JP5634397B2

JP5634397B2 - ｐ２７のプロテアソーム分解の阻害物質である、アルギリン及びその誘導体等の新規の大環状化合物の製造の中間体を製造する方法、並びに上記大環状化合物の使用

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Publication number: JP5634397B2
Application number: JP2011515193A
Authority: JP
Inventors: カレッセ，マルクス; マレク，ニザール; フランク，ロナルド; ブロドマン，トビアス; ビューロウ，レイラ; レンチュ，アンドレアス; ギルビッグ，アンナ‐カタリーナ; エッゲルト，ウルリケ
Original assignee: ヘルムホルツ−ツェントルムフュアインフェクツィオンスフォルシュンクゲーエムベーハー; メディツィニシェホッホシューレハノーヴァー; ゴットフリート・ヴィルヘルム・ライプニッツ・ウニヴェルジテート・ハノーヴァー
Priority date: 2008-06-23
Filing date: 2009-06-23
Publication date: 2014-12-03
Anticipated expiration: 2029-06-23
Also published as: US9458200B2; EP2303916A1; JP2011525512A; WO2010006682A1; EP2138507A1; AU2009270571A1; ATE557032T1; EP2303916B1; ES2391220T3; CA2729188C; AU2009270571B2; US20110311564A1; CA2729188A1

Description

本発明は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（癌等）といった様々な状態の治療のための、ｐ２７のプロテアソーム分解の阻害物質である特定の大環状化合物、特にアルギリン及びその誘導体の使用に関する。

サイクリンキナーゼ阻害物質ｐ２７^ｋｉｐ１の細胞レベルの低下は、多くのヒト癌において頻繁に見られ、患者の予後と直接相関している（非特許文献１）。具体的には、ユビキチン依存性プロテアソーム代謝回転が、多くのヒト癌においてｐ２７発現の低下を引き起こすことが示されている（非特許文献２）。

特許文献１はｐ２７タンパク質、及びｐ２７を培養細胞において産生させる方法を開示している。ｐ２７の活性に影響を及ぼす薬剤を発見するためのｉｎｖｉｔｒｏアッセイも提供されている。さらに、低増殖性障害を診断及び治療する方法が提供されている。

特許文献２の実施例８では、ｉｎｖｉｔｒｏでのＳｋｐ２とｐ２７との相互作用を同定するために使用されているアッセイが記載される。該アッセイは、細胞増殖を抑制する化合物を試験するために有用であると記載されている。該アッセイは分子、化合物、ペプチドの存在下又は非存在下で実行することができ、アッセイにより同定された上記分子は、癌及び増殖性障害に対する治療剤として潜在的に有用な薬物であると記載される。同定された特定の分子は記載されていない。

特許文献３は、薬学的に活性のある大環状化合物（「アルギリン」）、及び自己免疫疾患の治療、免疫寛容の誘導、又は細菌感染の治療に対するそれぞれの医薬品を開示している。

SasseF et al.は、アルギリンと呼ばれる環状ペプチド群の製造、及びその生物学的特性の幾つかを記載している（非特許文献３）。Vollbrecht et al.は、上記環状ペプチドの構造を記載している（非特許文献４）。

同様に、Ley et al.は、アルギリンＢの合成、及び抗体形成の阻害物質としてのその機能を記載している（非特許文献５）。

特許文献４は、特許文献３の大環状化合物を患者における癌の治療用の薬剤の製造に使用することを記載している。

したがって、アルギリン及び関連の大環状化合物は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（癌等）といった様々な状態における治療用の薬剤のさらなる開発にとって興味深い候補である。

しかしながら、アルギリン及びその関連誘導体の薬学的可能性を完全に活用することは、その比較的複雑な化学構造から困難であるため、（例えば微生物から）十分な量の化合物を単離するには大変な努力が必要とされ、研究及び治療に容易に利用可能である、有効なこのファミリーの化合物の数が制限される。

米国特許第６，３５５，７７４号国際公開第０２／０５５６６５号英国特許出願公開第２，３６７，５５３号欧州特許出願公開第０７００４１８５．０号

Philipp-Staheli, J., Payne, S.R. and Kemp, CJ. p27(Kip1): regulationand function of a haplo-insufficient tumour suppressor and its misregulation incancer. Exp Cell Res 264, 148-68 (2001) Loda, M. et al. Increased proteasome-dependent degradation of thecyclin dependent kinase inhibitor p27 in aggressive colorectal carcinomas. NatMed 3, 231-4 (1997) Sasse F, Steinmetz H, Schupp T, Petersen F, Memmert K, Hofmann H,Heusser C, Brinkmann V, von Matt P, Hofle G, Reichenbach H. Argyrins,immunosuppressive cyclic peptides from myxobacteria. I. Production, isolation,physico-chemical and biological properties. J Antibiot (Tokyo). 2002Jun;55(6):543-51. Vollbrecht L, Steinmetz H, Hofle G, Oberer, L, Rihs G, Bovermann G,and von Matt P. Argyrins, immunosuppressive cyclic peptides from myxobacteria.II. Structure elucidation and stereochemistry. J Antibiot (Tokyo). 2002Aug; 55(8):715-721. Ley SV, Priour A, Heusser C. Total synthesis of the cyclicheptapeptide Argyrin B: a new potent inhibitor of T-cell independent antibodyformation. Org Lett. 2002 Mar 7;4(5):711-4.

したがって、本発明の一目的は、アルギリンファミリーの化合物及びそれぞれの中間体を製造する改良された方法を提供することである。本発明のさらなる目的は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（癌等）といった様々な状態における治療のための治療剤として使用することができる、アルギリンファミリーの新たな成員をさらに提供することである。

本発明の第１の態様によると、上記の目的は、以下の一般式（Ｉ）：

（式中、
Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルコキシ、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_８アルキル、又はＯＲであり、ここで、Ｒは水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル、アリール又はアセチル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシから選択され、
Ｒ^４は水素、ハロゲン、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^５は水素又はハロゲン、又は非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_８アルキル、又はＯＲであり、
Ｒ^６は水素又はＣ_１〜Ｃ_４アルキルであり、
Ｒ^７は水素、又は非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
ＸはＣ＝ＣＨ_２又はＣＨＲ^８であり、ここで、Ｒ^８は非置換か又は−Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキルである）に従う大環状化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法であって、
上記合成が一般式（ＩＩ）：

（式中、Ｒ^２は独立して、水素、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシから選択される）を有するチアゾール要素から開始する合成を含む、方法によって解決される。

上記の方法において、Ｒ^１が水素でない場合、ＸがＣＨ_２であるのが好ましい。

本明細書に記載されるようなチアゾール要素を使用して合成を開始することによって、面倒な工程及び非常に高価な中間体を用いることなく、一般式（Ｉ）に従う大環状化合物を合成するより迅速かつ安価な方法が可能となる。より重要なことには、ＯＨ基（Ｒ^２に関する）が保護されたチアゾール誘導体の使用によって、誘導体、特に（例えば）アルギリンＦから誘導され、アルギリンＦよりも良好な活性を示す新たな誘導体の合成が可能となる。

本発明の第２の態様によると、上記の目的は、以下の一般式（Ｉ）：

式Ｉ

（式中、
Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルコキシ、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_８アルキル、又はＯＲであり、ここで、Ｒは水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル、アリール又はアセチル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシから選択され、
Ｒ^４は水素、ハロゲン、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^５は水素又はハロゲンであり、
Ｒ^６は水素又はＣ_１〜Ｃ_４アルキルであり、
Ｒ^７は水素、又は非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
ＸはＣ＝ＣＨ_２又はＣＨＲ^７であり、ここで、Ｒ^７は非置換か又は−Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキルである）に従う大環状化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法であって、
一般式（ＩＩＩ）：

（式中、
ＰＧはＢｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ等の保護基であり、
Ｒ^１は水素、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^６は水素又はＣ_１〜Ｃ_４アルキルであり、
ＸはＣ＝ＣＨ_２又はＣＨＲ^７であり、ここで、Ｒ^７は非置換か又は−Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキルである）のトリペプチド、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を合成すること、
これを続いて一般式（ＩＶ）：

（式中、
Ｒ^３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルコキシ、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_８アルキル、又はＯＲであり、ここで、Ｒは水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル、アリール又はアセチル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^４は水素、ハロゲン、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^５は水素又はハロゲンであり、
Ｒ^７は水素、又は非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシである）に従う化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩と融合させることを含む、方法によって解決される。

Ｒ^１が水素でない場合、ＸがＣＨ_２であるのが好ましい。

既知のアルギリン合成の特有の問題は、セレン含有アミノ酸の使用にある。セレンの使用に加えて、この経路は、アルギリンにおいてエキソメチレン基を確立するために最終的な酸化及び除去を必要とする。本発明による方法では、二重結合は合成の初期に確立される。アミノ酸のセリン及びアラニンの結合の後、ＣｕＣｌ及びＥＤＣでの処理によって二重結合を生成させることができる。続くペプチド結合によって式（ＩＩＩ）に従うトリペプチドが生じる。続いて、式（ＩＶ）に従う断片を用いて、本発明の大環状化合物（アルギリン等）への全体的な融合を行うことができる。

本発明による大環状化合物を製造する方法において、セレン含有アミノ酸を合成に使用しないのが好ましい。

さらに好ましくは、本発明による大環状化合物を製造する方法において、上記大環状化合物は、アルギリンＡ〜Ｆ、Ｂ／Ｆ、及びＡｌａ α及びＡｌａ β等のアルギリン、並びにその単離立体異性体から選択される。

本発明の別の態様は次に、本発明によって製造される、好ましくはアルギリン群から選択される大環状化合物に関する。

本発明のさらに別の態様は次に、本発明による大環状化合物を製造する方法であって、任意で保護された４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンを使用することを含み、上記任意で保護された４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンが、以下のスキーム：

に従う工程を含む立体選択的接触水素化経路を介して製造される、方法に関する。

これまで、４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンは、酵素的分割によってしか製造することができなかった（非特許文献５）。原則的に、得ることができる収率は５０％を超えることはない。実際、１０％〜４０％ほどの収率にしか到達しなかった。

さらに、本明細書中で開示される保護基の組み合わせ、及び最終的な酸性脱保護によってアルギリン、特にアルギリンＦが生じることが本発明の特有の特徴及び利点である。アルギリン、特にアルギリンＦに必要とされるｔ−ブチル（ｔＢｕ）保護基が、二重結合を損なうことなく最終的に脱保護され得ることは自明ではない。

本発明は、酵素的分割を用いずにアミノ酸４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンを製造する改良された方法、及びアルギリン等の大環状化合物を合成するための該生成物の使用も包含する。

上記のような本発明による大環状化合物又は４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンを製造する方法において、９０％を上回る合成収率が見られるのが好ましい。

さらに好ましくは、上記のような本発明による大環状化合物又は４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンを製造する方法において、酵素を使用せずに合成を行う。

したがって、本発明の別の態様は、本発明によって製造される、好ましくはアルギリン群から選択される４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンに関する。

