JP7569818B2 - エルゴチオネインを光に対し安定化させた液体組成物 - Google Patents
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Description
本発明は、エルゴチオネイン含有液体組成物におけるエルゴチオネインの光に対する安定化に関する。
エルゴチオネインは、ライ麦角菌(Claviceps purpurea)から単離された含硫アミノ酸として発見され、植物や動物の生体内にも存在することが見いだされている。しかしながら、植物や動物は、エルゴチオネインを合成することはできず、生体内のエルゴチオネインは、担子菌類などの微生物により合成されたエルゴチオネインに由来すると考えられている。特に担子菌類の一部のキノコ、例えば、ヒラタケ、シイタケ、マイタケ、エリンギなどの食用キノコにも含まれており、特にタモギタケに多く含まれていることが知られている。エルゴチオネインは、ヒスチジンからの生合成経路が知られており、硫黄原子はシステインから供給される。エルゴチオネインは、高い抗酸化性を有しており、また、エラスターゼ阻害作用、チロシナーゼ阻害作用が報告されており、美白やしわ予防といった美容・食品分野で特に注目されている。また、エルゴチオネインが生体酸化防御システムに関与することが判明してきており、医療分野での応用も試みられている。エルゴチオネインは、熱安定性やｐＨ安定性が高く、高温でもその抗酸化作用を維持することができ、生理作用を期待して食品へ配合される他、抗酸化剤としての食品への使用も期待されている。
エルゴチオネインの製造方法としては、タモギタケなどの担子菌からの抽出、化学合成、微生物を用いた発酵が用いられている。タモギタケなどの担子菌からの抽出は、原材料の取得に時間がかかり、大量生産には適していない。大量生産には化学合成が適しているが高価な合成試薬を用いる必要があり、また、精製コストが高くなるという問題がある（特許文献１）。したがって、Ｃ１化合物資化性の細菌や酵母を用いた発酵（特許文献２、非特許文献１）、さらにはエルゴチオネイン生合成遺伝子を過剰発現させた微生物を用いた発酵（特許文献３）が製造方法としては有力であり、微生物発酵物をそのまま、または簡易な抽出操作により得られた抽出物を使用できる点で有力である。
PLOS One 2014 vol. 9(5) e97774
エルゴチオネインを配合した製品開発を行っていたところ、エルゴチオネインは精製品では安定性が高い一方で、特定の条件下で安定性が低下することを見出した。より具体的に、エルゴチオネイン含有原料にエタノール又は含水エタノールを添加し、沈殿物を除去し、上清を濃縮して得られたエルゴチオネイン含有液体組成物（以下、「エルゴチオネイン含有液体組成物」といい、エルゴチオネイン含有液体組成物を添加された組成物を含む。）では、光安定性が低く２週間の光照射下では、初期量の約半分へと低下してしまうことが見いだされた。
そこで、本発明者らが、エルゴチオネイン含有液体組成物について、光に対し安定化させる成分について鋭意研究を行ったところ、アスコルビン酸を含有させることでエルゴチオネイン含有液体組成物中のエルゴチオネインの光に対する安定性が増大することを見出し、本発明に至った。
そこで、本発明は以下に関する：
［１］ エルゴチオネイン含有原料にエタノール又は含水エタノールを添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮して得られるエルゴチオネイン含有液体組成物であって、前記組成物中のエルゴチオネインの光安定化剤としてアスコルビン酸又はその塩を含む、液体組成物。
［２］ 前記エルゴチオネイン含有原料が、微生物発酵物又はキノコ子実体粉砕物である、項目１に記載の液体組成物。
［３］ 前記微生物発酵物が、麹菌発酵物である、項目２に記載の液体組成物。
［４］ エルゴチオネイン含有液体組成物中のアスコルビン酸又はその塩の濃度が、０．０３質量％以上である、項目１～３のいずれか一項に記載の液体組成物。
［５］ 前記液体組成物のｐＨが３．０～７．０である項目１～４のいずれか一項に記載の液体組成物。
［６］ 液体組成物が、濃縮液、飲料、液体調味料、及び食品からなる群から選択される、項目１～５のいずれか一項に記載の液体組成物。
［７］ エルゴチオネインの光安定化剤のスクリーニング方法であって、
エルゴチオネイン含有原料にエタノール又は含水エタノールを添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮して得られるエルゴチオネイン含有液体組成物と、候補成分とを含む検体を調製する工程、
光照射下で保存する工程、
保存後のエルゴチオネイン含有量を測定する工程、及び
対照のエルゴチオネイン含有量と比較する工程
を含む、前記スクリーニング方法。
