JP6821560B2 - 免疫刺激剤による癌治療 - Google Patents

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関連出願の相互参照
この出願は、２０１４年１０月２１日出願の米国特許仮出願番号第６２／０６６,８６２号及び２０１５年９月８日出願の米国特許仮出願番号第６２／２１５,４３３号に対する優先権及びその利益を主張するものであり、目的を問わずそれぞれが参照により組み込まれる。

本発明は、黒色腫などの癌またはその転移を治療する組成物及び方法に関する。

複数の小分子化合物を含め、多くの薬物または候補薬が、各種癌治療のために開発されてきた。しかしながら、現在の癌治療の多くは、特殊な一部の癌を有する患者にはあまり効果がないか、あるいはこのような患者には、または一般に毒性が強すぎる。

皮膚癌は、米国で最も一般的な形態の癌である。２００７年のアメリカ癌協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ）の概算によれば、米国での黒色腫による死亡者は約８，１１０人に達し、更に５９，９４０人が黒色腫と診断されると予測されている。

黒色腫はメラノサイトの悪性腫瘍であり、主として皮膚に見られるが、腸及び眼（ブドウ膜黒色腫）にも見られる。黒色腫は希少な種類の皮膚癌の一種であるが、皮膚癌に関連した死亡の大部分は黒色腫を原因とする。

現在利用可能な治療としては、腫瘍の外科的除去、アジュバント治療、化学療法及び免疫療法、または放射線療法が挙げられる。中でも原発性黒色腫腫瘍の転移は特に危険である。しかしながら、黒色腫治療の向上は当技術分野で依然として必要とされている。

本発明は、対象での癌または複合癌を治療する組成物及び方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。

いくつかの実施形態では、方法は、治療的有効量の第１の免疫刺激剤及び第２の免疫刺激剤を含有する組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、第１の免疫刺激剤は、アルファサイモシンペプチドである。いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、ＩＬ−２、インターフェロン−α、またはＩＲＸ−２以外の化合物である。いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、特異的な免疫賦活薬を含む。いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、非特異的な免疫賦活薬を含む。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、敗血症の治療に有効である免疫賦活薬である。いくつかの実施形態では、免疫賦活薬は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）阻害剤及び／またはインターロイキン−７（ＩＬ−７）を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は追加の抗癌剤を更に含む。いくつかの実施形態では、追加の抗癌剤は化学療法剤である。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、約０．０１〜１０００ｍｇ／日の投与量で、前記対象に投与される。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤はＧＭ−ＣＳＦを含み、ＧＭ−ＣＳＦの投与量は約１０〜５００ｍｃｇ／ｍ^２、例えば約１２５〜約２５０ １０〜５００ｍｃｇ／ｍ^２である。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、ＰＤ−１阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤ−１を阻害する薬剤、例えばＰＤ−１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤ−１のリガンドを阻害する薬剤、例えばＰＤ−１のリガンドに対する抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤の投与量は、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約１〜５ｍｇ／ｋｇ、または約２〜３ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり、投与量は約１５〜２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、１２００ｍｇの一定用量で２週毎、３週毎または４週毎に使用される。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、ＩＬ−２ではないインターロイキンを含む。いくつかの実施形態では、インターロイキンはＩＬ−７である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−７の投与量は、約０．１〜１００ｍｃｇ／ｋｇ、例えば、約１〜５０ｍｃｇ／ｋｇ、または約３〜３０ｍｃｇ／ｋｇである。

いくつかの実施形態では、アルファサイモシンペプチドは、少なくとも治療の一部期間で、約０．１〜１００ｍｇ／日、例えば約０．５〜５０ｍｇ／日または約０．１〜１０ｍｇ／日の範囲内の投与量で対象に投与される。

いくつかの実施形態では、アルファサイモシンペプチドは、サイモシンアルファ１（ＴＡ１）である。

いくつかの実施形態では、方法は、約１〜１０日間にわたる毎日のＴＡ１の投与と、それに続く約１〜５日のＴＡ１の非投与で構成される。いくつかの実施形態では、ＴＡ１は約３〜５日間毎日投与され、それに続く約２〜４日、ＴＡ１は非投与である。いくつかの実施形態では、ＴＡ１は約４日間毎日投与され、それに続く約３日、ＴＡ１は非投与である。

いくつかの実施形態では、方法は、キナーゼ阻害剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤はソラフェニブを含む。いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、約１０〜２００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の投与量で前記患者に投与される。

いくつかの実施形態では、方法は、抗悪性腫瘍性の熱ショックアポトーシス活性化因子（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｃｔｉｖａｔｏｒ：ＨＳＡＡ）を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＡＡは、ＳＴＡ−４７８３（エレスクロモル）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＡＡは、約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の投与量で前記患者に投与される。

いくつかの実施形態では、方法は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）、例えばＣＴＬＡ４に対する抗体等の阻害剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４抗体は、９Ｈ１０、ＭＤＣ０１０、１Ｆ４、ＢＮＩ３、Ｑ０１、Ａ０１、Ｍ０８、１Ｂ８、ＷＫＨ２０３、ａｂ９９８４、ａｂ１３４８６、イピリムマブ、チシリムマブまたはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４抗体は、約０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の投与量で前記患者に投与される。

いくつかの実施形態では、方法は、アルキル化抗悪性腫瘍薬（ＡｌｋＡＡ）を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、アルキル化抗悪性腫瘍薬（ＡｌｋＡＡ）は、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）を含む。いくつかの実施形態では、アルキル化抗悪性腫瘍薬（ＡｌｋＡＡ）は、約７００〜１３００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の投与量で前記患者に投与される。

いくつかの実施形態では、方法は、化学療法剤を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）またはシスプラチンである。

いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。

本発明はまた、治療的有効量の免疫刺激剤を含有する組成物を投与することを含む、対象の癌またはその転移を治療する方法を提供し、該免疫刺激剤は敗血症の治療に有効である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態では、敗血症の治療に有効である免疫賦活薬は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）阻害剤及び／またはインターロイキン−７（ＩＬ−７）またはこれらのあらゆる組み合わせを含む。

いくつかの実施形態では、組成物は追加の抗癌剤を更に含む。いくつかの実施形態では、追加の抗癌剤はアルファサイモシンペプチドである。いくつかの実施形態では、アルファサイモシンペプチドは、サイモシンアルファ１（ＴＡ１）である。

いくつかの実施形態では、方法は、対象に化学療法剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）またはシスプラチンである。

本発明はまた、癌治療に対するヒト対象の反応性を決定するための方法も提供する。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、方法は、ヒト対象からの生体試料において１種以上のバイオマーカーの活性レベルを決定することを含む。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６及びＩＬ−１０からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、癌治療は、本明細書に記載する方法に従う。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−１βの活性が正常レベルより高い場合、ヒト対象が治療に反応していることを示す。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−４の活性が正常レベル未満である場合は、ヒト対象が治療に反応していることを示す。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−６の活性が正常レベルより高い場合は、ヒト対象が治療に反応していることを示す。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−１０の活性が正常レベルより高い場合は、ヒト対象が治療に反応していることを示す。

本発明はまた、ヒト対象の癌治療のための投与量またはレジメンを決定するための方法も提供する。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、方法は、治療されるヒト対象からの生体試料において１種以上のバイオマーカーの活性レベルを決定することを含む。いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６及びＩＬ−１０からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、治療後のＩＬ−１βの活性レベル低下は、治療が有効であることを示す。いくつかの実施形態では、治療後のＩＬ−１βの活性レベルが変化しない、または増加した場合、治療が有効でないことを示す。この結果に応じて治療上の投与量またはレジメンを修正することができる。

いくつかの実施形態では、治療後のＩＬ−４の活性レベルの増加は、ヒト対象が治療に反応していることを示す。いくつかの実施形態では、治療後のＩＬ−４の活性レベルが変化しない、または減少した場合、治療が有効でないことを示す。この結果に応じて治療上の投与量またはレジメンを修正することができる。

いくつかの実施形態では、治療後のＩＬ−６の活性レベル低下は、治療が有効であることを示す。いくつかの実施形態では、治療後のＩＬ−６の活性レベルが変化しない、または増加した場合、治療が有効でないことを示す。この結果に応じて治療上の投与量またはレジメンを修正することができる。

いくつかの実施形態では、治療後のＩＬ−１０の活性レベル低下は、治療が有効であることを示す。いくつかの実施形態では、治療後のＩＬ−１０の活性レベルが変化しない、または増加した場合、治療が有効でないことを示す。この結果に応じて治療上の投与量またはレジメンを修正することができる。

腫瘍接種後の腫瘍体積によって示される、Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫モデル治療でのシスプラチンの抗腫瘍効果を示す。 ビヒクルまたはシスプラチンで処置された、腫瘍接種後のＢ１６Ｆ１０マウス黒色腫モデルマウスの体重変化を示す。 サイモシンの抗腫瘍活性を示す。Ｂ１６Ｆ１０から派生した腫瘍をもつ動物を、ＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）で処置した。試験した全用量で、動物はビヒクル処置群と比較して腫瘍成長の抑制を呈した。 は、数種類の用量でのサイモシンの抗腫瘍活性を示す。試験した全用量で、サイモシンは、ビヒクル処置群と比較して統計的に有意な腫瘍成長の抑制をもたらした。 サイモシンで処置したＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス皮下黒色腫モデルでのＩＬ−１βの評価を示す。ＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）は、６日間にわたり１日２回、０．０２、０．０６、０．２、０．３、２または６ｍｇ／ｋｇ １０μＬ／ｇでマウスに皮下投与した。ビヒクル処置群と比較して、ＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）処置群では、投薬開始後Ｄ４及びＤ７でＩＬ−１βレベルが低下した。 サイモシンで処置したＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス皮下黒色腫モデルでのＩＬ−４の評価を示す。ＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）は、６日間にわたり１日２回、０．０２、０．０６、０．２、０．３、２または６ｍｇ／ｋｇ １０μＬ／ｇでマウスに皮下投与した。ビヒクル処置群と比較して、ＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）処置群では、投薬開始後Ｄ４及びＤ７でＩＬ−４レベルが上昇した。 サイモシンで処置したＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス皮下黒色腫モデルでのＩＬ−６の評価を示す。ＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）は、６日間にわたり１日２回、０．０２、０．０６、０．２、０．３、２または６ｍｇ／ｋｇ １０μＬ／ｇでマウスに皮下投与した。ビヒクル処置群と比較して、ＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）処置群では、投薬開始後Ｄ４及びＤ７でＩＬ−６レベルが低下した。 サイモシンで処置したＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス皮下黒色腫モデルでのＩＬ−１０の評価を示す。ＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）は、６日間にわたり１日２回、０．０２、０．０６、０．２、０．３、２または６ｍｇ／ｋｇ １０μＬ／ｇでマウスに皮下投与した。ビヒクル処置群と比較して、ＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）処置群では、投薬開始後Ｄ４及びＤ７でＩＬ−１０レベルが低下した。 処置の異なるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス全身黒色腫モデルでのＩＦＮ−ガンマの評価を示す。 処置の異なるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス全身黒色腫モデルでのＩＬ−１βの評価を示す。 処置の異なるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス全身黒色腫モデルでのＩＬ−４の評価を示す。 処置の異なるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス全身黒色腫モデルでのＩＬ−５の評価を示す。 処置の異なるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス全身黒色腫モデルでのＩＬ−６の評価を示す。 処置の異なるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス全身黒色腫モデルでのＩＬ−１０の評価を示す。 処置の異なるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス全身黒色腫モデルでのＩＬ−１２の評価を示す。 処置の異なるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス全身黒色腫モデルでのＴＮＦ−αの評価を示す。 Ｂ１６Ｆ１０マウス肺転移黒色腫モデル及び実験計画を示す。Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞は０日目にマウスに接種した。 ビヒクル、サイモシン単独、抗ＰＤ−１単独、サイモシン＋抗ＰＤ−１またはシクロホスファミドで処置したマウスでの１６日目の肺転移群の分布を示す。 ビヒクル、サイモシン単独、抗ＰＤ−１単独、サイモシン＋抗ＰＤ−１またはシクロホスファミドで処置したＢ１６ＭＥＴマウスでの１日目からの群平均の体重変化率を示す。 異なる用量のビヒクル、サイモシン単独、抗ＰＤ−１単独、サイモシン＋抗ＰＤ−１またはシクロホスファミドで処置したマウスでの１５日目の肺転移群の分布を示す。 異なる用量のビヒクル、サイモシン単独、抗ＰＤ−１単独、サイモシン＋抗ＰＤ−１またはシクロホスファミドで処置後のＢ１６Ｆ１０マウス肺転移黒色腫モデルでのＩＬ−１αを示す。 ビヒクル、サイモシン単独、抗ＰＤ−１単独、サイモシン＋抗ＰＤ−１またはシクロホスファミドで処置したＢ１６Ｆ１０マウスでの１日目からの群平均の体重変化率を示す。 ビヒクル、サイモシン単独、抗ＰＤ−１単独、サイモシン＋抗ＰＤ−１またはシクロホスファミドで処置した、腫瘍移植後１３日目の異なる群での肺転移巣を示す。

本発明は、対象での癌の治療及び／または予防方法に関する。いくつかの実施形態では、癌は、黒色腫またはその転移である。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１種の免疫刺激剤を含む組成物を対象に投与することを伴う。

いくつかの実施形態では、本発明の方法を、小型で成長の遅い局所的及び／または非侵襲性であり得る早期悪性腫瘍を含む早期癌の治療、例えば、疾患を治癒することまたは癌を退縮させることを意図したもの、それに加え、中期の治療、ならびに進行性及び／または転移性及び／または侵襲性の悪性腫瘍を含む末期癌の治療、例えば、疾患の進行を遅延させること、転移を抑制すること、または患者の生存率を増加させることに適用することができる。同様に、併用することで軽度の癌、中度の癌及びまたは高度の癌の治療に使用することができる。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、痛みを伴わない癌、再発性癌、例えば局所再発性、遠隔再発性及び／または難治性癌（すなわち、治療に反応しない癌）を含む癌、転移性癌、局所進行性癌ならびに侵襲性癌の治療にも使用することができる。したがって、「進行性」癌には局所進行癌及び転移癌を含み、患者の顕性疾患を指す。このような顕性疾患は、例えば外科手術または放射線療法などの局所治療法によって容易に治癒することができない。用語「転移性癌」は、身体のある部分から別の部分に拡散した癌を指す。進行性癌はまた切除不能、すなわち、それらが周辺組織まで広がり、外科的に除去できない場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明の方法を、多剤耐性腫瘍を含む薬剤耐性癌の治療に使用することもできる。当技術分野で既知であるように、化学療法に対する癌細胞の耐性は、癌のマネジメントにおける中心課題の一つである。