本発明の別の態様によると、上記の目的は、以下の一般式（Ｉ）：

（式中、
Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルコキシ、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_８アルキル、又はＯＲであり、ここで、Ｒは水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル、アリール又はアセチル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシから選択され、
Ｒ^４は水素、ハロゲン、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^５は水素又はハロゲンであり、
Ｒ^６は水素又はＣ_１〜Ｃ_４アルキルであり、
Ｒ^７はプロトンとは異なり、
ＸはＣ＝ＣＨ_２又はＣＨＲ^７であり、ここで、Ｒ^７は非置換か又は−Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキルである）に従う大環状化合物よって解決される。

好ましくは、Ｒ^７は水素、又は非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
ＸはＣ＝ＣＨ_２又はＣＨＲ^７であり、ここで、Ｒ^７は非置換か又は−Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキルである。

以下の式（Ｖ）：

（式中、
Ｒ^１は水素、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^６は水素又はＣ_１〜Ｃ_４アルキルであり、
Ｒ^７は水素、又は非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
ＸはＣ＝ＣＨ_２又はＣＨＲ^７であり、ここで、Ｒ^７は非置換か又は−Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキルである）から選択される本発明による大環状化合物が好ましい。Ｒ^１が水素でない場合、ＸがＣＨ_２であるのが好ましい。

本発明者らの結果は、アルギリンＡｌａ βが、アルギリンＦよりも強いプロテアソームに対する阻害効果を、３つのプロテアソームサブユニット全てについて有することを示した。したがって、理論に束縛されることを望むものではないが、立体配置が重要であると思われる。アルギリンＡｌａ αは若干活性が低いことが見出された。その合成はアルギリンＦの合成と同様であり得る。しかしながら、この位置にアラニンを含むという概念は、それにより当業者が予見することができなかった構造変化が生じるため、全く自明ではない。一方、この変化はプロテアソームアッセイにおいて明らかに改善した活性をもたらす（下記実施例を参照されたい）。したがって、このようにアラニンを含むことが特に好ましい。

以下の式：

から選択される本発明による大環状化合物、及びその薬学的に許容可能な塩が特に好ましい。

さらに化学修飾された本発明による大環状化合物がさらに好ましい。より好ましくは、本発明による方法は、本発明による化合物の化学修飾をさらに含む。この場合、化合物は、さらに化学修飾を受ける、いわゆる「リード構造」として機能するが、これを次に１つ又は複数のその後の既知のスクリーニング方法において、ｐ２７の量及び／又は生物活性を増大するその効力についてスクリーニングする。

修飾は当該技術分野で既知の様々な方法により達成することができ、該方法としては、新規の側鎖の挿入又は官能基の交換、例えばハロゲン、特にＦ、Ｃｌ、又はＢｒの挿入、好ましくは１個〜５個の炭素原子を有する低級アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基若しくはイソペンチル基）、好ましくは２個〜５個の炭素原子を有する低級アルケニル基、好ましくは２個〜５個の炭素原子を有する低級アルキニル基の挿入、又は例えばＮＨ_２基、ＮＯ_２基、ＯＨ基、ＳＨ基、ＮＨ基、ＣＮ基、アリール基、ヘテロアリール基、ＣＯＨ基又はＣＯＯＨ基から成る群から選択される基の挿入が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、単一アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド等の付加的なペプチド基を分子に付加することができる。

本発明の別の態様は次に、患者における状態及び疾患の治療に使用される本発明による大環状化合物に関する。好ましくは、上記患者は哺乳動物、特にヒトである。

本発明のさらに別の態様は、本発明による化合物を、薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と共に製剤することを含む、医薬組成物を製造する方法に関する。例えば任意の従来の経路、特に経腸的に、例えば経口的に、例えば錠剤若しくはカプセルの形態で、非経口的に、例えば注射剤若しくは懸濁剤の形態で、局所的に、例えばローション剤、ジェル、軟膏、若しくはクリームの形態で、又は鼻腔内に、又は坐薬の形態で全身投与若しくは局所投与される医薬組成物を製剤するための担体、賦形剤及び戦略は、当業者に既知であり、それぞれの文献内に記載される。

薬剤、例えば化合物の投与は、薬剤を標的細胞に到達させる任意の方法により達成することができる。これらの方法には、例えば注射、付着（deposition）、注入、坐薬、経口摂取、吸入、局所投与、又は薬剤の標的細胞への接近が達成される任意の他の投与方法が含まれる。注射は、例えば静脈注射、皮内注射、皮下注射、筋肉内注射又は腹腔内注射であり得る。注入には、挿入植え込み型薬物送達システム、例えば、ミクロスフェア、ヒドロゲル、ポリマーリザーバ、コレステロールマトリクス、ポリマーシステム、例えば、マトリクス侵食及び／又は拡散システム、及び非ポリマーシステム、例えば、圧縮、融合、又は部分融合した丸薬が含まれる。坐薬はグリセリン坐薬を含む。経口摂取用量は腸溶コーティングすることができる。吸入は、吸入器内のエアロゾルを用いて薬剤を単独か、又は吸収することができる担体に結合させて投与することを含む。薬剤は、例えば溶解形態又はコロイド形態で液体中に懸濁することができる。液体は溶剤、不完全溶剤又は非溶剤であり得る。多くの場合、水又は有機液体を使用することができる。

本発明のさらに別の態様は次に、上記方法により製造される医薬組成物に関する。

本発明の別の態様は、患者における疾患又は状態を治療する方法であって、本発明による医薬品の有効量を、上記治療を必要とする患者に投与することを含む、方法に関する。好ましくは、上記疾患又は状態は免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染、並びに乾癬又は癌（乳癌、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸癌等）といった増殖性疾患から選択される。好ましくは、上記患者はヒトである。治療するとは、例えば疾患若しくは状態の症状を予防、治療、軽減すること、又は疾患若しくは状態を治癒することを含むことを意味する。

本発明はまた、上記疾患の危険がある患者を治療する方法であって、治療的に有効量の上記化合物を与える、方法を含む。疾患の危険がある状態は、例えば疾患の家族歴、疾患が生じやすくなる遺伝子型、又は疾患が生じやすくなる表現型症状に起因し得る。

本発明の別の態様は次に、本発明による患者を治療する方法であって、薬剤が、パクリタキセル、ボルテゾミブ、又は抗生物質等の抗菌剤といった薬学的に活性のある付加的な抗腫瘍成分をさらに含む、方法に関する。

本発明者らが実施したマウス予備実験は、アルギリンが０．０３ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で既に活性を有することを示す。したがって、本発明の別の態様は、本発明による化合物が、１日当たり最適には、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇの用量で、好ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの用量で、最も好ましくは０．０２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、本発明による使用に関する。別の例では、０．１５ｍｇ／ｋｇ体重の化合物が３日毎に腹腔内注射される。

本発明の或る特定の実施の形態では、投与は幾らかの期間、例えば数時間、数日、数週間、数ヶ月又は数年にわたる化合物への順次曝露をもたらすように設計され得る。これは、化合物の反復投与、例えば上記の方法の１つによって、又は代替的には、化合物を患者に反復投与せずに長期にわたって送達する放出制御送達システムによって達成することができる。放出制御送達システムとは、化合物の全放出が投与の直後ではなく、幾らかの時間遅れて起こることを意味する。放出は一気に起こり得るか、又は徐々にかつ継続的に起こり得る。このようなシステムの投与は、例えば長時間作用型経口投薬形態、ボーラス注射、経皮貼布又は皮下埋め込みによるものであり得る。放出が一気に起こるシステムの例としては、例えば化合物がポリマーマトリクス中に封入されたリポソームに捕捉され、該リポソームが特定の刺激、例えば温度、ｐＨ、光、磁場又は分解酵素に対して感受性が高いシステム、及び化合物がマイクロカプセルコア分解酵素でイオンコーティングしたマイクロカプセルにより封入されるシステムが挙げられる。化合物の放出が徐々にかつ継続的に起こるシステムの例としては、例えば化合物がマトリクス内にある形態で含有される浸食システム、及び化合物が制御速度で、例えばポリマーを介して浸透する拡散システムが挙げられる。かかる持続放出システムは、例えば丸薬又はカプセルの形態であり得る。

化合物は、疾患の症状が発現する前、又は発現に続いて投与され得る。或る特定の実施の形態では、化合物は、疾患の家族歴のある患者、又は疾患、例えば乳癌の素因を示し得る表現型を有する患者、又は疾患が患者に生じやすくなる遺伝子型を有すると診断された患者、又は他の危険因子を有する患者に投与される。

本発明による化合物は、患者に治療的に有効な量で投与される。治療的に有効な量とは、疾患若しくは状態を少なくとも部分的に予防するか、又は回復させることが可能な量を意味する。治療的に有効な量は個別的に決定することができ、かつ単回、複数回又は放出制御の投与計画のいずれが採用されるかにかかわらず、患者の種、患者のサイズ、患者の年齢、使用される特定の化合物の有効性、使用される特定の化合物の寿命、使用される送達システムの型、疾患の症状の発症に対する投与の時間の考慮に少なくとも一部基づく。当業者は、かかる因子を用い、単なる日常実験を使用して治療的に有効な量を求めることができる。

或る特定の好ましい実施の形態では、本発明による化合物の濃度は、１日当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重の用量、より好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの用量、最も好ましくは０．０２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの用量である。好ましくは、投薬形態は、患者に実質的に悪影響を及ぼさないようなものである。

また、本発明の化合物は任意の従来の経路、特に経腸的に、例えば経口的に、例えば錠剤若しくはカプセルの形態で、非経口的に、例えば注射剤若しくは懸濁剤の形態で、局所的に、例えばローション剤、ジェル、軟膏若しくはクリームの形態で、又は鼻腔内に、又は坐薬の形態で全身投与若しくは局所投与され得る。

本発明の別の態様は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染、並びに乾癬又は癌（乳癌、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸癌等）といった増殖性疾患から選択される疾患又は状態の治療のための本発明による化合物の使用である。本発明のさらに別の態様は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染、並びに乾癬又は癌（乳癌、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸癌等）といった増殖性疾患から選択される疾患又は状態の治療用の薬剤の製造のための本発明による化合物の使用である。

以下の図面、配列及び実施例は、単に本発明を説明するために用いられ、本発明の範囲を実施例に記載される本発明の特定の実施の形態に限定すると解釈されるべきではない。本発明において、本明細書中に引用される全ての参照文献は、その全体が参照により本明細書中に援用される。

アルギリンＡが２０Ｓプロテアソームの阻害によりｐ２７安定化を誘導することを示す図である。ａ）指定の細胞株をアルギリンＡで処理し、Ｇ１画分及びｓｕｂ−Ｇ１画分を、ヨウ化プロピジウム染色細胞のフローサイトメトリー分析により求めた。ＩＣ５０値を、種々の濃度のアルギリンＡを用いてＭＴＴ細胞増殖アッセイで求めた。ＩＣ５０値は、アルギリンＡが効果を発揮する最大半減濃度として算出した。ｂ）ＳＷ４８０細胞、ＨＣＴ１１６細胞及びＨｅＬａ細胞を、アルギリンＡで処理した後、ｐ２７^ｋｉｐ１の発現レベルをウエスタンブロットにより求めるために、細胞を指定の時点で溶解した。ｃ）ＳＷ４８０細胞及びＨｅＬａ細胞を１２時間アルギリンＡで処理するか、又は未処理のままにした後、シクロヘキシミドを２５μｇ／ｍＬの濃度で添加した。ｐ２７^ｋｉｐ１の発現レベルを、指定の時点でウエスタンブロットにより求め、内部対照として使用したアクチン発現に対して正規化した。グラフは、３つの独立実験の定量化を示す。ｄ）精製ヒト赤血球由来２０Ｓプロテアソームを、指定の量のアルギリンＡ又はボルテゾミブとインキュベートし、カスパーゼ、キモトリプシン及びトリプシン様プロテアソーム活性を、種々の触媒活性に特異的な蛍光発生ペプチド基質を用いて測定した。ｅ）ＳＷ４８０細胞株及びＨＣＴ１１６細胞株をアルギリンＡとインキュベートした。指定の時点で細胞を溶解し、ｐ５３、ｐ２１、Ｂａｘ、ＮｆκＢ及びアクチンの発現レベルをウエスタンブロットにより分析した。

