JP5108334B2 - 抗ウイルス剤 - Google Patents

Description

本発明は抗ウイルス剤に関し、さらに詳しくは各種ウイルスの不活性化や防除に有効な新規な抗ウイルス剤に関する。

従来より、Ｂ型肝炎、ヘルペス、成人Ｔ細胞白血病、鳥インフルエンザ、エイズなどのウイルス性疾患が世界中で大きな問題となっている。上記ウイルスの非活性化や防除に有効な抗ウイルス性物質の研究は広く行われている。

第４級アンモニウム塩が抗ウイルス性を有することが知られている（例えば、特許文献１〜３）。特許文献１に記載の抗ウイルス剤は、プリン化合物をトリメチルアミンで処理して、第４級アンモニウム基を導入した化合物であり、特許文献２に記載の抗ウイルス剤は、第３級アミンおよび／または第４級アンモニウム塩とトリアルカノールアミンとの混合物であり、特許文献３に記載の抗ウイルス剤は、テトラエチルアンモニウム、ヘキサメトニウム、ペントリニウムなどである。
特開平４−１０８７８８号公報 特表２００５−５１４４２７号公報 米国特許第４，９０２，７２０号明細書

上記従来の抗ウイルス剤は、消毒や注射液として使用されるが、例えば、鳥インフルエンザの防疫用として消毒に使用される場合、水溶性に優れている点は使い易い薬剤であるものの、製造コストが高いとともに、その持続活性が十分とはいえないという課題がある。

従って本発明の目的は、水溶性に優れ、かつ高コストではなく、持続活性に優れた抗ウイルス剤を提供することにある。

上記目的は以下の本発明によって達成される。すなわち、本発明は、分子末端に２個のピリジン環またはキノリン環を有し、該ピリジン環またはキノリン環の窒素原子が第４級アンモニウム基となっている化合物を必須成分として含有することを特徴とする抗ウイルス剤を提供する。

本発明によれば、水溶性に優れ、かつ安価であり、持続活性に優れた抗ウイルス剤を提供することができる。

次に発明を実施するための最良の形態を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。
本発明の抗ウイルス剤の必須成分は、分子末端に２個のピリジン環またはキノリン環を有し、該ピリジン環またはキノリン環の窒素原子が第４級アンモニウム基となっている化合物である。好ましい上記化合物の１例としては、下記一般式（１）で表される化合物が挙げられる。

（但し、上記一般式において、Ｒ₁およびＲ₄は、炭素数１〜４の直鎖もしくは分岐の同一または異なるアルキレン基であり、Ｒ₂およびＲ₅は、水素原子、同一または異なるハロゲン原子、低級アルキル基または低級アルコキシ基であり、Ｒ₃は、炭素数２〜１２の直鎖もしくは分岐のアルキレン基であり、Ｒ₆は、炭素数１〜１８の直鎖もしくは分岐のアルキル基であり、Ｚは、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子もしくはＯＳＯ₂Ｒ₇基（Ｒ₇は、低級アルキル基もしくは置換あるいは無置換のフェニル基である。）

前記一般式（１）において、Ｒ₁およびＲ₄は、ピリジン環の３または４位置に結合しているメチレン基であり、Ｒ₂およびＲ₅は、水素原子であり、Ｒ₃は、テトラメチレン基であり、Ｒ₆は、オクチル基、デシル基およびドデシル基から選ばれる基であり、Ｚが塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子もしくはＯＳＯ₂Ｒ₇基（Ｒ₇は、低級アルキル基もしくは置換あるいは無置換のフェニル基である）である化合物が好ましい。

さらに好ましい前記一般式（１）で表される化合物は、下記式（１）〜（４）で表される少なくとも１種の化合物である。

以上の一般式（１）で表される化合物の製造方法および各種物性は、特開２００６−２２０２２号公報に詳細に記載されている。

本発明の抗ウイルス剤の必須成分として別の好ましい例としては、下記一般式（２）で表される化合物が挙げられる。

（式中、Ｚはピリジン環またはキノリン環を、Ｒ₃は炭素数２〜１８のアルキレン基あるいはアルケニレン基を、Ｒ₄はＺの窒素原子に結合した炭素数６〜１８のアルキル基を示し、いずれも置換基を含んでいてもよい。Ｒ₁およびＲ₂は同一または異なって、Ｚの窒素原子以外の原子に結合した炭素数１〜３のアルキル基、水酸基、アミノ基、炭素数１〜３のアルコキシ基あるいは水素原子を、Ｘはアニオンをそれぞれ示す。）

上記一般式（２）の化合物において、特に好ましい化合物は、Ｚが２−ピリジル基であり、Ｒ₁、Ｒ₂が、それぞれ水素原子であり、Ｒ₃が炭素数２〜１８のアルキレン基であり、Ｒ₄が炭素数６〜１８のアルキル基であり、Ｘが臭素である化合物である。