当業者であれば、これらの分類の多くが重複している（例えば、侵襲性癌が通常、転移性でもある）ことを理解されよう。本明細書で使用される場合、「侵襲性癌」は急速に成長する癌を指す。当業者であれば、乳癌または前立腺癌などの一部の癌では、用語「侵襲性癌」は、所与の癌が再発期間に入って最初の約３分の２以内で再発した進行性癌を指す一方で、他の型に関しては、ほぼすべての症例が侵襲性と見なされる急速に成長する癌を指すことを理解されよう。したがって、この用語は特定の癌型の小区分を包括することができ、またはその他の癌型のすべてを包含する場合もある。

いくつかの実施形態では、本発明の方法によって治療される癌としては、ＡＩＤＳ関連癌、副腎皮質癌、肛門癌、膀胱癌、腸癌、脳及び中枢神経系癌、乳癌、カルチノイド癌、子宮頸癌、軟骨肉腫、絨毛癌、結腸癌、内分泌線癌、子宮内膜癌、ユーイング肉腫、眼癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、胃腸癌、尿生殖器癌、神経膠腫、婦人科系癌、頭頚部癌、肝細胞癌、ホジキン病、下咽頭癌、膵島細胞癌、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌、白血病、肝癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、リンパ腫、黒色腫、基底細胞癌、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭眼、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、食道（ｅｓｏｐｈａｇａｅｌ）癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、下垂体癌、腎細胞癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、扁平上皮癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、移行性細胞癌、栄養膜癌、子宮癌、膣癌、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、ウィルムス癌及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の方法によれば、用語「対象」及びその変形例は、本明細書で使用される場合、疾患または病状を有する、有する疑いがある、または有するリスクのあるいずれかの対象を含む。適した対象（または患者）は、哺乳動物、例えば実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット）、農場の動物及び家畜または愛玩動物（例えば、ネコ、イヌ）などを含む。非ヒト霊長類及び、好ましくはヒト患者が含まれる。「リスクがある」対象は、検出可能な疾患を有する場合もあるし、有しない場合もあり、本明細書に記載された診断方法または治療方法を受ける前に検出可能な疾患を表している場合もあるし、表していない場合もある。「リスクがある」とは、対象が、本明細書に記載する病状の発症と関連がある測定可能なパラメーターである、本明細書に記載する１つ以上のいわゆるリスクファクターを有することを意味する。これらのリスクファクターの１つ以上を有する対象は、このリスクファクター（複数可）を有しない対象よりも、本明細書に記載する病状を発症する確率が高い。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、黒色腫を有すると診断されたヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、黒色腫を有する疑いがあるヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、黒色腫を発症するリスクが高いヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、転移を有する黒色腫患者である。いくつかの実施形態では、対象は、転移のリスクが高い黒色腫患者である。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、黒色腫の治療に使用される。いくつかの実施形態では、黒色腫は、悪性黒子、悪性黒子型黒色腫、表在性拡大型黒色腫、末端性黒子性黒色腫、粘膜黒色腫、結節性黒色腫、ポリープ状黒色腫、線維形成性黒色腫、無色素性黒色腫、軟組織黒色腫、小母斑様細胞を有する黒色腫、スピッツ母斑の特徴を有する黒色腫、ブドウ膜黒色腫またはそれらの組み合わせのいずれかである。

いくつかの実施形態では、ヒト患者は、ステージ０、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶ、またはそれぞれの細分類の状態である黒色腫を有する。ある特定の実施形態では、治療される黒色腫は、悪性転移性黒色腫である。ある特定の実施形態では、治療される黒色腫は、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩまたはステージＩＶである。他の実施形態では、治療される黒色腫は、ステージＭ１ａ、Ｍ１ｂまたはＭ１ｃの黒色腫である。詳細な病期分類情報については、その全体が参照により組み込まれる、Ｂａｌｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００１，“Ｆｉｎａｌ ｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｍｅｌａｎｏｍａ”．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９（１６）：３６３５−４８．ＰＭＩＤ １１５０４７４５）を参照のこと。

いくつかの実施形態では、ヒト患者は１つ以上の黒色腫の早期徴候、例えば既存の黒子の形状または色の変化、限定されないが、非対称、不明瞭な境界、色の不整、約６ｍｍ以上の直径、経時的変化、かゆみ、潰瘍化または出血などを有する。いくつかの実施形態では、ヒト患者は結節性黒色腫を有しており、早期徴候として、限定されないが、皮膚のいずれかの場所への新しいしこりの発生、皮膚上面の隆起、硬い触感、及び持続的成長を含む。

転移または転移性疾患は、ある臓器から別の臓器への癌の拡散である。癌細胞によっては、リンパ壁及び／または血管壁を透過する能力を獲得し、その後、血流を通って循環し、身体の他の部位及び組織へと到達できる。この腫瘍細胞は別の部位で休止状態になった後、血管または壁に再侵入して、増殖し続け、最終的に別の臨床的に検出可能な腫瘍を形成する。

いくつかの実施形態では、黒色腫は悪性転移性黒色腫である。いくつかの実施形態では、転移性黒色腫は、患者に非特異的な腫瘍随伴症状を引き起こし、この症状には、限定されないが、食欲不振、悪心、嘔吐及び疲労が挙げられる。いくつかの実施形態では、患者は脳への転移を有する。いくつかの実施形態では、黒色腫は、肝臓、骨、腹部及び／または遠位リンパ節まで拡散している。

いくつかの実施形態では、治療される対象は、黒色腫を発症するリスクが高い。いくつかの実施形態では、ヒト対象はコーカソイドである。いくつかの実施形態では、ヒト患者は、紫外線への広範囲な曝露のある多日照の気候で生活している。いくつかの実施形態では、治療される対象は、対象の黒色腫に対する感受性を増強させる１種以上の遺伝子突然変異を有する。いくつかの実施形態では、遺伝子突然変異は、ＢＲＡＦ、ＭＣ１Ｒ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫ４、ヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ）酵素（別称、色素性乾皮症（ＸＰ））、多発性腫瘍抑制因子１（ＭＴＳ１）及び／またはＭＤＭ２に生じる。

黒色腫の診断方法は、例えば、Ｗｕｒｍａｎｄ Ｓｏｙｅｒ（Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１０，“Ｓｃａｎｎｉｎｇ ｆｏｒ ｍｅｌａｎｏｍａ”．Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｐｒｅｓｃｒｉｂｅｒ（３３）：１５０−５）に記載されているものなどが周知であり、該文献はその全体が参照により組み込まれる。いくつかの実施形態では、診断は仮想検査によるものである。いくつかの実施形態では、診断は、Ｘ線、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、ＰＥＴ及びＰＥＴ／ＣＴ、超音波、ＬＤＨ試験及び／または光音響検出によるものである。

黒色腫と診断された後、更に別の試験を使用して、癌細胞が皮膚の範囲内に、または身体の他の部分に拡散しているかどうかを判定することができる。試験としては、限定されないが、身体検査及び病歴、リンパ節マッピング及びセンチネルリンパ節生検、ＣＴスキャン、ＰＥＴスキャン、ＭＲＩならびに血液化学試験が挙げられる。

本明細書で使用される場合、用語「治療すること」及び「治療」は、臨床的結果を含めた有益または所望の結果を得るためのアプローチを意味し、これには、治療される疾患または病状の１種以上の測定可能なマーカーにおける最小限の変化または改善も含む場合がある。治療は通常、少なくとも１つの病状、疾患、障害、傷害または損傷の症状を緩和するのに効果的である。臨床的改善の代表的なマーカーは、当業者に明らかであろう。例としては、以下のうちの１つ以上を含むが、これらに限定されない：疾患に起因する１つ以上の症状の重症度及び／または発症頻度を減少させる、疾患の程度を軽減する、疾患を安定させる（例えば、疾患を予防する、または疾患の悪化を遅延させる）、疾患の進行を遅延させる、または緩徐化する、疾患の状態を改善する、疾患の治療に必要な１種以上の他の薬剤の用量を減少させる、及び／または生活の質を向上させるなど。

「予防法」または「予防的治療（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「予防的治療（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、１つ以上の症状及び／またはそれらの根本原因の発生または重症化の予防もしくは抑制、例えば、疾患または病状を発症しやすい対象（例えば、遺伝的素因、環境因子、素因疾患または障害などの結果としてリスクが高くなっている）における疾患または病状の予防を指す。

いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１種の免疫賦活薬を含有する治療的有効量及び／または予防的有効量の組成物を対象に投与することを含む。本明細書で使用される場合、用語「治療的有効量」は、場合により重大な負の影響または有害な副作用を引き起こさずに、病状を治療する、または傷害または損傷を抑制または予防するのに必要な１種以上の薬剤のレベルまたは量を指す。「予防的有効量」は、疾患または病状に感受性である対象、及び／またはそれを発症し得る対象に投与されるとき、将来的な疾患または病状の重症化を予防または抑制するのに十分な薬剤の量を指す。

免疫刺激剤、別称、免疫賦活薬（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｎｔ）または免疫賦活因子（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ）は、免疫系を刺激する物質を指す。いくつかの実施形態では、本発明の免疫刺激剤は、免疫系の１つ以上の陽性調節因子の活性化を誘発できるかまたは活性を増加させることができる。いくつかの実施形態では、本発明の免疫刺激剤は、免疫系の１つ以上の陰性調節因子の失活を誘発できるかまたは活性を減少させることができる。本明細書で使用される場合、用語「活性」は、ゲノムＤＮＡレベル、転写レベル、転写後レベル、翻訳レベル、翻訳後レベルでの所与の標的の活性を指し、以下に限定されないが、遺伝子コピー数、ｍＲＮＡ転写速度、ｍＲＮＡ存在量、ｍＲＮＡ安定性、タンパク質翻訳速度、タンパク質安定性、タンパク質修飾、タンパク質活性、タンパク質複合体活性などを含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、特異的な免疫賦活薬であり得る。特異的な免疫賦活薬は、免疫応答に抗原特異性をもたらす物質、例えばワクチンまたは抗原である。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、非特異的な免疫賦活薬であり得る。非特異的な免疫賦活薬は、抗原特異性に関係なく作用し、抗原特異性を問わず、他の抗原の免疫応答を増強する、または免疫系の成分を刺激する、例えばアジュバントなどである。本発明の方法で使用される免疫刺激剤は、組み換え製剤、合成製剤、天然製剤またはこれらの組み合わせであり得る。

いくつかの実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活薬は、敗血症の治療に有効である。

いくつかの実施形態では、少なくとも１種の免疫賦活薬は、サイモシンペプチド（サイモシン）である。サイモシンは、小タンパク質で、多くの動物組織に存在する。サイモシンは本来、胸腺から単離されたが、現在ではほとんどが他の多くの組織に存在することが知られている。本明細書で使用される場合、サイモシンには、サイモシンα、サイモシンβ、サイモシンγ、及びその機能的変異体を含む。ある種の実施形態では、サイモシンは、サイモシンα（または、アルファサイモシン）である。ある種の実施形態では、サイモシンは、プロサイモシンアルファ（ＰＴＭＡ）である。ある種の実施形態では、サイモシンは、サイモシンアルファ１（「ＴＡ１」、別称サイモシンアルファ−１、サイモシンａ−１、サイモシンα−１、またはアルファサイモシン）及びＴＡ１と構造的相同性を有する機能的変異体である。いくつかの実施形態では、ＴＡ１は、アミノ酸配列（Ｎ−アセチル）−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−ＯＨ（配列番号１）を有するペプチドである。ＴＡ１のアミノ酸配列は、米国特許第４，０７９，１３７号に開示されており、その開示内容は参照により本明細書に組み込まれる。ＴＡ１は、アセチル化Ｎ末端を有する非グリコシル化２８アミノ酸ペプチドであり、分子量は約３１０８である。いくつかの実施形態では、ＴＡ１の合成バージョンが使用される。いくつかの実施形態では、ＴＡ１の合成バージョンは、ある特定の国で商標名ＺＡＤＡＸＩＮ（チマルファシン）として市販されている。本明細書で使用される場合、用語ＴＡ１はまた、配列番号１に由来する機能的な変異体または断片を指す。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、サイモシンアルファ１（ＴＡ１）である。アルファサイモシンペプチドは、サイモシンアルファ１（ＴＡ１）ペプチドを含み、これには天然型ＴＡ１に加えて、天然型ＴＡ１のアミノ酸配列、それと実質的に類似するアミノ酸配列、もしくはその短縮配列形式を有する合成ＴＡ１または組み換えＴＡ１、及びＴＡ１のものと実質的に類似した生物活性を所有する、置換、欠失、延長、交換またはそれ以外の修飾をされた配列を有する生物学的活性類似体が含まれ、例えば、ＴＡ１と実質的に同一な活性で実質的に同一の方法で機能するような、ＴＡ１と十分なアミノ酸相同性を有するＴＡ１由来ペプチドである。アルファサイモシンペプチドの好適な投与量は、約０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内であり得る。いくつかの実施形態では、ＴＡ１は、米国特許第４，０７９，１３７号に開示されたアミノ酸配列を有し、その開示内容は参照により本明細書に組み込まれる。サイモシン分画５（ＴＦ５）から最初に単離されたＴＡ１をシーケンスして化学的に合成した。ＴＡ１は、３１０８の分子量を有する２８アミノ酸ペプチドである。

いくつかの実施形態では、アルファサイモシンペプチドの有効量は、約０．０１〜２０ｍｇのＴＡ１、約１〜１０ｍｇのＴＡ１、約２〜１０ｍｇのＴＡ１、約２〜７ｍｇのＴＡ１、または約３〜６．５ｍｇのＴＡ１に相当する範囲内の投与量単位であり得る量であり、約１．６、３．２もしくは６．４ｍｇのＴＡ１、または約３．２もしくは６．４ｍｇのＴＡ１を含んでよい。投与量単位は、１日当たり１回投与しても、１日当たり複数回投与してもよい。いくつかの実施形態では、ＴＡ１は、約０．５〜１０ｍｇ／日の範囲内の投与量で対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＴＡ１投与量は、約１．５〜７ｍｇ／日の範囲内であるか、または約１．６〜６．４ｍｇ／日の範囲内である。ある特定の実施形態では、ＴＡ１投与量は、約１．７〜１０ｍｇ／日、約１．７〜７ｍｇ／日、または約３〜７ｍｇ／日の範囲内である。いくつかの実施形態では、有効な投与量は、約１．６、３．２または６．４ｍｇ／日を含む。いくつかの実施形態では、ＴＡ１は、約０．０１〜約６ｍｇ／ｋｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＴＡ１は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、またはそれ以上、対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＴＡ１は、対象に単独で投与されるか、または１種以上の追加の免疫刺激剤とともに投与される。