［８］ 対照のエルゴチオネイン含有量が、候補成分未添加検体について、光照射下で同じ期間保存後の検体である、項目７に記載の方法。
［９］ 前記エルゴチオネイン含有原料が、微生物発酵物又はキノコ子実体粉砕物である、項目７又は８に記載の方法。
［１０］ 前記微生物発酵物が、麹菌発酵物である、項目９に記載の方法。
［１１］ エルゴチオネインの光安定化方法であって、
エルゴチオネイン含有原料の濃縮度に応じて添加するエタノール量を調整する工程、
エルゴチオネイン含有原料にエタノール又は含水エタノールを添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮して得られるエルゴチオネイン含有液体組成物に、アスコルビン酸又はその塩を添加する工程、
を含む、エルゴチオネイン含有液体組成物中のエルゴチオネインの光安定化方法。
［１２］前記エタノール又は含水エタノールの添加が、エタノールの終濃度２０％～９９％、好ましくは、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、又は８０％以上、好ましくは９５％以下、９０％以下、８５％以下、又は８０％以下となるように添加される、項目１～６のいずれか一項に記載の組成物。
［１３］前記エタノール又は含水エタノールの添加が、エタノールの終濃度２０％～９９％、好ましくは、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、又は８０％以上、好ましくは９５％以下、９０％以下、８５％以下、又は８０％以下となるように添加される、項目７～９のいずれか一項に記載の方法。
［１４］前記エタノール又は含水エタノールの添加が、エタノールの終濃度２０％～９９％、好ましくは、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、又は８０％以上、好ましくは９５％以下、９０％以下、８５％以下、又は８０％以下となるように添加される、項目７～９のいずれか一項に記載の方法。
そこで、本発明は以下に関する：
［１］ エルゴチオネイン含有原料にエタノール又は含水エタノールを添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮して得られるエルゴチオネイン含有液体組成物であって、前記組成物中のエルゴチオネインの光安定化剤としてアスコルビン酸又はその塩を含む、液体組成物。
［２］ 前記エルゴチオネイン含有原料が、微生物発酵物又はキノコ子実体粉砕物である、項目１に記載の液体組成物。
［３］ 前記微生物発酵物が、麹菌発酵物である、項目２に記載の液体組成物。
［４］ エルゴチオネイン含有液体組成物中のアスコルビン酸又はその塩の濃度が、０．０３質量％以上である、項目１～３のいずれか一項に記載の液体組成物。
［５］ 前記液体組成物のｐＨが３．０～７．０である項目１～４のいずれか一項に記載の液体組成物。
［６］ 液体組成物が、濃縮液、飲料、液体調味料、及び食品からなる群から選択される、項目１～５のいずれか一項に記載の液体組成物。
［７］ エルゴチオネインの光安定化剤のスクリーニング方法であって、
エルゴチオネイン含有原料にエタノール又は含水エタノールを添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮して得られるエルゴチオネイン含有液体組成物と、候補成分とを含む検体を調製する工程、
光照射下で保存する工程、
保存後のエルゴチオネイン含有量を測定する工程、及び
対照のエルゴチオネイン含有量と比較する工程
を含む、前記スクリーニング方法。
［８］ 対照のエルゴチオネイン含有量が、候補成分未添加検体について、光照射下で同じ期間保存後の検体である、項目７に記載の方法。
［９］ 前記エルゴチオネイン含有原料が、微生物発酵物又はキノコ子実体粉砕物である、項目７又は８に記載の方法。
［１０］ 前記微生物発酵物が、麹菌発酵物である、項目９に記載の方法。
［１１］ エルゴチオネインの光安定化方法であって、
エルゴチオネイン含有原料の濃縮度に応じて添加するエタノール量を調整する工程、
エルゴチオネイン含有原料にエタノール又は含水エタノールを添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮して得られるエルゴチオネイン含有液体組成物に、アスコルビン酸又はその塩を添加する工程、
を含む、エルゴチオネイン含有液体組成物中のエルゴチオネインの光安定化方法。
［１２］前記エタノール又は含水エタノールの添加が、エタノールの終濃度２０％～９９％、好ましくは、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、又は８０％以上、好ましくは９５％以下、９０％以下、８５％以下、又は８０％以下となるように添加される、項目１～６のいずれか一項に記載の組成物。
