JP6329516B2 - Ｉｌ−１７ａ及びｉｌ−１７ｆに結合する抗体分子 - Google Patents

Description

本発明は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方の抗原決定基に対して特異性を有する抗体分子に関する。本発明はさらに、この抗体分子の治療的使用及びそれらの作製方法に関する。

ＣＴＬＡ−８又はＩＬ−１７Ａとしても公知の、インターロイキン１７（ＩＬ−１７）は、多様な非免疫細胞から広範囲の他のサイトカインの分泌を促進する、炎症性サイトカインである。ＩＬ−１７Ａは、線維芽細胞、ケラチノサイト、上皮及び内皮の細胞のような接着細胞によるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＰＧＥ２、ＭＣＰ−１及びＧ−ＣＳＦの分泌を誘導でき、照射線維芽細胞の存在下で共培養した場合、ＩＣＡＭ−１の表面発現、Ｔ細胞の増殖並びにＣＤ３４＋ヒト前駆細胞の好中球への成長及び分化もまた誘導できる（Ｆｏｓｓｉｅｚ他、１９９８、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６、５４１〜５５１）。ＩＬ−１７Ａは、活性メモリーＴ細胞によって大部分は産生され、普遍的に発現する細胞表面受容体（ＩＬ−１７Ｒ）に結合することによって作用する（Ｙａｏ他、１９９７、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ、９、７９４〜８００）。また、ＩＬ−１７ＲＡ及びＩＬ−１７ＲＣの複合体への結合を介してもまた作用できる（Ｔｏｙ他、２００６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７（１１）；３６〜３９）。「ＴＨ１７細胞」と呼ばれる、Ｔ細胞を産生するＩＬ−１７は、特定の癌の発症に関わっている（Ｗｅａｖｅｒ他、２００６、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２４、６７７〜６８８；Ｌａｎｇｏｗｓｋｉ他、２００６、４４２、４６１〜４６５；Ｉｗａｋｕｒａ及びＩｓｈｉｇａｍｅ、２００６、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１６、５、１２１８〜１２２２）。

炎症反応の制御において類似の役割及び異なる役割の両方を有する、多くのＩＬ−１７の同族体が特定されている。ＩＬ−１７サイトカイン／受容体ファミリーに関する総説としては、Ｄｕｍｏｎｔ、２００３、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ、１３、２８７〜３０３を参照されたい。このような同族体の１つは、ＩＬ−２４及びＭＬ−１としても公知のＩＬ−１７Ｆであり、これはＩＬ−１７Ａとおよそ５５％同一であり、ＩＬ−１７Ａと同じ受容体を共有すると考えられている（Ｋｏｌｌｓ及びＬｉｎｄｅｎ ２００４、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２１、４６７〜４７６；Ｈｙｍｏｗｉｔｚ他、２００１、ＥＭＢＯ Ｊ．２０（１９）、５３３２〜５３４１；Ｋｕｅｓｔｎｅｒ他、２００７、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１７９、５４６２〜５４７３）。

ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方は、ホモ二量体及びヘテロ二量体のタンパク質の両方を形成でき、これらはすべて、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞によって産生される（Ｗｒｉｇｈｔ他、２００７、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８２（１８）、１３４４７〜１３４５５）。

ＩＬ−１７は、関節リウマチ及び気道炎症などの、異常な免疫応答によって仲介される多くの疾患、並びに臓器移植の拒絶反応及び抗腫瘍性免疫に関係することがある。ＩＬ−１７の活性の阻害因子は当技術分野において周知であり、例えば、マウスＩＬ−１７Ｒ：ヒトＦｃ融合タンパク質、マウス可溶性ＩＬ−１７Ｒ及び抗ＩＬ−１７モノクロナール抗体が、関節リウマチの様々なモデルにおいてＩＬ−１７の役割を実証するために使用されている（Ｌｕｂｂｅｒｔｓ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１、１６７、１００４〜１０１３；Ｃｈａｂａｕｄ他、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．２００１、３、１６８〜１７７）。さらに、中和ポリクロナール抗体が、腹膜の癒着形成を減少させるために使用されている（Ｃｈｕｎｇ他、２００２、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９５、１４７１〜１４７８）。ラットに由来する抗ヒトＩＬ−１７抗体が、ＷＯ０４／１０６３７７に記載された。およそ２２０ｐＭの親和性を有するヒト化抗ＩＬ−１７抗体が、ＷＯ２００６／０５４０５９に記載された。およそ１８８ｐＭの親和性を有するモノクロナール抗ＩＬ−１７完全ヒト抗体が、ＷＯ２００６／０１３１０７に記載された。ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体に結合する抗体が、ＷＯ２００６／０８８８３３に記載された。ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体に特異的に結合する抗体が、ＷＯ２００５／０１００４４に記載された。

ＩＬ−１７Ｆの拮抗作用は、ぜんそくに対する予防に関与しており（Ｋａｗａｇｕｃｈｉ他、２００６、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７（４）；７９５〜８０１）、ＩＬ−１７Ｆはさらに、関節炎の病理においてもまた役割を担っていると考えられる（Ｌｕｂｂｅｒｔｓ ２００３、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ Ｄｒｕｇｓ、４（５）、５７２〜５７７）。

したがって、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの二重拮抗薬は、ＩＬ−１７により仲介される疾患の治療において、単独の拮抗薬より有効であり得る。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに結合する抗体が、２０．９．０７に公開されたＷＯ２００７／１０６７６９に記載された。

本発明者らは、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方に結合できる抗体が単離でき、ＩＬ−１７の両方のイソ型の活性を中和できることを実証できた。故に、本発明は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方に結合できる、抗ＩＬ−１７抗体を提供する。特に、本発明の抗体は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方に特異的に結合でき、すなわち、この抗体はＩＬ−１７の他のイソ型には結合しない。好ましくは、本発明の抗体は、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体にもまた結合する。好ましくは、本発明の抗体は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方の活性もまた中和する。一実施形態において、本発明の抗体は、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の活性を中和する。したがって、本発明の抗体は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方の生物活性を阻害できる、有利な特性を有する。したがって、本発明は、自己免疫疾患又は炎症性疾患或いは癌などの、ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆのいずれか又は両方によって仲介される疾患の治療及び／又は予防における、このような抗体の使用もまた提供する。

本明細書中で使用する場合、「中和抗体」という用語は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方の生物シグナル伝達活性を、例えば、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの、それらの１種又は複数種の受容体への結合をブロックすることによって、及びＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の、その１種又は複数種の受容体への結合をブロックすることによって、中和できる抗体を表す。本明細書中で使用する場合、「中和」という用語が、生物シグナル伝達活性の、部分的又は完全な減少を指すことは理解されるであろう。さらに、抗体によるＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの活性の中和の程度は、同じであっても異なっていてもよいことは理解されるであろう。一実施形態において、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体の活性の中和の程度は、ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆの活性の中和の程度と同じであっても、異なっていてもよい。

一実施形態において、本発明の抗体は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに特異的に結合する。特異的結合は、抗体が、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７のポリペプチド（ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）に対して、他のポリペプチドに対するよりも非常に高い親和性を有することを意味する。好ましくは、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７のポリペプチドは、ヒトである。一実施形態において、この抗体はカニクイザルのＩＬ−１７Ｆにもまた結合する。

ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆのポリペプチド或いは２種の混合物或いは前記ポリペプチドの１種又は両方を発現する細胞は、両方のポリペプチドを特異的に認識する抗体の作製に使用できる。ＩＬ−１７ポリペプチド（ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ）は、「成熟」ポリペプチド或いは好ましくは受容体結合部位を含む、それらの生物活性断片又は誘導体であってよい。好ましくは、ＩＬ−１７ポリペプチドは、成熟ポリペプチドである。ＩＬ−１７ポリペプチドは、発現系を含む、遺伝子操作により作製された宿主細胞から、当技術分野において周知の方法により調製されても、天然の生物起源から回収されてもよい。本出願において、「ポリペプチド」という用語は、ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質を含む。別途明記しない限り、これらは同じ意味で使用される。ＩＬ−１７ポリペプチドは、場合によっては、例えば親和性タグに融合した融合タンパク質などのより大きなタンパク質の一部であってもよい。動物の免疫化が必要な場合、これらのポリペプチドに対して作製される抗体は、動物、好ましくは非ヒト動物にこのポリペプチドを投与し、周知でごく普通のプロトコル（例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ（編）、Ｖｏｌ４、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｅｎｇｌａｎｄ、１９８６を参照されたい）を使用して得ることができる。多くの温血動物、例えばウサギ、マウス、ラット、ヒツジ、ウシ又はブタなどが免疫化できる。しかし、マウス、ウサギ、ブタ及びラットが一般的に好ましい。

本発明における使用のための抗体は、全抗体及びそれらの機能的に活性な断片又は誘導体を含み、限定するものではないが、モノクロナール、多価、多重特異性、ヒト化又はキメラの抗体、ドメイン抗体、例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨＨ、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）_２断片及び上記のいずれかのエピトープ結合断片であってよい。他の抗体断片は、国際特許出願ＷＯ２００５００３１６９、ＷＯ２００５００３１７０及びＷＯ２００５００３１７１に記載の抗体を含む。抗体断片及びそれらの作製方法は、当技術分野において周知であり、例えばＶｅｒｍａ他、１９９８、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６、１６５〜１８１；Ａｄａｉｒ ａｎｄ Ｌａｗｓｏｎ、２００５、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｏｎｌｉｎｅ ２（３）：２０９〜２１７を参照されたい。

本発明における使用のための抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫的に活性な部分、すなわち、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を含む。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子のいずれのクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＡ）又はサブクラスであってもよい。

モノクロナール抗体は、ハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９７）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒ他、１９８３、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ、４：７２）及びＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ他、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、７７〜９６ページ、Ａｌａｎ Ｒ Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、１９８５）などの、当技術分野において公知の任意の方法によって調製できる。

本発明における使用のための抗体は、例えば、Ｂａｂｃｏｏｋ、Ｊ．他、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３（１５）：７８４３〜７８４８ｌ；ＷＯ９２／０２５５１；ＷＯ２００４／０５１２６８及び国際特許出願番号ＷＯ２００４／１０６３７７により記載された方法により、特異的抗体の作製のために選択された単一リンパ球から作製された、免疫グロブリン可変領域ｃＤＮＡをクローン化及び発現することによる、単一リンパ球抗体法を使用してもまた作製できる。

ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１種又は複数種の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する、非ヒト種由来の抗体分子である（米国特許第５，５８５，０８９号；ＷＯ９１／０９９６７を参照されたい）。

キメラ抗体は、軽鎖及び重鎖遺伝子が、異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントを含むように遺伝子操作された免疫グロブリン遺伝子によってコードされる、それら抗体である。これらのキメラ抗体は、抗原性がより低いと思われる。二価抗体は、当技術分野において公知の方法（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ他、１９８３、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７〜５３９；ＷＯ９３／０８８２９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ他、１９９１、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５〜３６５９）によって作製できる。多価抗体は多重特異性を含んでいても、又は単一特異性であってもよい（例えば、ＷＯ９２／２２８５３及びＷＯ０５／１１３６０５を参照されたい）。