以上の一般式（２）で表される化合物の製造方法および各種物性は、特開平６−３２１９０２号公報に詳細に記載されている。

本発明の抗ウイルス剤の必須成分として別の好ましい例としては、下記一般式（３）で表される化合物が挙げられる。

（式中、Ｚはピリジン環または縮合ピリジン環を示し、Ｒ₁は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を示し、Ｒ₂は単結合、炭素数１〜８のアルキレン基または炭素数２〜８のアルケニレン基を示し、Ｒ₃はＺの環窒素原子に結合した炭素数１〜１８のアルキル基を示し、Ｒ₄およびＲ₅は同一または異なり、Ｚの環炭素原子に結合した炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、水酸基または水素原子を示し、Ｘはアニオンを示す。）

以上の一般式（３）で表される化合物の製造方法および各種物性は、特開平１０−２８７５６６号公報に詳細に記載されている。

本発明の抗ウイルス剤の必須成分として別の好ましい例としては、下記一般式（４）で表される化合物が挙げられる。

（上記式中、Ｐｙはピリジン環あるいは縮合ピリジン環を、Ｒ₁はＰｙの窒素原子に結合した炭素数６〜１８のアルキル基を示し、いずれも置換基を含んでもよい。Ｚは０または１を、ｍは１、２または３を、ｎは０、１または２を示し、Ｘ₂はアニオンを示す。）

以上の一般式（４）で表される化合物の製造方法および各種物性は、特開２００４−３４５９５３号公報に詳細に記載されている。

本発明の抗ウイルス剤の必須成分として別の好ましい例としては、下記一般式（５）で表される化合物が挙げられる。

（式中、Ｒ₁およびＲ₄は、炭素数１〜４の直鎖もしくは分岐のアルキレン基であり、Ｒ₂およびＲ₅は、水素原子、ハロゲン原子、低級アルキル基または低級アルコキシ基であり、Ｒ₃は、炭素数２〜１２の直鎖もしくは分岐のアルキレン基であり、Ｒ₆は、炭素数１〜１８の直鎖もしくは分岐のアルキル基であり、Ｚは、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子または式：ＯＳＯ₂Ｒ₇（Ｒ₇は、低級アルキル基または置換もしくは無置換のフェニル基である。）で示される有機基である。）

以上の一般式（５）で表される化合物の製造方法および各種物性は、特開２００６−１５１９４１号公報に詳細に記載されている。

本発明の抗ウイルス剤の必須成分として別の好ましい例としては、下記一般式（６）で表される化合物が挙げられる。

（式中、Ｒ₁およびＲ₄は、炭素数１〜４の直鎖もしくは分岐のアルキレン基であり、Ｒ₂およびＲ₅は、水素原子、ハロゲン原子、低級アルキル基または低級アルコキシ基であり、Ｒ₃は、炭素数２〜１２の直鎖もしくは分岐のアルキレン基であり、Ｒ₆は、炭素数１〜１８の直鎖もしくは分岐のアルキル基であり、Ｚは、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子または式：ＯＳＯ₂Ｒ₇（Ｒ₇は、低級アルキル基または置換もしくは無置換のフェニル基である。）で示される有機基である。）

以上の一般式（６）で表される化合物の製造方法および各種物性は、特開２００６−１５１９４２号公報に詳細に記載されている。

上記本発明の抗ウイルス性化合物は、通常水溶液または水乳化体として使用され、特に前記一般式（１）で表される化合物は、水溶性が高く任意の濃度で各種消毒に使用することができる。

次に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する。なお、以下において「％」は質量基準である。

実施例１
１．希釈液がインフルエンザウイルスの感染価に及ぼす影響
［実験方法］
〔試験ウイルス〕：インフルエンザウイルスＡ／ニューカレドニア／２０／９９（H1N1）
〔ウイルス希釈液〕：滅菌ミリＱ水、滅菌水道水、ＰＢＳ、リン酸緩衝液（ＰＢＳ組成から塩を除いたもの）

〔実験方法〕
（１）−８０℃で凍結保存しているウイルス原液（ＭＥＭ培地に懸濁）を各希釈液で希釈した後、室温で１時間放置した。
（２）各ウイルス希釈液０．１ｍｌをＭＤＣＫ細胞に接種し、５％ＣＯ₂の存在下に、３４℃で１時間培養し、ウイルスを細胞に吸着させる。このとき、ミリＱおよび水道水で希釈したウイルス液に関しては２×ＰＢＳと等容量混合した後、細胞に接種した。
（３）１時間培養後、ＭＥＭ寒天培地を重層し、５％ＣＯ₂の存在下に、３４℃で３日間培養した後、染色し、各ウイルスサンプルの感染価を算出した。

