JP4317455B2 - 多量のアルファ−ラクトアルブミンを含む幼児用処方の組成物 - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

（技術分野）
本発明は幼児の寛容性の改善を示す幼児用処方の組成物に関する。詳細には、本発明は特定量のアルファ−ラクトアルブミンおよびベータ−ラクトグロブリンを含む修飾されたホウェイ蛋白濃縮物を含む幼児用処方の組成物に関する。

（背景技術）
人乳は生まれてから４ヶ月ないし６ヶ月の間新生児に栄養を与えるための好ましい手段である。母乳を与えることが適切でない、またはうまくいかない場合に、あるいは母親が母乳を与えないことを選択した場合に、人乳に代わる、または人乳を補足するための幼児用処方が開発されてきた。幼児用処方の組成物を改良する試みは、母乳の組成をより完全にまねることに焦点が当てられてきた。
幼児用処方に８０年以上にわたって牛乳が用いられてきた。しかしながら、人乳と牛乳の蛋白系は、量および質の両方において実質的に異なっている。顕著な量的違いとして、人乳の全蛋白分（１１ｇ／Ｌ）が牛乳のそれ（３３ｇ／Ｌ）と比べて低いこと、およびホウェイ蛋白のカゼインに対する割合の違い（牛乳では１８：８２であり、人乳では６０：４０である）が挙げられる。

この分野における注目が、牛乳と人乳の間の、個々のホウェイ蛋白、具体的にはアルファ−ラクトアルブミンとベータ−ラクトグロブリンの量の、顕著な質的違いに焦点が当てられた。すべての哺乳動物の乳汁中に見られる蛋白である、アルファ−ラクトアルブミンは人乳の主たる蛋白である。ベータ−ラクトグロブリンは人乳には存在しない。ウシホウェイの蛋白分は約５０％ないし５５％のベータ−ラクトグロブリンおよび約１８％のアルファ−ラクトアルブミンを含有する。ウシホウェイ中にあるベータ−ラクトグロブリンのアルファ−ラクトアルブミンに対する割合は２．５：１と４：１の範囲にある。さらには、牛乳中のベータ−ラクトグロブリンを除外または除去することで、アルファ−ラクトアルブミンの全量がウシホウェイ蛋白の１８％から４０％に増大することも知られている［de Wit, J. N.、"Nutritional and Functional Characteristics of Whey Proteins in Food Products", Journal of Dairy Science ８１：５９７−６０８（１９９８）］。

ベータ−ラクトグロブリンは、特に必須アミノ酸であるバリンおよびトレオニンに富んでいる。アルファ−ラクトアルブミンは、他の牛乳蛋白と比べて、特に必須アミノ酸であるトリプトファン、リジンおよびシスチンに富んでいる［Jarvenpaa, A. L., N. C. Raihaら、"Milk protein quantity and quality in the term infant. I. Metabolic responses and effects on growth", Pediatrics ７０（２）：２１４−２０（１９８２）］。牛乳および人乳中の特定のホウェイ蛋白の量およびこれら蛋白のアミノ酸組成が異なる結果として、牛乳と人乳はそのアミノ酸特性にて実質的に異なる［Rudloff, S.およびC. Kunz、"Protein and nonprotein nitrogen components in human milk, bovine milk, and infant formula: quantitative and qualitative aspects in infant nutrition", J Pediatr Gastroenterol Nutr ２４（３）：３２８−４４（１９９７）］。この違いは、特定のホウェイ蛋白の組成が修飾されていないような、ウシホウェイで調製されている幼児用処方では依然として存在することとなる。

上記したように、牛乳を基材とする幼児用処方にてベータ−ラクトグロブリンを除外または除去すると、アルファ−ラクトアルブミンの含有率が増大する。かかる変化は、付随的に、必須アミノ酸であるシスチン、トリプトファン、チロシンおよびフェニルアラニンのレベルを増大させ、必須アミノ酸であるトレオニンのレベルを人乳のそれと極めて類似するレベルにまで減少させる。したがって、アミノ酸組成の改良は、幼児用処方の全蛋白分を減少させることとなる。

DeWit, de Wit, J. N.、"Nutritional and Functional Characteristics of Whey Proteins in Food Products", Journal of Dairy Science ８１：５９７−６０８（１９９８）は、乳汁蛋白とアミノ酸組成の両方を微調整することに、具体的には、牛乳にアルファ−ラクトアルブミン、ベータ−カゼインおよびラクトフェリンを富ませ、特にそのアミノ酸組成について、最適な栄養素組成を得ることに焦点を当てたリサーチ活動を記載する。脱塩した牛乳パーミエート（ｐｅｒｍｅａｔｅ）中にベータ−ラクトグロブリンを用い尽くしたホウェイ蛋白、ベータ−カゼインおよびラクトフェリンを含む栄養素組成が提案されている。それはかかる調製物が現存する幼児用処方よりも人乳の蛋白組成に極めて近い蛋白組成を有することを前提とする。

