JP3441993B2 - コレステロールセンサ - Google Patents
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
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- G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
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- G—PHYSICS
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- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、血液、血清、血漿
などの被検試料中の低密度リポ蛋白に含まれるコレステ
ロールを定量する方法に関するものである。
などの被検試料中の低密度リポ蛋白に含まれるコレステ
ロールを定量する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、この種の低密度リポ蛋白中コレス
テロールの定量方法は、超遠心法を用いた分画操作によ
って行われていた。しかし、この方法では、特殊な装置
を必要とし、さらに測定に長時間を要するという問題が
ある。また、超遠心を行わない定量方法として、被検試
料中の全コレステロール、高密度リポ蛋白中コレステロ
ール、およびトリグリセリドの濃度をそれぞれ求め、Fr
iedewaldの式から低密度リポ蛋白中コレステロールの濃
度を算出する方法が一般的である。しかし、この方法で
は、トリグリセリド値が高い被検試料を用いた場合、再
現性、正確性の点で信頼性が低いという問題がある。さ
らに近年、トリグリセリド値を必要としない低密度リポ
蛋白中コレステロールの定量方法が提案されている（特
開平１０−３８８８８号公報）。この方法は２つの工程
からなり、工程（ａ）において被検試料中の高密度リポ
蛋白、超低密度リポ蛋白、およびカイロミクロン中のコ
レステロールを消去し、工程（ｂ）において低密度リポ
蛋白中のコレステロール値を定量するものである。しか
し、コレステロールの消去には、色素の発色度合いから
コレステロール値を定量するため、血液が被検試料であ
る場合、初めから着色されているので、血液の濃さ（ヘ
マトクリット値）の影響を受けやすいという問題があ
る。さらに、工程（ａ）と工程（ｂ）を行うための試薬
類をそれぞれ用意し、それぞれの試薬を別々のタイミン
グで被検試料に添加しなければならず、操作が煩雑であ
るという欠点を有していた。
テロールの定量方法は、超遠心法を用いた分画操作によ
って行われていた。しかし、この方法では、特殊な装置
を必要とし、さらに測定に長時間を要するという問題が
ある。また、超遠心を行わない定量方法として、被検試
料中の全コレステロール、高密度リポ蛋白中コレステロ
ール、およびトリグリセリドの濃度をそれぞれ求め、Fr
iedewaldの式から低密度リポ蛋白中コレステロールの濃
度を算出する方法が一般的である。しかし、この方法で
は、トリグリセリド値が高い被検試料を用いた場合、再
現性、正確性の点で信頼性が低いという問題がある。さ
らに近年、トリグリセリド値を必要としない低密度リポ
蛋白中コレステロールの定量方法が提案されている（特
開平１０−３８８８８号公報）。この方法は２つの工程
からなり、工程（ａ）において被検試料中の高密度リポ
蛋白、超低密度リポ蛋白、およびカイロミクロン中のコ
レステロールを消去し、工程（ｂ）において低密度リポ
蛋白中のコレステロール値を定量するものである。しか
し、コレステロールの消去には、色素の発色度合いから
コレステロール値を定量するため、血液が被検試料であ
る場合、初めから着色されているので、血液の濃さ（ヘ
マトクリット値）の影響を受けやすいという問題があ
る。さらに、工程（ａ）と工程（ｂ）を行うための試薬
類をそれぞれ用意し、それぞれの試薬を別々のタイミン
グで被検試料に添加しなければならず、操作が煩雑であ
るという欠点を有していた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、色素
の発色度合いからコレステロール値を定量するため、血
液が被検試料である場合、初めから着色されているので
血液の濃さ（ヘマトクリット値）の影響を受けやすいと
いう不利益を有さず、２種類以上の試薬類をそれぞれ別
々のタイミングで被検試料に添加することをせず、被検
試料を一度供給するだけで、低密度リポ蛋白中コレステ
ロールを定量することができる方法を提供することであ
る。
の発色度合いからコレステロール値を定量するため、血
液が被検試料である場合、初めから着色されているので
血液の濃さ（ヘマトクリット値）の影響を受けやすいと
いう不利益を有さず、２種類以上の試薬類をそれぞれ別
々のタイミングで被検試料に添加することをせず、被検
試料を一度供給するだけで、低密度リポ蛋白中コレステ
ロールを定量することができる方法を提供することであ
る。
【０００４】
【課題を解決するための手段】前記の課題を解決する本
発明は、試料保持部と、少なくとも高密度リポ蛋白、低
密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロン
を含む被検試料中の全コレステロール濃度を測定するた
めの反応ウェルならびに前記被検試料中の高密度リポ蛋
白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含まれる
コレステロール濃度を測定するための反応ウェルを含む
２つの反応ウェルと、前記試料保持部および前記２つの
反応ウェルそれぞれを結ぶ２本の通路とを含む試料供給
装置を有し、前記２つの通路の高さが同一であり、前記
試料保持部よりあふれ出た前記被検試料が前記２つの通
路に流出して前記２つの反応ウェルに到達することを特
徴とするセンサに関する。 これにより、少なくとも高密
度リポ蛋白、低密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白および
カイロミクロンを含む被検試料中の全コレステロール濃
度を測定する工程（ａ）、および前記被検試料中の高密
度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに
含まれるコレステロール濃度を測定する工程（ｂ）を備
え、工程８ａ）で求めた濃度値から工程（ｂ）において
求めた濃度値を差し引いて低密度リポ蛋白に含まれるコ
レステロールの濃度を求める低密度蛋白中コレステロー
ルの定量方法を実施することができる。この方法におい
ては、工程（ａ）と工程（ｂ）とを同時に行うのが好ま
しい。
発明は、試料保持部と、少なくとも高密度リポ蛋白、低