本発明における使用のための抗体は、当技術分野において公知の様々なファージディスプレイ法を使用してもまた作製でき、Ｂｒｉｎｋｍａｎ他、（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５、１８２：４１〜５０）、Ａｍｅｓ他、（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５、１８４：１７７〜１８６）、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ他、（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４、２４：９５２〜９５８）、Ｐｅｒｓｉｃ他、（Ｇｅｎｅ、１９９７ １８７ ９〜１８）、Ｂｕｒｔｏｎ他、（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９４、５７：１９１〜２８０）並びにＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；並びに米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７３３，７４３号及び同第５，９６９，１０８号により記載された方法を含む。米国特許第４，９４６，７７８号に記載の方法などの、一本鎖抗体の作製のための技術は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに結合する一本鎖抗体の作製のためにもまた適合できる。さらに、トランスジェニックマウス又は他の哺乳動物を含む他の生物は、ヒト化抗体を発現させるために使用できる。

抗体可変領域の残基は、Ｋａｂａｔ 他により考案されたシステムに従って、慣習的に付番されている。このシステムは、Ｋａｂａｔ他、１９８７、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ、ＵＳＡ（これ以降「Ｋａｂａｔ他、（上記）」）に記述されている。この付番方式を、別途明示しない限り、本明細書中で使用する。

Ｋａｂａｔの残基指定は、必ずしもアミノ酸残基の線形付番と直接一致しない。実際の直線アミノ酸配列は、フレームワーク領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）であろうとなかろうと、基本の可変領域構造の構成要素の短縮、又はそれらへの挿入に対応する、厳密なＫａｂａｔ付番よりアミノ酸が少なかったり、付加されていたりすることがある。残基の正確なＫａｂａｔ付番は、所与の抗体に関して、「標準的」Ｋａｂａｔ付番配列との、抗体の配列における相同性残基のアラインメントによって決定できる。

重鎖可変領域のＣＤＲは、Ｋａｂａｔの付番方式によれば、残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）及び残基９５〜１０２（ＣＤＲ−Ｈ３）に位置する。しかし、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．及びＬｅｓｋ，Ａ．Ｍ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６、９０１〜９１７（１９８７））によれば、ＣＤＲ−Ｈ１に相当するループは、残基２６から残基３２の範囲である。それ故に、本明細書中で使用する場合「ＣＤＲ−Ｈ１」は、Ｋａｂａｔの付番方式及びＣｈｏｔｈｉａの位相的ループ定義を組み合わせることによって記載されるように、残基２６から３５を含む。

軽鎖可変領域のＣＤＲは、Ｋａｂａｔの付番方式によれば、残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）及び残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）に位置する。

一実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに対して特異性を有し、重鎖の可変領域が、ＣＤＲ−Ｈ１に関して配列番号１で示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２に関して配列番号２で示される配列を有するＣＤＲ及びＣＤＲ−Ｈ３に関して配列番号３で示される配列を有するＣＤＲの、少なくとも１種を包含する重鎖を含む中和抗体を提供する。

別の実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに対して特異性を有し、重鎖の可変領域のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３の少なくとも２種が、以下：ＣＤＲ−Ｈ１に関して配列番号１で示される配列、ＣＤＲ−Ｈ２に関して配列番号２で示される配列及びＣＤＲ−Ｈ３に関して配列番号３で示される配列から選択される重鎖を含む中和抗体を提供する。例えば、この抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１が配列番号１で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｈ２が、配列番号２で示される配列を有する重鎖を含むことができる。或いは、この抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１が配列番号１で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号３で示される配列を有する重鎖を含むことができ、或いはこの抗体は、ＣＤＲ−Ｈ２が配列番号２で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｈ３が、配列番号３で示される配列を有する重鎖を含むことができる。誤解を避けるために、すべての順列が含まれることと理解する。

別の実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに対して特異性を有し、重鎖の可変領域が、ＣＤＲ−Ｈ１に関して配列番号１で示される配列、ＣＤＲ−Ｈ２に関して配列番号２で示される配列及びＣＤＲ−Ｈ３に関して配列番号３で示される配列を包含する重鎖を含む中和抗体を提供する。

一実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに対して特異性を有し、軽鎖の可変領域が、ＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号４で示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号５で示される配列を有するＣＤＲ及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号６で示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１種を包含する軽鎖を含む中和抗体を提供する。

別の実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに対して特異性を有し、軽鎖の可変領域のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３の少なくとも２種が、以下：ＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号４で示される配列、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号５で示される配列及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号６で示される配列から選択される軽鎖を含む中和抗体を提供する。例えば、この抗体は、ＣＤＲ−Ｌ１が配列番号４で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｌ２が、配列番号５で示される配列を有する軽鎖を含むことができる。或いは、この抗体は、ＣＤＲ−Ｌ１が配列番号４で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号６で示される配列を有する軽鎖を含むことができ、或いはこの抗体は、ＣＤＲ−Ｌ２が配列番号５で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｌ３が、配列番号６で示される配列を有する軽鎖を含むことができる。誤解を避けるために、すべての順列が含まれることと理解する。

別の実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに対して特異性を有し、可変領域が、ＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号４で示される配列、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号５で示される配列及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号６で示される配列を包含する軽鎖を含む中和抗体を提供する。

本発明の抗体分子は、好ましくは、それぞれ相補的な軽鎖又は相補的な重鎖を含む。

それ故、一実施形態において、本発明に従った抗体は、重鎖の可変領域が、ＣＤＲ−Ｈ１に関して配列番号１で示される配列、ＣＤＲ−Ｈ２に関して配列番号２で示される配列及びＣＤＲ−Ｈ３に関して配列番号３で示される配列を含む重鎖、ならび軽鎖の可変領域が、ＣＤＲ−Ｌ１に関して配列番号４で示される配列、ＣＤＲ−Ｌ２に関して配列番号５で示される配列及びＣＤＲ−Ｌ３に関して配列番号６で示される配列を包含する軽鎖を含む。

１つ又は複数のアミノ酸の置換が、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに結合し、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの活性を中和する抗体の能力を有意に変化させることなく、本発明により提供されるＣＤＲに対して実施可能なことは理解されるであろう。結合及び中和についてのアミノ酸置換の効果は、当業者によって、例えば本明細書中に記載の方法を使用して、容易に試験できる。したがって、本発明は、１種又は複数種のＣＤＲにおいて１つ又は複数のアミノ酸が別のアミノ酸に置換されている、ＣＤＲＨ−１（配列番号１）、ＣＤＲＨ−２（配列番号２）、ＣＤＲＨ−３（配列番号３）、ＣＤＲＬ−１（配列番号４）、ＣＤＲＬ−２（配列番号５）及びＣＤＲＬ−３（配列番号６）から選択される、１種又は複数種のＣＤＲを含む抗体を提供する。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに結合し、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの活性を中和する抗体の能力を有意に変化させることなく、１種又は複数種のＣＤＲの長さを変更し得ることもまた理解されるであろう。

一実施形態において、本発明の抗体は、重鎖の可変領域が３種のＣＤＲを含み、ＣＤＲＨ−１の配列が、配列番号１で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＨ−２の配列が、配列番号２で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、及び／又はＣＤＲＨ−３の配列が、配列番号３で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する重鎖を含む。別の実施形態において、本発明の抗体は、重鎖の可変領域が３種のＣＤＲを含み、ＣＤＲＨ−１の配列が、配列番号１で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９８％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＨ−２の配列が、配列番号２で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９８％の同一性又は類似性を有し、及び／又はＣＤＲＨ−３の配列が、配列番号３で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９８％の同一性又は類似性を有する重鎖を含む。

本明細書中で使用する場合、「同一性」は、アライメントした配列の任意の特定の位置において、アミノ酸残基が配列間で同一であることを指す。本明細書中で使用する場合、「類似性」は、アライメントした配列の任意の特定の位置において、アミノ酸残基が配列間で類似の型であることを指す。例えば、ロイシンは、イソロイシン又はバリンに置換されていてもよい。多くの場合互いに置換されていてもよい他のアミノ酸は、限定するものではないが、
フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン（芳香族側鎖を有するアミノ酸）
リシン、アルギニン及びヒスチジン（塩基性側鎖を有するアミノ酸）
アスパラギン酸及びグルタミン酸（酸性側鎖を有するアミノ酸）
アスパラギン及びグルタミン（アミノ側鎖を有するアミノ酸）及び
システイン及びメチオニン（硫黄含有側鎖を有するアミノ酸）
を含む。同一性又は類似性の度合は、容易に計算できる（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ、Ａ．Ｍ．編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ、Ｐａｒｔ１、Ｇｒｉｆｆｉｎ、Ａ．Ｍ．ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ、Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８７；及びＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ、Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編、Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１）

別の実施形態において、本発明の抗体は、軽鎖の可変領域が３種のＣＤＲを含み、ＣＤＲＬ−１の配列が、配列番号４で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＬ−２の配列が、配列番号５で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、及び／又はＣＤＲＬ−３の配列が、配列番号６で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する軽鎖を含む。別の実施形態において、本発明の抗体は、重鎖の可変領域が３種のＣＤＲを含み、ＣＤＲＬ−１の配列が、配列番号４で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９８％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＬ−２の配列が、配列番号５で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９８％の同一性又は類似性を有し、及び／又はＣＤＲＬ−３の配列が、配列番号６で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９８％の同一性又は類似性を有する軽鎖を含む。

一実施形態において、本発明により提供される抗体は、モノクロナール抗体である。

一実施形態において、本発明により提供される抗体は、キメラ抗体である。

一実施形態において、本発明により提供される抗体は、配列番号１から６で提供される１種又は複数種のＣＤＲを含む、ＣＤＲグラフト抗体分子である。本明細書中で使用する場合、「ＣＤＲグラフト抗体分子」という用語は、１種又は複数種のＣＤＲ（所望であれば１種又は複数種の修飾されたＣＤＲ）を含む、ドナー抗体（例えば、マウスモノクロナール抗体）由来の重鎖及び／又は軽鎖が、アクセプター抗体（例えば、ヒト抗体）の重鎖及び／又は軽鎖の可変領域フレームワークにグラフトされた抗体分子を指す。総説としては、Ｖａｕｇｈａｎ他、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１６、５３５〜５３９、１９９８を参照されたい。一実施形態において、全ＣＤＲを移入するのではなく、本明細書中の上記のＣＤＲのいずれか１種に由来する特異性決定残基の１種又は複数種のみを、ヒト抗体フレームワークに移入する（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉ他、２００５、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６、２５〜３４を参照されたい）。一実施形態において、本明細書中の上記のＣＤＲの１種又は複数種に由来する特異性決定残基のみを、ヒト抗体フレームワークに移入する。別の実施形態において、本明細書中の上記のＣＤＲのそれぞれに由来する特異性決定残基のみを、ヒト抗体フレームワークに移入する。

