JP7748876B2 - 抗タウｃ３抗体及びその使用 - Google Patents

Description

本出願は、参照として本明細書に組み入れられる、２０１９年４月５日に出願された米国仮特許出願第６２／８２９，７７４号の利益を主張するものである。

タウタンパク質は、主に軸索に分布し、ニューロン中の微小管（ＭＴ）の集合、空間構成及び挙動を調節する微小管関連タンパク質である。タウタンパク質は、１７番染色体上に配置される単一遺伝子によりコードされる。

タウタンパク質には、６つの公知のアイソフォームが存在する。これらのアイソフォームは、タウのアミノ末端領域での２９アミノ酸又は５８アミノ酸挿入物の有無により、及び微小管結合ドメインと呼ばれるタウのカルボキシル末端領域でのタンデムリピート（３回又は４回のいずれかで繰り返され得る）の追加又は欠失により、互いに異なっている。微小管結合ドメイン領域は、３１～３２個のアミノ酸残基の不完全な繰り返しから構成される。最長のタウタンパク質アイソフォーム（２Ｎ４Ｒ）は、長さが４４１個のアミノ酸であり、４つのリピート（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４）及び２つの挿入を含有する。最小のタウアイソフォームは、微小管結合ドメイン中に、３つのタンデムリピート（Ｒ１、Ｒ３及びＲ４）を伴う３５２個のアミノ酸残基を含有し、アミノ末端挿入を含有しない。ヒトタウタンパク質のアイソフォームに対応するアミノ酸配列は、配列番号１～６で提供される。

配列番号１は、最長のタウアイソフォームであるｈｔａｕ４０であり、２つのＮ末端挿入物及び４つの微小管結合（２Ｎ４Ｒ）ドメインを含有し、以下の通りである。
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKESPLQT PTEDGSEEPG 60
SETSDAKSTP TAEDVTAPLV DEGAPGKQAA AQPHTEIPEG TTAEEAGIGD TPSLEDEAAG 120
HVTQARMVSK SKDGTGSDDK KAKGADGKTK IATPRGAAPP GQKGQANATR IPAKTPPAPK 180
TPPSSGEPPK SGDRSGYSSP GSPGTPGSRS RTPSLPTPPT REPKKVAVVR TPPKSPSSAK 240
SRLQTAPVPM PDLKNVKSKI GSTENLKHQP GGGKVQIINK KLDLSNVQSK CGSKDNIKHV 300
PGGGSVQIVY KPVDLSKVTS KCGSLGNIHH KPGGGQVEVK SEKLDFKDRV QSKIGSLDNI 360
THVPGGGNKK IETHKLTFRE NAKAKTDHGA EIVYKSPVVS GDTSPRHLSN VSSTGSIDMV 420
DSPQLATLAD EVSASLAKQG L 441

配列番号２は、以下のように２つのＮ末端挿入物と３つの微小管結合ドメイン（２Ｎ３Ｒ）を含有する：
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKESPLQT PTEDGSEEPG 60
SETSDAKSTP TAEDVTAPLV DEGAPGKQAA AQPHTEIPEG TTAEEAGIGD TPSLEDEAAG 120
HVTQARMVSK SLDGTGSDDK KAKGADGKTK IATPRGAAPP GQKGQANATR IPAKTPPAPK 180
TPPSSGEPPK SGDRSGYSSP GSPGTPGSRS RTPSLPTPPT REPKKVAVVR TPPKSPSSAK 240
SRLQTAPVPM PDLKNVKSKI GSTENLKHQP GGGKVQIVYK PVDLSKVTSK CGSLGNIHHK 300
PGGGQVEVKS EKLDFKDRVQ SKIGSLDNIT HVPGGGNKKI ETHKLTFREN AKAKTDHGAE 360
IVYKSPVVSG DTSPAHLSNV SSTGSIDMVD SPQLATLADE VSASLAKQGL 410

配列番号３は、以下のように１つのＮ末端挿入物と４つの微小管結合ドメイン（１Ｎ４Ｒ）を含有する：
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKESPLQT PTGDGSEEPG 60
SETSDAKSTP TAEAEEAGIG DTPSLEDEAA GHVTQARMVS KSLDGTGSDD KKAKGADGKT 120
LIATPRGAAP PGQKGQANAT RIPAKTPPAP KTPPSSGEPP KSGDRSGYSS PGSPGTPGSR 180
SRTPSLPTPP TREPKKVAVV RTPPKSPSSA KSRLQTAPVP MPDLKNVKSK IGSTENLKHQ 240
PGGGKVQIIN KKLDLSNVQS KCGSLDNILH VPGGGSVQIV YKPVDLSKVT SKCGSLGNIH 300
HKPGGGQVEV KSEKLDFKDR VQSKIGSLDN ITHVPGGGNK KIETHKLTFR ENAKAKTDHG 360
AEIVYKSPVV SGDTSPRHLS NVSSTGSIDM VDSPQLATLA DEVSASLAKQ GL 412

配列番号４は、以下のようにＮ末端挿入物がなく、４つの微小管結合ドメイン（０Ｎ４Ｒ）を含有する：
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRLDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKAEEAGI GDTPSLEDEA 60
AGHVTQARMV SKSKDGTGSD DKKAKGADGK TKIATPRGAA PPGQKGQANA TRIPAKTPPA 120
PKTPPSSGEP PKSGDRSGYS SPGSPGTPGS RSRTPSLPTP PTREPKKVAV VATPPKSPSS 180
AKSRLQTAPV PMPDLKNVKS LIGSTENLKH QPGGGKVQII NKKLDLSNVQ SKCGSKDNIK 240
HVPGGGSVQI VYKPVDLSKV TSKCGSLGNI HHKPGGGQVE VKSEKLDFKD RVQSKIGSLD 300
NITHVPGGGN KKIETHKLTF RENAKALTDH GAEIVYKSPV VSGDTSPRHL SNVSSTGSID 360
MVDSPQLATL ADEVSASLAK QGL 383

配列番号５は、以下のように１つのＮ末端挿入物と３つの微小管結合ドメイン（１Ｎ３Ｒ）を含有する：
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKESPLQT PTEDGSEEPG 60
SETSDAKSTP TAEAEEAGIG DTPSLEDEAA GHVTQARMVS KSKDGTGSDD KKAKGADGKT 120
KIATPRGAAP PGQKGQANAT RIPAKTPPAP KTPPSSGEPP KSGDRSGYSS PGSPGTPGSR 180
SRTPSLPTPP TREPKKVAVV RTPPKSPSSA KSRLQTAPVP MPDLKNVKSK IGSTENLKHQ 240
PGGGKVQIVY KPVDLSKVTS KCGSLGNIHH KPGGGQVEVK SEKLDFKDRV QSKIGSLDNI 300
THVPGGGNKK IETHKLTFRE NAKAKTDHGA EIVYKSPVVS GDTSPRHLSN VSSTGSIDMV 360
DSPQLATLAD EVSASLAKQG L 381

配列番号６は、以下のようにＮ末端挿入物がなく、３つの微小管結合ドメイン（０Ｎ３Ｒ）を含有する：
MAEPRQEFEV MEDHAGTYGL GDRKDQGGYT MHQDQEGDTD AGLKAEEAGI GDTPSLEDEA 60
AGHVTQARMV SKSKDGTGSD DKKAKGADGK TKIATPRGAA PPGQKGQANA TRIPAKTPPA 120
PKTPPSSGEP PKSGDRSGYS SPGSPGTPGS RSRTPSLPTP PTREPKKVAV VRTPPKSPSS 180
AKSRLQTAPV PMPDLKNVKS KIGSTENLKH QPGGGKVQIV YKPVDLSKVT SKCGSLGNIH 240
HKPGGGQVEV KSEKLDFKDR VQSKIGSLDN ITHVPGGGNK KIGTHKLTFR ENAKAKTDHG 300
AEIVYKSPVV SGDTSPRHLS NVSSTGSIDM VDSPQLATLA DEVSASLAKQ GL 352

タウＣ３は極度に毒性が強く、核形成し、プレタングルであり、細胞内かつ優先的に分泌される、アスパルタート４２１にて終端するＣ末端切断型タウ断片である。タウＣ３は完全長タウ（ＦＬＴ）（２Ｎ４Ｒ）と比較すると低い存在量で存在するが、不釣合いに大きな病理学的効果を発揮することが示された。タウＣ３は、例えば病理学的タウ凝集の播種及び伝播に寄与し得る。

脳内でのタウの病理学的凝集及び病理学的タウの伝播は、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）など（まとめて「タウオパチー」と呼ばれる）を含む、２０以上の神経変性障害に関連する。

脳内でのタウＣ３の病理学的活性に関連する神経変性障害の診断及び処置に使用され得るキメラ抗体を提供することが、本発明の目的である。

脳内でのタウＣ３の病理学的活性に関連する神経変性障害の診断及び処置に使用され得るヒト化抗体を提供することもまた、本発明の目的である。

脳内でのタウＣ３の病理学的活性に関連する神経変性障害の診断及び処置に使用され得るヒト抗体を提供することが、本発明の追加の目的である。

タウＣ３のＣ末端に特異的なキメラ抗体を提供することが、本発明の更なる目的である。

タウＣ３のＣ末端に特異的であり、１×１０^－３ｓ^－１以下のオフレート（Ｋ_ｄ）を有するキメラ抗体を提供することが、本発明の更なる目的である。

タウＣ３のＣ末端に特異的なヒト化抗体を提供することもまた、本発明の目的である。

タウＣ３のＣ末端に特異的であり、１×１０^－３ｓ^－１以下のオフレート（Ｋ_ｄ）を有するヒト化抗体を提供することもまた、本発明の目的である。

上記目的及び他の目的の助長に関して、本発明は、タウＣ３のＣ末端に特異的なキメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体（「抗タウＣ３抗体」）に関する。抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０～１×１０^－１２のタウＣ３に対する結合親和性（ＫＤ）、１×１０^－４～１×１０^－８Ｍの完全長タウ（「ＦＬＴ」）（配列番号１）に対する結合親和性（ＫＤ）を有する。例えば抗タウＣ３抗体は、約５×１０^－１２Ｍ～約１．２×１０^－１０Ｍ、約１×１０^－１１Ｍ～約１×１０^－１０Ｍ、約１×１０^－１１Ｍ～約９×１０^－１１Ｍ、約１×１０^－１１Ｍ～約８×１０^－１１Ｍ、約１×１０^－１１Ｍ～約７×１０^－１１Ｍ、約１×１０^－１１Ｍ～約６×１０^－１１Ｍ、約１×１０^－１１Ｍ～約５×１０^－１１Ｍ、又は約１×１０^－１１Ｍ～約４×１０^－１１ＭのタウＣ３に対する結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭのＦＬＴに対する結合親和性（ＫＤ）を有してもよい。好ましい実施形態において、抗体は、約４０℃～約６７℃の温度に１０分間供された後、その結合能力を保持し、３７℃で２１日間、血清（例えば、マウス）におけるインキュベーション後のその結合能力もまた保持する。抗タウＣ３抗体の高い能力により、抗体はＦＬＴの標準的な生理学的機能を損なうことなくタウＣ３を標的とすることが可能である。いくつかの実施形態において、抗体の特異性により、タウの最も有毒な種のみを標的とすることが可能になる。これにより、例えば、特異的ではなく、タウの異なる種間を区別しない抗体と比較すると、治療有効投与量を潜在的に減少させることが可能となり得る。抗タウＣ３抗体、及びそれらの抗原結合断片は、例えば脳内のタウＣ３の病理学的活性に関連する、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）などを含む神経変性障害の診断及び処置において、使用され得る。抗タウＣ３抗体は、５０ｍｇ／ｍＬ以上（例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１８０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１７０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１４０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ～約１３０ｍｇ／ｍｌ、又は約６０ｍｇ／ｍＬ～約１３０ｍｇ／ｍＬ）の水溶性を有してもよい。

本発明は、マウスの抗タウＣ３抗体よりも、タウＣ３についてより高い結合親和性（ＫＤ）を有するキメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体に更に関する。いくつかの実施形態において、キメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体は、マウスの抗タウＣ３抗体のタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）よりも、少なくとも２倍、３倍、又は４倍高いタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態において、マウスの抗タウＣ３抗体は、約４．９×１０^－１１ＭのタウＣ３に関する結合親和性（ＫＤ）を有し、キメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体は、約１×１０^－１１Ｍ～約２．５×１０^－１１ＭのタウＣ３に関する結合親和性（ＫＤ）を有する。キメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体は、例えば約１．１×１０^－１１Ｍ、約１．３×１０^－１１Ｍ、約１．５×１０^－１１Ｍ、約１．７×１０^－１１Ｍ、約１．９×１０^－１１Ｍ、約２．１×１０^－１１Ｍ、又は約２．３×１０^－１１ＭのタウＣ３に関する結合親和性（ＫＤ）を有してもよい。抗タウＣ３抗体は、５０ｍｇ／ｍＬ以上（例えば、約５０ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１８０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１７０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１４０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ～約１３０ｍｇ／ｍｌ、又は約１００ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１８０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１７０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約１４０ｍｇ／ｍｌ、又は約１００ｍｇ／ｍｌ～約１３０ｍｇ／ｍｌ）の水溶解度を有してもよい。

