JP3016284B2 - 試料液を自動的に前処理する方法およびその装置 - Google Patents
試料液を自動的に前処理する方法およびその装置Info
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- JP3016284B2 JP3016284B2 JP3216423A JP21642391A JP3016284B2 JP 3016284 B2 JP3016284 B2 JP 3016284B2 JP 3216423 A JP3216423 A JP 3216423A JP 21642391 A JP21642391 A JP 21642391A JP 3016284 B2 JP3016284 B2 JP 3016284B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、試料液の前処理方法お
よびその装置に関し、詳細にはバイオアッセイに用いら
れる蛋白質、糖、核酸を含む試料液を自動的に前処理す
るための方法およびその装置に関する。
よびその装置に関し、詳細にはバイオアッセイに用いら
れる蛋白質、糖、核酸を含む試料液を自動的に前処理す
るための方法およびその装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】液体クロマトグラフィーを使用した天然
物、生理活性物質などの分離、精製については、試料液
の脱塩、濃縮あるいは塩置換等の前処理を行うのが一般
的である。従来かかる試料液の前処理における脱塩、塩
置換等の工程は各々独立して実施されており、かかる各
々の工程は常にオペレータが介在しなければならなかっ
た。
物、生理活性物質などの分離、精製については、試料液
の脱塩、濃縮あるいは塩置換等の前処理を行うのが一般
的である。従来かかる試料液の前処理における脱塩、塩
置換等の工程は各々独立して実施されており、かかる各
々の工程は常にオペレータが介在しなければならなかっ
た。
【０００３】
【この発明が解決しようとする課題】このため、従来の
試料液の前処理のための操作は極めて煩雑であり、近年
のバイオテクノロジーの発展に伴い多用される液体クロ
マトグラフィーのための試料液の前処理を人手を介さず
迅速に行なうことができなかった。
試料液の前処理のための操作は極めて煩雑であり、近年
のバイオテクノロジーの発展に伴い多用される液体クロ
マトグラフィーのための試料液の前処理を人手を介さず
迅速に行なうことができなかった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を解
決するためなされたものであり、本発明の第一の態様に
よれば、容器から指定成分を含む所定量の試料液を送液
して濾過膜を通過させることにより、試料液の脱塩また
は濃縮を行ない上記容器へ戻し、この脱塩または濃縮の
完了した試料液に必要に応じて適当量の別の溶液を注入
することにより、塩置換を行ない、所望の脱塩率、濃縮
率または塩置換率が得られるまで上記工程を自動的に繰
り返すことにより、試料液を自動的に前処理する。
決するためなされたものであり、本発明の第一の態様に
よれば、容器から指定成分を含む所定量の試料液を送液
して濾過膜を通過させることにより、試料液の脱塩また
は濃縮を行ない上記容器へ戻し、この脱塩または濃縮の
完了した試料液に必要に応じて適当量の別の溶液を注入
することにより、塩置換を行ない、所望の脱塩率、濃縮
率または塩置換率が得られるまで上記工程を自動的に繰
り返すことにより、試料液を自動的に前処理する。
【０００５】また、本発明の第二の態様によれば、試料
液を収容するための容器と、容器内の試料液の量を計量
するための手段と、試料液中の所定成分を除去するため
の限外濾過手段と、試料液を上記容器から上記限外濾過
手段を通過させ、容器へ戻すための送液手段と、濾過後
の試料液の物体を測定するための手段と、必要に応じて
容器内に適当量の別の溶液を注入するための手段と、あ
らかじめ設定された脱塩率、濃縮率または塩置換率が得
られるまで、送液および濾過を続け、必要に応じて容器
内に別の溶液を加えるための制御手段とから成る試料液
