JP6281991B2

JP6281991B2 - ホウ素化合物を内包および外壁に担持するカーボンナノホーン及びその製造方法

Info

Publication number: JP6281991B2
Application number: JP2016512786A
Authority: JP
Inventors: 陽子飯泉; 俊也岡崎; 湯田坂　雅子; 雅子湯田坂; 譲池原; 民芳張
Original assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Current assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Priority date: 2014-04-11
Filing date: 2015-04-10
Publication date: 2018-02-21
Anticipated expiration: 2035-04-10
Also published as: JPWO2015156385A1; WO2015156385A1

Description

本発明は、ホウ素化合物を内包および外壁に担持するカーボンナノホーン及びその製造方法に関し、特に、ホウ素中性子捕捉療法(ＢＮＣＴ：Boron Neutron Capture Therapy)に用いるホウ素化合物を内包および外壁に担持するカーボンナノホーン及びその製造方法に関するものである。

ホウ素中性子捕捉療法は、正常組織よりもがん組織に集合しやすいホウ素化合物を、あらかじめ癌細胞内に取り込ませておき、外部からエネルギーの低い熱中性子線を照射すると、ホウ素の原子核が低速の熱中性子を好んで捕捉し、捕捉と同時に核分裂を起こし、α粒子を発生し、このα粒子で近傍のがん細胞を殺傷させる手法である。

ホウ素中性子捕捉療法では、腫瘍に対して高い親和性と選択性を持ち、かつ正常組織に対する蓄積・損傷を最小限にすることが可能なホウ素製剤が必須であるが、現在使われている、ホウ素フェニルアラニンやオルトデカボランなどでは、化学的安定性が十分でないことや腫瘍への蓄積量を上げることが困難であるなどの問題があり、ホウ素中性子捕捉療法の効果を高めることができない。

近年、ホウ素中性子捕捉療法用製剤の性能向上を目指して多くの研究が進められるようになり、ポルフィリンやフラーレン(特許文献１参照)、あるいはヘテロポリ酸(特許文献２参照)などの化合物中にホウ素を導入した例、リポソーム中にＢＳＨやＢＰＡを導入したもの(特許文献３および４参照)、カルボランのような無機系ホウ素化合物(特許文献５参照)の利用、ポリマーにＢＰＡ等を含む化合物を反応させたもの(特許文献６参照)などの複合系を利用しようとする試みも行われている。しかし、これらのいずれの手法も、ホウ素の量を飛躍的に向上することは不可能である。

一方、ＢＮナノチューブを内包したカーボンナノチューブが報告されている(非特許文献１参照)。しかしながら、該非特許文献１には、ホウ素中性子捕捉療法用製剤としての利用については、触れられていない。
また、カーボンナノチューブでは、直径が細いために内包量を上げることが困難である。また、カーボンナノチューブは、チューブ同士がファンデルワールス力で凝集し、分散させることが困難であるという欠点を有する。

特開２００５−５３９０４号公報特開２００４−２５６３７０号公報特開２００６−６３００８号公報特開２００６−６３００９号公報特開２００２−３４８３８１号公報特開２００６−５０２９９３号公報

Nakanishiet al. Scientific Report, Vol.3, Article No.1385, 2013

前述のとおり、これまでの、ホウ素中性子捕捉療法に使われているホウ素製剤は、腫瘍蓄積量が少ないという欠点を有する。
本発明は、こうした現状を鑑みてなされたものであって、ホウ素の腫瘍蓄積量が多いホウ素製剤を提供することを目的とするものである。

本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、中性子捕捉療法用製剤として、ホウ素化合物を内包および外壁に担持するカーボンナノホーンを用いることにより、ホウ素化合物を腫瘍細胞へ選択的に送達し、ホウ素の腫瘍蓄積量を上げることが可能になるという知見を得た。

