JPH04500376A

JPH04500376A - 蛋白質の放射性標識用の放射性核種金属キレート

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Publication number: JPH04500376A
Application number: JP2510108A
Authority: JP
Inventors: グスタフソン，リンダ　エム; スリニバサン，アナンサチャリ; カシナ，スダカール; フリッツバーグ，アラン　アール
Original assignee: ネオレックス、コーポレイション
Priority date: 1989-06-16
Filing date: 1990-06-15
Publication date: 1992-01-23
Also published as: DE69023616T2; DE69023616D1; CA2031528C; ATE130303T1; AU645258B2; EP0431146A4; CA2031528A1; EP0431146B1; AU5956790A; WO1990015808A1; EP0431146A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】蛋白質の放射性標識用の放射性核種金属キレート背景放射性標識抗体は診断上及び治療上の様々な医療手法に使用されている。モノクローナル抗体は、ポリクローナル抗体に較べて特異性が高いため、ラジオアイソトープ類のような診断薬又は治療薬をｉｎ　ｖｉｖｏで所望の標識部位に到達させるのに一層有用となっている。腫瘍細胞等の所望のタイプの標的細胞に特異的なモノクローナル抗体は、その標的細胞に対し、抗体に結合させた治療用放射性核種を到達させ、それによりその望ましからざる標的細胞を照射するのに使用することができるであろう、一方、診断上有効な放射性核種を結合担持させたモノクローナル抗体を投与することもでき、そうすればその放射性標識抗体が標的組織上に局在する。そこで、患者内部の該標的部位の存在を検出するのに通常の診断手法を使用することができよう。

抗体等の蛋白質を放射性標識するための一つの方法は、放射性核種金属キレートを蛋白質に結合させることである。様々な化学構造のキレート類がこの目的のために開発されている。このようなキレートａの有用性は、例えばキレート内における放射性核種の結合の安定性やキレートと所望の蛋白質との反応性等多くの要素に依存するものである。所望の放射性核種金属キレートを製するためには、キレート剤化合物の放射性標識化の効率もまた重要である。他に考慮すべきことは、放射性標識抗体及びそれらの異化物のｉｎ　ｖｉｖｏにおける生体内分布である。非標的組織への局在が、投与し得る治療用放射性標識抗体の総投与量を制限し、これによって治療効果を低下させる０診断手法においては、非標的組織への局在は望ましくないバックグラウンドを生じ及び／又は誤診を招き得る。抗体のような蛍白質の放射性標識に用いられる放射性核種金属キト・−ト化合物のこれらの及びその他の性質の改良が要望されている。

本発明は式、（式中、Ｒはそれぞれ独立して＝０、Ｈｌ、低級アルキル基、−（ＣＨｔ　）ｎ　Ｃ０ＯＨ，又はＲｒ　Ｚを表し、ｎはＯ乃至約３であり、Ｒ２は低級アルキル基又は置ｔＡ基を有する低級アルキル基を表し、Ｚは蛋白質結合基又は間接的蛋白質を表し、Ｒ１はそれぞれ独立して、Ｈｚ、低級アルキル基、（ＣＨｚ）ｒ＋−ＣＯＯＨ，又はＲｒ　Ｚを表し、ｍはそれぞれＯ又は１であるが、最大でも１個のｍが１であり、Ｔはそれぞれイオウ保護基を表し、並びに、該化合物は少な（とも１個の−（ＣＨ！　）ｎ　Ｃ０ＯＨ置換基及び１個の−Ｒ＋　Ｚ置換基を含んでなる。）で示される化合物を提供する。

本発明はまた式、（式中、Ｍは放射性核種金属又はそのオキシドを表し、他の記号は上記に同じである。）で示される、放射性核種金属キレート化合物をも提供する。

これらの化合物は、抗体等の間接的蛋白質を含んでなり又は、これらの化合物が間接的蛋白質に結合するための結合基を含んでなる、該キレート剤化合物は、これを間接的蛋白質と結合させ次いで放射性！！識を施してもよい、或いは、放射性核種金属キレート化合物を先ず調製し、次いで間接的蛋白質に結合してもよい、得られる放射性標識向標的蛋白質は診断上及び治療上の医療手法において有用である。間接的蛋白質の一例は癌細胞に結合するモノクローナル抗体である。

本発明の化合物上に存するカルボン酸置換基は、放射性核種のキレート化を助は且つ該放射性標識同種的蛋白質の異化物の改良された生体内分布特性に寄与していると考えられる。腸管内への放射能局在の低下が、本発明の放射性標識同種的蛋白質の使用により達成される。

図面の簡単な説明ＦＩＧ、１−７は、本発明の一定のキレート剤化合物の製造に使用できる化学的合成方法を描いたものである。

発明の詳細な説明本発明は、キレート剤化合物及びこれから製造される放射性核種金属キレート化合物、並びに該キレートを結合担持した放射性標識蛋白質を提供する９本発明の放射性核種金属キレートは、抗体等の間接的蛋白質に結合させて、診断的又は治療的用途を有する放射性標識向標的蛋白質を形成する。該化合物は間接的蛋白質を含んでなるか又は間接的蛋白質に該化合物が結合するための蛋白質結合基を含んでなる。該化合物はまた、少なくとも１個のカルボン酸置換基を含んでなる。

これらの化合物により達成される放射性標ｍｌ（すなわちキレート形成）の収率が良好であるのは、少なくとも部分的には、該カルボン酸置換基の存在に因るものであると考えられる０本発明の放射性標識蛋白質の生体内分布特性が改良されているのもまた、少なくとも部分的には該キレート上のカルボン酸置換基に因ると考えられる。

本発明が提供するのは、次の式、（式中、Ｒはそれぞれ独立して、−〇、Ｈ２％低級アルキル基、−（ＣＨｚ　）ｎ　ＣＯＯＨｌ又はＲ＋　Ｚを表し、ｎは０乃至３であり、Ｒ，は低級アルキル基又は置換基を有する低級アルキル基を表し、Ｚは蛋白質結合基又は同種的蛋白質を表し、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈｚ、低級アルキル基、（ＣＨｉ）ｎ−ＣＯＯＨｌ又はＲ，−Ｚを表し、ｍはそれぞれ０又は１であるが、最大でも１個のｍが１であり、Ｔはそれぞれイオウ保護基を表し、並びに、該化合物は少なくとも１個の−（ＣＨｚ　）ｎ　ＣＯＯＨ置換基及び１個の−Ｒ，−Ｚ置ｍ基を含んでなる。）で示されるキレート剤化合物である。

上記に提示したキレート剤化合物は放射性標識されて式、（式中、Ｍは放射性核種金属又はそのオキシドを表し、他の記号はいずれも上記に同じである。）で示される、対応する放射性核種金属キレートを提供する。

蛋白質結合基は、蛋白質を変性したり有害な影響を与えたりすることのない条件下で蛋白質と反応する化学的に反応性の官能基である９、従って、反応を実質的に水溶液中で行うことができ、例えば該蛋白質の変性を起こすような高い温度への加熱を余儀なくされることのないよう、該蛋白質結合基は蛋白質上の官能基との反応性が十分に高いものである。適当な蛋白質結合基の例としては、活性エステル類、イソチオシアネート類、アミン類、ヒドラジン類、チオール類及びマレイミド類があるがこれらに限定されるわけではない。

好ましい活性エステルのうちには、チオフェニルエステル、２，３．５．６−チトラフルオロフエニルエステル、及び２．３，５．６−チトラフルオロチオフエニルエステルがある。好ましい活性エステルはフェニル環のパラ位（すなわち４位）に、水溶性を高める基を含んでいてもよい。かかる基の例としては、Ｃｏ、Ｈ，、ＳＯｓ　−１ＰＯｓ”−、ＯＰＯ，”−、及び０（ＣＨｔ　ＣＨｚ　０）ｎＣＨｓ基がある。

蛋白質結合基（上記の式中Ｚで表されている）はＲ１で表される架橋を介してキレート剤化合物核に結合している。Ｒ１は低級アルキル基又は置換基を有する低級アルキル基である。［低級アルキル基Ｊなる語は、好ましくは１乃至４個の炭素原子よりなるアルキル基を意味する。最も好ましくは、Ｒ８は２乃至３個の炭素原子よりなるメチレン鎖である。該低級アルキル基は酸素原子又は窒素原子のようなヘテロ原子によって置換されていてもよい。該蛋白質結合基が一級アミンであるときは、Ｒ１架橋は該末端−級アミン蛋白質結合基に直接に隣接するメチレン基を含んでなる。

ここに用いる「同種的蛋白質」なる語は、ｉｎ　ｖｉｖｏにて所望の標的部位に結合することのできる蛋白質をいう、該同種的蛋白質は、標的細胞上の受容体、基質、抗原決定基若しくは他の結合部位又は他の標的部位に結合するものであってよい、該同種的蛋白質は、これに結合した放射性核種をｉｎ　ｖｉｖｏにて所望の標的部位に到達させる働きをする。同種的蛋白質の例としては、抗体及び抗体フラグメント、ホルモン、繊維素溶解酵素及び生物学的反応調節物質があるが、これらに限定されるものではない、「同種的蛋白質」なる語は、蛋白質、ポリペプチド及びこれらのフラグメントを包含する。加えて、厳密には蛋白質ではないが、ｉｎ　ｖｉｖｏで所望の標的部位に局在する他の分子も、ここで用いる［同種的蛋白［Ｊの語の定義に包含される。例えば、ある種の炭水化物又は糖蛋白質も本発明において使用することができる。所望の生物学的特性（すなわち標的部位に結合する能力）が維持される限り、該蛋白質は、例えばそれらの変種やフラグメントを調製するために修飾してもよい、該蛋白質は種々の遺伝子工学的または蛋白質工学的技術を用いて修飾することができる。