［１３］前記エタノール又は含水エタノールの添加が、エタノールの終濃度２０％～９９％、好ましくは、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、又は８０％以上、好ましくは９５％以下、９０％以下、８５％以下、又は８０％以下となるように添加される、項目７～９のいずれか一項に記載の方法。
［１４］前記エタノール又は含水エタノールの添加が、エタノールの終濃度２０％～９９％、好ましくは、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、又は８０％以上、好ましくは９５％以下、９０％以下、８５％以下、又は８０％以下となるように添加される、項目７～９のいずれか一項に記載の方法。
エルゴチオネイン含有原料から得られたエルゴチオネイン含有液体組成物にアスコルビン酸を配合することにより、エルゴチオネイン含有液体組成物中のエルゴチオネインの光安定性が増大する。
本発明は、エルゴチオネイン含有原料から調製されたエルゴチオネイン含有液体組成物に対し、エルゴチオネインの光安定化剤としてアスコルビン酸又はその塩が添加されたエルゴチオネイン含有液体組成物に関する。さらに別の態様では、本発明は、アスコルビン酸又はその塩を添加する工程を含む、エルゴチオネイン含有原料から調製されたエルゴチオネイン含有液体組成物中において、エルゴチオネインを安定化させる方法にも関する。
本発明の別の態様では、アスコルビン酸又はその塩を添加する工程を含む、エルゴチオネインの光安定性が向上されたエルゴチオネイン含有液体組成物の製造方法にも関する。より具体的に、光安定性が向上されたエルゴチオネイン含有液体組成物の製造方法は、以下の：
エルゴチオネイン含有原料にエタノール又は含水エタノールを添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮する工程；及び
濃縮されたエルゴチオネイン含有液体組成物に、光安定化剤としてアスコルビン酸又はその塩を添加する工程
を含む。
エルゴチオネイン含有原料にエタノール又は含水エタノールを添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮する工程；及び
濃縮されたエルゴチオネイン含有液体組成物に、光安定化剤としてアスコルビン酸又はその塩を添加する工程
を含む。
エルゴチオネイン含有原料は、エルゴチオネインを含有していれば任意の原料であってよい。一例として、ヒラタケ、シイタケ、マイタケ、エリンギ、タモギタケなどの担子菌類の子実体に由来するものであってもよいし、微生物発酵物であってもよい。
微生物発酵物としては、エルゴチオネインを生産する観点から、糸状菌、担子菌、酵母、細菌などの培養物が挙げられる。エルゴチオネインを産生する微生物としては、マイコバクテリウム（Mycobacterium）属の微生物、シュードザイマ（Psudozyma）属の酵母、シゾサッカロマイシス属（Schizosaccharomyces）の分裂酵母、ロドトルラ（Rhodotorula）属、クリプトコッカス（Cryoptococcus）属の不完全酵母、アスペルギルス（Aspergillus）属の麹菌が挙げられる。培養物には菌体のみならず、培地が含まれてもよい。
また、別の態様では、エルゴチオネイン産生量を高めるよう遺伝子導入された微生物、例えば、大腸菌、酵母、放線菌、糸状菌が使用されてもよい。このような遺伝子導入された微生物としては、エルゴチオネイン合成遺伝子が導入された酵母やエルゴチオナーゼ遺伝子の発現が抑制された酵母が使用されうる。食品として配合される観点から、麹菌が好ましい。
微生物発酵物としては、エルゴチオネインを生産する観点から、糸状菌、担子菌、酵母、細菌などの培養物が挙げられる。エルゴチオネインを産生する微生物としては、マイコバクテリウム（Mycobacterium）属の微生物、シュードザイマ（Psudozyma）属の酵母、シゾサッカロマイシス属（Schizosaccharomyces）の分裂酵母、ロドトルラ（Rhodotorula）属、クリプトコッカス（Cryoptococcus）属の不完全酵母、アスペルギルス（Aspergillus）属の麹菌が挙げられる。培養物には菌体のみならず、培地が含まれてもよい。
また、別の態様では、エルゴチオネイン産生量を高めるよう遺伝子導入された微生物、例えば、大腸菌、酵母、放線菌、糸状菌が使用されてもよい。このような遺伝子導入された微生物としては、エルゴチオネイン合成遺伝子が導入された酵母やエルゴチオナーゼ遺伝子の発現が抑制された酵母が使用されうる。食品として配合される観点から、麹菌が好ましい。