ＣＤＲ又は特異性決定残基をグラフトする場合、任意の適切なアクセプターの可変領域フレームワーク配列を、マウス、霊長類及びヒトのフレームワーク領域を含む、ＣＤＲが由来するドナー抗体のクラス／型を考慮して使用できる。本発明に従ったＣＤＲグラフト抗体は、ヒトアクセプターのフレームワーク領域並びに上記の１種又は複数種のＣＤＲ又は特異性決定残基を含む、可変領域を有することが好ましい。それ故に、一実施形態において、可変領域がヒトアクセプターのフレームワーク領域及び非ヒトドナーのＣＤＲを含む、中和ＣＤＲグラフト抗体を提供する。

本発明に使用できるヒトフレームワークの例は、ＫＯＬ、ＮＥＷＭ、ＲＥＩ、ＥＵ、ＴＵＲ、ＴＥＩ、ＬＡＹ及びＰＯＭ（Ｋａｂａｔ他、上記）である。例えば、ＫＯＬ及びＮＥＷＭは、重鎖に関して使用でき、ＲＥＩは、軽鎖に関して使用でき、ＥＵ、ＬＡＹ及びＰＯＭは重鎖及び軽鎖の両方に関して使用できる。或いは、ヒト生殖細胞系配列が使用できこれらは、ｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／において利用可能である。

本発明のＣＤＲグラフト抗体において、アクセプターの重鎖及び軽鎖は必ずしも同じ抗体に由来する必要はなく、所望であれば、異なる鎖に由来するフレームワーク領域を有する複合鎖を含んでもよい。

本発明のＣＤＲグラフト抗体の重鎖に関する好ましいフレームワーク領域は、ＪＨ４を伴うヒトサブグループのＶＨ３配列１−３ ３−０７に由来する。したがって、重鎖フレームワーク領域が、ＪＨ４を伴うヒトサブグループ配列の１−３ ３−０７に由来する、少なくとも１種の非ヒトドナーのＣＤＲを含む、中和ＣＤＲグラフト抗体を提供する。ヒトＪＨ４の配列は以下の、（ＹＦＤＹ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳである。ＹＦＤＹモチーフは、ＣＤＲ−Ｈ３の一部であり、フレームワーク４の一部ではない（Ｒａｖｅｔｃｈ、ＪＶ．他、１９８１、Ｃｅｌｌ、２７、５８３〜５９１）。

本発明のＣＤＲグラフト抗体の軽鎖に関する好ましいフレームワーク領域は、ＪＫ１を伴うヒト生殖細胞系サブグループＶＫ１配列２−１−（１）Ｌ４に由来する。したがって、軽鎖フレームワーク領域が、ＪＫ１を伴うヒトサブグループ配列ＶＫ１ ２−１−（１）Ｌ４に由来する、少なくとも１種の非ヒトドナーＣＤＲを含む、中和ＣＤＲグラフト抗体を提供する。ＪＫ１の配列は以下の、（ＷＴ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫである。ＷＴモチーフは、ＣＤＲ−Ｌ３の一部であり、フレームワーク４の一部ではない（Ｈｉｅｔｅｒ、ＰＡ．、他、１９８２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５７、１５１６〜１５２２）。

また、本発明のＣＤＲグラフト抗体において、フレームワーク領域は、アクセプター抗体のフレームワーク領域と正確に同じ配列を有する必要はない。例えば、異常な残基は、そのアクセプター鎖のクラス又は型のために、より頻繁に発生する残基に交換できる。或いは、アクセプターのフレームワーク領域において選択された残基は、ドナー抗体の同じ位置に見出される残基に一致するように交換できる（Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ他、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ、３３２、３２３〜３２４を参照されたい）。このような交換は、ドナー抗体の親和性の回復に必要な最小限にとどめるべきである。交換が必要と思われるアクセプターのフレームワーク領域において、残基を選択するためのプロトコルは、ＷＯ９１／０９９６７に説明されている。

本発明のＣＤＲグラフト抗体分子において、アクセプターの重鎖が、ＪＨ４を伴うヒトＶＨ３配列１−３ ３−０７を有する場合、その時、重鎖のアクセプターのフレームワーク領域は、１種又は複数種のドナーＣＤＲに加えて、少なくとも９４位にドナーの残基を含むことが好ましい（Ｋａｂａｔ他、による（上記））。したがって、少なくとも、重鎖の可変領域の９４位の残基がドナーの残基であるＣＤＲグラフト抗体を提供する。

本発明に従ったＣＤＲグラフト抗体において、アクセプターの軽鎖がＪＫ１を伴うヒトサブグループＶＫ１配列２−１−（１）Ｌ４を有する場合、ドナー残基は移入されない、すなわち、ＣＤＲのみが移入されることが好ましい。したがって、ＣＤＲのみがドナーのフレームワークに移入されるＣＤＲグラフト抗体を提供する。

ドナー残基は、ドナー抗体由来の残基、すなわち、ＣＤＲが本来派生した抗体に由来する残基である。

一実施形態において、本発明の抗体は、重鎖の可変領域が配列番号９（ｇＨ９）で示される配列を含む、重鎖を含む。

別の実施形態において、本発明の抗体は、重鎖の可変領域が、配列番号９で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を包含する重鎖を含む。一実施形態において、本発明の抗体は、重鎖の可変領域が、配列番号９で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を包含する重鎖を含む。

一実施形態において、本発明の抗体は、軽鎖の可変領域が、配列番号７（ｇＬ７）で示される配列を包含する軽鎖を含む。

別の実施形態において、本発明の抗体は、軽鎖の可変領域が、配列番号７で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を包含する軽鎖を含む。一実施形態において、本発明の抗体は、軽鎖の可変領域が、配列番号７で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を包含する軽鎖を含む。

一実施形態において、本発明の抗体は、重鎖の可変領域が、配列番号９で示される配列を包含する重鎖、及び軽鎖の可変領域が、配列番号７で示される配列を包含する軽鎖を含む。

本発明の別の実施形態において、抗体は、重鎖の可変領域が、配列番号９で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を包含し、軽鎖の可変領域が、配列番号７で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を包含する、重鎖及び軽鎖を含む。抗体が、重鎖の可変領域が、配列番号９で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を包含する重鎖、及び軽鎖の可変領域が、配列番号７で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を包含する軽鎖を含むことが好ましい。

上記のように、本発明の抗体分子は、完全長の重鎖及び軽鎖を有する完全な抗体分子又はドメイン抗体、例えばＶＨ、ＶＬ、ＶＨＨ、Ｆａｂ、修飾されたＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ又はｓｃＦｖ断片などのそれらの断片を含むことができる。

本発明の抗体分子の定常領域ドメインは、存在するのであれば、抗体分子の提案された機能、特に必要とされると思われるエフェクター機能を考慮して選択できる。例えば、定常領域ドメインは、ヒトＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭドメインであってよい。具体的には、抗体分子が治療的使用を意図されており、抗体エフェクター機能が必要とされている場合、ヒトＩｇＧ、特にＩｇＧ１及びＩｇＧ３のイソ型の定常領域ドメインが使用できる。或いは、抗体分子が治療目的を意図されており、抗体エフェクター機能が必要とされていない、例えば、単純にＩＬ−１７の活性をブロックする場合、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４のイソ型が使用できる。例えば、Ａｎｇａｌ他、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９３、３０（１）、１０５〜１０８に記載されているように、２４１位のセリンがプロリンに交換されているＩｇＧ４分子が使用できる。特に好ましいのは、この交換を含むＩｇＧ４定常領域ドメインである。

一実施形態において、抗体の重鎖はＣＨ１領域を含み、抗体の軽鎖はＣＬ領域のκ又はλのいずれかを含む。

好ましい実施形態において、本発明により提供される抗体は、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに特異性を有し、重鎖の定常領域が、２４１位のセリンが、上記のＡｎｇａｌ他、に記載のようにプロリンによって置換されている、ヒトＩｇＧ４の定常領域を含む中和抗体である。したがって、本発明は、重鎖が配列番号１５で示される配列を含む、又は配列番号１５で示される配列からなる抗体を提供する。

本発明の一実施形態において、抗体は、配列番号１５で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含んだ重鎖を含む。抗体は、配列番号１５で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含んだ重鎖を含むことが好ましい。

一実施形態において、本発明に従った抗体分子は、配列番号１１で示される配列を包含する軽鎖を含む。

本発明の一実施形態において、抗体は、配列番号１１で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含んだ軽鎖を含む。抗体は、配列番号１１で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含んだ軽鎖を含むことが好ましい。

一実施形態において、本発明は、重鎖が配列番号１５で示される配列を含み、又は配列番号１５で示される配列からなり、軽鎖が配列番号１１で示される配列を含む、又は配列番号１１で示される配列からなる抗体を提供する。

本発明の一実施形態において、抗体は、重鎖が配列番号１５で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含み、軽鎖が配列番号１１で示される配列に対して少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含んだ、重鎖及び軽鎖を含む。抗体は、配列番号１５で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含んだ重鎖、及び配列番号１１で示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含んだ軽鎖を含むことが好ましい。

さらに本発明により、ヒトＩＬ−１７Ａの特定領域又はエピトープ及び／又はヒトＩＬ−１７Ｆの特定領域又はエピトープ及び／又は本発明により提供される抗体、具体的には、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び／又は軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体によって結合しているヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体、の特定領域又はエピトープを含む抗体が提供される。

ヒトＩＬ−１７Ａポリペプチドの特定領域又はエピトープ及びヒトＩＬ−１７Ｆポリペプチドの特定領域又はエピトープ及びヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体の特定領域又はエピトープは、当技術分野において公知の任意の適切なエピトープマッピング法と、本発明により提供される抗体の任意の１つを組み合わせて容易に特定できる。このような方法の例は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに由来する様々な長さのペプチドのスクリーニングを含み、抗体に特異的に結合できる最も小さい断片は、抗体により認識されるエピトープの配列を含む。ＩＬ−１７ペプチドは、合成的に、又は適切なＩＬ−１７ポリペプチドのタンパク質分解によって作製できる。抗体に結合するペプチドは、例えば質量分光分析によって特定できる。別の例において、ＮＭＲ分光法が、本発明の抗体により結合されたエピトープの特定に使用できる。ひとたび特定すれば、本発明の抗体に結合するエピトープ断片を、必要に応じて、同じエピトープに結合する更なる中和抗体を得るための免疫原として使用できる。

本発明に従った抗体、具体的には重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体の結合を交差ブロックする抗体は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの活性の中和において同様に有用であり得る。したがって、本発明はさらに、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに結合し、上記の抗体のいずれか１種の、ヒトＩＬ−１７Ａ及び／又はヒトＩＬ−１７Ｆ及び／又はＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体への結合を交差ブロックし、並びに／或いは上記の抗体のいずれか１種によって、ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆ及び／又はヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体を結合することから交差ブロックされる中和抗体を提供する。一実施形態において、このような抗体は、本明細書中の上記の抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、交差ブロック中和抗体は、本明細書中の上記の抗体によって結合されるエピトープより広い及び／又は重複するエピトープに結合する。別の実施形態において、本発明のこの態様の交差ブロック中和抗体は、本発明の抗体と同じエピトープ又は前記エピトープより広い及び／又は重複するエピトープには結合しない。