当業者であれば、提供される戦略に基づいて他の本発明の誘導体を合成するために、以下の合成を容易に変更することができることが理解されよう。

１．４−メトキシ−Ｌ−トリプトファン（１０）の合成
（１０）の合成における根本的な問題を回避するために、効率的かつ経済的な新たな合成方法として立体選択的接触水素化を確立した。非常に良好な収率で合成することができる基質８を出発物質とした。

スキーム２断片８の合成

Knowleset al.によって開発されたキラルビホスフィンロジウム触媒を触媒とした。Ｒ，Ｒ−ＤＩＰＡＭＰを配位子として使用するが、これは必要に応じて［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］_２及びテトラフルオロホウ酸ナトリウムを用いた簡単な処方に従って触媒に変換することができた（参照文献２、３及び４）。

水素化を６バールのオートクレーブ内で行った。エナンチオ選択性及び絶対配置を、Ｃｂｚ脱保護に続くモッシャー法によって決定した。

６バール
ＭｅＯＨ中
室温
９６時間
スキーム３断片８の水素化

化合物９は、トリフルオロ酢酸によるＢｏｃ脱保護、及び０．５ＮのＬｉＯＨ水溶液（テトラヒドロフラン／水／メタノール中）によるメチルエステルの加水分解を用いた２段階の反応系列で、所望のＣｂｚ保護４−メトキシ−Ｌ−トリプトファン１０に、非常に良好な収率で変換することができた。

２段階
スキーム４Ｂｏｃ−脱保護に続くエステルの加水分解によって、Ｃｂｚ保護４−メトキシトリプトファン１０がもたらされる

この新たな反応系列を用いると、４−メトキシ−Ｌ−トリプトファン（１０）を決定的な最終工程において、収率９９％及び９０％ｅｅで得ることができる。また、鏡像体過剰率（ｅｅ）をその後の再結晶によって９５％超まで改善することができる。

アルデヒド６の合成
オキシ塩化リン（０．４７ｍＬ、５．１０ｍｍｏｌ）を、乾燥ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に０℃で滴下した。この温度で、乾燥ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中のメトキシインドール６（５００ｍｇ、３．４０ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加すると、鮮黄色の沈殿が形成された。反応混合物を４５℃に温め、２時間攪拌した。反応混合物を氷水（８ｍＬ）に注ぎ入れ、ジエチルエーテルで２回抽出して、エーテル抽出物を捨てた。次いで、水層を水酸化ナトリウム水溶液で溶液が塩基性となるまで処理して、ジエチルエーテルで抽出した。有機抽出物を塩水で洗い、乾燥させて（ＭｇＳＯ_４）、減圧下で濃縮し、粗生成物を淡黄色の結晶性固体として得た（４４０ｍｇ、２．５１ｍｍｏｌ、７４％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１０．５０（ｓ，１Ｈ）、９．０６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、７．９３（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．２２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．０９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．７３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．０１（ｓ，３Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１８８．６、１５４．６、１３７．６、１２８．１、１２４．３、１１９．６、１１６．１、１０５．１、１０２．５、５５．４。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_１０Ｈ_１０ＮＯ_２（［Ｍ］^＋）に対する計算値：１７６．０７１２、実測値：１７６．０７０８。

アルデヒド７の合成
メトキシインドール−３−カルバルデヒド６（４４０ｍｇ、２．５１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（６ｍＬ）中に溶解し、室温でＤＭＡＰ（３１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（６６０ｍｇ、３．０２ｍｍｏｌ）で処理した。１持間攪拌した後、１ＮのＫＨＳＯ_４溶液（４．４ｍＬ）を添加して、ジクロロメタンを蒸発させた。水層を数回に分けた（several portions of）ジエチルエーテルで抽出し、合わせた有機抽出物を１ＮのＫＨＳＯ_４、水、１ＮのＮａＨＣＯ_３及び塩水で洗った。有機層を乾燥させて（ＭｇＳＯ_４）、減圧下で濃縮し、アルデヒド７（６０５ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ、８７％）を白色の固体として得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１０．５５（ｓ，１Ｈ）、８．２３（ｓ，１Ｈ）、７．８４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．３２（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．８１（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．００（ｓ，３Ｈ）、１．６７（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１８９．１、１５４．１、１４９．０、１３７．１、１２８．７、１２６．１、１２１．４、１１７．２、１０８．６、１０４．５、８５．４、５５．５、２８．０。
ＨＲＭＳ（ＥＩ）Ｃ_１５Ｈ_１７ＮＯ_４（［Ｍ］^＋）に対する計算値：２７５．１１５８、実測値：２７５．１１５９。

デヒドロアミノ酸８の合成
ホスホン酸塩９（２１７ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（０．６ｍＬ）に、ＤＢＵ（０．０９ｍＬ、０．６０ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間攪拌した後、ジクロロメタン（０．６ｍＬ）中のアルデヒド８（１５０ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。反応混合物を５時間攪拌した後、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣を酢酸エチル（１８ｍＬ）中に溶解した後、有機溶液を１ＮのＨＣｌ（２×５ｍＬ）及び塩水で洗い、乾燥させて（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン：１／５）によって精製して、黄色の固体（１９１ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、７３％）を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝８．３２（ｓ，１Ｈ）、７．９３（ｓ，１Ｈ）、７．７７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．４０〜７．３０（ｍ，５Ｈ）、７．２８〜７．２４（ｍ，１Ｈ）、６．７３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．１４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、５．２０（ｓ，２Ｈ）、３．９６（ｓ，３Ｈ）、３．８３（ｓ，３Ｈ）、１．６３（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１５４．７、１３６．５、１３６．２、１２８．７、１２８．３、１２８．２、１２７．９、１２６．５、１２６．０、１１４．２、１０８．４、１０４．４、８４．７、６７．６、５５．６、５２．６、２８．２。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_２６Ｈ_２８Ｎ_２Ｏ_７Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）に対する計算値：５０３．１７９４、実測値：５０３．１７６０。

ロジウム触媒シクロオクタジエン−１，５−［（Ｒ，Ｒ）−ＤＩＰＡＭＰ］ロジウムテトラフルオロボレートの合成
ビス（シクロオクタジエン−１，５）ジクロロジロジウム［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］_２（９７ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を、メタノール（１．５ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）中の（Ｒ，Ｒ）−ＤＩＰＡＭＰ（１８０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。スラリーは橙色となり、１時間攪拌して赤橙色の溶液を得た。混合物（complex）を、テトラフルオロホウ酸ナトリウム（６５ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の水溶液（０．５ｍＬ）を３０分かけてゆっくりと添加することによって沈殿させた。室温で２．５時間攪拌した後、微結晶を濾過して、少量の水で２回洗い、高真空で乾燥させた。２１０ｍｇ（７１％）の触媒シクロオクタジエン−１，５−［（Ｒ，Ｒ）−ＤＩＰＡＭＰ］ロジウムテトラフルオロボレートが得られた。この触媒をさらに精製することなく使用した。

デヒドロアミノ酸８の水素化
オートクレーブに、触媒シクロオクタジエン−１，５−［（Ｒ，Ｒ）−ＤＩＰＡＭＰ］ロジウムテトラフルオロボレート（２９ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）、デヒドロアミノ酸８（５００ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）及びメタノール（２０ｍＬ）を充填した。３回の真空／水素サイクルの後、オートクレーブを６バールの初期圧力に加圧した。反応を４日間進行させた。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製し、トリプトファン９（４９７ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、９９％、９０％ｅｅ）を無色の油として得た。

Ｒ_ｆ＝０．１７（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン１：３）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．７８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３８〜７．１９（ｍ，７Ｈ）、６．６６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．７７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．０４（ｓ，２Ｈ）、４．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．９２（ｓ，３Ｈ）、３．７３（ｓ，３Ｈ）、３．４３〜３．３３（ｍ，１Ｈ）、３．１９（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，８．９Ｈｚ，１Ｈ）、１．６５（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７２．８、１５６．０、１５３．７、１４９．６、１３７．２、１３６．５、１２８．６、１２８．１、１２８．０、１２７．８、１２５．５、１２３．５、１１９．７、１１５．４、１０８．７、８３．８、６６．８、５５．６、５５．３、５２．３、２９．３、２８．３。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_２６Ｈ_３１Ｎ_２Ｏ_７（［Ｍ］^＋）に対する計算値：４８３．２１３１、実測値：４８３．２１３３。

モッシャーアミド１１の合成

モッシャークロリド

パラジウム炭（１００ｍｇ、１０重量％）を、Ｎ^α−Ｃｂｚ−Ｎ^Ｉｎｄ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ−ＯＭｅ８（２０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１ｍｌ）に添加した。反応混合物を水素で３回パージして、室温で１２時間攪拌した。懸濁液をセライト（登録商標）のプラグを通して濾過して、メタノール（２×３ｍＬ）で洗い、濃縮した。このアミンを直接次の工程に使用した。

アミン（５ｍｇ、１４μｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１ｍＬ）に、室温でトリエチルアミン（１６μＬ、１１５μｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３．２ｍｇ、２６μｍｏｌ）、（Ｓ）−モッシャークロリド（１１μＬ、５８μｍｏｌ）を続けて添加した。混合物を室温で３時間攪拌し、酢酸エチル（１０ｍＬ）でクエンチした。混合物を飽和ＮａＨＳＯ_４水溶液（５ｍＬ）、１ＮのＮａＯＨ（５ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２×５ｍＬ）で続けて洗った。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、対応するモッシャーエステル１１（８ｍｇ、１４μｍｏｌ、９６％）を得た。

Ｒ_ｆ＝０．１８（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン１：３）。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．７９（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０〜７．５３（ｍ，２Ｈ）、７．４３〜７．３６（ｍ，３Ｈ）、７．３３（ｓ，１Ｈ）、７．２５〜７．２１（ｍ，１Ｈ）、６．６７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８〜４．７０（ｍ，１Ｈ）、３．７７（ｓ，３Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、３．４３〜３．３５（ｍ，１Ｈ）、３．２８（ｄｄ，Ｊ＝１４．３、９．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．９２（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，３Ｈ）、１．６６（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７１．８、１６６．９、１５３．５、１４９．５、１３３．０、１２９．７、１２９．６、１２８．６、１２８．３、１２８．２、１２５．６、１２５．２、１２３．６、１１９．６、１１５．３、１０８．９、１０３．３、８４．０、７７．４、５５．２、５４．９、５２．４、２８．３、２８．０。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_２８Ｈ_３１Ｎ_２Ｏ_７Ｆ_３Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）に対する計算値：５８７．１９８１、実測値：５８７．１９８２。