を自動的に前処理するための装置が提供される。
液を収容するための容器と、容器内の試料液の量を計量
するための手段と、試料液中の所定成分を除去するため
の限外濾過手段と、試料液を上記容器から上記限外濾過
手段を通過させ、容器へ戻すための送液手段と、濾過後
の試料液の物体を測定するための手段と、必要に応じて
容器内に適当量の別の溶液を注入するための手段と、あ
らかじめ設定された脱塩率、濃縮率または塩置換率が得
られるまで、送液および濾過を続け、必要に応じて容器
内に別の溶液を加えるための制御手段とから成る試料液
を自動的に前処理するための装置が提供される。
【０００６】
【作用】本発明によれば、容器内の試料液は送液手段、
例えばポンプにより所定成分、例えば所定の塩を含む溶
媒が除去され、再度容器へ戻される。このとき濾過後の
試料液の脱塩率および／または濃縮が測定される。容器
へは、必要に応じて別の塩を含む溶液が注入され、その
設定された脱塩率、濃縮率または塩置換率が得られるま
で、連続的に上記の一連の工程が繰り返される。
例えばポンプにより所定成分、例えば所定の塩を含む溶
媒が除去され、再度容器へ戻される。このとき濾過後の
試料液の脱塩率および／または濃縮が測定される。容器
へは、必要に応じて別の塩を含む溶液が注入され、その
設定された脱塩率、濃縮率または塩置換率が得られるま
で、連続的に上記の一連の工程が繰り返される。
【０００７】
【実施例】以下添付図面を参照して本発明について説明
する。
する。
【０００８】図１には、本発明に係る試料液を自動的に
前処理するための装置を含む、自動サンプリング濾過シ
ステムおよびこれと結合される液体クロマトグラフィー
システムが図示されている。自動サンプリング濾過シス
テムは、液体クロマトグラフィーシステム１により分離
された試料を取り出すためのフラクションユニット２
と、上記フラクションユニット２により取り出された試
料液を濾過膜に通過させることにより脱塩、濃縮または
必要に応じて塩置換を行なう前処理ユニット３と、前記
前処理ユニット３により処理された試料液を液体クロマ
トグラフィーへ導入するための自動サンプリングユニッ
ト４とからなる。
前処理するための装置を含む、自動サンプリング濾過シ
ステムおよびこれと結合される液体クロマトグラフィー
システムが図示されている。自動サンプリング濾過シス
テムは、液体クロマトグラフィーシステム１により分離
された試料を取り出すためのフラクションユニット２
と、上記フラクションユニット２により取り出された試
料液を濾過膜に通過させることにより脱塩、濃縮または
必要に応じて塩置換を行なう前処理ユニット３と、前記
前処理ユニット３により処理された試料液を液体クロマ
トグラフィーへ導入するための自動サンプリングユニッ
ト４とからなる。
【０００９】容器３１内に収容された蛋白質、糖、核酸
等を含む試料液は、ポンプ３２により後述するサンプリ
ングユニット４１内の切換バルブ１９を通して液体クロ
マトグラフ３０へ送られ、ここで所定成分が分解された
後、成分検出器７およびキャピラリーチューブ６を通し
てフラクションユニット２へ取り出される。
等を含む試料液は、ポンプ３２により後述するサンプリ
ングユニット４１内の切換バルブ１９を通して液体クロ
マトグラフ３０へ送られ、ここで所定成分が分解された
後、成分検出器７およびキャピラリーチューブ６を通し
てフラクションユニット２へ取り出される。
【００１０】このフラクションユニット２は、電磁弁５
からなり、キャピラリーチューブ６を通過した試料液を
ターンテーブル９上の試料カップ８に導く。前記処理が
不要な場合には、装置外へ排出される。
からなり、キャピラリーチューブ６を通過した試料液を
ターンテーブル９上の試料カップ８に導く。前記処理が
不要な場合には、装置外へ排出される。
【００１１】ターンテーブル９上には複数の試料カップ
８が配置されており、資料液が導入された試料カップ８
は、前処理ユニット３のポートに移動するようになって
いる。 本発明に係る前処理ユニット３は、試料カップ
８と、このカップ８内の試料の重量を測定するための重
量天秤２０と、試料カップ８から膜モジュール１１へ送