交差ブロック抗体は、交差ブロック抗体のヒトＩＬ−１７Ａ及び／又はヒトＩＬ−１７Ｆへの結合が、本発明の抗体の結合を妨げる又は逆の場合、当技術分野における任意の適切な方法、例えば、競合ＥＬＩＳＡ又はＢＩＡｃｏｒｅを使用することによって特定できる。

一実施形態において、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに結合する中和抗体が提供され、この中和抗体は、重鎖が配列ｇＨ９（配列番号９）を含み、軽鎖が配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体の、ヒトＩＬ−１７Ａへの、又はヒトＩＬ−１７Ｆへの結合を交差ブロックする。一実施形態において、本発明により提供される交差ブロック抗体は、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体の、ＩＬ−１７Ａへの結合を、８０％超、好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、さらにより好ましくは９５％超、及びＩＬ−１７Ｆへの結合を、８０％超、好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、さらにより好ましくは９５％超阻害する。

一実施形態において、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに結合する中和抗体が提供され、この中和抗体は、重鎖が配列ｇＨ９（配列番号９）を含み、軽鎖が配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体の、ヒトＩＬ−１７Ａへの、及びヒトＩＬ−１７Ｆへの、及びヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体への結合を交差ブロックする。一実施形態において、本発明により提供される交差ブロック抗体は、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体の、ＩＬ−１７Ａへの結合を、８０％超、好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、さらにより好ましくは９５％超、及びＩＬ−１７Ｆへの結合を、８０％超、好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、さらにより好ましくは９５％超、並びにＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体への結合を、８０％超、好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、さらにより好ましくは９５％超阻害する。

一実施形態において、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに結合する中和抗体が提供され、この中和抗体は、重鎖が配列ｇＨ９（配列番号９）を含み、軽鎖が配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体の、ヒトＩＬ−１７Ａへの、又はヒトＩＬ−１７Ｆへの、又はヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体への結合を交差ブロックする。一実施形態において、本発明により提供される交差ブロック抗体は、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体の、ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７Ｆ又はＩＬ−１７Ａ／Ｆへの結合を、８０％超、好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、さらにより好ましくは９５％超阻害する。

或いは、又はさらに、本発明のこの態様に従った中和抗体は、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体によって、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆへの結合を交差ブロックされ得る。したがってさらに、ヒトＩＬ−１７Ａに、及びヒトＩＬ−１７Ｆに結合し、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体によって、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆを結合することから交差ブロックされる中和抗体分子を提供する。一実施形態において、本発明のこの態様により提供される中和抗体は、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体によって、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆへの結合から、８０％超、好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、さらにより好ましくは９５％超阻害される。

別の実施形態において、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに結合する中和抗体が提供され、この中和抗体は、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体によって、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体への結合から交差ブロックされる。一実施形態において、本発明のこの態様により提供される中和抗体は、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体により、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆ及びヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体への結合から、８０％超、好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、さらにより好ましくは９５％超阻害される。

したがってさらに、ヒトＩＬ−１７Ａに、及びヒトＩＬ−１７Ｆに結合し、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体によって、ヒトＩＬ−１７Ａ又はヒトＩＬ−１７Ｆ又はヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合することから交差ブロックされる中和抗体分子を提供する。一実施形態において、本発明のこの態様により提供される中和抗体は、重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体によって、ヒトＩＬ−１７Ａ又はヒトＩＬ−１７Ｆ又はヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆへの結合から、８０％超、好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、さらにより好ましくは９５％超阻害される。

本発明の任意の態様の抗体分子は、好ましくは高い結合親和性、好ましくはナノモルの、さらにより好ましくはピコモルの結合親和性を有する。本発明に従った抗体のヒトＩＬ−１７Ａに対する結合親和性は、同じ抗体のヒトＩＬ−１７Ｆ及び／又はヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体に対する結合親和性と異なっていてもよいことは、理解されるであろう。一例において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対して、ＩＬ−１７Ｆに対するその結合親和性よりも高い親和性を有する。一例において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対して、ＩＬ−１７Ｆに対する結合親和性より少なくとも１０倍高い親和性を有する。一例において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対して、ＩＬ−１７Ｆに対するその結合親和性より少なくとも５０倍高い親和性を有する。一例において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対して、ＩＬ−１７Ｆに対するその結合親和性より少なくとも１００倍高い親和性を有する。一例において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ｆに対して、ＩＬ−１７Ａに対するその親和性よりも高い親和性を有する。一例において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対して、ＩＬ−１７Ｆに対するその親和性と同じ親和性を有する。一例において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対してピコモルの親和性及びＩＬ−１７Ｆに対してナノモルの親和性を有する。一例において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ｆに対してナノモルの親和性及びＩＬ−１７Ａに対してピコモルの親和性を有する。一例において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方に対してナノモルの親和性を有する。一例において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方に対してピコモルの親和性を有する。

好ましくは、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対して１０ｎＭより優れた結合親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対して５００ｐＭより優れた結合親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対して１００ｐＭより優れた結合親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対して２０ｐＭより優れた結合親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａに対して１６ｐＭの親和性を有する。

好ましくは、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ｆに対して１０ｎＭより優れた結合親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ｆに対して２ｎＭより優れた親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ｆに対して１．７５ｎＭの親和性を有する。

好ましくは、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体に対して１０ｎＭより優れた結合親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体に対して５００ｐＭより優れた結合親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体に対して１５０ｐＭより優れた結合親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体分子は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体に対して１１６ｐＭの結合親和性を有する。

一実施形態において、本発明の抗体分子は、カニクイザルのＩＬ−１７Ｆに対して２ｎＭより優れた結合親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体分子は、カニクイザルのＩＬ−１７Ｆに対して１．０３ｎＭの結合親和性を有する。

本発明によって提供される抗体の親和性は、当技術分野において公知の、任意の適切な方法を使用して改変されてもよいことは理解されるであろう。したがって、本発明はさらに、ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆに対する親和性が改善されている、本発明の抗体分子の変異体にも関する。このような変異体は、ＣＤＲの成熟（Ｙａｎｇ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５４、３９２〜４０３、１９９５）、チェーンシャッフリング（Ｍａｒｋｓ他、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０、７７９〜７８３、１９９２）、大腸菌のミューテーター株の使用（Ｌｏｗ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５０、３５９−３６８、１９９６）、ＤＮＡシャッフリング（Ｐａｔｔｅｎ他、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、８、７２４〜７３３、１９９７）、ファージディスプレイ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５６、７７〜８８、１９９６）及びセクシャルＰＣＲ（Ｃｒａｍｅｒｉ他、Ｎａｔｕｒｅ、３９１、２８８〜２９１、１９９８）を含む、多くの親和性成熟プロトコルによって得られる。Ｖａｕｇｈａｎ他（上記）は、これらの方法の親和性成熟について論じている。

一実施形態において、本発明の抗体分子は、例えば、実施例に記載したインビトロアッセイにおいて、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの活性を中和する。一実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに対して特異性を有し、０．８ｎＭのヒトＩＬ−１７Ａの活性を、５ｎＭ未満の濃度で５０％阻害でき、４．２ｎＭのヒトＩＬ−１７Ｆの活性を、１２ｎＭ未満の濃度で５０％阻害でき、前記阻害活性が、ＩＬ−１７Ａ又はＩＬ−１７により誘導されたヒーラ細胞からのＩＬ−６の放出について測定される中和抗体を提供する。一実施形態において、ＩＬ−１７Ａを５０％阻害する抗体の濃度は、３ｎＭ未満である。一実施形態において、ＩＬ−１７Ｆを５０％阻害する抗体の濃度は、１１ｎＭ未満である。一実施形態において、アッセイに使用したヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆは、組換えのヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆである。一実施形態において、中和抗体は、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体である。

所望であれば、本発明における使用のための抗体は、１種又は複数種のエフェクター分子に結合できる。エフェクター分子が、本発明の抗体に結合できる単一部位を形成するように連結された、単一のエフェクター分子又は２種以上のそのような分子を含んでよいことは理解されるであろう。エフェクター分子に連結された抗体断片を得ることが所望の場合、これは、抗体断片を直接又はカップリング剤を介してのいずれかで、エフェクター分子に連結する、標準的な化学的又は組換えＤＮＡの手法によって調製できる。このようなエフェクター分子と抗体の結合に関する技術は、当技術分野において周知である（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ他、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、第２版、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ他編、１９８７、６２３〜５３ページ；Ｔｈｏｒｐｅ他、１９８２、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．、６２：１１９〜５８及びＤｕｂｏｗｃｈｉｋ他、１９９９、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８３、６７〜１２３を参照されたい）。具体的な化学的手法は、例えば、ＷＯ９３／０６２３１、ＷＯ９２／２２５８３、ＷＯ８９／００１９５、ＷＯ８９／０１４７６及びＷＯ０３０３１５８１に記載された手法を含む。或いは、エフェクター分子がタンパク質又はポリペプチドである場合、連結は、例えば、ＷＯ８６／０１５３３及び欧州特許第０３９２７４５号に記載されたような組換えＤＮＡ手法を使用して達成できる。

本明細書中で使用する場合、エフェクター分子という用語は、例えば、抗腫瘍薬、薬剤、毒素、生物活性タンパク質、例えば酵素、他の抗体又は抗体断片、合成又は天然ポリマー、核酸及びそれらの断片、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ及びそれらの断片、放射性核種、特に放射性ヨウ化物、放射性同位元素、キレート金属、ナノ粒子、並びに蛍光化合物又はＮＭＲ若しくはＥＳＲ分光法によって検出できる化合物などのレポーター基を含む。

エフェクター分子の例は、細胞毒素、又は細胞にとって有害（例えば致死的）である任意の薬剤を含む、細胞毒性薬を含み得る。例としては、コンブレスタチン、ドラスタチン、エポチロン、スタウロスポリン、マイタンシノイド、スポンジスタチン、リゾキシン、ハリコンドリン、ロリジン、ヘミアステリン、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ，１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン、並びにそれらの類似体及び相同体が挙げられる。

エフェクター分子はさらに、限定するものではないが、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、並びにｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（ＡＭＣ）、カリケアマイシン又はデュオカルマイシン）並びに有糸分裂阻害剤（例えばビンクリスチン及びビンブラスチン）を含む。

他のエフェクター分子は、^１１１Ｉｎ及び^９０Ｙ、Ｌｕ^１７７、ビスマス^２１３、カリホルニウム^２５２、イリジウム^１９２及びタングステン^１８８／レニウム^１８８などのキレートされた放射性核種；又は限定するものではないが、アルキルホスホコリン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、タキソイド及びスラミンなどの薬剤を含み得る。

