JP3309990B2 - 生物学的応答調節剤としての双性イオンの組成物及び方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 世界の人口において、癌の発生率は非常に重大であ
る。４人のうち１人が癌を、その生涯のある時期に発症
するものと推定される。癌を発症した者全体のうち半数
が、それで死亡する。癌に関連する死亡の発生率は、米
国では30年ごとに倍加している。増加する疾病発生率に
関連する多くの要因が存在する。多くの人が、より長寿
になり、高齢化する人口のために、発生率が上昇し得
る。環境的な毒物及び／または遺伝的変化も、この上昇
に役割を果たす可能性がある。

伝染病、特にウイルス感染の発生率の増加も存在して
いる。今や多くの病原性の菌株が認められる。ウイルス
が媒介する感染、例えば肝炎（Ａ、Ｂ及びＣ型）ならび
にHIV形式の感染は、人口に対して重大な影響力を有す
るに至った。いくつかの癌、例えばカポジ肉腫が、ウイ
ルスの感染に付随する。

自己免疫疾患に付随する多くの疾病が存在する。リュ
ーマチ様関節炎及び重症性筋無力症は、その例である。
多くの自己免疫疾患の原因が、不明確である。遺伝的及
び／または環境的側面がいくつかの方途で寄与して、造
血及び免疫の応答を変化させ得る。一定の薬物は、自己
免疫応答を誘発し得るばかりでなく、免疫抑制された状
態も誘導し得る。

癌の治療には、４通りの基本的方策がある。これらの
方策は、ときには多様式療法という形で結合される。基
本的な方策は、外科的切除、化学療法、放射線及び免疫
療法である。これに代わる方策は、自然療法、薬草投与
及び針療法を包含する。

自己免疫病に対する治療法は限定されている。主とし
て、ステロイド類の使用が頼みの綱となっている。疾
病、例えばリューマチ様関節炎や重症性筋無力症の進行
した症例は、良好に応答することは稀でしかない。

伝染病の治療法は、抗生物質の使用とともに多くの進
歩が存在している。何種類かの抗ウイルス性化合物が開
発されている。それらの使用は何種類かの感染にかなり
限定されている。HIVは、依然として、いかなる有意義
な治療法にも応答しない。免疫療法は、肝炎では限定的
に成功している。

最近の50年間には、様々な免疫療法の緩慢な開発が存
在している。これらは、特定のサイトカイン、ケモカイ
ン、リンホカインその他の、細胞培養の研究から派生
し、クローニングされた免疫学的物質の使用を包含して
いる。過去においては、細胞培養の一定の画分が、特異
的な応答を腫瘍に生起したことが示されている。化学療
法剤と放射線とは、多少の腫瘍応答を発生させたが、高
い毒性を有する。

癌、癌の疼痛、免疫学的に仲介される疾病、及び一定
の伝染病を効果的に治療する薬剤や組成物を開発する必
要性は、非常に重要であり続けている。

発明の要約 本発明は、哺乳動物への安全かつ効果的な生物学応答
調節剤としての双性イオン組成物の投与によって、該哺
乳動物の疾病を治療する方法と、用いられる双性イオン
組成物と、治療に用いるためのそのような双性イオン組
成物の製造とに関する。

本発明は、双性イオン化合物であるＮ−２ヒドロキシ
エチルピペラジン−N'−２エタンスルホン酸（HEPES）
は、生物学的応答調節剤（BRM）として決定的な効果を
有することを立証する。双性イオンの分子は、負の電荷
も正の電荷も保有しない物質である。双性イオンは、ゼ
ロである正味電荷を分子上に有し、等しく電離された正
と負との基を分子内に有する化合物であり、例えば、ヒ
ドロキシル基やアミノ基、及び酸性基、例えばリン酸、
カルボン酸またはスルホン酸の基を含む双極性分子であ
り、例えば、6.15〜8.4の範囲内のpKを一般に有する。

数多くの双性イオン化合物が、活性成分として、単独
でか、または様々な組合せのいずれかで、代表的には、
１種類もしくはそれ以上の固体または液体の製薬上許容
され得る担体材料と組合せて、哺乳動物疾病の治療に用
い得る。そのような双性イオン化合物の多くは、緩衝
剤、例えばHEPES、PIPES等々の化合物、及びそれらの塩
として認識かつ使用され、疾病の治療における活性成分
としては使用も認識もされていない。

いくつかの双性イオン化合物を、下記の表で説明す
る。

この表の双性イオン化合物は、通常は酸性基（COO^-ま
たはSO₃ ^-）及びアルカリ性の基（OH、またはＮ、NH及び
NH₂）を有する脂肪族複素環化合物または脂肪族化合物
のいずれかとして、１または２個の窒素−炭素結合によ
って特徴付けられる。

PIPES及びHEPESのような一つの双性イオン化合物の群
は、各末端に２個の窒素を有し、−CH₂−の二価基のよ
うな二価のアルキリデンと結合した六員複素環を含む
が、MESは、（CH₂）_n1-3によって酸性基と結合したNH基
を有する環中に、酸素と窒素の双方を有する複素環化合
物である。したがって、有用な双性イオン化合物の一
群、例えばHEPES、MES及びPIPESは、例として、構造
式： ［式中、R₁及びR₂は、（CH₂）_n1-3を表すか、またはR₁
は、環の一部としてN⁺もしくはN⁺Hを有する五〜六員複
素環の一部としての窒素または酸素であるか、あるいは
R₁は、（CH₂）_n1-3に直接結合した窒素を有し、該アル
キリデンは、アルカリ性の基、例えばNH₂またはOHの基
と結合している］ を有する。

双性イオン化合物は、不飽和の窒素及び炭素の基、例
えばＮ≡ＣやＮ＝Ｃ、すなわちアセチレンまたはエチレ
ン性のＮ−Ｃ不飽和を含んでよく、CH₂OHもしくはCH₂CH
₂OH、またはNH₂が、該化合物のアルカリ性末端を形成
し、CH₂SO₃またはCH₂CH₂SO₃が、該化合物の他方の酸性
末端を形成する。