好ましい同種的蛋白質の一つに抗体、最も好ましくはモノクローナル抗体がある。ヒトのｔＩｆＪＩＩ関連抗原に特異的なモノクローナル抗体を含む、特異的な型の細胞に結合する多数のモノクローナル抗体が開発されている。使用されている多くのこのようなモノクローナル抗体のうちには、抗−ＴＡＣ又は他のインターロイキン−２受容体抗体、２５０キロダルトンのヒトメラノーマ関連プロテオグリカンに対する９、２．２７及びＮＲ−ＭＬ−０５、並びに汎癌性蛋白質に対するＮＲ−ＬＵ−１０がある。本発明に使用される抗体は無傷（全体）分子でも、これらのフラグメントでも、又はこれらの機能的同等物でもよい。抗体フラグメントの例としては、通常の遺伝子工学的又は蛋白質工学的技術により製造することができるＦ（ａｂ′）３、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、及びＦ、フラグメントがある。

同種的蛋白質が所望の標的部位に完全に特異的であるということはめったにない、非標的組織における局在は、例えば交叉反応性又は非特異的取込みによって起こる。放射性標識量標的蛋白質の場合、非標的部位でのこのような局在は診断像の鮮明度の低下（「バックグラウンド」の増大による）及び誤診を住じ得る。非標的組織の照射への暴露もまた起こるが、これは治療手法においては特に望ましからざるものである。本発明の放射性標識量標的蛋白質の改善された生体内分布特性はキレートの効果に、最も確からしくは該放射性標識蛋白質の異化物の生体内分布に対するキレートの効果に因るものであると考えられる。

本発明の該キレート剤化合物は２個の窒素及び２個のイオウというドナー原子を含んでなり、それ故’ＮｔＳ寞Ｊキレート剤化合物と名付けることができる。本発明の放射性ｌｆｆ１向標的蛋白質は他のＮｚ５ｚキレートで放射性標識された同種的蛋白質に比べである種の改善された生体内分布特性を示す、最も顕著なことは、放射性標識量標的蛋白質（又はその異化物）の腸管内への局在が減少している二とである。

ある種のＮ、Ｓ、放射性核種金属キレートで放射性標識された同種的蛋白質が、、（Ｍえば、欧州特許出願公開第１８８２５６号に記載されている。Ｅ　Ｐ　１８８２５６の放射性標識蛋白質はｉｎ　ｖｉｖＯで投与されると、放射性核種の注射投与量のある割合が腸管内に分布する（′１なわち、それ自体が腸管上皮組織に結合するというより寧ろ腸内容物の一部となる）、ＥＰ１８８２５６系を用いても抗体への放射性核種の安定な結合及び標的腫瘍上へのそれらの有効な局在が達成はされるが、腸管内への局在が減少すれば有益であり得る。投与された放射性標識蛋白質（例えば、抗体又はそのフラグメント）のうち標的に結合していない一部のものは、最も確からしくは最初に放射性ｔｓｍ異化物へと代謝され、続いてこれがおそらく肝胆汁性の分泌物を通じて腸管に入る。該キレートが同種的蛋白質のりジン残基に結合しているときには、主たる異化物は該キレートのリジンアダクｉ・であろう。

放射能の腸管への局在は腹部の標的部位と混同される（又はこれを遮る）ことがあり得る。治療手法のためには、腸管−・の局在があると（正常＆１１織を照射に曝すこととなるため）安全に投与し得る投す置が減少する。従って標的部位に対する治療効果もまた減少する。

下記の実験例において説明するように、本発明のキレートによって同種的蛋白質（例えば、抗体フラグメント）が標識されている場合のｉｎ　ｖｉｖｏでの生体内分布パターンは、他のＮ、Ｓ、キレートを用いた放射性Ｗ１ｍの場合とは異なっている。腸管への局在の減少の利点は、本発明の放射性標識同種的蛋白譬で示されている。

理論に拘束されようとするものではないが、キレート上のカルボン酸置換基が該放射性ツ識蛋白質の異化物（最も確からしくはキレートのリジンアダクト）の有利な生体内分布特性を賦与しているものと考えられる。本発明の化合物上のカルボン酸置換基は該化合物の極性を高め、及びそれ放水溶性を高める。高められた水溶性は異化物の腎臓による排出を促進し、該放射活性異化物の尿中への効果的排泄を生ずると考えられる。Ｃ０ＯＨ置換基に加えて（又は代えて）、極性を高める他の置換基（例えば、硫酸残基）をキレート剤化合物に使用することができる。

本発明のキレートの他の利点は、放射性標識の収率が相対的に良好なことである。遊離のカルボン酸置換基が放射性核種のキレート形成を助けていると考えられる。

放射性標識化の間、４個のドナー原子と放射性核種金属との間に結合が形成され、対応する放射性核種金属キレートが形成される。

本発明の化合物のイオウドナー原子にはいかなる適当な通常のイオウ保護基も結合しうる。放射性標識反応の前又は間に、該保護基を除去できなければならない、２個のイオウドナー原子に結合した保護基は同一でも異なっていてもよい、或いは、例えばチオアセタール基のような単一の保護基は、両イオウドナー原子を保護することができる。好ましいイオウ保護基には、アセタミドメチル及びヘミチオアセタール保護基があるが、これらは放射性標識反応の間にキレート剤合物から追い出すことができる。好ましくは、少なくとも１個のイオウ保護基はへミチオアセタール基であり、最大でも１個のイオウ保護基がアセタミドメチル基である。

アセタミドメチル系イオウ保護基を次の式に示すが、式中、示されたイオウ原子は該キレート剤化合物のイオウドナー原子である。

該アセタミドメチル基はｐＨ約３乃至６の反応液巾約５０゛Ｃで放射性標識を行う間にキレート剤化合物から追い出される。

ヘミチオアセクール系保ｌ！基を使用したときには、保護すべき各イオウ原子には結合した別個の保護基が結合しており、これが該イオウ原子と共にヘミチオアセタール基を形作る。該ヘミチオアセタール基はイオウ原子及び酸素原子に直接（すなわち、何ら介在する原子なしに）結合している炭素原子を含んでいる。すなわち、好ましいヘミチオアセタール類は一般に次の式、（式中、Ｒ３は、好ましくは２乃至５個の炭素原子よりなる、低級アルキル基であり、Ｒ４は、好ましくは１乃至３個の炭素原子よりなる、低級アルキル基である。又は、Ｒ３及びＲ４は式中の炭素原子及び酸素原子と一緒になって、好ましくは式中の炭素原子及び酸素原子に加えて３乃至７個の炭素原子よりなる、非芳香環をなす。

Ｒ５は水素又は、■乃至３個の炭素原子よりなる、低級アルキル基を表す。）で示されるものであるが、ここにおいてイオウ原子はキレート剤化合物のイオウ原子であり、別個の保護基がキレート剤化合物の各イオウ原子に結合している。かかる好ましいヘミチオアセタール類の例としては次のものがあるが、これらに限定されるものではない。

テトラヒドロフラニル基　２−メチルテトラヒドロフラニル基これらのイオウ保護基は、酸性ｐＨで行われる放射性標識反応の間に、金属の助けを借りた酸性開裂反応と考えられているものによって、追い出される。イオウ原子と金属放射性核種との間に共有結合が形成される゛、イオウ保ｉｓを除去するための別個の操作の必要はない、このように放射性ｊＪ識操作は単純化されている。加えて、ある種の公知の放射性！！識操作又は他のイオウ保護基の除去に関連した塩基性ＰＨ条件及び激しい条件は回避されている。こうしてキレート剤化合物上の、塩基に対し感受性の基が放射性標識操作後も無傷で残る。かかる塩基に弱い基には、塩基性ｐ　Ｈに曝されることにより破壊され、加水分解され、又はさもなければ有害な影響を受けるあらゆる基が含まれる。一般的に、かかる基にはとりわけエステル類、マレイミド類、及びイソチオシアネート基が含まれる。かかる基は蛋白質結合基としてキレート剤化合物上に存在し得る。

本発明の化合物は、好ましくは少なくとも１個の−ＯＷ換基を含んでなり、最も好ましくは２個の＝０置換基を含んでなる０本発明の実施例の−においては、少なくとも１個及び好ましくは２個のＲ２置換基が−（ＣＨ□）ｎ−ＣＯＯＨであり、ｎは好ましくはｌに等しい。

本発明のキレート剤化合物の例としては、次の式、（式中、記号は上記に記載したと同じ。）で示される化合物がある、これらの化合物の合成方法は下記の実施例に記載されている０本発明の実施例の−においては、これらのキレート剤化合物は２個のへミチオアセクールか又は１個のへミチオアセタール及び１個のアセタミドメチル系のイオウ保護基を含んでなる。

本発明のキレート剤化合物は、通常の方法で種々の放射性核種金属のいずれによっても放射性標識されて対応する放射性核種金属キレートを生ずる。これらの放射性核種金属には、銅（例えば−’Ｃｕ及び６４Ｃｕ）、テクネチウム（例えば ””Ｔｃ）、レニウム（例えばＩＩ６Ｒｅ及びＩ　ＩＩ　Ｒｅ　）、鉛（例えば！ｌ！ｐｂ）、ビスマス（例えば！ＩｊＢ３）及びパラジウム（例えばｌ−９ｐｄ）がある、これらのアイソトープを製造する方法は知られている。””Ｔｃを製造するためのモリブデン／テクネチウムジェネレーターは市販されている　＋１１６Ｒｅを製造するための方法にはＤｅｕｔｓｃｈ等［Ｎｕｃｌ、Ｍｅｄ、Ｂｉｏ　ｌ、、土１土、４６５−４７７　（ｉ９８６）〕及びＶａｎｄｅｒｈｅｙｄｅｎ等［Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　ｉｉ、１６６６−１６７３　（１９８５））により記載されている方法があり、　Ｉ＠＠Ｒｅを製造する方法はＢｌａｃｈ。