他のエフェクター分子は、タンパク質、ペプチド及び酵素を含む。限定するものではないが、対象となる酵素は、タンパク質分解酵素、加水分解酵素、リアーゼ、イソメラーゼ、トランスフェラーゼを含む。限定するものではないが、対象となるタンパク質、ポリペプチド及びペプチドは、免疫グロブリン、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素又はジフテリア毒素などの毒素、インスリン、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子又は組織プラスミノーゲン活性化因子などのタンパク質、血栓剤（ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ）又は抗血管新生剤、例えばアンギオスタチン又はエンドスタチン、或いはリンホカイン、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、又は他の成長因子などの生物反応修飾因子、及び免疫グロブリンを含む。

他のエフェクター分子は、例えば診断において有用な検出可能な物質を含み得る。検出可能な物質の例は、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性核種、陽電子放出金属（陽電子放出トモグラフィーにおける使用のため）及び非放射性常磁性金属イオンを含み得る。診断としての使用のための抗体に結合可能な金属イオンに関しては、米国特許第４，７４１，９００号全体を参照されたい。適切な酵素は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼを含み、適切な補欠分子族はストレプトアビジン、アビジン及びビオチンを含み、適切な蛍光物質はウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオロセイン、塩化ダンシル及びフィコエリトリンを含み、適切な発光物質はルミノールを含み、適切な生物発光物質は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びエクオリンを含み、適切な放射性核種は、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１１１Ｉｎ及び^９９Ｔｃを含む。

別の例において、エフェクター分子は、インビボにおける抗体の半減期の増加及び／又は抗体の免疫原性の減少及び／又は上皮バリアを超えた免疫系への抗体の送達を強化できる。この型のエフェクター分子の適切な例は、ＷＯ０５／１１７９８４に記載された様な、ポリマー、アルブミン、アルブミン結合タンパク質、アルブミン結合化合物を含む。

エフェクター分子がポリマーである場合、一般的に、合成又は天然ポリマー、例えば適宜置換された直鎖又は分岐鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン又はポリオキシアルキレンポリマー、或いは分岐型又は非分岐型の多糖類、例えばホモ又はヘテロの多糖類であってよい。

上記の合成ポリマーに存在してもよい具体的な任意選択の置換基は、１種又は複数種のヒドロキシ基、メチル基又はメトキシ基を含む。

合成ポリマーの具体的な例は、場合によって置換された直鎖又は分岐鎖のポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）ポリ（ビニルアルコール）又はそれらの誘導体、特に、場合によって置換されたメトキシポリ（エチレングリコール）などのポリ（エチレングリコール）及びその誘導体を含む。

具体的な天然ポリマーは、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン又はそれらの誘導体を含む。

本明細書中で使用する場合の「誘導体」は、例えばマレイミドなどのチオール選択的反応基などの反応性誘導体を含むことを意図する。反応基は、ポリマーに直接又はリンカーセグメントを介して連結できる。このような基の残基が、抗体断片とポリマーとの間の連結基として、時には生成物の一部を形成することは理解されるであろう。

ポリマーのサイズは、所望に応じて変更できるが、一般的には平均分子量が５００Ｄａから５００００Ｄａ、好ましくは５０００から４００００Ｄａ、より好ましくは２００００から４００００Ｄａの範囲となろう。ポリマーのサイズは、具体的には、生成物の使用目的、例えば腫瘍などの特定の組織に局在する能力又は循環半減期を延長させる能力に基づいて選択できる（総説としては、Ｃｈａｐｍａｎ、２００２、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ、５４、５３１〜５４５を参照されたい）。それ故に、例えば、例えば腫瘍の治療に使用するために、生成物を循環から離れて組織に浸透させることを意図する場合、分子量の小さいポリマー、例えばおよそ５０００Ｄａの分子量のポリマーの使用が有利であると思われる。生成物が循環に残存する場合の適用に関しては、分子量の大きいポリマー、例えば２００００Ｄａから４００００Ｄａの範囲の分子量を有するポリマーの使用が有利であると思われる。

特に好ましいポリマーは、ポリ（エチレングリコール）、或いは特にメトキシポリ（エチレングリコール）などの、特に約１５０００Ｄａから約４００００Ｄａの範囲の分子量のポリアルキレンポリマー又はその誘導体を含む。

一例において、本発明における使用のための抗体は、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部位に結合する。特定の一例において、抗体は、抗体断片であり、ＰＥＧ分子は、任意の利用可能なアミノ酸側鎖又は抗体断片に位置する末端アミノ酸官能基、例えば遊離アミノ酸、イミノ、チオール、ヒドロキシ又はカルボキシルの各基を介して結合できる。このようなアミノ酸は、抗体断片中に自然に発生してもよく、又は組換えＤＮＡ法を使用して断片中に操作・導入してもよい（例えば、米国特許第５，２１９，９９６号、米国特許第５，６６７，４２５号、ＷＯ９８／２５９７１を参照されたい）。一例において、本発明の抗体分子は、修飾Ｆａｂ断片であり、修飾は抗体分子の重鎖のＣ末端への、エフェクター分子の結合を可能にする、１つ又は複数のアミノ酸の付加である。付加アミノ酸は、エフェクター分子が結合できる１つ又は複数のシステイン残基を含む、修飾ヒンジ領域を形成することが好ましい。２つ以上のＰＥＧ分子を結合するために、複数の部位が使用できる。

ＰＥＧ分子は、抗体断片に位置する少なくとも１つのシステイン残基のチオール基を介して、共有結合することが好ましい。修飾抗体断片に結合した各ポリマー分子は、断片に位置するシステイン残基のイオウ原子に共有結合できる。共有結合は、一般的にジスルフィド結合、又は、特にイオウ−炭素の結合であろう。チオール基が、活性化エフェクター分子と適切に結合する場所として使用される場合、例えばマレイミドなどのチオール選択性誘導体及びシステイン誘導体が使用できる。上記のように、活性化ポリマーが、ポリマー−修飾抗体断片の調製において、出発物質として使用できる。活性化ポリマーは、α−ハロカルボン酸又はエステル、例えばヨードアセトアミド、イミド、例えばマレイミド、ビニルスルホン又はジスルフィドなどの、チオール反応基を含む任意のポリマーであってよい。このような出発物質は、市販で（例えば、Ｎｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ Ｉｎｃ．、Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、ＡＬ、ＵＳＡから）得られる、又は市販の出発物質から、従来の化学的手法を使用して調製できる。特定のＰＥＧ分子は、２０Ｋメトキシ−ＰＥＧ−アミン（Ｎｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒ、Ｒａｐｐ Ｐｏｌｙｍｅｒｅ及びＳｕｎＢｉｏから入手可能）及びＭ−ＰＥＧ−ＳＰＡ（Ｎｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒから入手可能）を含む。

一実施形態において、抗体は、例えば、欧州特許第０９４８５４４号に記載の方法に従って、ＰＥＧ化された、すなわちＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール））が共有結合した修飾Ｆａｂ断片である［「ポリ（エチレングリコール）化学、バイオ技術及び生物医学的応用（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ） Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、１９９２，Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ（編）、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，「ポリ（エチレングリコール）の化学及び生物学的応用（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」１９９７、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ ａｎｄ Ｓ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ（編）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ及び「生物医科学のための生物学的結合タンパク質カップリング技術（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、１９９８、Ｍ．Ａｓｌａｍ ａｎｄ Ａ．、Ｄｅｎｔ、Ｇｒｏｖｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｃｈａｐｍａｎ、Ａ．２００２、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００２、５４：５３１〜５４５も参照されたい］。一例において、ＰＥＧは、ヒンジ領域においてシステインに結合する。一例において、ＰＥＧ修飾Ｆａｂ断片は、修飾ヒンジ領域において単一のチオール基に共有結合したマレイミド基を有する。リシン残基は、マレイミド基に共有結合でき、リシン残基上の各アミン基は、およそ２０，０００Ｄａの分子量を有するメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーに結合できる。Ｆａｂ断片に結合したＰＥＧの全分子量は、したがっておよそ４０，０００Ｄａであると思われる。

一実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに対して特異性を有する中和抗体分子を提供し、この中和抗体は、重鎖が配列番号９で示される配列を含み、軽鎖が配列番号７で示される配列を含み、その重鎖のＣ末端に、エフェクター分子が結合した少なくとも１つのシステイン残基を含む修飾ヒンジ領域を有する、修飾Ｆａｂ断片である。好ましくは、エフェクター分子はＰＥＧであり、（ＷＯ９８／２５９７１及びＷＯ２００４０７２１１６）に記載の方法を使用して結合し、そのため、リシル−マレイミド基がその重鎖のＣ末端のシステイン残基に結合し、リシル残基の各アミノ基がそれに共有結合しており、メトキシポリ（エチレングリコール）残基は約２０，０００Ｄａの分子量を有する。抗体に結合したＰＥＧの全分子量は、したがっておよそ４０，０００Ｄａである。

別の例において、エフェクター分子は、国際特許出願ＷＯ２００５／００３１６９、ＷＯ２００５／００３１７０及びＷＯ２００５／００３１７１に記載の方法を使用して、抗体断片に結合できる。

本発明はさらに、本発明の抗体分子の重鎖及び／又は軽鎖をコードする、単離ＤＮＡを提供する。好ましくは、ＤＮＡ配列は、本発明の抗体分子の重鎖又は軽鎖をコードする。本発明のＤＮＡ配列は、例えば、化学的方法により作製された合成ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はそれらの任意の組み合わせを含む。

本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列は、当業者に周知の方法によって得られる。例えば、抗体の重鎖及び軽鎖の一部又はすべてをコードするＤＮＡ配列は、所望に応じて確定されたＤＮＡ配列から、又は対応するアミノ酸配列に基づいて合成できる。

受容体のフレームワーク配列をコードするＤＮＡは、当業者に広く利用可能であり、それらの公知のアミノ酸配列に基づいて容易に合成できる。

分子生物学の標準的技術を使用して、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列を調製できる。所望のＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド合成技術を使用して、完全に又は部分的に合成できる。部位特異的突然変異誘発法及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を必要に応じて使用できる。

適切な配列の例は、配列番号８、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１７及び配列番号１８で提供される。配列番号１８のヌクレオチド１〜５７及び配列番号１４の１〜６０は、本発明の中和抗体分子を得るために切断される、マウス抗体Ｂ７２．３由来のシグナルペプチド配列をコードする。（Ｗｈｉｔｔｌｅ他、１９８７、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１（６）４９９〜５０５）。

本発明はさらに、本発明の１種又は複数種のＤＮＡ配列を含むクローニングベクター又は発現ベクターに関する。したがって、本発明の抗体をコードする１種又は複数種のＤＮＡ配列を含むクローニングベクター又は発現ベクターを提供する。クローニングベクター又は発現ベクターは、それぞれ本発明の抗体分子の軽鎖及び重鎖をコードする、２種のＤＮＡ配列を含むことが好ましい。本発明に従ったベクターは、配列番号１４及び配列番号１８で示される配列を含むことが好ましい。配列番号１８のヌクレオチド１〜５７及び配列番号１４の１〜６０は、切断して本発明の中和抗体分子を得るために最も好ましいマウス抗体Ｂ７２．３由来のシグナルペプチド配列（それぞれ配列番号１６の残基１〜１９及び配列番号１２の１〜２０）をコードする。

