JP6281855B2 - 後発酵茶由来の血圧上昇抑制作用を有する剤並びにそれを含む飲食品及び医薬 - Google Patents
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Description
現在、高血圧の治療薬として、利尿剤、カルシウム拮抗剤、交感神経抑制剤、血管拡張剤及びアンギオテンシン変換酵素阻害剤といった降圧剤が広く用いられているが、腎機能悪化、血管浮腫、糖・脂質代謝への悪影響及び心臓への負担といった副作用を起こすことが少なからず報告されている。
一方、健康志向、そして安全志向の高まりとともに、健康によい影響を与えるとされる食品や特定保健用食品(いわゆる「特保」)が、注目を集めるようになってきた。古くから飲用されるお茶には、さまざまな有効成分が含まれているとされ、血管内皮由来の血管弛緩因子(NO及びEDHF等)を活性化することにより血管平滑筋を弛緩させて血圧を低下させる杜仲茶配糖体、血圧上昇に関わるアンギオテンシン変換酵素を阻害するペプチド類、及び血圧低下作用を示すアミノ酪酸(GABA)といったお茶由来の成分が血圧の低下に効果的であることが認められている。また、お茶はこの他にも体脂肪低下や動脈硬化予防など多様な効果・効能を持つことも知られている。
例えば、発酵した茶の利用として、特許文献1には、茶を好気的発酵した後に嫌気的発酵して得られたものの水系溶媒抽出物を有効成分とする酸化抑制及びコレステロール抑制組成物が開示されている。
また、特許文献2には、発酵茶を水性液体で抽出し、得られた抽出物をさらに有機溶媒で抽出して得た発酵茶抽出残渣を有効成分とする糖尿病用組成物が開示されている。
しかしながら、後発酵茶を熱水で抽出したものの有機溶媒抽出物を有効成分とする血圧上昇抑制のための剤及び当該剤を含有する飲食品や医薬については知られていなかった。
ことのない安全な、血圧上昇抑制作用を有する剤並びに当該剤を含む飲食品及び医薬を提供することにある。
のことを言い、例えば、生の茶葉を炒るあるいは蒸した後に好気的に発酵させたプーアル茶や、生の茶を蒸した後に好気的に発酵させ、その後さらに嫌気的に発酵させた碁石茶などが挙げられる。
他にも日本古来の好気発酵のバタバタ茶(富山)、碁石茶と同じ製法の天狗黒茶(愛媛)、嫌気発酵のみの阿波番茶(徳島)などが伝承されて残っている。
以下、本発明の剤の製造方法について説明する。
もの(学名:C. sinensis var. assamica)があるが、何れを使用してもよい。中でも、
日本で一般的な低木の茶を特に制限なく用いることができる。
一段階目の発酵処理としては好気的発酵を行う。具体的には、茶葉を高湿下で静置することにより行われる。例えば、茶葉を容器に入れ、湿度を保つために水や蒸汁を散布した上でカバーをかけ、常温で5〜10日間程度静置することにより行われる。その間、適度な温度や湿度を保つことが必要であり、茶葉の状態等を確認しつつ、発酵条件を適宜調節する。また、好気的発酵を行う際に、手で押さえたり、又は、足で踏むなどして適度な圧力をかけてもよい。さらに、好気的発酵に適する好気的細菌又は真菌を添加してもよいが、これらを添加しない場合においても、茶葉自身の酸化酵素や自然に存在する細菌等により発酵は進行する。
と、血圧上昇を抑制するための他の剤等とを併用してもよい。
抽出物原料である後発酵茶の酢酸エチルエキスは、以下の通り製造した。
50gの碁石茶茶葉を500mLのDDWに加え、120℃で20分間加熱し、茶葉をろ過して抽出液を得た。得られた抽出液に等量のヘキサンを加え、室温で3時間撹拌した。分液ロートを用いてヘキサン相と水相を分離し、水相に等量の酢酸エチルを加えて室温で12時間撹拌した。分液ロートを用いて酢酸エチル相と水相を分離し、酢酸エチル相をエバポレーターで完全に乾燥させた。酢酸エチル相の乾燥重量を測定後、10mg/mlとなるようにDDWに溶解して酢酸エチルエキスとした。
また、プーアル茶茶葉についても同様の条件及び工程で酢酸エチルエキスを得た。
ラット大腿動脈の内皮細胞を除去した血管平滑筋標本を用いて、血管平滑筋の微細張力を測定する飯塚らの方法(Iizuka et al., InsP3, but not novel Ca2+ releasers, contributes to agonist-initiated contraction in rabbit airway smooth muscle, J. Physiol., 1998 Sep 15; 511(Pt 3): 915-33)により、プーアル茶(一段発酵茶)及び碁石茶(二段発酵茶)の各溶媒分画エキスの血管平滑筋弛緩作用の測定を行った。
まず、血管平滑筋組織としてラット大腿動脈平滑筋を使用した。摘出した大腿動脈を短冊状に切り出し、血管内皮細胞と結合組織を取り除き張力測定装置にセットした。血管平滑筋組織の弛緩には正常細胞外液(NES)を用いた。また、収縮には155mMのカリウムを含む高カリウム細胞外液(KES)を用いた。以下の手順で血管平滑筋組織を弛緩・収縮させ、図1に示すチャートの1〜4の各時点における張力を測定した。
(1)平滑筋組織の張力を安定させるために、細胞外液をKESに交換し3分間収縮させ、その後NESに交換し弛緩させた。この操作を3回繰り返して完全に弛緩させた。この時点の張力を「1.基準」とする。