本発明はこれらの知見に基づいて完成に至ったものであり、本発明によれば、以下の発明が提供される。
［１］ホウ素化合物が内包及びおよび外壁に担持されていることを特徴とするカーボンナノホーン。
［２］前記ホウ素化合物が、窒化ホウ素であることを特徴とする[１]に記載のカーボンナノホーン。
［３］ホウ素化合物の原料にアンモニアボランを用い、カーボンナノホーンとともに加熱することを特徴とする、ホウ素化合物が内包および外壁に担持されているカーボンナノホーンの製造方法。
［４］７５０℃以上に加熱することを特徴とする[３]に記載の、ホウ素化合物が内包および外壁に担持されているカーボンナノホーンの製造方法。
［５］[１]又は[２]に記載のカーボンナノホーンの表面に、抗体または葉酸を付加させたリン脂質ＰＥＧが物理的に付着して表面修飾されていることを特徴とするカーボンナノホーン複合体。
［６］[１]又は[２]に記載のカーボンナノホーンに導入された官能基に、抗体付加ポリエチレングリコールが化学結合されていることを特徴とするカーボンナノホーン複合体。
［７］[１]又は[２]に記載のカーボンナノホーン或いは[５]又は[６]に記載のカーボンナノホーン複合体を有効成分として含有することを特徴とするホウ素中性子捕捉療法用製剤。

本発明のホウ素化合物を内包および外壁に担持しているカーボンナノホーン(以下、「ＢＮ−ＣＮＨ」ということもある。)は、カーボンナノホーン(以下、「ＣＮＨ」ということもある。)の直径が２〜５ｎｍと大きいために、大量のホウ素化合物を内包しており、ホウ素の腫瘍蓄積量を上げることが可能になる。また、比表面積が３００−４００ｍ^２／ｇであるため、外壁にも大量のホウ素化合物を担持できる。特に、原料としてアンモニアボラン(Ｈ_３Ｎ−ＢＨ_３)を用いた場合、加熱によりアンモニアボランからＢＮへ変化し、その際にＢＮがＣＮＨ内部や外壁にとどまることで、BN−CNHをえることができる。
また、ＣＮＨは化学的に安定であって、その外壁を修飾することが容易であるので、本発明のＢＮ−ＣＮＨを化学的にあるいは物理的に修飾することにより、血中投与した際の腫瘍での蓄積量を上げることが可能となる。
さらに、本発明に用いるＣＮＨは、１００ｎｍ程度の球状構造をとっていて、しかも表面は凹凸に富んだ構造をしているため、強く凝集することはなく、溶液中にて孤立分散する。したがって、適切に表面修飾したＢＮ−ＣＮＨは、生体内投与した際に、腫瘍への蓄積を実現させ、ホウ素中性子捕捉療法の効果を高めることができる。

異なる温度で合成したＢＮ−ＣＮＨの炭素原子１個あたりのホウ素原子数を示す図(ａ)、ＢＮ−ＣＮＨを、リン酸緩衝生理食塩水及び細胞培養液のそれぞれに３日間浸したのちに、ＢＮ−ＣＮＨに残ったホウ素の量を浸漬前のホウ素量の％で表した図(ｂ、ｃ)、及びＰＢＳ中への浸漬を１０日間まで延長したときのＢＮ−ＣＮＨのホウ素量を％で表した図(ｄ) ＢＮ−ＣＮＨの透過電子顕微鏡写真(ａ−ｄ)、及びＢＮ−ＣＮＨの電子エネルギー損失スペクトルを示す図(ｅ)であり、図(ｅ)中の○は、ＢＮ−ＣＮＨの電子顕微鏡写真を挿入し電子エネルギー損失スペクトルを測定した場所を示す。ＢＮ−ＣＮＨのＸＰＳ測定結果を示す図。ＢＮ−ＣＮＨをリン酸緩衝生理食塩水中に分散させた際の粒径分布を示す図。ＫＢ細胞にＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ(ａ)、ＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡ(ｂ)、ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ(ｃ)、ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡ(ｄ)を添加し、２４時間培養した後の共焦点レーザー顕微鏡写真(ａ〜ｄ)と、タンパク質量で規格化したＣＮＨ取り込み量を示す図(ｅ)。正常細胞にＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ(ａ)、ＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡ(ｂ)、ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ(ｃ)、ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡ(ｄ)を添加し、２４時間培養した後の共焦点レーザー顕微鏡写真(ａ〜ｄ)と、タンパク質量で規格化したＣＮＨ取り込み量を示す図(ｅ)。