ＴＡ１ペプチドは、天然型ＴＡ１に加えて、天然型ＴＡ１のアミノ酸配列、それと実質的に類似するアミノ酸配列、もしくはその短縮配列形式を有する合成ＴＡ１または組み換えＴＡ１、及びＴＡ１のものと実質的に類似した生物活性を所有する、置換、欠失、延長、交換またはそれ以外の修飾をされた配列を有する生物学的活性類似体が含まれ、例えば、ＴＡ１と実質的に同一な活性で実質的に同一の方法で機能するような、ＴＡ１と十分なアミノ酸相同性を有するＴＡ１由来ペプチドである。いくつかの実施形態では、サイモシンの好適な投与量は、約０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内、例えば０．００１、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０ｍｇ／ｋｇ／日以上であり得る。いくつかの実施形態では、ＴＡ１は、米国特許第４，０７９，１３７号に開示されたアミノ酸配列を有し、その開示内容は参照により本明細書に組み込まれる。

サイモシン分画５（ＴＦ５）から最初に単離されたＴＡ１をシーケンスして化学的に合成した。ＴＡ１は、３１０８の分子量を有する２８アミノ酸ペプチドである。用語ＴＡ１はまた、ＴＡ１の機能的変異体及び機能的断片、天然型、合成、または組み換えサイモシンを含む。ＴＡ１は当初、ウシ胸腺から単離され、胸腺切除された動物モデルの「免疫機能」を元に戻すことが示された。いくつかの実施形態では、サイモシンは、配列番号１のアミノ酸配列で構成される（場合によりアシル化、例えばアセチル化、Ｎ末端化される）。いくつかの実施形態では、サイモシンは、ＴＡ１と実質的に類似し、ＴＡ１の免疫調節活性を維持するアミノ酸配列を含む。実質的に類似する配列は、例えば、ＴＡ１と比較して、約１〜約１０個のアミノ酸の欠失、挿入及び／または置換（集合的に）を有してもよい。例えば、サイモシンは、ＴＡ１と比較して、約１〜約５（例えば、１、２または３）個のアミノ酸の挿入、欠失及び／または置換（集合的に）を有してよい。

したがって、サイモシンは、例えば、ＴＡ１と比較して、約１〜約１０個のアミノ酸、または約１〜約５個のアミノ酸、すなわち１、２または３個のアミノ酸の欠失を有する短縮ＴＡ１配列で構成されてよい。このような欠失は、ペプチドの免疫調節活性が実質的に維持される限り、Ｎ末端またはＣ末端にあってもよく、及び／または内部にあってもよい。その代わりに、またはそれに加えて、ＴＡ１の免疫調節性活性が実質的に維持される場合、ＴＡ１と比較して、実質的に類似した配列が、約１〜約５個のアミノ酸挿入（例えば、１、２または３個のアミノ酸挿入）を有していてもよい。その代わりに、またはそれに加えて、実質的に類似した配列は、免疫調節性活性が実質的に維持される場合、１〜約１０のアミノ酸置換を有していてもよい。例えば、実質的に類似した配列は、１〜約５、すなわち１、２または３個のアミノ酸置換を有してよく、これは保存的または非保存的置換を含み得る。いくつかの実施形態では、置換は保存的である。一般に、保存的置換は、化学的に類似したアミノ酸（例えば、極性、非極性、または荷電状態）の置換を含む。置換アミノ酸は、２０個の標準アミノ酸から選択することができ、または非標準アミノ酸（例えば、保存的非標準アミノ酸）でもよい。

いくつかの実施形態では、サイモシンは、ＴＡ１の免疫調節性活性を維持している場合、配列番号１に対して少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例えば、サイモシンは、配列番号１に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。サイモシンは、配列番号１に対して１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端は場合により、例えば、Ｃ１〜１０またはＣ１〜Ｃ７アシル基またはアルキル基でアシル化（例えば、アセチル化）またはアルキル化されてもよい。

ある特定の実施形態では、上記の実質的に類似し、相同性のペプチドは、ＴＡ１（配列番号１）と比較して、少なくとも約５０％、７０％、８０％、９０％、または約１００％のレベルで機能することができる。

サイモシンは、例えば、固相合成によって合成して調製してもよく、または組み換えによって作成し、既知の技術で精製してもよい。サイモシンはまた、凍結乾燥形態で提供し、無菌（例えば、水性）希釈液を用いて投与前に復元してもよい。サイモシンの製剤は、皮下注射または他の有効な経路によって投与してもよい。

ある特定の実施形態では、サイモシンは循環中の半減期を増加させるためＰＥＧ化される。治療用タンパク質の半減期を増加させるこのような方法は周知である。

サイモシンは、炎症性免疫応答及び自然免疫応答に関与しており、哺乳動物における自己と非自己との区別を容易にすると考えられている。サイモシンによるＰＡＭＰ（病原体関連分子パターン）リガンドの活性化は、細胞内シグナル伝達経路の刺激をもたらし、その結果、共刺激分子、炎症誘発性サイトカイン、一酸化窒素及びエイコサノイドの発現が生じる。サイモシンは、例えば、樹状細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞に影響を及ぼし得る。

いくつかの実施形態では、ＴＡ１は、第２の免疫刺激剤と組み合わされる。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、敗血症の治療に有効である免疫刺激剤である。いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、インターロイキン７、インターロイキン１５またはＰＤ−１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、敗血症の治療に有効である免疫刺激剤は、対象でのＴ細胞枯渇を低減できる。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、またはインターロイキン７もしくはインターロイキン１５の活性を増加させることができる物質である（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｏｏｍｅｒ（“Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ： Ｉｓ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｉｚｅｄ ｉｍｍｕｎｏ−ｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ｔｈｅｒａｐｙ ｔｈｅ ａｎｓｗｅｒ？”，Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ５：１，４５−５６；Ｊａｎｕａｒｙ １，２０１４）を参照のこと）。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、チェックポイントタンパク質に対する阻害剤（別称、チェックポイント阻害剤、免疫チェックポイント調節因子、またはＣＰＭ）である。本明細書で使用される場合、チェックポイントタンパク質は、免疫系が細胞を攻撃しないようにするものである。チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質の効果を減らすように設計されている。いくつかの実施形態では、チェックポイントタンパク質は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＴＬＡ４、ＫＩＲ、ＩＤＯ１、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）及びＬＡＧ３を含むが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、第２の免疫賦活薬は、対象での異常な免疫抑制を減衰させることができる。いくつかの実施形態では、異常な免疫抑制は、免疫系での免疫抑制因子の異常な高活性によるものである。いくつかの実施形態では、対象で異常に高い活性を有する免疫抑制因子は、プログラム死受容体（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド（ＰＤ−Ｌ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）またはサイトカインＩＬ−１０である。いくつかの実施形態では、敗血症の治療に有効な第２の免疫刺激剤は、低炎症性段階にある敗血症患者で異常な高活性を有する免疫抑制因子の阻害剤である（目的を問わず、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｏｏｍｅｒ（“Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ：Ｉｓ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｉｚｅｄ ｉｍｍｕｎｏ−ｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ｔｈｅｒａｐｙ ｔｈｅ ａｎｓｗｅｒ？”，Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ５：１，４５−５６；Ｊａｎｕａｒｙ １，２０１４）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ及び／またはＩＬ−１０の阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＤＮＡレベル、ｍＲＮＡレベル及び／またはタンパク質レベルでＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ及び／またはＩＬ−１０の活性を低減する。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭまたはＩＬ−１０に対する抗体である。いくつかの実施形態では、阻害剤はＰＤ−１に対する抗体、例えば、米国特許第８５５２１５４号、第８７４１２９５号、第８００８４４９号、第８４６０８８６号及び第７０２９６７４号または米国特許出願公開第２０１１０１７１２２０号、第２０１１０２７１３５８号、第２０１４００４４７３８号に記載されているものであり、それぞれが全体として参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、阻害剤はＰＤリガンドに対する抗体である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＰＤ−１とそのリガンドとの間の相互作用を阻害する。

いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤ−１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１抗体の投与量は、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０または１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１抗体の投与量は、約１〜５ｍｇ／ｋｇ、または約２〜３ｍｇ／ｋｇである。

本明細書で使用される場合、「ＰＤ−１の阻害剤」という語句は、ＰＤ−１によって媒介されるシグナル伝達経路を阻害する化合物を指し、例えばＰＤ−１シグナル伝達経路内の成分に対する阻害剤である。ＰＤ−１シグナル伝達経路は、Ｒｉｌｅｙ（Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２００９ Ｍａｙ；２２９（１）：１１４−１２５．）に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で使用される場合、ＰＤ−１シグナル伝達経路の成分の「活性」という用語は、ゲノムＤＮＡレベル、転写レベル、転写後レベル、翻訳レベル、翻訳後レベルでのパラメーターを表すことができ、これには、限定されないが、遺伝子活性、ＲＮＡ活性及びタンパク質活性を含む。遺伝子活性は、遺伝子コピー数、遺伝子増幅数またはプロモーター活性などであり得る。ＲＮＡ活性は、ｍＲＮＡ存在量、合成速度及び／または安定性などであり得る。タンパク質活性は、タンパク質存在量、合成速度、安定性、酵素活性、リン酸化速度、修飾、結合活性などであり得る。いくつかの実施形態では、阻害剤はＰＤ−１の活性を低減する。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＰＤ−１に対するリガンドの活性を低減する。いくつかの実施形態では、阻害剤は、例えば抗ＰＤ−１抗体などのＰＤ−１阻害剤、または抗ＰＤＬ−１抗体などのＰＤ−１に対するリガンド（別称、ＰＤＬ−１）の阻害剤である。抗体は、モノクローナル、ポリクローナルまたはこれらの組み合わせのいずれであってもよい。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、サイトカインである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、限定されないが、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンフォカイン、腫瘍壊死因子を含む。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤としてのサイトカインは、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）である。本明細書で使用される場合、用語ＣＳＦは、単離された、合成または組み換えのＣＳＦを指し、その機能的誘導体及び機能性断片を含む。本明細書で使用される場合、用語ＣＳＦは、完全長のコロニー刺激因子ポリペプチド、その機能的断片、及び／またはその機能的誘導体のいずれかを含む物質を指す。コロニー刺激因子は、造血幹細胞の表面にある受容体タンパク質と結合する分泌型糖タンパク質であり、それによって、細胞増殖及び／または特定の種類の血液細胞、例えば白血球への分化をもたらす細胞内シグナル伝達経路を活性化する。

いくつかの実施形態では、ＣＳＦはマクロファージコロニー刺激因子（例えばＣＳＦ１、すなわちＭ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（例えば、ＣＳＦ２、別称ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（例えば、ＣＳＦ３、別称ＧＣＳＦまたはＧ−ＣＳＦ）及び／またはその類似体のポリペプチドを含み、例えば、プロメガポエチンまたはフィルグラスチム、または対象の免疫系を刺激できるこれらの機能的断片である。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤としてのサイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦである。本明細書で使用される場合、用語ＧＭ−ＣＳＦは、単離された、合成または組み換えのＧＭ−ＣＳＦを指し、その機能的誘導体及び機能性断片を含む。本来、ＧＭ−ＣＳＦは、マクロファージ、Ｔ細胞、マスト細胞、ＮＫ細胞、血管内皮細胞及び繊維芽細胞によって分泌され得る。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、天然ＧＭ−ＣＳＦの医薬類似体、例えばサルグラモスチム及びモルグラモスチムであり得る。いくつかの実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、ホモダイマーまたはヘテロダイマーの形態である。いくつかの実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、組み換え技術を使用して製造される（例えば、モルグラモスチムまたはサルグラモスチム（別称リューキン））。