本発明は、１×１０^－３ｓ^－１以下のオフレート（Ｋ_ｄ）を伴う１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭのＦＬＴについての結合親和性（ＫＤ）を有する、キメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体にも関する。

抗タウＣ３抗体、又はそれらの抗原結合断片は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）により表されるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）により表されるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）により表されるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）により表されるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）により表されるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴ（配列番号１）との検出可能な結合を有さない。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体、又はそれらの抗原結合断片は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）と相同であるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）と相同であるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）と相同であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）と相同であるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）と相同であるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）と相同であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴ（配列番号１）との検出可能な結合を有さない。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体、又はそれらの抗原結合断片は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）と同一であるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）と同一であるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）と同一であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）と同一であるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）と同一であるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）と同一であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴ（配列番号１）との検出可能な結合を有さない。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体、又はそれらの抗原結合断片は、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）のＣＤＲ１、配列ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）のＣＤＲ２、及び配列ＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）のＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）のＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）のＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８Ｍである配列番号１についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又は配列番号１との検出可能な結合を有さず、アルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）を処置するために使用される。抗体はまた、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、又は前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）といったタウオパチーを診断するために使用されてもよい。

一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗体であり、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３ｓ^－１以下（例えば、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴとの検出可能な結合を有さない、抗タウＣ３抗体に関する。したがって、該ヒト化抗体は、（ａ）配列番号７のＣＤＲ１、配列番号８のＣＤＲ２、及び配列番号９のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列番号１０のＣＤＲ１、配列番号１１のＣＤＲ２、及び配列番号１２のＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでよく、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３ｓ^－１以下（例えば、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴとの検出可能な結合を有さず、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）などのタウオパチーを処置するために使用される。

一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７と同一であるＣＤＲ１、配列番号８と同一であるＣＤＲ２、及び配列番号９と同一であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列番号７と同一であるＣＤＲ１、配列番号１１と同一であるＣＤＲ２、及び配列番号１２と同一であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗体であり、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３ｓ^－１以下（例えば、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴとの検出可能な結合を有さない抗タウＣ３抗体に関する。したがって、該ヒト化抗体は、（ａ）配列番号７のＣＤＲ１、配列番号８のＣＤＲ２、及び配列番号９のＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列番号１０のＣＤＲ１、配列番号１１のＣＤＲ２、及び配列番号１２のＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３ｓ^－１以下（例えば、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴとの検出可能な結合を有さず、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）などのタウオパチーを処置するために使用される。

一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７と相同であるＣＤＲ１、配列番号８と相同であるＣＤＲ２、及び配列番号９と相同であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列番号と相同であるＣＤＲ１、配列番号１１と相同であるＣＤＲ２、及び配列番号１２と相同であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗体であり、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３ｓ^－１以下（例えば、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴとの検出可能な結合を有さない、抗タウＣ３抗体に関する。したがって、該ヒト化抗体は、（ａ）配列番号７のＣＤＲ１、配列番号８のＣＤＲ２、及び配列番号９のＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列番号１０のＣＤＲ１、配列番号１１のＣＤＲ２、及び配列番号１２のＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含んでよく、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３ｓ^－１以下（例えば、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴとの検出可能な結合を有さず、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）などのタウオパチーを処置するために使用される。

ヒト化抗体は、例えば、
（ａ）配列ＬＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＳ－ＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＳＭＡＹＬＱＭＤＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＶＧＧＧＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）又は配列番号１３と相同である配列を含む、可変重鎖、及び
（ｂ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＫＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１４）又は配列番号１４に相同である配列、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１５）又は配列番号１５に相同である配列、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１６）又は配列番号１６に相同である配列、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＧＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＧＡＦＫＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１７）又は配列番号１７に相同である配列、並びに
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＥＩＳＶＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＡＩＫＲＬＩＹＧＡＦＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＹＶＲＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８）又は配列番号１８に相同である配列、からなる群から選択される配列を含む可変軽鎖、を含んでよく、
１×１０^－１０～９×１０^－１２のタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭのＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴとの検出可能な結合を有さない。

特定の実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１３の可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド及び配列番号１４、配列番号１５、配列番号１７、又は配列番号１８の可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、ヒト化抗体は、（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチドであって、配列番号１３と少なくとも７０％配列同一性を有する可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドであって配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号：１８と少なくとも７０％配列同一性を有する可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１３と少なくとも７５％配列同一性を有するＶ _Ｈ 鎖ポリペプチド、並びに配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも７５％配列同一性を有するＶ _Ｌ 鎖ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１３と少なくとも８０％配列同一性を有するＶ _Ｈ 鎖ポリペプチド、並びに配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも８０％配列同一性を有するＶ _Ｌ 鎖ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１３と少なくとも８５％配列同一性を有するＶ _Ｈ 鎖ポリペプチド、並びに配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも８５％配列同一性を有するＶ _Ｌ 鎖ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１３と少なくとも９０％配列同一性を有するＶ _Ｈ 鎖ポリペプチド、並びに配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも９０％配列同一性を有するＶ _Ｌ 鎖ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号１３と少なくとも９５％配列同一性を有するＶ _Ｈ 鎖ポリペプチド、並びに配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも９５％配列同一性を有するＶ _Ｌ 鎖ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体は、配列番号１３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、及び配列番号１８からなる群から選択される配列を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体は、（ｉ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチドであって、ＣＤＲ１は配列番号７のポリペプチドであり、ＣＤＲ２は配列番号８のポリペプチドであり、ＣＤＲ３は配列番号９のポリペプチドである、可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｉｉ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドであって、ＣＤＲ１は配列番号１０のポリペプチドであり、ＣＤＲ２は配列番号１１のポリペプチドであり、ＣＤＲ３は配列番号１２のポリペプチドである、可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体は、（ｉ）可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、及び（ｉｉ）可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含み、可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチドは配列番号１３のポリペプチドであり、可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドは配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１８のポリペプチドである。

抗タウＣ３抗体はまた、（ａ）配列番号７により表される又は配列番号７と相同である配列ＣＤＲ１、配列番号８により表される又は配列番号８と相同である配列ＣＤＲ２、及び配列番号９により表される又は配列番号９と相同である配列ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列番号１０により表される又は配列番号１０と相同である配列ＣＤＲ１、配列番号１１により表される又は配列番号１１と相同である配列ＣＤＲ２、及び配列番号１２により表される又は配列番号１２と相同である配列ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０^－３－ｓ^－１以下（例えば、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）であるオフレート（Ｋ_ｄ）、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴ（配列番号１）との検出可能な結合を有さない、キメラ抗体であり得る。

本発明はまた、（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３ｓ^－１以下（例えば、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴ（配列番号１）との検出可能な結合を有さない、抗体の抗原結合断片に関する。抗体の抗原結合断片は、例えばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、又はｓｃＦｖ断片であり得る。

本発明はまた、（ａ）配列番号７と相同であるＣＤＲ１、配列番号８と相同であるＣＤＲ２、及び配列番号９と相同であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列番号１０と相同であるＣＤＲ１、配列番号１１と相同であるＣＤＲ２、及び配列番号１２と相同であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３ｓ^－１以下（例えば、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴ（配列番号１）との検出可能な結合を有さない、抗体の抗原結合断片に関する。抗体の抗原結合断片は、例えばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、又はｓｃＦｖ断片であり得る。

本発明はまた、（ａ）配列番号７と同一であるＣＤＲ１、配列番号８と同一であるＣＤＲ２、及び配列番号９と同一であるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列番号１０と同一であるＣＤＲ１、配列番号１１と同一であるＣＤＲ２、及び配列番号１２と同一であるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－３ｓ^－１以下（例えば、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）であるオフレート（Ｋ_ｄ）、１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴ（配列番号１）との検出可能な結合を有さない、抗体の抗原結合断片に関する。抗体の抗原結合断片は、例えばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、又はｓｃＦｖ断片であり得る。

本発明はまた、病理学的タウの取込みをブロッキングする方法、病理学的タウ播種活性をブロッキングする方法、病理学的タウ凝集を阻害する方法、及びあるニューロンから別のニューロンへ、又は脳のある一部分から別の部分への病理学的タウ、タウ原線維及びタウ凝集の伝播をブロッキングする方法に関する。この方法は、有効量の抗タウＣ３抗体を、その必要がある対象に投与することを含む。これらの実施形態の一部において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

投与されると、抗タウＣ３抗体は、例えばタウＣ３播種活性をブロッキング又は低下させること、例えばタウＣ３の細胞内取込みを本質的にブロッキング又は低下させることにより、あるニューロンから別のニューロンへ、又は脳のある一部分から別の部分への病理学的タウの伝播をブロック又は低下させることができる。この機構は細胞外で生じ、ニューロン内部に存在するであろう抗タウＣ３抗体を必要としない。抗タウＣ３抗体は、あるニューロンから別のニューロンへ、及び脳のある一部分から別の部分へのタウＣ３タウ、タウＣ３を含む原線維及びタウＣ３を含む凝集物の伝播をブロッキング又は低下させることが可能である。凝集物は、完全長タウ（例えば、２Ｎ４Ｒ）、タウオリゴマー及び／又は翻訳後に修飾されたタウ（切断又は高リン酸化された）の異種起源の集団を含み得る。タウＣ３及びタウＣ３を含む原線維の細胞内取込みをブロッキングするのに加えて、抗タウＣ３抗体は細胞（例えばニューロン）内部の病理学的タウ凝集をブロッキング又は低下させることもできる。抗体は完全長タウ（例えば、２Ｎ４Ｒ）について実質的に親和性を有さないため、抗体は完全長タウの標準的な非病理学的機能に干渉することは全くない。いくつかの実施形態において、抗タウＣ３抗体は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

抗タウＣ３抗体はまた、細胞外タウＣ３及び細胞から放出されるタウＣ３を含む凝集物を結合することにより、タウＣ３を含む原線維及び凝集物の伝播を低下させることができる。これにより、タウＣ３及びタウＣ３を含む凝集物の、近接する細胞への侵入を防ぎ、あるニューロンから別のニューロンへ、及び脳のある一部分から別の部分へのタウ凝集物の伝播を低下させる。したがって、抗タウＣ３抗体は、タウＣ３又はタウＣ３を含む凝集物の、細胞（例えばニューロン）への侵入を防ぐ手段として機能し得る。いくつかの実施形態において、抗タウＣ３抗体は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

抗タウＣ３抗体はまた、タウ凝集のニューロン間の伝播を遅延及び／又は減少させるために使用され得る。例えば、抗タウＣ３抗体はタウＣ３を含むタンパク質原線維の脱凝集を促進させ、単量体タウＣ３がタウＣ３を含む原線維及び／又は凝集物へと細胞内で変換するのをブロッキングし、タウＣ３を含む原線維及び／又はタウＣ３を含む凝集物の細胞内分解を促進させ得る。タウＣ３に加えて、原線維及び凝集物は、完全長タウ（例えば、２Ｎ４Ｒ）、タウオリゴマー及び／又は翻訳後に修飾されたタウ（切断又は高リン酸化された）の異種起源の集団を含み得る。いくつかの実施形態において、抗タウＣ３抗体は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

抗タウＣ３抗体はタウオパチーに罹患している対象の脳萎縮を減少させることができる。いくつかの実施形態において、抗タウＣ３抗体は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

抗タウＣ３抗体は、完全長タウ（例えば、２Ｎ４Ｒ）、タウオリゴマー及び／又は翻訳後に修飾されたタウ（切断又は高リン酸化された）の異種起源の集団を含む不溶性の凝集物の形成を阻害させ得る。例えばこれは、脳内における病理学的タウ（例えば、タウＣ３、タウＣ３を含む原線維及びタウＣ３を含む凝集物）の量を減少させることである。いくつかの実施形態において、抗タウＣ３抗体は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体は、完全長タウ（例えば、２Ｎ４Ｒ）の病理学的凝集を阻害する。実施形態のいくつかにおいて、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体の投与により、タウオパチーの発症から対象を免疫化し得る。実施形態のいくつかにおいて、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