両性の双性イオン化合物であるHEPESは、他の活性成
分、ならびに製剤組成物に代表的に用いられる他の成分
や担体；例えば、限定はされないが、様々な量での緩衝
剤、安定剤、染料、抗酸化剤、分散剤、充填剤、界面活
性剤、シリコーン、増量剤、顔料、塩類、ヒトまたは動
物の（天然もしくは合成の）細胞や細胞成分、抗生物
質、薬物、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、血清及び
他の様々な化合物とそれらの組合せとともに、活性成分
として用い得る。活性成分として治療に用いられる製剤
組成物中のHEPESの使用は、イヌの癌腫のマクロファー
ジ浸潤を与えること、したがって、様々な疾病の治療に
おいて抗腫瘍効果を与え、更には、試験において巨大血
小板と組織球の生成によって証拠立てられるとおり、免
疫刺激能力を立証することが示されている。

動物での試験では、500mg/kgまでの用量で、毒性の証
拠は全く示されないことが発見された。この用量を24時
間の間に３回摂取した動物もある。生物学的応答調節剤
としてのHEPESの用量の時間割は、疾病及び状態に応じ
て変動するが、治療のためには、約0.1〜5,000mg/kgの
範囲にわたり得る。

HEPESの免疫刺激効果は、動物で立証されている。試
験は、特定の用量レベルでは、すべての動物が、末梢塗
抹標本中に巨大血小板及び組織球の存在を立証すること
を示す。

すべての試験動物で、HEPESによって下記の結果が見
出された：（１）投与されたすべてのイヌは、注射部位
での血腫の急速な分解があった；（２）投与群の動物
で、投与の間に何らかの呼吸器感染を有したものは皆無
であったが、投与されなかった群では、多くが有した；
（３）すべてのイヌが、注射後に鎮静された；（４）治
療群では、改善された血管統合性の強力な証拠があっ
た。一定の投与量で顕著な利尿の証拠があり、腎機能及
び／または抗利尿ホルモン（ADH）に対する効果を示唆
する。

本発明は、Ｎ−２ヒドロキシエチルピペラジン−N'−
２エタンスルホン酸、式量238（すなわちC₂H₁₈N₂O₄S）
（HEPES）として公知の双性イオン及びその酸性塩；例
えばナトリウムもしくはカリウム、の用途に仕向けら
れ、また特にそれによって効果的である。それらは、細
胞培養では緩衝剤として常套的に用いられ、現在まで、
細胞、生理学的経路または疾病過程に対していかなる効
果を有することも疑われなかった。

ここに、HEPESは、真の生物学的応答調節剤（BRM）で
あることが示される。それらは、癌、癌の疼痛、自己免
疫病、ウイルス感染、及び毒性症候群に肯定的な変化を
及ぼす。単独で、及び／または哺乳動物の血清との併用
で、及び／または哺乳動物の血清を用いた細胞培養の上
清との併用で用いることができる。血清及び／または細
胞培養上清との潜在的相互作用が存在するように思われ
る。生体活性の経路は、様々な組成の双性イオン分子に
よって影響される可能性がある。これらの分子は、抗腫
瘍活性を誘導し、腫瘍の量と寸法との減少を生起し、腫
瘍の壊死及び／または溶解を誘導し、癌による疼痛を軽
減し、自己免疫介在疾病における自己免疫の活性の低下
を誘導し、炎症過程を緩和し、そして抗ウイルス活性を
有する。

作用の機序は、単一であるか、または生理学的、病態
生理学的及び免疫学的経路を含んで多重であり得る。特
異的な経路及び／または特異的な受容体部位を活性化及
び／または刺激及び／または遮断するという効果があり
得る。造血系に対して肯定的な効果がある。多くの形態
の細胞産物の分泌に対する効果があるように思われる。
これらの効果は、疾病過程に対する効果によって証拠付
けられるとおり、緩衝能力のそれを越えている。

イオンのレベルでのそれ以上の効果はもとより、膜の
安定性と透過性とに対する明確な効果が存在し得る。膜
の安定化は、外的な生理形成性因子と内的な細胞機能の
いずれかまたは双方によって、異常な細胞分裂、及び異
常な細胞機能を正常化させるのに重要な役割を果たし得
る。いずれの事象においても、双性イオン分子としての
HEPESの独自の能力、及び疾病に対する効果のこの最初
の記載を提出するものである。

本発明は、抗腫瘍活性を誘導し、腫瘍の容積を減少さ
せ、癌患者の疼痛を軽減し、自己免疫介在性疾病に抗炎
症性応答を誘導し、免疫介在性疾病の活性及び進行を緩
和し、腫瘍増殖の緩和を誘導し、免疫介在性疾病での自
己免疫活性の緩和を誘導するため、そして抗ウイルス効
果のための方法及び組成物に関する。特に、HEPES（Ｎ
−２ヒドロキシエチルピペラジン−N'−２エタンスルホ
ン酸）、すなわち、塩類または細胞培養に緩衝剤として
広く用いられる双性イオンの使用は、単独でか、または
細胞培養と結合して一定の組成物中で用いたときに、抗
腫瘍形成性であり、鎮痛性であり、抗炎症性であり、自
己免疫病の緩和及び／または進行であり、抗ウイルス活
性である効果を立証した。加えて、HEPESは、細胞培養
に対して効果を有するように思われ、それは、独自であ
り、その緩衝能力とは直接的には無関係である免疫学的
特徴性である。