いくつかの実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦの投与量は、約１〜１０００ｍｃｇ／ｍ^２、例えば約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００ｍｃｇ／ｍ^２である。いくつかの実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦの投与量は、約１２５〜約２５０ｍｃｇ／ｍ^２である。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤としてのサイトカインはインターフェロンである。本明細書で使用される場合、用語インターフェロンは、単離された、合成または組み換えのインターフェロンを指し、その機能的誘導体及び機能性断片を含む。本明細書で使用される場合、インターフェロン（ＩＦＮ）は、病原体、例えばウイルス、細菌、寄生体または腫瘍細胞の存在に応答して、宿主細胞によって産生され、放出されるポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、インターフェロンは免疫細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、ナチュラルキラー細胞及びマクロファージを活性化する。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）抗原の活性を増加させる。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、Ｉ型ＩＦＮ、ＩＩ型ＩＦＮまたはＩＩＩ型ＩＦＮに属する。いくつかの実施形態では、Ｉ型ＩＦＮは、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ε、ＩＦＮ−κまたはＩＦＮ−ωである。いくつかの実施形態では、ＩＩ型ＩＦＮは、例えばＩＦＮ−γのように、ＩＦＮＦＧＲ１鎖とＩＦＮＧＲ２鎖で構成されるＩＦＮＲと結合する。いくつかの実施形態では、ＩＩＩ型ＩＦＮは、ＣＲＦ２−４及びＩＦＮＬＬＲ１で構成される受容体複合体を経由してシグナルを伝達する。いくつかの実施形態では、本出願のインターフェロンは、ＭＨＣＩの活性及び／またはＭＨＣＩＩ活性を増加させる。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、対象の免疫プロテアソーム活性を増加させる。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、細胞傷害性Ｔ細胞の活性を増加させる。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、シグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）複合体を活性化させる。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、Ｊａｎｕｓキナーゼ−ＳＴＡＴ（ＪＡＫ−ＳＴＡＴ）シグナル伝達経路を活性化させる。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、アダプタータンパク質ＣＲＫＬのＣＲＫファミリーを活性化させる。ＣＲＫＬは、Ｃ３Ｇ／Ｒａｐ１経路によるシグナル伝達も調節するＳＴＡＴ５の核内アダプターである。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、ｐ３８マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰキナーゼ）を活性化させて、遺伝子転写を誘発する。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）シグナル伝達経路を活性化させる。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、ヘルパーＴ細胞の活性を増加させる。いくつかの実施形態では、インターフェロンはＩＦＮ−γである。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、マクロファージ及び／またはナチュラルキラー細胞を直接活性化させる。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、インターフェロンを誘発することができる。いくつかの実施形態では、インターフェロンは、ポリエチレングリコールと架橋される。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤としてのサイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）である。本明細書で使用される場合、用語ＴＮＦは、単離された、合成または組み換えのＴＮＦを指し、その機能的誘導体及び機能性断片を含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦは、活性化マクロファージ、ＣＤ４＋リンパ球、ＮＫ細胞、好中球、マスト細胞、好酸球またはニューロンによって産生され得る。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤としてのサイトカインは、インターロイキンである。本明細書で使用される場合、用語インターロイキンは、単離された、合成または組み換えのインターロイキンを指し、その機能的誘導体及び機能性断片を含む。いくつかの実施形態では、インターロイキンは、ヘルパーＣＤ４Ｔリンパ球、単球、マクロファージまたは内皮細胞によって合成され得る。いくつかの実施形態では、インターロイキンは、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球及び／または造血細胞の発生及び／または分化を促進する。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、インターロイキン１、インターロイキン３、インターロイキン４、インターロイキン５、インターロイキン６、インターロイキン７、インターロイキン８、インターロイキン９、インターロイキン１０、インターロイキン１１、インターロイキン１２、インターロイキン１３、インターロイキン１４、インターロイキン１５、インターロイキン１６またはインターロイキン１７を含む。本明細書で使用される場合、用語インターロイキンは、単離されたインターロイキン、合成または組み換えのインターロイキンの両方を指し、その機能的誘導体及び機能性断片を含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ＩＬ−７、ＩＬ−９及び／またはＩＬ−１５を含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、リンパ系細胞、例えばＢ細胞血統、Ｔ細胞血統及び／またはＮＫ細胞の成長因子として機能することができるインターロイキンを含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ヘルパーＴ細胞の成長を助けることができるインターロイキンを含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、細胞免疫反応を刺激して、維持することができるインターロイキンを含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、リンパ系細胞、例えばＢ細胞血統及び／またはＴ細胞血統の増殖を刺激することができるインターロイキンを含む。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤は、ＩＬ受容体の活性を増強することができる物質を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ受容体は、ＩＬ−７受容体である。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ＩＬ−７とＩＬ−７受容体との相互作用を増強することができる物質を含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、インターロイキン７受容体アルファを含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、インターロイキン７受容体アルファとヘテロダイマーを形成する共通ガンマ鎖受容体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ受容体はＩＬ−９受容体である。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ＩＬ−９とＩＬ−９受容体との相互作用を増強することができる物質を含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、インターロイキン９受容体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ受容体はＩＬ−１５受容体である。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５受容体との相互作用を増強することができる物質を含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、インターロイキン１５受容体ベータ鎖（ＣＤ１２２）を含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、インターロイキン１５受容体の共通ガンマ鎖（ガンマ−Ｃ、ＣＤ１３２）を含む。

いくつかの実施形態では、第２の免疫刺激剤はインターロイキンを含む。いくつかの実施形態では、インターロイキンはＩＬ−７である。いくつかの実施形態では、ＩＬ−７の投与量は、約０．１〜１００ｍｃｇ／ｋｇ、例えば約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｃｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、投与量は、約１〜５０ｍｃｇ／ｋｇ、または約３〜３０ｍｃｇ／ｋｇである。

その他の免疫刺激剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、白血球成長因子として機能することができる。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、幹細胞を刺激して、顆粒球（例えば、好中球、好酸球及び好塩基球）及び／または単球を産生する。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、化学療法後の好中球減少を防止することができる。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、好中球前駆体及び成熟した好中球の残存、増殖、分化及び／または機能を刺激することができる。いくつかの実施形態では、免疫刺激剤は、１つ以上のシグナル伝達経路を使用して機能し、これには、Ｊａｎｕｓキナーゼ（ＪＡＫ）、シグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）、Ｒａｓ／マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及びプロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）シグナル伝達経路が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、本出願の免疫賦活薬または少なくとも２つの免疫賦活薬の組み合わせは、抗癌剤と併用される。

いくつかの実施形態では、本出願の免疫賦活薬と併用して使用できる抗癌剤には、限定されないが、エストロゲン受容体アンタゴニスト、受容体型チロシンキナーゼ阻害剤、癌細胞複製阻害剤、癌細胞シグナル伝達阻害剤またはサイレンス（ｓｉｌｅｎｃｅｓ）、ならびに癌細胞成長、アポトーシスに対する癌細胞耐性及び／または癌細胞転移に関与する、腫瘍細胞表面の細胞内シグナル伝達分子のその他阻害剤を含み得る。

いくつかの実施形態では、本出願の免疫賦活薬は、エストロゲン受容体アンタゴニスト（ＥＲＡＮＴ）、エストロゲン受容体に対する阻害剤またはエストロゲン受容体リガンドに対する阻害剤と併用される。

いくつかの実施形態では、本出願の免疫賦活薬は、受容体型チロシンキナーゼ阻害剤と併用される。チロシンキナーゼ阻害剤は、腫瘍細胞などの細胞中の受容体型及び／または非受容体型チロシンキナーゼを標的とする種類の治療薬または薬物を表す。特定の例において、チロシンキナーゼ阻害剤は、抗体ベース（例えば、抗チロシンキナーゼモノクローナル抗体など）、またはポリヌクレオチドベース（例えば、チロシンキナーゼアンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉リボ核酸など）形態の標的療法である。いくつかの実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤は、酵素のＡＴＰ結合部位と結合することによって標的チロシンキナーゼを阻害する小分子である。

いくつかの実施形態では、本出願の免疫賦活薬は、抗微小管剤などの癌細胞の複製阻害剤と併用される。抗微小管剤とは、微小管機能を阻止することにより細胞分裂を阻害する化学物質を指す。

いくつかの実施形態では、本出願の免疫賦活薬は、癌細胞シグナル伝達阻害剤と併用される。いくつかの実施形態では、癌細胞シグナル伝達阻害剤は、ＥＧＦＲ（表皮成長因子受容体）応答を阻害できる薬剤、例えばＥＧＦＲ抗体、ＥＧＦ抗体、ならびに、ＥＧＦＲ阻害剤；ＶＥＧＦ（血管内皮成長因子）阻害剤；及びｅｒｂＢ２受容体阻害剤（例えば、ｅｒｂＢ２受容体と結合する有機分子または抗体）である分子を含む。

いくつかの実施形態では、追加の抗癌剤は、本発明の第１の免疫刺激剤の投与前、投与と同時、または投与後に投与することができる。

いくつかの実施形態では、抗癌剤は米国特許第７，６１１，７０２号、第７，７４１，３４５号及び第８，０８８，７７０号に記載のイピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｙｍａｂ）または誘導体を含み、その全体が参照により組み込まれる。

いくつかの実施形態では、抗癌剤は、シグナル伝達阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、形質導入阻害剤は、ＢＲＡＦ阻害剤、例えばベムラフェニブ及びダブラフェニブである。いくつかの実施形態では、形質導入阻害剤は、ＭＥＫ阻害剤、例えばトラメチニブである。いくつかの実施形態では、形質導入阻害剤は、ｃ−ＫＩＴ阻害剤、例えばイマチニブある。

いくつかの実施形態では、抗癌剤はキナーゼ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、米国特許第７，２３５，５７６号に記載のソラフェニブまたは誘導体を含む。キナーゼ阻害剤は、連続（すなわち、毎日）、１日複数回、隔日などで投与してもよく、本発明の免疫刺激剤の投与前、投与と同時、または投与後、例えば、治療レジメン期間中の同じ日（複数可）または別の日に投与してもよい。ある特定の実施形態では、キナーゼ阻害剤は、例えば、約１０〜２０００ｍｇ／日の投与、約５０〜１０００ｍｇ／日、または約５０〜８００ｍｇ／日の投与量範囲で投与される。１日投与量は、例えば、約５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇなどであってもよい。

いくつかの実施形態では、抗癌剤は、抗悪性腫瘍性の熱ショックアポトーシス活性化因子（ＨＳＡＡ）を含む（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１００３１７５８３号を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ＨＳＡＡは、ＳＴＡ−４７８３（エレスクロモル）を含む。ＨＳＡＡは、連続（すなわち、毎日）、１日複数回、隔日などで投与してもよく、本発明の免疫刺激剤の投与前、投与と同時、または投与後、例えば、治療レジメン期間中の同じ日（複数可）または別の日に投与してもよい。ある特定の実施形態では、ＨＳＡＡは、例えば、約０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日の投与、約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ／日、または約１〜２００ｍｇ／ｋｇ／日の投与量範囲で投与される。１日投与量は、例えば、２５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇなどであってよい。

いくつかの実施形態では、抗癌剤は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）に対する阻害剤を含む（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１００３３００９３号を参照のこと）。いくつかの実施形態では、阻害剤はＣＴＬＡ４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４抗体は、限定されないが、９Ｈ１０（ＥＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ）、ＭＤＸ０１０（ＭＥＤＡＲＥＸ）、１Ｆ４（ＧＥＮＥＴＥＸ）、ＢＮＩ３（ＧＥＮＥＴＥＸ）、Ｑ０１（ＡＢＮＯＶＡ）、Ａ０１（ＡＢＮＯＶＡ）、Ｍ０８（ＡＢＮＯＶＡ）、１Ｂ８（ＡＢＣＡＭ）、ＷＫＨ２０３（ＡＢＣＡＭ）、ａｂ９９８４（ＡＢＣＡＭ）、ａｂ１３４８６（ＡＢＣＡＭ）、イピリムマブ、チシリムマブまたはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４抗体は、連続（すなわち、毎日）、１日複数回、隔日などで投与してもよく、本発明の免疫刺激剤の投与前、投与と同時、または投与後、例えば、治療レジメン期間中の同じ日（複数可）または別の日に投与してもよい。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ４抗体は、例えば、１日当たり０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ（患者体重）の投与、または約０．０１〜２０ｍｇ／ｋ、または約１〜１５ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される。

ある特定の実施形態では、抗癌剤は、１つ以上の抗悪性腫瘍薬を含む。いくつかの実施形態では、抗悪性腫瘍薬は化学療法剤である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤及び細胞傷害性抗生物質から選択される。

本明細書で使用される場合、用語「アルキル化剤」は、タンパク質、ＲＮＡ及びＤＮＡを含めた、対象の分子をアルキル化する能力を有する薬剤を指す。アルキル化剤の非限定的な例としては、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、テトラジン、アジリジン、シスプラチン及び誘導体、ならびに非古典的アルキル化剤が挙げられる。ナイトロジェンマスタードとしては、メクロレタミン、シクロホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミド及びブスルファンが挙げられる。

本明細書で使用される場合、用語「代謝拮抗剤」は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質合成を阻害する分子を指す。いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は、核酸塩基またはヌクレオシド（リン酸基のないヌクレオチド）に類似しているが、変更された化学基を有する。これらの薬物は、ＤＮＡ合成に必要とされる酵素を阻害すること、あるいはＤＮＡまたはＲＮＡに組み込まれることのいずれかにより、その効果を及ぼす。ＤＮＡ合成に関与する酵素を阻害することにより、ＤＮＡはそれ自体を複製することができないので有糸分裂が阻止される。また、ＤＮＡへの分子の誤取り込み（ｍｉｓｉｎｃｏｒｐｅｒａｔｉｏｎ）の結果、ＤＮＡ損傷が発生する可能性があり、プログラム細胞死（アポトーシス）が誘発される。いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は、葉酸拮抗剤、フルオロピリミジン、デオキシヌクレオシド類似体及びチオプリンである。いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は、メトトレキサート、ペメトレキセド、フルオロウラシル、カペシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、デシタビン、ビダーザ、フルダラビン、ネララビン、クラドリビン、クロファラビン、ペントスタチン、チオグアニン及びメルカプトプリンから選択される。

本明細書で使用される場合、用語「抗微小管剤」は、微小管機能を阻害することによって細胞分裂を阻止する化学物質を指す。

いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は有糸分裂阻害剤である。

本明細書で使用される場合、用語「トポイソメラーゼ阻害剤」は、トポイソメラーゼＩ及び／またはトポイソメラーゼＩＩの活性を調節することができる薬剤を指す。いくつかの実施形態では、本発明のトポイソメラーゼ阻害剤は、トポイソメラーゼＩ阻害剤であり得る。本発明の更に別の実施形態では、トポイソメラーゼ阻害剤はトポイソメラーゼＩＩ阻害剤である。

本明細書で使用される場合、用語「細胞傷害性抗生物質」細胞傷害性抗生物質には、限定されないが、アンチノマイシン（ａｎｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ブレオマイシン、マイトマイシン、プリカマイシン等を含む。チロシンキナーゼ阻害剤の例としては、ニロチニブ、イマチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマン（ｍａｔｕｚｕｍａｎ）等が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、他の抗癌剤は、例えばアレムツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ及びトラスツズマブなどのモノクローナル抗体；例えばアミノレブリン酸、メチルアミノレブリン酸、ポルフィマーナトリウム及びベルテポルフィンなどの光増感剤；ならびに、例えばアリトレチノイン、アルトレタミン、アムサクリン、アナグレリド、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、ベキサロテン、ボルテゾミブ、セレコキシブ、デニロイキンディフティトックス、エルロチニブ、エストラムスチン、ゲフィチニブ、ヒドロキシカルバミド、イマチニブ、ペントスタチン、マソプロコール、ミトタン、ペガスパルガーゼ及びトレチノインなどの他の薬剤である。

いくつかの実施形態では、抗悪性腫瘍薬は、アルキル化抗悪性腫瘍薬（ＡＩｋＡＡ）を含む。いくつかの実施形態では、ＡＩｋＡＡはダカルバジン（ＤＴＩＣ）を含む。いくつかの実施形態では、アルキル化抗悪性腫瘍薬は、例えば、約７００〜１３００ｍｇ／ｍ^２／日の投与量範囲内で、より好ましくは約８００〜１２００ｍｇ／ｍ^２／日の投与量で、及び最も好ましくは約１０００ｍｇ／ｍ^２／日の投与量で患者に投与してよい。

いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、黒色腫の１つ以上の症状を、臨床的に関連した、統計的に有意な及び／または持続的な方法で改善、治療及び／または予防することができる。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物の投与は、黒色腫の１つ以上の症状の改善、治療及び／または予防に関して、統計的に有意な治療効果をもたらす。一実施形態では、統計的に有意な治療効果は、米国規制当局（例えば、ＦＤＡ）またはそれ以外の国の規制当局の１つ以上により提供される１つ以上の標準または基準に基づいて決定される。いくつかの実施形態では、統計的に有意な治療効果は、規制当局の承認した臨床試験設定及び／または手順から得た結果に基づいて決定される。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、無再発生存期間（ＲＦＳ、再発または死亡までの時間の長さ）によって測定した場合に、統計的に有意な治療効果を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、頻度及び／または転移の重症度によって測定した場合に、統計的に有意な治療効果を提供する。