密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロン
を含む被検試料中の全コレステロール濃度を測定するた
めの反応ウェルならびに前記被検試料中の高密度リポ蛋
白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含まれる
コレステロール濃度を測定するための反応ウェルを含む
２つの反応ウェルと、前記試料保持部および前記２つの
反応ウェルそれぞれを結ぶ２本の通路とを含む試料供給
装置を有し、前記２つの通路の高さが同一であり、前記
試料保持部よりあふれ出た前記被検試料が前記２つの通
路に流出して前記２つの反応ウェルに到達することを特
徴とするセンサに関する。 これにより、少なくとも高密
度リポ蛋白、低密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白および
カイロミクロンを含む被検試料中の全コレステロール濃
度を測定する工程（ａ）、および前記被検試料中の高密
度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに
含まれるコレステロール濃度を測定する工程（ｂ）を備
え、工程８ａ）で求めた濃度値から工程（ｂ）において
求めた濃度値を差し引いて低密度リポ蛋白に含まれるコ
レステロールの濃度を求める低密度蛋白中コレステロー
ルの定量方法を実施することができる。この方法におい
ては、工程（ａ）と工程（ｂ）とを同時に行うのが好ま
しい。
【０００５】また、工程（ａ）および工程（ｂ）の少な
くとも１つの工程において、コレステロールを前記コレ
ステロールと特異的に反応する酵素および電子伝達体と
反応させた後、還元された前記電子伝達体を電気化学的
に酸化して酸化電流値を得てコレステロールの濃度を求
めるのが好ましい。また、工程（ｂ）は低密度リポ蛋白
を沈殿させる工程を含んでもよく、特に、密度リポ蛋白
に対する抗体、水酸化ヘパリン、アシル化された水酸化
ヘパリン、硫酸化グリコサミノグリカン、硫酸化ポリ多
糖、レクチンまたはポリアニオン／二価カチオンを用い
て、前記低密度リポ蛋白を沈殿させるのが好ましい。前
記ポリアニオン／二価カチオンの組合せは、ポリアネト
ールスルホン酸／二価カチオン、ホスホタングステン酸
／マグネシウムイオン、またはデキストラン硫酸／マグ
ネシウムイオンであるのが好ましい。
くとも１つの工程において、コレステロールを前記コレ
ステロールと特異的に反応する酵素および電子伝達体と
反応させた後、還元された前記電子伝達体を電気化学的
に酸化して酸化電流値を得てコレステロールの濃度を求
めるのが好ましい。また、工程（ｂ）は低密度リポ蛋白
を沈殿させる工程を含んでもよく、特に、密度リポ蛋白
に対する抗体、水酸化ヘパリン、アシル化された水酸化
ヘパリン、硫酸化グリコサミノグリカン、硫酸化ポリ多
糖、レクチンまたはポリアニオン／二価カチオンを用い
て、前記低密度リポ蛋白を沈殿させるのが好ましい。前
記ポリアニオン／二価カチオンの組合せは、ポリアネト
ールスルホン酸／二価カチオン、ホスホタングステン酸
／マグネシウムイオン、またはデキストラン硫酸／マグ
ネシウムイオンであるのが好ましい。
【０００６】さらに、工程（ｂ）は低密度リポ蛋白を吸
着させる工程を含んでもよく、特に、シリカ、ポリアク
リル酸を含むポリスルホン繊維、シラノール基またはポ
リアニオン基を用いて前記低密度リポ蛋白を吸着させる
のが好ましい。前記ポリアニオン基は、ポリカルボキシ
ル基、ポリスルホン基、ポリホスホン酸基またはポリア
クリル酸基であるのが好ましい。
着させる工程を含んでもよく、特に、シリカ、ポリアク
リル酸を含むポリスルホン繊維、シラノール基またはポ
リアニオン基を用いて前記低密度リポ蛋白を吸着させる
のが好ましい。前記ポリアニオン基は、ポリカルボキシ
ル基、ポリスルホン基、ポリホスホン酸基またはポリア
クリル酸基であるのが好ましい。
【０００７】また、前記工程（ｂ）においては、Ｎ−
（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジ
メトキシアニリン、マグネシウムイオン、ＨＬＢ値が１
３〜１５であるポリアルキルオキサイド誘導体、および
ｐＨ緩衝剤の存在下において、コレステロール濃度を測
定するのが好ましい。
（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジ
メトキシアニリン、マグネシウムイオン、ＨＬＢ値が１
３〜１５であるポリアルキルオキサイド誘導体、および
ｐＨ緩衝剤の存在下において、コレステロール濃度を測
定するのが好ましい。
【０００８】前記の本発明によれば、被検試料を一度供
給するだけで、被検試料中の全コレステロール濃度、お
よび被検試料中の高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白、
およびカイロミクロンに含まれるコレステロール濃度を
同時に測定でき、かつ低密度リポ蛋白中コレステロール
を定量することが可能である。
給するだけで、被検試料中の全コレステロール濃度、お
よび被検試料中の高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白、
およびカイロミクロンに含まれるコレステロール濃度を
同時に測定でき、かつ低密度リポ蛋白中コレステロール
を定量することが可能である。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明は、高密度リポ蛋白、低密
度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンを
含む被検試料中の全コレステロール濃度を測定する工程
（ａ）、および前記被検試料中の高密度リポ蛋白、超低
密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含まれるコレステ
ロール濃度を測定する工程（ｂ）を備え、工程（ａ）で
求めた濃度値から工程（ｂ）において求めた濃度値を差
し引いて低密度リポ蛋白に含まれるコレステロールの濃
度を求める。
度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンを
含む被検試料中の全コレステロール濃度を測定する工程
（ａ）、および前記被検試料中の高密度リポ蛋白、超低
密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含まれるコレステ
ロール濃度を測定する工程（ｂ）を備え、工程（ａ）で
求めた濃度値から工程（ｂ）において求めた濃度値を差
し引いて低密度リポ蛋白に含まれるコレステロールの濃
度を求める。
【００１０】まず、工程（ａ）について説明する。本発
明の工程（ａ）においては、被検試料中の全コレステロ