を等［１ｎｔ１．Ｊ、ｏｆ　Ａｐｐｌｆｅｄ　Ｒａｄｉａｔｉｏｎａｎｄ　ｌ５ｏｔｏｐｅｓ、７立、４６７−４７０　（１９６９）〕及びＫｌｏｆｕｔａｒ等（Ｊ、ｏｆ　Ｒａｄｉｏａｎａｌｙｔｉｃａ　Ｉ　Ｃｈｅｍ、、５．３−１０　（１９７０）］によって記載されている。１１１９ｐｄの製造はＦａｗｗａｚ等（Ｊ、　Ｎｕｃ　１．　Ｍｅｄ、（１９８４）、ｌｉ、７９６）により記載されている　！Ｉｍｐｂ及び！ｌ！Ｂｉの製造はＧａｎｓｏｗ等（Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｓｙｍｐ、Ｓｅｒ、（１９８４）、　又」−Ｌ　２１５−２ｉ　７〕及びＫｏｚａｈ等（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ’　１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ。

ｔＪｓＡ（Ｊａｎｕａｒｙ　１９８６）、ＪＬＬ、４７４−４７８）により記載されている。”′″Ｔｃは好ましくは診断用であり、上に挙げた他の放射性核種は治療用である。

本発明の実施例の−においては、アセタミドメチル及び／又はヘミチオアセタールイオウ保護基を含んでなる本発明−のキレート剤化合物は酸性ｐＨ条件下にて該化合物を放射性核種と反応させることにより放射性核種金属で標識される。酸性ｐＨ及び金属の存在がいずれも該キレート剤化合物からのイオウ保護基の追い出しに寄与すると考えられる。該放射性核種は、本発明のキレート剤化合物と反応させるときはキレート化され得る形態とする。

テクネチウムとレニウムの場合には、「キレート化され得る形態」には通常、還元操作を要する。還元剤は、放射性核種（例えば、それぞれ過テクネチウム酸及び過レニウム酸の形における）をキレート化の起こる低い酸化状態へと還元するために使用される。多くの適当な還元剤及びそれらの用途が知られている。（例えば米国特許第４４４０７３８号、第４４３４１５１号及び第４６５２４４０塩化第−錫又はフン化第−錫等の第一錫塩）、金属錫、第一鉄イオン（例えば塩化第一鉄、硫酸第一鉄又は酢酸第一鉄等の第一鉄塩）その他の多くのものがあるが、これらに限られるわけではない、過テクネチウム酸ナトリウム（すなわち＋７の酸化状態にあるＬ９ａ’ｌ’Ｃ０ａ−）又は過レニウム酸ナトリウム（すなわち”’Ｒｅ　Ｏ，−１”’　Ｒｅ０ａ　−）は、本発明の放射性標識方法に従って同時に還元剤及び本発明のキレート剤化合物と組み合わされて、キレートを形成する。

好ましくは、該放射性核種は還元剤及び複合化剤で処理され”ζ中間複合体（すなわち［交換複合体））を形成する。複合化剤は、本発明のキレート剤化合物が結合するよりも弱く放射性核種と結合する化合物であって、弱いキレート化剤でよい。知られている適当な複合化剤をいずれも使用し得る。これらには、グルコン酸、グルコヘプトン酸、メチレンジホスホネート、グリセリン酸、グリコール酸、マンニトール、シヱウ酸、マロン酸、コハク酸、ジエチロールグリシン、Ｎ、Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン、クエン酸、アスコルビン酸及びゲンチシン酸があるが、これらに限られるわけではない、Ｔｃ−複合化剤としてはグルコン酸又はグルコヘプトン酸を、またレニウムにはクエン酸を使用すればよい結果が得られる。かかる交換複合体の形の放射性核種を本発明のキレート剤化合物と反応させると、該放射性核種は、該放射性核種とより強く結合するこれらの化合物へと移行し、本発明のキレートを形成する。放射性核種の移行を促進するためにしばしば加熱が必要である。かかる複合体の形の放射性核種もまた、本発明の目的のだめの「キレート化され得る形態」にあると考えられる。

Ｋｌ！ｐ　ｌ、、ｔｌＪ　ｉ及び１°”Ｐｄは、放射性核種の適当な塩をキレート剤化合物と合わせて反応混合物を室温にて又はより高い温度にて・インキエベーシダンすることにより調製することができる。鉛、；−゛スフス、Ｋ８ジウｌ、及び銅の放射性同位元素は、キトート化に先立ち還元剤で処理する必要はない。かがる同位元素はすでにキレート化に適した酸化状態（すなわち、キレート化され得る形ＡＩ）にあるからである１個々の放射性標識反応の条件は、使用される個々の放射性核種及びキレート剤化合物によって幾分変わる。

キレート剤化合物は放射性標識されて放射性核種金属キレ−・トを形成するが、これを同種的蛋白質と反応させる。或いは、非標識キレート剤化合物を同種的蛋白質に結合させ、次いで放射性標識を施してもよい、、蛋白質は様々な官能基、例えばカルボキシル基（Ｇ。

（月（）又は遊離のアミノ基（−ＮＨり、を有しており、これらはキレート剤を蛋白質に結合するためにキレート剤上の適当な蛋白質結合？Ｉｉ　’　Ｚ　Ｊとの反応に供することができる。例えば、キレート剤の活性エステルは蛋白質のりジン残基の一級アミノ基と反応してアミド結合を形成する。ｇｉ、いは、蛋白質及び／又はキレート剤を誘導体化して、追加の反応性官能基を露出させ又は結合させてもよい。

誘導体化には、例えばイリノイ州ロックフォード所在のＰｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、がら入手できるよ・うな、多くの架橋剤分子のいずれを４１加させることを含むものでもよい（Ｐ　ｉ　ｅ　ｒ　ｃｅ　１９８６−８７　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｃａｔａｌｏｇ、ｐ、３１３−５４を参照の５二と）。或いは、誘導体化は、蛋白質（抗体であってもよい）の化学的処理を含むものであってもよい（米国特許第４６５９８３９号を参照のこと）。キレート剤上のマレイミド結合本はスルフヒドリル（千オール）基に対し反応性がある。

成いは、同種的化合物が炭水化物又は糖蛋白質であるときは、誘導体化は炭水化物の化学的処理、例えば遊離のアルデヒド基をつくり出すために過ヨウ素酸により糖蛋白質抗体の糖部分からのグリコール開裂、を含むものであ、ってもよい、抗体上の該遊離のアルデヒド基は、キレ−・ト化剤上の遊離のアミン又はヒドラジン結合基と反応させると該キレート化荊をこれに結合させることができる（米国特許第４６７１９５８号を参照のこと）。

本発明の放射性ｍ識向標的蛋白質は、診断上及び治療上の手法において、すなわちｉｒｘ　ｖｉｔｒｏでの測定及びｉｎ　ｖｉｖｏでの医療的手法のいずれにも用いられるものである。放射性Ｉ［識蛋白質は、標的部位のタイプ等の要因に依存して、静屍内、腹腔内、リンパ内、局所、又はその他の適当な方法で投与することができる。

投与量は、放射性核種のタイプ（例えば、診断用放射性核種であるか又は治療用放射性核種であるか）、投与経路、標的部位のタイプ、問題とする標的部位に対する同種的蛋白質の親和性、及び正常組織に対する同種的蛋白質のあらゆる交叉反応性、といった要因に応じて変動するであろう、適切な投与量は通常の手法によって決定することができ、本発明の関連する分野の専門医は患者への適切な投与Ｉを決定することができるであろう。診断上有効な投与量は通常約５乃至約３５、典型的には約１０乃至約３０ｍＣ１／７０ｋｇ体重である。治療上有効な投与量は通常約２０ｍＣ１乃至約３００ｍＣ１である０診断上は通常の非侵襲的手法（例えばガンマカメラ）が放射性核種の生体内分布を検出するのに使用され、これにより問題とする標的部位（例えば腫瘍）の有無が決定される。

本発明の治療用の放射性標識抗体又はその異化物の比較的低い腸内局在のため、腸内組織かりされる放射線量が相対的に低いことから８．投惇量を高めることが可能である。診断像の鮮明さと正確さもまた、放射性標識抗体又はその異化物の正常組織への局在が少ないことにより、改善される。

以下の実施例は、本発明のいくつかの具体例を説明するために提示するものである。

ｍ± 合成経路の概略をＦｉｇ、１に示す。

上からのＳ−アセタミドメチル−Ｎ−ｔ−ＢＯＣイソシスティンｌの合成：メルカプトコハク酸１（市販）をＴｏｓＯＨ中でシクロペンタノンと反応させて２−オキサチオロン）を調製した。

２−オキサチオロン呈をベンゼン（４０ｍｌ）及びトリエチルアミン（３，２８ｍＬ、２３．５５ｍｍｏｌ）に溶解した０℃の液に、ジフェニルホスホリルアジド（５，０８ｍＬ、２３．５５ｍｍ。

ｌ）をベンゼン（５，０ｍＬ）に溶解した液を加えた。水浴を取り去り反応液を室温にて１時間撹拌した。溶液を水で洗浄した。水相をベンゼンで抽出した。ベンゼン抽出液を合わせて乾燥し、最初の体積の半分まで濃縮し、５０℃から８０ °Ｃまで徐々に昇温する油浴中で加熱還流した０反応液を室温まで冷却し酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈しＮ　ａ　ＨＣＯ、（３０ｍ、　Ｌ　）の飽和溶液で２回洗浄した。