Ｃｂｚ保護メトキシトリプトファン１０の合成
トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を、メトキシトリプトファン９（９５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４ｍＬ）に０℃で滴下した。反応混合物を室温で３．５時間攪拌した。溶液をトルエン（３×５ｍＬ）との同時蒸発によって濃縮し、得られた脱保護トリプトファンを直接次の工程に使用した。

０．５ＮのＬｉＯＨ水溶液（０．８ｍＬ、０．４ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／メタノール／水（７ｍＬ：１．３ｍＬ：４ｍＬ）中の脱保護トリプトファンの溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、２時間攪拌した。溶液を０．１ＮのＨＣｌ水溶液（１５ｍＬ）とジクロロメタン（１５ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×１５ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（１％から５％へのメタノール勾配を有するジクロロメタン）によって精製し、５１ｍｇのＣｂｚ保護メトキシトリプトファン１０を白色の固体として得た（０．１４ｍｍｏｌ、７０％、２段階）。

Ｒ_ｆ＝０．２７（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン３：１、１％の酢酸を含む）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、［Ｄ６］ＤＭＳＯ、６０℃）：δ＝１０．７５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４〜７．３４（ｍ，５Ｈ）、６．９〜７．２（ｍ，３Ｈ）、６．４４（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ）、４．９５（ｍ，２Ｈ）、４．３０（ｍ，１Ｈ）、３．８３（ｓ，３Ｈ）、３．３５（ｄｄ，Ｊ＝１４，４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９５（ｄｄ，Ｊ＝１４，１０Ｈｚ，１Ｈ）。

２．アルギリンの固相合成において使用されるＦｍｏｃ保護アミノ酸（３１及び３２）の合成。
固相ペプチド合成は、自動化された迅速かつ効率的なペプチドの集合を可能にする技法である。それに使用される最も一般的な保護基戦略は、塩基性条件下で窒素保護基を除去するＦｍｏｃ戦略である。本発明においては、重要なアミノ酸（メトキシトリプトファン及びチアゾール含有アミノ酸）をそのＦｍｏｃ誘導体として集合させる合成を記載する。これらの合成において特に問題であったのは、ａ）公開済みの経路と比べて、特にチアゾールアミノ酸について異なる合成経路及び戦略を必要とする、Ｆｍｏｃ基の塩基不安定性、並びにｂ）キラル中心のエピマー化を防止する経路の開発である。後者は特にチアゾールアミノ酸にとって難題であった。

２段階で８８％
分子量

トリプトファンアミノ酸の合成では、本発明のＢｏｃ保護アミノ酸の合成に使用した中間体３２を使用した。Ｂｏｃ保護基の除去によって化合物３３を構築し、これを鹸化してアミノ酸３４を得た。水素化分解の後、αアミノ部分を保護して、固相合成に必要とされるＦｍｏｃ保護アミノ酸を得た。

チアゾール部分含有アミノ酸の合成は、シスチン（３７）を用いて開始され、ベンジルアルコールでの処理及び（und）酸性条件によってベンジルエステル３８が生じる。ジスルフィド結合はＤＴＴで切断することができ、ｔ−ブチル保護セリンは標準条件下で結合する。有意なエピマー化を引き起こし得る重要な閉環は、ＴｆＯ_２及びＯ＝ＰＰｈ_３を用いて行うことができ、チアゾリン４１が収率７６％で、検出可能なエピマー化なく（ｅｅ＞９０％）生じる。芳香族化はＭｎＯ_２を用いて達成され、最終的な水素化によってＦｍｏｃ保護アミノ酸３２が生じる。

Ｆｍｏｃ保護断片の合成

分子量

Ｃｂｚ保護メトキシトリプトファン３５（３６８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１０％、５０ｍｇ）のＭｅＯＨ溶液を、３時間水素化した。混合物を濾過して、蒸発させた。ジオキサン（５ｍＬ）及びＮａ_２ＣＯ_３水溶液（１０％、１０ｍＬ）中の粗酸を、Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（２５９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を０℃で２時間攪拌した。次いで、水（１００ｍＬ）を添加し、水層をＭＴＢＥで洗った。水層をＨＣｌ（１Ｍ）で酸性化し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。有機相を乾燥させて（ＭｇＳＯ_４）、溶媒を除去し、Ｆｍｏｃ保護メトキシトリプトファン３１（４０２ｍｇ、８８％）を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝１２．５０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、１０．８１（ｓ，１Ｈ）、７．８７（ｄ，Ｊ＝７．８５Ｈｚ，２Ｈ）、７．６５（ｄ，Ｊ＝７．５１Ｈｚ，１Ｈ）、７．６１（ｄ，Ｊ＝７．５１Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝８．１９Ｈｚ，１Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝７．１７Ｈｚ，１Ｈ）、７．３８（ｄ，Ｊ＝７．１７Ｈｚ，１Ｈ）、７．３１（ｔ，Ｊ＝７．５１Ｈｚ，１Ｈ）、７．２５（ｔ，Ｊ＝７．５１Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｓ，１Ｈ）、７．００〜６．９０（ｍ，２Ｈ）、６．４５（ｄ，Ｊ＝７．１７Ｈｚ，１Ｈ）、４．２９（ｍ，１Ｈ）、４．１８（ｍ，３Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、３．００（ｍ，１Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ＝１５５．８、１５４．０、１４３．９、１４３．８、１４０．７、１３７．８、１２８．９、１２８．３、１２７．６、１２７．５、１２７．３、１２７．１、１２５．２、１２２．５、１２１．７、１２１．４、１２０．１、１１６．９、１１０．７、１０９．８、１０５．０、９８．８、６６．４、５５．９、５５．０、４８．６、４６．６。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_２７Ｈ_２５Ｎ_２Ｏ_５（［Ｍ］^＋）の要求値（requires）：４５７．１７６３、実測値：４５７．１７６９。

分子量
文献：JACS2005, 12263 (Allylester)

ディーン・スターク分離器を備えた丸底フラスコに、ベンゼン（５００ｍＬ）中のＬ−シスチン（２０ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（１００ｍＬ、２４９．６ｍｍｏｌ）及びｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ_２Ｏ（６３．３ｇ、８３．２ｍｍｏｌ）を充填した。混合物を理論量（calculated amount）の水が分離されるまで（３時間〜５時間）加熱還流した。室温に冷却した後、沈殿した生成物を吸引濾過して酢酸エチルで洗い、乾燥させて、３８（６０ｇ、９４％）を得た。

３８−ＴｓＯＨの^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．４０〜７．３０（ｍ，１０Ｈ）、５．１５（ｓ，４Ｈ）、３．８５（ｄｄ，Ｊ＝７．９，４．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．１３（ｄｄ，Ｊ＝１３．７，４．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．９２（ｄｄ，Ｊ＝１３．７，７．５Ｈｚ，２Ｈ）、２．０９（ｂｒ．ｓ，４Ｈ）。

分子量

丸底フラスコにＣＨ_２Ｃｌ_２（８００ｍＬ）中のベンジルエステル３８（７６．５ｇ、１００ｍｍｏｌ）を充填し、蒸発させ、窒素を数回再充填した。ジチオスレイトール（３８．６ｇ、２５０ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ_３（３５ｍＬ、２５０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１時間攪拌した。有機層を水（３×）で洗い、乾燥させた（ＭｇＳＯ_４）。溶媒を除去して、残渣をジエチルエーテル中に溶解した。ＨＣｌ−ジエチルエーテル溶液を添加することによって塩酸塩を沈殿させた。濾過した後、粗生成物を酢酸エチルからの結晶化によって精製し、３９（４４．６ｇ、９０％）を得た。

３９−ＨＣｌの^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．４０〜７．３０（ｍ，５Ｈ）、５．２０（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．１５（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．６９（ｄｄ，Ｊ＝５．５，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、２．８８（ｄｄ，Ｊ＝１３．７，５．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．８３（ｄｄ，Ｊ＝１３．５，４．３Ｈｚ，２Ｈ）、１．７５（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）。

分子量

システインエステル塩酸塩（３．１０ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（３．８３ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（５０ｍＬ）に、ＨＯＢｔ（２．０３ｇ、１５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（２．８８ｇ、１５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２．２ｍＬ、１２．５ｍｍｏｌ）を続けて添加した。混合物を１６時間攪拌した後、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を添加した。有機層を水（２×）で洗い、乾燥させて（ＭｇＳＯ_４）、蒸発させた。粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ）によって精製し、４０（４．０５ｇ、７０％）を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．７７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）、７．６０（ｄｄ，Ｊ＝７．５，２．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．５６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、７．４０（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ）、７．３５（ｓ，５Ｈ）、７．３２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）、５．７５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、５．２６（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．２０（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．９１（ｄｔ，Ｊ＝７．５，３．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．４０（ｍ，２Ｈ）、４．３０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、４．２４（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．８３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、３．４３（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．０９〜２．９６（ｍ，２Ｈ）、１．２３（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７１．４、１７０．０、１６９．５、１５６．０、１４３．７、１４１．３（２Ｃ）、１３５．０、１２８．７（２Ｃ）、１２８．４、１２７．７、１２７．１、１２５．１、１２０．０、７５．８、７４．４、６７．６、６７．３、６７．２、６５．３、６４．４、６１．６、５４．７、５３．９、４７．１、４０．２、３２．６、３０．９、３０．４、２７．９、２６．７。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_３２Ｈ_３６Ｎ_２Ｏ_６ＮａＳ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）の要求値：５９９．２１９２、実測値：５９９．２１９２。

分子量

ＰＰｈ_３ＰＯ（１．０８５ｇ、３．９ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（１０ｍＬ）に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（０．３２ｍＬ、１．９５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を０℃で１０分間攪拌した後、−２０℃まで冷却した。ジペプチド（７５０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（３ｍＬ）を添加した。混合物を３０分間攪拌した後、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液を添加することによってクエンチした。有機層を水（２×）で洗い、乾燥させて（ＭｇＳＯ_４）、蒸発させた。粗生成物をクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２／アセトン、９８：２）によって精製し、４１（５５５ｍｇ、７６％）を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．７７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）、７．６２（ｍ，３Ｈ）、７．４０（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ）、７．４４〜７．２８（ｍ，９Ｈ）、５．８２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．２９〜５．１２（ｍ，３Ｈ）、４．７３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、４．４５（ｄｄ，Ｊ＝９．６，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．３５（ｍ，１Ｈ）、４．２６（ｍ，１Ｈ）、３．７６（ｍ，１Ｈ）、３．６６〜３．４６（ｍ，３Ｈ）、１．１６（ｓ，９Ｈ）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_３２Ｈ_３４Ｎ_２Ｏ_５ＮａＳ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）の要求値：５８１．２０８６、実測値：５８１．２０８９。

分子量

チアゾリン（５１９ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（９．３ｍＬ）に、ＭｎＯ_２（１．６１ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間攪拌した。セライトを通して濾過した後、粗生成物をクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２／アセトン、９７：３）によって精製し、チアゾール（３５２ｍｇ、６８％）を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝８．１０（ｓ，１Ｈ）、７．７６（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）、７．６２（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）、７．５０〜７．２７（ｍ，９Ｈ）、５．９５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、５．４０（ｍ，２Ｈ）、５．２１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、４．５５〜４．３７（ｍ，２Ｈ）、４．２５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、３．９０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、３．６９（ｄｄ，Ｊ＝８．５，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、１．１２（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７２．１、１６１．１、１５８．８、１４６．５、１４３．８、１４１．３、１３５．７、１２８．６、１２８．４（２Ｃ）、１２７．９、１２７．７、１２７．０、１２５．０、１２０．０、７７．２、７３．９、６７．１、６６．９、６３．５、５４．０、４７．２、２７．３。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_３２Ｈ_３２Ｎ_２Ｏ_５ＮａＳ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）の要求値：５７９．１９３０、実測値：５７９．１９０９。