本発明は、カーボンナノホーンにホウ素化合物が内包および外壁に担持されていることを特徴とするものである。

本発明におけるカーボンナノホーンの製造方法は、特に限定されず、ＣＶＤ法、レーザーアブレーション法、アーク放電法など、いずれの方法であっても構わない。

本発明において、カーボンナノホーンに内包および外壁に担持させるホウ素化合物及びその方法は、特に限定されないが、たとえば、原料にアンモニアボランを用い、ＣＮＨとともに加熱する方法があげられる。該方法によれば、加熱によりアンモニアボランからＢＮへ変化し、その際にＢＮがＣＮＨ内部や外壁にとどまることで、BN−CNHを得ることができる。
ちなみに、化学反応式は、以下のとおりである。
ＮＨ₃ＢＨ₃ → ＢＮ＋３Ｈ₂

カーボンナノホーンは化学的に安定であって、その外壁を化学修飾することが容易であるので、血中投与した際に腫瘍での蓄積量を上げるために、本発明のＢＮ−ＣＮＨを化学的にあるいは物理的に修飾することができる。

化学的な修飾の一例として、例えば、本発明のＢＮ−ＣＮＨに、ＰＥＧを介して、がん細胞にその受容体が多数形成されている上皮成長因子(ＥＧＦ：Epidermal Growth Factor)を結合させることで、ＢＮ−ＣＮＨをがん細胞に特異的に集積させることができる。
具体的には、本発明のＢＮ−ＣＮＨを酸化処理してカルボキシル基を導入した後、得られたＢＮ−ＣＮＨのカルボキシル基にアミド結合によりＰＥＧ−ＣＯＯＨを付加して、ＢＮ−ＣＮＨ-ＰＥＧ−ＣＯＯＨを得、得られたＢＮ−ＣＮＨ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨに、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド(ＮＨＳ)とＥＤＣを少量加えて、ＢＮ−ＣＮＨ−ＰＥＧ−ＮＨＳを得た後、トリエチルアミンとＥＧＦを加えて、ＢＮ−ＣＮＨ−ＰＥＧ−ＥＧＦを得ることができる。

また、物理的な修飾の一例として、例えば、本発明のＢＮ−ＣＮＨの表面に、ＰＬＰＥＧ−ＦＡを物理的に結合させることで、ＢＮ−ＣＮＨをがん細胞に特異的に集積させることができる。
すなわち、がん細胞には葉酸受容体が多数形成されているため、リン脂質ＰＥＧ(ＰＬＰＥＧ)と葉酸(ＦＡ)を反応さて、得られたＰＬＰＥＧ−ＦＡをカーボンナノチューブにファンデルワールス力により物理的に付着させるとカーボンナノチューブががん細胞に集積しやすくなることが示されており(飯泉陽子、博士学理論文、筑波大学、２０１２年参照)、同様な手法により、ＰＬＰＥＧ−ＦＡを、本発明のＢＮ−ＣＮＨの表面に物理的に結合させると、ＢＮ−ＣＮＨをがん細胞に特異的に集積させることが可能となる。

以下に、リン脂質ＰＥＧ(ポリ(エチレングリコール)誘導体化ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、以下、「ＰＬＰＥＧ」とする。)、葉酸(ＦＡ)、及びその化合物(ＰＬＰＥＧ−ＦＡ)の分子構造と反応式を示す(前掲論文、図５−９参照)。