乳業技術は、幼児用処方を含め、食品に用いるために、ホウェイから実質的にすべてのベータ−ラクトグロブリンを選択的に除去するか、または実質的にベータ−ラクトグロブリン不含のアルファ−ラクトアルブミンに富むフラクションを単離する、ホウェイ蛋白の分別工程に焦点が当てられている。米国特許第５４５５３３１号は、脱脂せず、限外濾過に付したホウェイを用いてアルファラクトアルブミン分が高く、全沈殿性蛋白に基づいて５％未満のベータ−ラクトグロブリンを含む材料を生成する方法を記載する。この方法は、ｐＨ４．２にて、脱脂せず、限外濾過に付したチーズホウェイにて、アルファ−ラクトアルブミンを熱沈殿させることを含む。アルファ−ラクトアルブミンに富む沈殿物を上清し、洗浄し、中和し、限外濾過に付し、噴霧乾燥させてホウェイフラクションを得る。その中の蛋白は優勢的にアルファ−ラクトグロブリンであり、実質的にベータ−ラクトグロブリンを欠き、そのホウェイにて脂質含有成分を含む。米国特許第５４２０２４９号は脱脂肪ホウェイおよびカルシウム結合樹脂を用いて分離のためのホウェイならびに少なくとも６０％のアルファ−ラクトアルブミンとしての蛋白および最大１０％のベータ−ラクトグロブリンとしての蛋白を含むアルファ−ラクトアルブミンフラクションの調製を開示する。それらは１３％のベータ−ラクトグロブリンとしての蛋白を含有するアルファ−ラクトアルブミンに富むフラクションを記載する。しかしながら、このフラクションは７４％の蛋白をアルファ−ラクトアルブミンとして含有するが、ベータ−ラクトグロブリンのアルファ−ラクトアルブミンに対する割合は１：６である。他のアルファ−ラクトアルブミンに富むフラクションは、ベータ−ラクトグロブリンのアルファ−ラクトアルブミンに対する割合が１：４ないし１：７である。

米国特許第５４３６０２０号は、カゼイングリコマクロペプチドおよび脂肪を除去するのに限外濾過に付した分画されたホウェイと結合した非蛋白窒素源としての脱ラクトース化および脱イオン化ホウェイパーミエートからなる材料で製造されている、未処理の牛乳蛋白を欠く幼児用処方を記載する。米国特許第５１６９６６６号は、幼児養育用の「ヒト化」牛乳材料を製造するために、牛乳を処理し、アルファ−ｓ−カゼインを除外または実質的に減少させ、ベータ−ラクトグロブリンレベルを蛋白の百分率として４％またはそれ以下にまで減少させることを記載する。

（発明の要約）
本発明は、幼児が十分に我慢できる、幼児用処方の組成物に関する。本発明の幼児用処方組成物は、ホウェイフラクションの全蛋白の４０％以下がアルファ−ラクトアルブミンであり、ホウェイフラクションの全蛋白の８％以上がベータ−ラクトグロブリンである；ただし、ホウェイフラクション中のアルファ−ラクトアルブミンの割合がベータ−ラクトグロブリンの割合よりも大きい、ホウェイフラクションを含む。

（発明の詳細な記載）
本発明はさらには、１００キロカロリーを利用するに際して約１．０ないし約１．２グラムの蛋白を提供するのに十分な量の牛乳と、１００キロカロリーを利用するに際して約１．０ないし約１．２グラムの蛋白を提供するのに十分な量のウシホウェイ材料とを含む、栄養学的に完全な幼児用処方であって、ウシホウェイ材料が全蛋白のアルファーラクトアルブミン分約２８％ないし約４０％およびベータ−ラクトグロブリン分約８％ないし約３３％を含む、幼児用処方に関する。好ましくは、ホウェイ材料は全蛋白の約２８％と約３６％の間のアルファーラクトアルブミン分および約１０％と約２９％の間のベータ−ラクトアルブミン分を有する。この処方において、そのホウェイフラクションのアルファーラクトアルブミンの百分率は、そのホウェイフラクションのベータ−ラクトグロブリンの百分率によりも大きい。好ましくは、そのホウェイフラクションのベータ−ラクトグロブリン分は、そのホウェイフラクションのアルファーラクトアルブミンの百分率から７％を引いた百分率よりも大きくない。
本発明の特定量のアルファーラクトアルブミンおよびベータ−ラクトグロブリンの組成を有する修飾されたホウェイは、全窒素の約１５％（百分率はｗ／ｗを基礎とする；以下、同じ）またはそれ以下の蛋白以外の窒素分；約１２．５ないし約９５％の全蛋白分；約１５％以下の脂質分；および約４．５％以下の灰分を有することが好ましい。好ましくは、修飾されたホウェイの全蛋白分は約３５％ないし約８０％の間にあり、より好ましくは約７３％ないし約７７％の間にある。