分子量

ＴＨＦ（２ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２ｍＬ）中のチアゾール（１５１ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣＯ_２ＮＨ_４（８１ｍｇ、０．３ｇ／ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１０％、８１ｍｇ、０．３ｇ／ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で８時間攪拌した。セライトを通して濾過した後、粗生成物をクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ、９：１）によって精製し、酸（９０、７１％）を得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝８．１０（ｓ，１Ｈ）、７．７６（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）、７．６２（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）、７．５０〜７．２７（ｍ，９Ｈ）、５．９５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、５．４０（ｍ，２Ｈ）、５．２１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、４．５５〜４．３７（ｍ，２Ｈ）、４．２５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、３．９０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、３．６９（ｄｄ，Ｊ＝８．５，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、１．１２（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７２．１、１６１．１、１５８．８、１４６．５、１４３．８、１４１．３、１３５．７、１２８．６、１２８．４（２ｘ）、１２７．９、１２７．７、１２７．０、１２５．０、１２０．０、７７．２、７３．９、６７．１、６６．９、６３．５、５４．０、４７．２、２７．３。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_３２Ｈ_３２Ｎ_２Ｏ_５ＮａＳ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）の要求値：４８９．１４６０、実測値：４８９．１４６５。

３．アルギリン及びそれぞれの誘導体の合成
本発明による新たな経路においては、二重結合を合成の初期に確立させる。アミノ酸Ｄ−アラニン及びＤ／Ｌ−セリンの結合の後、デヒドロアラニン単位を組み込む。ＣｕＣｌ及びＥＤＣでの処理によってジペプチド２０が高収率で得られ、これをエチルサルコシンとの結合の後、トリペプチド１４に変換することができる。

アルギリンＡ（２）
アルギリンＦ（３）
誘導体

断片１２は、Leyによる文献から既知の手順に従って合成される。本発明の４−メトキシトリプトファンへの効率的かつ経済的な新たな合成方法は、数グラム規模の合成を可能とする。Ｌ−トリプトファン及びグリシン又はアラニンとのペプチドの結合によって、トリペプチド１５〜１７が得られた（accessed）。

３．１断片（１２〜１７）の合成
３．１．１断片１４の合成

０℃から室温へ

Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ（１９）

１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．３０ｇ、９．６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１．６６ｇ、８．７ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１．２１ｍＬ、７．１ｍｍｏｌ）を、Ｄ／Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ・ＨＣｌ（１．００ｇ、６．４ｍｍｏｌ）及びＢｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ（１．４６ｇ、７．７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン懸濁液（５ｍＬ）に０℃、アルゴン下で続けて添加した。反応混合物を室温に温め、４時間攪拌した。溶液を１ＮのＫＨＳＯ_４水溶液（１０ｍＬ）とジクロロメタン（１０ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液で洗い、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。減圧下で溶媒を除去し、続いてカラムクロマトグラフィー（３％から５％へのメタノール勾配を有するジクロロメタン）によって精製することで、１９が無色の粘性固体として得られた（１．０５ｇ、３．６ｍｍｏｌ、５６％）。

Ｒ_ｆ＝０．２８（酢酸エチル）
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．２５〜７．１７（ｍ，１Ｈ）、５．４３〜５．２３（ｍ，１Ｈ）、４．６９〜４．５５（ｍ，１Ｈ）、４．２５〜４．１３（ｍ，１Ｈ）、３．９８〜３．８９（ｍ，２Ｈ）、３．７６（ｓ，３Ｈ）、１．４４〜１．４０（ｍ，９Ｈ）、１．３６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_１２Ｈ_２２Ｎ_２Ｏ_６（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）に対する計算値：３１３．１３７６、ｆ実測値：３１３．１３７６。

Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−ＤＨＡ−ＯＭｅ（２０）

ＣｕＣｌ（３１ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（１．１９ｇ、６．１８ｍｍｏｌ）を、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ１９（８９７ｍｇ、３．０９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４０ｍＬ）に室温、アルゴン下で添加した。反応混合物を１６時間攪拌し、セライト（登録商標）を通して濾過し、塩水で洗った。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。減圧下で溶媒を除去し、続いてカラムクロマトグラフィー（３％のメタノールを含むジクロロメタン）によって精製することで、２０が黄色の固体として得られた（８０８ｍｇ、２．９７ｍｍｏｌ、９６％）。

Ｒ_ｆ＝０．５７（４％のメタノールを含むジクロロメタン）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝８．４５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、６．５７（ｓ，１Ｈ）、５．８８（ｍ，１Ｈ）、５．１１〜５．０１（ｍ，１Ｈ）、４．３１〜４．１８（ｍ，１Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、１．４３（ｓ，９Ｈ）、１．３８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７１．６８、１６４．３６、１５５．５８、１３０．９６、１０９．３２、８０．５６、５３．０４、５１．０４、２８．３７、１８．０５。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_１２Ｈ_２０Ｎ_２Ｏ_５Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）に対する計算値：２９５．１２７０、実測値：２９５．１２７３。

Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−ＤＨＡ−Ｓａｒ−ＯＥｔ（１４）

０．５ＮのＬｉＯＨ水溶液（１．０４ｍＬ、０．５２ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／メタノール／水（４ｍＬ：１ｍＬ：２ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−ＤＨＡ−Ｓａｒ−ＯＥｔ（２０）（１２９ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で滴下した。反応混合物を室温に温め、２時間攪拌した。溶液を０．１ＮのＫＨＳＯ_４（１０ｍＬ）とジクロロメタン（１０ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させて、溶媒を減圧下で除去した。

残渣のジクロロメタン溶液（５ｍＬ）に０℃、アルゴン下で、ＨＣｌ−Ｓａｒ−ＯＥｔ（１０９ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｒｏＰ（３３１ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を続けて添加し、ジイソプロピルエチルアミン（２４．３μＬ、１．４２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温に温め、１９時間攪拌した。溶液を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）とジクロロメタン（１０ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を除去し、続いてカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）によって精製することで、１４が無色の粘性固体として得られた（１２４ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、７４％）。

Ｒ_ｆ＝０．３８（酢酸エチル）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝８．３４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、６．１０〜５．５８（ｍ，１Ｈ）、５．２３〜４．８６（ｍ，２Ｈ）、４．２９〜４．０９（ｍ，５Ｈ）、３．２８〜２．９２（ｍ，３Ｈ）、１．４３（ｓ，９Ｈ）、１．３６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）、１．２７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７１．７、１６８．９、１６８．０、１５５．７、１３４．６、１０５．０、８０．５、６１．５、５０．６、４９．５、３９．０、２８．４、１８．２、１４．３ｐｐｍ。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_１６Ｈ_２７Ｎ_３Ｏ_６Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）に対する計算値：３８０．１７８９、実測値：３８０．１７８９。

３．１．２チアゾール１３の合成

チオアミド２２
ＤＣＣ（５９ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を、Ｎ−Ｂｏｃ−（Ｏ−ｔＢｕ）−Ｄ−セリン（１００ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３１ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン懸濁液（３ｍＬ）に０℃で添加した。溶液を室温に温め、１時間攪拌した。溶液を０℃まで冷却し、アンモニア（０．０６ｍＬ）のジクロロメタン溶液（０．３ｍＬ）を添加した。反応混合物を０℃で１時間攪拌した後、濾過した。母液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／アセトン、４：１）によって精製して、アミドを白色の固体として得た（４１ｍｇ、７０％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝６．５９（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．０７（ｂｒｓ，１Ｈ）、５．４３（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．１９〜４．０４（ｍ，１Ｈ）、３．７７〜３．６７（ｍ，１Ｈ）、３．３４（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．４０（ｓ，９Ｈ）、１．１５（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７３．４、１５５．４、７９．８、７３．９、６１．７、５４．０、２８．２、２７．３。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_１４Ｈ_２７Ｎ_３Ｏ_４Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ＋ＣＨ_３ＣＮ］^＋）に対する計算値：３２４．１８９９、実測値：３２４．１８９５。

ベロー試薬（Belleau's reagent）（５．３ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）を、アミド（４．４ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（２５０ｍＬ）に０℃で添加した。溶液を室温に温め、９０分間攪拌し、氷水（２５０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２５０ｍＬ）とに分配した。これをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３×２５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせて塩水（２５０ｍＬ）で洗い、乾燥させて（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル、５：１）によって精製し、チオアミド２２を無色の油として得た（３．８ｇ、８２％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．９３（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．５３（ｂｒｓ，１Ｈ）、５．６５（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．４０（ｄｔ，Ｊ＝６．８，３．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．８，３．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．４４（ｂｒｓ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．１７（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝２０７．０、１５５．１、８０．３、７４．１、６３．９、５９．６、２８．３、２７．４。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_１２Ｈ_２４Ｎ_２Ｏ_３Ｓ（［Ｍ］^＋）に対する計算値：２７６．１５０８、実測値：２７６．１５０６。

チアゾール１３
ブロモピルビン酸エチル（４．５ｍＬ、３７．９ｍｍｏｌ）を、ＫＨＣＯ_３（１０．３ｇ、１０２．９ｍｍｏｌ）及びチオアミド２２（３．６ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）の懸濁液（１，２−ジメトキシエタン（３０ｍＬ）中、−１５℃で５分間攪拌した）に添加した。１分後、混合物を−１５℃で、２，６−ルチジン（１２．７ｍＬ、１０９．１ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸無水物（２．７ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の１，２−ジメトキシエタン溶液（２０ｍＬ）で処理した。反応混合物を同じ温度で３時間攪拌し、水（９０ｍＬ）に注ぎ入れ、ジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、乾燥させて（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／酢酸エチル、８：１）によって精製し、チアゾール１３を黄色の固体として得た（３．７ｇ、７７％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝８．０６（ｓ，１Ｈ）、５．６７（ｂｒｓ，１Ｈ）、５．１０（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．４１〜４．２６（ｍ，２Ｈ）、３．８８〜３．８５（ｍ，１Ｈ）、３．６９〜３．６１（ｍ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．３７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）、１．０７（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１６１．４、１５５．２、１４６．８、１２７．４、８０．２、７３．８、６３．５、６１．３、５５．１、５３．６、２８．３、２７．３、１４．３。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_１７Ｈ_２８Ｎ_２Ｏ_５Ｓ（［Ｍ］^＋）の要求値：３７２．１７１９、実測値：３７２．１７２０。

３．２改良したアルギリンＡ（２）の合成

２段階
３段階
アルギリンＡ（２）

Ｎ^α−Ｂｏｃ−Ｄ−ＡｌａＴｈｚ−Ｔｒｐ−（４−ＯＭｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−ＯＭｅ（２３）

０．５ＮのＬｉＯＨ水溶液（１．５ｍＬ、０．７４ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／メタノール／水（７．４ｍＬ：１．８ｍＬ：３．７ｍＬ）中のチアゾール１２（１８３ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、１．５時間攪拌した。溶液を０．１ＮのＨＣｌ水溶液（２０ｍＬ）とジクロロメタン（４０ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。得られたカルボン酸を直接次の工程に使用した。