以下、本発明を実施例に基づいて説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。

（ＢＮ−ＣＮＨの作製）
ＣＮＨは乾燥空気中で室温から５００℃まで１℃／ｍｉｎで昇温し、その後放冷して開孔させた。アンモニアボラン１ｍｇと開孔ＣＮＨ１ｍｇをガラス容器にいれて、４×１０^-4Ｐａにて２時間真空排気後、ガラス容器の一端を封じ切ってアンプルを得た。
得られた試料入りアンプルを電気炉に入れ、２４時間かけて所定の温度(５５０℃から８５０℃までの、５０℃毎に異なる温度)まで昇温し、２４時間保った後、放冷させた。この処理により、ＢＮ−ＣＮＨを得た。
アンプルを開封して、ＢＮ−ＣＮＨを取り出し、エタノールで遊離している余剰なホウ素化合物をフィルターろ過することで洗い流した後、構造評価に用いた。

（誘導結合プラズマ(ＩＣＰ)発光測定）
各温度で合成したＢＮ−ＣＮＨを、それぞれ、１％ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム水溶液中に０.０５ｍｇ／ｍＬになるように加え、チップ型ソニケーションで５分間処理し、ＢＮ−ＣＮＨ分散溶液を得た。これをＩＣＰ発光測定することにより、ＢＮ−ＣＮＨ中のホウ素含有量を定量した。その結果を図１ａに示す。
また、ＢＮ−ＣＮＨ(１ｍｇ)を、リン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)(２ｍＬ)及び細胞培養液(Cell Culture Meddium)(２ｍＬ)にそれぞれ加え、超音波洗浄機を用いて５分間分散させた後、３日間静置させた。３日間静置後、濾過によりＢＮ−ＣＮＨを回収し、ＢＮ−ＣＮＨに残っていたホウ素量を上述の方法でＩＣＰにて測定して見積もった。ＢＮ−ＣＮＨ中のホウ素量は、浸漬前のホウ素量に対する％で示すと、それぞれ図１ｂ、ｃのようになった。
図１ｂ、ｃに示すとおり、７５０℃以上で加熱処理したＢＮ−ＣＮＨが安定した構造をとると考えられたため、以後は、８００℃で加熱処理したＢＮ−ＣＮＨを構造評価に用いた。
８００℃で作製したＢＮ−ＣＮＨ(１ｍｇ)を細胞培養液(２ｍＬ)に加え、超音波洗浄機にて５分間分散させた後、０〜１０日間静置させた。静置後、濾過によりＢＮ−ＣＮＨを回収し、ＢＮ−ＣＮＨに残っていたホウ素量を上述の方法でＩＣＰにて測定して見積もった。ＢＮ−ＣＮＨ中のホウ素量は、浸漬前のホウ素量に対する％で示すと図１ｄのようになった。ＢＮ−ＣＮＨ中のホウ素量は、１０日間浸漬でも浸漬前のホウ素量の７５−８０％に保たれることが分かった。

（透過型電子顕微鏡観察(ＴＥＭ)と電子エネルギー損失分光(ＥＥＬＳ)測定）
得られた前記ＢＮ−ＣＮＨをエタノールに分散させ、ＴＥＭ観察とＥＥＬＳ測定を行った。
ＴＥＭ測定の結果を、図２ａ−ｄに示す。図２ａ−ｄに示すとおり、ＢＮ−ＣＮＨはＣＮＨ個々の擬円筒状構造とその球状集合体形状を維持していた。さらに高倍率で観察してみると、ＣＮＨの壁に沿って、壁の内側と外側に層状にＢＮが合成されていることがわかった。また、ＣＮＨ内部空間にもＢＮが存在していることを確認した。ＢＮは六方晶ＢＮとして存在していると推知される。図２ｅに示すＥＥＬＳスペクトルには、Ｂ、Ｎ、及びＣによるピークが観察され、Ｂ及びＮのピーク形状は六方晶ＢＮのものと一致した。

（Ｘ線光電子分光(ＸＰＳ)測定）
前記のＢＮ−ＣＮＨ(１ｍｇ)とエタノール(５ｍＬ)を混合し、５分間バスソニケーションして得た分散液をＳｉウエハー上に滴下し、乾燥させた後に、ＸＰＳ測定を行った。結果を図３に示す。
図３に示すとおり、ＢＮ−ＣＮＨは、Ｂ、Ｃ、及びＮに帰属されるピークが観察され、それぞれの強度から、Ｂ(２２％)、Ｃ(５５％)、Ｎ(２２％)であることが分かった(％は原子数％)。酸素のピークも見られたが、これは、基盤に用いたＳｉウエハーの表面のＳｉ酸化物による。