本発明の組成物にて用いられるウシホウェイ材料が、全蛋白１００グラムに付き、グラム単位にて以下のアミノ酸分：アルギニン（３．１）；シスチン（１．４）；ヒスチジン（１．６）；イソロイシン（１．０）；ロイシン（５．３）；リジン（３．９）；メチオニン（０．３）；フェニルアラニン（１．２）；トレオニン（３．２）；トリプトファン（１．５）；チロシン（０．９）；およびバリン（１．０）を最低量にて有する。したがって、本発明の幼児用処方はアミノ酸を付加的に含有する必要はない。
本発明の幼児用処方は、付加的に、当該分野にて知られている栄養学的に有益な成分、例えば、アラキドン酸およびドコサヘキサエン酸などの長鎖ポリ不飽和脂肪酸を提供する油と一緒に処方することができる。本発明の幼児用処方はさらに、ビタミン、ミネラル、セレニウム、天然カロチノイド、ヌクレオチド、タウリンおよび他の栄養物質と一緒に処方することもできる。

かくして、一の具体例において、本発明は、１００キロカロリーを利用するに際して２．０−２．４グラムの蛋白を含有する栄養学的に完全な幼児用処方の組成物であって、該蛋白が修飾されていない牛乳とホウェイフラクションからの実質的に等量の蛋白にて構成され、該ホウェイフラクションはアルファ−ラクトアルブミンに富んでいるところの、幼児用処方に関する。

本発明の幼児用処方は、脱イオン水中に適量のアルファ−ラクトアルブミンに富むホウェイ蛋白濃縮物を、脱脂粉乳、ラクトース、植物油および脂溶性ビタミンと一緒にブレンドすることにより調製することができる。好ましくは、これらの材料を略２４０グラム／リットルの最終濃度を得るのに十分な量にて一緒にブレンドする。ついで、高温／短時間の低温殺菌に付す前に、無機塩を該混合物に加えてもよい。適当な無機塩として、塩化カルシウム、炭酸カルシウム、クエン酸ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素カリウム、塩化マグネシウム、硫酸鉄、クエン酸カリウム、硫酸亜鉛、水酸化カルシウム、硫酸銅、硫酸マグネシウム、ヨウ化カリウム、亞セレン酸ナトリウム等が挙げられる。ついで、この混合物を均質にして冷却する。ついで、熱不安定なビタミンおよび微量栄養素を当該混合物に添加する。ついで、この混合物を約１２０ないし約１３５、好ましくは１２３グラム／リットル（約６７０キロカロリー／リットルに相当する）の最終全固体濃度にまで脱イオン水を用いて標準化する。その処方を一般的に超高温で滅菌処理してもよく、あるいは標準的なレトルト方法で滅菌処理に付してもよい。次に、この滅菌処理された材料を適当なパッケージに入れる。

製造および滅菌処理についての他の既知の方法を本発明の幼児用処方を調製するのに使用できることは当業者に明らかであろう。本発明の幼児用処方はまた、幼児に授乳する前に等容量の水で希釈する必要のある濃縮液体生成物として調製してもよい。さらには、かかる幼児用処方をスプレードライヤーにおけるように脱水させ、輸送の安定性および経済性の利点を付与する安定した幼児用処方粉末を作り出してもよい。かかる粉末は幼児に付与スル前に水で復元する必要がある。

本発明の幼児用処方は、幼児用処方におけるアミノ酸についての欧州連合［Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ９１／３２１／ＥＥＣ］基準に適合あるいは上回るように必須アミノ酸を付加的に添加する必要のないアミノ酸特性の組成を有するという点で有利である。このアミノ酸特性は全蛋白濃度を１００キロカロリーを利用するに際して２．１グラムにまで減少させることができ、これは人乳の全蛋白濃度とより近い。もう一つ別の利点がＵ．Ｓ．Ｉｎｆａｎｔ Ｆｏｒｍｕｌａ Ａｃｔの蛋白要件を上回る幼児用処方であるということである。さらなる利点は人乳にて見られるような平均量のアルファ−ラクトアルブミンを含有する幼児用処方であるということである。さらなる利点はアルファ−ラクトアルブミンを主たるホウェイ蛋白として含有する幼児用処方であるということである。もう一つ別のさらなる利点は長鎖オメガ−３およびオメガ−６ポリ不飽和脂肪酸を栄養学的に望ましいレベルで含有する幼児用処方であるということである。

牛乳は大部分の幼児用処方の基材である。全蛋白濃度が人乳のそれの３倍であるにも拘わらず、アルファ−ラクトアルブミンは人乳の半分にも満たない。人乳はベータ−ラクトグロブリンを全く含有しない。反対に、ベータ−ラクトグロブリンは牛乳にある最も豊富なホウェイ蛋白である（表１）。
単なる蛋白源として未修飾牛乳で製造した現行の幼児用処方は、１５−１６ｇ／Ｌの蛋白を含有し、カゼイン−優勢であり、わずか０．５ｇ／Ｌのアルファ−ラクトアルブミンを含有するにすぎない（表１）。蛋白組成について修飾されていないホウェイ蛋白で製造された当該幼児用処方は１５ｇ／Ｌの蛋白を含有する。脱ミネラル化されたホウェイはこれらの幼児用処方にある蛋白の半分を提供する。これらの幼児用処方は等容量の人乳にて略半分の、１．２ｇ／Ｌのアルファ−ラクトアルブミンを含有する（表１）。