液するためのチューブポンプ１０と、膜モジュール１１
の下流側に直列に接続された抵抗管１２と、膜モジュー
ル１１通過後の試料液内のイオンを測定するためのイオ
ンモニタ１３と、試料液の伝導度を測定するための伝導
度モニタ１４と、そして、置換液を試料カップ８に導入
するための置換液導入ポンプ１５とからなる。
８が配置されており、資料液が導入された試料カップ８
は、前処理ユニット３のポートに移動するようになって
いる。 本発明に係る前処理ユニット３は、試料カップ
８と、このカップ８内の試料の重量を測定するための重
量天秤２０と、試料カップ８から膜モジュール１１へ送
液するためのチューブポンプ１０と、膜モジュール１１
の下流側に直列に接続された抵抗管１２と、膜モジュー
ル１１通過後の試料液内のイオンを測定するためのイオ
ンモニタ１３と、試料液の伝導度を測定するための伝導
度モニタ１４と、そして、置換液を試料カップ８に導入
するための置換液導入ポンプ１５とからなる。
【００１２】初期重量を重量天秤２０により測定された
試料カップ８の試料は、チューブポンプ１０により、連
続して膜モジュール１１にて限外ろ過され、脱塩または
濃縮された後、抵抗管１２、イオンモニタ１３及び伝導
度モニタ１４を通って試料カップ８へ戻される。ろ過後
の試料液は再度重量測定され、イオンモニタ１３及び伝
導度モニタ１４の出力等に基づき、脱塩率または濃縮率
が測定され、予め設定された脱塩率または濃縮率が得ら
れるまで上記の一連の工程が繰り返される。塩置換が必
要な場合には、置換液導入ポンプ１５により置換液が試
料カップ８に導入され、ろ過により除去された塩と置換
され、所望の置換率が得られるまでろ過による濃縮及び
置換が繰り返される。
試料カップ８の試料は、チューブポンプ１０により、連
続して膜モジュール１１にて限外ろ過され、脱塩または
濃縮された後、抵抗管１２、イオンモニタ１３及び伝導
度モニタ１４を通って試料カップ８へ戻される。ろ過後
の試料液は再度重量測定され、イオンモニタ１３及び伝
導度モニタ１４の出力等に基づき、脱塩率または濃縮率
が測定され、予め設定された脱塩率または濃縮率が得ら
れるまで上記の一連の工程が繰り返される。塩置換が必
要な場合には、置換液導入ポンプ１５により置換液が試
料カップ８に導入され、ろ過により除去された塩と置換
され、所望の置換率が得られるまでろ過による濃縮及び
置換が繰り返される。
【００１３】こうして前処理の完了した試料カップ８内
の試料液が、ターンテーブル９の回転により、サンプリ
ングユニット４のポートでサンプリングされる。
の試料液が、ターンテーブル９の回転により、サンプリ
ングユニット４のポートでサンプリングされる。
【００１４】サンプリングユニット４は、切換バルブ１
９と、試料保持チューブ１８と、試料カップ８から試料
液を吸引するためのシリンジポンプ１６とからなる。切
換バルブ１９が図中の実線位置にあり、ポンプ１６が吸
引を開始すると、カップ８内の前処理された試料液は、
エア検知器１７を介してバルブ１９、試料保持ループ１
８及びバルブ１９を介してポンプ１６に吸引される。次
にバルブ１９が図中の点線位置になると、ポンプ３２と
保持ループ１８と液体クロマトグラフィー３０が直列に
接続され、保持ループ１８内に保持されていた前処理済
みの液料が液体クロマトグラフィー３０へ送られ、更に
所定成分の分離、精製を行うようになっている。
９と、試料保持チューブ１８と、試料カップ８から試料
液を吸引するためのシリンジポンプ１６とからなる。切
換バルブ１９が図中の実線位置にあり、ポンプ１６が吸
引を開始すると、カップ８内の前処理された試料液は、
エア検知器１７を介してバルブ１９、試料保持ループ１
８及びバルブ１９を介してポンプ１６に吸引される。次
にバルブ１９が図中の点線位置になると、ポンプ３２と
保持ループ１８と液体クロマトグラフィー３０が直列に
接続され、保持ループ１８内に保持されていた前処理済
みの液料が液体クロマトグラフィー３０へ送られ、更に
所定成分の分離、精製を行うようになっている。
【００１５】本発明者は、本発明に係る前処理ユニッ
ト、フラクションユニット（ＦＣ）、サンプリングユニ