抗タウＣ３抗体の投与は、対象においてタウオパチーの１つ以上の症状を低減させ、及び／又は対象におけるタウオパチーの進行を低減させ得る。例えば、特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体の投与は、タウオパチーに罹患している対象における認知機能及び／又は運動／感覚運動機能を向上させ得る。いくつかの実施形態において、抗タウＣ３抗体は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明の抗タウＣ３抗体は、ヒト対象においてタウオパチーを処置するために使用され得る。例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）を処置するための抗タウＣ３抗体の投与は、特に考慮される。いくつかの実施形態において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

特定の実施形態において、本発明は治療有効量の抗タウＣ３抗体を対象に投与することを含む、対象の脳内でのタウ凝集の伝播を減少する方法であって、この抗体はタウＣ３に結合し、完全長タウには結合しない、方法に関する。いくつかの実施形態において、抗タウＣ３抗体は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明は、対象に対するタウＣ３播種活性をブロックするのに十分な治療有効量の抗タウＣ３抗体を投与することを含む、対象においてタウオパチーを処置する方法であって、この抗タウＣ３抗体はヒト化抗体である、方法に更に関する。いくつかの実施形態において、ヒト化抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明はまた、対象に対し、ニューロンによりタウＣ３の再取込みをブロッキングするために十分な治療有効量の抗タウＣ３抗体を投与することを含む、対象においてタウオパチーを処置する方法であって、この抗タウＣ３抗体はキメラ抗体である、方法に関する。いくつかの実施形態において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明はまた、対象に対し、治療有効量の抗タウＣ３抗体を投与することを含む、対象においてアルツハイマー病を処置する方法であって、この抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、１×１０^－３ｓ^－１以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）を有し、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴについての結合親和性（ＫＤ）を有する、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、方法に関する。これらの実施形態の一部において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明はまた、対象に対し、治療有効量の抗タウＣ３抗体を投与することを含む、対象において進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）を処置する方法であって、この抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、１×１０^－３ｓ^－１以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）を有し、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、方法に関する。これらの実施形態の一部において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明はまた、対象に対し、治療有効量の抗タウＣ３抗体を投与することを含む、対象において前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を処置する方法であって、この抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、１×１０^－３ｓ^－１以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）を有し、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、方法に関する。これらの実施形態の一部において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明はまた、対象に対し、治療有効量の抗タウＣ３抗体を投与することを含む、対象において外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を処置する方法であって、この抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、１×１０^－３ｓ^－１以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）を有し、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、方法に関する。これらの実施形態の一部において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明はまた、対象に対し、治療有効量の抗タウＣ３抗体を投与することを含む、対象においてピック病（ＰｉＤ）を処置する方法であって、この抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、１×１０^－３ｓ^－１以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）を有し、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、方法に関する。これらの実施形態の一部において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明はまた、対象に対し、治療有効量の抗タウＣ３抗体を投与することを含む、対象において大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）を処置する方法であって、この抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、１×１０^－３ｓ^－１以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）を有し、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、方法に関する。これらの実施形態の一部において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明はまた、対象に対し、治療有効量の抗タウＣ３抗体を投与することを含む、対象において前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）を処置する方法であって、この抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、１×１０^－３ｓ^－１以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）を有し、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、方法に関する。これらの実施形態の一部において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。

本発明はまた、病理学的タウの細胞内取込みをブロッキングするための治療薬及び組成物、タウ播種活性をブロッキングするための治療薬及び組成物、タウ凝集をブロッキングするための治療薬及び組成物、並びにタウ、タウ原線維、タウ凝集物、及び前述のいずれかの断片の、脳のある一部分から別の部分までの病理学的伝播をブロッキングするための治療薬及び組成物であって、この病理学的伝播がタウＣ３により誘発又は調節される、治療薬及び組成物に関する。治療薬及び組成物は、上記及び以下に記載の抗タウＣ３抗体を含む。抗タウＣ３抗体に加えて、本発明の組成物は１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含み得る。治療薬又は組成物はまた、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）などのタウオパチーからの受動免疫及びタウオパチーの処置のために使用され得る。特定の実施形態において、組成物はタウＣ３産生を阻止（例えばカスパーゼ阻害剤）、又は除去を促進（例えば、小分子の１つ以上のタウＣ３凝集阻害剤）する１つ以上の薬剤を更に含み得る。

本発明は、抗タウＣ３抗体及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物であって、この抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、１×１０^－３ｓ^－１以下であるオフレート（Ｋ_ｄ）を有し、及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴ（配列番号１）についての結合親和性（ＫＤ）を有する、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、組成物に更に関する。これらの実施形態の一部において、抗タウＣ３は（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む。組成物は例えば、液体組成物であり得る。組成物は、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）などを含む、タウオパチーを処置するための有効量の抗タウＣ３抗体を含む。特定の好ましい実施形態において、組成物は安定している（すなわち、組成物中少なくとも９０％の抗タウＣ３抗体は、この組成物の３７℃で２１日間の保存後にそれらの結合能を保持している）。

ＭｏＴａｕ０１カッパ軽鎖可変領域のタンパク質及びＤＮＡ配列。

ＭｏＴａｕ０１カッパ重鎖可変領域のタンパク質及びＤＮＡ配列。

ｐＨｕＫ ＬＩＣベクター。

ｐＨｕＧ４ ＬＩＣベクター。

キメラＭｏＴａｕ０１ ＶＫのタンパク質及びＤＮＡ配列。

キメラＭｏＴａｕ０１ ＶＨのタンパク質及びＤＮＡ配列。

結合ＥＬＩＳＡを使用した、タウＣ３及びＦＬタウに対するキメラＴａｕ０１の結合試験。

Ｏｃｔｅｔを使用した、タウＣ３及びＦＬタウに対するマウスＴａｕ０１抗体及びキメラＴａｕ０１抗体の結合試験。

Ｔａｕ０１ ＨＡのタンパク質及びＤＮＡ配列。

Ｔａｕ０１ ＨＢのタンパク質及びＤＮＡ配列。

Ｔａｕ０１ ＨＣのタンパク質及びＤＮＡ配列。

Ｔａｕ０１ ＫＡのタンパク質及びＤＮＡ配列。

Ｔａｕ０１ ＫＢのタンパク質及びＤＮＡ配列。

Ｔａｕ０１ ＫＣのタンパク質及びＤＮＡ配列。

タウＣ３に対するヒト化Ｔａｕ０１及びキメラＴａｕ０１の結合：Ａバージョン及びＢバージョン。

タウＣ３に対するヒト化Ｔａｕ０１及びキメラＴａｕ０１の結合ＥＬＩＳＡ：ＨＡ～ＨＬバリアント。

タウＣ３に対するヒト化Ｔａｕ０１抗体のＯｃｔｅｔスクリーニング：ＫＡ～ＫＣを有するＨＢ、ＨＣ及びＨＦ。

タウＣ３に対するヒト化Ｔａｕ０１抗体の結合ＥＬＩＳＡ：ＫＡ～ＫＪバリアント。

タウＣ３に対するヒト化Ｔａｕ０１抗体のＯｃｔｅｔスクリーニング：ＫＡ～ＫＪバリアントを有するＨＢ。

タウＣ３に対するヒト化Ｔａｕ０１抗体の第２ラウンドの結合ＥＬＩＳＡ：ＨＭ、ＨＮ及びＨＯバリアント。

タウＣ３に対するヒト化Ｔａｕ０１抗体の第２ラウンドのＯｃｔｅｔスクリーニング：ＨＭ、ＨＮ及びＨＯバリアント。

タウＣ３に対する、ヒト化抗体を含有するＨＣ及びＨＭの結合ＥＬＩＳＡ。

タウＣ３に対するヒト化Ｔａｕ０１抗体の第２ラウンドのＯｃｔｅｔスクリーニング：ＨＭバリアント。

タウＣ３及びＦＬタウに対するヒト化Ｔａｕ０１抗体の第２ラウンドのＯｃｔｅｔスクリーニング：リードバリアント。

Ｂｉａｃｏｒｅを使用したタウＣ３を有するリードヒト化候補のオフレートランキング。

ＢｉａｃｏｒｅによるＦＬタウに対する結合試験。

キメラ候補抗体及びヒト化候補抗体の熱安定性。

精製されたＭｏＴａｕ０１ ＨｕＧ４Ｋ及びＴａｕ０１ ＨＣＫＢ ＨｕＧ４Ｋ抗体のＳＥＣ－ＭＡＬＳ凝集分析。

精製されたＴａｕ０１ ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ、ＨＭＫＥ、及びＨＭＫＭ ＨｕＧ４Ｋ抗体のＤＬＳ分析。

精製されたキメラ候補抗体及びヒト化候補抗体の質量分析。

ヒト化候補抗体のＢｉａｃｏｒｅ動態。

ヒト化候補抗体のサーマルシフト分析。

ヒト化候補抗体の非特異的なタンパク質－タンパク質相互作用（相互作用クロマトグラフィー）。

溶解度について評価された精製されたヒト化抗体候補。

円偏光二色性によるヒト化候補抗体の凍結／解凍及び熱応力分析。

ヒト化候補の等電点を測定するキャピラリー等電点電気泳動。

ヒト化候補抗体の血清安定性評価。

定義
本明細書で使用される「抗体」は、無変化分子（すなわち、完全長抗体（ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ））及びそれらの断片、並びに例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’_２及びＦ_Ｖ断片を含まない、又はｐＩＩＩ又はｐＶＩＩＩ又は他の表面タンパク質の糸状ファージの表面上、若しくは抗原に結合可能である細菌の表面上に発現する、それらの合成誘導体及び生物学的誘導体を含有することを意味する。Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’_２及びＦ_Ｖ断片は、無変性抗体のＦ_Ｃ断片を欠損しており、循環により更に迅速に除去する。加えてこれは、抗体の非特異的組織結合をほとんど含まない。抗体はモノクローナル抗体であり得る。組換え抗体は用語「抗体」によって包含される。用語「抗体」は、キメラ抗体及びヒト化抗体を包含する。抗体はまた、完全ヒト抗体（例えば、遺伝子導入マウス又はファージ由来）であってもよい。

本明細書で使用される用語「ヒト化抗体」は、マウス又は他の非ヒト抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）がヒト抗体のフレームワーク上へと移植される抗体を指す。ヒト抗体フレームワークは、ＣＤＲを除外する完全ヒト抗体を意味する。

本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、完全配列がヒト遺伝子レパートリー（例えば、遺伝子導入マウス又はファージ）から誘導される抗体を指す。

本明細書に使用される用語「相同である」は、配列が、相同である配列に少なくとも８０％同一であり、１つ以上の相同な配列を含む重合体のペプチド（例えば抗体）が、相同である１つ以上の配列を含む重合体のペプチドと実質的に同じ生物学的活性を有することを意味する。例えば、（ａ）配列ＧＦＴＦＮＴＹＡ（配列番号７）により表されるＣＤＲ１、ＩＲＳＫＳＮＮＹＡＴ（配列番号８）により表されるＣＤＲ２、及びＶＧＧＧＤＦ（配列番号９）により表されるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、並びに（ｂ）配列ＱＥＩＳＶＹ（配列番号１０）により表されるＣＤＲ１、配列ＧＡＦ（配列番号１１）により表されるＣＤＲ２、及び配列ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ（配列番号１２）により表されるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗体と、１つ以上のＣＤＲ配列が１つ以上の相同な配列により置換される抗体との両方が、１×１０^－１０～１×１０^－１２であるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）及び１×１０^－４～１×１０^－８ＭであるＦＬＴについての結合親和性（ＫＤ）を有する、又はＦＬＴとの検出可能な結合を有さない。定義により、相同抗体は実質的に同様の三次元形状を有する。

本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」は「相補性決定領域」を意味する。ＣＤＲは高頻度可変領域とも呼ばれてもよい。特段指定しない限り、本明細書に開示されるＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴナンバリングシステムにより定義される。

本明細書で使用される場合、ＣＤＲ配列を参照した「配列番号により表される」は、ＣＤＲの配列が列挙される配列番号と同一又はこれに相同であることを意味する。

本明細書で使用される用語「キメラ抗体」は、マウス抗体又はラット抗体の可変領域の全体が、ヒト定常領域に従って発現される抗体を指す。

本明細書で使用される用語「マウスの抗タウＣ３抗体」は、Ｎｉｃｈｏｌｌｓ，Ｓ．Ｂ．，Ｓ．Ｌ．ＤｅＶｏｓ，Ｃ．Ｃｏｍｍｉｎｓ，Ｃ．Ｎｏｂｕｈａｒａ，Ｒ．Ｅ．Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｄ．Ｌ．Ｃｏｒｊｕｃ，Ｅ．Ｍａｕｒｙ，ｅｔ ａｌ．２０１７．「タウＣ３抗体の特徴及びタウ伝播をブロックするその能力の証明（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＴａｕＣ３ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｏ ｂｌｏｃｋ ｔａｕ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ）」 ＰＬｏＳ ＯＮＥ １２（５）：ｅ０１７７９１４．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１７７９１４に特徴付けられる「抗タウ３抗体」を指す。

