JP4814501B2 - 抗酸化機能向上剤 - Google Patents

Description

本発明は、動脈硬化症、癌、糖尿病などの生活習慣病、しみ、そばかす等の異常な色素沈着、皮膚の炎症、皮膚の老化などの予防治療に有用な抗酸化機能向上剤に関する。

スーパーオキシドラジカルや過酸化水素に代表される活性酸素が、細胞障害性を有し、癌、リウマチ、シミ、シワ等の原因となっていることは広く知られている。また、コレステロールを運ぶＬＤＬは活性酸素により酸化ＬＤＬに変化し、変化した酸化ＬＤＬは動脈硬化の原因になることが知られている。

そこで抗酸化作用を有する薬剤は、動脈硬化症、癌、糖尿病などの生活習慣病、しみ、そばかす等の異常な色素沈着、皮膚の炎症、皮膚の老化などの予防治療薬として有用であるといわれ、種々の抗酸化作用成分が見出されている。例えば、ビタミンＥやビタミンＣ等の天然物や、ＢＨＴ（３，５−tert−ブチル−４−ヒドロキシトルエン）やＢＨＡ（２，３−tert−ブチル−ヒドロキシアニソール）等の合成品、生薬等に抗酸化作用のあることが知られている（特許文献１）。
特開平１０−１３９６７８号公報

しかしビタミンＥやビタミンＣは天然物として安全ではあるものの、抗酸化剤としての効果は不十分であり、ＢＨＴやＢＨＡには発ガン性の疑いがもたれている等の問題がある。また生薬由来のものについても、抗酸化剤としての効果は不十分であった。
従って、本発明の目的は、安全に長時間摂取できる抗酸化機能向上剤を提供することにある。

そこで本発明者は、種々のアミノ酸の薬理作用を検討してきたところ、５−アミノレブリン酸に代表される、安全性の高いδ−アミノ酸類が抗酸化酵素として知られているスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）又はグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）活性を向上させ、優れた抗酸化機能向上作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、δ−アミノ酸、その誘導体又はその塩を有効成分とする抗酸化機能向上剤を提供するものである。

本発明によれば、抗酸化機能が低下した動物、例えば高齢化に伴ない、抗酸化機能が低下した人を含む動物の抗酸化機能を向上させることができ、動脈硬化症、癌、糖尿病などの生活習慣病、しみ、そばかす等の異常な色素沈着、皮膚の炎症、皮膚の老化などを予防又は改善することができる。

本発明の抗酸化機能向上剤の有効成分は、δ−アミノ酸、その誘導体又はその塩である。当該δ−アミノ酸類としては、次式（１）

（式中、Ｒ¹は水素原子又はアシル基を示し、Ｒ²は水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示す)
で表される５−アミノレブリン酸類又はその塩が挙げられる。
当該５−アミノレブリン酸類は、光動力学的治療における光増感剤（特表２００４−５０５１０５号）、植物成長調節剤（特開平０７−５３４８７号）、除草剤（特開平０５−１１７１１０号）、魚類病原性微生物、寄生虫の感染治療（特開２００１−３１６２５５号）、豚成育促進剤（特開２００３−４０７７０号）等として有用であることは知られているが、抗酸化機能に対する作用については全く知られていない。

式（１）中、Ｒ¹で示されるアシル基としては、例えば炭素数１〜２４のアルカノイル基、芳香族アシル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。好ましいアシル基の具体例としては、例えばアセチル基、ｎ−プロパノイル基、ｎ−ブタノイル基、ｎ−ペンタノイル基、ｎ−ヘキサノイル基、ｎ−ノナノイル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。このうち、炭素数１〜６のアルカノイル基がより好ましい。

また、Ｒ²で示される置換を有していてもよいアルキル基としては、例えば置換基を有していてもよい直鎖若しくは分岐鎖の、又は環状構造を有する炭素数１〜２４のアルキル基等が挙げられる。このアルキル基が有してもよい置換基としては、例えばヒドロキシ基、アルコキシ基、フェニル基等が挙げられる。このような置換基を有していてもよいアルキル基の好ましい例としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、シクロヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−ドデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ベンジル基、フォネチル基、３−フェニルプロピル基、ヒドロキシエチル基、エトキシエチル基等を挙げることができる。このうち炭素数１〜６のアルキル基がより好ましい。なお、上記Ｒ¹は、アミノ基の置換基、Ｒ²はカルボン酸基の置換基を示しているが、例示したこれらの置換基は、５−アミノレブリン酸のみならず、δ−アミノ酸の置換基でもある。

δ−アミノ酸又はその誘導体の塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩等の酸付加塩、及びナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等の金属塩、アンモニウム塩、アルキルアンモニウム塩等が挙げられる。なお、これらの塩は使用時において水溶液又は粉体として用いられる。

以上のδ−アミノ酸、その誘導体又はそれらの塩は、水和物又は溶媒和物を形成していてもよく、またいずれかを単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。