実施例１
アルファ−ラクトアルブミンについては富んでいるが、ベータ−ラクトグロブリンを有意なレベルにて含有するホウェイ蛋白濃縮物を、本発明の幼児用処方に用いるために調製した。当該濃縮物は以下の近似値ならびにミネラル組成およびホウェイ蛋白割合を有した。

＊蛋白１００グラム当たりのグラム数

ホウェイ蛋白フラクションのアルファ−ラクトアルブミンおよびベータ−ラクトグロブリンの割合を、２−メルカプトエタノール還元に付した後、移動相および溶媒として６ＭグアニジンＨＣＬを用いるＧＰＣ（ゲル透過クロマトグラフィー）を用いて測定した。

クロマトグラフィーカラムにプロゲルＴＳＫ Ｇ３０００ ＳＷ ＸＬを充填した。２つのカラムをＳＷ ＸＬのガードカラムと直列に並べた。グアニジン塩酸塩（５７３．１８ｇ）をＨＰＬＣ等級の水（６００ｍＬ）に溶かして移動相を調製した。バッファーストック（１００ｍＬ）を加え、その溶液を加熱して攪拌し、完全に溶解させた。そのｐＨを５０％水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整した。濾過した後、溶液を１リットルに希釈した。Ｎａ２ＨＰＯ４（５６．６ｇ）、ＮａＨ２ＰＯ４（３．５ｇ）および四酢酸エチレンジアミン（２．９ｇ）をＨＰＬＣ等級の水（１０００ｍＬ）に溶かし、塩酸でｐＨ７．５に調整してバッファーストックを調製した。

クロマトグラフィー条件は以下のとおりである：流速（０．５ｍＬ／分）；作動時間（六〇分）；注入容量（５０マイクロリットル）；温度（外界温度）；および検出器（ＵＶ２８０ｎｍ）。

１０ｍＬの容量フラスコ中にて１０ｍｇに相当する量の蛋白を秤量することでサンプルを調製した。移動相を一定容量まで加え、フラスコを十分に混合した。該溶液を２０分間超音波処理に付した。約１ｍＬの溶液を注入用バイアルに移し、１０ｍＬの２−メルカプトエタノールを加え、その溶液をボルテックス・ミキサー上で１０秒間混合する。ついで、そのサンプルをＨＰＬＣシステムに注入した。

約２５ｍｇのウシアルファ−ラクトアルブミンおよびベータ−ラクトグロブリンを別々に秤量し、それらを１０ｍＬの容量フラスコ中のＨＰＬＣ等級の水に溶かすことで標体を調製した。１．０ｍＬの各標体を１０ｍＬの容量フラスコにピペットで取り、移動相で一定容量に希釈することで較正基準を調製した。約１ｍＬの較正基準溶液を注入用バイアルに移し、１０ｍＬの２−メルカプトエタノールを加え、その溶液をボルテックス・ミキサーで１０秒間混合した。ついでその標準サンプルをＨＰＬＣシステムに注入した。

実施例２
実施例１のホウェイ蛋白濃縮物を等量の蛋白を含有する一定量の脱脂粉乳と混合し、ホウェイ蛋白のカゼインに対する割合を６０：４０とした。アルファ−ラクトアルブミンがこの蛋白混合物にて優勢なホウェイ蛋白であることがわかった。
この蛋白混合物を用い、標準のホウェイをベースとする幼児用処方における蛋白分よりも蛋白分が低く、人乳に見られるそれと近似する、改良された幼児用処方を調製した。当該幼児用処方の蛋白分、ホウェイ蛋白分、アルファ−ラクトアルブミンレベルおよびベータ−ラクトグロブリンレベルを表３に示す。この幼児用処方におけるアルファ−ラクトアルブミンの量はベータ−ラクトグロブリンの量よりも多かった。該幼児用処方中のアルファ−ラクトアルブミンの量は人乳中のアルファ−ラクトアルブミンの量と本質的に同じであった。

この蛋白混合物を配合したすぐ授乳することのできる４つのバッチの液体幼児用処方を以下の方法にて４０００リットルの容量で製造した。
各バッチの脂肪ブレンドは、４３．５４ｋｇの無作為に選択されたパームオレイン、３５．２Ｌのオレイン酸含量の多いヒマワリ油またはサフラワー油、３４．６Ｌのココナッツ油、２８．１Ｌの大豆油、１．３６ｋｇの大豆レシチン、１．３７ｋｇの蒸留したモノグリセリド、その脂肪酸の３８％をアラキドン酸として含有する１．１９ｋｇの油（ＡＲＡＳＣＯ、Ｍａｒｔｅｋ、コロンビア、メリーランド州）およびその脂肪酸の３８％をドコサヘキサエン酸として含有する０．７４ｋｇの油（ＤＨＡＳＣＯ、Ｍａｒｔｅｋ、コロンビア、メリーランド州）を合することにより調製した。
ついで、脂溶性ビタミンのビタミンＡ（ビタミンＡパルミチン酸塩および混合天然カロチノイド）、ビタミンＤ（コレカルシフェロール）、ビタミンＥ（ｄｌ−アルファ−トコフェロール酢酸塩）およびビタミンＫ（フィトナジオン）をこの脂肪ブレンドに分散させた。