有機抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ，）ｌ、情夫して、粗製イソシアネート」−を褐色油状物（４，９２ｇ）として得た。

−３−を６Ｎ塩酸（４５ｍＬ）に懸濁した液を４０分間加熱還流した。反応液を冷却し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で２回洗浄した。水性抽出液を情夫し粗製イソシスティン土を琥珀色油状物（４，９２ｇ、理論量３．６４ｇ）として得た。ＮＭＲはイソシスティン及び脂肪族不純物を示している。

０℃の水（３，０ｒｎＬ）中にて粗製のイソシスティン土の半量（２，４２ｇ、理論量１１．６１ｍｍｏ　ｌ）にＮ−ヒドロキシメチルアセタミド（１，，１４ｇ）を加えた。この溶液に濃ＨＣＩ　（０，４５ｍＬ）を滴下して加えた。この溶液をＯ′ｃにて３日間貯蔵した。

溶液を情夫しＳ−ａｃｍイソシスティ４１を無色液体として得た（ａｃｍ＝アセタミドメチル）。

ＮＭＲ（ＤＸ　Ｏ）　二　１．９５　（ｓ、３Ｈ）、３．３５　（ｄｄ、２Ｈ）、３．８　（ｔ、ＩＨ）、４．４　（ｄｄ、２Ｈ）。

ＴＬＣ（ｃ−１８，１５％メタノール／水、１％酢酸）：ワンスポット、Ｒｆ＝０．　４゜ｉ（理論量１１．　６１ｍｒｎｏ　１）をＤＭＦ／Ｈｚ　Ｏ（３：　２．２５　ｍ　ｌ、　）及びトリエチルアミン（３，６０ｍＬ、２５．５４ｒｎｍ。

１）に溶解した液に炭酸ジーＬ−ブチル（３，０４ｇ、１３．９ｍｍｏ　１）を加えた。反応液を室温にて３時間攪拌し次いで情夫した。残渣を水と酢酸エチルとの間に分配した。水層を１．０Ｍ塩酸でｐＨ３，０の酸性とし更に酢酸エチル（３Ｏｍ、Ｌ、３回）及びジクロルメタンで（５０ｍＬ、２回）抽出した。有機抽出液を合わせて乾燥しくＭｇ５Ｏ，）情夫して油状物を得た。クロマトグラフィー（１５％イソプロピルアルコール／ジクロルメタン、２％酢酸）により精製して１−を油状物として得、これをアセトニトリルから結晶化した。２・−オキサチオロン）からの収率は１．９０ｇ　（６，２１ｍｍｏｌ＞、５３％であった。

Ｓ−ａ　ｃｍ−Ｎ−ｔ、−ＢＯＣイソシスティンｉのＳ−ａｃｍ−Ｎ−ｔ−ＢＯＣイソシスティントリクロルエチルエステル１への変換６　（１，９０ｇ、６．２１ｒｎｍｏｌ）及びトリクロルエタノール（０，７１ｍＬ、７．４５ｍｒｎｏｌ）をアセトニトリル（１２ｍ、Ｌ）及びジクロルメタン（２ｍＬ）に溶解した水冷液にジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１，４７ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）及びジメチルアミノピリジン（７６ｍｇ、０．６２ｍｍｏりを加えた。

水浴を自然融解させ反応液を室温にて１６時間攪拌した８反応液を０°Ｃまで冷却し、濾過し、情夫して油状物を得、これをクロマトグラフィー（１：１＝酢酸工チル／混合ヘキサン、１％酢酸）により精製して１を油状物（１，２５ｇ、２．９５ｍｍｏりとして４７％の収率で得た。

皇族１１１Ｎ二工二Ｂ−０−ρ１菖し仁乙区臣Ｚ酸に」ニブｌ沙活スｌ匪−主ニュへり　イミ′エスール　１２　」盃戒合成経路の概略をＦｆｇ、２に示す。

Ｎ−ｔ−ＢＯＣオキサゾリンンアミノアジビン酸（９）のＮ−ｔ−ＢＯＣオキサゾリンンアミノアジビン酸ｔ−ブチルエステル（」−ｉ）への変換：、、ｉ（３，２３ｇ、１２．４ｍ、ｍｏｌ）をアセトニトリル（１２ｍＬ）及びｔ−ブチルアルコール（１，７５ｒｎＬ、１８．６ｒｎｒｎｏｌ）に溶解した水冷液にジメチルアミノピリジン（１５１ｉｉｉ、ｇ、ｉ。

２４ｍｍｏり及びＤＣＣ（３，０７ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を０゛Ｃにて６９分間撹拌し、次いで０℃にて６０時間貯蔵した。混合物を濾過した。濾液を情夫し固体を得、これをクロマトグラフィー（２５％酢酸エチル／混合へキサン）に付した。を−ブチルエステル■を白色固体（２゜８５ｇ、８．６６ｍｍｏｌ）として７０％の収率で得た。

■のＮ−ｔ−ＢＯＣアミノアジピン酸δ−Ｌ−ブチルエステル（、、ＬＬ）への変換： ±４（１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏ　Ｉ　）をメタノール（２，０ｍＬ）に溶解した液にＩＮ水酸化ナトリウム（０，３３ｍＬ）を滴下して加えた。溶液を１時間攪拌し、次いでエタノールアミン（０゜０２ｍＬ、０．３３ｍｍｏ　ｌ）で処理した。この溶液にＩＮ水酸化ナトリウム（０，３２ｍＬ、０゜３２ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を４８時間攪拌し、濃縮し、次いでＩＮ塩酸（０，３３ｍＬ）を加えて中性とした。水相を酢酸エチル（２５ｍＬ）で抽出した。水相を１．ＯＮ塩酸でｐＨ１の酸性とし更に酢酸エチル（５０ｍＬ、２回）で抽出した。酢酸エチル抽出液を合わせて乾燥（ＭｇＳＯ。

）し、情夫して油状物を得た。クロマトグラフィー（４０％酢酸工ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）として６３％の収率で得た。

土工のＮ−ｔ−ＢＯＣアミノアジピン酸δ−ｔ−ブチルエステルα−コハク酸イミドエステルユへの変換：±１（０，９７ｇ、３．０６ｍｍｏ　Ｉ）をアセトニトリル（６゜０ｍＬ）に溶解した水冷液にＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（４２２ｍｇ、３．６７ｒｎｍｏｌ）及びＤＣＣ（７４７ｍｇ、３．６７ｒ。

ｍｏ　１）を加えた。水浴を自然融解させ反応液を室温にて５時間撹拌した。混合物を０°Ｃまで冷却し、酢酸２．３滴で処理して濾過Ｌ５た。濾液の情夫により■を白色固体ｃｉ、１９ｇ、３．０６ｍｍｏ１）として１００％の収率で得た。

裏旅■主スクシ　−　１１澄崖化合物ＩＬの２つの合成経路の概略をＦｉｇ、３に示す。

第１操作：　オキサチオロンの塩基開環を経たスクシネート試薬１旦の合成： ■の２−メルカプトコハク酸オキサチオロンβ−も−ブチルエステル」への変換：化合物１１実施例１の記載と同様にして土より調製した。

２　（１，４５ｇ、６．３０ｎｎｍｏ　１）をアセトニトリル（６，５ｍＬ）及びｔ−ブチルアルコール（０，８９ｍＬ）に溶解した水冷液にジメチルアミノピリジン（７７ｍｇ、０．６３ｒｎｍｏｌ）及びＤＣＣ（１，５５ｇ、７．５６ｍｍｏ　ｌ）を加えた０反応液を０°Ｃにて１時間攪拌し、次いで０°Ｃにて４日間貯蔵した。生成物を濾過した。濾液を情夫した。クロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／混合・＼キサン）により■を黄色油状物（１，７６ｇ、６．１５＋ｎｒｎｏ　１）として９８％の収率で得た。

１３の２−メルカプトコハク酸β−Ｌ−ブチルエステル（１４−）への変換：ｕＬ（０゜５８ｇ、１．８２ｍｍｏｌ）をアセトン（２，０ｍＬ）に溶解した液にＩＮ水酸化ナトリウム（１，８２ｍＬ、１．８２ｒｒｉｍｏｌ）を加えた。反応液を４時間攪拌した後、更にＩＮ水酸化ナトリウム（１，８２ｍ、Ｌ、１．８２ｍｒｎｏｌ）を加えた０反応液を２０時間攪拌し、次いで１．０Ｍ塩酸（３，６ｍＬ）の添加により中性とした。水相を酢酸エチル（２５ｍＬ、３回）で抽出した。

酢酸エチル抽出液を合わせ塩水で洗浄し、乾燥し情夫して油状物を得た。生成物をクロマトグラフィー（最初ｌＯ％酢酸エヂル／混合ヘキサン、１％酢酸、３００ｍＬ、次いで３３％酢酸エチル／混合ヘキサン、１％酢酸、３００ｒｎ、Ｌ）に付し１土を無色油状物（０゜２４ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）として６４％の収率で得た。

１４のＳ−テトラヒドロピラニルメルカプトコハク酸β−ｔ−ブチルエステル（Ｌｉ）及びＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル７ｒｎｇ、０．０３ｍｍｏ　１）をジクロルメタンに溶解した一４０℃の液にジヒドロ−２Ｈ−ピラン（０，ｉ　１ｍＬ％　１．ｌ　６ｒｎ、−ｍｏ　１）を加えた。添加後、反応液を−５ ’Ｃに加温し３０分間攪拌した。