本明細書で使用される場合、「軽鎖」は、抗体の小さなポリペプチドサブユニットである。典型的な抗体は２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む。

本明細書で使用される場合、「重鎖」は、抗体の大きなポリペプチドサブユニットである。抗体の重鎖は、少なくとも１つの可変ドメイン及び少なくとも１つの定常ドメインと共に、一連の免疫グロブリンドメインを含有する。

本明細書で使用される用語「親和性」は、抗体分子がそのエピトープに結合する強度を指す。親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ動態を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される。

本明細書で使用される用語「ＫＤ」は、平衡解離定数（ＫＤ＝Ｋｄ／Ｋａ、この場合Ｋｄは解離速度定数であり、Ｋａは会合速度定数である）を指す。

本明細書で使用される用語「免疫枯渇」は、抗体の使用によるタンパク質の除去を指す。用語「免疫枯渇」は、用語「免疫沈降」と互換的に使用される。この用語は、（免疫枯渇を引き起こす）試料からの対象の抗原を沈降又は免疫沈降（ＩＰ）させる抗体の能力を指す。

本明細書で使用される場合、用語「治療有効量」及び「有効量」は、治療薬（例えば、抗タウＣ３抗体）又は対象において測定可能な臨床効果を引き起こす組成物の量を意味する。治療薬の有効量は、投与される化合物、投与経路、処置されている症状のステータス、並びにいくつかの考慮の中でもとりわけ同様の対象及び投与状態の考慮を含む、この症例を取り巻く状況によって決定される。「有効量」は、本明細書に説明される抗タウＣ３抗体の約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇを一般には含む。特定の実施形態において、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇの量が使用される。

用語「病理学的タウ」は、タウＣ３、タウＣ３を含む原線維、及びタウＣ３を含む凝集物（例えば、完全長タウ、タウオリゴマー及び／又は翻訳後に修飾されたタウ（切断又はリン酸化された）を含む異種起源の集団）を包含する。タウＣ３に加えて、病理学的タウは、完全長タウ（例えば、２Ｎ４Ｒ）、タウオリゴマー及び／又は翻訳後に修飾されたタウ（切断又は高リン酸化された）の異種起源の集団を含んでもよい。

用語「タウＣ３」は、ｈｔａｕ４０（配列番号１）のアスパルタート４２１にて終わるＣ末端切断型タウ断片を意味する。

本明細書で使用される場合、「ＦＬＴ」は完全長タウ（例えば、ｈｔａｕ４０（配列番号１））に対する略語である。

用語「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」又は「処置」は、タウオパチーに関連する少なくとも１つの症状又は症状の徴候における減弱、回復又は好転を含む。

用語「播種」は、完全長タウ（例えば２Ｎ４Ｒ）、タウオリゴマー及び／又は翻訳後に修飾されたタウ（切断又は高リン酸化された）の異種起源の集団の一部として、タウＣ３、タウＣ３を含む原線維、及び／又はタウＣ３を含む凝集物の細胞内凝集に先行する細胞外活性を指す。

用語「凝集」は、タウＣ３及び／又はタウＣ３を含む原線維、及び／又はタウＣ３を含む凝集物が細胞により取り込まれる後に細胞内で起こる活性を指す。

「ＥｘｐｉＣＨＯ」は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ高密度／無血清）細胞の略語である。

「Ａ」はアデニンの略語である。

「ｂｐ」は塩基対の略語である。

「℃」は摂氏の略語である。

「Ｃ」はシトシンの略語である。

「ＭＥＭ」は、基礎培地（Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）の略語である。

「ＤＮＡ」は、デオキシリボ核酸（Ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）の略語である。

「ＥＬＩＳＡ」は、酵素結合免疫吸着検定法（Ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏ－ａｄｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）の略語である。

「ＥＣ５０」は、５０％効果の反応を提供する抗体の濃度の略語である。

「ＥＣ８０」は、８０％の最大反応を提供する抗体の濃度の略語である。

「ＥＣＤ」は細胞外ドメインの略語である。

「ｇ」はグラムの略語である。

「Ｇ」はグアニンの略語である。

「ＨＲＰ」は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）の略語である。

「ＩｇＧ」は、免疫グロブリン－Ｇの略語である。

「Ｋ」はＧ又はＴの略語である（ＩＵＰＡＣ慣例）。

「ＬＩＣ」は、リガーゼ非依存性クローニング（Ｌｉｇａｓｅ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｌｏｎｉｎｇ）の略語である。

「ｍｉｎ」は分の略語である。

「Ｍ」はＡ又はＣの略語である（ＩＵＰＡＣ慣例）。

「ｎｍ」はナノメートルの略語である。

「ＯＤ」は吸光度の略語である。

「ＰＢＳ」はリン酸緩衝生理食塩水の略語である。

「ＰＣＲ」はポリメラーゼ連鎖反応の略語である。

「Ｒ」はＡ又はＧの略語である（ＩＵＰＡＣ慣例）。

「ＲＴ」は室温の略語である。

「ｓ」は秒の略語である。

「Ｓ」はＣ又はＧの略語である（ＩＵＰＡＣ慣例）。

「Ｔ」はチミンの略語である。

「ＴＢＳ」はトリス緩衝生理食塩水（Ｔｒｉｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ）の略語である。

「ＵＶ」は紫外線の略語である。

「Ｖ」はＡ又はＣ又はＧの略語である（ＩＵＰＡＣ慣例）。

「ＶＣＩ」は、バーニア、カノニカル及びインタフェース残基の略語である。

「ＶＨ」は、免疫グロブリン重鎖可変領域の略語である。

「ＶＫ」は、免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域の略語である。

「Ｗ」はＡ又はＴの略語である（ＩＵＰＡＣ慣例）。

「Ｙ」はＣ又はＴの略語である（ＩＵＰＡＣ慣例）。

タウＣ３は、タウ凝集及び播種活性の原因となる高分子量の種に存在する、多くの種のうちの１つである。タウＣ３に加えて、タウ凝集物は、完全長（正常タウ）、タウオリゴマー及び／又は翻訳後に修飾されたタウ（切断又は高リン酸化された）の異種起源の集団を含み得る。孤発性ＡＤ以外の他の神経変性疾患もまた、タウＣ３のレベルが上昇したことを示す。

タウＣ３は神経毒性があり、微小管の機能不全を引き起こし得る。タウＣ３はまた、タウ原線維が脳の一部分から別の部分に伝播する原因であり得る。

抗タウＣ３抗体
本発明の抗タウＣ３抗体は、凝集した、病理学的タウＣ３の細胞外形態を認識する。本発明の抗タウＣ３抗体は、例えばキメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体、又はヒト抗タウＣ３抗体であり得る。

抗タウＣ３抗体は、組換えタウＣ３タンパク質に対して検査される場合、標的カスパーゼ切断タウタンパク質に対して非常に強固な結合特異性を示す。特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体はバイオセンサアッセイにおける播種をブロッキングし、細胞内タウ凝集を誘発する原因となる種のニューロンへの侵入をブロッキングするのに効果的である（すなわち、タウＣ３及びタウＣ３原線維の細胞への侵入をブロッキングするのに効果的である）。

抗タウＣ３抗体は一般には、タウＣ３にナノモル以下の特異性を有し、完全長タウ（２Ｎ４Ｒ）よりもタウＣ３にとって少なくとも１００倍更に特異的（例えば、完全長タウよりもタウＣ３に１００倍以上特異的である）である。例えば、抗タウＣ３抗体は、完全長タウ（２Ｎ４Ｒ）よりもタウＣ３にとって、１５０～５０００倍更に特異的であり得る。特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体は、完全長タウ（２Ｎ４Ｒ）よりもタウＣ３にとって、５００～２５００倍更に特異的である。特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体は、完全長タウ（２Ｎ４Ｒ）よりもタウＣ３にとって、７５０～２０００倍更に特異的である。特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体は、完全長タウ（２Ｎ４Ｒ）よりもタウＣ３にとって、１０００～１５００倍更に特異的である。これらの実施形態のすべてにおいて、抗タウＣ３抗体は、完全長タウ（２Ｎ４Ｒ）との検出可能な結合を有さない可能性がある。

特定の実施形態において、本発明の抗体は、マウスの抗タウＣ３抗体よりも、タウＣ３についてのより高い結合親和性（ＫＤ）を有するキメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体である。いくつかの実施形態において、キメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体は、マウスの抗タウＣ３抗体のタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）よりも、少なくとも２倍、３倍、又は４倍高いタウＣ３に関する結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態において、マウスの抗タウＣ３抗体は、約４．９×１０^－１１ＭのタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、キメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体は、約１×１０^－１１Ｍ～約２．５×１０^－１１ＭのタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有する。本発明のキメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体は、例えば、約１．１×１０^－１１Ｍ、約１．３×１０^－１１Ｍ、約１．５×１０^－１１Ｍ、約１．７×１０^－１１Ｍ、約１．９×１０^－１１Ｍ、約２．１×１０^－１１Ｍ又は約２．３×１０^－１１ＭのタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し得る。いくつかの実施形態において、マウスの抗タウＣ３抗体は、約３．９×１０^－１１ＭのタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、キメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体は、約１×１０^－１１Ｍ～約２．５×１０^－１１ＭのタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有する。本発明のキメラ抗タウＣ３抗体、ヒト化抗タウＣ３抗体及びヒト抗タウＣ３抗体は、例えば、約１．１×１０^－１１Ｍ、約１．３×１０^－１１Ｍ、約１．５×１０^－１１Ｍ、約１．７×１０^－１１Ｍ、約１．９×１０^－１１Ｍ、約２．１×１０^－１１Ｍ又は約２．３×１０^－１１ＭのタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し得る。

特定の実施形態において、抗体は、１×１０^－１０Ｍ～１×１０^－１１Ｍの平衡定数ＫＤでタウＣ３に結合し、２Ｎ４Ｒとの平衡定数ＫＤは１×１０^－４Ｍ～１×１０^－８Ｍである、又は完全長タウ（例えば、２Ｎ４Ｒ）に検出可能な結合を示さない。好ましい実施形態において、抗タウＣ３抗体は、１×１０^－９Ｍ～１×１０^－１２Ｍの平衡定数ＫＤでタウＣ３に結合し、１×１０^－８Ｍ～９×１０^－８Ｍの平衡定数ＫＤで完全長（例えば、２Ｎ４Ｒ）に結合する、又は２Ｎ４Ｒに検出可能な結合を示さない。これらの実施形態の一部において、抗体はタウＣ３からの非常に遅いオフレート（すなわち、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１のオフレート）を有し、実質的には２Ｎ４Ｒに対する親和性を有さない（すなわち、１００，０００１／ＭＳ未満のｋａ）。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体は、約５ｐＭ～約９０ｐＭ、約１０ｐＭ～約９０ｐＭ、約１０ｐＭ～約８０ｐＭ、約１０ｐＭ～約７０ｐＭ、約１０ｐＭ～約６０ｐＭ、約１０ｐＭ～約５０ｐＭ、約１０～約４０ｐＭ、又は約１０ｐＭ～約３５ｐＭのタウＣ３についてのＫＤを有する、キメラ抗体、又はヒト化抗体である。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体は、約１０～約９０ｐＭのＫＤ及び２×１０^－３ｓ^－１未満のＫｄにより示されるように、タウＣ３から非常に遅いオフレートを有する、キメラ抗体又はヒト化抗体である。換言すると、抗体は、疾患状態にて産生され得る標的タンパク質であるタウＣ３に対して高度の特異性、及び遅いオフレートを有する。この両方は、免疫化戦略にて使用される抗体にとって理想的である。

抗タウＣ３抗体としては、モノクローナル、キメラ、ヒト化、一本鎖、Ｆａｂ断片及びＦａｂ発現ライブラリが挙げられるがこれらに限定されない。抗タウＣ３抗体は天然又は組換え、固定化、溶液中で遊離状態であってよく、又は様々な分子若しくは細菌、ウイルスの表面上、若しくは他の表面上に表されてよい。

特定の実施形態において、抗タウＣ３抗体は、配列ＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤ（配列番号２３）をタウＣ３のＣ末端にて認識するが、ＦＬＴの内部にこれが存在する場合には同じ配列を認識しない。

本発明による有用な抗タウＣ３抗体（例えば、ヒト化抗体）は、タウＣ３の播種及び／又は凝集をブロッキングするため、タウオパチーに罹患しやすい可能性がある又はこれに罹患している対象に投与され、これによりタウオパチーの１つ以上の症状を処置し得る。