（動的光散乱測定(ＤＬＳ)）
前記のＢＮ−ＣＮＨ(１ｍｇ)をＰＬＰＥＧのリン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)(５ｍＬ)に加え、バスソニケーションで、５分間ソニケーションしてＢＮ−ＣＮＨを分散させた後に、粒子径をＤＬＳにて測定した。比較のため、同様にして前記の開孔したＣＮＨ(１ｍｇ)を分散させた後に、粒子径をＤＬＳにて測定した。それぞれの結果を、図４のｂ、ａに示す。
ｂに示すＢＮ−ＣＮＨの平均粒子径は約１３０ｎｍであり、ａに示すもとのＣＮＨの平均粒子径約１２０ｎｍとほぼ一致し、ホウ素化合物を内包および外壁に担持する操作により構造が大きく変わらなかったことを示唆している。電子顕微鏡観察によりＣＮＨの平均直径が約１００ｎｍであることが知られているので、ＰＬＰＥＧでＰＢＳ中に分散したＢＮ−ＣＮＨはほぼ孤立に分散していることが分かる。また、この分散状態は少なくとも数日間は安定であった。

（ＢＮ−ＣＮＨの表面修飾）
腫瘍へＢＮ−ＣＮＨを高濃度蓄積させるために、ＢＮ−ＣＮＨ表面をポリエチレングリコール(ＰＥＧ)によりコーティングしてマクロファージによる貪食を避け、さらに、葉酸(ＦＡ)をＢＮ−ＣＮＨに付加して、ＢＮ−ＣＮＨをがん細胞選択的に取り込ませるようにする。
そのためにまず、ＦＡ(１ｍｇ)をＤＭＳＯ(４ｍＬ)に溶解させ、この溶液に、ＰＬＰＥＧ(２００ｍｇ)、ピリジン(２ｍＬ)、ＥＤＣ(３８ｍｇ)を加え、４時間室温にて撹拌した。ロータリーエバポレーターでピリジンを蒸発させた後に水５０ｍＬを加えた。得られた液を透析膜(ＭＷＣＯ３５００)に入れ、水２Ｌ中に浸したのちに室温にて放置した。約１日後に、水２Ｌを入れ替えるという操作を５回行い、未反応ＰＬＰＥＧ分子を除去した。得られた液を凍結乾燥させ、ＰＬＰＥＧ−ＦＡの粉末を得た。ＰＬＰＥＧ−ＦＡの構造は¹ＨＮＭＲにて確認した。

得られたＰＬＰＥＧ−ＦＡでＢＮ−ＣＮＨ表面を修飾するため、ＰＬＰＥＧ−ＦＡ(４ｍｇ)と、前記ＢＮ−ＣＮＨ(３ｍｇ)をリン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)(２ｍＬ)中にて混合させ、ＰＬＰＥＧ−ＦＡの脂質基(アルキル鎖)をＢＮ−ＣＮＨの表面にワンデルワール力で結合させ、がん細胞選択的に取り込まれるＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡを合成した。

ＣＮＨをＰＬＰＥＧ−ＦＡを用いてＰＢＳ中に分散させたもの(ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡ)と、［００２８］で得られたＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡのＰＢＳ分散液における粒子サイズをＤＬＳにて測定した。その結果をそれぞれ、図４のｄ、ｃに示す。
ｄに示すＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡの平均粒子サイズは約１３０ｎｍであり、上記［００２６］と同様、ｃに示すもとのＣＮＨのサイズとほぼ一致し、ＦＡ付加後においても、表面修飾したＣＮＨは単一分散していることがわかる。