エルゴチオネイン含有液体組成物とは、エルゴチオネイン含有原料にエタノールを添加し、ろ過し、固形分を除去するなどで沈殿物を除去し、上清を濃縮して得られた液体組成物又はその液体組成物を含む液体組成物をいう。
エタノール添加量を軽減させるためにはエルゴチオネイン含有原料を一定程度まで濃縮することが望ましく、エルゴチオネイン含有原料の濃縮度に応じて、適宜、９５％から５％の範囲で、適切なエタノール濃度を選択することができる。別の態様として、エルゴチオネイン含有原料を乾燥させて、乾燥粉末を得て、乾燥粉末に対し、含水エタノールが添加されてもよい。
エタノール添加量を軽減させるためにはエルゴチオネイン含有原料を一定程度まで濃縮することが望ましく、エルゴチオネイン含有原料の濃縮度に応じて、適宜、９５％から５％の範囲で、適切なエタノール濃度を選択することができる。別の態様として、エルゴチオネイン含有原料を乾燥させて、乾燥粉末を得て、乾燥粉末に対し、含水エタノールが添加されてもよい。
本発明の一つの態様としてエルゴチオネイン含有原料である麹菌発酵物を１０倍程度に一般的な濃縮を行った場合、抽出に用いるエタノールは、終濃度２０％～９９％で麹菌発酵物に添加されうる。エルゴチオネインの光安定性を高める観点から、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、又は８０％以上となるように麹菌発酵物に添加されてもよい。エタノール終濃度の上限は特に限定されないが、エルゴチオネインを晶析させない観点から添加量に応じ通常９５％以下、好ましくは９０％以下、より好ましくは８５％以下、さらに好ましくは８０％以下が用いられる。エタノールの終濃度を高めることで、エルゴチオネイン含有液体組成物中のエルゴチオネインの光安定性が高まり、さらに光安定化剤による安定化効果を亢進することができる。
エルゴチオネインの光安定化剤とは、エルゴチオネイン含有液体組成物に添加することで、エルゴチオネインの光安定性を高めることができる成分をいう。このような成分として、アスコルビン酸又はその塩が用いられうる。アスコルビン酸は、光学活性化合物であり、Ｌ－体又はＤ－体のいずれであってもよい。ビタミンＣとしての生理作用を有する観点から、Ｌ－アスコルビン酸が特に好ましい。エルゴチオネイン含有液体組成物に配合する場合、アスコルビン酸又はその塩は、０．０３質量％～４０質量％の終濃度で配合することができる。最終製品に配合する場合、アスコルビン酸又はその塩は、０．０３質量％～１０質量％で配合することができ、例えば０．０５質量％以上、又は０．１質量％以上で配合でき、そして５質量％以下、又は１質量％以下で配合することができる。組成物を濃縮物として提供する観点からは、１質量％～４０質量％で配合することができ、例えば１．５質量％以上、又は５質量％以上で配合することができ、そして２０質量％以下、又は１０質量％以下で配合することができる。
光安定化とは、光、特に紫外線の影響による分解を抑制することをいう。光安定化は、製品の流通、貯蔵、消費の間の光曝露による分解を抑制することを目的とするが、通常実験室条件で調べられる。一例として、エルゴチオネイン含有液体組成物を殺菌処理後に、光照射下で一定期間保存し、保存前の検体、光照射下で保存後の検体及び/又は光未照射で保存後の検体について、エルゴチオネイン含量を測定することで、光安定性を決定することができる。光照射及び保存条件は、任意の強度を選択することができる。例えば、透明のチューブに入れ、５～３０℃、１，０００～２０，０００Ｌｕｘの光の照射下で数週間、例えば、２週間保存される。保存条件として、一例として３０℃、２，０００Ｌｕｘ又は３，０００Ｌｕｘを選択することができる。
本発明のエルゴチオネイン含有液体組成物において、エルゴチオネインの安定性の観点からｐＨが調整されうる。エルゴチオネイン含有液体組成物のｐＨは２．５～７．０、好ましくは３．０以上、より好ましくは３．５以上であり、好ましくは６．５以下、より好ましくは６．０以下に調整することができる。
微生物発酵物とは、微生物を用いて発酵を行い得られた発酵物をいう。微生物発酵物を製造するための発酵培地は任意の培地であってよく、エルゴチオネイン含量を高める観点から、タンパク質高含有培地が好ましく、例えば、１０％以上、好ましくは２０％以上のタンパク質を含むことが好ましい。発酵培地は、固体培地であってもよいし、液体培地であってもよい。発酵培地は、培養する微生物の種類に応じて適宜選択することができる。このような培地の原料としては、米、麦、イモなどの穀類、豆類、魚、肉、藻類、菌類並びにそれらの加工物が挙げられる。このような加工物として、脱脂大豆、豆乳、魚粉、肉紛、小麦ふすま、スピルリナ粉、酵母エキスなどが挙げられる。発明の固体培地は、膨化処理した原料を含むことがさらに好ましい。固体培地は、上述の原料を沸騰したお湯で蒸すか又は煮込み、場合により破砕することで調製することができる。