δ−アミノ酸、その誘導体又はそれらの塩（以下、「δ−アミノ酸類」と称する。）は、化学合成、微生物による生産、酵素による生産のいずれの方法によっても製造することができる。また、前記δ−アミノ酸又はその塩のうち、５−アミノレブリン酸は、特開昭４８−９２３２８号公報、特開昭６２−１１１９５４号公報、特開平２−７６８４１号公報、特開平６−１７２２８１号公報、特開平７−１８８１３３号公報、特開平１１−４２０８３号公報等に記載の方法に準じて製造することができる。上記のようにして製造されたδ−アミノ酸若しくはその塩又はそれらの誘導体、それらの精製前の化学反応溶液や発酵液は、有害な物質を含まない限り、分離精製することなくそのまま用いることができる。また市販品なども使用することができる。

上記δ−アミノ酸類は、後記実施例に示すように、老齢化して抗酸化機能が低下したマウスのＳＯＤ活性又はＧＰｘ活性を増強させ、低下した抗酸化機能を向上させる作用をする。従って、上記δ−アミノ酸類は人を含む動物の抗酸化機能向上剤として有用であり、特に加齢により抗酸化機能が低下した人を含む動物の抗酸化機能向上剤として有用である。

また、本発明の抗酸化機能向上剤は、ミネラルを含有させるか、同時に摂取することにより、さらにその効果を向上させることができる。ミネラルとしては、鉄、亜鉛、銅、リン、カルシウム、マグネシウム、カリウム、セレン、クロム、マンガン、ヨウ素、ホウ素、ケイ素、バナジウム、モリブデン、コバルトなどが挙げられるが、特に好ましくは銅、亜鉛、マンガン、セレンである。これらのミネラル分は単独で、又は二種以上を組み合わせて用いることができる。ミネラルの化学的性状としては生物に害を与えるものでなければどんなものを用いてもよい。

本発明の抗酸化機能向上剤には、他の抗酸化剤及び必要に応じて栄養剤等を加えることができる。他の抗酸化剤としては、ユビキノン、フェルラ酸などのポリフェノール類、Ｎ−アセチルシステイン、システイン、カテコール、トコフェロール、カテキン、ケルセチンなどのフラボノイド類等が挙げられる。栄養剤としては、例えば、必須アミノ酸類、非必須アミノ酸類、ビタミン類、ハーブ、プロテイン、種々の酵素などが挙げられる。

本発明の抗酸化機能向上剤は、δ−アミノ酸類の粉末、δ−アミノ酸類を水に溶かした水溶液、上記方法で製造したδ−アミノ酸類を含む発酵液を、賦形剤等の担体に吸着させて使用することもできる。担体の種類としては、一般的なものでよく、結晶性セルロース、ゼラチン、でんぷん、デキストリン、油かす、パン酵母、ビール酵母、酒酵母、ワイン酵母、脱脂粉乳、乳糖、動物性及び植物性油脂、無水リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ケイ酸アルミン酸マグネシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどが挙げられる。

本発明の抗酸化機能向上剤の剤型としては、注射剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、シロップ剤、坐薬等が挙げられる。これらは溶剤、分散媒、増量剤、賦形剤等を適宜用い、常法に従って製造することができる。また、食品の形態として摂取してもよい。

本発明の抗酸化機能向上剤を水溶液として調製する場合には、δ−アミノ酸類が５−アミノレブリン酸の場合、有効成分である５−アミノレブリン酸、その誘導体又はそれらの塩の分解を防ぐため、水溶液がアルカリ性とならないように留意する必要がある。アルカリ性となってしまう場合は、酸素を除去することによって有効成分の分解を防ぐことができる。

本発明の抗酸化機能向上剤は、本剤を摂取してその抗酸化機能を向上させることができればよく、本剤の使用方法に制限はないが、好ましい態様について以下に示す。

本剤を用いた抗酸化機能向上剤の対象となる動物は特に限定されないが、哺乳類、爬虫類、鳥類、両性類、魚類などの脊椎動物が好ましい。これらの例としては、人、牛、豚、羊、やぎ、マウス、ラット、ウサギ、犬、猫、鶏、鶉、ニジマス、コイ、ウナギ、イワナなどの淡水魚、ギンザケ、ブリ、マダイ、サバ、マグロなどの海水魚などが挙げられる。

本剤の抗酸化機能向上剤の使用は動物の成育のどの時点でも可能であるが、好ましくは抗酸化機能、例えばＳＯＤ活性やＧＰｘ活性が低下した以降が好ましい。抗酸化機能向上剤の使用は、人であれば１５歳以降が好ましく、３５歳以降が特に好ましい。

本発明の抗酸化機能向上剤の摂取方法としては特に限定されないが、経口摂取、注射による摂取又は経腸による摂取が挙げられ、なかでも経口摂取が好ましい。

本剤は、１度の摂取でも十分な効果を示すが、さらに効果を強めるために複数回摂取することもできる。摂取する剤あたりの効果は複数回摂取の方が効果的であり、毎日少量ずつ摂取するのが効率的な使用方法である。

本剤の対象動物１kgあたり１回の摂取量は、０．００１mg〜１０００mgが好ましく、さらには０．００１mg〜１００mg、特に０．００１mg〜５０mgが好ましい。本剤の摂取量は、成育が旺盛な時期ほど、また摂取回数の少ないほど多くの量が必要である。適切な範囲を超えた摂取は不経済であるばかりか日光傷害を起こす可能性があるため望ましくない。