（がん細胞のＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡ選択的取り込み実験）
ヒト口腔類上皮がん由来の細胞株(ＫＢ細胞)を培養し、そこに、ＰＢＳに分散させたＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡ溶液を、最終濃度１０μｇ／ｍＬになるように添加した。２４時間培養後、細胞に取り込まれなかったＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡをＰＢＳで洗い流したあと、共焦点レーザー顕微鏡にて、細胞を観察した。結果を図５ａ−ｄに示す。
図５ａ−ｄに示すとおり、ＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ(ａ)とＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ(ｃ)は、ＫＢ細胞に取り込まれる量が少なかったが、ＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ―ＦＡ(ｂ)とＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ―ＦＡ(ｄ)は、ＫＢ細胞に大量に取り込まれていた。

また、ＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡのがん細胞による取り込み量を定量的に評価するため、細胞溶解試薬によって、細胞溶解液を作成し、この溶液中のタンパク質量とＣＮＨ量を測定した。タンパク質量は、ブラッドフォード法にて定量するため、遠心分離機(１８００ｘｇ，５０分)によって、細胞片を取り除き、また、ＣＮＨから分離した。上澄みの細胞溶解液(１０μＬ)に、ブラッドフォード液(２５０μＬ)を加えて、５９５ｎｍの波長での吸収強度を測定した。さらに、細胞が取り込んだＢＮ−ＣＮＨ量は、細胞溶解液をチップ型ソニケーションに１０分間かけた後、７００ｎｍの波長での吸収強度を測定することで濃度を見積もった。以上の操作によるタンパク質量とＣＮＨ量から、がん細胞でのＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡ取り込み量を算出した。結果を図５ｅに示す。
その結果、ＢＮ−ＣＮＨは、ＣＮＨと同様に、ＰＬＰＥＧ−ＦＡを修飾することによって、がん細胞に取り込まれやすくなることがわかった。

［００３０］と［００３１］に記載と同様の実験を、正常細胞ＦＨｓ１７３Ｗｅを用いて行った。結果を図６ａ−ｅに示す。
図６ａ−eに示すとおり、ＦＡを付加したことによる細胞取り込み量に差は見られず、ＦＡがない場合と同様取り込み量は少なかった。ＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ(ａ)、ＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡ(ｂ)、ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ(ｃ)、ＣＮＨ/ＰＬＰＥＧ―ＦＡ(ｄ)のいずれの場合も、顕微鏡でみた細胞内取り込み量は少なく、また、これら試料の細胞内取り込み量測定結果にも優位な差は認められなかった(ｅ)。
上記［００３０］、［００３１］に記載の結果と合わせて考察することにより、ＢＮ−ＣＮＨ／ＰＬＰＥＧ−ＦＡは、がん細胞選択的に取り込まれるといえる。

本発明のＢＮ−ＣＮＨは、大量のホウ素化合物を内包および外壁に担持しており、特に、適切に表面修飾したＢＮ−ＣＮＨは、生体内投与した際に、腫瘍への蓄積を実現させ、ホウ素中性子捕捉療法の効果を高めることができるので、ホウ素中性子捕捉療法に有用な成分を提供する医薬製造業において利用できる。

Claims

窒化ホウ素が、カーボンナノホーンの壁に沿って内壁および外壁に層状に担持されているとともに内部空間にも内包されていることを特徴とするカーボンナノホーン。
原料にアンモニアボランを用い、カーボンナノホーンとともに加熱してアンモニアボランを窒化ホウ素に変化させることにより、窒化ホウ素が内包および外壁に担持されているカーボンナノホーンを製造する方法。
７５０℃以上に加熱することを特徴とする請求項２に記載の、窒化ホウ素が内包および外壁に担持されているカーボンナノホーンを製造する方法。
請求項１に記載のカーボンナノホーンの表面に、抗体または葉酸を付加させたリン脂質ＰＥＧが物理的に付着して表面修飾されていることを特徴とするカーボンナノホーン複合体。
請求項１に記載のカーボンナノホーンに導入された官能基に、抗体付加ポリエチレングリコールが化学結合されていることを特徴とするカーボンナノホーン複合体。
請求項１に記載のカーボンナノホーン或いは請求項４又は５に記載のカーボンナノホーン複合体を有効成分として含有することを特徴とするホウ素中性子捕捉療法用製剤。