本発明は、比較的無害かつ安全である効果的な治療を
提供する。その個々の独自性は、多くの方法で示され
る。何年もの間、HEPESという双性イオンは、哺乳動物
の細胞培養に緩衝剤として用いられている。いかなる特
異的な効果も細胞に対して有すると考えられなかった。
確かに、それは、癌、癌の疼痛、自己免疫病、または一
定の感染の状態を治療するための独立した薬剤とは見な
されなかった。今や、HEPES（C₂H₁₈N₂O₄S）（Ｎ−２ヒ
ドロキシエチルピペラジン−N'−２エタンスルホン酸）
は、一定の調合では、腫瘍の増殖、容積減少、腫瘍活性
及び癌の疼痛に対して抗腫瘍形成効果を有することが示
される。それは、一定の自己免疫病の緩和または逆転に
対する効果も有する。加えて、抗ウイルス効果を有する
ように思われる。HEPESは、細胞培養の技術において緩
衝剤として用いられている。本発明は、細胞培養を伴わ
ずにHEPES及びヒトの血清を、癌、癌の疼痛、免疫病、
及びウイルス感染の実験的治療のために一定の細胞培養
上清を摂取しようとした患者に、対照として使用がなさ
れたときに、明らかになった。

上記の効果はすべて、HEPESを、単独でか、または、
特異的な生理学的、生化学的及び免疫学的作用を通じて
効果を強化し得る、その他の生物学的組成物と組合せて
用いたときに示すことができる。それは、哺乳動物の細
胞培養中の既知及び未知の生成物を強化する可能性があ
り、その組合せは、物質の個別の効果もさることなが
ら、より活性に富む組成物を与える。記載の効果は、細
胞培養技術の範囲外で明確に立証されることが、更に注
目される。そのため、例えば、HEPESは、それ自体が免
疫学的活性化剤である。このために、HEPESは真の生物
学的応答調節剤（BRM）として分類されることになる。

本発明は、被験者に投与するための双性イオン組成物
の製造法、及び該組成物を、癌、癌の疼痛、自己免疫病
及び伝染病の治療に用いる用途を提供する。

投与に用いられる組成物は、 （ａ）溶液中に一定の濃度のHEPESを、単独でか、及び
／またはアミノ酸及び／またはＬ−グルタミン及び／ま
たは重炭酸塩とともに調製し； （ｂ）溶液中に一定の濃度のHEPESを、アミノ酸及び／
またはＬ−グルタミン及び／または重炭酸塩及び／また
はヒト血清とともに調製し；そして （ｃ）溶液中に一定の濃度のHEPESを、アミノ酸及び／
またはＬ−グルタミン及び／または重炭酸塩及び／また
はヒト血清とともに調製し、これを哺乳動物の細胞培養
と、培養中の該細胞が形質転換されるとされないとにか
かわらず組合せ、上清及び／または該上清の画分を、単
独でか、あるいは組合せて用いて、生物学的応答調節剤
として単独でか、または双性イオン化合物と組合せて作
用するのに効果的である免疫学的物質の、細胞による生
産を強化することを含む。

上記の方法によって生産された、単独でか、または組
成物での生物学的応答調節剤も提供される。

本発明は、被験者の免疫系を活性化する方法であっ
て、請求項に記載のある量の組成物を投与したときに、
該免疫系が活性化されるような上記の組成物を含む方法
も提供する。「活性化する」とは、例えば、免疫活性の
刺激剤または遮断剤を活性化することを包含する。

更に、健康であるか、または免疫抑制された被験者で
のCD₂、CD₃、CD₈及びCD₂₀のカウント、及び幹細胞生成
の増加を増大させる方法であって、一定の造血機序の増
強に作用する上記の組成物としてHEPESを投与すること
を含む方法が提供される。

腫瘍の大きさ及び／または容積を減少させる方法であ
って、腫瘍減少量のHEPESを、腫瘍の大きさ及び／また
は腫瘍の容積を減少させるような組成物として被験者に
投与することを含む方法も提供される。更に、双性イオ
ン化合物としてのHEPESの生物学的応答調節剤の効果の
ために、腫瘍の消散及び／または壊死の誘導が生じるこ
と。

本発明は、被験者での自己免疫病を治療する方法であ
って、該被験者に、HEPESを含有する、自己免疫病の進
行が減速及び／または逆転するような量の、その効果が
生物学的応答調節剤としてのHEPESによるものである組
成物を投与することを含む方法を提供する。

炎症及び／または腫瘍の活性及び／または自己免疫病
の活性による疼痛を治療する方法であって、HEPESを含
有する、ある量かつ一定の組成物を該被験者に投与する
ことを含む方法も提供される。

被験者におけるウイルス感染を治療する方法であっ
て、ウイルス活性の低下を招く活性成分としてのある量
の双性イオン組成物を投与することを含む方法も、更に
提供される。

その病態生理学的状態が、薬物、毒素、放射線または
環境的要因によって誘導された可能性がある免疫抑制及
び／または免疫抑圧された被験者を、ある量のHEPESを
単独でか、または組成物によって投与することによって
治療する方法も提供される。