［実験結果］

滅菌ミリＱ水に関しては、ミリＱ水のみを細胞に接種し、３日間培養した場合でも、浸透圧により細胞が死んでしまったため、ウイルスの力価を測定する希釈液としては適切ではない。水道水、ＰＢＳ、リン酸緩衝液に関しては細胞自身には影響を及ぼさず、各ウイルス懸濁液は３０分間放置後も高いウイルス感染能を保持していた。この３種の希釈液の中でも最もウイルスが安定な状態で高い感染能を保持していたＰＢＳを以後の実験でウイルス懸濁液として使用し、試験サンプルのウイルス不活化効果を試験することにした。

２．試験サンプルのインフルエンザウイルス不活化試験
［実験方法］
〔試験ウイルス〕：インフルエンザウイルスＡ／ニューカレドニア／２０／９９（H1N1）
〔細胞〕：ＭＤＣＫ細胞（犬の腎臓由来）
〔試験サンプル〕：１，４−ビス（３，３’−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ）ブタンジブロマイド（下記式で表される化合物（商品名「ハイジェニア」、タマ化学工業（株）製、以下「３ＤＯＢＰ−４，１０」という）

〔試薬〕：
・Minimum Essential Medium(MOD) with Eagle's salts (ICN)
・カナマイシン硫酸塩（和光純薬）
・炭酸水素ナトリウム（和光純薬）
・Fetal Bovine Serum (Valley Biochemical Inc.)
・MEM Vitamin Solution (GIBCO)
・メチレンブルー（和光純薬）
・Noble Agar(BECTON DICKINSON)
・トリプシン（ナカライ）
・トリプシン−ＥＤＴＡ（デンカ生研）
・ＤＥＡＥ−デキストラン（Pharmacia）

〔実験方法〕
＜インフルエンザウイルス不活化試験法＞
（１）３ＤＯＢＰ−４，１０をＰＢＳで所定濃度に希釈する。
（２）１０⁵ＰＦＵ／ｍｌとなるようＰＢＳで調製したウイルス液１ｍｌと薬剤溶液１ｍｌを混合し、３０℃で３０分間振盪培養する。
（３）３０分後にウイルス液をサンプリングし、溶液中に含まれるウイルスの感染価を測定した。なお、ウイルスアッセイと平行して、３ＤＯＢＰ−４，１０濃度がＭＤＣＫ細胞に及ぼす影響についても検討した。

＜インフルエンザウイルスのプラークアッセイ法＞
（１）ＭＤＣＫ細胞を６穴プレートに３ｍｌずつ加え、５％のＣＯ₂の存在下に、３４℃で３日間培養した。
（２）フルシートになったＭＤＣＫ細胞から細胞上清を除き、細胞洗い用FBS free MEM （ＦＢＳにはインフルエンザウイルスの感染を制御するシアログリコプロテインが含まれるため）３ｍｌで２回洗浄した。
（３）ウイルスをwell当たり０．１ｍｌ接種し、５％のＣＯ₂インキュベーター内にて３４℃で１時間細胞に吸着させた。この間、１５分に１度はプレートを動かし、ウイルス液を細胞全体になじませた。

（４）５０℃に保温しておいた滅菌済み１．６％agar量の１％となるように２％のＤＥＡＥ−デキストランを０．２％となるように１μｇ／ｍｌトリプシン溶液を加え、３７℃で保温しておいた等容量の２×ＭＥＭと混合した。
（５）ウイルス吸着後の６穴プレートに、寒天培地を３ｍｌ／well重層し、固化するまで室温で放置し、固まったら裏返して、３４℃、５％ＣＯ₂インキュベーターで３日間培養した。
（６）３日間後、３．７％ホルマリン−ＰＢＳ（２ｍｌ／well）で１時間以上固定後、水流でAgarをはずし、メチレンブルー（２ｍｌ／well）で１時間以上染色した後、水洗し、裏返して自然乾燥した。
（７）翌日、プレートのプラーク数をカウントし、ＰＦＵを計算した。

［実験結果］

以上の結果より、１０〜５０ｐｐｍの３ＤＯＢＰ−４，１０でウイルスを処理した場合、３０分後には約５０％が感染能を失っていることが確認され、１００ｐｐｍの３ＤＯＢＰ−４，１０で３０分間処理した場合は、３ＤＯＢＰ−４，１０はほぼ完全にインフルエンザウイルスの感染を阻害した。

以上述べたように、本発明によれば、水溶性に優れ、かつ安価であり、持続活性に優れた抗ウイルス剤を提供することができる。

Claims (1)

1. 分子末端に２個のピリジン環またはキノリン環を有し、該ピリジン環またはキノリン環の窒素原子が第４級アンモニウム基となっている下記式で表される化合物を必須成分として含有することを特徴とする抗ウイルス剤。