いくつかの実施形態では、統計的に有意な治療効果は、少なくとも５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、またはそれ以上の患者集団に基づいて決定される。いくつかの実施形態では、統計的に有意な治療効果は、ランダム化二重盲検臨床試験設定から得られるデータに基づいて決定される。いくつかの実施形態では、統計的に有意な治療効果は、約０．０５、０．０４、０．０３、０．０２または０．０１以下のＰ値を有するデータに基づいて決定される。いくつかの実施形態では、統計的に有意な治療効果は、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％以上の信頼区間を有するデータに基づいて決定される。いくつかの実施形態では、統計的に有意な治療効果は、本発明によって提供される方法の第ＩＩＩ相臨床試験の承認（例えば、米国のＦＤＡによる）によって決定される。

いくつかの実施形態では、統計的に有意な治療効果は、少なくとも５０、１００、２００、３００または３５０の患者集団のランダム化二重盲検臨床試験で測定される。集団は本発明の医薬組成物で処置されるが、ＭＤ症状を治療するための他の薬剤は一切併用しない。いくつかの実施形態では、統計的に有意な治療効果は、少なくとも５０、１００、２００、３００または３５０の患者集団のランダム化臨床試験によって、また本明細書に記載する基準のような、ＭＤ症状評価に関するいずれかの一般に容認された基準を使用して測定される。

一般に、統計解析には、規制当局、例えば、米国または中国またはその他いずれかの国のＦＤＡによって許可された、いずれかの好適な方法を含むことができる。いくつかの実施形態では、統計分析には、非層化分析、例えば、カプラン−マイヤー法、Ｊａｃｏｂｓｏｎ−Ｔｒｕａｘ法、Ｇｕｌｌｉｋｅｎ−Ｌｏｒｄ−Ｎｏｖｉｃｋ法、Ｅｄｗａｒｄｓ−Ｎｕｎｎａｌｌｙ法、Ｈａｇｅｍａｎ−Ａｒｒｉｎｄｅｌ法、及び階層線形モデル（ＨＬＭ）に基づくログランク分析、ならびにコックス回帰分析が含まれる。

いくつかの実施形態では、方法は、黒色腫進行の特定の段階で免疫刺激剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象でＴ細胞のアポトーシスが開始したときに、免疫刺激剤を対象に投与する。Ｔ細胞のアポトーシスを検出する方法は周知であり、例えばＦＩＴＣアネキシンＶを使用した方法などである。いくつかの実施形態では、対象でＴ細胞のアポトーシスによるＴ細胞枯渇が生じているときに、免疫刺激剤を対象に投与する。Ｔ細胞の定量化方法は周知であり、例えば、フローサイトメトリーを使用した方法などである。いくつかの実施形態では、対象で所定レベルの活性化Ｔ細胞集団を維持するために免疫刺激剤を対象に投与する。いくつかの実施形態では、活性化Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞である。

ある特定の実施形態では、治療レジメンは、本発明の免疫刺激剤を含有する、複数日の医薬組成物を含み、また免疫刺激剤は、治療レジメンの少なくとも一部の期間、対象に投与することができる。

ある特定の実施形態では、治療レジメンは、約１〜１０日、約１〜２０日、約１〜３０日、約１〜４０日、約１〜５０日、約１〜６０日、約１〜７０日、約１〜８０日、約１〜９０日、約１〜１００日またはそれ以上の期間、医薬組成物を投与することを含む。

ある特定の実施形態では、治療レジメンは、約１〜５日、約５〜１０日、約１０〜２０日、約２０〜３０日またはそれ以上の医薬組成物の非投与を更に含む。いくつかの実施形態では、約１〜１０日、約１〜２０日、約１〜３０日、約１〜４０日、約１〜５０日、約１〜６０日、約１〜７０日、約１〜８０日、約１〜９０日、約１〜１００日またはそれ以上の間、医薬組成物は毎日投与され、それに続く約１〜５日、約５〜１０日、約１０〜２０日、約２０〜３０日、アルファサイモシンペプチドが非投与であってよい。

いくつかの実施形態では、方法は、過剰活性化及び過剰増殖による重度の及び／または致命的な免疫介在性有害反応を回避するために、投与後の対象の反応をモニターすることを更に含む。いくつかの実施形態では、患者が持続的な中程度の有害反応を示す場合、免疫刺激剤の投与を変更（例えば、減少、一時中止、または終了）する。いくつかの実施形態では、最初の用量の投与から約１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週またはそれ以上の間、患者の反応が見られない場合、投与量を変更する。いくつかの実施形態では、患者が重度のまたは致死的な有害反応を示す場合、投与量を変更する。有害反応には、限定されないが、腹痛、発熱、腸閉塞または腹膜刺激徴候を有する大腸炎；排便回数（基準よりも７回以上多い）、便失禁、２４時間超の静脈内水分補給の必要性、胃腸出血及び胃腸穿孔の増加、基準値上限（ＵＬＮ）の５倍超のＡＳＴもしくはＡＬＴ、またはＵＬＮの３倍超の総ビリルビン量、全層皮膚潰瘍形成または壊死症状、水疱症状もしくは出血症状の併発により悪化した、スティーブンス・ジョンソン症候群、中毒性表皮壊死剥離症または発疹、重度の運動性ニューロパチーまたは感覚性ニューロパチー、ギランバレー症候群、重症筋無力症、局所免疫抑制療法に反応しない何らかの器官系免疫介在性眼疾患を伴う重度の免疫介在性反応が含まれる。

いくつかの実施形態では、方法は、本発明の免疫刺激剤の投与前、投与中、及び／または投与後に、１つ以上の免疫系成分の活性を決定することを含む。いくつかの実施形態では、本発明の治療レジメンは、１つ以上の免疫系成分の活性に基づいて変更することができる。いくつかの実施形態では、免疫系成分としては、Ｔ細胞アポトーシス、ＣＤ＋８Ｔ細胞及びＣＤ＋４Ｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、方法は、Ｔ細胞アポトーシス、ＣＤ＋８Ｔ細胞及び／またはＣＤ＋４Ｔ細胞の活性を示す１つ以上のバイオマーカーを決定することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、エフェクターＴ細胞の活性を決定することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ヘルパーＴ細胞の活性を決定することを含む。

いくつかの実施形態では、対象での１つ以上の免疫系成分の活性を所定の標準と比較し、本発明の医薬組成物を対象に投与すべきかどうか、及び／または医薬組成物を対象に投与できる場合を決定する。いくつかの実施形態では、成分は、ＩＬ−２、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−７、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５受容体、ＣＤ６９、ＩＦＮγ、ＩＬ−６、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＰＤ−Ｌ、ＰＤ−１、ＩＬ−１０、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０またはこれらの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＰＤ−Ｌ、ＰＤ−１、ＩＬ−１０ ＴＬＡ及び／またはＨＶＥＭの活性が所定の標準と比較して高い場合に、対象に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＩＬ−２、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−７、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５受容体、ＣＤ６９、ＩＦＮγ、ＩＬ−６、ＴＮＦ及び／またはＧＭ−ＣＳＦの活性が所定の標準と比較して低い場合に、対象に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＩＬ−１βの活性が所定の標準と比較して高い場合に、対象に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＩＬ−４の活性が所定の標準と比較して低い場合に、対象に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＩＬ−６の活性が所定の標準と比較して高い場合に、対象に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＩＬ−１０の活性が所定の標準と比較して高い場合に、対象に投与される。

いくつかの実施形態では、本発明の治療方法は、１つ以上の追加の癌治療と併用される。いくつかの実施形態では、追加治療は外科手術である。いくつかの実施形態では、追加治療はアジュバント治療である。いくつかの実施形態では、追加治療は化学療法である。いくつかの実施形態では、追加治療は免疫療法である。いくつかの実施形態では、追加治療は放射線療法である。いくつかの実施形態では、追加治療は、標的療法、例えば養子細胞療法または遺伝子療法である。

ある特定の実施形態では、対象は免疫不全である。免疫不全対象（例えば、ヒト対象）は、感染疾患と闘う力の低下及び／または病原体露出に対する反応力の低下を呈する。このような免疫不全対象の例としては、高齢患者、新生児、白血病または好中球減少性患者、（例えば、慢性腎疾患の治療のための）血液透析中の患者、免疫抑制剤療法を受けている患者、ＡＩＤＳ患者、糖尿病患者、化学療法または放射線療法を受けている癌患者、遺伝子欠損によって生じる免疫不全、栄養失調症、薬物乱用、アルコール依存症、またはその他の免疫力を低下させる疾患または病状が挙げられる。

ある特定の実施形態では、免疫力の低下した対象は高齢者である。動物は老化するにつれて、免疫応答が低下し、低親和性の抗体反応が優勢になることにより免疫応答の健全性が減少する。したがって、本実施形態の対象は、４５歳超または５０歳超のヒト患者であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、６０歳以上、６５歳以上または７０歳以上のヒト患者である。

ある特定の実施形態では、治療レジメンは、治療期間中の患者反応を決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、感染に伴う１つ以上の症状を評価し、治療レジメンに対する対象の反応を決定する。

いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、対象または対象の集団で、病原体に対して強い迅速な免疫応答を誘発する。本明細書に記載するサイモシンのレジメンは、病原体曝露に対する健全性の高い免疫応答、例えば限定されないが、より高い抗体価及び／またはより迅速な抗体反応を患者にもたらす。いくつかの実施形態では、レジメンは、わずか１回、２回、３回または４回の投与によって、最大約１０日、２０日、３０日、４０日、５０日またはそれ以上の間、このような利点をもたらす。

いくつかの実施形態では、対象は、癌保持者と診断されている。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。

いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、当技術分野で既知のいずれかの好適な方法によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明の組成物の投与は、経口的に、非経口的に、皮下に、静脈内に、筋肉内に、腹腔内に、鼻腔内滴下により、移植により、腔内または膀胱内点滴により、眼内に、動脈内に、病巣内に、経皮的に、または粘膜への塗布により行うことができる。阻害剤は、薬学的に許容される担体とともに投与することができる。いくつかの実施形態では、サイモシンは、注射（例えば、筋肉内、動脈内、血管内、静脈内、腹腔内または皮下）によって対象に投与される。「薬学的に許容される」とは、物質が生物学的に、またはそれ以外でも有害ではないこと、すなわち、物質が、患者に投与される医薬組成物に組み込まれても、生物学上望ましくない効果を引き起こしたり、薬剤の組成物に含まれる他のあらゆる成分とも有害な方法で相互作用したりしないことを意味する。用語「薬学的に許容される」が、医薬担体または賦形剤を指すときに使用される場合、担体または賦形剤が毒性試験及び製造試験の要求標準を満たしていること、または米国食品医薬品局によって定められた不活性成分ガイド（Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ）に記載されていることを意味する。

いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、ビヒクル、例えば人工膜小胞（リポソーム、脂質ミセル等を含む）、微小粒子またはマイクロカプセルに含まれる医薬組成物で提供することができる。

経口使用を目的とする組成物は、固体または液体いずれの単位剤形で調製されてもよい。液体単位剤形は、医薬組成物の製造のための当技術分野で既知の手順に従って調製することができ、またこのような組成物は、薬学的に上質で味のよい製剤を提供するために甘味剤、矯味剤、着色剤及び保存剤からなる群から選択される１種以上の薬剤を含むことができる。エリキシル剤は、芳香矯味剤とともに糖及びサッカリンなどの適した甘味剤を有するヒドロアルコール性（例えば、エタノール）ビヒクルを使用して調製される。懸濁剤は、アカシア、トラガカント、メチルセルロース等の懸濁化剤を用いて水性ビヒクルで調製することができる。

錠剤などの固形製剤は、錠剤の製造に適する無毒性の薬学的に許容される賦形剤との混合体で活性成分を含有する。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；造粒剤及び崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプンまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア；ならびに滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルク；ならびにその他の従来成分、例えばリン酸二カルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、硫酸カルシウム、デンプン、乳糖、メチルセルロース及び機能的に同等の材料であってよい。錠剤はコーティングされていないか、あるいは崩壊及び消化管での吸収を遅延させ、それにより長期間にわたって持続した作用を提供するために既知の技術によってコーティングされている。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料を使用することができる。

経口使用のための製剤はまた、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合される硬質ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水もしくは油性媒体、例えば、ラッカセイ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合される軟質ゼラチンカプセルとして存在してもよい。軟質ゼラチンカプセル剤は、許容される植物油、軽流動ワセリンまたは他の不活性油を有する化合物スラリーの機械封入によって調製される。

水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適する賦形剤との混合体で活性物質を含有する。このような賦形剤は、懸濁剤、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム及びアラビアゴムであり、分散剤または湿潤剤は、天然型リン脂質、例えば、レシチン、またはアルキレンオキシドの脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）、もしくはエチレンオキシドの長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、もしくはエチレンオキシドの脂肪酸とヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール）、もしくはエチレンオキシドの脂肪酸とヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）であってよい。水性懸濁剤はまた、１つ以上の保存剤、例えば、エチルもしくはｎ−プロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート、１つ以上の着色剤、１つ以上の矯味剤、またはスクロースもしくはサッカリンなどの１つ以上の甘味剤を含有することもできる。

油性懸濁剤は、植物油、例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油に、または流動パラフィンなどの鉱油に活性成分を懸濁させることにより製剤化することができる。油性懸濁剤は、増粘剤、例えばミツロウ、固形パラフィンまたはセチルアルコールを含有してもよい。上述のような甘味剤、及び矯味剤を添加すると、味のよい経口製剤を提供することができる。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加により保存することができる。

水を添加して水性懸濁液を調製する場合に適した分散性の散剤及び顆粒剤は、分散または湿潤剤、懸濁化剤、及び１つ以上の保存剤との混合体で活性成分を提供する。好適な分散または湿潤剤及び懸濁化剤は、すでに上述したものによって例示している。追加の賦形剤、例えば甘味剤、矯味剤及び着色剤が存在してもよい。