本発明の更に別の実施形態において、本発明の抗タウＣ３抗体は、細胞保護薬又は血液脳関門（「ＢＢＢ」）を通過する抗体能力を促進及び／又は向上させる薬剤にコンジュゲートされ得る。細胞保護薬は、抗酸化薬（例えばメラトニン）であってよく、ＢＢＢを通過する抗体能力を促進又は向上させる薬剤は、ＢＢＢを通過可能な疎水性物質であり、これは一般には米国食品医薬品局（「ＦＤＡ」）によりセージ（ＧＲＡＳ）として認識されている。細胞保護薬又はＢＢＢを通過する抗体能力を促進又は向上させる薬剤は、抗体に直接、又はリンカーを介してコンジュゲートされてもよい。リンカーは、ヒドラジンリンカー、ジスルフィト（ｄｉｓｕｌｆｉｔｅ）リンカー、チオエーテルリンカー、ペプチドリンカーを含む、又はこれらからなる群から選択されてもよい。特定の実施形態において、抗体は２Ｎ４Ｒに対する抗体平衡定数ＫＤから２～３桁高い、タウＣ３に対する平衡定数ＫＤを有し、細胞保護薬はメラトニンである。

使用方法
一態様において、本発明はタウオパチーに罹患している、又はタウオパチーを発症している危険性がある生存しているヒトにて使用するための抗タウＣ３抗体を提供する。タウオパチーとしては、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、ピック病（ＰｉＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、又は前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）などが挙げられる。

病理学的タウ凝集の伝播をブロッキングする方法
一態様において、本発明はあるニューロンから別のニューロンへ、又は脳のある一部分から別の部分への、病理学的タウの伝播をブロッキングする方法に関する。

一態様において、本発明は対象の脳内でのタウＣ３播種活性をブロッキングする方法に関する。

追加的な態様において、本発明は対象の脳内での病理学的タウ凝集の伝播を減少させる方法に関する。

本発明は、対象の脳内で、タウＣ３を含む凝集物の伝播を減少させる方法に更に関する。

本発明は、対象の脳内で、タウＣ３を含む原線維の伝播を減少させる方法に更に関する。

本発明の更なる態様において、本発明はタウＣ３及びタウＣ３原線維の細胞内取込みにより誘発されるタウの細胞内凝集を減少させる方法に関する。

各態様において、この方法は、治療有効量の抗タウＣ３抗体をヒトに投与することを含む。抗タウＣ３抗体は、生理学的タウに結合することなく、凝集した病理学的タウの細胞外形態を独自に認識可能である。好ましい実施形態において、抗タウＣ３抗体のエピトープの本質的な部分は、タウＣ３（例えば、タウＣ３又は配列番号２３）の最終１０のＣ末端残基に対応するペプチドのＣ末端残基でネオエピトープを形成するカルボキシ基である。抗タウＣ３抗体は２Ｎ４Ｒに対する抗体平衡定数ＫＤから２～３桁高い、タウＣ３に対する平衡定数ＫＤ、及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を有する。抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０Ｍ～１×１０^－１１Ｍの平衡定数ＫＤでタウＣ３に結合するが、完全長タウ（例えば２Ｎ４Ｒ）との平衡定数ＫＤは１×１０^－４Ｍ～１×１０^－８Ｍである、又は完全長タウ（例えば、２Ｎ４Ｒ）に検出可能な結合を示さない。好ましい実施形態において、抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１１Ｍ～９×１０^－１１Ｍの平衡定数ＫＤでタウＣ３に結合し、１×１０^－８Ｍ～９×１０^－８Ｍの平衡定数ＫＤで２Ｎ４Ｒに結合する、又は２Ｎ４Ｒに検出可能な結合を示さない。抗タウＣ３抗体は好ましくは、タウＣ３からの非常に遅いオフレートを有し、かつ２Ｎ４Ｒに対する親和性を実質的に有さない（すなわち、１００，０００ １／ＭＳ未満のｋａ）。抗体は例えば、ヒト化抗体、キメラ抗体又は前述のいずれかの免疫学的断片から選択されてもよい。好ましい実施形態において、抗体は、本明細書に説明されるヒト化抗タウＣ３抗体から選択される抗体である。

ヒトは、治療有効量の抗タウＣ３抗体の投与前に、タウ凝集に関連する症状を有しても有さなくてもよい。換言すると、ヒトはタウ播種及び／又は凝集に関連する徴候を経験してもしなくてもよい。当業者は、病理学的タウ播種及び凝集は、タウ凝集に関連する症状の診断又は発症の前に恐らく開始することを理解するであろう。いくつかの実施形態において、ヒトはタウ播種及び／又は凝集に関連する徴候を有している。他の実施形態において、ヒトはタウ播種及び／又は凝集に関連する徴候を有していない。更なる他の実施形態において、ヒトは検出可能なタウ病態を有するが、タウ徴候及び／又は凝集に関連する任意の他の徴候を有さない。本発明による治療薬及び医薬組成物を投与することによる、ヒトの脳内においてタウ凝集の伝播を低下させることは、タウの病理学的播種及び／又は凝集に関連する発症及び／又は徴候の進行を低下させることができる。

病理学的タウ凝集の拡散の予防、阻害又は遅延はしたがって、タウ凝集物の生成及び伝播に関連する病態の処置において使用されてもよい。タウ播種及び／又は凝集に関連する症状の１つの定義は、部分的にタウ原線維から構成されているタウ凝集物の形成により引き起こされる、いずれかの症状を指す。タウ凝集に関連する徴候を有する例示的な障害としては、進行性核上性麻痺、拳闘家認知症（慢性外傷性脳症）、前頭側頭型認知症及び第１７染色体に結合されたパーキンソニズム、リティコ・ボディグ病（グアムのパーキンソン認知症複合）、神経原線維変化型老年期認知症、神経節膠腫及び神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛脳症、結節性硬化症、ハラーフォルデン－シュパッツ症候群、リポフスチン沈着症、ピック病、大脳皮質基底核変性症、嗜銀性顆粒病（ＡＧＤ）、前頭側頭葉変性症、アルツハイマー病、及び前頭側頭型認知症が挙げられるが、これらに限定されない。これらの障害を診断するための方法は、当技術分野において公知である。

タウ播種又はタウ凝集に関連する徴候を有する例示的な障害としては、例えば障害された認知機能、変性された挙動、感情の調節不全、てんかん発作、及び障害された神経系構造又は機能が挙げられる。障害された認知機能には、記憶、注意力、集中力、原語、抽象的な思考、創造性、実行機能、計画、及び体型付けに関する困難さが挙げられるがこれらに限定されない。変性された挙動としては、身体的又は言語的な攻撃性、衝動性、低下された抑圧性、感情鈍麻、低下された惹起、性格の変化、アルコール、タバコ又は薬物の濫用、及び中毒関連挙動が挙げられるがこれらに限定されない。感情の調節不全としては、うつ病、不安、躁病、易刺激性、及び感情失禁が挙げられるがこれらに限定されない。てんかん発作としては、全般強直関代性てんかん発作、複雑部分発作、及び心因性非てんかん性発作が挙げられるが、これらに限定されない。障害された神経系構造又は機能としては、水頭症、パーキンソニズム、睡眠障害、精神障害、バランス及び協調性の機能障害が挙げられるがこれらに限定されない。これは、不全単麻痺、不全片麻痺、四肢不全麻痺、運動失調、バリズム及び振戦といった運動機能障害を含む。これはまた、感覚消失又は嗅覚、触覚、味覚、視覚及び聴覚といった感覚機能を含む機能不全を含む。更には、これは腸機能不全、膀胱機能不全、性機能不全、血圧及び温度調節不全といった自律神経系機能障害を含む。最終的には、これは成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、小胞刺激ホルモン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、プロラクチン、並びに多数の他のホルモン及び修飾因子の欠乏及び機能障害といった視床下部及び脳下垂体腺の機能不全に起因し得るホルモン障害を含む。タウ凝集に関連する徴候を検出及び評価するための方法は、当技術分野において公知である。

いくつかの実施形態において、タウ凝集に関連する徴候は認知症を指す。認知症はそれ自体特定の疾患ではなく、毎日の活動を実施する人間の能力を十分低下させるほど深刻な記憶又は他の思考スキルにおける低下に関連する広範な徴候を説明する全体的な用語である。認知症はまた、タウ凝集に関連する多くの疾患の共通する臨床徴候でもある。当業者は、認知症の重症度を診断するのに利用可能な多くの方法に精通しているだろう。例えば、認知症に関する複数の認知検査及びスクリーニングアンケート調査が当技術分野において公知であり、そのすべては感受性及び特異性の変化度を伴う。非限定的な例としては、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）、略式メンタルテストのスコア（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ ｍｅｎｔａｌ ｔｅｓｔ ｍａｙ ｓｃｏｒｅ、ＡＭＴＳ）、変更されたミニメンタルステート検査（３ＭＳ）、認知能力スクリーニング手法（ＣＡＳＩ）、トレイル・メイキング・テスト、時計描画試験、老年層における認知機能低下に関する情報アンケート調査（ｔｈｅ Ｉｎｆｏｒｍａｎｔ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ｏｎ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｄｅｃｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｌｄｅｒｌｙ）、認知に関する一般的な開業医評価、臨床的認知症尺度（ＣＤＲ）、加齢及び認知を区別する８項目の情報インタビュー（ＡＤ８）が挙げられる。

いくつかの実施形態において、認知症の症状の重症度は、臨床的認知症尺度を使用して定量化される。臨床的認知症尺度を使用した場合、スコア０は徴候が見られないことを示し、スコア０．５は非常に軽度の徴候が見られることを示し、スコア１は軽度の徴候を示し、スコア２は中程度の徴候を示し、スコア３は重度の徴候を示す。したがって、ヒトについての臨床的認知症尺度スコアの任意の上昇は、認知の悪化及び認知症の上昇を示す。更に、０から０超の臨床的認知症尺度における変化は、認知症の発症又は発生を示す。

いくつかの実施形態において、タウ播種又はタウ凝集に関連する徴候は、タウ病態又はタウオパチーを指す。用語「タウ病態」又は「タウオパチー」は、タウの病理学的播種又はタウの凝集を指す。いくつかの実施形態において、タウ病態は神経原線維変化タングルを指す。他の実施形態において、タウ病態は高リン酸化タウを指す。更なる他の実施形態において、タウ病態は、血中、血漿中、血清中、ＣＳＦ中、又はＩＳＦ中で検出可能な高レベルのタウ凝集物を指し、いずれも疾患を含まない個体で検出されるものよりも２～およそ４０倍高い。

投与
本明細書に説明される抗タウＣ３抗体の投与は、タウオパチーを処置又はタウオパチーから免疫化する治療として使用され得る。

免疫学的に反応性のある断片を含む医薬品グレードで好ましい治療有効量である抗体は、ヒトに投与されてもよい。投与は、中枢神経系への末梢的（すなわち、中枢神経系への投与によるものではない）又は局所的なものを含む、標準的で有効な技術を使用して実施される。末梢投与としては、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、肺投与、経皮投与、筋肉内投与、経鼻投与、頬側投与、舌下投与、又は坐薬投与が挙げられるがこれらに限定されない。中枢神経系（ＣＮＳ）へと直接投与するものを含む、局所投与としては、腰椎を介した投与、脳室内カテーテル、又は実質内カテーテル、又は外科的に植え込まれ制御される放出製剤の使用が挙げられるが、これらに限定されない。

処置を受け入れられる人間としては、疾患の危険性はあるが症状が現れていない個体、及び現在症状が現れている対象が挙げられる。アルツハイマー病の場合には、実質的には、アルツハイマー病に罹患している危険性がある人間である。したがって、本発明の方法は、対象の危険性を評価する必要なしに、一般的な集団に対し、予防的に行うことができる。こうした予防的な投与は、例えば５０歳以上の年齢で開始することができる。現在の方法は、タウオパチー（例えば、アルツハイマー病）の公知の遺伝的な危険性を有さない個体にも特に有用である。こうした個体としては、この疾患を経験したことある親類を有する人々、及び遺伝的マーカ又は生物化学的マーカの分析によりその危険性が測定される人々が挙げられる。例えば、アルツハイマー病に対する危険性の遺伝的マーカとしては、ＡＰＰ遺伝子における変異、特にＨａｒｄｙ及びＳｗｅｄｉｓｈ変異とそれぞれ呼ばれる、位置７１７及び位置６７０及び６７１における変異が挙げられる。危険性を示す他のマーカは、プレセニリン遺伝子における変異であるＰＳ１及びＰＳ２、並びにＡｐｏＥ４、家族歴、高コレステロール血症又はアテローム性動脈硬化である。現在アルツハイマー病に罹患している個体は、上記のリスク因子が存在していることによる特徴的な認知症により認識され得る。加えて、ＡＤを有する個体を同定するために多くの診断検査が利用可能である。こうした診断検査としては、画像化、並びに／又はＣＳＦタウ及びＡＪ３４２レベルの測定が挙げられる。タウレベルの上昇及びＡＪ３４２レベルの減少は、ＡＤの存在を意味する。アルツハイマー病に罹患している個体は、アルツハイマー病及び関連する障害の関連基準によっても診断され得る。