ベクターを構築できる一般的な方法、形質移入法及び培養方法は、当業者に周知である。この点において、「分子生物学における最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、１９９９、Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ（編）、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ 及びＣｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇにより作成された「マニアティスのマニュアル（Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｍａｎｕａｌ）」を参照する。

さらに、本発明の抗体をコードする１種又は複数種のＤＮＡ配列を含む１種又は複数種のクローニングベクター又は発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。任意の適切な宿主細胞／ベクター系は、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列の発現のために使用できる。細菌、例えば大腸菌及び他の微生物系が使用でき、又は真核生物、例えば哺乳動物、宿主細胞発現系もまた使用できる。適切な哺乳動物宿主は、ＣＨＯ、骨髄腫又はハイブリドーマの細胞を含む。

本発明はさらに、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡからタンパク質の発現を引き起こすために適切な条件下で、本発明のベクターを含む宿主細胞を培養するステップ及びこの抗体分子を単離するステップを含む、本発明に従った抗体分子の作製に関する方法を提供する。

抗体分子は、重鎖又は軽鎖のポリペプチドのみ、この場合、宿主細胞に形質移入するための使用が必要とされる配列をコードする、重鎖又は軽鎖のポリペプチドのみを含むことができる。重鎖及び軽鎖の両方を含む生成物の作製に関しては、細胞系には、２つのベクター、軽鎖ポリペプチドをコードする第１のベクター及び重鎖ポリペプチドをコードする第２のベクターを形質移入できる。或いは、重鎖及び軽鎖のポリペプチドをコードする配列を含むベクターである、単一のベクターを使用できる。

本発明の抗体は、病態の治療及び／又は予防に有用であるので、本発明はさらに、本発明の抗体分子と、１種又は複数種の医薬として許容可能な賦形剤、希釈剤又は担体とを組み合わせて含む、医薬組成物又は診断用組成物を提供する。したがって、本発明に従った抗体の、薬剤の製造のための使用を提供する。この組成物は、医薬として許容可能な担体を普通は含むであろう、滅菌医薬組成物の一部として通常供給されるであろう。本発明の医薬組成物は、医薬として許容可能なアジュバントをさらに含むことができる。

本発明はさらに、本発明の抗体分子に加えて又は本発明の抗体分子と混合して、１種又は複数種の医薬として許容可能な賦形剤、希釈剤又は担体とを一緒に含む、医薬組成物又は診断用組成物の調製方法を提供する。

この抗体分子は、医薬組成物又は診断用組成物における唯一の活性成分であっても、又は他の抗体成分、例えば抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−１β、抗Ｔ細胞、抗ＩＦＮγ又は抗ＬＰＳの抗体或いはキサンチンなどの非抗体成分を含む他の活性成分を伴ってもよい。

医薬組成物は、治療有効量の本発明の抗体を含むことが好ましい。本明細書中で使用する場合、「治療有効量」という用語は、標的となる疾患又は病態を治療、改善又は予防するために、或いは検出可能な治療効果又は予防効果を示すために必要とされる治療薬の量を指す。任意の抗体に関して、治療有効量は、細胞培養アッセイ又は動物モデル（通常、げっ歯類、ウサギ、イヌ、ブタ又は霊長類）のどちらかにおいて、はじめに推定することができる。動物モデルは、適切な濃度範囲及び投与経路を決めるために使用できる。このような情報はその後、ヒトにおける有用な用量及び投与経路を決めるために使用できる。

ヒト対象に対する正確な治療有効量は、疾患状態の重篤度、対象の全体的な健康、対象の年齢、体重及び性別、食事、投与の回数及び頻度、薬の組み合わせ、治療に対する反応感受性及び耐性／応答に依存するであろう。この量は、日常の実験によって決定でき、臨床医の判断の範囲内である。一般的に、治療有効量は、０．０１ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇであろう。医薬組成物は、用量当たりの本発明の活性成分の所定量を含む、単位剤形で存在することが都合がよいと思われる。

組成物は、患者に単独で投与しても、又は他の成分、薬剤又はホルモンと組み合わせて（例えば、同時に、連続して又は別々に）投与してもよい。

本発明の抗体分子を投与する場合の用量は、治療する病態の特徴、存在する炎症の程度及び抗体分子が予防的に使用されるか、又は現状を治療するために使用されるかどうかに依存する。

投与の頻度は、抗体分子の半減期及びその効果の持続期間に依存するであろう。抗体分子の半減期が短い（例えば、２から１０時間）場合、１日に１回又は複数回の投与が必要と思われる。或いは、抗体分子の半減期が長い場合（例えば２から１５日）、１日に１回、１週間に１回或いはさらに１又は２か月に１回の投与で十分であると思われる。

医薬として許容可能な担体は、それ自体は組成物を摂取する個体に対して有害な抗体の産生を誘導してはならず、毒性であってはならない。適切な担体は、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合アミノ酸、アミノ酸コポリマー及び不活性ウィルス粒子などの、大型の緩慢に代謝される巨大分子であってよい。

医薬として許容可能な塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩及び硫酸塩などの鉱酸塩、又は酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩及び安息香酸塩などの有機酸の塩が使用できる。

治療用組成物中の医薬として許容可能な担体は、さらに水、食塩水、グリセロール及びエタノールなどの液体を含むことができる。さらに、湿潤剤又は乳化剤或いはｐＨ緩衝物質などの補助剤がこのような組成物中に存在してもよい。このような担体は、患者による摂取のために、医薬組成物を錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー及び懸濁液などに処方可能にする。

投与の好ましい形態は、例えば注射又は注入による、例えばボーラス注射又は連続注入による非経口投与に適した形態を含む。生成物が、注射用又は注入用である場合、油性又は水性の媒体において懸濁液、溶液又は乳剤の形態を取ってよく、懸濁剤、保存料、安定剤及び／又は分散剤などの製剤助剤を含むことができる。或いは、抗体分子は、使用前に適切な滅菌の液体により再構成するために、乾燥形態であってもよい。

ひとたび処方したら、本発明の組成物は、対象に直接投与できる。治療される対象は動物であってよい。しかし、組成物はヒト対象に投与するために適合されることが好ましい。

本発明の医薬組成物は、限定するものではないが、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、脳室内、経皮的、経皮的（例えば、ＷＯ９８／２０７３４を参照されたい）、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸内、局所的、舌下、膣内又は直腸の経路を含む、任意の数の経路によって投与できる。皮下噴射器もまた本発明の医薬組成物の投与のために使用できる。典型的には、治療用組成物は、溶液又は懸濁液のどちらかとして、注射可能に調製できる。注射前の、液体媒体中における溶液用又は懸濁液用に適した固体形態にもまた調製できる。

組成物の直接送達は、一般的に、皮下、腹腔内、静脈内又は筋肉内に注射することによって達成される、或いは組織の間質腔に送達されるであろう。組成物は、病巣に投与することもまたできる。投薬治療は、単回投与スケジュールであっても、又は複数回投与スケジュールであってもよい。

組成物中の活性成分が、抗体分子であることは理解されるであろう。そのため、消化管における分解を受けやすいであろう。それ故に、組成物を、消化管を使用する経路によって投与する場合、組成物は抗体を分解から保護するが、消化管から吸収されたら抗体を放出する成分を含む必要があると思われる。

医薬として許容可能な担体の徹底的な考察は、レミントンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．１９９１）で利用できる。

本発明の抗体を遺伝子治療の使用により投与することも想定している。このことを達成するために、本抗体分子の重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡ配列を、適切なＤＮＡ成分の調節下で、抗体鎖がＤＮＡ配列から発現し、その場で結合するように患者に導入する。

本発明はさらに、炎症性疾患の調節における使用のための抗体を提供する。抗体分子は、炎症過程を減少させる又は炎症過程を防ぐために使用できることが好ましい。

本発明はさらに、ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆにより仲介される、或いはＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆのレベルの上昇に伴う、病的障害の治療又は予防における使用を提供する。病態は、感染（ウィルス性、細菌性、真菌性及び寄生性）、感染に伴う内毒素性ショック、関節炎、間接リウマチ、ぜんそく、骨盤内炎症性疾患、アルツハイマー病、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、ペイロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、血管炎、外科手術後の癒着、脳梗塞、Ｉ型糖尿病、ライム病関節炎、髄膜脳炎、多発性硬化症及びギラン・バレー症候群などの中枢神経系及び末梢神経系の免疫介在性炎症性疾患、他の自己免疫疾患、膵炎、外傷（外科手術）、移植片対宿主病、移植による拒絶反応、癌（メラノーマ、肝芽腫、肉腫、扁平上皮癌、移行上皮癌、卵巣癌などの固体腫瘍、及び悪性血液疾患の両方、並びに特に急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、胃癌、及び結腸癌）、心筋梗塞並びにアテローム性動脈硬化などの虚血性疾患を含む心臓疾患、血管内凝固、骨吸収、骨粗しょう症、歯周炎及び低塩酸症からなる群から選択されることが好ましい。

本発明はさらに、痛みの治療又は予防における使用のための、本発明に従った抗体分子を提供する。

本発明はさらに、ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆにより仲介される、或いはＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆのレベルの上昇に伴う、病的障害の治療又は予防のための薬剤の製造における、本発明に従った抗体分子の使用を提供する。病的障害は、間接リウマチ又は多発性硬化症であることが好ましい。

本発明はさらに、痛みの治療又は予防のための薬剤の製造における、本発明に従った抗体分子の使用を提供する。

本発明の抗体分子は、ヒト又は動物の体内で、ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆの効果を減少させることが望ましい、任意の治療において利用できる。ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆは、体内で循環していても、又は体内の特定の部位、例えば炎症部位に、望ましくない高レベルで局在していてもよい。

本発明に従った抗体分子は、炎症性疾患、自己免疫疾患又は癌の調節のために使用することが好ましい。

本発明はさらに、ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆによって仲介される疾患を患っている、又は危険性があるヒト又は動物の対象を治療する、有効量の本発明の抗体分子を対象に投与するステップを含む方法を提供する。

本発明に従った抗体分子は、ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆに関与する病態の診断、例えばインビボ診断及び画像化において使用できる。