パラジウム炭（３０ｍｇ、１０重量％）を、Ｎ^α−Ｃｂｚ−Ｔｒｐ−（４−ＯＭｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−ＯＭｅ１５（３００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（３０ｍＬ）に添加した。反応混合物を水素で３回パージして、室温で４時間攪拌した。懸濁液をセライト（登録商標）のプラグを通して濾過し、メタノール（２×２０ｍＬ）で洗い、トルエン（２×２０ｍＬ）との同時蒸発によって濃縮した。このアミンを直接次の工程に使用した。

ＥＤＣ（１１３ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を、カルボン酸、アミン及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（９７ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン懸濁液（２０ｍＬ）に０℃で続けて添加した。反応混合物を室温に温め、１８時間攪拌した。溶液を水（１０ｍＬ）とジクロロメタン（１０ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（６％のメタノールを含むジクロロメタン）によって精製し、ペンタペプチド２３を無色の固体として得た（２８０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、７８％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝８．８１（ｂｒ，１Ｈ）、７．９２（ｓ，１Ｈ）、７．７９（ｂｒ，１Ｈ）、７．６６〜７．５９（ｍ，１Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．２８（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．１５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．０９〜７．０３（ｍ，２Ｈ）、６．９８〜６．９０（ｍ，３Ｈ）、６．６２〜６．５２（ｍ，２Ｈ）、６．４０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．１５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．９３〜４．８５（ｍ，２Ｈ）、４．０５（ｄｄ，Ｊ＝１７．９，６．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．８８〜３．７９（ｍ，１Ｈ）、３．７１（ｓ，３Ｈ）、３．６８（ｓ，３Ｈ）、３．４６（ｄｄ，Ｊ＝１４．７，４．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．１７〜３．０７（ｍ，３Ｈ）、１．５１〜１．４３（ｍ，１２Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７５．０、１７２．１、１７１．７、１７０．３、１６１．６、１５５．２、１５４．０、１４８．９、１３８．２、１３６．２、１２７．４、１２３．７、１２３．２、１２２．７、１２２．６、１２２．２、１１９．７、１１８．７、１１７．５、１１１．５、１１０．２、１０９．７、１０５．４、９９．８、８１．０、５５．５、５５．４、５４．９、５２．３、４９．３、４１．２、２８．５、２８．１、２６．７、２１．９。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_３７Ｈ_４３Ｎ_７Ｏ_８ＮａＳ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）に対する計算値：７６８．２７９２、実測値：７６８．２７９８。

Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−ＡｌａＴｈｚ−Ｔｒｐ−（４−ＯＭｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ａｌａ−ＤＨＡ−Ｓａｒ−ＯＥｔ（２４）

０．５ＮのＬｉＯＨ水溶液（０．２２ｍＬ、０．１０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／メタノール／水（２．９ｍＬ：０．７ｍＬ：１．４ｍＬ）中のエステル２３（６９ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、１時間攪拌した。溶液を０．１ＮのＨＣｌ水溶液（２．２ｍＬ）とジクロロメタン（４．３ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×３ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。得られたカルボン酸を直接次の工程に使用した。

トリフルオロ酢酸（１．４ｍＬ）を、カルバミン酸塩１４（５７ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に０℃で滴下した。反応混合物を室温に温め、３０分間攪拌した。溶液をトルエン（３×３ｍＬ）との同時蒸発によって濃縮し、得られたアンモニウム塩を直接次の工程に使用した。

ジイソプロピルエチルアミン（３０μＬ、０．１５ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（３２ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を、カルボン酸、アミン及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２９ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン懸濁液（１０ｍＬ）に０℃で続けて添加した。反応混合物を室温に温め、１８時間攪拌した。溶液を０．１ＮのＨＣｌ水溶液（６ｍＬ）とジクロロメタン（１２ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて飽和塩化アンモニウム水溶液（１０ｍＬ）で洗い、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（５％のメタノールを含むジクロロメタン）によって精製し、オクタペプチド２４を粘性固体として得た（１０５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、８１％）。

ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_４７Ｈ_５８Ｎ_１０Ｏ_１１ＮａＳ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）に対する計算値：９９３．３９０５、実測値：９９３．３９０７。

アルギリンＡ（２）

０．５ＮのＬｉＯＨ水溶液（０．２７ｍＬ、０．１１ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／メタノール／水（３．７ｍＬ：０．７ｍＬ：２ｍＬ）中のエステル２４（１００ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、２時間攪拌した。溶液を０．１ＮのＨＣｌ水溶液（７ｍＬ）とジクロロメタン（１４ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。得られたカルボン酸を直接次の工程に使用した。

トリフルオロ酢酸（７．３ｍＬ）を、カルボン酸のジクロロメタン溶液（５ｍＬ）に０℃で滴下した。反応混合物を室温に温め、１時間攪拌した。溶液をトルエン（３×１０ｍＬ）との同時蒸発によって濃縮し、得られたアンモニウム塩を直接次の工程に使用した。

ジイソプロピルエチルアミン（７０μＬ、０．２１ｍｍｏｌ）及びＴＢＴＵ（６６ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を、直鎖ペプチド及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２８ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１７０ｍＬ）に室温で続けて添加した。反応混合物を１８時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（４％のメタノールを含むジクロロメタン）によって精製し、アルギリンＡ（２）を粘性固体として得た（４７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、５７％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１０．６９（ｓ，１Ｈ）、９．４９（ｓ，１Ｈ）、８．８４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．７８（ｄ，１．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．５７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．３８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、８．０６（ｓ，１Ｈ）、７．３６〜７．３２（ｍ，２Ｈ）、７．０５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２〜６．８９（ｍ，１Ｈ）、６．８９〜６．８５（ｍ，２Ｈ）、６．８３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．３３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．５１〜５．４４（ｍ，１Ｈ）、５．３７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．０９〜５．０４（ｍ，１Ｈ）、５．０１（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．９５（ｄ，Ｊ＝１６．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．７２（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．５４〜４．４９（ｍ，１Ｈ）、４．３４（ｓ，３Ｈ）、４．２６〜４．２０（ｍ，２Ｈ）、３．５７〜３．４６（ｍ，３Ｈ）、３．４０（ｄ，Ｊ＝１６．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．３２（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，４．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．１１（ｓ，３Ｈ）、２．８４（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，３．１Ｈｚ，１Ｈ）、１．７３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．４２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）、１．０５（ｄｄ，Ｊ＝１７．４，５．１Ｈｚ，１Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７２．９、１７１．０、１７０．８、１７０．０、１６９．８、１６８．３、１６６．８、１５９．８、１５２．３、１５０．４、１３８．３、１３６．７、１３４．７、１２６．５、１２５．５、１２３．７、１２３．６、１２２．９、１２１．２、１１９．２、１１７．３、１１５．９、１１１．３、１０８．３、１０６．６、１０５．７、１０１．２、９９．７、５７．７、５６．１，５２．１，５１．０、４８．３、４５．２、４０．４、３７．４、２６．９、２６．６、２０．３、１３．９。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_４０Ｈ_４５Ｎ_１０Ｏ_８Ｓ（［Ｍ］^＋）に対する計算値：８２５．３１４３、実測値：８２５．３１４１。

３．３改良したアルギリンＦ（３）の合成

２段階
３段階
アルギリンＦ（３）

Ｎ^α−Ｂｏｃ−Ｄ−ＳｅｒＴｈｚ−Ｔｒｐ−（４−ＯＭｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−ＯＭｅ（２５）

０．５ＮのＬｉＯＨ水溶液（０．３ｍＬ、０．１５ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／メタノール／水（１．６ｍＬ：０．４ｍＬ：０．８ｍＬ）中のチアゾール１３（４６ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、３時間攪拌した。溶液を０．１ＮのＨＣｌ水溶液（５ｍＬ）とジクロロメタン（１０ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×５ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。得られたカルボン酸を直接次の工程に使用した。

パラジウム炭（６ｍｇ、１０重量％）を、Ｎ^α−Ｃｂｚ−Ｔｒｐ−（４−ＯＭｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−ＯＭｅ１５（６０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（３ｍＬ）に添加した。反応混合物を水素で３回パージし、室温で２時間攪拌した。懸濁液をセライト（登録商標）のプラグを通して濾過し、メタノール（２×５ｍＬ）で洗い、トルエン（２×５ｍＬ）との同時蒸発によって濃縮した。このアミンを直接次の工程に使用した。

ＥＤＣ（２３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を、カルボン酸、アミン及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１９ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン懸濁液（３ｍＬ）に０℃で続けて添加した。反応混合物を室温に温め、１６時間攪拌した。溶液を水（５ｍＬ）とジクロロメタン（５ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、飽和塩化アンモニウム水溶液（１０ｍＬ）で洗い、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（４．５％のメタノールを含むジクロロメタン）によって精製し、ペンタペプチド２５を無色の固体として得た（４０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、７８％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝９．０３（ｂｒ，１Ｈ）、８．０９（ｂｒ，１Ｈ）、７．９３（ｓ，１Ｈ）、７．５４（ｍ，１Ｈ）、７．５２（ｍ，１Ｈ）、７．２７（ｍ，１Ｈ）、７．１３（ｍ，１Ｈ）、７．１０（ｍ，２Ｈ）、６．９５（ｍ，２Ｈ）、６．５９（ｍ，２Ｈ）、６．３６（ｍ，１Ｈ）、５．６５（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．８４（ｍ，１Ｈ）、４．６６（ｍ，２Ｈ）、４．０８（ｄｄ，Ｊ＝１８．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．８５（ｄｄ，Ｊ＝１８．０，５．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．６８（ｓ，３Ｈ）、３．６４（ｓ，３Ｈ）、３．４４（ｍ，１Ｈ）、３．００〜３．２０（ｍ，３Ｈ）、１．７７（ｓ，３Ｈ）、１．５３（ｓ，２Ｈ）、１．４７（ｓ，９Ｈ）、１．４６（ｍ，３Ｈ）、１．１１（ｓ，９Ｈ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１７３．３、１７２．１、１７１．７、１７１．５、１７０．３、１６１．６、１５７．９、１５４．４、１４８．４、１３７．５、１３６．５、１２７．６、１２４．１、１２２．９、１２２．７、１２２．５、１２２．１、１１９．５、１１８．６、１１７．４、１１１．４、１１０．０、１０９．６、１０５．４、９９．５、８１．０、７４．２、６３．４、５５．４、５４．８、５３．８、５２．３、４１．２、３４．９、３２．９、２８．５、２８．３、２７．４。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_４１Ｈ_５１Ｎ_７Ｏ_９ＮａＳ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）に対する計算値：８４０．３３６８、実測値：８４０．３３６７。

Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−ＳｅｒＴｈｚ−Ｔｒｐ−（４−ＯＭｅ）Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ａｌａ−ＤＨＡ−Ｓａｒ−ＯＥｔ（２６）

０．５ＮのＬｉＯＨ水溶液（０．５ｍＬ、０．２３ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／メタノール／水（１９．５ｍＬ：４．５ｍＬ：９．５ｍＬ）中のエステル２５（１２０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、３時間攪拌した。溶液を０．１ＮのＨＣｌ水溶液（４０ｍＬ）とジクロロメタン（１００ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×３ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。得られたカルボン酸を直接次の工程に使用した。