本発明の医薬組成物はまた、水中油型乳剤の形態であってもよい。油相は、植物油、例えば、オリーブ油もしくはラッカセイ油、もしくは鉱油、例えば、流動パラフィン、またはこれらの混合物であってもよい。好適な乳化剤は、天然ゴム、例えば、アラビアゴムまたはトラガントゴム、天然リン脂質、例えば、ダイズレシチン、及び脂肪酸とヘキシトール無水物から誘導されるエステルまたは部分エステル、例えば、モノオレイン酸ソルビタン、及び上記部分エステルのエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであり得る。乳剤はまた、甘味剤及び矯味剤を含有してもよい。

医薬組成物は、水性または油性の無菌注射懸濁液の形態であってよい。この懸濁液は、上述した好適な分散剤または湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、既知の技術に従って製剤化することができる。無菌注射製剤はまた、無菌注射溶液または無毒性の非経口的に（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ）許容される希釈剤または溶媒中の懸濁液であってよく、例えば１，３−ブタンジオール溶液である。中でも、使用してよい許容されるビヒクル及び溶媒は、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液である。加えて、従来から、無菌不揮発性油が溶媒または懸濁媒体として使用されている。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、いずれかの無刺激の不揮発性油を使用してもよい。加えて、オレイン酸などの脂肪酸にも注射液の調製での用途が見出されている。局所麻酔薬、保存剤及び緩衝液などのアジュバントもまた、注射剤または懸濁液に含むことができる。

いくつかの実施形態では、好適なデリバリーシステムとしては、持続放出性、遅延放出性、徐放性または制御放出性のデリバリーシステムが挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、制御放出系、例えば徐放性マトリックスで送達することができる。徐放性マトリックスの非限定的な例としては、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７−２７７及びＬａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８−１０５に記載のようなポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート））、またはポリ（ビニルアルコール）、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号；ＥＰ５８，４８１）、Ｌ−グルタミン酸とガンマエチル−Ｌ−グルタミン酸とのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２：５４７−５５６）、非分解性のエチレン−ビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．前掲）、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）などの分解性の乳酸−グリコール酸コポリマー（乳酸−グリコール酸コポリマーとリュープロリドアセテートからなる注射用マイクロスフィア）及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が挙げられる。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内注射、移植可能な浸透圧ポンプ、経皮パッチ、リポソームまたは他の投与様式を使用して投与することができる。一実施形態では、ポンプを使用してよい（Ｌａｎｇｅｒ，前掲；Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎ． Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照のこと）。別の実施形態では、高分子材料を使用することができる。更に別の実施形態では、制御放出システムを、例えば肝臓など、全身用量の一部のみを必要とするような治療標的に近接して配置することができる（Ｇｏｏｄｓｏｎ， Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照のこと）。それ以外の制御放出システムは、Ｌａｎｇｅｒによる概説で説明されている（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））。いくつかの実施形態では、組成物は皮下注射で投与してよい。

いくつかの実施形態では、組成物の放出は突発的に生じる。放出が突発的に生じるシステムの例としては、例えば、ポリマーマトリックス中に封入されているリポソーム（このリポソームは、特定の刺激、例えば、温度、ｐＨ、光または酵素分解などに容易に反応する）に組成物を混入しているシステム、及び分解酵素をマイクロカプセルの核に含む、イオン結合によりコーティングされたマイクロカプセルによって組成物を封入しているシステムが挙げられる。

いくつかの実施形態では、組成物の放出は段階的／持続的である。阻害剤の放出が段階的及び持続的であるシステムの例としては、例えば、組成物がマトリックス内部に含有される形態の浸食性システム、及び組成物が制御速度で放出される浸出性のシステム、例えば、ポリマーによるものが挙げられる。このような徐放性システムは、例えばペレットまたはカプセルの形態であり得る。

本発明によって投与される組成物の他の実施形態は、非経口、肺、経鼻及び経口などの種々の投与経路に、粒子状形態、保護コーティング、プロテアーゼ阻害剤または浸透賦活剤を組み込んでいる。他の医薬組成物及び医薬組成物の調製方法は、当技術分野で既知であり、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ” （旧版“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”）；Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌｉｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．（２０００）に記載されている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、担体またはアジュバントを更に含むことができる。

投与される投与量は所定の限度に依存しないが、通常は有効量、すなわち治療的／薬学的有効量になる。用語「有効量」は、望ましい治療転帰を示す１種以上の化合物量を指す。有効量は１種以上の用量から構成されていてよい。すなわち、望ましい治療エンドポイントの達成に単回用量または複数回用量が必要な場合がある。本明細書で使用される場合、用語「治療的／薬学的有効量」は、場合により有意な負の副作用または有害な副作用を引き起こさずに、病状を治療するため、または傷害もしくは損傷を軽減もしくは予防するために必要な１種以上の薬剤のレベルまたは分量を指す。これは、望ましい薬学的及び生理学的効果を得る活性遊離薬の代謝放出時に投与製剤から生成される薬理的活性遊離形態とモルベースで同等のものである。いくつかの実施形態では、組成物を単位剤形に製剤化してよい。用語「単位剤形」は、ヒト対象及び他の哺乳動物に対する単位投与量として適した物理的な個別単位を指し、各単位は好適な医薬賦形剤とともに望ましい治療効果を得るように計算された所定量の活性物質を含有する。

いくつかの実施形態では、サイモシンの投薬レジメンには、以下に限定されないが、用量当たりの分量、投薬頻度、例えば日単位、週単位もしくは月単位、投薬周期あたりの総量、投薬間隔、投薬の変動、投薬周期ごとのパターンもしくは変更、最大蓄積用量、もしくは慣らし投薬（ｗａｒｍ ｕｐ ｄｏｓｉｎｇ）、またはこれらいずれかの組み合わせを含む。いくつかの他の実施形態では、サイモシンの投薬レジメンには、例えば、日単位または週単位の投薬頻度を含む。

更にいくつかの実施形態では、投薬レジメンには、このような投薬頻度と組み合わせた、投薬当たりの所定量または固定量を含む。例えば、サイモシンの投薬レジメンには、このような対象に投与されるサイモシンの投薬頻度と組み合わせた、投薬当たりの固定量を含む。

いくつかの実施形態では、サイモシンの有効量は、約０．１〜２０ｍｇのＴＡ１、約１〜１０ｍｇのＴＡ１、約２〜１０ｍｇのＴＡ１、約２〜７ｍｇのＴＡ１、または約３〜６．５ｍｇのＴＡ１に相当する範囲内の投与量単位であり得る量であり、また約１．６、３．２もしくは６．４ｍｇのＴＡ１、または約３．２もしくは６．４ｍｇのＴＡ１を含んでよい。投与量単位は、１日当たり１回投与しても、１日当たり複数回投与してもよい。いくつかの実施形態では、ＴＡ１は、約０．５〜１０ｍｇ／日の範囲内の投与量で対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＴＡ１投与量は、約１．５〜７ｍｇ／日の範囲内であるか、または約１．６〜６．４ｍｇ／日の範囲内である。ある特定の実施形態では、ＴＡ１投与量は、約１．７〜１０ｍｇ／日、約１．７〜７ｍｇ／日、または約３〜７ｍｇ／日の範囲内である。いくつかの実施形態では、有効な投与量は、約１．６、３．２または６．４ｍｇ／日を含む。

いくつかの実施形態では、投与は、約０．１〜１．０ｎｇ／ｍｌで、サイモシンの血清レベルを提供する。いくつかの実施形態では、投与は、約１００ｎｇ／ｍｌの注射後、ピーク血漿レベルを提供する。いくつかの実施形態では、ＴＡ１の循環半減期は約２時間である。

ある特定の実施形態では、治療レジメンは、ＴＡ１を含有する、複数日の医薬組成物を含むか、あるいはＴＡ１を、治療レジメンの少なくとも一部の期間、対象に投与することができる。

ある特定の実施形態では、治療レジメンは、約１〜１０日、約１〜２０日、約１〜３０日またはそれ以上の期間、医薬組成物を投与することを含む。

ある特定の実施形態では、治療レジメンは、約１〜５日、約５〜１０日、約１０〜２０日、約２０〜３０日またはそれ以上の医薬組成物の非投与を更に含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は約１〜１０日、約１〜２０日またはそれ以上の間、毎日、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、週に１回投与され、それに続く約１〜５日、約５〜１０日、サイモシンが非投与であってよい。

いくつかの実施形態では、方法は、過剰活性化及び過剰増殖による重度の及び／または致命的な免疫介在性有害反応を回避するために、投与後の対象の反応をモニターすることを更に含む。いくつかの実施形態では、患者が持続的な中程度の有害反応を示す場合、免疫刺激剤の投与を変更（例えば、減少、一時中止、または終了）する。いくつかの実施形態では、最初の用量の投与から約１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週、２週またはそれ以上の間、患者の反応が見られない場合、投与量を変更する。

本発明の医薬組成物はまた、黒色腫に伴う１種以上の症状を緩和すること、その重症度を軽減すること、またはその症状の発生を抑制することができる。いくつかの実施形態では、このような症状としては、限定されないが、早期の黒色腫の徴候である既存の黒子の形状もしくは色の変化、または結節性黒色腫の場合は、皮膚のいずれかの場所への新しいしこりの発生（このような病変は即刻、皮膚科医に問い合わせるべきである）が挙げられる。後期段階では、かゆみ、潰瘍化または出血が黒子に生じる場合がある。黒色腫の早期徴候としては、形状の非対称、不明瞭な境界、色の不整、約６ｍｍ以上の直径、及び経時的変化が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、転移を予防する、または転移の確率及び／または重症度を抑制する。

本発明はまた、バイオマーカーパネルの活性プロファイルの収集を提供する。本明細書で使用される場合、用語「活性プロファイル」は、１つ以上のバイオマーカーの顕著な機能または特徴を表すデータ一式を指す。このような機能または特徴には、限定されないが、転写物存在量、転写物安定性、転写速度、翻訳速度、翻訳後修飾、タンパク質存在量、タンパク質安定性及び／またはタンパク質酵素活性などを含む。いくつかの実施形態では、活性プロファイルは、各バイオマーカーの遺伝子発現レベルに関連したデータで構成される。いくつかの実施形態では、活性プロファイルを含む集合は、対象の特定の集団から得られる。いくつかの実施形態では、対象の特定の集団は、臨床的に正常な対象からなる。いくつかの実施形態では、集団は、本発明の１つ以上の抗黒色腫剤に反応する患者からなる。いくつかの実施形態では、集団は、本発明の１つ以上の抗黒色腫剤に反応しない患者からなる。

いくつかの実施形態では、集団は、例えば、活性プロファイルの機能及び特徴を示す１つ以上の定量的または半定量的パラメーターにおいて統計学的に均一であるなど、１つ以上の態様で統計学的に均一である活性プロファイルを含む。いくつかの実施形態では、定量的パラメーターとしては、限定されないが、転写物存在量、転写物安定性、転写速度、翻訳速度、翻訳後修飾、タンパク質存在量、タンパク質安定性及び／またはタンパク質酵素活性などが挙げられる。１つ以上の態様において、一群の活性プロファイルが統計学的に均一であるかどうかは、当業者に既知のいずれかの好適な統計試験及び／またはアルゴリズムによって測定することができる。

いくつかの実施形態では、１種以上のバイオマーカーは、治療に反応してその活性が増加する。いくつかの実施形態では、１種以上のバイオマーカーは、治療に反応してその活性が減少する。いくつかの実施形態では、１種以上のバイオマーカーは、治療に反応してその活性が存続される。本明細書で使用される場合、バイオマーカーの活性は、ゲノムＤＮＡレベル、転写レベル、転写後レベル、翻訳レベル、翻訳後レベルでのパラメーターを表すことができ、限定されないが、遺伝子活性、ＲＮＡ活性及びタンパク質活性を含む。遺伝子活性は、遺伝子コピー数、遺伝子増幅数またはプロモーター活性などであり得る。ＲＮＡ活性は、ｍＲＮＡ存在量、合成速度及び／または安定性などであり得る。タンパク質活性は、タンパク質存在量、合成速度、安定性、酵素活性、リン酸化速度、修飾、結合活性などであり得る。

本明細書で使用される場合、バイオマーカーのレベルが所定の標準レベルの水準に向かう場合、それを標準化と呼ぶ。

本明細書で使用される場合、バイオマーカーのレベルが所定の標準レベルの水準から遠ざかる速度を低下させる場合、それを安定化と呼ぶ。

いくつかの実施形態では、対象での本発明の１つ以上のバイオマーカーの活性プロファイルを測定して、所定の標準レベルと比較する。本明細書で使用される場合、用語「所定の標準レベル」または「所定の活性プロファイル」は、特定の集団における１つ以上のバイオマーカーの平均的で代表的な機能または特徴を表す標準化データまたはデータセットを指す。このような機能または特徴には、限定されないが、遺伝子コピー数、遺伝子増幅、転写物存在量、転写物安定性、転写速度、翻訳速度、翻訳後修飾、タンパク質存在量、タンパク質安定性及び／またはタンパク質酵素活性などを含む。いくつかの実施形態では、対象の特定の集団は、約５、約１０、約２０、約５０、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約１０００、約５０００、約１００００またはそれ以上の個々の対象からなる。所定の活性プロファイルは、対象の特定の集団すべてが薬物に曝露される前、その期間中、またはその後に収集された標準化されたデータまたはデータセットであり得る。いくつかの実施形態では、特定の集団は、所与の薬物に反応する対象からなる。

いくつかの実施形態では、対象が薬物に曝露されたときに本発明の１つ以上のバイオマーカーのレベルが所定の標準レベルに向かって増加または減少する場合、あるいはプラセボと比較して本発明の１つ以上のバイオマーカーのレベルが変化する速度が薬物によって変更される場合、対象は治療のための薬物に「反応している」。バイオマーカーレベルの検出、定量化及び比較に関連した方法については、そのすべてが、全体として参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄ． Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｍ．（２０１０）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌａｓｔ，Ｅｄ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊｏｈｎ Ｅ．，ｅｔ ａｌ．（２０１０）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｅｄ．Ｅｇｌｉ，Ｍａｒｔｉｎ（２０１０）； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，Ｅｄ．Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，Ａｎｄｒｅａｓ Ｄ．（２０１０）；及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊｏｓｅｐｈ（２００１）を参照のこと。