本発明は、HEPESを、 （ａ）HEPES及び／またはアミノ酸及び／またはＬ−グ
ルタミン及び／または重炭酸塩を有する溶液中の活性成
分； （ｂ）HEPES及び／またはアミノ酸及び／またはＬ−グ
ルタミン及び／または重炭酸塩及び／または哺乳動物
（ヒト）の血清を含有する溶液中の活性剤及び／または
活性化剤；ならびに （ｃ）細胞培養中のHEPES及び／またはアミノ酸及び／
またはＬ−グルタミン及び／または重炭酸塩及び／また
はヒトの血清及び／またはヒト（哺乳動物）の血清 として含有する溶液を調製する方法を提供する。細胞培
養調製品に用いた細胞は、健康な供与者からのヒトＢリ
ンパ様細胞であった。予めエプスタイン−バーウイルス
（EBV）と接触させることによって、細胞を形質転換ま
たは活性化しておき、これをエプスタイン−バーウイル
ス核抗原（EBNA）の存在によって確認した。人口のほぼ
60％は、エプスタイン−バーウイルス核抗原に陽性であ
る。細胞の活性化には他の方法、例えば、内毒素刺激、
及びタンパク質活性化刺激（PAS）の手法があり、これ
らは当業者には公知である。更に、用いた細胞は、IgM
分泌性であり、これは限定要因とは考えられない。細胞
培養中にHEPESを含有する調製品は、他の細胞分泌物質
の効果の免疫学的な活性化及び／または刺激及び／また
は遮断に関して、HEPESの存在によって更に組み合わせ
てよい。癌、癌の疼痛、自己免疫病及びウイルス感染に
対する効果は、HEPESによって更に増大し得る。それ
は、生物学的応答調節剤としてのHEPESの作用が、培養
中の細胞が分泌する一定の物質の存在によって強化さ
れ、及び／またはHEPESもしくは該物質が、活性におけ
る相乗作用を有し、及び／または一定の免疫学的経路
が、HEPESを細胞培養に加えたときに、一つまたはそれ
以上の免疫生理学的経路の作用のために活性化、刺激も
しくは遮断されるということであり得る。更に、HEPES
をヒトの血清と組み合せたときに、追加の、及び／また
は同じ機序が存在するということも認められる。血清
は、HEPESと組み合わせたときに強化される、一定の免
疫学的活性物質を含有し、及び／または一定の物質が、
HEPESと組み合わせたときに、特異的な経路の活性化及
び／または刺激及び／または遮断を生じる可能性があ
る。

加えて、単独でか、様々な組成物中での、生物学的応
答調節剤であるHEPES又は他の双性イオン分子は、例え
ば、腫瘍の消散及び／または壊死；病変の数及び／また
は分布の減少；腫瘍の大きさ及び／または容積の減少；
腫瘍マーカーの減少；疼痛及び／または鎮痛剤の使用の
低下；免疫学上の、及び造血のマーカーの減少；炎症、
及び炎症過程に付随するマーカーの減少；総ウイルス負
荷の低下；及び免疫仲介疾病での自己抗体生産の減少の
ような、正の指標によって有効性を示している。

本発明は、刺激及び／または遮断及び／またはBRMと
一致する他の免疫生理学的経路の効果によって免疫系を
活性化もしくは増強する方法であって、被験者に前記の
組成物中のある量のHEPESを投与することを含む方法を
提供する。指標は、幹細胞生成、CD₂、CD₃、CD₈及び／
またはCD₂₀のカウント数の増加からなる。他のマーカー
は、減少した抗体力価、リウマチ性因子（RF）、抗核抗
体（ANA）、及び抗アセチルコリン抗体を包含してよ
い。一定の免疫学的細胞分泌物質の正の変化は、限定は
されないが、サイトカイン、ケモカイン、キナーゼ、免
疫グロブリンその他の公知の生物学的応答調節剤を包含
する。改善は、リウマチ様関節炎及び重症性筋無力症の
被験者で注目される。造血指標は、免疫抑制及び免疫抑
圧の状態に対して、薬物、化学療法、放射線、毒素及び
／または環境効果のために正の応答を示す。ウイルスに
よって誘導された、免疫抑制された状態に関連するそれ
以上の正の造血指標は、集塊決定因子及び幹細胞に加え
て、Ｐ−24抗原及びβミクログロブリンレベルを包含す
る。本発明は、上記の実施態様のすべてを企図し、かつ
継続する。

HEPES、または他の双性イオン分子及び／または組成
物は、血中に巨大血小板及び組織球を形成して、双性イ
オン分子の免疫刺激能力を立証し、更に、骨髄刺激を示
すことが見出されている。哺乳動物に投与されたHEPES
は、腫瘍への大赤血球の侵入を生起して、抗腫瘍活性を
立証する。

本発明は、さらに、HEPES又は他の双性イオン組成物
が単独で使用され且つ被治療体に投与されたときに双性
イオン分子が生物学的応答の調節剤であり、しかも腫瘍
の大きさ及び（又は）容積の減少並びに腫瘍の消散及び
（又は）壊死をもたらすことを立証する。腫瘍の大き
さ、容積及び壊死は、当業者に周知のようにコンピュー
ター連動断層撮影法（CAT）及び（又は）核磁気共鳴画
像法（MRI）及び（又は）核薬物スキャン法を利用する
方法により検出しモニターすることができる。前記の組
成物にHEPES又はその他の双性イオン分子を利用するこ
の方法によって減少され又は壊死されるどんな腫瘍も、
例えば、他にもあるが、非ホドキンスリンパ種と関連す
る腫瘍、腺癌、中皮腫、扁平上皮癌、胎生期精巣癌、乳
癌、前立腺癌、卵巣癌、印鑑細胞型のものも含めて胆嚢
癌、胆管癌、食道癌、悪性黒色腫、舌癌、肝癌、多発性
骨髄腫、カポージ肉腫、セミノーマ、星状細胞腫及びグ
リア芽細胞腫を含めて脳腫瘍、肝臓癌のような外胚葉、
中胚葉及び内胚葉起源の腫瘍（さらにこれらの腫瘍は実
施例により例示するように一次性又は転移性であってよ
い）も、この方法により治療することができる。

双性イオン化合物は哺乳動物に利尿効果を誘発させる
方法を提供することが発見された。利尿効果には、双性
イオン分子が腎機能を果たし且つ抗利尿ホルモン（AD
H）活性を生じさせる能力が含まれる。ADH法は、呼吸機
能を改善させ及び（又は）酸素効率を増大させ、及び
（又は）肺組織における酸素−二酸化炭素の交換を改善
させ、しかも気腫、嚢胞性腺維腫及び喘息における有利
な応答も含む。