改良された処方のバッチを製造するために、２８ｋｇの蛋白を得るのに十分な量の加熱した液体脱脂粉乳または粉状の脱脂粉乳を、熱水に溶かした７２３ｇのクエン酸ナトリウムおよび４０４ｇの炭酸水素カリウムが添加されている合成タンク中の加温した脱イオン水に加えた。脂肪ブレンドをこの合成タンクに秤量して入れた。主たる乾燥成分、ラクトースおよびホウェイ蛋白濃縮物を粉末漏斗エダクターを通して加えた。ホウェイ蛋白濃縮物の添加量はその蛋白分に応じて変わり、２８ｋｇの蛋白を得るのに十分であった。タウリン（２２１ｇ）を熱水に溶かし、合成タンクに加えた。以下のミネラルを別々に熱水に溶かすかまたは分散させ、激しくかき混ぜながら合成タンクに加えた：炭酸カルシウム（６７９ｇ）；水酸化カルシウム（２６２ｇ）；水酸化カリウム（１４３ｇ）；塩化マグネシウム（５０７ｇ）；塩化カルシウム（２９２ｇ）；塩化カリウム（５５２ｇ）；硫酸鉄（１５１ｇ）；ラクトース中１％粉薬のヨウ化カリウム（３１．６ｇ）；硫酸亜鉛の４４．６％溶液（２５０ｇ）；硫酸銅の２．５％溶液（３６７ｇ）；硫酸マンガンの２．５％溶液（５．０８ｇ）および炭酸水素カリウム中の０．３％亞セレン酸ナトリウム（１２．５ｇ）。

混合物を９６±２℃に加熱し、３０秒間そのままとし、ついで６６±２℃に冷却した。ついで、二段階式ホモジナイザーを用い、その混合物を第一段階は２５００ｐｓｉｇで、第二段階は５００ｐｓｉｇで均質化させた。ついで、その均質化された混合物をプレート熱交換機を用いて５−１０℃に冷却した。

混合物のサンプルを脂肪分、ｐＨおよび全固形分について分析した。必要に応じて適量の脱イオン水を添加し、８０％の全希釈を達成し、バッチを混合した。全固形分およびｐＨを分析するためにサンプルを採取した。最終希釈のために必要とされる量の水を算定した。この希釈水の一部を用いてヌクレオチドおよび水溶性ビタミンを希釈し、それらを混合物に添加した。以下のヌクレオチドを加温した水に溶かし、混合物に添加した：シチジン５’一リン酸（６３．７ｇ）；アデノシン５’一リン酸（１８．６ｇ）；ウリジン５’一リン酸二ナトリウム塩（３２．４ｇ）；イノシン５’一リン酸二ナトリウム塩（１３．０ｇ）およびグアノシン５’一リン酸二ナトリウム塩（１１．２ｇ）。

適宜処方した水溶性ビタミンのプレミックスを温水に溶かし、この溶液を混合物に加えた。コリンクロリド（２５１ｇ）およびミオイノシトール（１０４ｇ）を水に溶かし、混合物に加えた。アスコルビン酸（８１２ｇ）を温水に溶かし、炭酸水素カリウム（４６２ｇ）をゆっくりと添加してアスコルビン酸を中和した。ついで、アスコルビン酸塩中性溶液を混合物に添加した。その混合物を３０分間かき混ぜた。この混合物を約１２３ｇ／リットルの全固形分に標準化させた。
最初の均質化から２４時間後、混合物を再び均質化させ、ストークＵＨＴ（超高圧）無菌処理システムを介して滅菌し、無菌状態で２５０ｍＬのフレキシブルな容器に充填した。

対照となる処方
脱ミネラル化ホウェイ（典型的には、１３．５％蛋白、８５％ラクトース、脂肪１％および灰分１．５％未満）で製造した、すぐ授乳することのできる液体幼児用処方の対照となるバッチを、以下の方法にて、４０００リットルの量にて製造した。３０ｋｇの蛋白を得るのに十分な量の加熱した液体脱脂粉乳を、熱水に溶かしたクエン酸ナトリウムおよびクエン酸カリウムが加えられている合成タンク中の加温した脱イオン水に添加した。脂溶性ビタミンに富む脂肪ブレンドをこの合成タンクに秤量して入れた。主たる乾燥成分、ラクトースおよび脱ミネラル化ホウェイを粉末漏斗エダクターを通して加えた。脱ミネラル化ホウェイの添加量はその蛋白分に応じて一定でなく、３０ｋｇの蛋白を得るのに十分であった。タウリンを熱水に溶かし、合成タンクに加えた。以下のミネラルを別々に熱水に溶かすかまたは分散させ、激しくかき混ぜながら合成タンクに加えた：炭酸水素カリウム、塩化カルシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、クエン酸カルシウム、硫酸鉄、ヨウ化カリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸マンガンおよび亞セレン酸ナトリウム。