ある特定の実施形態では、バイオマーカーまたはその他の治療指標を測定する場合の「増加した」または「減少した」量またはレベルは「統計的に有意な」量を含み得る。結果は通常、偶然に発生した可能性が低い場合、統計的に有意と呼ばれる。試験または結果の有意水準は、従来から、事象が偶然に生じた可能性が低いことを承認するために要求されるエビデンスの量を意味する。ある特定の場合では、統計的有意性は、帰無仮説が実際に真であるときに、帰無仮説を棄却する判定（第１種過誤、すなわち「偽陽性判定」として既知の判定）が下される確率と定義され得る。この判定はｐ値を使用して行われることが多い。すなわち、ｐ値が有意水準よりも低い場合に帰無仮説は棄却される。ｐ値が小さいほど、結果はより有意である。統計的有意性の決定には、ベイズ因子も利用することができる（Ｇｏｏｄｍａｎ Ｓ．，Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ．１３０：１００５−１３，１９９９を参照のこと）。いくつかの実施形態では、「増加した」または「減少した」量またはレベルは、以前または早い時点と比較して、所定の標準量または指定した時点の量の約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍または５０倍超または未満である。

癌治療の活性薬剤の有効性をモニターする方法もまた提供される。本方法には、患者からの生体試料において本発明の１つ以上のバイオマーカー活性を決定すること、及びバイオマーカー情報に基づいて治療または有効性を決定または評価する組織に、バイオマーカーに関するその情報を提供することを含む。いくつかの実施形態では、バイオマーカー活性は、本発明の活性薬剤投与量の少なくとも１回分を受けている間、またはその後に測定される。いくつかの実施形態では、後述する１つ以上の選択基準をヒト対象が満たす場合に、活性薬剤による治療を使用すべきか、またはそれを継続すべきかの判定をその組織が下すことができる。
・ 治療前の同じヒト対象のものと比較したとき、ヒト対象はＩＬ−１β活性レベルが減少している、及び／または本発明の治療に反応するヒト対象またはヒト対象群のものと比較したとき、ＩＬ−１β活性の標準化または安定化を有している。
・ 治療前の同じヒト対象のものと比較したとき、ヒト対象はＩＬ−４活性レベルが増加している、及び／または本発明の治療に反応するヒト対象またはヒト対象群のものと比較したとき、ＩＬ−４活性の標準化または安定化を有している。
・ 治療前の同じヒト対象のものと比較したとき、ヒト対象はＩＬ−６活性レベルが減少している、及び／または本発明の治療に反応するヒト対象またはヒト対象群のものと比較したとき、ＩＬ−１β活性の標準化または安定化を有している。
・ 治療前の同じヒト対象のものと比較したとき、ヒト対象はＩＬ−１０活性レベルが減少している、及び／または本発明の治療に反応するヒト対象またはヒト対象群のものと比較したとき、ＩＬ−１β活性の標準化または安定化を有している。

核酸、例えばＲＮＡまたはＤＮＡなどのレベルの検出方法は、詳細に記載されており、当業者に周知である。ＲＮＡの検出方法としては、限定されないが、ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンブロット解析、遺伝子発現解析、マイクロアレイ解析、遺伝子発現チップ解析、ハイブリダイゼーション技術（ＦＩＳＨを含む）、発現ビーズチップアレイ、及びクロマトグラフィー、ならびに当技術分野で既知のいずれかの他の技術を挙げることができる。ＤＮＡの検出方法としては、限定されないが、ＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ、デジタルＰＣＲ、ハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨを含む）、マイクロアレイ解析、ＳＮＰ検出アッセイ、ＳＮＰ遺伝子型決定アッセイ、及びクロマトグラフィー、ならびに当技術分野で既知のいずれかの他の技術を挙げることができる。

タンパク質及びポリペプチドの検出方法としては、限定されないが、タンパク質濃度の分光光度測定、定量的アミノ酸分析、タンパク質濃度分析、クロマトグラフィー分析、ウェスタンブロット解析、ゲル電気泳動（限定されないが、クマシーブルー、シルバーステイン、サイバーグリーン、サイバーゴールドを含む、その後の染色手順）、ハイブリダイゼーション、多重サイトカインアッセイ、イムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイ、ブラッドフォードタンパク質アッセイ及びローリータンパク質アッセイ、ならびに当技術分野で既知の他のいずれかの技術を挙げることができる。タンパク質の検出にはまた、安定化または活性タンパク質のレベルの検出を含むこともでき、反応速度アッセイ、キナーゼアッセイ、酵素アッセイ及び翻訳後修飾アッセイ（例えば、リン酸化反応及びグリコシル化状態を決定するためのアッセイ）などの方法もまた使用することができる。

バイオマーカーレベルの検出、定量化及び比較に関連した詳細な方法については、そのすべてが、全体として参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｄ． Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｍ．（２０１０）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌａｓｔ，Ｅｄ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊｏｈｎ Ｅ．，ｅｔ ａｌ．（２０１０）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｅｄ．Ｅｇｌｉ，Ｍａｒｔｉｎ（２０１０）； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，Ｅｄ．Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，Ａｎｄｒｅａｓ Ｄ．（２０１０）；及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊｏｓｅｐｈ（２００１）を参照のこと。

いくつかの実施形態では、バイオマーカーについての情報は、１つ以上の試験から得られる。試験は、男女の対象自身によって、医師によって、看護師によって、試験機関によって、医療提供者によって、または試験を行うことができる他のいずれかの当事者によって実施することができる。バイオマーカー情報を含んでいる試験結果を更に、同じ当事者によって、または第２の当事者、例えば男女の対象自身、医師、看護師、試験機関、医療提供者、内科医、臨床試験担当者、病院、研究室、研究機関、または試験を分析して対象が薬に反応しているかどうかを決定できる、他のいずれかの当事者によって分析することができる。

以下の実施例は、各種の本発明の態様を例示する。実施例は、言うまでもなく、単に本発明のある特定の実施形態のみを例示するものであり、本発明の範囲の限定を意味しないものと理解されるべきである。
［実施例］

Ｂ１６Ｆ１０マウス皮下黒色腫モデルのサイモシンによる黒色腫の皮下処置
Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫モデルは、ＭＢ１６系統に由来し、転移クローンから逐次選抜する。マウスにＦ１０を１０回継代接種することにより転移性を高め、Ｂ１６Ｆ１からＢ１６Ｆ１０（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−６４７５（商標））を発生させた。このモデルは転移機序の研究、癌治療の評価に広く使用されている。また、癌免疫療法のための最も一般的な同系モデルの１つでもある。皮下転移モデル及び実験転移モデルはいずれも非常に有用である。

黒色腫の治療におけるサイモシンの効果を試験するために、２つの個別の試験で、Ｂ１６Ｆ１０を接種されたマウスにサイモシンアルファペプチド（ＺＡＤＡＸＩＮ）を投与した：

腫瘍体積及び体重を試験期間にわたってモニターした。別の既存対照試験ではシスプラチンを陽性対照群に投与した。陰性対照群には、全試験でビヒクルのみを投与した。

シスプラチンで処置したＢ１６Ｆ１０マウスは通常、腫瘍体積の減少を示す（図１Ａ及び表３）。しかしながら、これらのマウスはまた、シスプラチンの毒性の結果、有意な体重減少が見られた（図１Ｂ）。

Ｂ１６Ｆ１０由来の腫瘍をもち、ＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）を投与した動物は、試験した全用量でビヒクル処置群と比較して腫瘍成長の抑制を示した（図２及び図３）。

試験Ｉでは、ビヒクル処置群（第１群）の平均腫瘍サイズは、腫瘍接種後１４日で１，９９５ｍｍ^３に達した。０．２ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇのＴＡ１での処置は、腫瘍接種後１４日の時点で有意な抗腫瘍活性を生じさせた。平均腫瘍サイズは、１，１４８ｍｍ^３（Ｔ／Ｃ値＝５７．５６％、ｐ値＜０．００１）及び１，３８４ｍｍ^３（Ｔ／Ｃ値＝６９．３６％、ｐ値＝０．００６）であり、腫瘍サイズ１，１４０ｍｍ^３までの腫瘍成長をそれぞれ１．５日及び０．５日遅延させた。６ｍｇ／ｋｇのＴＡ１による処置は、腫瘍成長を遅延させることができるが、低下率は有意差に達しなかった（ｐ値＝０．１４６）。更に、０．２ｍｇ／ｋｇのＴＡ１は６ｍｇ／ｋｇのＴＡ１よりも良好な抗腫瘍活性を生じさせた。

加えて、群ごとの有意な体重変化は観察されなかった。したがって、サイモシンは黒色腫の治療に使用することができる。

バイオマーカー試験
上記の試験では、ＩＬ−７、ＩＬ−１８、ＴＲＥＭ−１、ＩＦＮ−α、プロカルシトニン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１α、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０及びＩＬ−１βを含め、潜在的バイオマーカー群を試験した。ビヒクルまたはＺＡＤＡＸＩＮ（商標）（チマルファシン）によって処置されたマウスの一部特定のバイオマーカー濃度を図４Ａ〜図４Ｄに示す。この結果は、これらのバイオマーカーを、癌治療（単剤または併用療法）の有効性評価、治療が有効である患者の選択、及び臨床試験または治療の際の用量及び／またはレジメンの最適化に使用できることを示している。

別の試験では、異なる処置をしたＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウス全身黒色腫モデルの血清サンプル中の８種のサイトカイン（ＩＦＮγ、ＩＬ−１β、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＴＮＦα）をＥＬＩＳＡにより分析した。処置内容は以下の通りであった。
1.ビヒクル、１日２回ｘ１０、ｓ．ｃ．
2.１００ｕｇ／マウスのＰＤ−１抗体、隔週ｘ２、ｉ．ｐ．
3.０．４８６ｕｇ／マウスのＴＡ１、１日２回ｘ１０、ｓ．ｃ．
4.４．８６ｕｇ／マウスのＴＡ１、１日２回ｘ１０、ｓ．ｃ．
5.４８．６ｕｇ／マウスのＴＡ１、１日２回ｘ１０、ｓ．ｃ．
6.ＰＤ−１抗体＋ＴＡ１（１００ｕｇ／マウス＋０．４８６ｕｇ／マウス；隔週ｘ２＋１日２回ｘ１０、ｉ．ｐ＋ｓ．ｃ．）
7.ＰＤ−１抗体＋ＴＡ１（１００ｕｇ／マウス＋４．８６ｕｇ／マウス；隔週ｘ２＋１日２回ｘ１０、ｉ．ｐ＋ｓ．ｃ．）
8.ＰＤ−１抗体＋ＴＡ１（１００ｕｇ／マウス＋４８．６ｕｇ／マウス；隔週ｘ２＋１日２回ｘ１０、ｉ．ｐ＋ｓ．ｃ．）
9.シクロホスホミド３００ｍｇ／ｋｇ、１日１回ｘ１、ｉ．ｐ．

処置後のマウスでの各バイオマーカーの濃度を図４Ｅ〜４Ｌに示す。この結果は、これらのバイオマーカーをサイモシンの作用機序と関連付けできる、あるいは薬力学的標識として使用できることを示している。

Ｂ１６Ｆ１０マウス肺転移黒色腫モデルでのサイモシンによる黒色腫の治療
材料及び方法
マウス：雌性Ｂ６Ｄ２Ｆ１／Ｃｒｌマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）は試験のＤ１時に９週齢であり、体重範囲は１９．２〜２４．５ｇであった。動物には、水（逆浸透、Ｃｌ濃度１ｐｐｍ）と、１８．０％の粗タンパク質、５．０％の粗脂肪及び５．０％の粗繊維からなるＮＩＨ ３１ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ａｎｄ Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ Ｌａｂ Ｄｉｅｔ（登録商標）を不断給餌した。１２時間の照明周期、２０〜２２℃（６８〜７２°Ｆ）及び湿度４０〜６０％で、静的マイクロアイソレーター内の照射されたＥｎｒｉｃｈ−ｏ’ｃｏｂｓ（商標）床敷上で、マウスを飼育した。ＤＲＳ−ＮＣは、拘束、飼畜、外科的手技、給餌及び体液調節、ならびに獣医による管理に関して、具体的には「実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）」の勧告を遵守している。ＤＲＳ−ＮＣの動物管理及び使用プログラムは、実験動物の管理及び使用に対する承認規格の遵守を保証する「国際実験動物ケア評価認証協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）」によって公認されている。

ｉｎ ｖｉｖｏ移植：試験マウスを表１に示すような５つの処置群（ｎ＝１０）に区分した。動物の第６群は「観察（ｌｏｏｋ−ｓｅｅ）」群（ｎ＝９）として追加した。Ｂ１６−Ｆ１０細胞を対数期増殖中に採取し、ＰＢＳ中で７．５ｘ１０^５細胞／ｍＬの濃度に再懸濁した。各マウスは、試験のＤ１時に、１．５ｘ１０^５のＢ１６−Ｆ１０細胞（０．２ｍＬの細胞懸濁液）の尾静脈内（ｉ．ｖ．）注射を受けた。

試験用物品：抗ＰＤ１アルファペプチド（コード名抗ＰＤ−１−ＳＣＥ、ロット番号５１７７／０２１４）及びサイモシンアルファ−１ペプチド（チマルファシン、コード名ＳＲ１、ロット番号１４０２−２２４）。ＤＲＳ−ＮＣは、機密保持のため内部試験期間中、コード名を割り当てた。シクロホスファミド（Ｂａｘｔｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ、ロット番号２Ｅ７１８Ｆ、２０１３年６月７日に入手）を標準対照として追加した。ＳＲ１は凍結乾燥粉末（９０．７％の遊離塩基）として提供され、ＰＢＳに溶解して２２．０５１ｍｇ／ｍＬの投与液を得た。これは、投与容量１０ｍＬ／ｋｇで、２２０．５１ｍｇ／ｋｇの投与量に相当した。体重当たりの用量は調節しなかった。抗ＰＤ−１−ＳＣＥ抗体をＰＢＳで希釈して１０．０ｍｇ／ｍＬの投与液を得た。これは、投与容量１０ｍＬ／ｋｇで、１００ｍｇ／ｋｇの投与量に相当した。体重当たりの用量は調節しなかった。シクロホスファミドは生理食塩水で希釈して１５．０ｍｇ／ｍＬの投与液を得た。これは、投与容量１５ｍＬ／ｋｇで、３００ｍｇ／ｋｇの投与量に相当した。体重当たりの用量を調節した。シクロホスファミドは試験開始時に一度に調製し、４℃で保存した。

処置：表４Ａに次の処置計画の概要を示す：
第１群の動物は、ＰＢＳをｓ．ｃ．（終了まで１日２回）投与し、対照処置群として利用した。
第２群には、ＳＲ１を２２０．５１ｍｇ／ｋｇ（２００ｍｇ／ｋｇ遊離塩基）（終了まで１日２回）でｓ．ｃ．投与した。
第３群には、抗ＰＤ−１−ＳＣＥを１００ｍｇ／ｋｇ（隔週ｘ３）でｉ．ｐ．投与した。
第４群は、ＳＲ１及び抗ＰＤ−１−ＳＣＥの両方を、それぞれ２２０．５１ｍｇ／ｋｇでｓ．ｃ．投与（終了まで１日２回）、１００ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．投与（隔週ｘ３）した。
第５群は、陽性対照群として設定し、３００ｍｇ／ｋｇでシクロホスファミドをｉ．ｐ．投与した（１日１回ｘ１）。
第６群は、「観察」動物として設定し、何も処置を受けなかった。