ールの濃度を測定する。なお、ここでいう被検試料と
は、広く高密度リポ蛋白、低密度リポ蛋白、超低密度リ
ポ蛋白およびカイロミクロンを含むものをすべて含む
が、例えば血液、血清、血漿などのことをいう。特に、
本発明においては吸光度を測定するわけではないので、
被検試料が血液である場合や、濁りのある血清または血
漿である場合にも、低密度リポ蛋白中コレステロールを
定量することができる。工程（ａ）における全コレステ
ロールの濃度の測定は、従来公知の方法で行えばよい
が、血液のように着色した被検試料であっても正確に測
定可能であるという理由から、例えば、コレステロール
に、コレステロールと特異的に反応する酵素を電子伝達
体の存在下で反応させた後、前記の酵素反応にともなっ
て還元された電子伝達体を電気化学的に酸化して酸化電
流値を得て前記コレステロールの濃度を求める方法を用
いるのが好ましい。ここで用いる酵素、電子伝達体、お
よび電気化学的酸化方法については、従来公知のものを
用いればよい。
明の工程（ａ）においては、被検試料中の全コレステロ
ールの濃度を測定する。なお、ここでいう被検試料と
は、広く高密度リポ蛋白、低密度リポ蛋白、超低密度リ
ポ蛋白およびカイロミクロンを含むものをすべて含む
が、例えば血液、血清、血漿などのことをいう。特に、
本発明においては吸光度を測定するわけではないので、
被検試料が血液である場合や、濁りのある血清または血
漿である場合にも、低密度リポ蛋白中コレステロールを
定量することができる。工程（ａ）における全コレステ
ロールの濃度の測定は、従来公知の方法で行えばよい
が、血液のように着色した被検試料であっても正確に測
定可能であるという理由から、例えば、コレステロール
に、コレステロールと特異的に反応する酵素を電子伝達
体の存在下で反応させた後、前記の酵素反応にともなっ
て還元された電子伝達体を電気化学的に酸化して酸化電
流値を得て前記コレステロールの濃度を求める方法を用
いるのが好ましい。ここで用いる酵素、電子伝達体、お
よび電気化学的酸化方法については、従来公知のものを
用いればよい。
【００１１】つぎに、本発明の工程（ｂ）について説明
する。本発明の工程（ｂ）においては、前記被検試料中
の高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミク
ロンのみに含まれるコレステロール濃度を測定する。す
なわち、被検試料中に含まれる高密度リポ蛋白、低密度
リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンのう
ち、低密度リポ蛋白を除き、高密度リポ蛋白、超低密度
リポ蛋白およびカイロミクロンが含むコレステロールの
みを選択的に測定する。そこで、本発明の工程（ｂ）と
しては、被検試料から低密度リポ蛋白を除去してから高
密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロン
に含まれるコレステロール濃度を測定する工程（ｂ−
１）、または低密度リポ蛋白を除去せずに高密度リポ蛋
白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含まれる
コレステロール濃度のみを測定する工程（ｂ−２）とが
ある。
する。本発明の工程（ｂ）においては、前記被検試料中
の高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミク
ロンのみに含まれるコレステロール濃度を測定する。す
なわち、被検試料中に含まれる高密度リポ蛋白、低密度
リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンのう
ち、低密度リポ蛋白を除き、高密度リポ蛋白、超低密度
リポ蛋白およびカイロミクロンが含むコレステロールの
みを選択的に測定する。そこで、本発明の工程（ｂ）と
しては、被検試料から低密度リポ蛋白を除去してから高
密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロン
に含まれるコレステロール濃度を測定する工程（ｂ−
１）、または低密度リポ蛋白を除去せずに高密度リポ蛋
白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含まれる
コレステロール濃度のみを測定する工程（ｂ−２）とが
ある。
【００１２】まず、被検試料から低密度リポ蛋白を除去
してから高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイ
ロミクロンに含まれるコレステロール濃度を測定する工
程（ｂ−１）について説明する。このような工程（ｂ−
１）としては、低密度リポ蛋白を沈殿させる工程または
低密度リポ蛋白を吸着体に吸着させる工程があげられ
る。低密度リポ蛋白を沈殿させる工程においては、例え
ば低密度リポ蛋白に対する抗体、水酸化ヘパリン、アシ
ル化された水酸化ヘパリン、硫酸化グリコサミノグリカ
ン、硫酸化ポリ多糖、レクチンまたはポリアニオン／二
価カチオンを用いて、前記低密度リポ蛋白を沈殿させれ
ばよい。これらのなかでも、低密度リポ蛋白に対する特
異性が高いという理由から、低密度リポ蛋白に対する抗
体を用いるのが好ましい。
してから高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイ
ロミクロンに含まれるコレステロール濃度を測定する工
程（ｂ−１）について説明する。このような工程（ｂ−
１）としては、低密度リポ蛋白を沈殿させる工程または
低密度リポ蛋白を吸着体に吸着させる工程があげられ
る。低密度リポ蛋白を沈殿させる工程においては、例え
ば低密度リポ蛋白に対する抗体、水酸化ヘパリン、アシ
ル化された水酸化ヘパリン、硫酸化グリコサミノグリカ
ン、硫酸化ポリ多糖、レクチンまたはポリアニオン／二
価カチオンを用いて、前記低密度リポ蛋白を沈殿させれ
ばよい。これらのなかでも、低密度リポ蛋白に対する特
異性が高いという理由から、低密度リポ蛋白に対する抗
体を用いるのが好ましい。
【００１３】また、前記ポリアニオン／二価カチオンの
組合せとしては、ポリアネトールスルホン酸／二価カチ
オン、ホスホタングステン酸／マグネシウムイオン、ま
たはデキストラン硫酸／マグネシウムイオンであるのが
好ましい。つぎに、低密度リポ蛋白を吸着体に吸着させ
る工程においては、例えばシリカ、ポリアクリル酸を含
むポリスルホン繊維、シラノール基またはポリアニオン
基を用いて前記低密度リポ蛋白を吸着させればよい。な
かでも、層の厚さを自由に変えることが比較的容易であ
るという理由から、シリカを用いるのが好ましい。ま
た、前記ポリアニオン基は、吸着能力がより高いという
理由から、ポリカルボキシル基、ポリスルホン基、ポリ
ホスホン酸基またはポリアクリル酸基であるのが好まし