本発明はさらに、添付の図面について言及する以下の実施例においてのみ、図解を用いて説明する。

図１ａは、抗体ＣＡ０２８＿０４９６の軽鎖Ｖ領域（配列番号７）を表す図である。 図１ｂは、抗体ＣＡ０２８＿０４９６の重鎖Ｖ領域（配列番号９）を表す図である。 図１ｃは、抗体ＣＡ０２８＿４９６のＣＤＲＨ１（配列番号１）、ＣＤＲＨ２（配列番号２）、ＣＤＲＨ３（配列番号３）、ＣＤＲＬ１（配列番号４）、ＣＤＲＬ２（配列番号５）、ＣＤＲＬ３（配列番号６）を表す図である。 図１ｄは、抗体ＣＡ０２８＿４９６の軽鎖（配列番号１１）を表す図である。 図１ｅは、抗体ＣＡ０２８＿４９６の重鎖（配列番号１５）を表す図である。 図１ｆは、シグナル配列を含む抗体ＣＡ０２８＿４９６の軽鎖をコードするＤＮＡ（配列番号１４）を表す図である。 図１ｇは、シグナル配列を含む抗体ＣＡ０２８＿４９６の重鎖をコードするＤＮＡ（配列番号１８）を表す図である。 ヒトＩＬ−１７により誘導される、ヒーラ細胞からのＩＬ−６の産生についての抗体ＣＡ０２８＿０４９６（凡例においてＡｂ＃４９６と指定される）の効果を表す図である。 ヒトＩＬ−１７Ｆにより誘導される、ヒーラ細胞からのＩＬ−６の産生についての抗体ＣＡ０２８＿０４９６（凡例においてＡｂ＃４９６と指定される）の効果を表す図である。

ＤＮＡの操作及び一般的方法
大腸菌株ＩＮＶαＦ’（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、形質転換及び日常の培養成長に使用した。ＤＮＡの制限酵素及び修飾酵素は、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｌｔｄ．及びＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓから入手した。プラスミドの調整は、マキシプラスミド（Ｍａｘｉ Ｐｌａｓｍｉｄ）精製キット（ＱＩＡＧＥＮ、カタログ番号１２１６５）を使用して実施した。ＤＮＡシークエンシング反応は、ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ Ｂｉｇ Ｄｙｅ ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｋｉｔ（カタログ番号４３０４１４９）を使用して実施し、ＡＢＩ ３１００自動シークエンサー（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で実行した。データを、プログラムＡｕｔｏＡｓｓｅｍｂｌｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して分析した。オリゴヌクレオチドは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手した。ＩｇＧの濃度は、ＩｇＧ会合ＥＬＩＳＡを使用して決定した。

ＩＬ−１７イソ型
組換えＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。
組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体は、ＧＳリンカーを使用して、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆを連結することによって作製した。このヘテロ二量体は、以下の配列（配列番号１９）を有した。

組換えカニクイザルＩＬ−１７Ｆ（配列番号２０）

ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体をコードするＤＮＡ配列は、Ｅｎｔｅｌｅｃｈｏｎ ＧｍｂＨによって化学的に合成し、ｐＥＴ４３．１ａのＮｄｅＩ／ＸｈｏＩ部位にサブクローン化した。
カニクイザルのＬ−１７ＦをコードするＤＮＡ配列は、ＮｄｅＩ及びＸｈｏＩの制限部位に導入されたプライマーを使用して、ＰＣＲにより増幅した。ＰＣＲ産物は、ｐＣＲ４Ｂｌｕｎｔ−ＴＯＰＯ内において連結し分解及びｐＥＴ４３．１ａのＮｄｅＩ／ＸｈｏＩ部位への連結前に、配列を確認した。

ＩＬ−１７のイソ型をコードするｐＥＴ４３．１ａ ＤＮＡを、ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の形質移入に使用し、選択されたカルベニシリン耐性クローンを、２％グルコース及び５０μｇ／ｍｌのカルベニシリン含有の２ＴＹブロスで、３７℃において一晩成長させた。その後、培養物を希釈し、同じ培地において、ＯＤ_６００が０．５〜０．７になるまで成長させ、１ｍＭのＩＰＴＧを誘導し、３７℃においてさらに４〜５時間成長させた。

細胞を遠心分離機により回収し、細胞から封入体を調製した。封入体を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、５Ｍのグアニジン塩酸塩、５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、２ｍＭの還元型グルタチオン、０．２ｍＭの酸化型グルタチオン、ｐＨ８．５において可溶化した。可溶化したタンパク質を、グアニジン塩酸塩を含まない上記のバッファーに、激しく攪拌しながら滴下することによって、ＩＬ−１７タンパク質をリフォールディングした。最終容積は、最終タンパク質濃度が０．１ｍｇ／ｍｌ未満であるように選択した。

リフォールディングしたタンパク質溶液を、バッファーを１０ｍＭのＭＥＳ ｐＨ６に交換する前に、必要に応じて濃縮した。その後タンパク質を、２０ｍＭのＭＥＳ ｐＨ６で平衡化したＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＳＰ ＨＰのカラムに注入した。タンパク質を、カラム容量の１０倍量のＭＥＳ ｐＨ６において、０〜５００ｍＭのＮａＣｌの直線勾配で溶出した。ＩＬ−１７Ｆに関しては、勾配を６００ｍＭのＮａｃｌまで拡張した。ＩＬ−１７をさらに精製するために、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＳＰ ＨＰからの関連分画をプールし、濃縮し、２０ｍＭのＣＡＰＳＯ（ｐＨ１０）で希釈し、２０ｍＭのＣＡＰＳＯで平衡化したＭｏｎｏ Ｑカラムに注入した。タンパク質を、カラム容量の２０倍量の２０ｍＭのＣＡＰＳＯにおいて、０〜２５０ｍＭのＮａＣｌの直線勾配で溶出した。ＩＬ−１７を含む分画をプールし、１ＭのＭＥＳ ｐＨ６を使用して中和した。

（実施例１）
中和抗ＩＬ−１７抗体の作製
メスのＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｙラットを組換えヒトＩＬ−１７（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓから購入）を用いて免疫化した。ラットは、１００μｌのフロイントのアジュバント中の２０μｇＩＬ−１７の免疫化を４回受けた。ヒトＩＬ−１７と結合した抗体２２５を、ＷＯ０４／０５１２６８に記載の方法を使用して単離した。抗体２２５の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）に関する遺伝子を単離し、逆転写ＰＣＲを介したクローニングの後でシークエンシングした。

ヒト化したＶＬ及びＶＨ領域のシリーズを、ヒトＶ領域アクセプターのフレームワークを使用して、フレームワーク領域におけるドナー残基の数を変えることによって、設計した。８種のグラフトＶＬ領域（ｇＬ１〜８）及び９種のグラフトＶＨ領域（ｇＨ１〜９）を設計し、遺伝子を、オリゴヌクレオチド形成及びＰＣＲ突然変異生成によって構築した。

軽鎖をグラフトした配列を、ヒトＣ−κ定常領域（Ｋｍ３ アロタイプ）をコードするＤＮＡを含むヒト軽鎖発現ベクターｐＫＨ１０．１中にサブクローン化した。重鎖をグラフトした配列を、ヒンジ安定化突然変異Ｓ２４１Ｐを含む、ヒトγ−４定常領域をコードするＤＮＡを含むヒトγ−４発現ベクターｐＶｈｇ４Ｐ ＦＬ中にサブクローン化した（Ａｎｇａｌ他、上記）。プラスミドを、ＣＨＯ細胞中に共形質移入し、抗体を、ＩＬ−１７結合における活性に関してスクリーニングし、中和アッセイを実施することによって作製した。ＣＨＯの形質移入は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２０００の手法を使用して、製造業者の指示書（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１１６６８）に従って実施した。

発現、親和性及び中和能力（ｇＬ７ｇＨ９）に基づく最適なグラフトを選択し、ＣＡ０２８＿０４９６と名付けた。この抗体のＶ領域の配列を、図１（ａ）及び（ｂ）に、軽鎖（ｇＬ７）及び重鎖（ｇＨ９）に関してそれぞれ配列番号７及び９で示した。

重鎖アクセプターのフレームワークは、ヒト生殖細胞系配列ＶＨ３ １−３ ３−０７であり、フレームワーク４は、ヒトＪＨ領域生殖細胞系ＪＨ４のこの部分からもたらされる。軽鎖アクセプターのフレームワークは、ヒト生殖細胞系配列ＶＫ１ ２−１−（１）Ｌ４であり、フレームワーク４は、ヒトＪＫ領域生殖細胞系ＪＫ１のこの部分からもたらされる。

（実施例２）
抗体ＣＡ０２８＿０４９６はＩＬ−１７及びＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体を中和する。
ヒーラ細胞
ヒーラ細胞におけるヒト組換えＩＬ−１７Ａ及びヒト組換えＩＬ−１７Ｆに対する抗体ＣＡ０２８＿０４９６の能力を試験し、抗体ＣＤＰ４３５（ＷＯ０６／０５４０５９）と比較した。ヒーラ細胞は、ＡＴＣＣ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−２）の細胞バンクから得た。細胞を、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン、ゲンタマイシン及びグルタミンを添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）で成長させた。１×１０^４の細胞を、９６ウェルの平底組織培養プレートに播種した。細胞を一晩インキュベートし、アッセイバッファーで１回洗浄した。ヒトＩＬ−１７Ａ（２５ｎｇ／ｍｌ）又はヒトＩＬ−１７Ｆ（１２５ｎｇ／ｍｌ）のどちらかを、固定濃度のヒトＴＮＦαの存在下でインキュベートし、この混合物を、抗体ＣＡ０２８＿０４９６又は抗体ＣＤＰ４３５とともにプレインキュベートした。その後、サイトカインと抗体とを、一晩インキュベートしたヒーラ細胞に加えた。細胞培養の上清におけるＩＬ−６の産生は、細胞に加えたＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆの量と比例していた。ヒトＩＬ−６のレベルをＥＬＩＳＡにより測定し、ヒトＩＬ−６の公知の標準濃度と比較することによって定量化した。

データ（図２ａ及び２ｂ）は、抗体ＣＡ０２８＿０４９６がヒト組換えＩＬ−１７Ａを強力に中和し、さらにヒトＩＬ−１７Ｆに対する活性もいくらか有していたことを示している。これらの実験からのデータは、抗体ＣＡ０２８＿０４９６が、ヒト組換えＩＬ−１７（２５ｎｇ／ｍｌ）に対して４３／ｎｇ／ｍｌ、及び組換えＩＬ−１７Ｆ（１２５ｎｇ／ｍｌ）に対して１４７７ｎｇ／ｍｌのＩＣ_５０をもたらすことを示した。したがって、抗体ＣＡ０２８＿０４９６は、このアッセイにおいて、ヒト組換えＩＬ−１７（０．７８ｎＭ）に対して０．２９Ｍ、及びヒト組換えＩＬ−１７Ｆ（４．１６ｎＭ）に対して１０．１８ｎＭのＩＣ５０をもたらす（平均ＩｇＧ４として分子量１４５，０００と仮定したＩｇＧごとに、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆは二量体であるとの仮定に基づいて計算）。