トリフルオロ酢酸（１．７ｍＬ）を、カルバミン酸塩１４（６８ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２．４ｍＬ）に０℃で滴下した。反応混合物を室温に温め、３時間攪拌した。溶液をトルエン（３×５ｍＬ）との同時蒸発によって濃縮し、得られたアンモニウム塩を直接次の工程に使用した。

ジイソプロピルエチルアミン（２７μＬ、０．１６ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（３５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、カルボン酸、アミン及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３２ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン懸濁液（１２ｍＬ）に０℃で続けて添加した。反応混合物を室温に温め、１６時間攪拌した。溶液を０．１ＮのＨＣｌ水溶液（１０ｍＬ）とジクロロメタン（２０ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて飽和塩化アンモニウム水溶液（２０ｍＬ）で洗い、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（５％のメタノールを含むジクロロメタン）によって精製し、オクタペプチド２６を粘性固体として得た（１１９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、７６％）。

ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_５１Ｈ_６６Ｎ_１０Ｏ_１２ＮａＳ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）に対する計算値：１０６５．４４８０、実測値：１０６５．４４７０。

大環状化合物（Macrocyclus）（２７）

０．５ＮのＬｉＯＨ水溶液（２．５ｍＬ、０．１３ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／メタノール／水（４ｍＬ：１ｍＬ：２ｍＬ）中のエステル２６（９８ｍｇ、９４μｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、３時間攪拌した。溶液を０．１ＮのＨＣｌ水溶液（５ｍＬ）とジクロロメタン（１０ｍＬ）とに分配した。水層をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させて（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。得られたカルボン酸を直接次の工程に使用した。

トリフルオロ酢酸（６．４ｍＬ）を、カルボン酸のジクロロメタン溶液（４．２ｍＬ）に０℃で滴下した。反応混合物を室温に温め、３時間攪拌した。溶液をトルエン（３×５ｍＬ）との同時蒸発によって濃縮し、得られたアンモニウム塩を直接次の工程に使用した。

ジイソプロピルエチルアミン（６２μＬ、０．３７ｍｍｏｌ）及びＴＢＴＵ（６０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、直鎖ペプチド及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１４５ｍＬ）に室温で続けて添加した。反応混合物を３日間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（０．５％から４％へのメタノールを含むジクロロメタン）によって精製し、大環状化合物２７を粘性固体として得た（３６ｍｇ、４０μｍｏｌ、４３％）。

ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_４４Ｈ_５２Ｎ_１０Ｏ_９Ｓ（［Ｍ］^＋）に対する計算値：８９７．３７１８、実測値：８９７．３７１９。

アルギリンＦ（３）

トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を、環状ペプチド２７（５ｍｇ、５．６μｍｏｌ、１当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（１ｍＬ）に０℃で滴下した。反応混合物を室温に温め、３日間攪拌した。溶液をトルエン（３×５ｍＬ）との同時蒸発によって濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（０．５％から１０％へのＭｅＯＨを含むＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製し、アルギリンＦ（３）を粘性固体として得た（２．７ｍｇ、３μｍｏｌ、収率５８％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．０７（ｄｄ，Ｊ＝１７．５Ｈｚ及び５．１７Ｈｚ，１Ｈ）、１．４０（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）、２．８５（ｄｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ及び３．１８Ｈｚ，１Ｈ）、３．１６（ｓ，３Ｈ）、３．３１（ｄｄ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ及び３．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．４３（ｄ，Ｊ＝１６．５，１Ｈ）、３．５４〜３．４７（ｍ，３Ｈ）、４．０９〜４．０３（ｍ，１Ｈ）、４．２１〜４．１８（ｍ，１Ｈ）、４．３３〜４．２４（ｍ，３Ｈ）、４．３４（ｓ，３Ｈ）、４．４９〜４．４４（ｍ，１Ｈ）、４．７９（ｄ，Ｊ＝１．１９Ｈｚ，１Ｈ）、４．９９（ｄ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．０８〜５．０４（ｍ，１Ｈ）、５．０９（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．３８（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ）、５．５５〜５．５０（ｍ，１Ｈ）、６．３３（ｔ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，１Ｈ）、６．８１（ｄ，Ｊ＝２．３８Ｈｚ，１Ｈ）、６．９１〜６．８４（ｍ，１Ｈ）、６．９２（ｄ，Ｊ＝４．３７Ｈｚ，１Ｈ）、７．０５（ｄ，Ｊ＝８．１５Ｈｚ，２Ｈ）、７．３５〜７．２８（ｍ，２Ｈ）、８．１０（ｓ，１Ｈ）、８．３３（ｄ，J＝１．９９Ｈｚ，１Ｈ）、８．３６（ｄ，J＝８．７４Ｈｚ，１Ｈ）、８．５４（ｄ，Ｊ＝７．３５Ｈｚ，１Ｈ）、８．７７（ｄ，Ｊ＝１．５９Ｈｚ，１Ｈ）、９．７２（ｓ，１Ｈ）、１０．６７（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ＝１３．８、１４．２、２２．８、２６．９、２７．０、３７．８、４０．６、４８．７、５１．４、５１．５、５２．１，５６．２、５７．７、６４．０、１０１．４、１０１．４、１０６．０、１０６．７、１０８．４、１１１．４、１１６．２、１１７．４、１１９．４、１２１．４、１２３．６、１２３．７、１２３．８、１２５．３、１２６．６、１２９．７、１３３．４、１３４．７、１３６．３、１３８．４、１５０．６、１５２．４、１５９．７、１６７．２、１６７．９、１６８．５、１７０．１ｐｐｍ。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_４０Ｈ_４４Ｎ_１０Ｏ_９Ｓ（［Ｍ］^＋）に対する計算値：８４１．３０９２、実測値：８４１．３０８７。

４．新たなアルギリン誘導体−機能アッセイ
細胞及び組織培養
初代ヒト線維芽細胞（ＨＫＩ）；ＨＣＴ１１６（結腸癌）、ＭＣＦ７（乳癌）、ＣａＣｏ（結腸癌）、Ａ５４９（肺癌）、ＨｅＬａ（頸癌）及び不死化ＭＥＦは、５％ＦＣＳ及び２ｍｇ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンを添加したＤＭＥＭ中で培養した。ＳＷ４８０細胞（結腸癌）は、５％ＦＣＳ及び２ｍｇ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンを添加したマッコイ培地中で培養した。

抗体、ウエスタンブロット、免疫蛍光、免疫組織化学
マウス腫瘍組織の免疫組織化学的染色、ウエスタンブロット及び免疫蛍光の実験は、以前に記載されているように（Timmerbeul, I. et al. Testing the importance of p27 degradation bythe SCFskp2 pathway in murine models of lung and colon cancer. Proc Natl AcadSci U S A 103, 14009-14 (2006). Kossatz, U. et al. C-terminal phosphorylationcontrols the stability and function of p27^kip1.Embo J 25, 5159-70 (2006).）行なった。以下の抗体を使用した：ｐ２７（カタログ番号Ｋ２５０２０−１５０；TransductionLabs）、ｐ２１（Ｎ２０；Santa Cruz）、ｐ５３（ＦＬ−３９３；Santa Cruz）、ＮｆκＢ（Ｃ−２０；SantaCruz）、Ｂａｘ（Ｐ−１９；Santa Cruz）、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ４８８（＃Ａ１１００１；Invitrogen）、２０Ｓプロテアソームサブユニットβ２（Ｚ）（ＰＷ９３００；Biomol、ヒト細胞用）、２０Ｓプロテアソームサブユニットβ２（Ｚ）（ＰＷ８１４５；BIOTREND、マウス細胞用）；２０Ｓプロテアソームサブユニットβ１（Ｙ）（ＰＷ８１４０；BIO TREND）、２０Ｓプロテアソームサブユニットβ５（ＰＷ８８９５；BIOTREND）；ＰＥＣＡＭ抗体クローンＭＥＣ１３．３（＃５５０２７４；BD Pharmingen）。

ＭＴＴアッセイ、アポトーシス、フローサイトメトリー
ＭＴＴアッセイは、以前に記載されているように（非特許文献３）行なった。組織切片のＴＵＮＥＬ染色は、脱パラフィンし（deparafinised）、製造業者により推奨されるように処理した（ＩｎＳｉｔｕＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｅｔｅｃｔｉｏｎＫｉｔ、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ；ROCHE、カタログ番号１１６８４７９５９１０）１０μｍの切片上で実施した。培養細胞のフローサイトメトリー分析は、BectonDickinsonの蛍光フローサイトメーターを用いて、以前に記載されているように（Malek,N.P. et al. A mouse knock-in model exposes sequential proteolytic pathways that regulate p27^Kip1in G1 and S phase. Nature 413, 323-7 (2001)）行なった。細胞周期における細胞の分布及びｓｕｂ−Ｇ１画分の分析は、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアを用いて行なった。ヒストン結合ＤＮＡ断片ＥＬＩＳＡを使用して、製造業者の取扱説明書に従って（Roche；＃１１７７４４２５００１）アポトーシスを起こした細胞の数を求めた。

プロテアソーム精製、プロテアソームアッセイ
精製２０Ｓプロテアソームによるプロテアソームアッセイは、以前に記載されているように（Lightcap, E. S. et al. Proteasome inhibition measurements: clinicalapplication. Clin Chem 46, 673-83 (2000)）、赤血球由来２０Ｓプロテアソーム（Biomol International、＃ＬＰＰＷ８７２０）並びに蛍光定量基質Ｓｕｃｃ−ＬＬＶＹ−ＡＭＣ、ＢＺ−ＶＧＲ−ＡＭＣ及びＺ−Ｌｌｅ−ＡＭＣ（BiomolInternational、ＬＰＰＷ９９０５）をプローブとして用いて、製造業者の取扱説明書に従って実施した。細胞及び腫瘍切片からのプロテアソーム抽出は、以前に記載されているように（Crawford,L.J. et al. Comparative selectivity and specificity of the proteasomeinhibitors BzLLLCOCHO, PS-341, and MG-132. Cancer Res 66, 6379-86 (2006)）行なった。簡潔に言うと、細胞（ＭＥＦ又はＭＣＦ−７）又は組織試料ホモジネート（腫瘍切片）を、１ｍＬのＡＴＰ／ＤＴＴ溶解緩衝液（１０ｍｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．８）、５ｍｍｏｌ／ＬのＡＴＰ、０．５ｍｍｏｌ／ＬのＤＴＴ、５ｍｍｏｌ／ＬのＭｇＣｌ_２）に再懸濁し、氷上で１０分間インキュベートし、続いて１５秒間超音波処理した。溶解物を４００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離し、得られたプロテアソームを含有する上清を、２０％グリセロールを添加して−８０℃で少なくとも１ヶ月間保存した（stable）。試料のタンパク質濃度を、クマシータンパク質アッセイ（Pierce，Rockford，IL）を用いて測定した。

全血からのプロテアソーム抽出については、凍結全血細胞ペレットを解凍し、２〜３ペレット容量の冷溶解緩衝液（５ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）中に溶解した。溶解物を４℃で遠沈し、上清を新しい試験管に移した。クマシータンパク質アッセイ（Pierce，Rockford，IL）を用いてタンパク質濃度を求めるために、５μｌを取った。

細胞又は組織から精製したプロテアソームを用いたプロテアソームアッセイを、２０μｇのプロテアソーム抽出物、５０ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ及び６０μｍｏｌ／Ｌの蛍光発生基質（キモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）、トリプシン様（Ｔ−Ｌ）又はカスパーゼ様（Ｃ−Ｌ））を含有するＡＴＰ／ＤＴＴ溶解緩衝液（反応容量１００μＬ）中、３７℃で実行した。アッセイ緩衝液に、キモトリプシン様活性及びカスパーゼ様活性の評価のために最終濃度０．０５％のＳＤＳを添加した。蛍光発生ペプチド基質の切断速度は、Ｖｉｃｔｏｒ１４２０マルチラベルカウンター（Wallac）を用いて、励起波長３９５ｎｍ及び放射波長４６０ｎｍで６０分間にわたって、放出されたアミノメチルクマリン（amonomethylcoumarin）の蛍光をモニタリングすることにより求めた。

ＨＭＶＥＣ培養、ｉｎｖｉｔｒｏ毛細血管様管構造形成アッセイ及び免疫蛍光
初代微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）をヒト包皮から単離した。細胞を基礎培地（ＥＢＭ−２）、ＦＢＳ、ヒドロコルチゾン、ｈＦＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ、Ｒ３−ＩＧＦ、アスコルビン酸、ｈＥＧＦ、ゲンタマイシン及びアムホテリシンを含むＥＧＭ−２ＭＶ（Cambrex）において、３７℃及び１０％ＣＯ_２で維持した。ｉｎｖｉｔｒｏ血管形成に対するアルギリンＡ又はボルテゾミブの影響を、マトリゲル毛細血管様管構造形成アッセイにより求めた。種々の化合物のｉｎｖｉｔｒｏ血管形成への影響を調べるために、マトリゲル（BDBiosciences、＃３５４２４８）でプレコートし、アルギリンＡ又はボルテゾミブに曝露した９６ウェル培養プレートにＨＭＶＥＣを播種した。無作為に選択した３つの領域からの管構造の閉鎖ネットワークを、顕微鏡（Leica，Cambridge，UnitedKingdom）下でスコアリングした。ＡｘｉｏＶｉｓｉｏｎ３．１（Zeiss）カメラを用いて写真を撮り、管長及び閉鎖血管様構造の形成を求めることによりスコアリングした。

異種移植研究
１×１０^７個のＳＷ４８０細胞又はＨＣＴ１１６細胞（１００μｌのＤＭＥＭ培地及び１００μｌのマトリゲル中）を、ＮＭＲＩｎｕ／ｎｕマウスの脇腹に皮下注射した。腫瘍を適当なサイズ（２００ｍｍ^３）に達するまで、およそ１８日間増殖させた。腫瘍のサイズをデジタルノギスで測定し、以下の式：（長さ×幅^２）×π／６を用いて算出した。実験は全て検討後に、Lower Saxony、Germanyの動物権利保護機関に従って行なった。

ＥＭ
腫瘍の小試験片を、０．１Ｍカコジル酸ナトリウム（ｐＨ７．３）中２．５％グルタルアルデヒド（Polysciences，Warrington，PA，USA）中で固定し、同じ緩衝液中２％四酸化オスミウム（Polysciences）で後固定した（post-fixed）。段階的（graded）アルコール中で脱水した後、Ｅｐｏｎ（Serva，Heidelberg，Germany）に包埋した。酢酸ウラニル及びクエン酸鉛で染色した薄片を、ＰｈｉｌｉｐｓＥＭ３０１電子顕微鏡において検査した。電子顕微鏡写真を選択し、デジタル化し、ＡｄｏｂｅＰｈｏｔｏｓｈｏｐ６．０を用いて加工した。

種々のアルギリン誘導体の効果
２つの癌細胞株、Ｈ１５（頸癌）及びＳＷ４８０（結腸癌）に対するアルギリン誘導体Ｂ及びＦの効果を、以下の表に要約する。有効性を試験するために、ｐ２７−ＧＦＰクローンを使用した。

^＊ＧＦＰ蛍光は、クローンＨ１５ＧＦＰ−ｐ２７（ＨｅＬａ細胞株；頚癌）を種々のアルギリン誘導体（５００ｎｇ／ｍｌ）と２４時間インキュベートした後に、ＦＡＣＳで求めた。
^＊＊可視効果を示す段階希釈の最小濃度。
^＊＊＊ＳＷ４８０（結腸癌細胞株；ＭＴＴ試験後分析）の増殖の最大半減阻害。アルギリンＢ及びアルギリンＦがどちらも効果的であることが分かる。

以下の誘導体を作製した：

アルギリンＢ／Ｆ（３０）

この誘導体はアルギリンＢ及びアルギリンＦの構造の「ハイブリッド」であり（その合成の例については上記を参照されたい）、したがって、アルギリン群と共通する薬学的特徴（免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（癌等）といった状態に対する薬効を含む）を有することが予想される。

さらなる予備実験によって、アルギリンの薬物動態特性が、下記に示す立体配置を示すアルギリン誘導体を選択することによって変更され得ることがさらに示される。分子の全体構造の安定化によっても、治療を受ける患者に対する分子のバイオアベイラビリティが改善することが予想される。

アルギリンＡｌａ β

アルギリンＡｌａ α

プロテアソーム精製、プロテアソームアッセイ
精製２０Ｓプロテアソームによるプロテアソームアッセイは、以前に記載されているように（Lightcap et al., 2000）、赤血球由来２０Ｓプロテアソーム（Biomol International、＃ＬＰＰＷ８７２０）並びに蛍光定量基質Ｓｕｃｃ−ＬＬＶＹ−ＡＭＣ、ＢＺ−ＶＧＲ−ＡＭＣ及びＺ−Ｌｌｅ−ＡＭＣ（BiomolInternational、ＬＰＰＷ９９０５）を用いて実施した。細胞及び腫瘍切片からのプロテアソーム抽出は、以前に記載されているように（Crawfordet al., 2006）行なった。全血からのプロテアソーム抽出については、凍結全血細胞ペレットを解凍し、２〜３ペレット容量の冷溶解緩衝液（５ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）中に溶解した。溶解物を４℃で遠沈し、上清を新しい試験管に移した。クマシータンパク質アッセイ（Pierce、Rockford、IL）を用いてタンパク質濃度を求めるために、５μｌを取った。細胞又は組織から精製したプロテアソームを用いたプロテアソームアッセイを、２０μｇのプロテアソーム抽出物、５０ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ及び６０μｍｏｌ／Ｌの蛍光発生基質（キモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）、トリプシン様（Ｔ−Ｌ）又はカスパーゼ様（Ｃ−Ｌ））を含有するＡＴＰ／ＤＴＴ溶解緩衝液（反応容量１００μＬ）中、３７℃で実行した。アッセイ緩衝液に、キモトリプシン様活性及びカスパーゼ様活性の評価のために最終濃度０．０５％のＳＤＳを添加した。蛍光発生ペプチド基質の切断速度は、Ｖｉｃｔｏｒ１４２０マルチラベルカウンター（Wallac）を用いて、励起波長３９５ｎｍ及び放射波長４６０ｎｍで６０分間にわたって、放出されたアミノメチルクマリンの蛍光をモニタリングすることにより求めた。

アポトーシスアッセイ
ヒストン結合ＤＮＡ断片化を製造業者の取扱説明書に従って（Roche；＃１１７７４４２５００１）行った。

指定の化合物によって以下の結果が得られた：

２０Ｓプロテアソーム試験（手動）：

好ましい誘導体であるアルギリンＡｌａ α、特にアルギリンＡｌａ βがアルギリンＦよりも高い活性を有することが分かる。したがって、修飾位置及び構造の両方がこれらの化合物、概してアルギリンの活性に対して決定的な役割を果たす。

Claims

以下の一般式（Ｉ）：

（式中、
Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルコキシ、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_８アルキル、又はＯＲであり、ここで、Ｒは水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル、アリール又はアセチル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシから選択され、
Ｒ^４は水素、ハロゲン、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^５は水素又はハロゲンであり、
Ｒ^６は水素又はＣ_１〜Ｃ_４アルキルであり、
Ｒ^７は水素、又は非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
ＸはＣ＝ＣＨ_２又はＣＨＲ^８であり、ここで、Ｒ^８は非置換か又は−Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキルである）で表される大環状化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法であって、
前記合成が一般式（ＩＩ）：

（式中、Ｒ^２は独立して、水素、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシから選択される）を有するチアゾール要素から開始する合成を含み、
任意で保護された４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンを合成することを含み、前記任意で保護された４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンが、以下のスキーム：

に示される工程を含む立体選択的接触水素化経路を介して、酵素を使用せずに合成される、方法。
以下の一般式（Ｉ）：

（式中、
Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルコキシ、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_８アルキル、又はＯＲであり、ここで、Ｒは水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル、アリール又はアセチル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシから選択され、
Ｒ^４は水素、ハロゲン、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^５は水素又はハロゲンであり、
Ｒ^６は水素又はＣ_１〜Ｃ_４アルキルであり、
Ｒ^７は水素、又は非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
ＸはＣ＝ＣＨ_２又はＣＨＲ^８であり、ここで、Ｒ^８は非置換か又は−Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキルである）で表される大環状化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法であって、
一般式（ＩＩＩ）：

（式中、
ＰＧはＢｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚを含む保護基であり、
Ｒ^１は水素、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^６は水素又はＣ_１〜Ｃ_４アルキルであり、
ＸはＣ＝ＣＨ_２又はＣＨＲ^７であり、ここで、Ｒ^７は非置換か又は−Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４アルキルで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキルである）のトリペプチド、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を合成すること、
これを続いて一般式（ＩＶ）：

（式中、
Ｒ^３は水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルコキシ、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_８アルキル、又はＯＲであり、ここで、Ｒは水素、Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル、アリール又はアセチルであり、
Ｒ^４は水素、ハロゲン、非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシであり、
Ｒ^５は水素又はハロゲンであり、
Ｒ^７は水素、又は非置換か若しくはＯＨで置換されたＣ_１〜Ｃ_４アルキル、又はＣ_１〜Ｃ_４アルコキシである）で表される化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩と融合させることを含む、方法。
Ｒ^１が水素でない場合、ＸがＣＨ_２である、請求項１又は２に記載の大環状化合物を製造する方法。
アルギリンＦを含むアルギリンに必要とされるｔ−ブチル（ｔＢｕ）保護基を酸性脱保護する最終工程を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の大環状化合物を製造する方法。
前記大環状化合物がアルギリンＡ〜Ｆ、Ｂ／Ｆ、及びＡｌａ−α及びＡｌａ−βを含むアルギリン、並びにその単離立体異性体から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の大環状化合物を製造する方法。
９０％を上回る合成収率が見られる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の大環状化合物を製造する方法。
合成が固相ペプチド（pept）合成を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の大環状化合物を製造する方法。
以下の式：

から選択される、大環状化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩。
請求項８に記載の大環状化合物を、薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と共に含む医薬組成物。
請求項８に記載の大環状化合物、または請求項９に記載の医薬組成物を含む、患者における状態及び疾患の治療用の薬剤。
請求項８に記載の大環状化合物、または請求項９に記載の医薬組成物を含む、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染、並びに乾癬、又は乳癌、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸癌を含む癌を含む増殖性疾患から選択される疾患又は状態の治療のための薬剤。