い。なお、このような工程（ｂ−１）においては、低密
度リポ蛋白が除去されるため、工程（ａ）と同様の方法
でコレステロールの濃度を測定することができるという
利点がある。
組合せとしては、ポリアネトールスルホン酸／二価カチ
オン、ホスホタングステン酸／マグネシウムイオン、ま
たはデキストラン硫酸／マグネシウムイオンであるのが
好ましい。つぎに、低密度リポ蛋白を吸着体に吸着させ
る工程においては、例えばシリカ、ポリアクリル酸を含
むポリスルホン繊維、シラノール基またはポリアニオン
基を用いて前記低密度リポ蛋白を吸着させればよい。な
かでも、層の厚さを自由に変えることが比較的容易であ
るという理由から、シリカを用いるのが好ましい。ま
た、前記ポリアニオン基は、吸着能力がより高いという
理由から、ポリカルボキシル基、ポリスルホン基、ポリ
ホスホン酸基またはポリアクリル酸基であるのが好まし
い。なお、このような工程（ｂ−１）においては、低密
度リポ蛋白が除去されるため、工程（ａ）と同様の方法
でコレステロールの濃度を測定することができるという
利点がある。
【００１４】つぎに、工程（ｂ−２）について説明す
る。工程（ｂ−２）においては、低密度リポ蛋白を除去
せずに高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロ
ミクロンに含まれるコレステロール濃度のみを測定す
る。この工程においては、低密度リポ蛋白のみが酵素と
反応しないように、被検試料を化学的に処理すればよ
い。例えば、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白および
カイロミクロンと酵素との反応率が最大となり、低密度
リポ蛋白と酵素との反応率が最小となるという理由か
ら、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−
３，５−ジメトキシアニリン、マグネシウムイオン、Ｈ
ＬＢ値が１３〜１５であるポリアルキルオキサイド誘導
体（例えば、ポリオキシエチレンフェニルエーテルな
ど）およびｐＨ緩衝剤の存在下において、コレステロー
ル濃度を測定するのが好ましい。
る。工程（ｂ−２）においては、低密度リポ蛋白を除去
せずに高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロ
ミクロンに含まれるコレステロール濃度のみを測定す
る。この工程においては、低密度リポ蛋白のみが酵素と
反応しないように、被検試料を化学的に処理すればよ
い。例えば、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白および
カイロミクロンと酵素との反応率が最大となり、低密度
リポ蛋白と酵素との反応率が最小となるという理由か
ら、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−
３，５−ジメトキシアニリン、マグネシウムイオン、Ｈ
ＬＢ値が１３〜１５であるポリアルキルオキサイド誘導
体（例えば、ポリオキシエチレンフェニルエーテルな
ど）およびｐＨ緩衝剤の存在下において、コレステロー
ル濃度を測定するのが好ましい。
【００１５】ここで、ＨＬＢ値とは、界面活性剤の親水
基と疎水基の性質および量比によって変動するパラメー
タであり、ＨＬＢ値が大きいほど親水性が高い。特に、
ＨＬＢ値が１３〜１５であるポリアルキルオキサイド誘
導体は、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白、およびカ
イロミクロンに対して、それぞれのリポ蛋白構造を崩壊
させ、構成要素であるコレステロールおよびコレステロ
ールエステルを可溶化することが知られている（Ｏｋａ
ｄａら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．（１９９８）
１３２，１９５）。
基と疎水基の性質および量比によって変動するパラメー
タであり、ＨＬＢ値が大きいほど親水性が高い。特に、
ＨＬＢ値が１３〜１５であるポリアルキルオキサイド誘
導体は、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白、およびカ
イロミクロンに対して、それぞれのリポ蛋白構造を崩壊
させ、構成要素であるコレステロールおよびコレステロ
ールエステルを可溶化することが知られている（Ｏｋａ
ｄａら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．（１９９８）
１３２，１９５）。
【００１６】また、本発明においては、工程（ａ）と工
程（ｂ）とを同時に行うのが好ましい。これにより、被
検試料を一度供給するだけで工程（ａ）および工程
（ｂ）が同時に進行するので、後から試薬類を供給する
必要がないという効果を奏する。この場合、工程（ａ）
および工程（ｂ）の少なくとの１つの工程、好ましくは
両方の工程におけるコレステロールの濃度の測定におい
ては、前述のように、コレステロールを前記コレステロ
ールと特異的に反応する酵素および電子伝達体と反応さ
せた後、還元された前記電子伝達体を電気化学的に酸化
して酸化電流値を得てコレステロールの濃度を求めるの
が好ましい。
程（ｂ）とを同時に行うのが好ましい。これにより、被
検試料を一度供給するだけで工程（ａ）および工程
（ｂ）が同時に進行するので、後から試薬類を供給する
必要がないという効果を奏する。この場合、工程（ａ）
および工程（ｂ）の少なくとの１つの工程、好ましくは
両方の工程におけるコレステロールの濃度の測定におい
ては、前述のように、コレステロールを前記コレステロ
ールと特異的に反応する酵素および電子伝達体と反応さ
せた後、還元された前記電子伝達体を電気化学的に酸化
して酸化電流値を得てコレステロールの濃度を求めるの
が好ましい。
【００１７】ここで、図７を用いて、コレステロール濃
度を定量する際の反応原理を説明する。被検試料のリポ
蛋白中において、コレステロールの多くは、脂肪酸とエ
ステル結合したコレステロールエステルとして存在して
いる。そこでまず、コレステロールエステラーゼ１４に
よって、コレステロールエステル１１を脱エステル化し
てコレステロール１２とする（過程I）。つぎに、酸化
還元酵素１５によって、コレステロール１２を酸化する
（過程II）。この酸化反応は、同時に電子伝達体１６の
還元を伴う（過程III）。ついで、作用極１８と対極１
９の間に電圧をかけることによって、作用極１８上で電
子伝達体１７の酸化を行う（過程IV）。このときに流れ
る電流を測定するのであるが、この電流値は電子伝達体
（還元型）の濃度に依存し、さらに、電子伝達体（還元
型）の濃度は、コレステロールの濃度に依存する。した
がって、コレステロールの濃度を知るためには、作用極
１８と対極１９の間に流れる電流量を測定すればよいの