ット（ＡＳ）を有する本出願人により製造されたシステ
ムと液体クロマトグラフィシステムを組み合わせたシス
テムを下記のように構成し、蛋白質の精製を行った。
ト、フラクションユニット（ＦＣ）、サンプリングユニ
ット（ＡＳ）を有する本出願人により製造されたシステ
ムと液体クロマトグラフィシステムを組み合わせたシス
テムを下記のように構成し、蛋白質の精製を行った。
【００１６】実験例１ イオン交換とゲル濾過の２種類のカラムを組み合わせ
て、α−アミラーゼの精製を行った。
て、α−アミラーゼの精製を行った。
【００１７】（使用装置） コントローラ：ＳＣ−８０１０（液体クロマトグラフィ
ー制御）（東ソー社製） 検出器：ＵＶ−８０１０ ポンプ：ＣＣＰＭ バルブ：ＭＶ−８０１１、ＭＶ−８０１０ ２台 ＡＳ、ＦＣ、濃縮脱塩：バイオアシスト カラム：ＤＥＡＥ−トヨパールパック６５０Ｓ（２．２
×２０ｃｍ） ＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ Ｇｌａｓｓ （２×３０
ｃｍ） 活性部位測定用ＦＣ：ＦＣ−８０１０ 上記装置を図２のように組み合わせて、α−アミラーゼ
の精製を行った。
ー制御）（東ソー社製） 検出器：ＵＶ−８０１０ ポンプ：ＣＣＰＭ バルブ：ＭＶ−８０１１、ＭＶ−８０１０ ２台 ＡＳ、ＦＣ、濃縮脱塩：バイオアシスト カラム：ＤＥＡＥ−トヨパールパック６５０Ｓ（２．２
×２０ｃｍ） ＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ Ｇｌａｓｓ （２×３０
ｃｍ） 活性部位測定用ＦＣ：ＦＣ−８０１０ 上記装置を図２のように組み合わせて、α−アミラーゼ
の精製を行った。
【００１８】（精製工程）粗α−アミラーゼの３０ｍｇ
／ｍｌを含む２０ｍＭトリス−塩酸緩衝溶液（ｐＨ８．
０）を２ｍｌ採取して、以下の条件でイオン交換液体ク
ロマトグラフにかけて、分取、精製を行い、回収フラク
ション量として４５ｍｌを得た。
／ｍｌを含む２０ｍＭトリス−塩酸緩衝溶液（ｐＨ８．
０）を２ｍｌ採取して、以下の条件でイオン交換液体ク
ロマトグラフにかけて、分取、精製を行い、回収フラク
ション量として４５ｍｌを得た。
【００１９】 カラム：ＤＥＡＥ−トヨパール６５０Ｓ 溶離液：Ａ液 ２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０） Ｂ液 Ａ液＋０．５ＮａＣｌ グラジェント条件： ０分→４０分 Ｂ液 ０％→６６．７％ ４０分→４５分 Ｂ液 １００％ ４５分→ Ｂ液 ０％ 溶離液流速：５ｍｌ／分 分取部位：３０分〜３９分（９分間） 回収フラクション量のうちの４４ｍｌを、濃縮、塩置換
のために膜モジュールに導入して、５ｍｌまで濃縮し、
溶離液を９９％リン酸緩衝溶液（ｐＨ６．６）とした。
溶液の循環流速は１０ｍｌ／分で、濃縮、塩置換時間
は、５０分であった。
のために膜モジュールに導入して、５ｍｌまで濃縮し、
溶離液を９９％リン酸緩衝溶液（ｐＨ６．６）とした。
溶液の循環流速は１０ｍｌ／分で、濃縮、塩置換時間
は、５０分であった。
【００２０】次いで、得られた濃縮、塩置換溶液の２ｍ
ｌと１．５８ｍｌをそれぞれサイズ排除液体クロマトグ
ラフに以下の条件で導入した。
ｌと１．５８ｍｌをそれぞれサイズ排除液体クロマトグ
ラフに以下の条件で導入した。
【００２１】 カラム：Ｇ３０００ＳＷ Ｇｌａｓｓ 溶離液：５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．６） 溶離液流速：３ｍｌ／分 分取部位：３４．５分〜３９．５分（５分間） 回収フラクション量として合計３０ｍｌを得た。この内
２９ｍｌを膜モジュールに導入して、循環流速１０ｍｌ
／分、濃縮時間１３分で５ｍｌまで濃縮した。
２９ｍｌを膜モジュールに導入して、循環流速１０ｍｌ
／分、濃縮時間１３分で５ｍｌまで濃縮した。
【００２２】なお、液体クロマトグラフの分取部位は、
あらかじめ活性部位測定用ＦＣ−８０１０によりタイム
フラクションして活性部位を決めた。
あらかじめ活性部位測定用ＦＣ−８０１０によりタイム
フラクションして活性部位を決めた。