無症状性対象においては、処置は任意の年齢（例えば、１０歳、２０歳、３０歳、４０歳、５０歳、又は６０歳）で開始することができる。ただし、通常は、対象が４０歳、５０歳、６０歳、７０歳、７５歳、又は８０歳に到達するまでは、処置を開始する必要はない。処置は通常、一定の期間にわたって複数回の投薬を必要とする。処置は、抗体、又は経時的な治療薬に対する活性化されたＴ細胞若しくはＢ細胞の応答をアッセイすることによりモニタリングされ得る。応答が減少する場合、ブースター投薬を提示する。ダウン症候群の可能性がある対象の場合には、処置は、母親への治療薬投与により出産前に、又は誕生後速やかに開始可能である。

予防用途では、医薬組成物又は薬物は、疾患に罹患しやすい、又はタウオパチーの危険性がある対象へ、リスクを除去又は減少させるのに、重症度を低下させるのに、又は疾患の生物化学的、組織学的、及び／又は行動学的症状、合併症及び疾患の発症中に表われる病理学的な中間表現型を含む疾患の開始を遅らせるのに十分な量で投与される。治療用途では、組成物又は薬物は、これらの疾患が疑われる、又はこれらの疾患に既に罹患している対象へと、その合併症及び疾患の発症中に表われる病理学的な中間表現型を含む疾患の生物化学的、組織学的、及び／又は行動学的症状を治癒、又は少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で投与される。いくつかの方法において、薬剤の投与により軽度の認知障害が低減又は除去される。治療処置又は予防処置を達成するのに適切な量は、治療的に効果的な投与量若しくは量、又は予防的に効果的な投与量若しくは量として規定される。予防的及び治療的管理体制の両方において、薬剤は通常、十分な免疫応答が得られるまでは複数回の投薬にて投与される。通常、免疫応答をモニタリングし、免疫応答が衰え始めた場合には繰り返し投薬が行われる。

上記状態の処置を目的とする本発明の組成物の有効投与量は、多くの異なる因子に応じて変化する。この因子には、投与手段、標的部位、対象の生理学的状態、投与される他の薬物療法、及び処置が予防的なものか治療的なものかというものが含まれる。処置投薬は、治験において個々の場合に応じて検査される必要があり、多くの場合には安全性及び有効性を最適化するために用量設定される必要がある。特定の実施形態において、本発明の抗タウＣ３抗体の追加的な利点は、同等の質量の投薬に関して、本発明の抗タウＣ３の投薬が、本発明による抗タウＣ３抗体に比べてタウＣ３への特異性が少ない抗体を含む組成物よりも除去及び／又は「不活性化」において有効である、より高い分子投薬量の抗体を含有するということであり得る。通常、本発明の抗タウＣ３抗体は、静脈内注入又は皮下注射により投与される。静脈内注入による投与のための抗タウＣ３抗体の量は、対象当たり０．５ｍｇ～１０ｍｇで変化し得る。皮下注射は一般には、十分な量で脳に到達させるためにはより高い投与量を必要とする。抗体（例えば、ＩｇＧの全体分子）は、１ヶ月に１回投与され得る。

いくつかの方法において、同様の又は異なる結合特異性を有する２つ以上の抗体（例えば、組換え抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体及び／又はヒト化抗体）は、投与される各抗体の投薬量が示された範囲内にある場合には、同時に投与される。こうした状況では、２つ以上の抗体は、その両方が例えば切断型タウに向けられ得る。代替的には、１つ以上の抗体は、例えば切断型タウに向けられ、また、１つ以上の追加の抗体は、アルツハイマー病に関連するアミロイド－β（Ａβ）ペプチドに向けられ得る。抗体は通常、複数回投与される。単回投薬間の間隔は、１時間ごと、１日ごと、１週間ごと、１ヶ月ごと、又は１年ごとであり得る。いくつかの方法において、投薬は、１～１０００μｇ／ｍＬの血漿抗体濃度を得るように調節され、いくつかの方法では、これは２５～３００μｇ／ｍＬである。代替的には、それほど頻繁な投与な必要ではない場合には、抗体は徐放性製剤として投与され得る。

投薬及び頻度は、対象内の抗体の半減期に応じて変化する。一般に、ヒト抗体は最長の半減期を示し、これにヒト化抗体、キメラ抗体、及び非ヒト抗体が続く。投薬及び投与頻度は、処置が予防的又は治療的かに応じて変化し得る。予防用途では、長期期間にわたり相対的には頻繁ではない間隔で、相対的に低量の投薬が投与される。一部の対象は、生涯にわたって処置を受け続ける。治療用途では、疾患の進行が落ち着くまで、又は終了するまで、好ましくは対象が疾患症状の部分的又は完全な寛解を示すまでは、相対的に短い間隔で相対的に高い投薬量が時に必要とされる。その後、患者は予防的な管理体制で投与され得る。

タウＣ３播種をブロッキングする抗タウＣ３抗体の投与量は、タウＣ３凝集を阻害する抗タウＣ３抗体の投与量と同量である必要はない。本明細書にて提供される情報といった観点で、特定の投与量は日常的な試験により決定され得る。

投与／処置の有効性は、血漿及び／又はＣＳＦ中の病理学的タウ又はリン酸中タウのレベルを測定することにより評価され得る。この評価に基づき、投与量及び／又は投与頻度をそれに合うように調節してもよい。

特定の実施形態において、認知における効果もまた評価されてもよい。

ＭＲＩによって測定されるように、有効性は脳萎縮の程度によっても評価されてもよい。

投与／処置の安全性は、参加者が経験する有害事象（ＡＥ）の数、深刻なＡＥ、臨床検査における異常、バイタルサイン、ＥＣＧ、ＭＲＩ、理学的検査及び神経学的検査、並びに認知の悪化により評価されてもよい。この評価に基づき、投与量及び／又は投与頻度をそれに合うように調節してもよい。

抗タウＣ３抗体及び免疫源は、経鼻的に、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注入により、経皮的に、頬側になど、又は以下詳細に説明するようなものにより投与されてもよい。

医薬組成物
本発明に従う医薬組成物は、本明細書に説明される抗タウＣ３抗体、又はその断片及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１０Ｍ～１×１０^－１１Ｍの平衡定数ＫＤでタウＣ３に結合するが、完全長タウ（例えば２Ｎ４Ｒ）との平衡定数ＫＤは１×１０^－４Ｍ～１×１０^－８Ｍである、又は完全長タウ（例えば、２Ｎ４Ｒ）に検出可能な結合を示さない。好ましい実施形態において、抗タウＣ３抗体は、１×１０^－１１Ｍ～９×１０^－１１Ｍの平衡定数ＫＤでタウＣ３に結合し、１×１０^－８Ｍ～９×１０^－８Ｍの平衡定数ＫＤで２Ｎ４Ｒに結合する、又は４Ｒタウに検出可能な結合を示さない。抗タウＣ３抗体は好ましくは、タウＣ３からの非常に遅いオフレート（すなわち、１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１）を有し、かつ４Ｒタウに対する親和性を実質的に有さない（すなわち、１００，０００ １／ＭＳ未満のｋａ）。抗体は例えば、ヒト化抗体、キメラ抗体、又はヒト抗体（例えばｔｇマウスから）であってもよい。

医薬組成物は、投与の選択方式にとって適切であるように設計され、適合する分散剤、緩衝液、界面活性物質、保存剤、可溶化剤、等張化剤、安定剤などといった薬学的に許容される賦形剤は適切なものとして使用される。

静脈内注射又は皮下注射による末梢性の効果的な全身性送達は、生存している対象に対して好ましい投与方法である。こうした注射にとって好適な媒介物は単純なものである。

投与されるべき製剤中のヒト化抗体の濃度は、有効量であり、約０．１重量％と同等の低さから、約９５重量％又は約９９．９重量％までの範囲である。所望の場合には選択される特定の投与方式に従い、この範囲は流体量、粘度などに基づき主に選択される。特定の実施形態においては、抗体は、組成物の約１５重量％～約２０重量％であり得る。

対象へと注射するための組成物は、リン酸緩衝生理食塩水の１～２５０ｍＬの緩衝滅菌水及び約１～約５０００ｍｇの本発明の抗タウＣ３抗体のうちいずれか１つ又はそれらの組合せを含有するように構成され得る。製剤は、製剤を作製した後に滅菌ろ過され得る。又はそれ以外の場合には、微生物学的に許容可能なものとされる。静脈内注入のための典型的な組成物は、滅菌リンガー溶液などの、１～２５０ｍＬの流体量を有し、これは抗タウ抗体濃度についてはｍＬあたり１～１００ｍｇ以上を有し得る。この発見に関する治療薬は、貯蔵のために冷凍又は凍結乾燥されることができ、使用前に好適な滅菌担体中で再構成され得る。凍結乾燥及び再構成は、抗体活性消失度を変化させることができる（例えば、従来の免疫グロブリンを伴い、ＩｇＭ抗体はＩｇＧ抗体よりも大きな活性消失を有する傾向がある）。

投与される投薬量は、示される目的に対する有効量であり、調節されて補償されなければならない場合がある。一般には医薬品グレード品質である製剤のｐＨは、抗体安定性（化学的及び物理的）の均衡を保つように選択され、投与時に対象にとって安心なものである。一般には、４～８のｐＨを許容する。投与量は、順調な投与を受ける個体の、サイズ、重量、及び他の物理生物学的特徴に基づき個人によって変化する。

一態様において、典型的な投与量は約０．１ｍｇ～１０ｍｇの本明細書に説明される抗タウＣ３抗体を含有する。特定の実施形態において、典型的な投与量は約０．５ｍｇ～１０ｍｇの抗タウＣ３抗体を含有する。投与量は約０．５５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。すべてのＩｇＧ抗体を用いて投与する頻度は、通常月ごとである。一方で、抗体断片は、その半減期が短いという観点から、徴候を効果的に処置するために必要な場合には、更に頻繁に投与する必要がある。

疾患自体に対する処置の投与のタイミング、及び処置の継続時間は、症例を取り巻く環境によって決定される。処置は、タウ凝集に関連する疾患の診断後に開始させることが可能である。代替的には、処置はタウ凝集に関連する徴候の臨床確認後に開始させることが可能である。更には、処置はタウ病態の検出後に開始させることが可能である。処置は病院又はクリニックで速やかに、又は病院から退院した後の時点で、又は外来患者用のクリニックで確認した後に開始させることができる。処置の継続時間は、適時に投与される単回投与から、生涯にわたる一連の治療処置までの範囲である。

前述の方法は、好適に順応することでヒト化抗体といったタンパク質の投与にとって、最も簡便であり、最も適切であり、有効であろうが、適切な製剤がそこで利用された場合には、例えば脳室内投与、経皮投与及び経口投与といった投与にとって他の効果的な技術が使用されてもよい。

典型的な有効量又は投与量は、標準的な臨床技術を使用して決定及び最適化され得、これは本明細書にて提供される情報及び当技術分野において利用可能な知識といった観点から、投与方式によって左右される。

例１（マウスＭｏＴａｕ０１抗体の配列決定）
ＭｏＴａｕ０１抗体の配列決定
ハイブリドーマ細胞からのＲＮＡ調製

－８０℃で保存されたマウスハイブリドーマ細胞（ＭｏＴａｕ０１）の凍結ペレットは、Ｔａｕ－Ｂｉｏｌｏｇｉｃに代わってＧｅｎｓｃｒｉｐｔにより供給された。これをＱｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙキットを使用して加工し、製造業者のプロトコルに従ってＲＮＡを単離した。

第１鎖ｃＤＮＡ合成
ＭｏＴａｕ０１ ＲＮＡ（約２１μｇ）を逆転写し、製造業者のプロトコルに従ってＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ製の第１鎖ｃＤＮＡ合成キットを使用してｃＤＮＡを産生し、例５にて説明するように精製した。逆転写酵素により誘発されたｃＤＮＡ変異を検出し、これを回避する目的で２回繰り返して３つの独立したｃＤＮＡ産物（ラウンド１、ラウンド２及びラウンド３）を生成した。