である。なお、酵素層は固体であるとしたが、液体状態
であってもよい。
度を定量する際の反応原理を説明する。被検試料のリポ
蛋白中において、コレステロールの多くは、脂肪酸とエ
ステル結合したコレステロールエステルとして存在して
いる。そこでまず、コレステロールエステラーゼ１４に
よって、コレステロールエステル１１を脱エステル化し
てコレステロール１２とする（過程I）。つぎに、酸化
還元酵素１５によって、コレステロール１２を酸化する
（過程II）。この酸化反応は、同時に電子伝達体１６の
還元を伴う（過程III）。ついで、作用極１８と対極１
９の間に電圧をかけることによって、作用極１８上で電
子伝達体１７の酸化を行う（過程IV）。このときに流れ
る電流を測定するのであるが、この電流値は電子伝達体
（還元型）の濃度に依存し、さらに、電子伝達体（還元
型）の濃度は、コレステロールの濃度に依存する。した
がって、コレステロールの濃度を知るためには、作用極
１８と対極１９の間に流れる電流量を測定すればよいの
である。なお、酵素層は固体であるとしたが、液体状態
であってもよい。
【００１８】つぎに、本発明は、このような反応原理を
利用して前記定量方法を行うセンサにも関する。本発明
のセンサは、試料保持部と、少なくとも高密度リポ蛋
白、低密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミ
クロンを含む被検試料中の全コレステロール濃度を測定
するための反応ウェルならびに前記被検試料中の高密度
リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含
まれるコレステロール濃度を測定するための反応ウェル
を含む２つの反応ウェルと、前記試料保持部および前記
２つの反応ウェルそれぞれを結ぶ２本の通路とを含む試
料供給装置を有し、前記２つの通路の高さが同一であ
り、前記試料保持部よりあふれ出た前記被検試料が前記
２つの通路に流出して前記２つの反応ウェルに到達する
ことを特徴とするセンサにも関する。
利用して前記定量方法を行うセンサにも関する。本発明
のセンサは、試料保持部と、少なくとも高密度リポ蛋
白、低密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミ
クロンを含む被検試料中の全コレステロール濃度を測定
するための反応ウェルならびに前記被検試料中の高密度
リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含
まれるコレステロール濃度を測定するための反応ウェル
を含む２つの反応ウェルと、前記試料保持部および前記
２つの反応ウェルそれぞれを結ぶ２本の通路とを含む試
料供給装置を有し、前記２つの通路の高さが同一であ
り、前記試料保持部よりあふれ出た前記被検試料が前記
２つの通路に流出して前記２つの反応ウェルに到達する
ことを特徴とするセンサにも関する。
【００１９】以下に、本発明の理解の容易のために、図
面を用いて前記コレステロールの手量方法に用いるセン
サを実施の形態に沿って説明する。 《実施の形態１》 図１は、本発明のコレステロールの定量方法に用いるこ
とのできるセンサの一実施例の分解斜視図である。定量
方法を用いるセンサは、試料保持部と、２つの反応ウェ
ルと、試料保持部と２つの反応ウェルとをそれぞれ結ぶ
２本の通路からなる試料供給装置を有し、２つの通路の
高さが同一である。そのため、試料保持部よりあふれ出
た試料が、２つの通路へそれぞれ同時に流出するように
設計されている。図１において、センサ１は、カバー２
と基板３とからなる。カバー２は２つの反応ウェル４と
試料保持部５を有し、試料保持部５は通路６を通じてそ
れぞれ反応ウェル４に連結している。反応ウェル４はカ
バー２を貫通しており、カバー２と基板３とを張り合わ
せたとき、容器としての機能を発揮する。試料保持部５
は貫通していないので、十分量の被検試料を試料保持部
へ供給すると、通路６を通って被検試料が反応ウェル４
まで到達する構造になっている。カバー２および基板３
の材質は、電気絶縁性である程度の剛性を有していれば
特に制限はないが、例えば、ポリエチレン、ポリスチレ
ン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド、飽和ポリエステルな
どの熱可塑性樹脂、尿素樹脂、メラミン樹脂、フェノー
ル樹脂、エポキシ樹脂、不飽和ポリエステル樹脂などの
熱硬化性樹脂があげられる。なかでも、後述する電極材
料との接着性に優れるポリエチレンテレフタレートを用
いるのが好ましい。また、基板３上には電極７を作製し
た。電極作製方法としても特に制限はないが、例えば炭
素ペーストを基板上にスクリーン印刷してもよいし、パ
ラジウムを基板上に蒸着、またはスパッタしてもよい。
面を用いて前記コレステロールの手量方法に用いるセン
サを実施の形態に沿って説明する。 《実施の形態１》 図１は、本発明のコレステロールの定量方法に用いるこ
とのできるセンサの一実施例の分解斜視図である。定量
方法を用いるセンサは、試料保持部と、２つの反応ウェ
ルと、試料保持部と２つの反応ウェルとをそれぞれ結ぶ
２本の通路からなる試料供給装置を有し、２つの通路の
高さが同一である。そのため、試料保持部よりあふれ出
た試料が、２つの通路へそれぞれ同時に流出するように
設計されている。図１において、センサ１は、カバー２
と基板３とからなる。カバー２は２つの反応ウェル４と
試料保持部５を有し、試料保持部５は通路６を通じてそ
れぞれ反応ウェル４に連結している。反応ウェル４はカ
バー２を貫通しており、カバー２と基板３とを張り合わ
せたとき、容器としての機能を発揮する。試料保持部５
は貫通していないので、十分量の被検試料を試料保持部
へ供給すると、通路６を通って被検試料が反応ウェル４
まで到達する構造になっている。カバー２および基板３
の材質は、電気絶縁性である程度の剛性を有していれば
特に制限はないが、例えば、ポリエチレン、ポリスチレ
ン、ポリ塩化ビニル、ポリアミド、飽和ポリエステルな
どの熱可塑性樹脂、尿素樹脂、メラミン樹脂、フェノー
ル樹脂、エポキシ樹脂、不飽和ポリエステル樹脂などの
熱硬化性樹脂があげられる。なかでも、後述する電極材
料との接着性に優れるポリエチレンテレフタレートを用
いるのが好ましい。また、基板３上には電極７を作製し
た。電極作製方法としても特に制限はないが、例えば炭
素ペーストを基板上にスクリーン印刷してもよいし、パ
ラジウムを基板上に蒸着、またはスパッタしてもよい。
【００２０】図２は、図１のカバー２を、２つの反応ウ
ェル４と試料保持部５とを結ぶＸ−Ｘ’線で断面にした
試料供給装置の断面図である。試料供給装置は、試料保
持部５と、２つの反応ウェル４と、試料保持部５と２つ
の反応ウェル４とをそれぞれ結ぶ２本の通路６からな
り、２つの通路６と試料保持部５とが接する位置の高さ