ヒトミクログリア細胞
ヒトミクログリア細胞（ＴＣＳ Ｃｅｌｌｗｏｒｋｓ）を、平底の９６ウェルプレートに、ウェル当たり５，０００細胞で、全量１００μｌで播種し、プラスチックへの付着のため２４時間放置した。この時、ヒト組換えＩＬ−１７Ａ、ヒト組換えＩＬ−１７Ｆ、カニクイザル組換えＩＬ−１７Ｆ及びヒト組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体の滴定（５、１、０．２及び０．０４μｇ／ｍｌ）を、１０ｎｇ／ｍｌのヒト組換えＴＮＦαの存在下及び不在下で、ウェルに３重に加えた。対照ウェルは、刺激を含まず、ＩＬ−１７Ａ単独（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＴＮＦα単独並びにＩＬ−１７Ａ及びＴＮＦαを一緒に含む。すべてのサイトカインを、全容量が１１０μｌ／ウェルで加え、ウェルの全容量を２１０μｌにした。抗体に関する実験において、細胞を、同じ方法で播種した。２４時間後、抗体及びサイトカインを同時に加え、全最終容量２００μｌにおいて定められた最終濃度をもたらした。

３７℃においてさらに２４時間インキュベートした後で、上清を回収し、分析まで−２０℃で凍結した。分析では、上清を１／１０に希釈し、ヒトＩＬ−６ＭＳＤキットを使用して、製造業者の説明書に従って、ＩＬ−６に関して測定した。

試験したすべてのＩＬ−１７のイソ型が、特にＴＮＦαの存在下でアッセイにおいて活性であることを見出した。

ヒトミクログリア細胞における、ヒト組換えＩＬ−１７Ａ及びヒト組換えＩＬ−１７Ｆ、カニクイザル組換えＩＬ−１７Ｆ及びヒト組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体に対する抗体ＣＡ０２８＿０４９６の能力を、ＴＮＦαの存在下で試験し、上記の方法を使用して、対照の抗体及びＩＬ−１７Ａ特異的抗体と比較した。

対照抗体は、試験したいずれのサイトカインの活性についても効果はなかった。抗体ＣＡ０２８＿０４９６は、カニクイザルＩＬ−１７Ｆを含む、サイトカインＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ／Ｆの３種すべてに対して阻害活性を有し、一方ＩＬ−１７Ａ特異的抗体は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体に対してのみ、阻害活性を有した。

（実施例３）
抗体ＣＡ０２８＿０４９６（ヒトＩｇＧ４定常領域）のＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに対する親和性
ＢＩＡ（Ｂｉａｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ）を、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ）を使用して実施した。すべての実験は、２５℃において実施した。Ａｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｆｃ Ｆｒａｇｍｅｎｔ ｇｏａｔ ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ ＩｇＧ，Ｆｃ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、アミン結合化学反応を介して、捕捉レベルおよそ６０００反応単位（ＲＵ）まで、ＣＭ５ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐに固定した。ＨＢＳ−ＥＰバッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０、Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ）を、流速１０μｌ／分で、ランニングバッファーとして使用した。固定抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃによって捕捉するために、抗体ＣＡ０２８＿０４９６（１．８１ｍｇ／ｍｌ）を１０μｌ注入した。ヒトのＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７のイソ型を、５０ｎＭからサブｎＭに２重に希釈した捕捉ＣＡ０２８＿０４９６により、流速３０μＬ／分で滴定した。３０μＬの４０ｍＭ ＨＣｌを注入し、その後５μＬの５ｍＭ ＮａＯＨを１度注入することによって、表面を再生した。

バックグラウンドを差し引いた結合曲線を、２重試験を参照し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（バージョン３．２）を使用して、標準的手法に従って分析した。速度パラメーターは、フィッティングアルゴリズムから決定した。

ＩＬ−１７Ａに結合する抗体ＣＡ０２８＿０４９６に対して決定した親和性値は、１６ｐＭであり、ＩＬ−１７Ｆに対しては１７５０ｐＭであった。抗体ＣＡ０２８＿０４９６は、他のＩＬ−１７のイソ型（ＩＬ−１７Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ）には結合しなかった。したがって、抗体ＣＡ０２８＿０４９６は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆに特異的に結合する。

（実施例４）
ＩＬ−１７Ａ、カニクイザルＩＬ−１７Ｆ及びＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体に対する、抗体ＣＡ０２８＿０４９６（マウスＩｇＧ１定常領域）の親和性
ＢＩＡ（Ｂｉａｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ）を、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ）を使用して実施した。
すべての実験は、２５℃において実施した。Ａｆｆｉｎｉｐｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）_２ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｇｏａｔ ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ，Ｆｃ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、アミン結合化学を介して、捕捉レベルおよそ６０００反応単位（ＲＵ）まで、ＣＭ５ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ）に固定した。ＨＢＳ−ＥＰバッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０、Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ）を、流速１０μｌ／分で、ランニングバッファーとして使用した。固定抗マウスＩｇＧ、Ｆｃによって捕捉するために、抗体ＣＡ０２８＿０４９６（４ｕｇ／ｍｌＬ）を１０μｌ注入した。ヒトＩＬ−１７Ａ、カニクイザルＩＬ−１７Ｆ及びヘテロ二量体Ａ／Ｆを、２５ｎＭからサブｎＭに２重に希釈した、捕捉ＣＡ０２８＿０４９６により、流速３０μＬ／分で滴定した。流速１０ｕＬ／分で１０μＬの４０ｍＭ ＨＣｌを注入し、その後５μＬの５ｍＭ ＮａＯＨを１度注入することによって、表面を再生した。

２重試験を参照し、バックグラウンドを差し引いた結合曲線を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（バージョン３．２）を使用して、標準的手法に従って分析した。速度パラメーターは、フィッティングアルゴリズムから決定した。

抗体ＣＡ０２８＿０４９６は、ＩＬ−１７Ａに対して２１ｐＭ、ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体に対して１１６ｐＭ及びカニクイザルＩＬ−１７Ｆに対して１０３０ｐＭの親和性を有した。

本発明を単に例証としてこれまで説明し、限定的にする意図は全くなく、詳細の変更を、以下の特許請求の範囲内でなし得ることは当然理解されるであろう。本発明の各実施形態の好ましい特徴は、変更すべきところは変更した他の実施形態それぞれに関しても同様である。限定するものではないが、本明細書に引用した特許及び特許出願を含むすべての刊行物は、それぞれ個々の刊行物が、具体的に、かつ個別に、完全に説明されたように本明細書中に参照により組み入れられることを示唆したかのように、本明細書中に参照により組み入れられる。

Claims (15)

1. ＩＬ−１７Ｆに対して、２ｎＭより優れた結合親和性を有し、ＩＬ−１７Ａに対して、１００ｐＭより優れた結合親和性を有する、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに結合する中和抗体であって、競合ＥＬＩＳＡ又はＢＩＡｃｏｒｅを用いて、配列番号９で示される配列を含む重鎖及び配列番号７で示される配列を含む軽鎖を有する抗体のヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆへの結合を８０％超交差ブロックし、並びに／又は配列番号９で示される配列を含む重鎖及び配列番号７で示される配列を含む軽鎖を有する抗体によって、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆを結合することから８０％超交差ブロックされ、かつ重鎖配列ｇＨ９（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ７（配列番号７）を含む抗体と同じヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆ上にあるエピトープに結合する、上記中和抗体。
2. 抗体が、抗体全体又はそれらの機能的に活性な断片又は誘導体である、請求項１に記載の抗体。
3. 抗体が、モノクロナール、多価、多重特異性、ヒト化又はキメラの抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、又はそれらのエピトープ結合断片である請求項２に記載の抗体。
4. 抗体又はその断片が、ＣＤＲグラフト抗体又は完全ヒト抗体である、請求項３に記載の抗体。
5. 抗体又はその断片が、１種又は複数種のエフェクター分子に結合した、請求項１から４までのいずれか一項に記載の抗体。
6. 請求項１から４までのいずれか一項に記載の抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードする、単離ＤＮＡ。
7. 請求項６に記載の１種又は複数種のＤＮＡを含む、クローニングベクター又は発現ベクター。
8. 請求項７に記載の１種又は複数種のクローニングベクター又は発現ベクターを含む宿主細胞。
9. 請求項８に記載の宿主細胞を培養するステップ、及び抗体を単離するステップを含む、請求項１から４までのいずれか一項に記載の抗体の作製方法。
10. 請求項１から４までのいずれか一項に記載の抗体と、１種又は複数種の医薬として許容可能な賦形剤、希釈剤又は担体とを組み合わせて含む、医薬組成物。
11. 他の活性成分をさらに含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
12. 治療に使用するための、請求項１から４までのいずれか一項に記載の抗体、或いは請求項１０又は請求項１１に記載の医薬組成物。
13. 病的障害が、感染（ウィルス性、細菌性、真菌性及び寄生性）、感染に伴う内毒素性ショック、関節炎、間接リウマチ、ぜんそく、骨盤内炎症性疾患、アルツハイマー病、クローン病、ペイロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、血管炎、外科手術後の癒着、脳梗塞、Ｉ型糖尿病、ライム病関節炎、髄膜脳炎、多発性硬化症及びギラン・バレー症候群を含む中枢神経系及び末梢神経系の免疫介在性炎症性疾患、膵炎、外傷（外科手術）、移植片対宿主病、移植による拒絶反応、がん（メラノーマ、肝芽腫、肉腫、扁平上皮癌、移行上皮癌、卵巣癌、胃癌、及び結腸癌を含む固形腫瘍、並びに急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病を含む悪性血液疾患の両方）、心筋梗塞及びアテローム性動脈硬化からなる群から選択される虚血性疾患を含む心臓疾患、血管内凝固、骨吸収、骨粗しょう症、歯周炎並びに低塩酸症からなる群から選択される、ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆにより仲介される、或いはＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆのレベルの上昇に伴う、該病的障害の治療又は予防における使用のための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体或いは請求項１０又は１１に記載の医薬組成物。
14. 次に示すステップを含む、ＩＬ−１７Ｆに対して、２ｎＭより優れた結合親和性を有し、ＩＬ−１７Ａに対して、１００ｐＭより優れた結合親和性を有する、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆに結合する中和抗体であって、配列番号９で示される配列を含む重鎖及び配列番号７で示される配列を含む軽鎖を有する抗体を交差ブロックし、及び／又は配列番号９で示される配列を含む重鎖及び配列番号７で示される配列を含む軽鎖を有する抗体によって交差ブロックされる該中和抗体を同定する方法；
    （１）該中和抗体が、配列番号９で示される配列を含む重鎖及び配列番号７で示される配列を含む軽鎖を有する抗体のヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆへの結合を交差ブロックするかどうかを決定するステップ、並びに／又は
    （２）該中和抗体が、配列番号９で示される配列を含む重鎖及び配列番号７で示される配列を含む軽鎖を有する抗体によってヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆを結合することから交差ブロックされるかどうかを決定するステップ。
15. 前記抗体が配列番号９で示される配列を含む重鎖及び配列番号７で示される配列を含む軽鎖を有する抗体のヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆへの結合を８０％超交差ブロックし、並びに／又は配列番号９で示される配列を含む重鎖及び配列番号７で示される配列を含む軽鎖を有する抗体によって、ヒトＩＬ−１７Ａ及びヒトＩＬ−１７Ｆを結合することから８０％超交差ブロックされる、請求項１４に記載の方法。

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