溶媒を情夫した。残渣を酢酸エチル（３０ｒｎｌ、）に溶解しｐＨ４゜０の緩衝液で洗浄した。水相を酢酸エチル（２０ｍＬ、２回）で抽出１５だ。酢酸エチル抽出液を合わせ塩水で洗浄し７、乾燥し情夫して油状物を得、精製することなく使用した。油状物をマ七ト！、トリル（２，ＯｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（１６０ｍｇ、１．３９ｒｏｍｏ１．）及びＤＣＣ（２８７ｍｇ、１．３９ｍｒｎｏｆ）で処理した。水浴を自然融解させ反応混合物を室温にて２０時間攪拌した。混合物を濾過し、た、濾液を情夫した０クロマトグラフイーにより１Ｊ−を白色固体（１４５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）として３２％の収率で得た。

第２操作：ｉ、ｏＡを用いたスクシネート試薬■の合成：Ｓ−テトラヒドロピラニルメルカプト酢酸（１エ）のＳ−テトラヒドロピラニルメルカプトコハク酸β −ｔ−ブチルエステル、ｌＪＪびＮ−ヒドロキシコハク酸エステル１８への変換：ｎ−ブチルリチウムを混合ヘキサン（１３，２ｍＬ、１７．２ｍｍｏｌ）にｆＪＨした１、３０Ｍの液を、ジイソプロピルアミン（２，５２ｍＬ、１８．Ｏｍｍｏｌ）をＴＨＦ　（１０，ＯｍＬ）に溶解し５た一７８゛Ｃの液に加えることにより、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の溶液を調製した。溶液を２０分間攪拌した。これにＳ−テトラヒドロピラニルメルカプト酢酸（１，３２ｇ、７．５０ｒｎｍｏｌ）をＴＨＦ　（５，ＯｍＬ）に溶解した液を滴下して加えた。反応液は混濁した。これを−７８°Ｃにて２５分間攪拌し、０℃まで加温し、２５分間攪拌した０反応液を一７８°Ｃまで冷却しブロム酢酸ｔ−ブチル（３，２ｍｌ、）をＴＨＦ　（２，ＯｍＬ）に熔解した液で処理した。反応液を一７８°Ｃにて１時間、及びＯ”Ｃにて３０分間攪拌した。反応を酢酸（１，０ｒｒｉＬ）のジクロルメタン溶液の添加により停止させた。混合物をｅ４縮し、水及び酢酸エチルで希釈し、た、水層を分離し、１．０Ｍ塩酸でＰ　Ｈ３゜０の酸性とし、更に酢酸エチル（７５ｍ　Ｌ、２回）で抽出した。酢酸エチル抽出液を合わせ塩水で洗浄し、乾燥し、情夫して上ｉをカナリア色の油状物として得た。

この油状物をアセトニトリル（１０，ＯｍＬ）及びジクロルメタン（１，５ｍＬ）に溶解し、０゛ｃまで冷却し、Ｎ−ヒトｑキシコハク酸（１，０３ｇ、９．０ｍｍｏ　Ｉ）及びＤＣＣ（１，８６ｇ、９、Ｏｍｍｏｌ）で処理した。水浴を自然融解させ反応混合物を４時間攪拌した。混合物を０゛ｃまで冷却し濾過した。

濾液を情夫し油状物を得これをクロマトグラフィー（３０％酢酸エチル／混合ヘキサン）に付し■を白色泡状物（１，３６ｇ、３．５１ｍｍｏｌ）として４７％の収率で得た。

１旌■土イソシ入テインーアミノアジビ乙二ムＬＬＡＬ＆久乞主：」キレー人　ｌ　の今底合成経路の概略をＦｉｇ、４に示す。

システィン産、とアミノアジピン酸誘導体１主との縮合による土１の調製：実施例１にて調整したＳ−ａ　ｃｍ、−Ｎ−ｔ−ＢＯＣイソシスティントリクロルエチルエステル７　（１００８ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）をジクロルメタン（７，ＯｍＬ）に溶解した水冷液にトリフルオロ酢酸（６，ＯｍＬ）を滴下して加えた。溶液を室温にて１時間攪拌した。溶液を四塩化炭素（５０ｍｌ、３回）から情夫した。残渣を１８時間減圧乾燥した。残渣韮をＤＭＦ　（２，５ｍＬ）に溶解した水冷液に実施例２にて調製した１ＪＬ（８６７ｍｇ、２．２２ｍｍｏｆ）をＤＭＦ　（３，５ｍＬ）に溶解した液を加えた。これにトリエチルアミン（０，７３ｍＬ、５．２４ｍｍｏｌ）を加えた０反応液を室温にて６時間攪拌し次いで情夫した。残渣を水と酢酸エチル間に分配した。水相を酢酸エチル（５０ｍＬ、２回）で抽出した。

酢酸エチル抽出液を合わせて塩水で洗浄し、乾燥し、情夫した。生成物をクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／混合ヘキサン、１％酢酸）に付し↓１を白色泡状物（１００５ｒｎｇ、１．６１ｍｍ。

１）として６８％の収率で得た。

−１１とスクシネート試薬１ｉとの縮合によるトリペプチドへ」上の調製：」−ユ（５００ｍｇ、０．８１ｍｍｏ　１）をジクロルメタン（４゜３　ｍ　Ｎ、）に溶解した水冷液にトリフルオロ酢酸（４，３ｒｎＬ）を加えた。水浴を取り去り反応液を１時間攪拌した。溶液を四塩化炭素（３０ｍＬ、３回）から情夫した。残渣をＤＭＦ　（１，ＯｍＬ）に溶解し０℃まで冷却した。これに実施例３で調製した１旦（３７６ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ　（２ｍＬ）に溶解した液を加えた。最後にトリエチルアミン（０，２２ｍＬ、１．６２ｍｒｎｏ　ｌ）を加えた。氷を自然融解させた。反応液を室温にて２１時間攪拌した。溶媒を情夫した。残渣を酢酸エチルに溶解しｐＨ４゜ＯのＭ出液で洗浄した。水相を酢酸エチルで抽出し、次いで１．０Ｍ塩酸でｐＨ３，０の酸性とし、更に酢酸エチル（３０ｍＬ、２回）で抽出した。酢酸エチル相を合わせて塩水で洗浄し、乾燥し、情夫した。

残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル：酢酸＝９９：１）に付した。生成物１主を白色固体として８０％の収率（４８０ｍｇ、０゜６５ｒｎｒｎｏｌ）で得た。

］Ｊ−のＴＦＰエステル−Ｖｌへの変換：１８　（４８０ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１゜５ｍＬ）及びジクロルメタン（０，５ｒｎＬ）に溶解した水冷液に、テトラフルオロフェノール（ＴＦＰ）（１４０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｆ）及びＤＣＣ（１６１ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を加えた。水浴を自然融解させ反応液を室温にて２０時間撹拌した０反応液を０℃まで冷却し、酢酸２滴で処理し、濾過した。濾液を情夫した。残渣をクロマトグラフィーに付し■を油状物（２４０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）として４２％の収率で得た。

ＴＣＥエステル」の開裂によるＪ−ｉの調製：土、、ｉ（１，９０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ　（１，４ｍＬ）及び１．０ＭのＫＨ，ＰＯ，（０，２８ｍＬ）に溶解した液に、亜鉛末（１３７ｍｇ、２．１０ｍｒｎｏ　Ｉ）を加えた。混合物を３０分間攪拌した。更にリン酸緩衝液（０，２８ｍＬ）及び亜鉛末（１３７ｍｇ、２．１０ｒｎｍｏ　Ｉ）を加えた。反応液を８０分間攪拌した。更にリン酸緩衝液（０，２５ｒｎＬ）、ＴＨＦ　（１，ＯｍＬ）及び亜鉛末（１３７ｍｇ、２．１０ｍｍｏ　１）を加えた０反応液を濾過した。濾液を情夫した。

残渣をクロマトグラフィーに付し、最初の分画にＩＪ（６０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を得、次いで後の分画に一２Ｊ−を白色泡状物（４０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）として２５％の収率で得た。

言−ブチルエステル＝４−１４の開裂による２Ｌ−の調製＝２０（４０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を蟻酸（１，５ｍＬ）に熔解し７た液を５時間撹拌した。溶液を情夫し５たう生成物を逆相半調製Ｃ−１８カラム上で４５％アセトニトリル７ ′水、１％酢酸を移動相として予備的液体クロマトグラフィーで精製した。生成物ｎをフィルム（６ｍｇ、０．Ｏ１ｍｍｏ　りとして１６％の収率で得た。