微生物として麹菌を使用する場合、米、麦、イモなどの穀類、豆類、魚、肉、藻類、菌類並びにそれらの加工物を原料としたタンパク質高含有培地を使用することができる。麹菌発酵培地としては、豆乳や大豆粉の煮汁、大豆抽出物、大豆おから、小麦ふすま、スピルリナ粉、及び/又は酵母エキスを含む培地が特に好ましい。発酵条件は、本技術分野において用いられる通常の条件を使用することができる。例えば、培地の初発ｐＨは５～１０に調整される。発酵温度は２０～４０℃に設定され、発酵時間は４日以上であり、好ましくは４～１０日間、好ましくは５～７日間、より好ましくは６～７日間が望ましい。
麹菌としては、アスペルギルス（Aspergillus）属に属する任意の菌を用いることができる。一例として、アスペルギルス オリゼ（Aspergillus oryzae）、アスペルギルス ソーヤ（Aspergillus sojae）、アスペルギルス リューキューエンシス（Aspergillus luchuensis）、アスペルギルス・タマリ（Aspergillus tamarii）が挙げられる。麹菌の菌株としては、例えば、Aspergillus oryzae ＲＩＢ３２６株など公的に入手可能な菌株、種麹屋などから市販されている種麹に含まれる菌株、又は清酒、醤油醸造蔵等の飲食品製造環境などから分離して得られる菌株を使用することができる。
使用される麹菌は、エルゴチオネイン産生性の麹菌である。エルゴチオネイン産生性の麹菌としては、自然から単離された、エルゴチオネイン産生能を有することが示された麹菌株、或いはかかる麹菌株から育種により高いエルゴチオネイン産生能を有する麹菌が使用されうる。また別の態様では、エルゴチオネイン産生量を高めるよう遺伝子導入された麹菌が使用されてもよい。このような遺伝子導入された麹菌としては、エルゴチオネイン合成遺伝子が導入された麹菌やエルゴチオナーゼ遺伝子などのエルゴチオネイン蓄積を阻害する遺伝子の発現が抑制された麹菌が使用されうる。
エルゴチオネイン合成遺伝子は、エルゴチオネイン生合成経路においてエルゴチオネイン産生に係るタンパク質をコードする遺伝子であればいかなる遺伝子であってもよい。一例として、Ｃ１化合物資化性のメチロバクテリウム(Methylobacterium)属の微生物は、エルゴチオネイン産生能が知られており、かかる微生物から得られたエルゴチオネイン産生に係る遺伝子としてegtABCDE遺伝子が挙げられる。この遺伝子には、エルゴチオネイン産生に関わるegtA遺伝子、egtB遺伝子、egtC遺伝子、egtD遺伝子及びegtE遺伝子が直列に配置されているが、これらの遺伝子の任意の組み合わせを含んでもよい。
本発明におけるエルゴチオネイン含有液体組成物は、エルゴチオネイン含有液体組成物を含む組成物であれば、任意の組成物であってもよい。一例として、エルゴチオネイン含有液体組成物は、食品、化粧品、医薬部外品、及び医薬品などの製品であってもよいし、製品に配合される濃縮物であってもよい。特にエルゴチオネインの生理作用に着目した、機能性表示食品、栄養機能食品、特定保健用食品、又は栄養補助食品（サプリメント）であってもよい。エルゴチオネイン含有液体組成物に由来するエルゴチオネインの配合量は、食品、化粧料、及び医薬品などの最終製品として配合される観点では、０．０００１～５０質量％で配合されることが好ましく、０．００１～３０質量％で配合されることがさらに好ましく、０．０１～２０質量％で配合されることが最も好ましい。濃縮物として配合される観点では、０．００１～５０質量％で配合され、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上で配合され、そして好ましくは４０質量％以下で配合され、より好ましくは３０質量％以下で配合されうる。濃縮物は、エルゴチオネインを含有しており、製品製造の原料として流通しうる。濃縮物を配合することで、エルゴチオネイン含有製品、例えば、食品、化粧品、医薬部外品、及び医薬品を製造することができる。
本発明の別の態様は、エルゴチオネイン含有液体組成物におけるエルゴチオネインの光に対する安定化剤をスクリーニングする方法にも関する。より具体的に、かかるスクリーニング方法は、
エルゴチオネイン含有液体組成物と、候補成分とを含む検体を調製する工程、
光照射下で保存する工程、
保存後のエルゴチオネイン含有量を測定する工程、及び
対照のエルゴチオネイン含有量と比較する工程
を含む。