対照となる処方を、上記した本発明の処方と同様の方法にて、加熱処理し、均質化してヌクレオチドおよび水溶性ビタミンのプレミックスを補足した。この対照となる処方混合物を再び均質化させ、ストークＵＨＴ（超高圧）無菌処理システムを介して滅菌し、２５０ｍＬのフレキシブルな容器に充填した。

この実施例の２つの処方の主な成分は以下のとおりである：

２つの処方のミネラル成分は以下のとおりである：

２つの処方のビタミン成分は以下のとおりである：

本発明の幼児用処方および対照となる処方の栄養素組成を表７に示す。

本発明の処方のカルシウムおよびリンのレベルは、標準処方よりも人乳に見られるレベルに近い。人乳は平均２５４ｍｇ／Ｌのカルシウムおよび１３９ｍｇ／Ｌのリンを含有する。

実施例３
幼児用処方の４つの個々のバッチを本発明に従って製造した。各バッチを標準的な高性能液体クロマトグラフィー操作によりアミノ酸組成について分析した。改良された処方の蛋白にて幼児に不可欠なアミノ酸の平均レベルを表８に示す。この処方は標準的なホウェイ処方よりも人乳のアミノ酸特性に近い特性を有する（表８）。この処方の蛋白源は、標準的なホウェイをベースとする処方よりも、トリプトファン、リジンおよびシスチンにて高く、トレオニンにて低い。

欧州連合（ＥＵ）は、その処方を比較しなければならない、特定の人乳アミノ酸組成物［ディレクティブ９１／３２１／ＥＥＣ］を提供する。ＥＵはｍｇ／１００キロカロリーにおける容量を基礎としてアミノ酸組成がＥＵ人乳値の１００％でなければならないことを要件とする。ｍｇ／１００キロカロリーをｍｇ／Ｌに変換するのに用いる因子は６７６キロカロリー／Ｌであった。

本発明の処方は、人乳または現行のホウェイ−ベースの幼児用処方よりも、トリプトファン、必須芳香族アミノ酸を高レベルにて含有する。現行の幼児用処方を与えられた幼児は、トリプトファンを除いて、母乳で育った幼児に見られるレベルを超えた血漿中アミノ酸レベルを有することが多い。処方を与えられた幼児の血漿中トリプトファンレベルは母乳で育った幼児のそのレベルより有意に低いことがしばしばである（Fazzolari-Nesciら、"Tryptophan Fortification of Adapted Formula Increasing Plasma Tryptophan Concentrations to Levels Not Different from Those Found in Breast-Fed Infants," Journal of Ped. Gastro and Nut.、１４：４５６−４５９（１９９２））。トリプトファンは神経伝達物質であるセロトニンの先駆体である（Fernstromら、"Brain Serotonin Content: Physiological Regulation by Plasma Neutral Amino Acids," Science、１７８：４１４−４１５（１９７２））。セロトニンの高いレベルは睡眠潜時の改善（速やかに入眠に至ること）と関連付けられる。幼児におけるトリプトファン補足は入眠までの時間を短くする（Yogmanら、"Dietal Sleep Patterns In Newborn Infants," New England Journal of Medicine、３０９（１９）：１１４７−９（１９８３））。

トリプトファンはラージ中性アミノ酸（ＬＮＡＡ）と同じ輸送システムについて競い合う。かくして、比較的高濃度のＬＮＡＡがある場合、トリプトファンはあまり効果的には細胞を介して輸送されない。トリプトファンの腸を介する、さらには脳への最適な輸送を保証するために、比較的高割合のトリプトファン／ＬＮＡＡが望ましい。現行の幼児用処方と比較して、本発明の処方は優れたトリプトファン／ＬＮＡＡ値を有する、すなわち、人乳の値に近い。

シスチンはグルタチオンの成分、重要な代謝機能を有するトリペプチドである。グルタチオンは酸化防止剤として不可欠であり、最適な免疫機能の確保においても必須である。本発明の処方は現行のホウェイ−およびカゼイン−優勢の処方と比べてシスチンレベルが高い。
本発明のアミノ酸組成は全蛋白レベルを人乳に近いレベルにまで減少させることができ、これはＥＵアミノ酸の要件に合致する。

実施例４
実施例２の改良された処方および対照となる処方を、予想される、多施設の、無作為の、制御され、色分けされた、並行なグループの外来患者の研究において、健康な満期産児にて評価した。幼児は２つの処方の一方を無作為に受け、１２週間追跡した。
幼児は妊娠期間に適する体重および身長を有する健康な完全満期産児であった。身長に対する体重の割合は国立健康統計センタ（ＮＣＨＳ）により提供される成長曲線によれば年齢で１０番と９０番の百分順位の間にあった。
研究を行う幼児はわずか１４日齢であった。体重と身長はまだ、ＮＣＨＳ成長曲線によれば年齢で１０番と９０番の百分順位の間にあった。幼児には専ら研究用の幼児用処方を与えた。