がそれぞれ同一であるため、試料保持部５よりあふれ出
た試料は、２つの通路６にそれぞれ同時に流出する。図
２に示すように、本発明のセンサは、カバー２と基板３
を重ね合わせたとき、電極７が反応ウェル４内に位置す
るように設計する。一つの反応ウェルにそれぞれ２つの
電極を作製した。その電極の一方は作用極として、他方
は対極として用いられる。
ェル４と試料保持部５とを結ぶＸ−Ｘ’線で断面にした
試料供給装置の断面図である。試料供給装置は、試料保
持部５と、２つの反応ウェル４と、試料保持部５と２つ
の反応ウェル４とをそれぞれ結ぶ２本の通路６からな
り、２つの通路６と試料保持部５とが接する位置の高さ
がそれぞれ同一であるため、試料保持部５よりあふれ出
た試料は、２つの通路６にそれぞれ同時に流出する。図
２に示すように、本発明のセンサは、カバー２と基板３
を重ね合わせたとき、電極７が反応ウェル４内に位置す
るように設計する。一つの反応ウェルにそれぞれ２つの
電極を作製した。その電極の一方は作用極として、他方
は対極として用いられる。
【００２１】一方の反応ウェル内部には全コレステロー
ルを測定するための試薬（図示せず）が存在し、他方の
反応ウェル内部には高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋
白、およびカイロミクロンに含まれるコレステロール濃
度を測定するための試薬（図示せず）を存在させる。な
お、試薬はいずれも溶液状態であっても良く、固体状態
であってもよい。また、全コレステロールを測定するた
めの反応ウェルと、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋
白、およびカイロミクロンに含まれるコレステロール濃
度を測定するための反応ウェルとは同一カバー内に設け
たが、別々のカバー内に設けてもよい。さらに、前述の
ように、全コレステロール濃度の定量と、高密度リポ蛋
白、超低密度リポ蛋白、およびカイロミクロンに含まれ
るコレステロール濃度の定量を同時に行っているが、両
者を別々のタイミングで行ってもよい。
ルを測定するための試薬（図示せず）が存在し、他方の
反応ウェル内部には高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋
白、およびカイロミクロンに含まれるコレステロール濃
度を測定するための試薬（図示せず）を存在させる。な
お、試薬はいずれも溶液状態であっても良く、固体状態
であってもよい。また、全コレステロールを測定するた
めの反応ウェルと、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋
白、およびカイロミクロンに含まれるコレステロール濃
度を測定するための反応ウェルとは同一カバー内に設け
たが、別々のカバー内に設けてもよい。さらに、前述の
ように、全コレステロール濃度の定量と、高密度リポ蛋
白、超低密度リポ蛋白、およびカイロミクロンに含まれ
るコレステロール濃度の定量を同時に行っているが、両
者を別々のタイミングで行ってもよい。
【００２２】ここで、低密度リポ蛋白中コレステロール
濃度の方が全コレステロール濃度より重要であるという
説（岡田正彦、日本臨床検査自動化学会会誌（１９９
８）３、１７７）もあるが、コレステロール濃度を下げ
る薬の一種であるＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤を服用
する場合、全コレステロール濃度を定期的に測定するこ
とが望ましい。そこで、本発明の実施の形態１によれ
ば、低密度リポ蛋白中コレステロール濃度を定量すると
同時に、全コレステロール濃度も定量できるので、２種
類の有用な生体情報が一度に得られるという利点があ
る。
濃度の方が全コレステロール濃度より重要であるという
説（岡田正彦、日本臨床検査自動化学会会誌（１９９
８）３、１７７）もあるが、コレステロール濃度を下げ
る薬の一種であるＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤を服用
する場合、全コレステロール濃度を定期的に測定するこ
とが望ましい。そこで、本発明の実施の形態１によれ
ば、低密度リポ蛋白中コレステロール濃度を定量すると
同時に、全コレステロール濃度も定量できるので、２種
類の有用な生体情報が一度に得られるという利点があ
る。
【００２３】《実施の形態２》図３は、本発明のセンサ
の一実施の形態における反応ウェル部分の概略断面図で
ある。この反応ウェルにおいては、基板３上に２つの電
極７を作製する。一方の電極は作用極として用いられ、
他方の電極は対極として用いることができる。電極７の
上部には、酵素水溶液を乾燥させることにより酵素層１
０を作製する。
の一実施の形態における反応ウェル部分の概略断面図で
ある。この反応ウェルにおいては、基板３上に２つの電
極７を作製する。一方の電極は作用極として用いられ、
他方の電極は対極として用いることができる。電極７の
上部には、酵素水溶液を乾燥させることにより酵素層１
０を作製する。
【００２４】酵素層１０には少なくともコレステロール
エステラーゼ、酸化還元酵素および電子伝達体を含ませ
る。これらの成分としては、従来公知のものであっても
特に制限はないが、酸化還元酵素としては、例えばコレ
ステロールオキシダーゼなどがあげられ、電子伝達体と
しては例えばパラベンゾキノン、フェリシアン化カリウ
ムなどがあげられる。また、酵素層１０には、リポ蛋白
中のコレステロールの溶解を容易にするため、さらに界
面活性剤を添加してもよい。血液などの被検試料は上方
から酵素層１０に接触させればよい。
エステラーゼ、酸化還元酵素および電子伝達体を含ませ
る。これらの成分としては、従来公知のものであっても
特に制限はないが、酸化還元酵素としては、例えばコレ
ステロールオキシダーゼなどがあげられ、電子伝達体と
しては例えばパラベンゾキノン、フェリシアン化カリウ
ムなどがあげられる。また、酵素層１０には、リポ蛋白
中のコレステロールの溶解を容易にするため、さらに界
面活性剤を添加してもよい。血液などの被検試料は上方
から酵素層１０に接触させればよい。
【００２５】本実施の形態２によれば、血液のように着
色した被検試料であっても、妨害されることなくコレス
テロールを定量できるという利点がある。
色した被検試料であっても、妨害されることなくコレス
テロールを定量できるという利点がある。
【００２６】《実施の形態３》図４は本発明のセンサの
別の実施の形態における反応ウェル部分の概略断面図で
ある。この反応ウェルは、被検試料中の高密度リポ蛋
白、超低密度リポ蛋白、およびカイロミクロンに含まれ
るコレステロール濃度を測定するために、電極と基板と
を有する。基板３上に２つの電極７を作製し、その上部
に酵素水溶液を乾燥させることにより酵素層１０を作製
する。また、酵素層１０の上部にはフィルター２２を設