対照のエルゴチオネイン含有量としては、候補成分未添加の検体について、同条件で光照射下で同じ期間保存後の検体におけるエルゴチオネイン含有量を使用することができる。候補成分未添加対照と比較し、エルゴチオネイン含有量が増大していた場合に、候補成分をエルゴチオネイン安定化剤として選択することができる。スクリーニング方法における「エルゴチオネイン含有原料」、「エルゴチオネイン含有液体組成物」、「光照射」、及び「保存」については、本明細書で定義される通りである。一例として、エルゴチオネイン含有原料としては麹菌発酵物を使用することができ、エルゴチオネイン含有液体組成物として、終濃度がエタノール７０％以上となるようにして調製し、沈殿物を除去し、上清を濃縮して得られたものが好ましい。スクリーニング方法における、光照射及び保存条件は、任意の強度を選択することができる。例えば、透明のチューブに入れ、５～３０℃、１，０００～２０，０００Ｌｕｘの光の照射下で数週間、例えば、２週間保存される。保存条件として、一例として３０℃、２，０００Ｌｕｘを選択することができる。
エルゴチオネイン含有液体組成物と、候補成分とを含む検体を調製する工程、
光照射下で保存する工程、
保存後のエルゴチオネイン含有量を測定する工程、及び
対照のエルゴチオネイン含有量と比較する工程
を含む。
対照のエルゴチオネイン含有量としては、候補成分未添加の検体について、同条件で光照射下で同じ期間保存後の検体におけるエルゴチオネイン含有量を使用することができる。候補成分未添加対照と比較し、エルゴチオネイン含有量が増大していた場合に、候補成分をエルゴチオネイン安定化剤として選択することができる。スクリーニング方法における「エルゴチオネイン含有原料」、「エルゴチオネイン含有液体組成物」、「光照射」、及び「保存」については、本明細書で定義される通りである。一例として、エルゴチオネイン含有原料としては麹菌発酵物を使用することができ、エルゴチオネイン含有液体組成物として、終濃度がエタノール７０％以上となるようにして調製し、沈殿物を除去し、上清を濃縮して得られたものが好ましい。スクリーニング方法における、光照射及び保存条件は、任意の強度を選択することができる。例えば、透明のチューブに入れ、５～３０℃、１，０００～２０，０００Ｌｕｘの光の照射下で数週間、例えば、２週間保存される。保存条件として、一例として３０℃、２，０００Ｌｕｘを選択することができる。
本明細書において言及される全ての文献は、その全体が引用により本明細書に取り込まれる。
以下に説明する本発明の実施例は、例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は、特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。
実施例１：エルゴチオネイン含有液体組成物の調製
麹菌（アスペルギルス・オリゼー（Aspergillus oryzae）（菌株：RIB326））を用いて、水に溶解した酵母エキス１８Ｌ（酵母エキス３．５％）を原料として２４℃、７日間発酵を行った。発酵液を１００℃で加熱殺菌後、濾布を用いて固液分離を行い、得られた清澄液１８Ｌをエバポレーターにて濃縮した。得られた濃縮液のうち４０ｍＬに、エタノールを１６０ｍＬ添加後、濾過を行い上清を得た。採取された上清をエバポレーターにて濃縮し、得られたエルゴチオネイン含有液体組成物４０ｍＬ中のエルゴチオネインを、ＬＣ－ＭＳＭＳを用いて測定を行ったところ、１．５質量％であった。
麹菌（アスペルギルス・オリゼー（Aspergillus oryzae）（菌株：RIB326））を用いて、水に溶解した酵母エキス１８Ｌ（酵母エキス３．５％）を原料として２４℃、７日間発酵を行った。発酵液を１００℃で加熱殺菌後、濾布を用いて固液分離を行い、得られた清澄液１８Ｌをエバポレーターにて濃縮した。得られた濃縮液のうち４０ｍＬに、エタノールを１６０ｍＬ添加後、濾過を行い上清を得た。採取された上清をエバポレーターにて濃縮し、得られたエルゴチオネイン含有液体組成物４０ｍＬ中のエルゴチオネインを、ＬＣ－ＭＳＭＳを用いて測定を行ったところ、１．５質量％であった。
実施例２：エルゴチオネイン含有液体組成物の光安定性試験
実施例１で得られたエルゴチオネイン含有液体組成物を水に溶解し、エルゴチオネイン濃度が３０ｍｇ／Ｌとなるように調製し、エルゴチオネインの光安定性についての検体を調製した。また、精製エルゴチオネインを同様に３０ｍｇ／Ｌとなるように調製して、エルゴチオネインの光安定性についての検体を調製した。これらの検体を、調製直後（０ｗ）、２週間の光照射（２，０００Ｌｕｘ、３０℃）後、２週間の光非照射（０Ｌｕｘ、３０℃）後に、エルゴチオネイン含有量を測定した。光照射は、人口気象器（ＮＣ－４１１Ｈ（Ｃ）Ｈ、日本医化機器製作所）を用いて行った。結果を図１に示す。