(2)細胞外液をKESに交換し、平滑筋の持続性の収縮が安定したら、細胞外液に各溶媒分画エキス(10mg/ml)を4μL又は12μL添加して張力の変化を観察した。持続性の収縮が安定した時点の張力を「2.前収縮」とし、各溶媒分画エキス添加後の張力を「3.弛緩」とする。
(3)細胞外液を各溶媒分画エキスが添加されていない別のKESに交換し、張力の変化を観察した。この時点での張力を「4.後収縮」とする。
(4)各溶媒分画エキスについて(2)及び(3)を行い、張力の変化を観察した。
平滑筋組織の張力変化を表すT値は以下の計算式に基づき計算した。
T値=([3.弛緩]−[1.基準値])/{([2.前収縮]+[4.後収縮])/2−[1.基準値]}
T値が1以上の場合には収縮効果があることを意味し、1以下の場合には弛緩効果があることを意味する。
結果を図2に示す。
ラット大腿動脈の内皮除去血管平滑筋を用いて、プーアル茶の酢酸エチル分画エキス、碁石茶の酢酸エチル分画エキス及びGABA含有緑茶(製品名:ナチュラルケア、大正製薬)を累積的に添加した場合の血管平滑筋弛緩作用を飯塚らの方法により測定した具体的には、血管内皮を除去したラットの大腿動脈の血管平滑筋に、プーアル茶と碁石茶の酢酸エチル分画エキス(10mg/ml)をそれぞれ4μlずつ5分おきに累積添加した。一方で、GABA含有緑茶(ナチュラルケア)を4μlずつ加算投与した。結果を図3に示す。
末梢血管に直接作用する降圧剤である塩酸ヒドララジンと碁石茶の酢酸エチル分画エキスの血管平滑筋弛緩作用を試験例1と同様の手順で測定し、比較を行った。塩酸ヒドララジンは、作用機序は不明であるが、臨床において動脈の平滑筋を弛緩することにより、末梢の血管を拡張させ、血圧を下げる降圧剤として知られている。
動物における血圧上昇抑制作用を検証するために、雄性高血圧自然発症ラット(SHR)を用いた連続投与試験による非観血式血圧測定を行った。具体的には、試料として、プーアル茶(一段発酵茶)及び碁石茶(二段発酵茶)の酢酸エチル分画エキス、GABA含有緑茶(製品名:ナチュラルケア、大正製薬)を用い、コントロールとしてDDWを用いて、以下の方法により行った。それぞれ一群につき6匹のSHRに対し、6週齢目より胃ゾンデを用いて熱水抽出物エキス(10mg)を経口投与し、さらに13週齢目よりプーアル茶と碁石茶それぞれの酢酸エチル分画エキス、GABA含有緑茶及びDDWをそれぞれ1mgずつ経口投与した。血圧測定は、午前中に非観血式自動血圧測定装置BP−98A(株式会社Softron製)を用いて、保定温度38℃でtail-cuff法にて収縮期及び拡張期血圧を各群1匹につき3回ずつ測定した。結果を図5に示す。
動物における血圧上昇抑制作用を検証するために、雄性高血圧自然発症ラット(SHR)を用いた単回投与試験による非観血式血圧測定を行った。具体的には、試料として、プーアル茶(一段発酵茶)及び碁石茶(二段発酵茶)の酢酸エチル分画エキスを用いて、以下の方法により行った。それぞれ一群につき4匹の21週齢SHRにおいて、試料投与前の収縮期及び拡張期血圧をBP−98A血圧計(株式会社Softron製)にて各6回測定し
た。続いて、胃ゾンデによりプーアル茶と碁石茶の酢酸エチル分画エキスをそれぞれ1mgずつ経口投与し、投与後4、8、24及び28時間目の収縮期血圧を測定した。結果を図6に示す。
正常ウィスターラットを用いた観血式血圧測定を行った。具体的には、24週齢の正常ウィスターラットをウレタン麻酔し、気道確保後、頸動脈に留置したカニューレを動物用ディスポ血圧トランスジューサに接続し、Quad Bridgeアンプを介することで、血圧変化
を電圧変化に変換した。血圧の測定及び記録はADINSTRUMENTS社のPowerLabシステムを使
用した。変換された電圧はADコンバーターPowerLab 4/25により1/100秒間隔でデジ
タルデータとしてコンピューターに記録した。記録されたデータは、水銀血圧計を用いて測定した圧力の実測値を基準としてmmHgに校正した。碁石茶の酢酸エチル分画エキス(10mg/ml)を生理食塩水にて1/1000倍希釈、1/100倍希釈、1/10倍希釈したもの、及び原液をそれぞれ30分おきに0.1 ml大腿静脈に投与し、投与
後、10分の収縮期及び拡張期血圧を測定した。測定したチャートとデータを図7に示す。
碁石茶(高知県)、天狗黒茶(愛媛県)、阿波番茶(徳島県)、バタバタ茶(富山県)及びプーアル茶の酢酸エチル分画エキスを製造例1と同様の方法で調製し、それぞれの血管平滑筋弛緩作用を試験例1と同様の手順で測定し、比較を行った。
碁石茶、プーアル茶、阿波番茶、バタバタ茶及び天狗黒茶のそれぞれの酢酸エチル分画エキスについて、ACE kit-WST(同仁化学)を用いてACE阻害活性測定を行った。ポジ
ティブコントロールとしては臨床で使用されているAlaceprilを用い、同時に測定した。
性がある事がわかった。特にプーアル茶、バタバタ茶及び天狗黒茶の酢酸エチル分画エキスには比較的強いACE阻害効果があることがわかった。
Claims (3)
- 碁石茶(登録商標)を熱水抽出したものの酢酸エチル抽出物を有効成分とする血圧上昇抑制剤。
- 請求項1に記載の血圧上昇抑制剤を含有する血圧上昇抑制用飲食品。
- 請求項1に記載の血圧上昇抑制剤を含有する血圧上昇抑制用医薬。
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