置する。
別の実施の形態における反応ウェル部分の概略断面図で
ある。この反応ウェルは、被検試料中の高密度リポ蛋
白、超低密度リポ蛋白、およびカイロミクロンに含まれ
るコレステロール濃度を測定するために、電極と基板と
を有する。基板３上に２つの電極７を作製し、その上部
に酵素水溶液を乾燥させることにより酵素層１０を作製
する。また、酵素層１０の上部にはフィルター２２を設
置する。
【００２７】フィルターとしては、孔径が０．０５〜
０．５μｍであるものが望ましい。このフィルターの材
料としては、ガラス、濾紙などが好ましい。また、フィ
ルター２２の上部には沈殿剤２１の層を配置する。ここ
で用いる沈殿剤としては、前述した低密度リポ蛋白に対
する抗体、水酸化ヘパリン、アシル化された水酸化ヘパ
リン、硫酸化グリコサミノグリカン、硫酸化ポリ多糖、
レクチン、またはポリアニオン／二価カチオンなどであ
ればよい。さらに、ポリアニオン／二価カチオンの組合
せとしても、前述したポリアネトールスルホン酸／二価
カチオン、ホスホタングステン酸／マグネシウムイオ
ン、またはデキストラン硫酸／マグネシウムイオンが好
ましい。
０．５μｍであるものが望ましい。このフィルターの材
料としては、ガラス、濾紙などが好ましい。また、フィ
ルター２２の上部には沈殿剤２１の層を配置する。ここ
で用いる沈殿剤としては、前述した低密度リポ蛋白に対
する抗体、水酸化ヘパリン、アシル化された水酸化ヘパ
リン、硫酸化グリコサミノグリカン、硫酸化ポリ多糖、
レクチン、またはポリアニオン／二価カチオンなどであ
ればよい。さらに、ポリアニオン／二価カチオンの組合
せとしても、前述したポリアネトールスルホン酸／二価
カチオン、ホスホタングステン酸／マグネシウムイオ
ン、またはデキストラン硫酸／マグネシウムイオンが好
ましい。
【００２８】血液などの被検試料は上方から沈殿剤２１
の層にまず接触させる。すると、被検試料中の低密度リ
ポ蛋白が凝集、沈殿する。沈殿した低密度リポ蛋白は、
沈殿剤下部のフィルター２２によって濾過され、酵素層
１０まで到達しない。フィルター２２を通過した被検試
料には、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイ
ロミクロンが含まれる。フィルター２２を通過した被検
試料が酵素層１０に到達すると、高密度リポ蛋白、超低
密度リポ蛋白、およびカイロミクロンに含まれるコレス
テロールに対して図７を参照して説明した反応が進行
し、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミ
クロンに含まれるコレステロール濃度が定量されるので
ある。なお、ここでは、酵素層は固体であるとしたが、
液体であってもよい。
の層にまず接触させる。すると、被検試料中の低密度リ
ポ蛋白が凝集、沈殿する。沈殿した低密度リポ蛋白は、
沈殿剤下部のフィルター２２によって濾過され、酵素層
１０まで到達しない。フィルター２２を通過した被検試
料には、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイ
ロミクロンが含まれる。フィルター２２を通過した被検
試料が酵素層１０に到達すると、高密度リポ蛋白、超低
密度リポ蛋白、およびカイロミクロンに含まれるコレス
テロールに対して図７を参照して説明した反応が進行
し、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミ
クロンに含まれるコレステロール濃度が定量されるので
ある。なお、ここでは、酵素層は固体であるとしたが、
液体であってもよい。
【００２９】本実施の形態３によれば、被検試料を沈殿
剤の層の上方から一度供給するだけで、低密度リポ蛋白
中コレステロールを定量することができるという利点が
ある。
剤の層の上方から一度供給するだけで、低密度リポ蛋白
中コレステロールを定量することができるという利点が
ある。
【００３０】《実施の形態４》図５は本発明のセンサの
また別の実施の形態における反応ウェル部分の概略断面
図である。実施の形態４は、フィルターおよび沈殿剤層
の代わりに吸着剤２３の層を設ける点で、実施の形態３
と相違する。
また別の実施の形態における反応ウェル部分の概略断面
図である。実施の形態４は、フィルターおよび沈殿剤層
の代わりに吸着剤２３の層を設ける点で、実施の形態３
と相違する。
【００３１】吸着材２３としては、前述したシリカ、ポ
リアクリル酸を含むポリスルホン繊維、シラノール基ま
たはポリアニオン基がよい。ポリアニオン基として、ポ
リカルボキシル基、ポリスルホン基、ポリホスホン酸基
またはポリアクリル酸基が好ましい。血液などの被検試
料は上方から吸着剤２３にまず接触させる。そして、被
検試料中の低密度リポ蛋白が吸着剤２３に吸着し、酵素
層１０まで到達しない。
リアクリル酸を含むポリスルホン繊維、シラノール基ま
たはポリアニオン基がよい。ポリアニオン基として、ポ
リカルボキシル基、ポリスルホン基、ポリホスホン酸基
またはポリアクリル酸基が好ましい。血液などの被検試
料は上方から吸着剤２３にまず接触させる。そして、被
検試料中の低密度リポ蛋白が吸着剤２３に吸着し、酵素
層１０まで到達しない。
【００３２】吸着剤層を通過した被検試料には、高密度
リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンが含
まれ、酵素層１０に到達する。ここで、高密度リポ蛋
白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含まれる
コレステロールに対して図７を参照して説明したの反応
が進行し、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカ
イロミクロンに含まれるコレステロール濃度を定量する
ことができる。
リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンが含
まれ、酵素層１０に到達する。ここで、高密度リポ蛋
白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含まれる
コレステロールに対して図７を参照して説明したの反応
が進行し、高密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカ
イロミクロンに含まれるコレステロール濃度を定量する
ことができる。
【００３３】本実施の形態４によれば、被検試料を吸着
剤の層の上方から一度供給するだけで、低密度リポ蛋白
中コレステロールを定量することができるという利点が
ある。
剤の層の上方から一度供給するだけで、低密度リポ蛋白
中コレステロールを定量することができるという利点が
ある。
【００３４】《実施の形態５》図６は本発明のセンサの