実施例１で得られたエルゴチオネイン含有液体組成物を水に溶解し、エルゴチオネイン濃度が３０ｍｇ／Ｌとなるように調製し、エルゴチオネインの光安定性についての検体を調製した。また、精製エルゴチオネインを同様に３０ｍｇ／Ｌとなるように調製して、エルゴチオネインの光安定性についての検体を調製した。これらの検体を、調製直後（０ｗ）、２週間の光照射（２，０００Ｌｕｘ、３０℃）後、２週間の光非照射（０Ｌｕｘ、３０℃）後に、エルゴチオネイン含有量を測定した。光照射は、人口気象器（ＮＣ－４１１Ｈ（Ｃ）Ｈ、日本医化機器製作所）を用いて行った。結果を図１に示す。
実施例３：エルゴチオネインの光安定化剤のスクリーニング
実施例１で得られたエルゴチオネイン含有液体組成物を水に溶解し、エルゴチオネイン濃度が３０ｍｇ／Ｌとなるように調製した。さらに、光安定化剤の候補成分として、アスコルビン酸（０．０３％）、ＥＤＴＡ２Ｎａ（０．００３％）、亜硝酸ナトリウム（０．００３％）、ローズマリーエキス（０．０５％）を、各濃度となるよう添加し、スクリーニング用の検体を調製した。対照として安定化剤を含まない検体を用いた。これらの検体を、調製直後（０ｗ）、２週間の光照射（２，０００Ｌｕｘ、３０℃）後、２週間の光非照射（０Ｌｕｘ、３０℃）後に、エルゴチオネイン含有量を測定した。光照射は、人口気象器（ＮＣ－４１１Ｈ（Ｃ）Ｈ、日本医化機器製作所）を用いて行った。結果を図２に示す。アスコルビン酸が、エルゴチオネイン含有液体組成物中のエルゴチオネインの光分解を抑制し、エルゴチオネインの光安定性を高めることが示された。
実施例１で得られたエルゴチオネイン含有液体組成物を水に溶解し、エルゴチオネイン濃度が３０ｍｇ／Ｌとなるように調製した。さらに、光安定化剤の候補成分として、アスコルビン酸（０．０３％）、ＥＤＴＡ２Ｎａ（０．００３％）、亜硝酸ナトリウム（０．００３％）、ローズマリーエキス（０．０５％）を、各濃度となるよう添加し、スクリーニング用の検体を調製した。対照として安定化剤を含まない検体を用いた。これらの検体を、調製直後（０ｗ）、２週間の光照射（２，０００Ｌｕｘ、３０℃）後、２週間の光非照射（０Ｌｕｘ、３０℃）後に、エルゴチオネイン含有量を測定した。光照射は、人口気象器（ＮＣ－４１１Ｈ（Ｃ）Ｈ、日本医化機器製作所）を用いて行った。結果を図２に示す。アスコルビン酸が、エルゴチオネイン含有液体組成物中のエルゴチオネインの光分解を抑制し、エルゴチオネインの光安定性を高めることが示された。
実施例４：アスコルビン酸の濃度の検討
実施例１で得られたエルゴチオネイン含有液体組成物を水に溶解し、エルゴチオネイン濃度が３０ｍｇ／Ｌとなるように調製した。さらに、光安定化剤の候補成分として、アスコルビン酸を０．０５％、０．０３％、０．０１％、０．００１％となるように添加し、濃度検討用の検体として調製した。これらの検体を、調製直後（０ｗ）、２週間の光照射（２，０００Ｌｕｘ、３０℃）後、２週間の光非照射（０Ｌｕｘ、３０℃）後に、エルゴチオネイン含有量を測定した。光照射は、人口気象器（ＮＣ－４１１Ｈ（Ｃ）Ｈ、日本医化機器製作所）を用いて行った。結果を図３に示す。アスコルビン酸濃度は０．０１％以下では、安定化効果を発揮しなかった一方、０．０３％及び０．０５％の濃度で安定化効果を示した。
実施例１で得られたエルゴチオネイン含有液体組成物を水に溶解し、エルゴチオネイン濃度が３０ｍｇ／Ｌとなるように調製した。さらに、光安定化剤の候補成分として、アスコルビン酸を０．０５％、０．０３％、０．０１％、０．００１％となるように添加し、濃度検討用の検体として調製した。これらの検体を、調製直後（０ｗ）、２週間の光照射（２，０００Ｌｕｘ、３０℃）後、２週間の光非照射（０Ｌｕｘ、３０℃）後に、エルゴチオネイン含有量を測定した。光照射は、人口気象器（ＮＣ－４１１Ｈ（Ｃ）Ｈ、日本医化機器製作所）を用いて行った。結果を図３に示す。アスコルビン酸濃度は０．０１％以下では、安定化効果を発揮しなかった一方、０．０３％及び０．０５％の濃度で安定化効果を示した。
実施例５：添加するエタノール濃度の検討
実施例１と同様にしてエルゴチオネイン含有液体組成物を調製するにあたり、エタノール終濃度を５０％、６０％または７０％とし、それ以外は実施例１と同じ操作を行って、エルゴチオネイン含有液体組成物（それぞれＥ５０、Ｅ６０およびＥ７０）を調製した。実施例１において終濃度を８０％として調製されたエルゴチオネイン含有液体組成物は、エルゴチオネイン含有液体組成物（Ｅ８０）とした。また、エタノールの代わりに熱水で抽出してエルゴチオネイン含有抽出物（ＹＷ）を調製した。これらのサンプルを水に溶解し、エルゴチオネイン濃度が３０ｍｇ／Ｌとなるように添加して、検体を調製した。対照として安定化剤を含まない検体を用いた。これらの検体を、調製直後（０ｗ）、２週間の光照射（２，０００Ｌｕｘ、３０℃）後、２週間の光非照射（０Ｌｕｘ、３０℃）後に、エルゴチオネイン含有量を測定した。結果を図４に示す。エルゴチオネイン含有液体組成物（Ｅ５０、Ｅ６０、Ｅ７０およびＥ８０）において、アスコルビン酸の安定化効果が発揮された。