化合物ｔ」−は本発明のキレート剤化合物の−である。

実Ｊｉ−例、、万一イ、Ｌ２よ−Ｌ−ンは−ノＪ議−酸μｍ不テー少士−に二上Ｊ刊一孔占１物−（２」Ｊ−のイＵ瓜合成経路の概略をＦｉｇ、５に示す。

ｔ−ＢＯＣ５の開裂及びシスティン１１−とアミノアジピン酸誘導体↓１−との縮合：ｕ（０，９７ｇ、２．３０ｍｍｏｌ）をジグ０ルメタニ／（６゜０　ｍ　Ｌ　）に溶解した水冷液にトリフルオロ酢酸（６，ＯｍＬ、）を加えた。反応液を室温にて撹拌し２、次いで四塩化炭素（１５ｍＬ、３回）と共に情夫し減圧乾燥した。残渣（Ｊｕ）をジメチルホルムアミド（１，ＯｍＬ）及びトリエチルアミン（０゜３５ｒｎＬ、２．５３ｍｍｏｌ）に溶解した。これに実施例２で調製したＮ −ｔ−ＢＯＣアミノアジピン酸−α−ＮＨ３・−δ−ｔ−ブチルエステル１２（８９７ｍｇ、２．３０ｍｍｏ　１）（ＮＨ３−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）をＤＭＦ　（２，５ｍＬ）に懸濁した液を加えた。トリエチルアミン（０，３５ｒｎ！、、２．５３ｒｏｍｏｌ）を加え反応液を１８時間攪拌した。溶液を濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解しｐｊ−＋４．Ｑの緩衝液で洗浄１−た。水相を更に酢酸エチル（３０ｒｒｕ−１２回）で抽出した。酢酸エチル抽出液を合わせて塩水で洗浄し、乾燥し７、情夫して油状物を得た。クロマトグラフィー（７５％酢酸、エチル／混合−・キサン、１％酢酸）に付し７１」＝を白色固体（１，４０ｇ、２．３０ｍｎｎｏ　ｌ　）として１００％の収率で得た。ＦＡＢＭＳ親イオンは６２２及び６２４゜ −２−）の脱保護基及びＳ−工トキシエチルメルカプト酢酸ＮＨＳエステルとの縮合による」狐の調製ニー２１（６９０ｍ　ｇ、１．　１２ｍｒｎｏ　りをジクロルメタン（６゜ＯｍＬ）に溶解した水冷液に］・リフルオロ酢！（６゜ＯｍＬ）を加えた。水浴を取り去り反応液を室温にて２時間攪拌した。液を四塩化炭素（１０ｍ　！、、３回）と共沸情夫した。残渣をＤＭＦ及びトリエチルアミン（０，１５ｍＬ、１．１２ｍｍｏ　１）に溶解した。この溶液に０°Ｃにて、Ｓ−エトキシエチルメルカプト酢酸ＮＨＳエステル（３２２ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ　（２，０ｒｎＬ）に溶解し、ｋ液を加えた。ＩＪ後にトリエチルアミン（０，３１ｍＬ、２．２４ｍｍｏｌ）を加えた。水浴を自然融解させ反応液篭室温にて１８時間撹拌した。溶媒を情夫した。残渣を酢酸エチル（３０ｒｎＬ）に溶解しｐＨ４，０の緩衝液で洗浄した。水相を酢酸エチル（２５ｍ　Ｌ、２回）で抽出した。酢酸エチル抽出液を合わせて乾燥し情夫した。残渣をクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／混合ヘキサン、１％酢酸）に付した８生成物１１を油状物（３ａｏｍｇ、０．５５ｍｒｎｏｌ）として５０％の収率で得た。

、２ｉのＴＦＰエステルｌユへの変換：２６　（１９０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ　（１，８ｍＬ）に溶解した液にテトラフルオロフェノール（６５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（７３ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を加えた。

反応液を２０時間攪拌し、０　’Ｃまで冷却し、濾過した。濾液を情夫した。残渣をクロマトグラフィー（酢酸エチル：酢酸＝９９　；　１）に付した。生成物ｌユを無色油状物（１５０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）として６４％の収率で得た。

１１のＴＣＥエステルの開裂によるシスティンリガンドｉｆＬの調製：ＪＬＬ（９０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ　（０，８ｍＬ）及び１．０ＭのＫＨ，Ｐｏ、１１衝液（０，１６ｍＬ）に溶解した液に亜鉛末（７８ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を４０分間攪拌した。更にリン酸緩衝液（０，１６ｍＬ）及び亜鉛末（７８ｍｇ、１．２０ｍｍｏ　Ｉ）を加えた０反応液を４０分間攪拌し、濾過し、次いで５０％の水性アセトニトリル（３０ｒｎＬ）で洗浄した、濾液を情夫した。残渣をクロマトグラフィー（１５％イソプロピルアルコール／ジクロルメタン、２％酢酸）に付した。生成物ＩＬを油状物（６０ｍｇ、０・１０ｍｍｏｌ）として８０％の収率で得た。化合物■は本発明のキレート剤化合物の−である。

ＸＪＩＬ！、□１多２（元イン久久２ネ：」ゴＦｌ、＝二ｆ１化−合！ｌｕｕ、−ｕニーｐイし成、合成経路の概略をＦｉｇ、６に示す。

２４のｔ−ＢＯＣ基及びＬ−ブチル基の開裂及びスクシネート試薬１１−との縮合による被保護トリペプチドＩ■の調製：実施例５と同様にして調製したＩ土（７０８ｒｎｇ、１．　１６ｒｎｍｏ１）をジクロルメタン（６，２ｍＬ）に溶解した水冷液にトリフルオロ酢酸（６，２ｍＬ）を加えた。溶液を室温にて１．５時間攪拌し次いで四塩化炭素（１５ｍＬ、３回）から情夫した。残渣をＤＭＦ　（２，ＯｍＬ）に０℃にて溶解し、これに実施例３で調製した、ＩＪＬ　（４５０ｍｇ、　１．　１６ｍｍｏ　１）をＤＭＦ　（２，ＯｍＬ）に溶解した液を加えた。反応液を１８時間攪拌しそして濃縮した。残渣を酢酸エチルとｐＨ４，０の緩衝液との間に分配した。水相を酢酸エチル（２５ｍＬ、２回）で抽出した。

酢酸エチル抽出液を合わせ塩水で洗浄し、乾燥し、情夫して油状物を得た。クロマトグラフィー（酢酸エチル／酢酸−９９：　１）に付し■を白色泡状物（０，３９ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）として４６％の収率で得た。

Ｉ工のＴＦＰエステルＪ１への変換：２９　（３９０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１゜ＯｍＬ）に溶解した水冷液にテトラフルオロフェノール（１１５ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（１３１ｍ、ｇ、０．６３ｍｍ。

［）を加えた０反応液を１８時間攪拌し、０°Ｃまで冷却し、濾過し、濾液を情夫した。クロマトグラフィー（７５％酢酸エチル／混合−・キサン、１％酢酸）に付し■を油状物（４００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）として８５％の収率で得た。

ｔ−グチル基及びトリクロロエチルエステル保護基の開裂による４−ｚ　／７）調製ニー別居（２００ｍ　ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を蟻酸（７，５ｍＬ）に溶解した液を３時間攪拌し次いで溜去した。残渣をクロマトグラフィー　（酢酸エチル／酢酸＝９９＝１）に付し１上を白色泡状物として得た。３ユ（１８０ｍｇ、０．２２ｍｍｏりをＴＨＦ　（１，４４ｍ　１．　）に溶解した液に亜鉛（１，４４ｍｇ、２．２０ｍｒｎｏｌ）及び１．０ＭのＫＨ，ＰＯ，（０，２９ｍＬ）を加えた。反応液を４０分間撹拌した。更に亜鉛（１５０ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ）及び１．０ＭのＫＨｚ　ＰＯ４（０，２９ｍＬ）を加えた０反応液を３０分間撹拌した。更に亜鉛（１５０ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ）及び工、ＯＭのＫＨｚ　ＰＯ −（０，２９ｍＬ）を加えた０反応液を２０分間攪拌し、濾過し、アセトニトリル（２５ｍＬ）　、次いで５０％水性アセトニトリル（１ＯｍＬ）で洗浄し、溜去して固体（１４０ｍｇ）を得た。粗生成物の３分の１を手分析Ｃ−１８逆相液体クロマ１−グラフィーカラム」二で４５％アセトニトリル／水、１％酢酸を移動相として予備的液体クロマトグラフィーにて精製した。最終のキレ−１・剤化合物１１が白色フィルム（１７ｍｇ、０．０２５ｒｎｍ。

１）として得られた。従って、粗生成物の全量を液体クロマトグラフィーに付したとして算定した場合、収率は脱保ｒ！１基の２操作全体で３４％であった。化合物■は本発明のキレート剤化合物の−である。

実」１例−ユーＤ　Ａ　ｐ−：；ノヨ１２】≧二上工入ｊゾベと旦ｐＩＥ収合成経路の概略をＦｉｇ、７に示す。

４．５−ジアミノベンクン酸（ＤＡＰ）とスクシネート試藁且との縮合：ＤＡ、Ｐ　Ｃ３３８ｍｇ、１．６５ｍｒｒ＋、ｏ　１）及び実施例３で調製した ↓Ｊｉ（１１６０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ　（３，５ｍｌ、）に懸濁した水冷液にトリエチルアミン（１，０３ｍＬ、５．７７ｒｎｎｎｏｌ）を加えた。水浴を自然融解させ反応液を室温にて１８時間攪拌した。溶液を濃縮した。残渣を酢酸エチルとＰＨ４，０の緩衝液との間に分配した。水相を酢酸エチル（５０ｍＬ、２回）で洗浄した。酢酸エチル相を合わせて塩水で洗浄し、乾燥し、溜去した。

残渣をクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／混合ヘキサン、１％酢酸、４０　ＯｍＬ、次いで６５％酢酸／混合ヘキサン、１％酢酸）に付し、且を白色固体（７７０ｒｎｇ、１．１３ｍｍｏｌ）として６９％の収率で得た。

且のＴＦＰエステル■への変換：ＬＬ（３６３ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（ｌ。

ＯｍＬ）及びジクロルメタン（０，１ｍＬ）に溶解した水冷液にテトラフルオロフェノール（１１３ｍｇ、０．６８ｍｒｎｏｌ）及びＤＣＣ（１２９ｍｇ、０．６２ｒｎ、ｒｎｏｌ）を加えた。水浴を自然融解させ次いで反応液を室温にて１８時間攪拌した。反応液を０°Ｃまで冷却し、酢酸２滴で処理し、濾過した。濾液を溜去した。残渣をクロマトグラフィー（３０％酢酸エチル／混合ヘキサン）に付し３５を白色泡状物（３５０ｒｎｇ、０．４１ｍｍｏｌ）として８０％の収率で得た。

２５−のジスクシネートエステルリガンドｉ工への変換ニー３Ｊ−（２３０ｍ　ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の溶液を２時間攪拌した。溶液をトルエンと共沸情夫し減圧乾燥した。粗製の■を白色固体（２００ｍｇ）として得た。生成物の半量をＣ−１８半調製逆相カラム上で予備的液体クロマトグラフィーにより精製した。