さらに別の実施の形態における反応ウェル部分の概略断
面図である。実施の形態５は、吸着剤層の代わりに試薬
層２４を設ける点で、実施の形態４と相違する。試薬層
２４には前述したＮ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプ
ロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、マグネシウム
イオン、ＨＬＢ値が１３〜１５であるポリアルキルオキ
サイド誘導体、およびｐＨ緩衝剤が含まれる。
さらに別の実施の形態における反応ウェル部分の概略断
面図である。実施の形態５は、吸着剤層の代わりに試薬
層２４を設ける点で、実施の形態４と相違する。試薬層
２４には前述したＮ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプ
ロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、マグネシウム
イオン、ＨＬＢ値が１３〜１５であるポリアルキルオキ
サイド誘導体、およびｐＨ緩衝剤が含まれる。
【００３５】本実施の形態５によれば、被検試料を試薬
層の上方から一度供給するだけで、低密度リポ蛋白中コ
レステロールを定量することができるという利点があ
る。
層の上方から一度供給するだけで、低密度リポ蛋白中コ
レステロールを定量することができるという利点があ
る。
【００３６】
【発明の効果】本発明によれば、低密度リポ蛋白中コレ
ステロール濃度を定量すると同時に、全コレステロール
濃度も定量できるので、高コレステロール血症の診断に
有用な生体情報（低密度リポ蛋白中コレステロール濃度
および全コレステロール濃度）ならびに薬の効き目の判
断に有用な生体情報（全コレステロール濃度）の２種類
の生体情報を一度に得ることができるという利点があ
る。さらに、被検試料中の全コレステロール濃度を測定
する工程（ａ）と、被検試料中の高密度リポ蛋白、超低
密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含まれるコレステ
ロール濃度を測定する工程（ｂ）を同時に行い、工程
（ａ）より求めた値から、工程（ｂ）より求めた値を差
し引くことにより、被検試料を一度供給するだけで低密
度リポ蛋白中コレステロールを定量することができる。
ステロール濃度を定量すると同時に、全コレステロール
濃度も定量できるので、高コレステロール血症の診断に
有用な生体情報（低密度リポ蛋白中コレステロール濃度
および全コレステロール濃度）ならびに薬の効き目の判
断に有用な生体情報（全コレステロール濃度）の２種類
の生体情報を一度に得ることができるという利点があ
る。さらに、被検試料中の全コレステロール濃度を測定
する工程（ａ）と、被検試料中の高密度リポ蛋白、超低
密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含まれるコレステ
ロール濃度を測定する工程（ｂ）を同時に行い、工程
（ａ）より求めた値から、工程（ｂ）より求めた値を差
し引くことにより、被検試料を一度供給するだけで低密
度リポ蛋白中コレステロールを定量することができる。
【図１】本発明のコレステロールの定量方法に用いるこ
とのできるセンサの一実施例の分解斜視図である。
とのできるセンサの一実施例の分解斜視図である。
【図２】図１のＸ−Ｘ’線で断面にした試料供給装置の
断面図である。
断面図である。
【図３】本発明のセンサの一実施の形態における反応ウ
ェル部分の概略断面図である。
ェル部分の概略断面図である。
【図４】本発明のセンサの別の実施の形態における反応
ウェル部分の概略断面図である。
ウェル部分の概略断面図である。
【図５】本発明のセンサのまた別の実施の形態における
反応ウェル部分の概略断面図である。
反応ウェル部分の概略断面図である。
【図６】本発明のセンサのさらに別の実施の形態におけ
る反応ウェル部分の概略断面図である。
る反応ウェル部分の概略断面図である。
【図７】コレステロール濃度を定量する際の反応原理を
説明するためのフローチャートである。
説明するためのフローチャートである。
１ センサ
２ カバー
３ 基板
４ 反応ウェル
５ 試料保持部
６ 通路
７ 電極
１０ 酵素層
１１ コレステロールエステル
１２ コレステロール
１３ 酸化されたコレステロール
１４ コレステロールエステラーゼ
１５ 酸化還元酵素
１６ 電子伝達体（酸化型）
１７ 電子伝達体（還元型）
１８ 作用極
１９ 対極
２１ 沈殿剤
２２ フィルター
２３ 吸着剤
２４ 試薬層
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(56)参考文献 特開 平８−201393（ＪＰ，Ａ)
特開 平６−102276（ＪＰ，Ａ)
特開 平９−297121（ＪＰ，Ａ)
特開 平10−38888（ＪＰ，Ａ)
特開 平２−187664（ＪＰ，Ａ)
特開 昭57−163500（ＪＰ，Ａ)
特開 昭55−159158（ＪＰ，Ａ)
特開 昭60−173470（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
G01N 33/48 - 33/98
G01N 27/327
G01N 27/416
Claims (4)
- 【請求項１】 試料保持部と、少なくとも高密度リポ蛋
白、低密度リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミ
クロンを含む被検試料中の全コレステロール濃度を測定
するための反応ウェルならびに前記被検試料中の高密度
リポ蛋白、超低密度リポ蛋白およびカイロミクロンに含
まれるコレステロール濃度を測定するための反応ウェル
を含む２つの反応ウェルと、前記試料保持部および前記
２つの反応ウェルそれぞれを結ぶ２本の通路とを含む試
料供給装置を有し、前記２ つの通路の高さが同一であり、前記試料保持部よ
りあふれ出た前記被検試料が前記２つの通路に流出して
前記２つの反応ウェルに到達することを特徴とするセン
サ。 - 【請求項２】 一方の反応ウェルが前記低密度リポ蛋白
を吸着する吸着剤層を具備することを特徴とする請求項
１記載のセンサ。 - 【請求項３】 前記吸着剤層が、シリカ、ポリアクリル
酸を含むポリスルホン繊維、シラノール基、またはポリ
アニオン基を含む請求項２記載のセンサ。 - 【請求項４】 一方の反応ウェルがＮ−（２−ヒドロキ
シ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリ
ン、マグネシウムイオン、ＨＬＢ値が１３〜１５である
ポリアルキルオキサイド誘導体、およびｐＨ緩衝剤を含
む試薬層を具備することを特徴とする請求項１記載のセ
ンサ。
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