また、本発明によれば、被治療体の自己免疫性疾病を
治療するために、前記の組成物として、疾病の自己免疫
の病理及び（又は）病理生理学的状態の進行が遅延さ
れ、停止され又は逆転されるような量のHEPESを単独で
又はその他の双性イオン分子を被治療体に投与すること
からなる、自己免疫性疾病の治療方法が提供される。例
えば、この方法は、消耗を停止させ、抗体力価を低下さ
せ、欲求を増大させ、眠りを改善させ、エネルギーを増
大させることができる。好ましい治療方法は、前記の組
成物にHEPESを単独で又はその他の双性イオン分子を単
独で利用する。ここに教示するように試験できるこの方
法に有利に応答するどんな自己免疫性疾病、例えば後天
性免疫不全症候群（AIDS）、慢性関節リュウマチ、重傷
筋無力症、乾癬、糸球体腎炎、甲状腺炎、全身性エリテ
マトーデス、多発性硬化症、筋萎縮性側塞硬化症（AM
L）、糖尿病、アフタ性口内炎、扁平苔癬及び慢性疲労
症候群もこの方法により治療することができる。

また、本発明は、被治療体におけるウイルスに起因す
る病巣を減少させるために、前記の組成物として、病巣
が減少するような量のHEPESを単独で又はその他の双性
イオン分子を被治療体に投与することからなる、ウイル
スに起因する病巣を減少させる方法を提供する。好まし
い治療方法は、前記の通りである。病巣の進行及び退化
は当業者に周知の標準的な方法、例えば血液検査、抗体
力価、病巣の測定並びに当業者に周知のその他の評価技
術によってモニターすることができる。任意のウイルス
により産生し又は誘発された、この方法によって減少さ
れる病巣、例えば、ここで説明する方法により試験でき
るように、カポージ肉腫、単純ヘルペス、帯状疱疹及び
陰部疱疹は、本発明に包含される。

さらに、本発明は、被治療体におけるウイルス性感染
症の強さ及び存続期間を減少させるために、前記の組成
物として、ウイルス性感染症の強さ及び存続期間が減少
するような量のHEPES又はその他の双性イオン分子を被
治療体に投与することからなる、ウイルス性感染症の強
さ及び存続期間を減少させる方法を提供する。好ましい
治療方法は、前記の組成物の方法を利用する。この方法
は、ウイルス性感染症であってその強さ及び存続期間が
ここで説明する方法により試験できるように、本発明の
組成物を投与することにより減少するどんな感染症にも
利用することができる。このようなウイルス性感染症
は、実施例により例示されるが、例えばインフルエンザ
ウイルス、ロタウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウ
イルス、免疫不全ウイルス及びコクサタッキーウイルス
による感染症が含まれる。

双性イオン化合物の使用は、セロトニン及びアセチル
コリンの産生及び活性の変化を直接又は間接的に生じさ
せる方法を提供する。この方法は、抗不整脈惹起性効
果、抗発作性効果並びに外傷又は生理学的損傷での細胞
の生存の向上をもたらす膜安定化効果を包含する。それ
は、心筋梗塞及び脳血管偶発症での組織の損傷を減少さ
せる。このような効果の他のものとしては、神経細胞の
損傷の減少及び（又は）神経細胞の修復及び（又は）神
経細胞の再生が含まれる。

さらに、本発明によれば、被治療体における疼痛及び
（又は）炎症を緩和させるために、前記の組成物とし
て、疼痛及び（又は）炎症が減少するような量のHEPES
を単独で又はその他の双性イオン分子を被治療体に投与
することからなる、疼痛及び（又は）炎症を緩和させる
方法が提供される。好ましい治療方法は、前記した組成
物の方法を利用する。疼痛の緩解には、腫瘍の大きさ及
び（又は）容積或いは空間を占める病巣の減少、しかし
て解剖構造物の器官の圧迫及び圧縮の低下からの疼痛の
緩解（即ち、神経、管及びその他の器官）、並びに腫瘍
の大きさ又は容積又は嚢の拡張の減少或いは病巣の減少
と関連しない疼痛、例えば骨の疼痛及び腫瘍の大きさ又
は容積或いは病巣の相当な減少が起こる前に起こるその
他の疼痛の緩解が含まれる。このような疼痛の減少は、
慢性関節リュウーマチ又はその他の炎症性及び（又は）
自己免疫性疾病の緩解又は減少のためであろう。また、
疼痛の緩解は、その他の生理学的、病理生理学的及び免
疫病理生理学的改善の変化、例えばエンドセリン及び類
似の生化学物質の産生の変化、神経系の活性の変化並び
に細胞又は生理学的経路レベルのイオン性条件及び（又
は）膜の透過性及び（又は）膜の安定性の変化のためで
あろう。

また、前記の組成物として、被治療体に精神的な落ち
込みの効果が減少されるような量のHEPESを単独で又は
その他の双性イオン分子を被治療体に投与することから
なる、被治療体の精神的落ち込みの効果を減少させる方
法が提供される。好ましい方法は、前記のような組成物
の方法を利用する。本発明の範囲内である効果は、ここ
で教示する方法により及びこのような効果を測定するた
めの標準的なプロトコルにより試験できような本発明の
方法により減少できるようなものである。この方法によ
り減少できる効果の例には、不眠症、体重減少、悲愴／
メランコリー、臨床的な鬱及び孤独感がある。この方法
からのいくつかの結果として、欲求の増大、幸福感、不
安の減少、平静さ、ムードの上昇及び睡眠の質の向上が
含まれる。

また、被治療体の癌を治療するために、前記の組成物
として、癌の進行が遅延され、停止され又は逆になるよ
うな量のHEPESを単独で又はその他の双性イオン分子を
被治療体に投与することからなる、癌の治療方法が提供
される。この方法に包含される癌は、ここの教示により
示すように試験できるこの方法によって減少されるもの
である。このような癌のいくつかの例には、乳ガン、前
立腺癌、非ホドキンスリンパ腫、胆管癌（印鑑細胞型を
含む）、グリア芽細胞腫、及び前記したようなその他の
ものが含まれる。これらの癌は一次性でも転移性でもよ
い。それらは外胚葉、中胚葉及び内胚葉起源の全ての癌
を包含する。