実施例１と同様にしてエルゴチオネイン含有液体組成物を調製するにあたり、エタノール終濃度を５０％、６０％または７０％とし、それ以外は実施例１と同じ操作を行って、エルゴチオネイン含有液体組成物（それぞれＥ５０、Ｅ６０およびＥ７０）を調製した。実施例１において終濃度を８０％として調製されたエルゴチオネイン含有液体組成物は、エルゴチオネイン含有液体組成物（Ｅ８０）とした。また、エタノールの代わりに熱水で抽出してエルゴチオネイン含有抽出物（ＹＷ）を調製した。これらのサンプルを水に溶解し、エルゴチオネイン濃度が３０ｍｇ／Ｌとなるように添加して、検体を調製した。対照として安定化剤を含まない検体を用いた。これらの検体を、調製直後（０ｗ）、２週間の光照射（２，０００Ｌｕｘ、３０℃）後、２週間の光非照射（０Ｌｕｘ、３０℃）後に、エルゴチオネイン含有量を測定した。結果を図４に示す。エルゴチオネイン含有液体組成物（Ｅ５０、Ｅ６０、Ｅ７０およびＥ８０）において、アスコルビン酸の安定化効果が発揮された。
実施例６：ｐＨの検討
実施例１で得られたエルゴチオネイン含有液体組成物を水に溶解し、エルゴチオネイン濃度が３０ｍｇ／Ｌとなるように調製した。さらに、光安定化剤の候補成分として、アスコルビン酸を０．０３％となるように添加し、ｐＨ調整剤としてＬ－乳酸又はＮａＯＨを用いて、ｐＨ４．０、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、及びｐＨ７．０に合わせた検体を調製した。これらの検体を、９０℃で３０分間殺菌後、調製直後（０ｗ）、４日間の光照射（３，０００Ｌｕｘ、３０℃）後、４日間の光非照射（０Ｌｕｘ、３０℃）後に、エルゴチオネイン含有量を測定した。光照射は、人口気象器（ＮＣ－４１１Ｈ（Ｃ）Ｈ、日本医化機器製作所）を用いて行った。結果を図５に示す。ｐＨ４．０～７．０のいずれの範囲でも、光照射による分解を抑制し、特にｐＨ７．０において光照射による分解を完全に抑制した。
実施例１で得られたエルゴチオネイン含有液体組成物を水に溶解し、エルゴチオネイン濃度が３０ｍｇ／Ｌとなるように調製した。さらに、光安定化剤の候補成分として、アスコルビン酸を０．０３％となるように添加し、ｐＨ調整剤としてＬ－乳酸又はＮａＯＨを用いて、ｐＨ４．０、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、及びｐＨ７．０に合わせた検体を調製した。これらの検体を、９０℃で３０分間殺菌後、調製直後（０ｗ）、４日間の光照射（３，０００Ｌｕｘ、３０℃）後、４日間の光非照射（０Ｌｕｘ、３０℃）後に、エルゴチオネイン含有量を測定した。光照射は、人口気象器（ＮＣ－４１１Ｈ（Ｃ）Ｈ、日本医化機器製作所）を用いて行った。結果を図５に示す。ｐＨ４．０～７．０のいずれの範囲でも、光照射による分解を抑制し、特にｐＨ７．０において光照射による分解を完全に抑制した。
Claims (6)
- エルゴチオネイン含有麹菌発酵物にエタノール又は含水エタノールを添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮して得られる、麹菌由来のエルゴチオネイン含有液体組成物であって、前記組成物中のエルゴチオネインの光安定化剤として、０．０３質量％以上のアスコルビン酸又はその塩を含み、液体組成物のｐＨが、３．０～７．０である、液体組成物。
- 液体組成物が、濃縮液、飲料、液体調味料、及び食品からなる群から選択される、請求項１に記載の液体組成物。
- 液体組成物が、飲料又は食品である、請求項１又は２に記載の液体組成物。
- エルゴチオネインの光安定化剤のスクリーニング方法であって、
エルゴチオネイン含有麹菌発酵物にエタノール又は含水エタノールを添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮して得られる、麹菌由来エルゴチオネイン含有液体組成物と、候補成分とを含む検体を調製する工程、
光照射下で保存する工程、
保存後のエルゴチオネイン含有量を測定する工程、及び
対照のエルゴチオネイン含有量と比較する工程
を含む、前記スクリーニング方法。 - 対照のエルゴチオネイン含有量が、候補成分未添加検体について、光照射下で同じ期間保存後の検体である、請求項４に記載の方法。
- エルゴチオネインの光安定化方法であって、
エルゴチオネイン含有麹菌発酵物にエタノール又は含水エタノールを、終濃度５０％～９９％になるように添加し、固形分を除去して得られた上清を濃縮して得られる麹菌由来のエルゴチオネイン含有液体組成物に、アスコルビン酸又はその塩を添加する工程、
を含む、エルゴチオネイン含有液体組成物中のエルゴチオネインの光安定化方法。
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