最初に溶出する主ピーク（「Ａ」という。）を２２％の収率で白色固体（１９ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）として得た。第２の主溶出ピーク（ｒＢ、という。）を３９％の収率（３０ｍｇ、Ｏ８０５ｒｎｍｏｌ）で得た。［ＡＪ及びｒ３Ｊの両異性体は高分解能Ｆ　、６．　Ｂ　−Ｍ　Ｓで各親イオン及び類似のフラグメンテーシジンパターンを示した。化合物３４（これらの両異性体）は本発明のキレート剤化合物の−である。

スＪＬｆＬ亀 ■。　９１′″Ｔｅキレート：　実施例１乃至７で合成した４種のキレート剤化合物（化合物■、■、１１及び３６）の各々につき、次の操作に従って””Ｔｃで放射性標識した。

１ｍＬの注射用滅菌水を、グルコン酸第−錫複合体（グルコン酸ナトリウム５０ｍｇ及び塩化第一錫２水和物１．２ｍｇ：Ｍｅｒｃｋ　Ｆｒｏｓｓｔ、Ｃａｎａｄａより乾燥形態で入手可能）の入った滅菌バイアルに加え、バイアルを穏やかに振って内容物を溶解させた。得られたグルコン酸第−錫溶液の０．１ｍＬを空の滅菌バイアルに注入するには滅菌インスリン注射筒を用いた。過テクネチウム酸（０，７５ｍＬ、７５−７５−１Ｏ０：ＤｕＰｏｎｔＳＭｅｄｔｐｈｙｓｉｃｓ、、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ又はＥ、Ｒ，５ｑｕｉｂｂより人手される”Ｍｏ／”Ｔｃジェネレーターから溶出される）を加え、バイアルを穏やかに振って内容物を混合し、次いで室温にて１０分間インキキレートして””Ｔ　ｃ−グルコン酸複合体を形成した。

”＠Ｔ　ｃ−グルコン酸交換複合体を製造する別の経路では、キットには、５ｍｇのグルコン酸ナトリウム、０．１２ｍｇの塩化第一錫２水和物、安定化剤としての約０．１ｍｇのゲンチシン酸、及び賦形剤としての乳糖２０ｍｇよりなる凍結乾燥物を入れたバイアルが含まれる。ゲンチシン酸の量は変えることができ、通常０．１ｍｇまでは安定化効果が増加する。ゲンチシン酸が０．２ｍｇ又はこれを超えて加えられると望む反応の妨害が起こり得る。乳糖の量は、例えば２０乃至１００ｍｇの間の量で、変化させることができ、凍結乾燥を助ける効果がある。少ない量の（上記の他の具体例に比して）グルコン酸ナトリウム及び塩化第一錫を含んだバイアルの場合には、安定化剤及び賦形剤の添加は特に重要である。過テクネチウム酸すトリウム（約１００ｍＣｆ　）の１．　ｍ　Ｌを凍結乾燥物に直接に加えた。バイアルを穏やかに振って内容物を混合し、次いで上記の通りにインキュベートＬ７て””Ｔ　ｃ−グルコン酸複合体を形成させた。

アセトニトリル中０．３ｍｇのキレート剤溶液をバイアルに入れ次いで窒素ガス下で溶媒を除去することによって調製した、乾燥固体形態のキレート剤０．３ｍｇを入れた別のバイアルを用意した。

このバイフルに、次いで、０．８７ｍＬの１０口％イソプロピルアルコールを加え、バイアルを約２分間穏やかに振ってキレート剤を完全に溶解させた８次に、このキレート剤溶液の０．５８ｍ、Ｌを０．１６ｍＬの氷酢酸１０．２Ｎ塩酸（２：１４）を入れたバイアルに移し、バイアルを穏やかに振った。この酸性化溶液より０．５ｍ■７を上記にて調製した９９′″Ｔｃ−グルコン酸複合体を入れたバイアルに移し７た。穏やかに振って混合した後、バイアルを７５°Ｃ±２° Ｃの水浴中で１５分間インキュベートし、次いで直ちに０℃の水浴に移し２分間おいた。

リン酸緩衝生理食塩水０．５ｍＬ中モノクローナル抗体のＦａｂフラグメント１０ｍｇを含有する別のバイアルに、ｐ）１１０．０の１．０Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液０．３７ｍＬを加えた。Ｆａｂフラグメントは、モノクローナル抗体を通常の方法でパパイン処理することにより調製した６ＮＲ１−ＬＩＪ−１０と名づけられたこのモノクローナル抗体は汎癌性抗原を認識する。バイアルを穏やかに振った。他の同種的蛋白質をＮＲ−ＬＩＪ−１０７ラグメントの代わりに用いてもよい。

””Ｔ　ｃ−標識キレートの酸性化した溶液（上記）の入ったバイアルを氷浴から取り出Ｌ７．０．１ｍＬの炭酸水素ナトリウム緩衝液を加え、バイアルを振って混合した。直ちに、緩衝した抗体溶液（Ｌ記）を加え、穏やかに振って混合し室温にて２０分間インキュベートして放射性４１ｍキレートを抗体に結合させた。

結合体の精製には、ＤＥＡＥ−セファデックス又はＱＡＢ−セファデックスのいずれかの陰イオン交換樹脂を含有するカラムを使用した。カラムは次のようにして無菌条件下に調製した。１ｍＬのＱＡ　Ｅ−−セファ７−′７クスカラム５本の端同士′！−繋いで単一のカラムを構成した。或いは、１本の５ｍＬＱＡＥ− セファデックスカラムを用いてもよい。カラムをｐＨ６，８の３７ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液５ｍＬで洗浄した。１．２ｐｍのフィルター（Ｍｉｌｌｉｐ。

ｒｅ社より入手可能）をカラムに装着し、０，２μｍのフィルターをこの１．２ μｍのフィルターに取りつけた。２２−ゲージの滅菌無バイロージエン針をこの０．２μｍのフィルターに取りつけた。

反応混合液を３ｍＬ又は５ｍＬの注射筒内に吸引し、気泡は全て溶液から除去した。針を取外した後、注射筒をＱＡＥ−セファデックスカラムの反フィルター側末端に繋いだ。カラム末端のフィルターに取りつけた２２−ゲージ針より針キャップを取り外し、針の先端を滅菌無バイロージエン試験管に挿入した。ゆっくりと２分間かけて反応混合物をカラムに注入した。試験管内に集めた溶出液を廃棄した。カラム上端の空になった注射筒を７５ｍＭ　（０，４５％）塩化ナトリウム溶液（気泡を除去したもの）５ｒｎＬが入った５ｍＬの注射筒に取り替えた。

カラム他端の針を滅菌無パイロ−ジエンの１０ｍＬの血清バイアルに無菌的に挿入した。ゆっくりと２分間かけて１、この塩化ナトリウム溶液をカラムに注入し、溶出液を血清バイアルに集めた。

得られた放射性標識抗体フラグメントは次の通りである。

２・　１″”Ｒｅキレート同キレート剤化合物は””Ｔ　ｃによる標識操作に類似の操作にて１ｌＩＲｅにより放射性標識することができる。Ｗ−１８８／Ｒｅ−１８８研究規模ジエネレーターから得られる過レニウム酸ナトリウムをクエン酸（１ｌｌｌＲｅには好ましい複合化剤である）、還元剤、及び好ましくはゲンチシン酸及び乳糖と組合せる。得られるｌｌｌＲｅ−クエン酸交換複合体を上記の所望のキレート剤化合物と共に加熱する＊Ｃ１ｌ逆相低圧材料（Ｂａｋｅｒ　Ｃ１，カートリッジ）を１１１ＩＲｅキレートの精製に使用することができる。す′″Ｔｃの操作にて記載したのと同様にしてモノクローナル抗体又はそのフラグメントを緩衝液中でキレートと反応させてキレートを結合させる。セファデックスＧ−２５カラムを該放射性標識抗体の精製に使用することができる。

実ＭＬＬ実施例８で調製した９”Ｔｃ標識抗体フラグメント４種の生体内分布をラットモデルで解析した。蛋白質１００μｇ（約０．５ｍ、Ｃ１）をＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに静注した。４種の放射性標識抗体フラグメント（すなわち、４種の異なるキレート剤化合物で放射性標識したＮＲ−ＬＬＪ−１０Ｆａｂフラグメント）を各３匹のラットに注射した。生体内分布は注射の６時間後に、腸及び腎臓を摘出し、線量キャリブレータ−を用いて、注射した放射能によるこれらの組織のグラム当りのｍＣｉ量を測定することにより解析した。腸及び腎臓組織のグラム当りの投与量の割合を算出して平均し、３匹の動物よりなる各群の平均値を得た。

結果を、次の式Ｉ、（式中、フラグメントはカルボン酸置換基を有しないＮ、Ｓｔキレートで標識されている）で示される放射性１識抗体フラグメントの放射能の腸内局在データと比較した。

式■で示される放射性標識フラグメントに比し、本発明の４種の各放射性標識抗体フラグメントでは放射能の腸内局在が減少していることが確認された。

実Ｊｉｆｉｌ史放射性標識抗体フラグメントの調製１　、９１＋″Ｔｅキレート：　以下の操作（両化合物にとって好ましい操作である）に従って、キレート剤化合物■及びｎ（それぞれ実施例４および７にて合成）を””Ｔ　ｃで放射性標識した。