本発明は、可視色の知覚を向上させ、視力を増大さ
せ、奥行覚の知覚を向上させ、聴覚を向上させ及び味覚
を向上させる方法を包含する。その他の細胞効果には毛
髪の成長の促進が含まれる。また、本発明の方法は、毒
性症候群、例えば、湾岸戦争症候群及び（又は）オレン
ジ剤毒性及び（又は）有機ホスフェート誘発疾病、疾病
連鎖及び（又は）多発性神経障害と関連するその他のこ
の種の症候群を治療することを包含する。

さらには、被治療体の肝炎を治療するために、前記の
組成物として、肝炎の病理及び病理生理学的活性が減少
するような量のHEPESを単独で又はその他の双性イオン
分子を被治療体に投与することからなる、肝炎の治療方
法が提供される。この方法により減少されるこのような
病理学的及び生理病理学的活性には、例えばビリルビン
レベルの上昇及び肝−脾臓腫大が含まれる。好ましい治
療法は、前記した組成物の方法を利用する。ここで、
“肝炎”とは、例えばＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎
（以前は、非Ａ型、非Ｂ型）及びアルコール性肝炎を包
含することを意味する。

また、被治療体の化学療法及び放射線療法の副作用を
低減させるために、前記の組成物として、化学療法及び
放射線療法の副作用が低減されるような量のHEPESを単
独で又はその他の双性イオン分子を被治療体に投与する
ことからなる、被治療体の化学療法及び放射線療法の副
作用を低減させる方法が提供される。好ましい治療法
は、前記の組成物を利用する。低減できる副作用には悪
心、嘔吐及び抜け毛が含まれる。

両性双性イオン化合物の投与は、動物において抗痙攣
性作用（平滑筋及び横紋筋に影響する）を生じさせ且つ
毛髪の成長を促進させることが証明された。

また、本発明は、血液凝固障害を治療してフィブリン
及びフィブリノーゲンの活性の変化を生じさせる方法を
含む。このような病理学的活性には、例えば、遺伝的な
障害に見られるような高凝固性及び（又は）低凝固性状
態及び（又は）ある種の病理生理学的状態（敗血症及び
（又は）薬物誘発凝固障害及び（又は）その他の代謝障
害を含めて）が含まれる。

また、本発明は、被治療体の感染症を検出するため
に、前記の組成物として、被治療体にHEPESを単独で又
はその他の双性イオン分子を投与し、被治療体に感染症
の存在を示す発熱、悪寒、発汗及び（又は）硬直のよう
な反応の発現を被治療体によってモニターすることから
なる、感染症を検出するための方法を提供する。このよ
うな感染症は、病因が細菌性、菌性又はウイルス性であ
るので感染症が臨床的か又は無症状であるかどうかの迅
速なサーチを行うことができる。さらに、発熱、悪寒及
び硬直の反応は免疫学的に媒介されうること、従って被
治療体の血液及び（又は）細胞に対し対照例を使用して
免疫物質のためのインビトロでの試験法が展開されるこ
とが予期される。これは、サイトカイン（多分、IL−１
又はその他のもの）、ケモカイン、キナーゼ及びその他
の細胞分泌物質の測定を包含しよう。

さらに、被治療体のアルツハイマー病、老人性痴呆症
及びクロイツフェルト−ヤコブ病を治療するために、前
記の組成物として、病理学的及び（又は）病理生理学的
な活性が遅延され及び（又は）逆転されるような量のHE
PESを単独で又はその他の双性イオン分子を被治療体に
投与することからなる、アルツハイマー病、老人性痴呆
症及びクロイツフェルト−ヤコブ病を治療する方法が提
供される。この方法により遅延され又は逆転される病理
学的又は病理生理学的な活性には、例えば、記憶の改
善、協調の改善、興奮の低下及び生活の質の改善が含ま
れる。好ましい治療法は前記の組成物の方法を利用す
る。

本発明の組成物は、非経口的に、例えば舌下、鞘内、
静脈内、筋肉内、皮下などの経路で投与することができ
る。経口用製剤や局所用製剤も有効であることが示され
る。必要とされる組成物の正確な量は、被治療体ごとに
変わり、被治療体の種族、年齢、体重、総合的な状態、
治療されるべき疾病の重さ、使用する投与方法などに左
右される。従って、正確な量を述べることは可能ではな
い。一般に、前記の組成物中の1000mg又はそれ以上の薬
量を毎日静脈内投与できよう。ある種の疾病では35gの
薬量が注目される応答でもって毎日静脈内投与された。
これよりも高い薬量で数人の被治療体では頭痛及び疲労
の病訴はなかった（＜10％）。毒性の研究は、それぞれ
の疾病に対して500mg/kgの応答レベルで毒性作用を示さ
れなかった。薬量は、静脈内、経口、舌下、鞘内又は局
所投与で毎日0.01mg/kg以下から1mg/kg以上まで変える
ことができる。それでも治療の長さは決定されるべきで
ある。

意図した投与形態に左右されて、組成物は製薬組成物
中で固体、半固体又は液体状であってよい。生物学的応
答調節剤の総合効果は、上記のように、疾病及び製薬形
態のタイプに応じて効果が増大し得る組成物も含めて、
多くの可変因子に左右される。前記のように、組成物
は、HEPESを単独で又はその他の双性イオン分子を単独
で或いはろ過され又はろ過されていない哺乳動物の血清
又は上澄み若しくは上澄み画分（それぞれは異なった障
害及び疾病に対して異なった生物活性及び生物学的応答
調節剤能力を有る）と共に含有し得る。さらに、投与形
態及び組成物に応じて、組成物には、製薬上許容できる
キャリアーを与えて良く、さらに組成物の活性を妨害し
ない任意の医薬品、製剤、キャリアー、補助剤、希釈剤
など、例えば食塩水溶液を含有することができる。