研究用処方の授乳をベースラインとなる外来の日に開始した。研究に参加した１９３人の幼児のうち、９８人の幼児は本発明の幼児用処方を受け、９５人の幼児は対照となる処方を受けた。５日以上連続して、または７日以上累積して研究用処方を授乳しない場合、人乳、離乳食または他の固形食を食する場合、あるいは該研究用プロトコルをコンプライアンスできない場合、幼児は処方の不寛容についての研究から抜けることができた。医師または両親は何時いかなる理由でも自由に幼児を離脱させることができた。

実験処方に帰属する９８人の幼児のうち、７２人（７３．５％）は研究を修了した。対照となる処方に帰属する９５人の幼児のうち、６２人（６５．３％）だけがその研究を修了した。実験群の８人の幼児（８．２％）および対照群の４人の幼児（４．２％）はプロトコルに違反したために当該研究を中止した。実験群の５人の幼児および対照群の４人の幼児が復帰しなかったため研究を打ち切った。実験群の残りの幼児、７２人または８５％あるいは対照群の６２人または７１％が該研究を修了した。有害事象のために該研究を中止した対照群の幼児（２０／９５または２１％）は、改良された処方群における幼児（１５／９８または１５．３％）よりも多かった。

＊この研究では中止の理由として複数の理由を考慮した。

主たる効能の測定は、体重（ｇ）、身長（ｃｍ）および頭囲（ｃｍ）の測定であり、それをベースライン測定の際、４週目、８週目および１２週目に測定した。研究を行う３日前までに評価を行い、他の時点では±３日の範囲内で評価を行った。
日齢、身長および頭囲についてのベースライン値は２つの研究した群で同様であった。実験群および対照群について、各々、ベースラインの平均日齢は１０．１日および１０．５日であり、平均身長は５１．５ｃｍおよび５１．３ｃｍであり、平均頭囲は３５．４ｃｍおよび３５．５ｃｍであった。体重においては２つのベースラインでの研究した群の間で統計学的に有意な違いがあった（ｐ＝０．０４）。実験群の幼児は対照群の幼児よりも平均してわずかに重かった（３５３６．４ｇ対３４５８．５ｇ）。

両方の処方は成長の促進に効果的であった。いずれの研究用処方を授乳した幼児も研究の間同程度に成長した。ベースラインから後で、いずれの成長の測定（体重、身長または頭囲）においても処方群の間で統計学的に有意な違いはなかった。身体計測データは、１２週間に及ぶすべての測定において、幼児は平均で体重が約２７００ｇ増え、身長が１０ｃｍ伸び、そして頭囲が５ｃｍ広がるという、有意な成長を示した。４週目、８週目または１２週目で実験用処方および対照となる処方を受けた群の間で統計学的に有意な違いはなかった。ベースラインから１２週目までの平均体重増についてのＺ−スコアは対照群（＋０．１８３）と比べて改良された処方群（＋０．４９）が高かった。この改良された処方群は対照群よりも研究以外の授乳が少なかった（各々、３５．７％対４２％）。

研究用処方の有害事象、許容度および寛容性も、４週目、８週目および１２週目の外来の際に、そして２週目、６週目および１０週目の電話連絡により記録した。この時点の３日前後で評価を行った。寛容性データを面談により集めた。有害事象は、試験処方と必ずしも因果関係を有しなくとも、臨床試験にて試験品を投与した幼児に見られる都合の悪い医学的な出来事として定義された。有害事象は、それが研究用処方に関連すると考えられるかどうかに拘わらず、好ましくなく、意図しないいずれの兆候（異常な検査所見を含む）、徴候または研究処方の使用に伴う一時的な疾患とすることもできる。

実験および対照群における半分に満たない幼児が処方と関連すると考えられる有害事象を有した（各々、４２人［４２．９％］および４４人［４６．３％］）。すべての幼児で最も一般的な処方関連の有害事象は鼓腸（３４人の幼児）、便秘（３０人の幼児）および嘔吐（２６人の幼児）であった。両群において、１７人の幼児が処方関連の鼓腸を示した。対照群（１１人）の幼児よりも実験群（１９人）の幼児にて処方関連の便秘が生じることが多かった。処方関連の嘔吐が、実験用処方群では１２人の幼児に、そして対照となる処方の群では１４人の幼児に生じた。対照群においては実験群における２倍の幼児が処方関連の下痢を経験した（８対４）。

本発明の処方群の幼児はいずれも呼吸器系の処方関連の有害事象を示さず、対照群のうちの３人の幼児がかかる事象を有した。全体として、２つの研究用処方の有害事象のプロフィールは類似するものであった。