１ｍＬの注射用滅菌水をグルコン酸第−錫（グルコン酸ナトリウム５０ｍｇ及び塩化第一錫２水和物１．２ｍｇ：Ｍｅｒｃｋ　Ｆｒｏｓ　ｓ　ｔ、Ｃａｎａｄａより乾燥固体形態で入手可能）を入れた滅菌バイアルに加え、バイアルを穏やかに振って内容物を溶解させた。得られたグルコン酸第−錫溶液の０．１ｍＬを空の滅菌バイアルに注入するには滅菌インスリン注射筒を使用した。過テクネチウム酸（０，７５ｍＬ、７５乃至１００ｍＣ１：ＤｕＰｏｎｔ、Ｍｅｄｉｐｈｙｓ　ｉｃｓ、Ｍａ　Ｉ　Ｉ　１ｎｃｋｒｏｄｔ又はＥ、Ｒ，５ｑｕｉｂｂより人手される９９Ｍｏ／”Ｔｃジェネレーターより溶出する）を加え、バイアルを穏やかに振って内容物を混合し、次いで室温にて１０分間インキュベートして９９１１Ｔｃ−グルコン酸複合体を形成した。

別に、０．３ｒｎｇのキレート剤のアセトニトリル溶液をバイアルに入れ、次いで窒素ガス下にで溶媒を除去することにより、０．３ｍｇのキレート剤（Ｉ土又はｌ）を乾燥固体形態で含むバイアルを用意した。次いでこのバイアルに０．８７ｍＬの１００％イソプロピルアルコールを加え、バイアルを約２分間穏やかに振ってキレート剤化合物を完全に溶解させた。次に、このキレート剤の溶液のうち０．５８ｒｎＬを０．１６ｍＬの氷酢酸１０．２Ｎ塩酸（２：１４）を含むバイアルに移し、バイアルを穏やかに振った。この酸性化した溶液のうち０．５ｍＬを上記にて準備した””Ｔ　ｃ−グルコン酸複合体を含むバイアルに移した。

穏やかに振って混合した後、バイアルを７５°Ｃ±２°Ｃの水浴中で１５分間インキュベートし、次いで直ちｔ′０°Ｃの水浴に移ξ、て２分間イン本ヱベートした。

化合物ｌｉについては、及び化合物■の放射性標識収率が４０％より低い場合には常に、抗体に結合させる前に放射性標識キレートを次のようにして精製した。

ＳＰＥ　Ｃ＋＊抽出カラム（Ｂａｋｅｒより入手し得る逆相カラム）を２ｍＬのエタノールで次いで２ｍＬの滅菌水で洗浄することにより再生した。次いで反応混合物をカラム上端に負荷した。１％エタノール１０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）の各２ｍＬでカラムを６乃至８回洗浄し１０分間減圧乾燥した。　” ”Ｔ　ｃキレートを、化合物Ｈの場合は０．５ｍＬのアセトニトリルを用い、化合物Ｈの場合は１ｍＬのアセトニトリルを用いて溶出させた。抗体と結合させるに先立ち、アセトニトリルを窒素気流下に情夫した。

こうして精製した１１″Ｔｃキレートを実施例８に記載したモノクローナル抗体（ＮＲ−ＬＵ−１０と命名されている）のＦａｂフラグメントに結合させた。他の同種的蛋白質をＮＲ−ＬＵ−１０に替えてもよい。

裏施汎土上キレ−ム　ユＥ使Ｌ−９″ＩＩＴＣレー　の化合物■（実施例６で調製した）を以下の操作により放射性標識した。この方法は特にこのキレート剤化合物には好ましい方法である：ＬｍＬのＮａＴｃ０ａ　（〜Ｌ　０ＯｒｎＣｉ）を、５．Ｏｒｎｇのグルコン酸ナトリウム、０．１２ｍｇの塩化第一錫２水和物、０．１ｍｇのゲンチシン酸、及び２０ｍｇの乳糖を含有する凍結乾燥物（凍結乾燥ｐ　Ｈは３．５）に加えた。バイアルを室温にて２分間インキュベートした後、０．１ｍＬの化合物■（９０％イソプロピルアルコール中１ｍｇ／ｍＬ）を加えた。次いで０．３００ｍＬのイソプロピルアルコール及び０．０６０ｍＬの０．ＩＮ塩酸を加えた。

２ｍｌの空気をバイアル内に加え、７５゛ｃにて１５分間インキュベートした０次いでバイアルを直ちにＯ′Ｃの水浴に移して２分間おいた。

得られたｌ？＋ＩＴｃキレートは実施例８に記載したように抗体フラグメントに結合した。他の同種的蛋白質を該抗体フラグメントに代えてもよい。

ＦＩＧ、　１ＦＩＧ、　２玖Ｒ＝ｓｕｃｃＦＩＧ、　３Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　５ｕｃｃ１ｎａｔｅ　ｒｅａ９ｅｎｔ　１６　ｖｉａ　ｏｘａｔｈ１ｏ１ｏｒ＋ｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　５ＵＣＣ１ｒｉａｔｅ　ｒｅａ９ｅｎｔ　１６　ＵＳｉｎｃ）　ＬＤＡ■ ＦＩＧ、　４四ＦＩＧ、　５ＦＩＧ、　６ＦＩＧ、　７国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒはそれぞれ独立して、＝Ｏ、Ｈ２、低級アルキル基、−（ＣＨ２）ｎ −ＣＯＯＨ、又はＲ１−Ｚを表し、ｎは０乃至３であり、Ｒ１は低級アルキル基又は置換基を有する低級アルキル基を表し、Ｚは蛋白質結合基又は向標的蛋白質を表し、Ｒ２はそれぞれ独立して、Ｈ２、低級アルキル基、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、又はＲ１−Ｚを表し、ｍはそれぞれ０又は１であるが、最大でも１個のｍが１であり、Ｔはそれぞれイオウ保護基を表し、並びに、該化合物は少なくとも１個の−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ置換基及び１個の−Ｒ１−Ｚ置換基を含んでなる。）で示される化合物。
２．Ｒ１が２乃至３個の炭素原子よりなるメチレン鎖である、請求項１に記載の化合物。
３．２個のＲ置換基が＝Ｏである、請求項１に記載の化合物。
４．少なくとも１個のＲ２置換基が−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである、請求項１に記載の化合物。
５．少なくとも１個のＴがヘミチオアセタールイオウ保護基である、請求項１に記載の化合物。
６．該蛋白質結合基が、活性エステル類、イソチオシアネート頬、アミン類、ヒドラジン類、チオール類及びマレイミｒ類からなる群より選ばれるものであり、ここにおいてアミンが該蛋白質結合基であるときはメチレン基が該アミンに直接に隣接しているものである、請求項１に記載の化合物。
７．該蛋白質結合基が活性エステルである、請求項６に記載の化合物。
８．該向標的蛋白質がモノクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求項１に記載の化合物。
９．次の式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｔはそれぞれヘミチオアセタールイオウ保護基を表し、及びＺは活性エステルを表す。）で示される化合物。
１０．次の式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａはアセタミドメチルイオウ保護基を表し、Ｔはヘミチオアセタールイオウ保護基を表し、及びＺは活性エステルを表す。）で示される化合物。
１１．次の式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａはアセタミドメチルイオウ保護基を表し、Ｔはヘミチオアセタールイオウ保護基を表し、及びＺは活性エステルを表す。）で示される化合物。
１２．次の式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａはアセタミドメチルイオウ保護基を表し、Ｔはヘミチオアセタールイオウ保護基を表し、及びＺは活性エステルを表す。）で示される化合物。
１３．式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｍは放射性核種金属又はそのオキシドを表し、Ｒはそれぞれ独立して、＝Ｏ、Ｈ２、低級アルキル基、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、又はＲ１−Ｚを表し、ｎは０乃至３であり、Ｒ１は低級アルキル基又は置換基を有する低級アルキル基を表し、Ｚは蛋白質結合基又は向標的蛋白質を表し、Ｒ２はそれぞれ独立して、Ｈ２、低級アルキル基、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ、又はＲ１−Ｚを表し、ｍはそれぞれ０又は１であるが、最大でも１個のｍが１であり、並びに、該化合物は少なくとも１個の−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ置換基及び１個の−Ｒ１−Ｚ置換基を含んでなる。）で示される化合物。
１４．Ｒ１が２乃至３個の炭素原子よりなるメチレン鎖である、請求項１３に記載の化合物。
１５．２個のＲ置換基が＝Ｏである、請求項１３に記載の化合物。
１６．少なくとも１個のＲ２置換基が−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである、請求項１３に記載の化合物。
１７．該蛋白質結合基が、活性エステル類、イソチオシアネート類、アミン類、ヒドラジン類、チオール類及びマレイミド類からなる群より選ばれるものであり、ここにおいてアミンが該蛋白質結合基であるときはメチレン基が該アミンに直接に隣接しているものである、請求項１３に記載の化合物。
１８．該蛋白質結合基が活性エステルである、請求項１７に記載の化合物。
１９．該向標的蛋白質がモノクローナル抗体又はそのフラグメントである、請求項１３に記載の化合物。
２０．Ｍが、９９ｍＴｃ、１８６Ｒｅ、１８■Ｒｅ、及びそれらのオキシドからなる群より選ばれる放射性核種金属を表すものである、請求項１３に記載の化合物。
２１．向標的蛋白質を放射性標識する方法であって、Ｚが蛋白質結合基を表すものである請求項１３に記載の化合物を該向標的蛋白質と反応させることよりなる方法。
２２．同標的蛋白質を放射性標識する方法であって、Ｚが蛋白質結合基を表すものである請求項１に記載の化合物を該向標的蛋白質と反応させることにより該化合物を該向標的蛋白質と結合させ、次いで該化合物を放射性標識することよりなる方法。
２３．該向標的蛋白質がモノクローナル抗体又はそのフラグメントである、請求項２１又は２２に記載の方法。