本発明を、例示としてのみ（なぜならば、多くの変形
及び変更は当業者には明らかであるからである）意図す
る後記の実施例で詳しく説明する。

治療で有用な双性イオン分子化合物は、哺乳動物の疾
病及び状態に応じて、有効治療濃度の点で変動できる。
しかし、一般に有効な治療濃度は、約0.001mg/kgの低さ
から5000mg/kgほどの高さまで、例えば500mg/kg又はそ
れ以上までである。いろいろな薬量応答範囲は、例え
ば、疼痛の軽減のためには1mg/kg〜20mg/kgであり、血
小板、対抗効果及び免疫刺激効果の再生のためには10mg
/kg以上、例えば20mg/kg〜100mg/kgであるが、これらに
限定されない。双性イオン化合物は、単独で使用され、
或いは、可変量の、例えば0.01mg/kg〜1g/kgの量の、食
塩水溶液増量剤のようなその他の代表的な製薬用キャリ
アー化合物、安定剤、不活性成分又はアミノ酸化合物、
Ｌ−グルタミンのような炭水化物アミンの如きその他の
活性成分と併用される。HEPESと共に使用されるその他
のアミノ酸には、Ｌ−アラニン、Ｌ−アラニン−HCl、
Ｌ−アスパラギン−H₂O、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−シ
ステイン−2HCl、Ｌ−グルタミン酸、グリシン、Ｌ−ヒ
スチジン−HCl−H₂O、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシ
ン、Ｌ−ロイシン−HCL、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニ
ルアラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−セリン、Ｌ−トリプト
ファン、Ｌ−チロシン−2Na、Ｌ−バリン並びにｄ−ビ
オチン、Ｄ−パントテン酸Ca、塩化コリン、葉酸、ｉ−
イノシット、ニコチンアミド、ピリドキシン−HCL、リ
ボフラビン、チアミン−HCl、ビタミン−B₁₂を含めてビ
タミン類が含まれる。典型的には、双性イオン分子組成
物は、食塩水溶液中の無菌の液体状で、例えば注射器に
又は静脈内用容器若しくはバッグで使用され、食塩水溶
液中に例えば燐酸塩若しくは重炭酸塩のような緩衝剤、
又はナトリウム及びカリウムのようなその他の緩衝剤を
含有する。

ピペラジン双性イオン化合物は、次の構造式： （ここで、R₁はアルキル基、例えばC₁〜C₆アルキル基の
ようなＮに結合する基であり、R₂は水素又はアミンであ
り、R₃はアルカン、例えばC₁〜C₆アルカンのようなＮに
結合する基であり、R₄は酸又は置換された酸、例えばく
えん酸、アジピン酸、カルボン酸（COOH）、燐酸（PO₄O
H）又はスルホン酸（SO₂OH）である） を有する化合物ようなヒドロキシル及びスルホン酸基を
持つ双性イオンピペラジン化合物並びにこの双性イオン
化合物の塩類を包含する。

また、有用な双性イオン分子組成物は、有効なキャリ
アー量でＡ型、Ｏ型、Ｂ型のようなヒト血清、特に細
菌、マイコプラズマ、肝炎、TB、HTLV I及びIIや、その
他の感染性物質又は成分に対して陰性であることが証明
されたAB型ヒト血清を含有する。

本発明において調製され且つ有用ないくつかの代表的
な組成物は、以下のものである。

双性イオン分子化合物の組成物 タイプＡ 100〜300mgのHEPES（超純粋） 1.6ccのＬ−グルタミン アミノ酸類 重炭酸塩緩衝剤 タイプＢ 100〜300mgのHEPES（超純粋） 1.6ccのＬ−グルタミン 0.8ccのヒトAB型血清 アミノ酸類 重炭酸塩緩衝剤 タイプＣ 100〜300mgのHEPES 1.6ccのＬ−グルタミン 0.8ccのヒトAB型血清 通常の投与は、15〜30分間で静脈内投与される50ccの
通常食塩水溶液（0.9％食塩水溶液）中に加えたもので
あった。

具体例の説明 本発明は、以下に示す特定の具体例及び実施例の詳細
な説明を参照すれば一層容易に理解されよう。

実施例 被治療体１ 前立腺癌の履歴が５年の65歳の白人の男性である。こ
の患者は、骨の部位に多発性の転移があった。彼の疼痛
は強烈であった。彼は、毎日400mgのモルヒネ、６個の
ジラウデイッド錠剤及び３個のダルボセット−Ｎ錠剤を
受けた。

この被治療体に、300mgのHEPES、1ccのヒト血清、1ml
のＬ−グルタミンとアミノ酸類及び重炭酸塩との組成物
をヒト細胞培養物上澄みと共に毎日１ヶ月間与えた（通
常の食塩水溶液と共に静脈内で）。１ヶ月後に、被治療
体は、有意な疼痛の軽減があった。彼は全く睡眠薬を要
求せず、ときどきの不快のために時折非ステロイド系の
抗炎症剤の投薬を受けた。彼の前立腺特異性抗原（PS
A）はベースラインから50％まで減少した。

被治療体２ 膵臓癌の履歴が２年である62歳の韓国人の男性であ
る。この患者は、管の閉塞を伴って激しい疼痛を有し、
死亡しかけていた。彼は経口で流体を食べ又は取ること
ができなかった。彼は１時間毎に35mgのデメロールの静
脈内投与を受けていた。