ｃＤＮＡ配列決定
例５に説明されるように、ＭｏＴａｕ０１ ｃＤＮＡをＰＣＲにより増幅した。免疫グロブリンｃＤＮＡを、Ｐｈｕｓｉｏｎ Ｆｌａｓｈ Ｈｉｇｈ－Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒミックスを使用し、ＭＫＣを追加したカッパ軽鎖プライマー（表１）又はＭＨＣミックスを追加した重鎖プライマー（１～１２及び１４）（表２）でＰＣＲ増幅した。ＭｏＴａｕ０１ ＶＨ ＰＣＲプライマーセットは、産物を何ら産生することができなかった。

したがって、リーダ領域及び末端領域における公知の配列に基づき、ハイブリドーマ細胞からのＶＨドメインのクローニングを促進させるために、追加のプライマーを設計した。追加のプライマー配列を、ＭＨＶ１３などプライマーの表及び追加プライマーの部分（表２）に挙げる。

アンビギュイティコード：Ｗ＝Ａ又はＴ、Ｙ＝Ｃ又はＴ、Ｋ＝Ｇ又はＴ

ＭＫＶは、マウスカッパ軽鎖可変領域遺伝子のリーダ配列にハイブリダイズするプライマーを示し、ＭＫＣはマウスカッパ定常領域遺伝子にハイブリダイズするプライマーを示す。太字の下線部分は、Ｍ１３フォワードシーケンシングプライマー又はＭ１３リバースシーケンシングプライマーを示す。ゆらぎ塩基を、定義部分にて定義する。

アンビギュイティコード：Ｒ＝Ａ又はＧ、Ｋ＝Ｇ又はＴ、Ｍ＝Ａ又はＣ。

ＭＨＶは、マウス重鎖可変領域遺伝子のリーダ配列にハイブリダイズするプライマーを示す。ＭＨＣＧは、マウス定常領域遺伝子にハイブリダイズするプライマーを示す。太字の下線部分は、Ｍ１３フォワードシーケンシングプライマー又はＭ１３リバースシーケンシングプライマーを示す。プライマーＭＨＣミックスは、プライマーであるＭＨＣＧ１、ＭＨＣＧ２ａ、ＭＨＣＧ２ｂ及びＭＨＣＧ３の等モルのミックスからなる。「ゆらぎ」塩基を、定義部分にて定義する。

各ＰＣＲ反応の結果は、ＱＩＡｑｕｉｃｋ ＰＣＲ精製キットを使用して精製され、Ｍ１３フォワードプライマー及びＭ１３－リバースプライマー（表３）を使用して両方向に（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ／ＧＡＴＣ Ｇｅｎｏｍｉｃｓにより）配列決定される、各免疫グロブリン鎖に関する３つの独立したセットの配列情報を得るための単一の増幅産物であった。

ＶＫ及びＶＨ ＭｏＴａｕ０１ ＤＮＡ配列
ＭｏＴａｕ０１ ＶＫ ＰＣＲ産物及びＭｏＴａｕ０１ ＶＨ ＰＣＲ産物のコンセンサスＤＮＡ配列を図１及び図２にそれぞれ示す。得られた可変領域のＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔにより決定される配列と同一である。ＭｏＴａｕ０１配列の生殖細胞系列分析は、カッパ軽鎖がマウスＶＫ１ ＩＧＫＶ９－１２４^＊０１であり、重鎖がマウスＶＨ１ ＩＧＨＶ１０－１^＊０２であることを示す。

例２（キメラＭｏＴａｕ０１抗体の生成）
キメラＭｏＴａｕ０１発現ベクターの構築
ＭｏＴａｕ０１ ＶＨ及びＶＫの遺伝子をＧｅｎｓｃｒｉｐｔにより合成した。Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔに所有権のあるソフトウェアアルゴリズムを使用し、ＭｏＴａｕ０１ ＶＨ及びＭｏＴａｕ０１ ＶＫのための配列を、ヒト細胞により優先的に使用されるコドンを使用するサイレント突然変異誘発により最適化し、合成した。

キメラ発現ベクターの構築は、リガーゼ非依存性クローニング（ＬＩＣ）を使用し、ＩｇＧ／カッパベクター（ｐＨｕＫ及びｐＨｕＧ４、それぞれ図３及び図４）へと合成された可変領域のクローニングを必要とする。ベクター（ｐＣＭＶ修飾）を、ＢｆｕＡ１（ＢｓｐＭ１）で消化し、次いで互換性のあるオーバーハングをＴ４ ＤＮＡポリメラーゼ３’－５’エキソヌクレアーゼ活性（＋ｄＡＴＰ）により生成した。

抗体配列（図５及び図６）を、リーダ配列（大半の配列はベクター中に存在する）の３’末端を含有するプライマーであるフォワードプライマー、又は定常領域（ＩｇＧ４又はカッパ）の最初、続いて、可変領域（各方向にて）の最初を含有するプライマーであるリバースプライマーで、ＰＣＲにより合成された可変領域を第一に増幅させることで生成した（表４）。

相補的なオーバーハングを、Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼ＋ｄＴＴＰ処置によりＰＣＲ産物中に生成した（プロトコルを例５に提供する）。ベクター及び挿入物を室温にてインキュベートし、化学的に形質転換受容性のあるＴＯＰ１０の細菌へと形質転換し、カナマイシンプレート上に配置した。複数のクローンを単離し、コロニーをＨＣＭＶｉプロモータフォワード及びＶＨ用のＨｕＧ４ ＬＩＣリバース又はＶＫ用のＨｕＫ ＬＩＣリバースといったプライマーを使用してＰＣＲによりスクリーニングした（表３）。

正確なサイズのＰＣＲ産物を生成するクローンを選択し、ＱＩＡＧＥＮキットを使用してミニプレップし、同じプライマーを使用して配列決定した。

キメラ抗体の生成
ＥｘｐｉＣＨＯトランスフェクション培地で増殖させたＥｘｐｉＣＨＯ懸濁細胞及び抗菌剤を、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅＣＨＯ試薬を使用し、ＭｏＴａｕ０１＿ＶＨ．ｐＨｕＧ４及びＭｏＴａｕ０１＿ＶＫ．ｐＨｕＫ（それぞれ１μｇのＤＮＡ）と同時導入した。細胞を１ｍＬの増殖培地で７日間、増殖させた。最大１６０μｇ／ｍＬ（表１４Ａ）のＭｏＴａｕ０１ ＨｕＧ４ｋ抗体を、Ｏｃｔｅｔ定量化により条件培地中で測定した。

キメラ抗体のタウＣ３結合活性
ＧｅｎｓｃｒｉｐｔによりタウＣ３及びＦＬタウ抗原を生成及び精製し、それぞれ２．５４ｍｇ／ｍＬ又は０．２４ｍｇ／ｍＬの濃度で供給した。タウＣ３及びＦＬタウに対するキメラ抗体の結合を、結合ＥＬＩＳＡによるアッセイした。キメラ抗体は０．７ｎＭのＥＣ５０でタウＣ３に結合可能であった（図７Ａ）が、ＦＬタウに対しては、結合は何ら観察されなかった（図７Ｂ）。いずれの抗原に対しても、観察された結合が特異的であることを裏付けるアイソタイプを用いる非特異的な結合が観察されなかった。精製タウＣ３に対するマウスＴａｕ０１抗体及びキメラＴａｕ０１抗体の結合は、Ｂｉｏ－Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（ＯｃｔｅｔＲｅｄ９６、ＦｏｒｔｅＢｉｏ セクション８．１２）を使用して測定したマウス抗体及びキメラ抗体を、２０ｎＭから０．３１ｎＭタウＣ３の濃度系列に対してアッセイした（図８Ａ及び図８Ｂ）。マウス抗体及びキメラ抗体の両方は、濃度依存性方式にてタウＣ３に対して結合可能であった。マウス抗体及びキメラ抗体の結合を、ＦＬタウに対しても検査したが、低い信号が観察されるか、又は何ら結合は観察されず（図８Ｃ及び図Ｄ）、抗体の結合がタウＣ３に特異的であることが確証された。

例３ Ｔａｕ０１ヒト化抗体バリアントの設計
ヒトＶＨ及びＶＫ ｃＤＮＡデータベース
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｄａｔａｂａｓｅ ２００９（Ｌｅｆｒａｎｃ、２０１５）及びＫａｂａｔ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ５ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（最新アップデート １９９９年１１月１７日）（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．１９９１）からのヒト免疫グロブリン及びマウス免疫グロブリンのタンパク質配列を使用して、整列したヒト免疫グロブリン配列のデータベースを編集した。データベースは、１０，４０６ＶＨ及び２，８９４ＶＫ配列を含有する。

ＭｏＴａｕ０１の分子モデル
ＭｏＴａｕ０１ ＶＨ及びＶＫ配列を使用し、ＭｏＴａｕ０１抗体のヒト化バージョンを設計した。ＭｏＴａｕ０１抗体可変領域の相同性モデルを、Ｍａｅｓｔｒｏ １１．５の抗体予測パネルを使用して生成した。選択したヒトフレームワークを使用して１０個のループモデルを生成した。これを、ワンステップタンパク質調製ウィザードを使用して調製した。１０個のモデルすべてに関してタンパク質の信頼性レポートを作成し、モデル品質に関しては何ら主要な差異は確認されなかった。ＣＤＲの異なる向きをキャプチャするために、１０個のモデルすべてを使用し、ＣＤＲループの４Å内である残基のコンセンサスを測定した。

ヒトフレームワークの選択
ヒト化は、好適なヒトＶ領域の同定を必要とする。配列分析プログラムであるＧｉｂｂｓを使用し、様々な選択基準を使用してＭｏＴａｕ０１ ＶＨ及びＶＫタンパク質配列についてヒトＶＨ及びＶＫデータベースを調べた。Ｍａｅｓｔｒｏ １１．５（Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ）ソフトウェアを使用し、マウスのＴａｕ０１抗体の構造におけるＣＤＲ残基の４Å内のＦＷ残基（ＩＭＧＴ定義）を同定し、「４Å近接残基」と命名した。４Å近接残基内のＭｏＴａｕ０１ ＶＨに対して最も高い同一性を有するヒトＶＨ配列アラインメントを、表５にて示す。表６は、これらのエンベロープ残基及びＶＣＩ、並びに表５における配列に対するマウスの等価位置と同一であるＦＷ、ＶＣＩ又は４Å近接残基のいずれかにおける残基数を列挙する。

ヒト化配列及び不完全配列を分析から除外した。配列ＤＱ８４０８９５．１を、ヒト重鎖ドナー候補として選択した。この配列は、配列同一性及び類似性については高いスコアを得る。そのＩＧＨＶ３－７３^＊０１ＶＨ生殖系列からの体細胞変異は２つのみである。これは、８個の４Å近接残基及び１個のＶＣＩ残基の変化を有するが、これは取得可能な最小数の変化であった（表８）。

同様に、配列Ｌ３３０３４をヒトカッパ軽鎖ドナー候補として選択した。この配列は、Ｔａｕ０１ ＶＫに対する配列同一性及び類似性については高いスコアを得る。そのＩＧＫＶ１－１７^＊０１生殖系列からの体細胞変異は１つのみである。これは、５個の潜在的な４Å近接残基及び１個のＶＣＩ残基の変化を有する。

カッパ軽鎖ヒト化戦略に関する配列を表１２に示す。

Ｔａｕ０１ヒト化重鎖バリアントの設計
好適なヒトフレームワークを同定すると、合成タンパク質及びＤＮＡ配列を設計することができる。Ｔａｕ０１のヒト化バージョンの初期設計は、ＭｏＴａｕ０１ ＶＨからのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のＤＱ８４０８９５．１のアクセプタＦＷへの移植であり、これによりバリアントＴａｕ０１ ＨＡを作成する。次いで、ヒト化バージョンのＴａｕ０１ ＨＢにおいて、位置１、４、３５、４９、５８、６１及び７６～７８における８個の４Å近接残基及び１個のＶＣＩ残基をマウス等価残基へと復帰突然変異させ、配列をインシリコにて構築し、Ｔａｕ０１ ＨＤ～Ｔａｕ０１ ＨＬと命名される以下のバリアントにて一度にこれらを変異させた。表８はＴａｕ０１ ＶＨタンパク質配列のマウスバーションとヒト化バージョンを比較する。

Ｔａｕ０１ヒト化軽鎖バリアントの設計
Ｌ３３０３４からのフレームワークを使用し、ヒト化構築物に関するＤＮＡ及びタンパク質を設計した。ヒト化Ｔａｕ０１の初期バージョンを生成するために、Ｌ３３０３４のアクセプタＦＷへと移植される、Ｔａｕ０１ ＶＫ由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を示す。バリアントＴａｕ０１ ＫＢにおけるマウスの等価残基へと復帰突然変異させたＴａｕ０１ ＫＡにおいて、位置３４、３６、４４、５３、６９及び７１における５個の一致しない４Å近接残基及び１個のＶＣＩ残基が存在する（表１２）。