蛋白状態（血清アルブミン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニン）はベースラインおよび１２週目に測定される副次的安全評価項目であった。本発明の処方群は対照群（１．５グラム蛋白／１００ｍＬ）よりも少量の蛋白（１．４グラム蛋白／１００ｍＬ）を受けた。両方の研究群は１２週の研究の終わりに血清アルブミンレベル（両群にて４．１ｍｇ／ｄＬ）により特定されるような類似する適当な蛋白状態を有した。同程度の成長および血清アルブミン状態は、全蛋白分が低いにも拘わらず、アルファ−ラクトアルブミンに富む処方からの適当な窒素栄養素の摂取を示す。研究終了の際には、実験群のＢＵＮレベルは対照群のそれよりも低く（８．２ｍｇ／ｄＬ対９．３ｍｇ／ｄＬ）、このことは実験群が高品質蛋白源であり、過剰の蛋白を除去する必要の減少したことを示す。

許容度および寛容性のデータを表１０にて要約する。実験用および対照としての処方は共に許容されるものであり、研究のすべての時点で大部分の幼児により十分に寛容されるものであった。２週目の後のすべての時点で、許容度および寛容性は本発明の処方を受けた幼児にてわずかに優れたものであった。研究用処方の全体としての許容度および寛容性が満足のいくものである幼児の百分率が、改良された処方を受けた幼児の場合、２週目の９０％から１０週目および１２週目の１００％までの範囲にあり、対照となる処方を受けた幼児の場合、４週目の８５．９％から１０週目の９８．４％までの範囲にある。許容できない割合は改良された処方群にて０−１０％の範囲にあり（平均４．１％）、対照群で１．６−１４．１％の範囲にある（平均７．０％）。このデータは改良された処方が蛋白栄養素を強化し、処方許容度を向上させることを示す。

本発明は、その精神および本質的な特性を逸脱することなく、別の具体的な様式にて具現化することができる。よって、本発明の範囲を示すものとして、明細書よりも別途添付した特許請求の範囲を参照すべきである。

Claims (11)

1. 牛乳およびホウェイフラクションを含む幼児用調製乳組成物であって、そのホウェイフラクション中の全蛋白の４０重量％またはそれ以下がアルファーラクトアルブミンであり、そのホウェイフラクション中の全蛋白の８重量％以上がベータ−ラクトグロブリンである；ただし、 アルファ−ラクトアルブミンの割合はそのホウェイフラクション中にあるベータ−ラクトグロブリンの割合よりも大きい、幼児用調製乳組成物。
2. 牛乳 対 ホウェイフラクション中における１００キロカロリーあたりの蛋白グラム数の比率が１：１．２〜１．２：１の範囲である、請求項１記載の幼児用調製乳組成物。
3. １．０ないし１．２グラムの蛋白で１００キロカロリーの利用可能なカロリーを付与する一定量の牛乳と、１．０ないし１．２グラムの蛋白で１００キロカロリーの利用可能なカロリーを付与する一定量のウシホウェイ材料とを含む幼児用調製乳組成物であって、ウシホウェイ材料が全蛋白の２８％ないし４０％のアルファ−ラクトアルブミン分および８％ないし３３％のベータ−ラクトグロブリン分を含む、幼児用調製乳組成物。
4. ウシホウェイ材料が全蛋白の２８％ないし３６％のアルファーラクトアルブミン分および１０％ないし２９％のベータ−ラクトグロブリン分を含むところの、請求項２記載の幼児用調製乳組成物。
5. ウシホウェイ材料がさらに
   （ａ）全窒素の１５％またはそれ以下の蛋白以外の窒素分；
   （ｂ）１２．５％ないし９５％の全蛋白分；
   （ｃ）１５％またはそれ以下の脂肪分；および
   （ｄ）４．５％またはそれ以下の灰分
   により特徴付けられるところの、請求項２記載の幼児用調製乳組成物。
6. ウシホウェイ材料が３５％ないし８０％の全蛋白分を有するところの、請求項４記載の幼児用調製乳組成物。
7. ウシホウェイ材料が７３％ないし７７％の全蛋白分を有するところの、請求項５記載の幼児用調製乳組成物。
8. ウシホウェイ材料が、全蛋白１００グラムに付き、グラム単位にて少なくとも以下のアミノ酸分：
   （ａ）アルギニン（３．１）；
   （ｂ）シスチン（１．４）；
   （ｃ）ヒスチジン（１．６）；
   （ｄ）イソロイシン（１．０）；
   （ｅ）ロイシン（５．３）；
   （ｆ）リジン（３．９）；
   （ｇ）メチオニン（０．３）；
   （ｈ）フェニルアラニン（１．２）；
   （ｉ）トレオニン（３．２）；
   （ｊ）トリプトファン（１．５）；
   （ｋ）チロシン（０．９）；および
   （ｌ）バリン（１．０）
   によりさらに特徴付けられるところの、請求項２記載の幼児用調製乳組成物。
9. アルファ−ラクトアルブミンの量が利用可能な６７０キロカロリーに付き２．２グラム（０．３３ｇ／１００キロカロリー）以上であるところの、請求項２記載の幼児用調製乳組成物。
10. アルファ−ラクトアルブミンの量が利用可能な６７０キロカロリーに付き２．２ないし２．５グラムであるところの、請求項２記載の幼児用調製乳組成物。
11. ホウェイ蛋白のカゼインに対する割合が重量にて６０：４０であるところの、請求項２〜１０のいずれか１項記載の幼児用調製乳組成物。