この被治療体には、100mgのHEPES、0.8ccのヒト血
清、1.6ccのＬ−グルタミンをアミノ酸類と共に通常食
塩水溶液に（50cc）入れて毎日２回２週間与えた（細胞
培養物は含まず）。５日後に、彼のIVデメロールは15mg
/hrに減少させた。７日後に、彼は5mg/hrを受けた。彼
は柔らかい固形物及び流体を取ることができた。彼は手
を借りずに立つことができた。２週間後に、彼は経口で
のデメロールのみを要求し、安らかで且つ機能的であっ
た。彼の腫瘍マーカーCA 19−９はベースラインから25
％以上も減少した。

被治療体３ 広い腹膜後の部分を巻き込んだ胆嚢の印鑑細胞癌のあ
る65歳の白人男性である。彼は食べることができなかっ
た。彼の癌胎児抗原（CEA）レベルは1300であった。彼
の肝機能は、アルカリホスファターゼ＞450mg/ml、SGOT
＞100、SGPT＞60及びLDH＞200を示した。彼は疼痛のた
めにモルヒネを取っていた。

この被治療体に、300mgのHEPES、0.8ccのヒト血清、
1.6ccのＬ−グルタミンをアミノ酸類（培養物上澄みは
含まず）と共に50ccの通常の食塩水溶液に入れて毎日４
週間静脈内投与した。４週間後に、彼のCEAレベルは600
に低下した。彼の肝機能のSGOT、SGPT及びLDHは正常で
あった。アルカリホスファターゼは＜200であった。彼
は本質的に疼痛から解放された。彼は液体と柔らかい固
形物を取ることができた。

被治療体４ 重い慢性関節リューマチの履歴が５年以上の58歳の女
性である。彼女はひどい疼痛を有した。彼女は金及びメ
トトレキサート療法に応答しそこなった。

彼女には、300mgのHEPES、1.6ccのＬ−グルタミン
（ヒト血清を含まず、細胞培養物も含まない）を50ccの
通常食塩水溶液に入れて２週間投与した。２週間後に、
彼女は有意の疼痛を有しなかった。非ステロイド系抗炎
症剤（NSAIDs）が彼女が動くことができ且つ安らかであ
るために必要な唯一の投薬であった。彼女の赤血球沈降
速度（ESR）はベースラインの50％であった。リュウマ
チ因子及びANAは減少した。

被治療体５ 再発性カポージ肉腫の履歴が10年である72歳の男性で
ある。以前に全てを切除した。悪性疾患の証拠はなかっ
た。この患者は右足に再発があった。

被治療体には300mgのHEPES、1.6ccのＬ−グルタミ
ン、0.8ccのヒト血清をアミノ酸類と共に50ccの通常食
塩水溶液に入れて１週間に３回IV静脈内投与した。ま
た、彼は30mgのHEPES、0.1ccのヒト血清、0.2ccのＬ−
グルタミンをアミノ酸と共に病巣内注射として１週間に
３回投与を受けた（全体で5ccの容積）。４週間後に、
病変部は消失し、元に戻らなかった。カポージ肉腫はウ
イルス媒介腫瘍である。

HEPESのような双性イオン化合物が哺乳動物のアルカ
リホスホターゼの産生を減少させることが発見された。
ほぼ12mg/kgの濃度で効果が現れ始めるが、100mg/kgを
超えて500mg/kgまで又はそれ以上の濃度ではアルカリホ
スホターゼのベースラインレベルは２以上の係数で降下
し、ある場合にはそれは標準的な実験室的方法より測定
できないものである。

一例として、５頭の健康な犬に500mg/kgまでのHEPES
を投与した。これらの薬量では、全ての犬において、血
清アルカリホスホターゼは標準的な実験室的方法より検
出できなかった。

今日まで、25人以上の患者を毎日300mg/kg〜1000mg/k
gのHEPESで治療した（その他の薬剤又は追加の組成物は
使用せず）。癌の疼痛のある患者の全てが応答して疼痛
が減少した。癌患者の全てが25％から50％の腫瘍容積及
び（又は）腫瘍活性の減少となった。慢性関節リュウマ
チ及び重傷筋無力症の患者の全てに25％〜50％の疾病活
性の減少があった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 バン ザンド，ロスコー エル. アメリカ合衆国 76012 テキサス，ア ーリントン，ロード トゥー シックス フラッグス ウエスト 801 (56)参考文献 特開 平５−97666（ＪＰ，Ａ) 特開 昭56−118018（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−242546（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 31/495 A61P 29/00 A61P 35/00 A61P 37/02 ＣＡ（ＳＴＮ) ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims (4)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】Ｎ−２ヒドロキシエチルピペラジン−N'−
   ２エタンスルホン酸（HEPES）又はその製薬上許容でき
   る塩を生物学的応答調節剤として有効な量で含む、哺乳
   動物における癌、癌の疼痛又は自己免疫病の治療に使用
   するための薬剤。
2. 【請求項２】哺乳動物の体重1kg当たり0.1mg〜5000mgの
   Ｎ−２ヒドロキシエチルピペラジン−N'−２エタンスル
   ホン酸の量で投与される請求項１に記載の薬剤。
3. 【請求項３】マクロファージの浸潤及び腫瘍の収縮によ
   って癌腫瘍含有疾病の治療に使用するための請求項１又
   は２のいずれかに記載の薬剤。
4. 【請求項４】ａ）活性成分としての、治療学的に有効な
   量の、Ｎ−２ヒドロキシエチルピペラジン−N'−２エタ
   ンスルホン酸又はその製薬上許容できる塩、 ｂ）該Ｎ−２ヒドロキシエチルピペラジン−N'−２エタ
   ンスルホン酸のための製薬上許容できるキャリアー及び ｃ）アミノ酸、ヒト血清、抗生物質、ビタミン及びこれ
   らの組み合わせから選択される化合物 を含む、哺乳動物の癌、癌の疼痛又は自己免疫病の治療
   に使用するための薬剤組成物。