これらの残基を、配列をインシリコにて構築し、Ｔａｕ０１ ＫＤ～Ｔａｕ０１ ＫＩと命名される以下のバリアントにて一度にこれらを変異させたバージョンＴａｕ０１ ＫＧにおいて、マウス残基Ｔに復帰突然変異させた残基Ｋもヒト生殖系列残基Ｓへと変異させた。この追加のバリアントをＴａｕ０１ ＫＪと命名した。

重鎖及び軽鎖Ｃバージョンの設計
初期ヒト化バリアントの設計に続き、Ｔａｕ０１ ＨＡＫＡの相同性モデルを構築及び評価した。後者のモデルを、マウス抗体のモデルに重ね合わせた。復帰突然変異について同定された各位置及びそれらの位置周辺の３Å残基を強調表示し、モデルにて試験した。このデータに基づき、復帰突然変異するのにどの残基が最も重要であるかについて予測をした。これらの予測は、重鎖に関するＨＣバージョン（表８）及び軽鎖に関するＫＣバージョン（表１２）を形成するために組み込まれた。

例４（ヒト化抗体の生成及び特性）
Ｔａｕ０１ヒト化抗体の生成
Ｔａｕ０１ ＨＡ／Ｂ／Ｃ及びＫＡ／Ｂ／Ｃのための配列を、ヒト細胞により優先的に使用されるコドンを使用してコドン最適化し、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔにより合成した。ＫＡ／Ｂ／Ｃ及びＨＡ／Ｂ／Ｃ構築物をＰＣＲ増幅させ、リガーゼ非依存性クローニングにてそれぞれｐＨｕＫ及びｐＨｕＧ４へとクローニングし、ＴＯＰ１０細菌を形質転換させるために使用した。続いて、バージョンＨＡ又はＫＡをＰＣＲ突然変異誘発により修飾し、表４のプライマーを使用して表８又は表１２それぞれに注釈をつけた他のヒト化バリアントを得た。

クローンを配列決定し、プラスミドＤＮＡをＱＩＡＧＥＮ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット又はＱｉａｇｅｎ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍａｘｉｐｒｅｐキットを使用して調製した。発現構築物配列（ＨＡ、ＨＢ、ＨＣ、ＫＡ、ＫＢ、及びＫＣ）を図９～図１４に示す。

抗体発現
（ヒト化又はキメラ）ＶＨ及びＶＫをコードする発現プラスミド調製物を使用してＥｘｐｉＣＨＯ細胞をトランスフェクトし、血清を含まない培地にて７日間培養した。その上で、分泌された抗体を含有する条件培地を収集した。ＥｘｐｉＣＨＯ細胞条件培地中のＩｇＧ４κ抗体の濃度をＯｃｔｅｔにより測定し、表１４Ａ～Ｃにこれを示す。大半の抗体を良好な発現レベルにて産生した。





^＊トランスフェクションコントロール、Ｈｕ１２１０ ＨｕＧ１Ｋの発現もまた減少した（予測レベルは約１００μｇ／ｍＬ）。

ヒト化抗体の初期バージョンによる抗原結合
提供されたタウＣ３抗原に対するヒト化バリアントの結合を、例５に説明される結合ＥＬＩＳＡにより検査した。図１５に示されるデータは、ＫＡ／ＫＢ軽鎖と組み合わせたＨＡ／ＨＢ重鎖からなるヒト化抗体を用いるタウＣ３の結合ＥＬＩＳＡを提示する。ＨＡＫＡ及びＨＡＫＢヒト化抗体はタウＣ３に対して結合しない。ＭｏＴａｕ０１ ＨｕＧ４Ｋキメラは、０．６５ｎＭのＥＣ５０値でタウＣ３に結合し、ＨＢＫＡ及びＨＢＫＢバリアントは、同様のＥＣ５０値で結合し、ＨＢＫＢバージョンが最も近い（０．７８ｎＭ）。

このデータを考慮した上で、ヒト化重鎖及び軽鎖の更なるバージョンは、それぞれ単一の復帰突然変異を伴った状態で発現された（表８及び表１２）。図１６は、ＥＬＩＳＡによりタウＣ３に対する結合を検査した、重鎖単一変異体及びＫＡ～ＫＣと組み合わせたＨＣバージョンの結果を示す。データは、重鎖単一変異体は、タウＣ３に対してキメラ抗体と同様に結合不可能であったことを示す。ＫＡ～ＫＣと組み合わせたＨＢ及びＨＣバージョンは最も高いＥＣ５０値を伴いタウＣ３に結合し、ＨＢＫＢ及びＨＢＫＣはキメラ抗体に最も近い値を提示している（それぞれ、０．８１ｎＭ及び０．８４ｎＭ）。これらの結果を、セクション８．１２（図１７）にて説明するタウＣ３のある濃度を使用したＯｃｔｅｔ機器でのスクリーニングアッセイを使用して確認した。Ｏｃｔｅｔデータは、タウＣ３タンパク質の性質に起因すると考えられる２相会合及び解離イベントが観察される可能性があることから、最適ではない。ただし、Ｏｃｔｅｔデータはヒト化候補をスクリーニング及びランキングするには十分である。

ＨＢ／ＨＣは最良の重鎖バージョンであることから、すべての軽鎖バージョン（ＫＡ～ＫＪ）と組み合わせたこれらのタウＣ３に対する結合を、結合ＥＬＩＳＡ（図１８）及びＯｃｔｅｔスクリーニングアッセイ（図１９Ａ及び図１９Ｂ）により検査した。軽鎖単一変異体の多くは、タウＣ３に対する結合を保持することが可能であるが、ＫＥ、ＫＧ、ＫＩ及びＫＪといった軽鎖バージョンは、両方のアッセイにて最も高く順位付けされた。

第２ラウンドのヒト化抗体の設計及び生成
初期ヒト化バリアントに関する最適以下の結合結果に基づき、ＨＣバージョン及びＫＣバージョン（それぞれＨＭ～ＨＯ及びＫＬ及びＫＭ）へと追加の復帰突然変異を組み込むことで、又はＫＡバージョン（ＫＮ～ＫＰ）における２つの復帰突然変異を組み合わせることで組み込むことにより、第２ラウンドのバリアントを設計した（表８及び表１２）。突然変異誘発、ＤＮＡ調製、発現及び定量化を実行した。得られた発現レベルを表１４Ｄ及び表１４Ｅに示した。大半の抗体は良好な発現レベルにて産生された。

第２ラウンドのヒト化Ｔａｕ０１抗体による抗原結合
重鎖を評価するため、軽鎖ＫＡ、ＫＢ、ＫＧ、ＫＩ、ＫＪと組み合わせられたＨＭ、ＨＮ及びＨＯを含有する抗体バリアントの結合活性を、タウＣ３に対してＥＬＩＳＡ（図２０）及びＯｃｔｅｔ（図２１）により検査した。ＨＭ及びＨＯバリアントを、両方のアッセイにて最高位に順位付けした。ＨＯバリアントとＨＭバリアントとの間の唯一の差異は、ＨＮバリアントにも存在している位置４におけるＬ～Ｖの追加の復帰突然変異である。ＨＮバージョンはＨＭバージョンと同様に結合しなかったため、Ｌ～Ｖの復帰突然変異は必要であるとは見なされなかった。そのため、ＨＭを第２ラウンドの設計に由来する最上位の重鎖として選択した。

リード重鎖ＨＭを、複数の軽鎖であるＫＡ～ＫＣ、前述箇所で強調表示した選択された単一変異体（ＫＥ、ＫＧ、ＫＩ、ＫＪ）及び第２ラウンドの設計であるＫＬ、ＫＮ、ＫＯ、ＫＰを用いて発現させた。比較のため、早期に好ましい重鎖であるＨＣと組み合わせたこれらの軽鎖もまた発現させた。タウＣ３に対するこれらのヒト化抗体バリアントの結合を、結合ＥＬＩＳＡ（図２２）により検査した。全体的に見て、ＨＭバリアントは、ＨＣバリアントよりも高いＥＣ５０を伴って結合した。このため、前述のバリアントをＯｃｔｅｔスクリーニングアッセイにて評価した（図２３）。抗体バリアントであるＨＭＫＥ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ及びＨＭＫＰを、両方のアッセイにて最高位に順位付けした。Ｏｃｔｅｔによるリーディング抗体バリアントと比較して、ＨＣ／ＨＭと組み合わせたＫＭ軽鎖もまたスクリーニングした（図２４Ａ）。ＨＭＫＭバージョンはＯｃｔｅｔスクリーニングアッセイにて非常に高位に順位付けした。一方でＨＣＫＭは最下位に順位付けした。ＦＬタウに対するヒト化リードの結合を、Ｏｃｔｅｔを使用してもまた検査し、どのくらいの選択性を保持しているかを測定した（図２４Ｂ）。５００ｎＭのＦＬタウと共に得られた信号は非常に低いものであり（０．０３～０．０７ｎｍ）、これは非特異性結合の範囲であった。

Ｏｃｔｅｔにて観察された結合データを更に評価するため、オフレートランキング試験をＢｉａｃｏｒｅ２００機器にて実施した。Ｂｉａｃｏｒｅは、Ｏｃｔｅｔよりも更に大きな選択性を提供し、抗原を安定化するアミンカップリングによるＣＭ５チップ上へのタウＣ３の固定化を促進させた。これにより、安定したベースライン及び良好な再現性のある反応を有する、より高品質のデータが生成される。タウＣ３が固定化されたら、ある濃度（５ｎＭ）の抗体を加えて、その後解離ステップ及び再生ステップを行う（セクション８．２０）。二相減衰モデル（図２５Ｂ）又は第２オフレートのみにフィットする一相減衰（図２５Ａ）を使用し、オフレートをフィットさせた。次いで、フィットを使用して得られたオフレートに基づき、候補を順位付けして比較した。データはＯｃｔｅｔ結果と一致した（ただしランキングの順位は異なる）。最大限遅いオフレートを有するヒト化バリアントとしてＴａｕ０１ ＨＭＫＭ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ、ＨＭＫＮ及びＨＭＫＥを強調表示している、キメラ候補及びヒト化候補に対するＦＬタウの結合の欠如もまた、タンパク質Ｇチップ上へ抗体を充填し、２５０ｎＭのＦＬタウを加えることにより、Ｂｉａｃｏｒｅにより確認された。図２６は、ＭｏＴａｕ０１ ＨｕＧ４ｋ又はＴａｕ０１ＨＣＫＢのいずれについても結合は何ら観察されなかったことを示す。

ヒト化Ｔａｕ０１候補抗体の熱安定性
この実験の目的は、３５℃～９５℃で変化する高温で１０分間供し、４℃に冷却し、それぞれの候補のＥＣ８０濃度にて結合ＥＬＩＳＡにて使用される場合（セクション８．１５）の、キメラ抗体及びいくつかのヒト化抗体（Ｔａｕ０１、ＨＣＫＧ、ＨＣＫＮ、ＨＭＫＥ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ）の熱安定性を検査することであった。すべてのヒト化候補抗体は、キメラ抗体よりも更に安定しており、６７～６８℃までタウＣ３に対する結合能力を保持し、その後タウＣ３に対する結合は減少した（図２７）。ヒト化バリアントは、最大で約５５℃までしか結合を保持しなかったキメラ抗体ＭｏＴａｕ０１ ＨｕＧ４ｋと比較すると、熱安定性が上昇したことを呈する。ＨＭ重鎖を含有するバリアントは、検査されたＨＣ重鎖バリアントよりもわずかに高温の結合を保持した。

リードヒト化Ｔａｕ０１候補抗体の選択
これらのすべての結果を総合すると、セクション８．１６にて説明されるように、アフィニティークロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィーを使用してスケールアップ及び精製するために、リードヒト化抗体バリアントであるＴａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＭ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ及びＨＭＫＰを選択した。精製された抗体を、一連の生物物理学的アッセイにて更に特徴付ける。タウＣ３に対し、より弱い結合を有するＨＣＫＢヒト化候補を、播種アッセイでのランキング用に比較抗体として使用するために、発現及び精製を目的としてスケールアップした。これにより、本発明者らはインビトロでの抗体親和性と細胞アッセイにおける作用強度との相関を更に検査することが可能となった。

ヒト化Ｔａｕ０１候補抗体の凝集
精製後のＱＣプロセスの一環として、抗体サンプルをＳＥＣ－ＭＡＬＳ／ＤＬＳ、続いて質量分析に供した。絶対モル質量を測定し、凝集を確認するため、精製抗体サンプルをＨＰＬＣシステムでのサイズ排除カラムへと挿入し、多角度光散乱検出器により分析した。ＭｏＴａｕ０１ ＨｕＧ４ｋ及びＴａｕ０１ ