JP6215260B2 - 再活性化を予防する結核ｔｂワクチン - Google Patents

Description

本発明は、結核菌群の細菌種（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、マイコバクテリウム・アフリカヌム（Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ））によって引き起こされる潜伏結核感染症の再活性を予防するために、ＥＳＡＴ６、ＣＦＰ１０、及びＥＳＸ−１分泌系からのその他の抗原など、恒常的に発現される抗原を標的することによって、潜伏感染した個体に投与することができるワクチンを開示する。

ＷＨＯによると、マイコバクテリウム・ツベルクローシスによって引き起こされるヒトの結核は、年間約３百万人の死者の原因となる重大な国際的健康問題である。新型結核（ＴＢ）の症例の世界的な発生数は１９６０年代及び１９７０年代の間は低下していたが、最近の数十年はひとつにはエイズの出現とマイコバクテリウム・ツベルクローシスの多剤耐性株の出現とによって、この傾向が一部で著しく変化した。

結核の細菌は様々な疾病を引き起こしうるが、最も一般的な侵入経路は細菌の吸入である。これにより、肺内での感染が開始し、最終的には体の他の部分に広がりうる。通常、この感染は免疫系によって増殖が制限され、感染した個体の大部分は咳や熱を除き殆ど徴候を示さず、最終的には緩和する。約３０％の個体は感染を抑えることができず一次疾患に発展し、多くの場合最終的には致命的となる。しかし、見かけ上感染を制御している個体でも、おそらく残りの人生感染したままである。確実に、何年、更に何十年も健康であった個体も突然結核に罹患することがあり、何年も前に感染した同じ細菌によって引き起こされることが分かっている。マイコバクテリウム・ツベルクローシス及びその他の結核菌群の細菌は、マイコバクテリアが免疫応答から回避することができ、難治性の非増殖段階又は増殖が緩徐な段階で長期間生残できる点で特有である。これは潜伏結核（潜伏性ＴＢ）と称され、現在では、世界人口の約１／３に影響すると推測される非常に重要な国際的健康問題である（Ａｎｏｎ．２００１）。

現在、臨床用途で利用可能な唯一のワクチンは、効果について論争事項があるワクチンであるＢＣＧである。ＢＣＧは一次感染の動物モデルには一貫して都合よく作用するが、ＴＢの蔓延を制御できないのは明らかである。それと共に、ＢＣＧワクチンの接種は小児ＴＢに備えた防御にはなる（一次感染であるため）が、成人の疾病（多くの場合、子供時代に罹った潜伏感染の再活性化である）に備えた防御とはほとんど又は全然ならない。更に、マイコバクテリアに現在感作しているか、あるいは潜伏感染している個体のワクチン接種は効果がないことが示されている。

マイコバクテリウム・ツベルクローシスの感染経過は図１で例示するように、実質的に３段階を経る。急性期には、感染を制御できる段階まで免疫応答が増加するまでは、細菌が器官内で増殖し、この段階で細菌負荷がピークとなり、下降し始める。この後、潜伏期が構成され、細菌負荷は低い状態で安定する、この時期においては、マイコバクテリウム・ツベルクローシスは能動的な増殖状態から休眠状態となり、実質的に非増殖になり肉芽腫の内部に維持されるというのが現在の見解である。

しかし近年、一定した少ない細菌数によって特徴づけられる感染段階においても、細菌集団の少なくとも一部は代謝が活性化している状態で維持されていることが明らかになった（Ｔａｌａａｔ ＡＭら、２００７）。従って、これらの細菌は強い免疫応答に直面しても生残し、能動的な代謝を維持し、増殖している。従って、感染した個体においては、非増殖性の細菌（細胞内に定住するため免疫系が探知することが極めて困難である）と、免疫宿主で生じた不適な環境に順応するために、発現プロファイルが能動的であるが変化している、増殖が緩徐な細菌との間に均衡がある。古典的な予防ワクチンを潜伏感染した実験動物に与えた場合の活性の欠如で例示されたように、この段階の細菌は一般的には、ＴＢ分野で現在開発下にある殆どの予防ワクチンで標的となっていない（Ｔｕｒｎｅｒ ２０００）。

一部の場合においては、均衡は病原体に有利なように傾き、感染は再活性期に移行し、細菌が急速に増殖を開始し、感染した個体における細菌数が増加する。非常に強い免疫性の圧力下で潜伏感染した個体において増殖する細菌は、本発明におけるワクチン接種戦略での標的である。予防ワクチンを潜伏感染した実験動物に与えた場合の活性の欠如によって例証されたように、この潜伏感染ステージにおける細菌は一般的には、ＴＢの分野で現在開発下にある殆どの予防ワクチンで標的となっていない（Ｔｕｒｎｅｒら、２０００）。宿主の強い免疫応答によって、主要な予防ワクチンの抗原であるＡｇ８５やＰｓｔＳといった多数の抗原が発現低下することは現在既知であるため、そのことは驚くべきことではない（Ｒｏｇｅｒｓｏｎ，ＢＪら、２００６）。Ａｇ８５Ｂについては、感染後にＡｇ８５Ｂの発現が初期に一過性で増加するが、感染から２週間後にはピーク期間中のコロニー形成単位（１ＣＦＵ）につき０．３のマイコバクテリウム・ツベルクローシスの転写物から１ＣＦＵにつき０．０２のマイコバクテリウム・ツベルクローシスの転写物に、細菌Ａｇ８５Ｂの発現レベルが低下し、この低いレベルは感染後少なくとも最大１００日維持される。従って、感染後２週間後の時点では、２％未満の細菌がＡｇ８５Ｂを能動的に発現している（同書）。Ａｇ８５Ｂの発現が低いことによって、感染後から３週間、又はそれ以降に、肺においてＡｇ８５Ｂに応答してＩＦＮ−ｇを生成できるＴ細胞の数が急速に低下することが支持される。

対照的にいくつかの抗原は、感染症の様々な段階を通して、更に安定して（恒常的に）発現し、この一例がＥＳＡＴ６である。初期感染後、ＥＳＡＴ−６の発現レベルは１ＣＦＵにつき０．８のマイコバクテリウム・ツベルクローシスの転写物で安定する。この転写レベルはＡｇ８５Ｂよりも相応に高く、少なくとも感染後最大１００日、このレベルが安定に維持される（Ｒｏｇｅｒｓｏｎ，ＢＪら、２００６）。更にこの転写データは、感染部位で感染の後半段階の強いＴ細胞のＥＳＡＴ−６の認識を示す免疫データにより支持されている（同書）。この恒常的な発現パターンは、これらの分子が病原体に非常に重大で重要な本質的な機能、病原体が免疫宿主において生残するために恒常的に発現することを要する遺伝子に依存する機能を満たすことを示す重要な特徴である。これらの分子は細菌のライフスタイルの全段階を標的とし、ひいては、その主成分が活性に対し最も広範であると推定されるため、これらの分子は本発明の主成分となり、潜伏感染した個体に投与するワクチンで特に重要な抗原となる。これは、非増殖の存続中にマイコバクテリアによって発現増加した抗原を同定することに焦点をあてている近年の見解とは異なる（Ａｎｄｅｒｓｅｎ，Ｐ．２００７、国際公開公報第０２０４８３９１号、国際公開公報第０４００６９５２号、Ｌｉｎ ＭＹ及びＯｔｔｅｎｈｏｆｆ ＴＨ ２００８；Ｌｅｙｔｅｎ ＥＭら、２００６）。そのような抗原は非増殖の存続中に発現増加されるが、非増殖細菌で利用可能な量が、防御的免疫エフェクタ機能の検出に対し、あるいは始動に対し、閾値未満であるため、常に免疫認識に利用可能とは限らない。

対照的に、ＥＳＸ−１分泌系由来のタンパク質のいくつかは、免疫原性が高く、かつ発現レベルが高いことが示されている。ＥＳＸ−１は、いくつかの病原性マイコバクテリアにおいて維持され、結核菌の病原性に関与している。ＥＳＡＴ−６、ＣＦＰ１０及びＥｓｐＡの分泌における個々のＥＳＸ−１タンパク質の寄与は十分に立証されており（Ｐｙｍ ＡＳら、２００３；Ｇｕｉｎｎ ＫＩら、２００４；Ｓｔａｎｌｅｙ，ＳＡら、２００３；Ｂｒｏｄｉｎ，Ｐ．ら、２００６；ＭａｃＧｕｒｎ ＪＡら、２００５；Ｒａｇｈａｖａｎ、Ｓ．ら、２００８）、そのエフェクター分子の機能は膜の溶解と、食胞からの回避と、細菌の拡散とであることが示されている（Ｇａｏ ＬＹら、２００４；Ｓｍｉｔｈ Ｊ．ら、２００８）。

潜伏感染を制御する免疫応答、及び再活性を引き起こす因子の全体的な性質はほとんど知られていない。しかし、原因となる優性な細胞型の変動に対する証拠はいくつかある。ＣＤ４Ｔ細胞は急性期中の感染の制御に必要十分あるが、研究によれば潜伏期間ではＣＤ８Ｔ細胞の反応が、より重要であることを示唆している。（ｖａｎ Ｐｉｎｘｔｅｒｅｎ ＬＡら、２０００）。

当業者が容易に認識するように、遺伝子の発現は、良好なワクチン候補とするには不十分である。マイコバクテリウム・ツベルクローシスで潜伏感染中に、タンパク質が免疫系によって認識されるかどうかを判定する唯一の方法は、所定のタンパク質を産生し、本明細書中に記載の好適なアッセイで試験することである。この点に関して、我々のグループは、ＥＳＡＴ−６（Ｅａｒｌｙ Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｔａｒｇｅｔ−６といったマイコバクテリアによって強く発現した抗原が総ての感染ステージにおける個体において、実際には特に、潜伏感染した個体において、認識されていることを実証した（Ｂｏｅｓｅｎ，Ｒａｖｎ，Ｄｏｈｅｒｔｙ、２００２）。しかし、自然感染中に抗原刺激したＥＳＡＴ−６に特異的なＴ細胞は多数存在しうるが、殆どが、非常に寿命が限られた末端が分化したＴ細胞である、いわゆるエフェクタータイプの表現型のみであり、感染疾患に対する防御的なＴ細胞としての活性が低い（Ｓｅｄｅｒ Ｒら、２００８）。これは、ＴＢの再活性に備えて防御するための本研究で実証したワクチンにより奨励される、高品質な、いわゆる多機能Ｔ細胞とは著しく異なる。

曝露後ワクチンとして有用なものは、その多くが過敏性反応を引き起こし、それによってむしろ状況を悪化させるため、発現率が高く高免疫原性であるタンパク質とは決してならない。これはコッホの独自のツベルクリンワクチンの臨床試験において明確に立証された。ワクチンは皮膚や肺のＴＢを含む様々な形態の疾患に罹患した患者に曝露後ワクチンとして与えた。その臨床試験は完全に失敗し、登録患者たちの数名は深刻な過敏反応のために死亡した（Ｇｕｔｔｓｔａｄｔ Ａ．１８９１）。一次感染中に発現したことが知られ、かつワクチンとして試験された数百の抗原のうち、６未満が顕著な潜在性を実証した。従来、１つの抗原のみが曝露後ワクチンとして何らかの潜在性を有していることが示されてきた（Ｌｏｗｒｉｅ，１９９９）。しかし、このワクチンはＤＮＡワクチンとして投与された場合にのみ作用するが、実験技術は現行ではヒトへの使用が承認されていない。更には、その技術は論争中であり、他のグループはこのプロトコルを用いたワクチン接種が非特異的な防御か、更には疾患の悪化を誘発すると主張している（Ｔｕｒｎｅｒ，２０００）。

従って、疾病の再活性に備えて感染した個体を防御する有効な曝露後ワクチン接種の戦略が非常に所望される。

本発明は、ＥＳＡＴ６、ＣＦＰ１０、及びＥｓｐＡといった恒常的に発現する抗原を標的にすることによって、結核菌の細菌種（マイコバクテリウム・ツベルクローシス、マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・アフリカヌム）によって生じる潜伏結核の感染の再活性を予防するために、潜伏結核感染症患者に投与できるワクチンによる、結核菌の種（マイコバクテリウム・ツベルクローシス、マイコバクテリウム・ボビス、マイコバクテリウム・アフリカヌム）によって引き起こされる感染の治療に関する。ＥＳＡＴ６、ＣＦＰ１０及びＥｓｐＡは、総てが相互依存的に分泌に必要であり、かつ総てが病原性に必須であることが知られているＥＳＸ−１分泌系に属している。これらの分泌した抗原は細菌の内転移や細胞膜の溶解に極めて重要である。ＥＳＡＴ６、ＣＦＰ１０及びＥｓｐＡの抗原は更に、疾病の様々な段階において恒常的に発現し、一方で、例えばＡｇ８５の発現は感染後すぐに発現減少する。驚くべきことに、免疫原性の恒常的に発現する抗原は曝露後ワクチンとして投与した場合、潜伏結核の感染の再活性化を予防し、それにより感染を潜伏させて維持する。

本発明は潜伏感染した個体に曝露後に投与し、結核の再活性化を予防し、マイコバクテリウム・ツベルクローシスの感染中に恒常的に発現する抗原、又は前記抗原をコードしている核酸を含むワクチン又は免疫原性組成物を開示する。

好ましくは、組成物は、ＥＳＸ−１分泌系に属する恒常的に発現する抗原、ＥＳＡＴ６（配列番号１）、ＣＦＰ１０（配列番号２）、ＥｓｐＡ（配列番号３）、Ｒｖ３６１４ｃ（配列番号４）、Ｒｖ３６１５ｃ（配列番号５）、ＥｓｐＲ（配列番号６）、Ｒｖ３８６８（配列番号７）、Ｒｖ３８６９（配列番号８）、Ｒｖ３８７０（配列番号９）、Ｒｖ３８７１（配列番号１０）、Ｒｖ３８７２（配列番号１１）、Ｒｖ３８７３（配列番号１２）、Ｒｖ３８７６（配列番号１３）、Ｒｖ３８７７（配列番号１４）、Ｒｖ３８７８（配列番号１５）、Ｒｖ３８７９ｃ（配列番号１６）、Ｒｖ３８８０ｃ（配列番号１７）、Ｒｖ３８８１ｃ（配列番号１８）、Ｒｖ３８８２ｃ（配列番号３２）、Ｒｖ３８８３ｃ（配列番号３３）、Ｒｖ３８６５ｃ（配列番号３４）、又はこれらの配列のいずれか１つの免疫原性部分、例えばＴ細胞のエピトープ、又はその配列のいずれか１つに少なくとも７０％以上の配列相同性を有すると同時に、免疫原性であるアミノ酸配列類似体を含む。

代替的に、組成物は、好ましくは、配列番号１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０及び３１からなる群から選択される免疫原性部分の混合物を含む。

本発明の別の実施態様は、前記ポリペプチドがマイコバクテリア系の細菌によって発現した抗原と融合し、好適には融合パートナーが恒常的に発現された抗原である組成物を含む。好適な融合タンパク質はＣＦＰ１０に融合したＥＳＡＴ６を含む。

本発明による組成物は好適には：マイコバクテリアの遺伝子を発現する細菌又はウイルスといった遺伝子改変細菌である組換え生ワクチン；あるいは上述のタンパク質に対する遺伝子及び遺伝子断片を発現するプラスミドであるＤＮＡワクチン、又はタンパク質自体若しくはアジュバントといった送達系で送達されるタンパク質自体に由来する合成ペプチドであるタンパク質ワクチンといった免疫原性送達系；から選択される更なる送達系を含む。アジュバントは好適には、ジメチルオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡ）、Ｑｕｉｌ Ａ、ポリＩＣ（ポリイノシン・ポリシチジン：ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ）、水酸化アルミニウム、フロイントの不完全型アジュバント、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）、トレハロースジベヘナート、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）、最も好適にはＤＤＡ／ＴＤＢ及びＩＣ３１などの多機能性Ｔ細胞の応答を促進するアジュバントから成る群から選択される。最も好適なアジュバントは、ＤＤＡ／ＴＤＢ、及び／又はポリＩＣを含む。代替的にはアミノ酸配列はポリペプチドの自己アジュバント効果を可能にするように脂質化されている。

本発明は更に、潜伏結核の治療及び感染の再活性化の予防用の、上述の抗原を開示している。

マイコバクテリウム・ツベルクローシス、マイコバクテリウム・アフリカヌム、又はマイコバクテリウム・ボビスといった病原性マイコバクテリアによって引き起こされる結核感染の再活性に備えて、ヒトを含む動物を治療する方法が、動物に上述に記載のワクチン又は免疫原性組成物を投与するステップを具え、前記ワクチン又は免疫原性組成物は急性感染期中若しくは後、及び／又は、潜伏感染期中といった感染後に投与される。

本方法は、病原性マイコバクテリウムに潜伏感染した対象を、例えば、マントーツベルクリン反応試験（ＴＳＴ）、クォンティフェロン試験、ＨＢＨＡの反応の生体外での検出、又は恒常的に発現している抗原での刺激後のＩＰ１０の検出といった診断手順によって同定するステップを具えうる。

本発明は更に、マイコバクテリウム・ツベルクローシス、マイコバクテリウム・ボビス、及びマイコバクテリウム・アフリカヌム等の結核菌群の種によって引き起こされる潜伏感染の再活性に備えた曝露後ワクチン又は免疫原性組成物の製造のための上述の抗原の使用を開示しており、前記ワクチン又は免疫原組成物は感染症の急性期感染ステージ中又はその後、及び／又は潜伏ステージ中など、感染後に投与するものであり、上述の１又はそれ以上の免疫原性部分を含む。

病原体としてのマイコバクテリアの幸運は、その宿主との相互作用の複雑かつ微細な方法、すなわち特異化されたＥＳＸ−１細菌タンパク質分泌系によって部分的に制御したプロセスによるものである。ＥＳＸ−１系は細菌タンパク質（例えば、ＥＳＡＴ−６、ＣＦＰ１０及びＥｓｐＡ）を宿主細胞に送達し、それは病原性に対して重要となる。細菌から分泌後、ＥＳＡＴ−６タンパク質は食胞膜に孔を形成して、食胞における封入部分から細胞基質へ細菌を回避可能にし、それにより細胞間の拡散を促進する。

この恒常的な発現パターンは、これらの分子が病原体に非常に重大で重要な本質的な機能、病原体が免疫宿主において生残するために恒常的に発現することを要する遺伝子に依存する機能を満たすことを示す重要な特徴である。これらの分子は細菌のライフスタイルの全段階を標的とし、ひいては、その主成分が活性に対し最も広範であると推定されるため、これらの分子は本発明の主成分となり、潜伏感染した個体に投与するワクチンで特に重要な抗原となる。

ＥＳＡＴ６、ＣＦＰ１０及びＥｓｐＡは、総てが相互依存的に分泌に必要であり、かつ総てが病原性に必須であることが知られているＥＳＸ−１分泌系に属している。これらの分泌した抗原は細菌の内転移や細胞膜の溶解に極めて重要である。ＥＳＡＴ６、ＣＦＰ１０及びＥｓｐＡの抗原は更に、疾病の様々な段階において恒常的に発現し、一方で、例えばＡｇ８５の発現は感染後すぐに発現減少する。免疫原性の恒常的に発現する抗原は治療用ワクチンとして投与した場合、潜伏結核の感染の再活性化を予防し、それにより感染を潜伏させて維持する。

［定義］
《多機能Ｔ細胞》
多機能Ｔ細胞という用語によって、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２及びＴＮＦ−αの総てのサイトカイン、あるいはＩＬ−２及び別の２つのサイトカインＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αのうちの少なくとも１つを同時に発現するＴ細胞と解釈される。

《ポリペプチド》
本発明における用語「ポリペプチド」の意味は通常のものである。それは、完全長のタンパク質、オリゴペプチド、短いペプチド及びその断片を含む任意の長さのアミノ酸鎖であり、アミノ酸残基は共有結合性のペプチド結合により結合している。

ポリペプチドは、グリコシル化により、脂質化により（例えば、Ｍｏｗａｔら、１９９１により記載のような、パルミトイルオキシスクシンイミドでの、あるいは、Ｌｕｓｔｉｇら、１９７６により記載のようなドデカノイルクロリドでの化学的な脂質化により）、補欠分子団を含むことにより、あるいは、例えばＨｉｓタグ又はシグナルペプチドといった更なるアミノ酸を含むことによって化学修飾してもよい。

従って、各ポリペプチドは特異的なアミノ酸によって特徴付けられ、特異的な核酸配列によってコードできる。このような配列は組換え法や合成法により産生された類似体や変異体を含み、このようなポリペプチド配列は、組換えポリペプチドにおける１又はそれ以上のアミノ酸残基の置換、挿入、付加、又は削除により修飾され、本明細書に記載した生物学的アッセイのいずれかにおいて更に免疫原性であると解釈すべきである。置換は好適には「保存的」である。これらは下記の表によって規定される。第２列目の同区画に、あるいは好適には第３列目の同一行にあるアミノ酸は相互に置換することができる。第３列目にあるアミノ酸は１文字コードで示されている。

本発明の好適なポリペプチドは、生物が潜伏感染に関連したストレスに供されたときに産生されるマイコバクテリウム・ツベルクローシス由来の免疫原性抗原である。このような抗原は更に、例えばマイコバクテリウム・ツベルクローシスの細胞及び／又はマイコバクテリウム・ツベルクローシスの培養濾液からも得ることができる。従って、上述の抗原のうちの１つの免疫原性部分を含むポリペプチドは全体的に免疫原性部分からなっていてもよく、更なる配列を含んでいてもよい。更なる配列は天然マイコバクテリウム・ツベルクローシスの抗原由来であっても、あるいは異種であってもよく、このような配列は必要ではないが、免疫原性であってもよい。

各ポリペプチドは、特異的な核酸配列によってコードされる。このような配列はその類似体や変異体を含み、このような核酸配列は１又はそれ以上の核酸の置換、挿入、付加又は欠失により修飾されている。置換は、アミノ酸配列が変わらないコドン使用頻度におけるサイレント置換であることが好ましく、タンパク質の発現量を増加するために導入されうる。

本文脈においては、用語「実質的に純粋なポリペプチド断片」は、最大５重量％の天然に結合する他のポリペプチド材料を含むポリペプチド試料のことである（低割合のポリペプチド材料、例えば最大４％、最大３％、最大２％、最大１％、最大１／２％が更に好ましい）実質的に純粋なポリペプチドは、少なくとも９６％の純度であること、すなわち、ポリペプチドが試料においてポリペプチド材料全体の少なくも９６重量％を構成し、高い割合、例えば少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．２５％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．７５％であることが好適である。ポリペプチド断片は「実質的に純粋な形態」であること、すなわちポリペプチド断片は、天然に結合するその他の抗原が基本的にない、すなわち、結核菌群、又は病原性マイコバクテリウムに属する細菌由来のその他の抗原がないことが特に好ましい。これは、下記に詳細に記載したような非マイコバクテリウムの宿主細胞において組換え方法によってポリペプチド断片を調製することによって、あるいは液相又は固相ペプチド合成の既知の方法、例えばＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄにより記載の方法又はその変形によりポリペプチド断片を合成することによって実現できる。本発明の目的のために、上述の「実質的に純粋なポリペプチド又はポリペプチド断片」の定義は、マイコバクテリア又は非マイコバクテリア起源の他の精製抗原又は合成抗原との組み合わせで存在する場合に、このようなポリペプチド又はポリペプチド断片を除外しないと解釈すべきである。

用語「病原性マイコバクテリア」によって、動物において、あるいはヒトにおいて結核を引き起こすことができる細菌として解釈すべきである。病原性マイコバクテリアの例は限定しないが、マイコバクテリウム・ツベルクローシス、マイコバクテリウム・アフリカヌム、マイコバクテリウム・ボビスを含む。関連する動物の例はウシ、フクロネズミ、アナグマ及びカンガルーである。

「感染した個体」によって、病原性マイコバクテリアの感染が培養又は顕微鏡法で判明した個体、及び／又はＴＢと臨床上診断され、かつ抗ＴＢ化学療法に応答する個体と解釈すべきである。ＴＢの培養、顕微鏡法及び臨床上の診断は当業者には周知である。

用語「ＰＰＤ陽性の個体」によって、マントウ試験が陽性の個体、又はＰＰＤ（精製タンパク質派生物）がＩＦＮ−γの放出により判定される生体外での陽性のリコール反応を誘発する個体と解釈すべきである。

「潜伏感染した個体」によって、例えば病原性マイコバクテリア、例えばマイコバクテリウム・ツベルクローシスに感染したが能動的な結核の症候を示さない個体と解釈すべきである。ＢＣＧワクチン等によりワクチン接種されたか、あるいはＴＢに対し治療された個体は、その体内にマイコバクテリアを保持している思われるが、このような個体は、ＰＰＤの反応性について試験した場合に陽性を示すことが予測されるため、証明することが現行では不可能である。それにも拘わらず、最も正確な意味においては、「潜伏感染した」は、マイコバクテリウム・ツベルクローシスは組織において残留しているが、臨床的疾患でない任意の個体について記載するのに用いることができる。潜伏感染した個体はマントウのツベルクリン皮膚試験（ＴＳＴ）、クァンティフェロン試験といった現在の臨床用途の数多くの方法で同定でき、将来的には、近年提案されているＨＢＨＡに対する反応の生体外での検出（Ｈｏｕｇａｒｄｙ、２００７）、又はＥＳＡＴ６での生体外での刺激後のＩＰ１０の検出（Ｒｕｈｗａｌｄ、２００８）といったこの特定の感染段階を診断する、更に感度の高い手段になりうる。

用語「再活性」によって、非増殖性の細菌（細胞内に定住するため免疫系が探知することが極めて困難である）と、免疫宿主で生じた不適な環境に順応するために、発現プロファイルが能動的であるが変化している、増殖が緩徐な細菌との間の均衡が、病原体に有利なように傾き、感染はその段階に移行し、細菌が再度急速に増殖を開始し、感染した個体における細菌数が増加する状況であると解釈すべきである。非常に強い免疫性の圧力下で潜伏感染した個体において増殖したこれらの細菌が、本発明におけるワクチン接種戦略での標的である。

用語「ＩＦＮ−γ」によって、インターフェロンγであると解釈される。ＩＦＮ−γの測定は免疫反応の指標として用いられる。

用語「核酸断片」及び「核酸配列」によって、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ（ロックド核酸）、ＰＮＡ、ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ及びＲＮＡとＤＮＡとの複合型を含む任意の核酸分子と解釈すべきである。更に含まれているのが、非天然に生じたヌクレオシドを含む核酸分子である。用語は用途に応じて、例えば１０乃至１００００ヌクレオチドといった、任意の長さの核酸分子も含む。核酸分子が医薬品として、例えばＤＮＡ治療に用いる、あるいは本発明によるポリペプチドの産生方法に用いる場合、少なくとも１のエピトープをコードする分子が好適には用いられ、長さは約１８乃至約１０００ヌクレオチドであり、この分子は選択的にベクターに挿入される。

文脈により別段の定めがある場合を除いて、本明細書にわたって、語句「含む」、又は「含んでいる」といったその変化形は、規定の要素若しくは整数、又は要素若しくは整数の群を含むことを意味するが、その他の要素若しくは整数、又は他の要素若しくは整数の群を排除することを意味しないと解釈すべきである。

恒常的に発現する遺伝子は、集団レベルでのｍＲＮＡの詳細な分析後、感染後３週間以降の時点で、肺における生体内でのマイコバクテリウム・ツベルクローシスのＣＦＵ数と関連づけた、肺において同様で良好に発現した遺伝子と定義される。この定義から、恒常的な遺伝子は単一の細菌レベルでは特異的に発現するということになる。遺伝子発現を定量する方法は、定量的ＰＣＲ法である。「同様で良好に」は、前回の測定から＋／−５倍のレベル内であると定義する。比較は常に、現在の直前の時点に対してである。測定間の時間は、感染と直前の測定との間の時間より長くできない。例を挙げると、遺伝子発現を感染後３週間で１回目の測定をした場合、２回目の測定は、感染後６週間以降に、３回目を感染後１２週間以降等にすることはできない。恒常的に発現する抗原は、恒常的に発現する遺伝子の産物であるポリペプチド、又はこれらのポリペプチドの一部である。

《配列相同性》
用語「配列相同性」は同一の長さの２のアミノ酸配列の間、又は同一の長さの２つのヌクレオチド配列間の相同性の度合の定量的な測定を意味する。比較すべき２の配列は、ギャップの挿入、あるいはタンパク質配列の末端の切断を可能にする推定される最良の適合度まで整列しなければならない。配列相同性は：

として算出することができる。ここでＮ_ｄｉｆとは整列した場合の２の配列における非同一性の残基の総数であり、Ｎ_ｒｅｆは配列のうちの１つの残基の数である。従って、ＤＮＡ配列ＡＧＴＣＡＧＴＣは、配列ＡＡＴＣＡＡＴＣと７５％の配列相同性がある（Ｎ_ｄｉｆ＝２及びＮ_ｒｅｆ＝８）。ギャップは非同一な１以上の特異的な残基として計数される。即ち、ＤＮＡ配列ＡＧＴＧＴＣはＤＮＡ配列ＡＧＴＣＡＧＴＣと７５％の配列相同性がある（Ｎ_ｄｉｆ＝２及びＮ_ｒｅｆ＝８）。配列相同性は代替的に、ＢＬＡＳＴプログラム、例えばＢＬＡＳＴＰプログラムによって計算することができる（Ｐｅａｒｓｏｎ，１９８８、又は「ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ＢＬＡＳＴ」）。発明の一態様においては、アラインメントは、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｊ．ら、１９９４に記載のような初期設定のパラメータが「ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ２．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｃｌｕｓｔａｌｗ／」で入手可能な配列アラインメント法Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗで実行することができる。

配列相同性の好適な最小の割合は少なくとも８０％、例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％である。

《免疫原性部分》
本発明の好適な実施態様においては、ポリペプチドはＢ細胞又はＴ細胞に対するエピトープといったポリペプチドの免疫原性部分を含む。ポリペプチドの免疫原性部分はポリペプチドの一部であり、動物又はヒトにおいて、及び／又は本明細書中に記載の生物学的アッセイのいずれかよって定量した生物学的試料において免疫反応を誘発する。ポリペプチドの免疫原性部分はＴ細胞エピトープ、又はＢ細胞エピトープであってもよい。免疫原性部分はポリペプチドの１又は少数の比較的少さい部分に関連づけでき、ポリペプチド配列にわたって分散するか、又はポリペプチドの特異的な部分に位置しうる。いくつかのポリペプチドについては、エピトープが完全配列をカバーするポリペプチドにわたって散在することが示されている（Ｒａｖｎら、１９９９）。免疫反応中に認識される関連するＴ細胞エピトープを同定するために、ＭＨＣクラスＩＩエピトープの検出用の、好適には合成性であり、長さが例えば、ポリペプチド由来の２０のアミノ酸残基の重複するオリゴペプチドを用いることが可能である。これらのペプチドは生物学的アッセイ（例えば、本明細書中に記載のＩＦＮ−γアッセイ）で試験することができ、これらの一部は、ペプチドにおけるＴ細胞エピトープの存在の証拠として陽性反応を与える（及びこれによって、免疫原性となる）。ＥＳＡＴ−６及びＣＦＰ１０については、このような研究によって、抗原の総ての部分がＴ細胞エピトープを含むことを示した（Ｍｕｓｔａｆａら、２０００；Ａｒｅｎｄ ＳＭら、２０００）。ＭＨＣクラスＩエピトープの検出については、結合するペプチドを予測することが可能であり（Ｓｔｒｙｈｎら、１９９６）、その後にこれらのペプチドの合成物を産生し、関連する生物学的アッセイ、例えば本明細書に記載のようなＩＦＮ−γアッセイで試験することが可能である。ペプチドの長さは好適には、ポリペプチド由来の８乃至１１のアミノ酸残基となる。Ｂ細胞エピトープは、例えばＨａｒｂｏｅら、１９９８に記載のように対象のポリペプチドをカバーする重複するペプチドに対するＢ細胞の認識を分析することによって定量できる。この定義と一致して、本明細書中に記載のポリペプチドの免疫原性部分は、免疫応答を誘発する部分として同定できる。以下の「免疫応答」の定義を参照。

最小長のＴ細胞エピトープは少なくとも６アミノ酸残基であることを示してきたが、このようなエピトープは更に長いアミノ酸の伸展から構成されることが一般的である。従って、本発明のポリペプチド断片の長さは、少なくとも７以上のアミノ酸残基、例えば、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも２２、少なくとも２４、及び少なくとも３０のアミノ酸残基であることが好適である。従って、本発明の方法の重要な実施態様では、ポリペプチド断片の長さは最大５０のアミノ酸残基、例えば最大４０、３５、３０、２５、及び２０のアミノ酸残基であることが好適である。長さが１０乃至２０のアミノ酸残基であるペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩエピトープとして最も有効であることが判明し、ひいては本発明の方法で用いた特に好適なポリペプチド断片の長さは１８、例えば１５、１４、１３、１２更には１１のアミノ酸残基であると予測される。長さが７乃至１２のアミノ酸残基のペプチドは、ＭＨＣクラスＩエピトープとして最も有効であることが判明し、ひいては本発明の方法で用いたポリペプチド断片の特に好適な長さは１１、例えば１０、９、８更に７のアミノ酸残基であると予測される。

ポリペプチドの免疫原性部分は、遺伝的に異種のヒト集団の広範な部分（高頻度）で、あるいは小さな部分（低頻度）で認識されうる。更に、いくつかの免疫原性部分は高い免疫学的応答（優性）を誘発する一方、他の部分は低いが、なお有意な免疫学的応答（準優性）を誘発する。高頻度、低頻度は、広く分布しているＭＨＣ分子（ＨＬＡ型）に、あるいは更に複数のＭＨＣ分子によって結合する免疫原性部分に関連付けることができる（Ｓｉｎｉｇａｇｌｉａ、１９８８；Ｋｉｌｇｕｓ、１９９１）。

結核に備えた新規のワクチンの候補分子を提供する文脈においては、しかしながら、準優性のエピトープは、強く、あるいは広範に認識されていないという事実にも拘らず防御を引き起こすことが示されている（Ｏｌｓｅｎ、２０００）ため、優性のエピトープと同程度に関連づけられる。

《変異体》
本発明のポリペプチドの共通の特徴は、実施例に示すように免疫学的応答を誘発する能力である。置換、挿入、付加又は削除により産生される本発明のポリペプチド変異体は更に、本明細書中に記載のアッセイのいずれかによって定量される免疫原性となりうることは理解すべきである。

《免疫個体》
免疫個体はヒト又は動物として定義され、病原性マイコバクテリアでの感染を排除又は制御しているか、あるいはマイコバクテリウム・ボビスのＢＣＧワクチンでのワクチン接種といった、予防的なワクチン接種を受けている。

［免疫応答］
免疫応答は下記の方法のうちの１つでモニタリングできる。

・生体外での細胞応答は、現在若しくは以前に病原性マイコバクテリアに感染しているか、あるいは関連するポリペプチドで免疫化した動物又はヒト由来のＩＦＮ−γなどの関連するサイトカインの放出の誘発、又は回収されたリンパ球における増殖の誘発によって定量される。誘発は１ウェルあたり２×１０^５の細胞数乃至４×１０^５の細胞数を含む懸濁液へのポリペプチド又はポリペプチドの免疫原性部分を添加によって行われる。細胞は血液、脾臓、肝臓、又は肺から単離し、ポリペプチド又は免疫原性部分の添加によって、懸濁液１ｍｌあたり２０μｇ以下の濃度を得て、刺激は２乃至５日間行われる。細胞増殖をモニタリングするために、細胞は放射活性物質で標識したチミジンで脈動して、１６乃至２２時間のインキュベーション後に液体シンチレーション測定によって増殖を検出する。陽性反応は２の標準偏差を加えたバックグラウンドより大きな反応と定義される。ＩＦＮ−γの放出はＥＬＩＳＡ法により定量され、それは当該技術分野の当業者に公知である。陽性反応は２の標準偏差を加えたバックグラウンドによりも大きな反応である。ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＴＧＦ−βといった、ＩＦＮ−γ以外の他のサイトカインは、ポリペプチドに対する免疫学的応答をモニタリングする場合に関連付けられうる。免疫応答を検出するための別の更に感度の高い方法はＥＬＩＳｐｏｔ法であり、細胞を産生するＩＦＮ−γの頻度が定量される。抗マウスＩＦＮ−γ抗体（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ社）で事前コーティングしたＥＬＩｓｐｏｔプレート（ＭＡＨＡ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）において、血液、脾臓、又は肝臓から単離した、計量した数の細胞（一般的には、１ウェルあたり１乃至４×１０^５の細胞数）は、１ｍｌあたり２０μｇ以下の濃度で得られたポリペプチド又は免疫原性部分の存在下で２４乃至３２時間インキュベートされる。次に、プレートはビオチン化抗ＩＦＮ−γ抗体でインキュベートされ、ストレプトアビジン−アルカリホスファターゼのインキュベーションが続く。ＩＦＮ−γ産生細胞は、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ（Ｓｉｇｍａ社）を添加することによって同定され、関連する基質はスポットを生じる。これらのスポットは解剖顕微鏡を用いて計数できる。更に、ＰＣＲ技術の使用によって、関連するサイトカインをコードするｍＲＮＡの存在を判定することが可能である。通常、１又はそれ以上のサイトカインは、例えばＰＣＲ、ＥＬＩＳＰＯＴ又はＥＬＩＳＡを用いて測定される。特異的なポリペプチドにより誘導されるこれらのサイトカインのうちのいずれかの量における有意な増加又は減少は、ポリペプチドの免疫学的活性の評価に用いることができることは、当業者によって理解されるであろう。

・生体外での細胞応答は更に、生存しているマイコバクテリア、前記細菌細胞からの抽出物、又はＩＬ−２を添加した１０乃至２０日間の培養濾液のいずれかでＴ細胞株を活性化した、免疫個体又はマイコバクテリウム・ツベルクローシスを誘発したヒト由来のＴ細胞株の使用によって定量される。誘発は、１ウェルあたり１×１０^５乃至３×１０^５の細胞数を含むＴ細胞株に、１ｍｌの懸濁液あたり２０μｇ以下のポリペプチド溶液を添加することによって行い、インキュベーションは２乃至６日間行う。ＩＦＮ−γの誘導又は他の関連するサイトカインの放出はＥＬＩＳＡにより検出される。Ｔ細胞の刺激は上述のように放射活性物質で標識したチミジンを用いて細胞増殖を検出することによりモニタリングできる。双方のアッセイについて、陽性反応は２の標準偏差を加えたバックグラウンドよりも大きな反応である。

・生体内の細胞応答は臨床的又は準臨床的に病原マイコバクテリウムに感染している個体に対する、最大１００μｇのポリペプチド又はポリペプチド免疫原性部分の皮内注射又は局所適用後のＤＴＨ反応により定量でき、陽性反応の直径は、注射又は適用後７２乃至９６時間で少なくとも５ｍｍである。

・生体外での体液性反応は、免疫個体又は感染した個体における特異的な抗体反応により定量される。抗体の存在はＥＬＩＳＡ法、あるいはニトロセルロース膜又はポリスチレンの表面にポリペプチド又は免疫原性部分を吸収させたウェスタンブロットによって定量される。血清は好適には、ＰＢＳで１：１０乃至１：１００に希釈し、吸収したポリペプチドに添加され、インキュベーションは１乃至１２時間行われる。標識した二次抗体の使用によって、特異的な抗体の存在はＯＤを測定することによって、例えば陽性反応が２の標準偏差を加えたバックグラウンドによりも大きな反応であるか、あるいは代替的にウェスタンブロットにおける視覚的反応であるＥＬＩＳＡによって定量できる。

・別の関連するパラメータはアジュバントにおけるポリペプチドでのワクチン接種後、又はＤＮＡワクチン接種後に誘発した動物モデルにおける防御の測定である。好適な動物モデルは霊長類、モルモット又はマウスを含み、病原性マイコバクテリアの感染で曝露される。誘発した防御の読取り値は、非ワクチン接種動物と比較した標的器官における細菌負荷の減少、非ワクチン接種動物と比較した長い生存期間、及び非ワクチン接種動物と比較した体重減少の低減である。

［調製方法］
一般的には、マイコバクテリウム・ツベルクローシスの抗原、及びこのような抗原をコードするＤＮＡ配列は様々な手順のうちのいずれか１つを用いて調製する。それらは、上述したような手順によってマイコバクテリウム・ツベルクローシスの細胞又は培養濾液から天然タンパク質として精製できる。免疫原性抗原は更に、発現ベクターに挿入し、好適な宿主に発現した、抗原をコードしたＤＮＡ配列を用いて組換え技術によって産生できる。宿主細胞の例は大腸菌である。そのポリペプチド又は免疫原性部分は更に、約１００未満のアミノ酸で、一般的には５０未満のアミノ酸で合成的に産生でき、アミノ酸が増殖中のアミノ酸鎖に順次添加される商業上利用可能な固相技術といった、当該技術分野における当業者に公知の技術を用いて産生できる。

ＤＮＡワクチン接種で規定されるように、ポリペプチドをコードするプラスミドＤＮＡの構築及び調整においては、大腸菌などの宿主菌株を用いることができる。プラスミドＤＮＡは次いで、対象のプラスミドを保有する宿主菌株の培養物から調製でき、例えばエンドトキシンの除去ステップを具えるＱｉａｇｅｎ Ｇｉｇａ−Ｐｌａｓｍｉｄカラムキット（米国カリフォルニア州サンタクラリタのＱｉａｇｅｎ社）を用いて、プラスミドＤＮＡの精製できる。ＤＮＡワクチン接種に用いたプラスミドＤＮＡは、エンドトキシンがないことが好適である。

［融合タンパク質］
免疫原性ポリペプチド更には融合タンパクとして産生でき、それの方法によって、本発明のポリペプチドの優れた特性が得られる。例えば、組換えで産生した場合にポリペプチドの輸送を促進する融合パートナー、ポリペプチドの精製を促進する融合パートナー、及び本発明のポリペプチド断片の免疫原性を強化する融合パートナーは、総て可能性のある対象である。従って本発明は更に、上に規定した少なくとも１のポリペプチド又は免疫原性部分と、少なくとも１の融合パートナーとを含む融合ポリペプチドに関する。免疫原性を強化するために、融合パートナーはマイコバクテリウム・ツベルクローシス由来の他のポリペプチド、例えば、ＥＳＡＴ−６、ＣＦＰ１０、ＥｓｐＡ、ＴＢ１０．４、ＲＤ１−ＯＲＦ５、ＲＤ１−ＯＲＦ２、Ｒｖ１０３６、ＭＰＢ６４、ＭＰＴ６４、Ａｇ８５Ａ（ＭＰＴ５９）、ＭＰＢ５９、Ａｇ８５Ｃ、１９ｋＤａリポプロテイン、ＭＰＴ３２及びαクリスタリン（ａｌｐｈａ−ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ）、又は上述の抗原のいずれかのＴ細胞エピトープといった結核菌群に属する細菌に由来するポリペプチド断片にできる（Ｓｋｊｏｔら、２０００；国際公開公報第０１７９２７４号；国際公開公報第０１０４１５１号；米国特許出願第０９／０５０５，７３９号；Ｒｏｓｅｎｋｒａｎｄｓら、１９９８；Ｎａｇａｉら、１９９１）。本発明は更に、本発明のポリペプチド（又はその免疫原性部分）のうちの２又はそれ以上の相互融合を含む融合ポリペプチドに関する。他の融合パートナーは、本製品の免疫原性を強化でき、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２及びＩＬ−１２といったリンホカインである。発現及び／又は精製を促進するために、融合パートナーは例えば：線毛成分のピリン（ｐｉｌｉｎ）とｐａｐＡ；タンパク質Ａ；ＺＺ−ペプチド（ＺＺ−融合剤はスウェーデンのＰｈａｒｍａｃｉａ社によって市販されている）；マルトース結合タンパク質；グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ；β−ガラクトシダーゼ；又はポリヒスチジン；といった細菌の線毛タンパク質にできる。融合タンパク質は宿主細胞における組換えで産生でき、大腸菌にでき、それは様々な融合パートナーとの間のリンカー領域を誘発する可能性がある。

他の対象の融合パートナーはポリペプチドであり、免疫原性ポリペプチドが免疫系において好適な方法で提示されるように脂質化される。この効果は、例えば国際公開第９６／４０７１８Ａ号に記載のようなボレリア・ブルグドルフェリのＯｓｐＡポリペプチドに基づいたワクチン又は緑膿菌Ｏｐｒｌリポタンパク質（Ｃｏｔｅ−Ｓｉｅｒｒａ Ｊ、１９９８）に基づいたワクチンで既知である。別の可能性は、既知のシグナル配列と免疫原性ポリペプチドのＮ末端システインのＮ末端融合である。適切な産生宿主で産生した場合、このような融合によってＮ末端システインで免疫原性ポリペプチドの脂質化が得られる。

［使用］
《ワクチン》
ワクチンは特定の疾病に対する免疫を確立又は改善する生物学的製剤である。ワクチンは、予防的（例えば、任意の天然型又は「野生型」の病原体によって将来の感染の作用を予防又は改善するために）、事後曝露的（例えば、臨床的な兆候がない潜伏感染した個体の再活性化を予防するために）、又は治療的（例えば、治療を短縮するために、単独で、あるいは抗生物質治療との組み合わせのいずれかで能動的な疾患を治療するために用いられるワクチン）にできる。

《潜伏性ＴＢ用の動物モデル》
マイコバクテリウム・ツベルクローシスで低度の潜伏感染を誘発するために、動物は最初に通常の用量のマイコバクテリウム・ツベルクローシス（肺において約１５０の細菌）を用いてエアロゾル感染を与える。感染の６週間後、動物は次いで、総てではないが殆どの細菌が根絶する６週間の準最適な化学療法的治療を与える。残余の細菌は潜伏感染を確立する。この化学療法的治療に続いて、一部の動物にワクチン接種して、ワクチンが化学療法的治療後５乃至１５週間に自然発生する、潜伏感染の再活性化を予防する能力を試験する。図２参照。

《タンパク質のワクチン》
本発明の別の部分は、ポリペプチド（又はその少なくとも１の免疫原性部分）あるいは本発明による融合ポリペプチドを含むワクチン組成物に関連する。このようなワクチン組成物の最適な効能を保証するために、免疫学的及び薬学的に許容される担体、賦形剤、又はアジュバントを含むことが好適である。

本発明のポリペプチドが動物によって認識される効果的なワクチンは、動物モデルにおいて非ワクチン接種動物と比べて、標的器官において細菌負荷を減少させ、生存期間を延長し、かつ／あるいは病原性マイコバクテリアによる曝露後の体重減少を低減できる。

好適な担体は例えばポリスチレン等のプラスチックといった疎水性で非共有結合性の相互作用によってポリペプチドが結合したポリマー、あるいはポリサッカライド又はウシ血清アルブミン、オボアルブミン若しくはキーホールリンペットヘモシアニン等のポリペプチドといった１又はそれ以上のポリペプチドが共有結合しているポリマーから成る群から選択される。好適な賦形剤は希釈剤及び懸濁剤からなる群から選択される。アジュバンドは好適にはジメチルオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡ）、Ｑｕｉｌ Ａ、ポリＩＣ、水酸化アルミニウム、フロイントの不完全アジュバント、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）、トレハロースジベヘナート及びムラミルジペプチド（ＭＤＰ）からなる群から選択される。活性成分としてペプチド配列を含むワクチンの調製は一般的には米国特許第４，６０８，２５１号、米国特許第４，６０１，９０３号、米国特許第４，５９９，２３１号、及び米国特許第４，５９９，２３０号に例示されているように当該技術分野の当業者に公知であり、総ては引用によって本明細書中に組み込まれている。

ワクチン用アジュバント効果を得る他の方法は、水酸化アルミニウム又はリン酸塩（ミョウバン）、糖の合成ポリマー（カーボポール）などの薬剤の使用を含み、熱処理によるワクチンにおけるタンパク質の凝集、アルブミンに対してペプシン処理した（Ｆａｂ）抗体で再活性化することによる凝集、クリプトスポリジウム・パルバムのような細菌細胞又はグラム陰性細菌のエンドトキシン若しくはリポ多糖成分との混合物、マンニドモノオレアート（Ａｒａｃｅｌ Ａ）といった生理学的に許容可能な油の賦形剤におけるエマルジョン、あるいはブロック置換体として用いた２０％のパーフルオロカーボン（Ｆｌｕｏｓｏｌ−ＤＡ）溶液とのエマルジョンを用いてもよい。他の可能性は、サイトカインといった免疫調節物質、又は上述のアジュバントと組合わせたポリＩＣといった合成ＩＦＮ−γ誘導剤の使用を含む。

アジュバント効果を得るための別の推定される対象は、Ｇｏｓｓｅｌｉｎら、１９９２に記載された技術を用いることである（引用により本明細書中に組み込まれている）。簡潔に言えば、本発明の抗原のような関連する抗原は、単球／マクロファージ上のＦｃγ受容体に対する抗体（又は抗原結合抗体断片）に接合できる。

ワクチンは投与形態に互換性のある方法で、かつ再活性化の予防において免疫原性及び有効となるような量で投与される。投与すべき量は治療すべき対象に依存し、例えば、免疫応答を開始できる個体の免疫系の能力、所望の防御の度合を含む。適切な用量範囲はワクチン接種あたり数１００μｇ程度の有効成分であり、好適な範囲は約０．１μｇ乃至１０００μｇ、例えば約１μｇ乃至３００μｇの範囲であり、特に１０μｇ乃至５０μｇの範囲である。初期投与及び追加投与に好適な投与計画は更に可変であるが、初期投与と、それに続く更なる接種又は他の投与とによって類型化されている。

適用の方法は広範に変化させることができる。ワクチン投与のための従来の方法のいずれかは適用可能である。これらは生理学的に許容可能な固形基剤若しくは生理学的に許容可能な分散剤の経口適用、非経口投与、又は注射等を含む。ワクチンの投与量は投与経路に依存し、ワクチン接種すべきヒトの年齢、わずかな度合では投与すべきヒトの大きさに応じて変わる。

ワクチンは従来、エアロゾル又は吸入等により肺内へ、非経口で、あるいは皮下又は筋内等のいずれかでの注射によって投与される。他の投与様式に好適な更なる製剤は、坐剤と、場合によっては経口製剤とを含む。坐剤については、従来の結合剤及び担体は、例えばポリアルキレングリコール又はトリグリセリドを含むことができ、このような坐剤は０．５％乃至１０％、好適には１％乃至２％の範囲で活性成分を含む混合物で形成できる。経口製剤は、例えば医薬グレードのマンニトール、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、及び炭酸マグネシウム等として通常用いられる賦形剤を含む。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性製剤又は粉末の形態をとり、１０乃至９５％、好適には２５乃至７０％の活性成分を含む。

多くの例では、ワクチンは複数の投与が必要となる。個体がすでに感染している又は感染したと疑われる例では、前回のワクチン接種が、原疾患を予防するのに十分な免疫を提供しうるが、前述したように、この免疫応答を追加免役することは潜伏感染に対して役に立たない。このような状況においては、ワクチンは必要に応じて潜伏期の感染及び再出現した能動的な結核感染に対し有効に設計された曝露後ワクチンにしなければならない。

遺伝的多様性により、様々な個体が同一のポリペプチドに対して強度を変えた免疫応答で反応させることができる。従って、本発明によるワクチンは免疫応答を増加させるためにいくつかの異なるポリペプチドを含むことができる。ワクチンは、２又はそれ以上のポリペプチド又は免疫原性部分を含むことができ、総てのポリペプチドが上に規定した通りであるか、あるいは、総てではなく、一部のポリペプチドは病原性マイコバクテリア由来にできる。後者の例では、上述のポリペプチドの基準を必ずしも満たす必要はないポリペプチドは、自己免疫原性に起因する作用をするもの、単なるアジュバントとしてのみ作用するものであってもよい。

ワクチンは１乃至２０、例えば２乃至２０、又は更に３乃至２０の異なるポリペプチド、又は融合ポリペプチド、例えば、３乃至１０の異なるポリペプチド又は融合ポリペプチドを含むことができる。

《ＤＮＡワクチン》
本発明の核酸断片は、抗原の生体内発現に影響を与えるために用いることができる。すなわち、核酸断片は、Ｕｌｍｅｒら、１９９３により概説されるようにいわゆるＤＮＡワクチンに用いることができ、引用によって含まれている。従って、本発明は更に、本発明の核酸断片を含む曝露後ワクチンにも関連しており、そのワクチンは、ワクチンを投与したヒトを含む動物によって抗原の生体内発現に影響を与え、発現した抗原の量は、ヒトを含む動物において病原性マイコバクテリアによって引き起こされる感染を治療するのに有効である。このようなＤＮＡワクチンの有効性は、ＤＮＡ断片が免疫応答を調節する能力のあるポリペプチドをコードするのと一緒に、発現産物をコードする遺伝子を投与することによって場合によっては高めることができる。

《組換え生ワクチン》
曝露後ワクチンの細胞性免疫応答を効果的に活性化するための１の可能性は、非病原性の細菌又はウィルスに、ワクチン中の関連する抗原を発現させることによって得ることができる。このような細菌の公知例としては、マイコバクテリウム・ボビスＢＣＧ、サルモネラ及びシュードモナスであり、ウイルスの例としては、ワクシニアウイルス、及びアデノウイルスである。従って、本発明の別の重要な態様は、現在利用可能なＢＣＧ生ワクチンの改良であり、上に規定のような１又はそれ以上のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列の１又はそれ以上のコピーは、細菌がポリペプチドを発現及び分泌できる方法で細菌のゲノムに組み込んでいる。本発明のヌクレオチド配列の２以上のコピーの組込みは、免疫反応の強化を予期するものである。別の可能性は、ワクシニアウイルス又はアデノウイルスなどの弱毒ウイルス内に本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡを組み込むことである（Ｒｏｌｐｈら、１９９７）。組換えワクシニアウイルスは、感染した宿主細胞の細胞質内で増殖でき、ひいては対象のポリペプチドは免疫応答を誘発でき、ＴＢに備えて防御を誘発することが想定される。本出願で引用した総ての特許文献及び非特許文献はその全体が引用によってここに組み込まれている。本発明を、以下の非限定的な実施例で更に詳細に説明する。

図１は、実質的に３段階を経る結核菌の感染経過である。 図２は、再活性化を予防するための曝露後ワクチン接種のモデルである。 図３は、ＴＢのワクチン接種モデルである。モデルの概要図は、曝露後のワクチンのテストのためにＳＳＩで用いている。マウスは、エアロゾル経路によって病原性のマイコバクテリウム・ツベルクローシスに感染させる。感染後６週乃至１２週のマウスは抗生物質で治療して、潜伏性ＴＢの状態を確立する。マウスは曝露後ワクチン候補で３週間隔で２又は３回接種し、感染１０週後に開始される。マウスは疾病を再活性する時間を与えられ、約２０週間後に肺は細菌数が評価されて、ワクチンの防御効果を評価する。 図４は、ＥＳＡＴ６によって防御を誘発するがＡｇ８５では誘発しない曝露後ワクチンである。マウスは実施例１の概略図に従って、感染、治療、及びワクチン接種した。マウスは感染後３０乃至４０週に処分し、この時点で肺は細菌負荷（図Ａ、Ｃ乃至Ｅ）について評価し、あるいは、図４Ｂに示すようにＥＳＡＴ６について感染の複数の時点において細菌負荷を定量した。（図Ａ及びＢ）ワクチン接種したＥＳＡＴ６の細菌数は対照動物と比較した。（Ｃ）ワクチン接種したＡｇ８５Ｂの細菌数を対照動物と比較した。（Ｄ）ワクチン接種したＥＳＡＴ−６のペプチド混合物（ＥＳＡＴ６配列全体をカバーする重複するペプチドを統合）の細菌をＡｇ８５Ｂワクチンを接種した動物と対照動物の両方と比較した。（Ｅ）Ａｇ８５Ｂ−ＥＳＡＴ−６（Ｈ１）ワクチンを接種した曝露後ワクチン接種後の再活性化に対する防御を非接種対照マウスと比較した。図４Ａ、Ｃ乃至Ｅの総てのデータは、平均値で示すと共に個々の動物を示すドットプロットとして表示されており、一方で図４Ｂの各時点は、６個体の動物を表しており平均値を平均値±標準誤差（ＳＥＭ）で表示している（Ｂ）。総ての統計分析は、独立ｔ検定（図Ａ乃至Ｃ及びＥ）、又はＴｕｋｅｙの多重比較検定（図Ｄ）を用いて行い、ｐ＜０．０５を考慮すべき有意差とした。 図５は、多機能性Ｔ細胞を誘発するＥＳＡＴ６曝露後ワクチン接種である。ワクチン非接種の、あるいはＥＳＡＴ−６でワクチン接種した動物の感染した肺の細胞は、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８、抗ＩＦＮ−γ、抗ＴＮＦ−α及び抗ＩＬ−２で染色する前に、ＥＳＡＴ−６で生体外刺激した。（図Ａ及びＢ）：サイトカインプロファイルはＣＤ４Ｔ細胞を、ＩＦＮ−γ陽性（＋）又はＩＦＮ−γ陰性（−）に分けることにより定量した。ＩＦＮ−γ＋とＩＦＮ−γ−との双方の細胞をＴＮＦ−α及びＩＬ−２の産生によって分析した。円グラフは（図Ａ及びＢ）はサイトカイン産生プロファイルによって色分けされており、所定のサイトカイン産生プロファイルについて陽性であるＣＤ４^＋Ｔ細胞応答の分画をまとめている（ＥＳＡＴ−６に特異的なＣＤ４Ｔ細胞以外）。（Ｃ）サイトカインの総ての可能な組み合わせは棒グラフのＸ軸に示されており、非ワクチン接種マウス（灰色のバー）及びサイトカインの任意の組み合わせを発現しているＥＳＡＴ−６ワクチンを接種したマウス（黒バー）におけるＥＳＡＴ−６に特異的なＣＤ４^＋Ｔ細胞の割合を各免疫群について示す。（Ｄ）潜伏感染したマウスはＥＳＡＴ−６を２回ワクチン接種して、最後のワクチン接種後２０週で肺の細菌数を評価して、防御効力を定量した。（^＊＊Ｐ＜０．０１、一方向分散分析（ＡＮＯＶＡ）式のＴｕｋｅｙの多重比較検定）。 図６は、総ての曝露後実験の統合分析である。ＥＳＡＴ６、Ｒｖ３８７１、Ａｇ８５Ｂ、Ｒｖ３９０５、Ｒｖ３４４５、Ｒｖ０５６９又はＲｖ２０３１ｃ（図Ａ）、Ａｇ８５Ｂ−ＥＳＡＴ６（Ｈ１）あるいはＡｇ８５Ｂ−ＥＳＡＴ６−Ｒｖ２６６０（Ｈ５６）（図Ｂ）のいずれかを曝露後のワクチン接種に用いた各実験について、アジュバント対照群の細菌負荷の中央値を、上述の抗原のいずれか１つでワクチン接種したワクチン接種群の各々の個々のマウスの細菌負荷と比較した。図ＡとＢでは、各ドットは防御レベル、すなわちアジュバント対照群と比較していたワクチン接種によって与えられたΔＬｏｇ１０ＣＦＵの値に対応しており、いくつかの独立した実験からなる。ＥＳＡＴ６単独の場合と比較した、単独抗原であるＥＳＡＴ６、Ｒｖ３８７１、Ａｇ８５Ｂ、Ｒｖ３９０５、Ｒｖ３４４５、Ｒｖ０５６９又はＲｖ２０３１について（Ａ）、あるいはハイブリッド抗原であるＨ１とＨ５６についてのＬｏｇ１０防御である。統計分析を適用して、Ｋｒｕｓｋａｌｌ−Ｗａｌｌｉｓ多重比較検定を用いて異なるグループ間の中央値を比較した。ｐ＜０．０５を有意と見なした。 図７は、ＥＳＡＴ６及び対照動物と比較した、Ｒｖ３８７１での曝露後ワクチン接種の効果である。マウスは感染、治療し、感染後１０、１３及び１８週にワクチン接種した。感染後３６週でマウスを処分して、ワクチン接種マウス及び非接種生理食塩水対照マウスの肺のリンパ球を生体外でＲｖ３８７１（図７Ａ）又はＥＳＡＴ６（図７Ｂ）を用いて再刺激した。ＥＬＩＳＡ及び試料により評価したＩＦＮ−γの放出は３回行われた。データは平均値±ＳＥＭで示されている。ワクチンにより与えられた防御効力を全肺ホモジネートから培養したバクテリアの計数により評価した（ｎ＝１６乃至１８）。データはドットプロットにより表示され各ドットは個々の動物を表しており中央値で描かれている（赤線）。

［実施例１］
《ワクチン接種用のマウス結核モデル》
コーネルモデルは潜伏性ＴＢの研究用マウスモデルとして広く用いられている。このモデルは、再活性化を予防するワクチン候補の能力の試験用に我々の研究室で適用した。マウスは最初にエアロゾルにより病原性のマイコバクテリウム・ツベルクローシスに感染させ、そして感染後６週間で抗生物質治療を始めて細菌負荷を減らす。これは、マウスに自発発生しないヒト感染の潜伏期を模倣するためである。この潜伏期（細菌数が連続して低いステージ）の間、マウスを２回免疫し、ワクチンによる再活性化を予防する能力は、最後の免疫から２０週後に脾臓と肺の生きたマイコバクテリウム・ツベルクローシスを培養することにより定量する。実験の長いスパンは、ワクチン効果の読み出しの必要条件である疾患の再活性化に十分な時間を与えるために必要である（図３）。

［実施例２］
《ＥＳＡＴ６により防御を誘発するが、Ａｇ８５により防御を誘発しない曝露後ワクチン》
ＥＳＡＴ−６及びＡｇ８５Ｂは単一成分として、更にＡｇ８５Ｂ−ＥＳＡＴ６（Ｈ１）の融合タンパクとしての双方で、防御的であることが証明されている。しかし、これらの抗原は曝露後モデル（実施例１で上述したように）で試験すると、ＥＳＡＴ６のみが防御効果があり、再活性期中の細菌増殖を制御する（図４）。更に、図４Ｂに示すように感染後１８週間程度の早さで、再活性の防御自体が顕在化し、この防御は実験期間中（感染後４０週まで）維持された。これは対照と比較して細菌負荷の有意な減少がなかったＡｇ８５Ｂを曝露後ワクチンとして用いた場合に観察されるものとは対照的である（図４Ｃ及びＤ）。更に、我々はＴＢ抗原Ａｇ８５Ｂ及び予防的設定で有望な有効性を示したＥＳＡＴ−６で構成されるＨ１融合タンパク質を評価した。この分子は、ＳＳＩ曝露後モデルにおいて曝露後ワクチンとして用いられた場合、有意に細菌数を減少させることができた（図４Ｅ）。

［実施例３］
［ＥＳＡＴ６ペプチド混合物の曝露後ワクチンにより誘発される防御］
上述の実施例で示したように、ＥＳＡＴ−６分子は曝露後に投与された場合、非常に活性があり、対照群と比較して、かつ更にＡｇ８５Ｂと比較して細菌負荷が減少する。更に、我々は組換えタンパク質の代わりに、重複するペプチドの統合物として与えたＥＳＡＴ−６が更に、対照群やＥＳＡＴ６の強い活性及び曝露後ワクチンとして機能する能力を示すＡｇ８５Ｂの両方と比較して、再活性に対して更に良好な防御となることを示した。

防御実験に使用した重複するＥＳＡＴ−６のペプチド（Ｐ１乃至Ｐ１３）：
Ｐ１ ＭＴＥＱＱＷＮＦＡＧＩＥＡＡＡ （配列番号１９）
Ｐ２ ＮＦＡＧＩＥＡＡＡＳＡＩＱＧＮ （配列番号２０）
Ｐ３ ＡＳＡＩＱＧＮＶＴＳＩＨＳＬＬ （配列番号２１）
Ｐ４ ＮＶＴＳＩＨＳＬＬＤＥＧＫＱＳ （配列番号２２）
Ｐ５ ＳＬＬＤＥＧＫＱＳＬＴＫＬＡＡ （配列番号２３）
Ｐ６ ＫＱＳＬＴＫＬＡＡＡＷＧＧＳＧ （配列番号２４）
Ｐ７ ＡＡＷＧＧＳＧＳＥＡＹＱＧＶＱ （配列番号２５）
Ｐ８ ＧＳＥＡＹＱＧＶＱＱＫＷＤＡＴ （配列番号２６）
Ｐ９ ＱＱＫＷＤＡＴＡＴＥＬＮＮＡＬ （配列番号２７）
Ｐ１０ ＴＡＴＥＬＮＮＡＬＱＮＬＡＲＴ （配列番号２８）
Ｐ１１ ＡＬＱＮＬＡＲＴＩＳＥＡＧＱＡ （配列番号２９）
Ｐ１２ ＴＩＳＥＡＧＱＡＭＡＳＴＥＧＮ （配列番号３０）
Ｐ１３ ＱＡＭＡＳＴＥＧＮＶＴＧＭＦＡ （配列番号３１）

［実施例５］
《多機能性Ｔ細胞を誘発するＥＳＡＴ−６での曝露後ワクチン接種》
ＥＳＡＴ−６に特異的な細胞のサイトカイン発現プロファイルでのＥＳＡＴ−６による曝露後ワクチンの効果を実験するため、マウスは最初にエアロゾル病原性のマイコバクテリウム・ツベルクローシスに感染させ、感染後６週間での抗生物質治療を開始して細菌負荷を減少させ潜伏感染を確立させた。潜伏期中に３週間の間隔で３回ワクチンを接種し（図３に示すように）、ＥＳＡＴ−６ワクチンが多機能性Ｔ細胞の数に影響し、マイコバクテリウム・ツベルクローシスの再活性を予防する能力は最後のワクチン接種から２０週間後に定量した。結果は、非接種群では相応のＥＳＡＴ−６に対する反応があるが、サイトカインの発現プロファイルはＥＳＡＴ−６ワクチン接種群と比較して特に多機能性Ｔ細胞の点で著しく異なる（ＩＦＮ−γ＋／ＴＮＦ−α＋／ＩＬ−２＋ＣＤ４細胞）ことを示していた（図５）。従って、非接種群と比較して、ＩＦＮ−γ／ＴＮＦ−αのＣＤ４Ｔ細胞数の減少と、ＩＦＮ−γ／ＴＮＦ−α／ＩＬ−２を共に発現している３重に陽性の多機能性ＣＤ４Ｔ細胞数の増加を観察した。ＥＳＡＴ−６ワクチンを接種した動物の肺で、増加した多機能Ｔ細胞の存在が減少した細菌数と相関していた（図５Ｄ）。

［実施例６］
《初期及び後期段階の感染に関連する他の抗原に比較して、更に一貫して再活性化を予防するＥＳＡＴ６での曝露後ワクチンの接種》
どの抗原が一貫して再活性化を防御するかを決定するため、実施した総ての曝露後の実験に基づいて規格化したデータの統合解析を行った。個々の実験のデータセットは、１のグループ内の個々のマウスの細菌数を対照群の細菌数の中央値と比較することで標準化した。すなわち各データポイントは、対照群の中央値ＣＦＵと個々の動物のＣＦＵの差（Ｌｏｇ１０ＣＦＵ対照の中央値−Ｌｏｇ１０ＣＦＵワクチン群）を表している（図６）。図６Ａにおいては、潜伏期に関連する抗原Ｒｖ０５６９、Ｒｖ２０３１ｃとＡｇ８５Ｂ、ＥＳＡＴ６、Ｒｖ３８７１、Ｒｖ３９０５及びＲｖ３４４５であり、後者の２つはＥＳＡＴ６ファミリーである初期抗原とについての統合したデータの比較によって、他の抗原の評価と比較してＥＳＡＴ６ワクチン接種動物が、顕著に良好に防御されていることを示している。更に、防御レベルはＲｖ３８７１での曝露後ワクチン接種後に到達し、ＥＳＸ−１タンパクは更に他の抗原と比較して上昇しているように見える（図６Ａ）。更に、特にＥＳＡＴ６の活性を示すために、我々はＥＳＡＴ６により与えられる防御を、どちらもＥＳＡＴ６を含んでいる２つの融合構造物であるＨ１（Ａｇ８５Ｂ−ＥＳＡＴ６）とＨ５６（Ａｇ８５Ｂ−ＥＳＡＴ６−Ｒｖ２６６０）と比較した（図６Ｂ）。分析によって、上述の２つの融合構造物が含まれている場合に再活性化に対する防御におけるＥＳＡＴ６の活性が得られることを示した。

［実施例７］
《再活性化のプロセスの阻害効果があると思われるＥＳＸ−１ファミリーの他のメンバーであるＲｖ３８７１での曝露後ワクチン接種》
我々はＥＳＡＴ６と並行してＥＳＸ−１ファミリーの他のメンバーを評価し、ＥＳＡＴ６で誘発される免疫応答ほどではないものの（図７Ａ）、Ｒｖ３８７１での曝露後ワクチン接種はＲｖ３８７１に特異的な免疫応答（図７Ｂ）を誘発をすることを見出した。それにもかかわらずＥＳＡＴ６とＲｖ３８７１で誘発された免疫応答は両方共、生理食塩水対照動物に比べて大きかった。ワクチンに特異的な免疫応答の誘発は、生理食塩水群と比較して、両方のワクチン群における細菌負荷の低下（中央値）と関連していた。このことは、Ｒｖ３８７１がＥＳＡＴ６と比較した再活性化に対して同様の防御効果が、細菌数が対照群においてレベルがある程度上昇したのと比較して、これら２つの群で同程度の細菌数レベルによって示されたことを意味する（図７Ｃ）。

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Claims (14)

1. 潜伏感染した個体に投与されかつ結核の再活性を予防するワクチン又は免疫原性組成物であって、前記ワクチン又は免疫原性組成物がマイコバクテリウム・ツベルクローシスの感染中に恒常的に発現している抗原ポリペプチド又は当該抗原をコードする核酸を含み、前記ワクチン又は組成物が、ＩＣ３１又はポリＩ：Ｃを有する又は有さないＤＤＡ／ＴＤＢを具えるアジュバントをさらに含み、
   前記恒常的に発現している抗原ポリペプチドが、ＥＳＸ−１分泌系に属し、かつ：
   ｉ）配列番号４；及び
   ｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、かつ同時に免疫原性であるアミノ酸配列の類似体；
   からなる群から選択されることを特徴とするワクチン又は組成物。
2. 請求項１に記載のワクチン又は組成物が、配列番号２、３、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、３２、３３及び３４またはこれらの免疫原性部分からなる群から選択される少なくとも１つの追加の抗原ポリペプチドを含むことを特徴とするワクチン又は組成物。
3. 請求項１に記載のワクチン又は組成物において、前記抗原ポリペプチドがマイコバクテリア科の細菌によって発現した抗原と融合した融合パートナーであることを特徴とするワクチン又は組成物。
4. 請求項３に記載のワクチン又は組成物において、前記融合パートナーが恒常的に発現している抗原であることを特徴とするワクチン又は組成物。
5. 請求項１乃至４のいずれか１項に記載のワクチン又は組成物が：
   マイコバクテリアの遺伝子を発現する細菌又はウイルスから選択される遺伝子改変生物である組換え生ワクチンから選択される追加の送達系；あるいは
   配列番号２、３、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、３２、３３及び３４またはこれらの免疫原性部分からなる群から選択される抗原ポリペプチドをコードする遺伝子又は遺伝子断片を発現するプラスミドであるＤＮＡワクチン、又はタンパク質自体若しくはアジュバント等の送達系で送達される前記タンパク質自体に由来する合成ペプチドであるタンパク質ワクチンから選択される免疫原性送達系；
   を更に含むことを特徴とするワクチン又は組成物。
6. 請求項１乃至５のいずれか１項に記載のワクチン又は組成物において、前記抗原ポリペプチドがポリペプチドの自己アジュバント効果を可能にするよう脂質化されていることを特徴とするワクチン又は組成物。
7. 請求項１乃至５のいずれか１項に記載の、潜伏結核の治療用のワクチン又は組成物。
8. マイコバクテリウム・ツベルクローシス、マイコバクテリウム・アフリカヌム、又はマイコバクテリウム・ボビスから選択される病原性マイコバクテリアによって引き起こされる結核感染の再活性に備えた、ヒトを含む動物の治療用の薬剤の製造のための請求項１乃至５のいずれか１項に記載のワクチン又は免疫原性組成物の使用。
9. 請求項８に記載の使用において、前記ワクチン又は免疫原性組成物が急性感染期後に、及び／又は、潜伏感染期中に投与されることを特徴とする使用。
10. 請求項８に記載の使用において、前記使用が病原性マイコバクテリアに潜伏感染している対象を同定するステップを具えることを特徴とする使用。
11. 請求項１０に記載の使用において、病原性マイコバクテリアに潜伏感染している前記対象がマントーツベルクリン皮膚試験（ＴＳＴ）、クァンティフェロン試験、ＨＢＨＡに対する反応の生体外での検出、又は恒常的に発現している抗原による刺激後のＩＰ１０の検出から選択される診断使用で同定されることを特徴とする使用。
12. マイコバクテリウム・ツベルクローシス、マイコバクテリウム・ボビス、及びマイコバクテリウム・アフリカヌムから選択される結核菌群の種によって引き起こされる潜伏感染の再活性化に備えるワクチン又は免疫原性組成物の製造用の抗原ポリペプチドの使用であって、
    前記抗原ポリペプチドが、ＥＳＸ−１分泌系に属し、かつ：
    ｉ）配列番号４；及び
    ｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、かつ同時に免疫原性であるアミノ酸配列の類似体；
    からなる群から選択されることを特徴とする使用。
13. 請求項１２に記載の使用において、前記ワクチン又は組成物が急性感染期後、及び／又は潜伏感染期中の投与用であることを特徴とする使用。
14. 請求項１２又は１３に記載の使用において、前記ワクチン又は組成物が、配列番号２、３、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、３２、３３及び３４またはこれらの免疫原性部分からなる群から選択される少なくとも１つの追加の抗原ポリペプチドを含むことを特徴とする使用。

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