またミネラル類を併用する場合は同時に使用してもよいし別々に使用してもよい。使用するミネラルの種類、その使用方法及びその使用量は通常市販されているミネラル類と同じで差し支えない。その使用量は、例えば銅の場合には成人男性で１日あたり０．５〜１０mgであればよく、１〜５mgが好ましい。亜鉛の場合には１〜４０mgであればよく、５〜２０mgが好ましい。マンガンの場合には０．５〜１１mgであればよく、２〜８mgが好ましい。セレンの場合には１０〜２５０μｇであればよく、２０〜１００μｇが好ましい。

次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに何ら限定されない。

実施例１
一週間予備飼育したマウス（７０週齢、ＢＡＬＢ／ｃＡＪｃｌ）にマウス体重１kg当たり５−アミノレブリン酸（ＡＬＡ）塩酸塩１０mgを一日一回、７日間連続して摂取させた。ＡＬＡ塩酸塩は蒸留水で０．５mg／mL濃度に調整し、マウスに経口投与した。試験後マウスを解剖し、マウスの胸腺を採取し組織のスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性を測定した。採取した胸腺に０．２５Ｍショ糖水溶液１．０mLを加え、ホモジナイズ後、１０，０００Ｇで１０分間遠心後の上澄み液を酵素液として用いた。測定は抗酸化能測定用発光試薬ＭＰＥＣ（２−メチル−６−ｐ−メトキシフェニルエチニルイミダゾピラジノン；ｍｗ＝２７９．１）法（アトー株式会社製）によった。すなわち、０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液pH７．５、１２５μＬ、酵素液１０μＬ、０．１units/mLキサンチンオキシダーゼ６０μＬ、蒸留水４５μＬ、０．３mM ＭＰＥＣ１０μＬ、反応終量２５０μＬとし、Luminescencer−ＰＳＮ（アトー株式会社製）に分注し、０．７２mMヒポキサンチンpH７．５を５０μＬ加え、発光させた。発光阻害率の算出は酵素液の代わりに緩衝液を用いた。計算は標準ＳＯＤを用いて検量線を作成して、これから濃度計算を行った。
また併せてグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）活性を測定した。分光光度計のセル内に３７℃に保持した０．６mL反応混合液（０．０５Ｍ−Ｋ−phosphate buffer, pH７．０、１mM ＮａＮ₃、１mM ＥＤＴＡ、４mM ＧＳＨを含む）と２mM Ｈ₂Ｏ₂ ０．１mL、酵素液５０μＬを加え、総量１mL、直接分光光度計にて波長３４０nm（ＯＤａｔ３４０nm）で２分間スキャンさせた（２０mm／min）。空試料は酵素液の代わりに蒸留水を
用いた。
計算はチャート上から直線の傾きΔＯＤ（ΔＯＤ＝Δcm（ｙ軸の変化量）×ＯＤＭａｘ
／fullcm）を求めＮＡＤＰＨの分子吸光係数ａ＝６．３cm²／μmoleを用いて

（数１）
ＧＰｘ活性＝Ｖ／adv×ΔＯＤ／Δｔ
（Ｖは反応溶液量、ｄ＝light path＝１cm、ｖ＝酵素量、Δｔ＝時間の変化量min）

によって求めた。
試験は１区あたり雄と雌のマウス各５匹、計１０匹で実施、値は平均値を示した。ＡＬＡを処理した区においては、雄、雌いずれの場合もＳＯＤ活性又はＧＰｘ活性が向上していることを確認した。

Claims (8)

1. 次式（１）
   

   

   （式中、Ｒ ¹ は水素原子を示し、Ｒ ² は水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す）
   で表される化合物又はその塩を有効成分とする抗酸化機能向上剤。
2. ５−アミノレブリン酸又はその塩を有効成分とする請求項１記載の抗酸化機能向上剤。
3. さらにミネラルを含むものである請求項１又は２記載の抗酸化機能向上剤。
4. ミネラルが、銅、亜鉛、マンガン又はセレンである請求項３記載の抗酸化機能向上剤。
5. 経口、注射又は経腸摂取用剤である請求項１〜４のいずれか１項記載の抗酸化機能向上剤。
6. 次式（１）
   

   

   （式中、Ｒ ¹ は水素原子を示し、Ｒ ² は水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す）
   で表される化合物又はその塩を、１日に体重１ｋｇあたり０．００１〜１０００ｍｇ摂取するものである請求項１〜５のいずれか１項記載の抗酸化機能向上剤。
7. 次式（１）
   

   

   （式中、Ｒ ¹ は水素原子を示し、Ｒ ² は水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す)
   で表される化合物又はその塩を有効成分とするスーパーオキシドジスムターゼ活性増強剤。
8. 次式（１）
   

   

   （式中、Ｒ ¹ は水素原子を示し、Ｒ ² は水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す)
   で表される化合物又はその塩を有効成分とするグルタチオンペルオキシダーゼ活性増強剤。