【００２３】以上の操作にかかった時間は、イオン交換
液体クロマトグラフ分取に５０分、濃縮、塩置換に５０
分、サイズ排除液体クロマトグラフ分取に５０分×２の
１００分、最後の濃縮に１３分の合計２１３分であっ
た。
液体クロマトグラフ分取に５０分、濃縮、塩置換に５０
分、サイズ排除液体クロマトグラフ分取に５０分×２の
１００分、最後の濃縮に１３分の合計２１３分であっ
た。
【００２４】（精製結果）最終的にはＳＷカラムで分取
し、分析カラムで確認したところ９０％の純度であっ
た。このときのタンパク質の量はスタート時の約２０％
であった。このなかのα−アミラーゼの回収率を、活性
から求めたところ以下のようになった。
し、分析カラムで確認したところ９０％の純度であっ
た。このときのタンパク質の量はスタート時の約２０％
であった。このなかのα−アミラーゼの回収率を、活性
から求めたところ以下のようになった。
【００２５】 回収率（％；比活性） ──────────────────────────────────── スタート時（原液） １００ ＤＥＡＥ分取フラクション １０３．９ 膜処理；濃縮、塩置換 ７７．２ ＳＷ分取フラクション ７７．１ 終了時（膜処理；濃縮） ６７．９ 実験例２ イオン交換、疎水及びゲル濾過の３種類のカラムを組み
合わせて、β−ガラクトシダーゼの精製を行った。
合わせて、β−ガラクトシダーゼの精製を行った。
【００２６】（使用装置） コントローラ：ＳＣ−８０１０ 検出器：ＵＶ−８０１０ ポンプ：ＣＣＰＭ樹脂仕様 バルブ：ＳＶ−８０１０、ＭＶ−８０１１、ＭＶ−８０
１０ ＡＳ、ＦＣ、濃縮脱塩：バイオアシスト カラム：ＤＥＡＥ−トヨパールパック６５０Ｓ Ｂｕｔｙｌ−トヨパールパック６５０Ｓ ＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ Ｇｌａｓｓ 電源ユニット：ＰＳ−８０１０ プリンタ：ＰＳ−８０１０ 活性部位測定用ＦＣ：ＦＣ−８０１０ 上記装置を図３のように組み合わせて、β−ガラクトシ
ダーゼの精製を行った。
１０ ＡＳ、ＦＣ、濃縮脱塩：バイオアシスト カラム：ＤＥＡＥ−トヨパールパック６５０Ｓ Ｂｕｔｙｌ−トヨパールパック６５０Ｓ ＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ Ｇｌａｓｓ 電源ユニット：ＰＳ−８０１０ プリンタ：ＰＳ−８０１０ 活性部位測定用ＦＣ：ＦＣ−８０１０ 上記装置を図３のように組み合わせて、β−ガラクトシ
ダーゼの精製を行った。
【００２７】（精製工程）粗β−ガラクトシターゼの１
０ｍｇ／ｍｌを含む２０ｍＭトリス−塩酸緩衝溶液（ｐ
Ｈ８．０）を５ｍｌ採取して、以下の条件でイオン交換
液体クロマトグラフにかけて、分取、精製を行い、回収
フラクション量として９９ｍｌを得た。
０ｍｇ／ｍｌを含む２０ｍＭトリス−塩酸緩衝溶液（ｐ
Ｈ８．０）を５ｍｌ採取して、以下の条件でイオン交換
液体クロマトグラフにかけて、分取、精製を行い、回収
フラクション量として９９ｍｌを得た。
【００２８】 カラム：ＤＥＡＥ−トヨパール６５０Ｓ（２２φ ２００ｍｍ） 溶離液：Ａ液 ２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０） Ｂ液 Ａ液＋０．５ＭＮａＣｌ グラジェント条件： ０分→８０分 Ｂ液 ０％→６６．７％ ８０分→９０分 Ｂ液 １００％ 溶離液流速：３ｍｌ／分 フラクション部位：４５分〜７８分 回収フラクションのうちの９８ｍｌを濃縮、塩置換のた
めに膜モジュールに導入して、５．４ｍｌまで濃縮し、
溶離液性を９９％５０ｍＭリン酸緩衝溶液＋２Ｍ硫酸ア
ンモニウム（ｐＨ６．６）とした。濃縮、塩置換時間は
７８分であった。次いで、得られた濃縮、塩置換溶液の
４．２ｍｌを疎水液体クロマトグラフに以下の条件で導
入した。
めに膜モジュールに導入して、５．４ｍｌまで濃縮し、
溶離液性を９９％５０ｍＭリン酸緩衝溶液＋２Ｍ硫酸ア
ンモニウム（ｐＨ６．６）とした。濃縮、塩置換時間は
７８分であった。次いで、得られた濃縮、塩置換溶液の
４．２ｍｌを疎水液体クロマトグラフに以下の条件で導
入した。
【００２９】 カラム；Ｂｕｔｙｌ−トヨパール６５０Ｓ（２２φ ２００ｍｍ） 溶離液：Ａ ５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０） Ｂ Ａ液＋０．５ＭＮａＣｌ グラジェント条件： ０分→８０分 Ｂ液 ０％→７５％ ９０分→１００分 Ｂ液 １００％ 溶離液流速：３ｍｌ／分 フラクション部位：５５分〜８８分 回収フラクションとして９９ｍｌを得た。この内９８ｍ
ｌを膜モジュールに導入して、濃縮時間４９分で５．３
ｍｌまで濃縮した。
ｌを膜モジュールに導入して、濃縮時間４９分で５．３
ｍｌまで濃縮した。
【００３０】更に、得られた濃縮、塩置換溶液の２ｍｌ
と１．６ｍｌをそれぞれサイズ排除液体クロマトグラフ
に以下の条件で導入した。
と１．６ｍｌをそれぞれサイズ排除液体クロマトグラフ
に以下の条件で導入した。
【００３１】 カラム：ＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ Ｇｌａｓｓ
（２２φ×２００ｍｍ）×２本 溶離液：５０ｍＭリン酸緩衝液＋０．２５ＭＮａＣｌ
（ｐＨ６．６） 溶離液流速：３ｍｌ／分 フラクション部位：２７分〜３７分 回収フラクション量として合計６６ｍｌを得た。この内
６５ｍｌを膜モジュールに導入して、濃縮時間を２２分
で５．５ｍｌまで濃縮した。
（２２φ×２００ｍｍ）×２本 溶離液：５０ｍＭリン酸緩衝液＋０．２５ＭＮａＣｌ
（ｐＨ６．６） 溶離液流速：３ｍｌ／分 フラクション部位：２７分〜３７分 回収フラクション量として合計６６ｍｌを得た。この内
６５ｍｌを膜モジュールに導入して、濃縮時間を２２分
で５．５ｍｌまで濃縮した。
【００３２】なお、液体クロマトグラフの分取部位は、
あらかじめ活性部位測定用ＦＣ−８０１０によりタイム
フラクションして活性部位を求めた。
あらかじめ活性部位測定用ＦＣ−８０１０によりタイム
フラクションして活性部位を求めた。
【００３３】以上の操作にかかった時間は、イオン交換
液体クロマトグラフ分取に９０分、濃縮、塩置換に７８
分、疎水液体クロマトグラフ分取に１００分、濃縮に４
９分、サイズ排除液体クロマトグラフ分取に４６分×２
の９２分、最後の濃縮に２２分の合計４２１分であっ
た。
液体クロマトグラフ分取に９０分、濃縮、塩置換に７８
分、疎水液体クロマトグラフ分取に１００分、濃縮に４
９分、サイズ排除液体クロマトグラフ分取に４６分×２
の９２分、最後の濃縮に２２分の合計４２１分であっ
た。
【００３４】（精製結果）最終的に得たタンパク質は、
スタート時の１２％であった。これに対し、酵素活の回
収率は４４％である。各工程における活性回収率を示
す。 回収率（％；比活性） ──────────────────────────────────── スタート時（原液） １００ ＤＥＡＥ分取フラクション ８８．９ 膜処理；濃縮、塩置換 ９０．５ Ｂｕｔｙｌ分取フラクション ４２．４＊ 膜処理；濃縮 ６５．０ ＳＷ分取フラクション ５８．６ 終了時（膜処理；濃縮） ４３．９ ＊Ｂｕｔｙ１分取フラクションの活性が低いのは塩濃度
が高い試料を用いたためと思われる。その後回復してい
る。
スタート時の１２％であった。これに対し、酵素活の回
収率は４４％である。各工程における活性回収率を示
す。 回収率（％；比活性） ──────────────────────────────────── スタート時（原液） １００ ＤＥＡＥ分取フラクション ８８．９ 膜処理；濃縮、塩置換 ９０．５ Ｂｕｔｙｌ分取フラクション ４２．４＊ 膜処理；濃縮 ６５．０ ＳＷ分取フラクション ５８．６ 終了時（膜処理；濃縮） ４３．９ ＊Ｂｕｔｙ１分取フラクションの活性が低いのは塩濃度
が高い試料を用いたためと思われる。その後回復してい
る。
【００３５】
【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば蛋
白質などを含む試料液の脱塩、濃縮又は塩置換を自動的
で連続的に行うことができ、操作が簡便である。
白質などを含む試料液の脱塩、濃縮又は塩置換を自動的
で連続的に行うことができ、操作が簡便である。
【図１】本発明にかかる試料液前処理装置を含む自動的
精製システムの構成図である。
精製システムの構成図である。
【図２】実験例１に用いられたシステム構成図である。
【図３】実験例２に用いられたシステム構成図である。
１ 液体クロマトグラフィー ２ フラクションユニット ３ 前処理ユニット ４ 試料サンプリングユニット ５ 電磁弁 ６ キャピラリーチューブ ７ 検出器 ８ 試料カップ ９ ターンテーブル １０ ポンプ １１ 膜モジュール １２ 抵抗管 １３ イオンモニタ １４ 伝導度モニタ １５ 置換液導入ポンプ １６ シリンダポンプ １７ エア検出器 １８ 保持ループ １９ 切換バルブ
Claims (5)
- 【請求項１】 容器から所定成分を含む所定量の試料液
を送液してろ過膜を通過させることにより、試料液の脱
塩または濃縮を行い上記容器へ戻し、所望の脱塩率また
は濃縮率が得られるまで上記工程を自動的に繰り返すこ
とから成る、試料液を自動的に前処理するための方法。 - 【請求項２】 容器から所定成分を含む所定量の試料液
を送液してろ過膜を通過させることにより、試料液の脱
塩または濃縮を行い上記容器へ戻し、この脱塩または濃
縮した試料液に適当量の別の溶液を注入することにより
塩置換を行ない、所望の脱塩率、濃縮率または塩置換率
が得られるまで上記工程を自動的に繰り返すことから成
る、試料液を自動的に前処理するための方法。 - 【請求項３】 上記試料液は蛋白質、糖、核酸を含む試
料液である請求項１または２に記載の方法 - 【請求項４】 試料液を収容するための容器と、容器内
の試料液の量を計量するための手段と、試料液中の所定
成分を除去するための限外ろ過手段と、試料液を上記容
器から上記限外ろ過手段を通過させ、容器へ戻すための
液送手段と、ろ過後の試料液の物体を測定するための手
段と、容器内に適当量の別の溶液を注入するための手段
と、容器内に別の溶液を加えるための制御手段とから成
り、あらかじめ設定された脱塩率、濃縮率または塩置換
率が得られるまで、液送およびろ過を続ける試料液を自
動的に前処理するための装置。 - 【請求項５】 ろ過後の試料液を測定するための手段
は、試料液中のイオンを測定する為のモニタおよび／ま
たは伝導率モニタとから成る請求項４に記載の装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3216423A JP3016284B2 (ja) | 1991-08-02 | 1991-08-02 | 試料液を自動的に前処理する方法およびその装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3216423A JP3016284B2 (ja) | 1991-08-02 | 1991-08-02 | 試料液を自動的に前処理する方法およびその装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0534248A JPH0534248A (ja) | 1993-02-09 |
| JP3016284B2 true JP3016284B2 (ja) | 2000-03-06 |
Family
ID=16688335
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3216423A Expired - Fee Related JP3016284B2 (ja) | 1991-08-02 | 1991-08-02 | 試料液を自動的に前処理する方法およびその装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3016284B2 (ja) |
-
1991
- 1991-08-02 JP JP3216423A patent/JP3016284B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0534248A (ja) | 1993-02-09 |
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