エンドポイント：Ｂ１６ＭＥＴ−ｅ１１７試験のエンドポイントを、肺群当たり１００転移と定義した。「観察」群から２〜３匹の動物を９日目から３日間隔で安楽死させ、肺転移巣を計数した。右肺の前葉、中葉、後葉及び副葉で計数した病巣数を、左肺で計数した病巣数に加算して総数を得た。試験をＤ１６で終了し、全動物を安楽死させ転移を計数した。阻害率は、指定された対照群の転移巣数と薬物処置群の転移巣数との差であると定義し、指定された対照群の転移巣数に対する百分率として表した。
阻害率＝［１−（薬物処置時の転移数／対照の転移数）］ｘ１００

毒性：試験の最初の５日間は動物を毎日計量し、それ以降は週２回計量した。マウスには、処置に伴う有害な副作用の明白な徴候が頻繁に観察された。また観察時には毒性の臨床徴候を記録した。許容される毒性は、試験期間中の群平均体重損失が２０％未満、また１０匹の処置動物のうち治療関連（ＴＲ）死が１匹以下であることと定義した。それより大きい毒性をもたらす投薬レジメンはいずれも、最大耐性量（ＭＴＤ）を上回っていると見なす。臨床徴候及び／または剖検により明らかになるような治療副作用の原因である場合、または投与期間または最後の投与から１４日以内の未知の原因に起因する場合、死亡はＴＲに分類される。死亡が治療副作用と関連していたというエビデンスがない場合、死亡は非治療関連（ＮＴＲ）に分類される。

統計及びグラフ解析：すべてのグラフ表示及び統計解析に、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ） ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ ６．０２を使用した。中央値の分析にマンホイットニーのＵ検定を使用して、対照群と処置群とのＤ１６ Ｂ１６Ｆ１０転移巣の統計的有意差を判定した。両側統計解析をＰ＝０．０５で実施した。「箱ひげ」図は、Ｄ１６時の各処置群について計数した転移巣の分布を示すために作成した。

Ｐｒｉｓｍは、Ｐ＞０．０５で有意性なし（ｎｓ）、０．０１＜Ｐ≦０．０５で有意性あり（「^＊」の記号で表す）、０．００１＜Ｐ≦０．０１で非常に有意性あり（「^＊＊」）、及びＰ≦０．００１で極めて有意性あり（「^＊＊＊」）として結果をレポートする。マンホイットニーのＵ検定は有意性検定であり、群同士の差の程度は評価されないので、すべての有意水準を「有意性あり」または「有意性なし」のいずれかで表４Ｂに報告する。

実験手順：
・ 試験開始１日前に細胞を移植する。
・ ０％マトリゲルｉｖ中で１．５ｘ１０^５Ｂ１６ＭＥＴ腫瘍細胞をもつ５９匹のＣＲ雌性Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスを準備する。
・ 尾静脈。
・ 細胞注入量は、０．２ｍＬ／マウスである。
・ 開始時の年齢：８〜１２週齢。
・ 体重：５／２、その後終了まで隔週
・ 転移計数：エンドポイント時
・ いかなる有害反応または死亡もＲＭ、ＳＤ、ＲＤまたはＳＨに直ちに報告する。
・ 単一観察で体重損失が３０％超であるか、または３回の連続した測定で体重損失が２５％超である個体動物があれば安楽死させる。
・ 平均体重損失が２０％超であるか、または死亡率が１０％超である群があれば、投薬を中止する。
・ この群は安楽死させず、回復にまかせる。体重損失が２０％超である群内で、個々の体重損失エンドポイントに達している個体を安楽死させる。体重損失を伴う処置群が、元の体重の１０％以内に戻っている場合、低用量または低頻度の投薬スケジュールで投薬を再開することができる。非処置期間の体重回復率に関して、個々の事例に応じて例外を考慮することができる。
・ エンドポイント：肺群当たり約１００転移。
・ ＣＲＬ−ＮＣ ＳＯＰ＃６８７に従って瀕死の動物を安楽死させる。呼吸困難の徴候を示している動物もまた、上記のように安楽死させる。

腫瘍細胞培養：Ｂ１６ＭＥＴ細胞を、１０％のウシ胎児血清、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、２ｍＭのグルタミン、１００ユニット／ｍＬのペニシリンＧナトリウム、０．０７５％の重炭酸ナトリウム、２５μｇ／ｍＬのゲンタマイシン及び１００μｇ／ｍＬの硫酸ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ １６４０培地中で、中期対数増殖期まで増殖させた。腫瘍細胞を、加湿インキュベーター内の組職培養フラスコ中で、３７℃にて、５％ＣＯ２及び９５％空気の存在下にて培養した。

Ｂ１６Ｆ１０マウス肺転移黒色腫モデルを発現した。約１．５ｘ１０^５のＢ１６−Ｆ１０細胞（０．２ｍＬの細胞懸濁液）をｉｎ ｖｉｔｒｏで増殖させ、雌性Ｂ６Ｄ２Ｆ１／Ｃｒｌマウスに静脈内投与した（０日目）。試験用薬剤による投薬を１日目に開始した。

１５日間にわたって転移数を評価するために「観察」未処置群を準備した。９日目に、「観察」群から３匹の動物を安楽死させ、肺転移を計数した（発明者らの履歴データによれば、この時点で未処置のマウスの肺に約５０超の転移が認められた）。３日後にそれ以外の３匹のマウスを検査した。転移計数が約５０〜１００個に達したとき、試験中の全群を犠牲死させ、最終的な転移計数を確定した。「観察」群の計数は最終的な有効性分析に含めなかった。大部分の個々の転移を容易に計数でき、転移が互いに同化して計数が困難になる可能性が低いという理由から、５０〜１００の転移計数を目標数として定義した。図５を参照のこと。

一試験（試験Ｉ）では、ビヒクル（陰性対照）、シクロホスファミド（陽性対照）、ＴＡ１、抗ＰＤ−１またはＴＡ１＋抗ＰＤ−１をマウスに投与して、転移計数を評価した。結果を以下の表４Ｂ、ならびに図６Ａ及び図６Ｂに示す。

Ｂ１６ＭＥＴ−ｅ１１７マウスでの１日目からの群平均体重変化率を図６Ｂに示す。

この結果は、サイモシンが黒色腫モデルでの肺への転移を抑制するが、特定の用量では抗ＰＤ−１の相加作用がないことを示している。

第２の試験（試験ＩＩでは、ビヒクル（陰性対照）、シクロホスファミド（陽性対照）、ＴＡ１、抗ＰＤ−１またはＴＡ１＋抗ＰＤ−１を異なる用量でマウスに投与した。試験計画及び結果を以下の表５Ａ及び表５Ｂ、ならびに図７Ａ〜図７Ｃに示す。

試験ＩＩでの処置計画：この試験では、１３群の雌性Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスに、表５Ａのプロトコルに従って投薬した。ＳＲ１及びビヒクルをそれぞれ、試験期間中、毎日２回ずつ皮下（ｓ．ｃ．）投与した（終了まで１日２回）。抗ＰＤ１抗体は、２週間にわたり週２回（隔週ｘ２）腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。シクロホスファミドの単回用量をｉ．ｐ．投与した（１日１回ｘ１）。表５Ａは、処置計画の概要を示す。
第１群の動物にはＰＢＳを投与し、対照処置群として利用した。
第２群〜第４群には、それぞれ０．４８６２、４．８６２及び４８．６２μｇ／マウス（０．４４１、４．４１及び４４．１μｇ／マウス、遊離塩基）のＳＲ１を投与した。
第５群及び第６群には、それぞれ３３．３３及び１００μｇ／マウスの抗ＰＤ−１を投与した。
第７群〜第９群には、３３μｇ／マウスの抗ＰＤ−１投与と組み合わせて、それぞれ０．４８６２、４．８６２及び４８．６２μｇ／マウスのＳＲ１を投与した。
第１０群〜第１２群には、１００μｇ／マウスの抗ＰＤ−１投与と組み合わせて、それぞれ０．４８６２、４．８６２及び４８．６２μｇ／マウスのＳＲ１を投与した。
第１３群は陽性対照群として設定し、３００ｍｇ／ｋｇでシクロホスファミドを投与した。
第１４群は、「観察」動物として設定し、何も処置を受けなかった。

この結果は、特定の用量でＺＤＸ（Ｔａ１）＋抗ＰＤ−１を併用した処置群は、Ｔａ１または抗ＰＤ−１単独で処置された群と比較して、少ない転移を呈したことを示している。このような結果は、サイモシン治療が、抗ＰＤ−１抗体と併用時の有効性傾向と合わせて、Ｂ１６Ｆ１０マウス肺転移モデルで陽性の統計的に有意な転移の抑制を示し得ることを裏付けている。

それぞれの処置を受けたマウスの４４のバイオマーカーの活性を分析した。これらのバイオマーカーのうち、いくつかのバイオマーカーは、Ｔａ１または抗ＰＤ−１単独で処置したマウスと、Ｔａ１及び抗ＰＤ−１を併用して処置したマウスとの間で統計的有意差の活性を示した。このようなバイオマーカーとしては、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ、レプチン、リンホタクチン、マクロファージコロニー刺激因子１（Ｍ−ＣＳＦ−１）、単球走化性タンパク質５（ＭＣＰ−５）、幹細胞因子（ＳＣＦ）及び血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ−１）が挙げられるが、これらに限定されない。

類似の試験を独立研究所で実施し、結果を確認した。結果を表６及び図８に示す。興味深いことに、この試験では、抗ＰＤ−１は上記の試験ほど良好に作用しなかったが、ＴＡ１は作用した。両方の研究所が入手した抗ＰＤ−１抗体のロット差、及び肺転移モデルのＢ１６Ｆ１０が抗ＰＤ−１に必ずしも反応しないという事実に起因する可能性がある。重要なのは、抗ＰＤ−１とＴＡ１の併用、特に低用量のＴＡ１により、統計的に有意な肺転移の減少を示したこと、その他の２つの併用群において陽性傾向があったことである。したがって、これらの予備試験から、２剤の併用により、特に２つのうちいずれかが単剤として作用しないと思われるときの付加的なまたは蓋然的な相乗効果が立証される。

別段の定義がない限り、本明細書のすべての技術的用語及び科学的用語は、本発明が属する分野の当業者に共通して理解されるものと同じ意味を有している。本明細書に記載するものと同様または同等であるいかなる方法及び材料も本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法及び材料を本明細書に記載している。引用されるすべての刊行物、特許及び特許公報は、目的を問わずその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で述べる刊行物は、本出願の提出日に先立つその開示のためだけに提供される。本明細書のいかなる内容も、本発明が先行発明を理由としてこのような刊行物に先行する権利を与えられないことを容認するものとは見なされない。

本発明はその特定の実施形態に関連して記載されているが、更なる改変が可能であること、ならびに本出願が、本発明の原理に一般的に従う本発明のいかなる変形例、使用法または適合例も包含し、また本発明が関係する技術の範囲内で周知の慣例または慣行の範囲内で考案されるような本開示からの逸脱、及び添付の特許請求の範囲内に定められ、それに従う上記の本質的な特徴に該当し得るような逸脱を含むことを意図するものであることが理解されよう。

Claims (24)

1. 対象の癌またはその転移を治療するための医薬組成物であって、治療的有効量の、アルファサイモシンペプチドと、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）又はプログラム細胞死１のリガンド（ＰＤ−Ｌ１）に対する抗体とを含む、前記医薬組成物。
2. 対象がヒトである、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 追加の抗癌剤を更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
4. アルファサイモシンペプチドが、少なくとも治療の一部期間で、０．５〜１０ｍｇ／日の範囲内の投与量で対象に投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
5. アルファサイモシンペプチドの投与量が、０．１〜１０ｍｇ／日の範囲内である、請求項４に記載の医薬組成物。
6. アルファサイモシンペプチドがサイモシンアルファ１（ＴＡ１）である、請求項１に記載の医薬組成物。
7. ＴＡ１は１〜１０日間の期間、毎日投与され、それに続く１〜５日、ＴＡ１は非投与である、請求項６に記載の医薬組成物。
8. ＴＡ１は３〜５日間毎日投与され、それに続く２〜４日、ＴＡ１は非投与である、請求項７に記載の医薬組成物。
9. ＴＡ１は４日間毎日投与され、それに続く３日、ＴＡ１は非投与である、請求項８に記載の医薬組成物。
10. キナーゼ阻害剤を更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
11. キナーゼ阻害剤がソラフェニブを含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
12. キナーゼ阻害剤が、１０〜２００ｍｇ／日の範囲内の投与量で前記対象に投与される、請求項１０に記載の医薬組成物。
13. 抗悪性腫瘍性の熱ショックアポトーシス活性化因子（ＨＳＡＡ）を更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
14. ＨＳＡＡが、ＳＴＡ−４７８３（エレスクロモル）を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
15. ＨＳＡＡが、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の投与量で前記対象に投与される、請求項１３に記載の医薬組成物。
16. 細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）に対する抗体を更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
17. ＣＴＬＡ４抗体が、９Ｈ１０、ＭＤＣ０１０、１Ｆ４、ＢＮＩ３、Ｑ０１、Ａ０１、Ｍ０８、１Ｂ８、ＷＫＨ２０３、ａｂ９９８４、ａｂ１３４８６、イピリムマブ、チシリムマブまたはこれらの組み合わせを含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
18. ＣＴＬＡ４抗体が、０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の投与量で前記対象に投与される、請求項１６に記載の医薬組成物。
19. アルキル化抗悪性腫瘍薬（ＡｌｋＡＡ）を更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
20. アルキル化抗悪性腫瘍薬（ＡｌｋＡＡ）が、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）を含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
21. アルキル化抗悪性腫瘍薬（ＡｌｋＡＡ）が、７００〜１３００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内の投与量で前記対象に投与される、請求項１９に記載の医薬組成物。
22. 化学療法剤を更に含む、請求項１に記載の医薬組成物。
23. 化学療法剤が、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）またはシスプラチンである、請求項２２に記載の医薬組成物。
24. 癌が黒色腫である、請求項１に記載の医薬組成物。

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