジオンジオキシム)
    3(３−カルボキシ−５−イソチオシアナトフェニルホウ
    素)、Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(３−イソチ
    オシアナトフェニルホウ素)、Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリ
    オキシム)3(３−カルボキシ−５−イソチオシアナトフ
    ェニルホウ素)、Ｒｅ(塩素)(ジメチルグリオキシム)
    3(３−イソチオシアナトフェニルホウ素)、Ｒｅ(塩素)
    (ジメチルグリオキシム)3(３−カルボキシ−５−イソチ
    オシアナトフェニルホウ素)、Ｔｃ(塩素)(ジメチルグリ
    オキシム)3(４−イソチオシアナトフェニルホウ素)、ま
    たはＲｅ(塩素)(ジメチルグリオキシム)3(４−イソチオ
    シアナトフェニルホウ素)である請求項１に記載の錯
    体。
  5. 【請求項５】 請求項１に記載の錯体の製造方法であっ
    て、 (ａ)テクネチウムまたはレニウム源、アニオン源、式
    (ＶＩＩ)： (ＯＨ)2(Ａ1)p−Ｅ (式中、(Ａ1)、ｐおよびＥは請求項１に記載と同じ)で
    示されるボロン酸誘導体、および式： 【化１４】 (式中、Ｒ1およびＲ2は請求項１に記載と同じ)で示され
    るビシナルジオキシムまたは薬理学的に許容し得るその
    塩を結合させるか、または (ｂ)上記式(ＶＩＩ)で示されるボロン酸誘導体を式： ＸＭ[Ｒ1Ｃ(ＮＯＨ)−ＣＲ2(ＮＯＨ)]3 (式中、Ｘ、Ｒ1、Ｒ2およびＭは請求項１に記載と同じ)
    で示されるジオキシム化合物と反応させることからなる
    方法。
  6. 【請求項６】 式： 【化３】 (式中、(Ａ1)は、アルキレン、アルケニレン、シクロア
    ルキレン、シクロアルケニレン、オキサアルキレン、ヒ
    ドロキシアルキレン、カルボキシアルキレン、アルキレ
    ンアミド、アルキレンスルホネート、アリーレン、アリ
    ールアルキレン、ヘテロシクロ、−ＣＨ2−、−ＣＨＲ6
    −、−ＣＲ6Ｒ10−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲ11
    −、−ＣＲ6＝ＣＲ12−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｏ−、−Ｓ
    −、−ＣＯ−、−ＨＣ＝Ｎ−、−ＣＲ6＝Ｎ−、または
    −ＮＲ6−(式中、Ｒ6、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12は、それ
    ぞれ独立にアルキル、アルケニル、アルコキシ、アリー
    ル、５員または６員の窒素原子含有複素環、ハロゲン、
    −ＯＨまたはヒドロキシアルキルから選ばれた基であ
    る)よりなる群から選ばれた残基；ｐは０または１〜１
    ００の整数、好ましくは１〜２０；Ｒ3は−ＮＣＳ、−
    ＮＣＯ、−Ｏ−トシル、−Ｏ−メシチルまたはアシルハ
    ライド、エステル、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミ
    ドよりなる群から選ばれた、アミンおよびタンパク質と
    反応性の官能基；Ｒ4は水素、または−ＯＨ、−ＣＯＯ
    Ｈ、−ＳＯ3Ｈ、アルキルスルホネート，−ＳＯ2Ｎ
    Ｈ2、カルボキシアルキル、およびヒドロキシアルキル
    よりなる群から選ばれた水溶性付与官能基)で示される
    ボロン酸化合物。
  7. 【請求項７】 ３−イソチオシアナトフェニルボロン
    酸、４−イソチオシアナトフェニルボロン酸、または３
    −カルボキシ−５−イソチオシアナトフェニルボロン酸
    である請求項６に記載のボロン酸誘導体。
  8. 【請求項８】 99mテクネチウムまたは同位体レニウム
    で標識するのに適したキットであって、 (i)アニオン源、たとえばＣｌ-、 (ii)式： 【化４】 [式中、Ａ1はアルキレン、アルケニレン、シクロアルキ
    レン、シクロアルケニレン、オキサアルキレン、ヒドロ
    キシアルキレン、カルボキシアルキレン、アルキレンア
    ミド、アルキレンスルホネート、アリーレン、アリール
    アルキレン、ヘテロシクロ、−ＣＨ2−、−ＣＨＲ6−、
    −ＣＲ6Ｒ10−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲ11−、
    −ＣＲ6＝ＣＲ12−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−
    ＣＯ−、−ＨＣ＝Ｎ−、−ＣＲ6＝Ｎ−、または−ＮＲ6
    −(式中、Ｒ6、Ｒ10、Ｒ11およびＲ12は、それぞれ独立
    にアルキル、アルケニル、アルコキシ、アリール、５員
    または６員の窒素原子含有複素環、ハロゲン、−ＯＨま
    たはヒドロキシアルキルから選ばれた基である)よりな
    る群から選ばれた残基；ｐは０または１〜１００の整
    数、好ましくは１〜２０；Ｒ3は−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、
    −Ｏ−トシル、−Ｏ−メシチルまたはアシルハライド、
    エステル、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドよりな
    る群から選ばれた、アミンおよびタンパク質と反応性の
    官能基；Ｒ4は水素、または−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−Ｓ
    Ｏ3Ｈ、アルキルスルホネート，−ＳＯ2ＮＨ2、カルボ
    キシアルキル、およびヒドロキシアルキルよりなる群か
    ら選ばれた水溶性付与官能基]で示されるボロン酸化合
    物、 (iii)式： 【化１５】 (式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立に水素、ハロゲ
    ン、アルキル、アリールまたは５員または６員の窒素、
    硫黄または酸素含有複素環であるかまたはＲ1とＲ2とが
    一緒になって−(ＣＲ8Ｒ9)n−(式中、ｎは３、４、５ま
    たは６であり、Ｒ8およびＲ9はそれぞれ独立に水素また
    はアルキルである)を形成する)で示されるビシナルジオ
    キシムまたは薬理学的に許容し得るその塩；および (iv)任意に還元剤を含むキット。
  9. 【請求項９】 ビシナルジオキシムが１,２−シクロヘ
    キサンジオンジオキシムまたは２,３−ブタンジオンジ
    オキシムであり、ボロン酸化合物が３−カルボキシ−５
    −イソチオシアナトフェニルボロン酸または３−イソチ
    オシアナトフェニルボロン酸である請求項８に記載のキ
    ット。
  10. 【請求項１０】 請求項１から４のいずれかに記載の金
    属錯体とアミン含有化合物との反応によって生成される
    結合体であって、該アミン含有化合物がタンパク質、た
    とえばフィブリン、フィブリノーゲンおよび低密度リポ
    タンパク質、ポリペプチド、ホルモン、アミン含有ステ
    ロイド、アミノ酸、またはアミン含有薬物および化合物
    である、結合体。
  11. 【請求項１１】 該ポリペプチドが抗体、たとえばモノ
    クローナル抗体、または抗体フラグメント、たとえばＦ
    ａｂである、請求項１０に記載の結合体。
  12. 【請求項１２】 癌標的部位に対して免疫反応性かつ免
    疫特異的である、請求項１１に記載の結合体。
  13. 【請求項１３】 請求項１から４のいずれかに記載の金
    属錯体を含む、癌の診断または治療用医薬組成物。
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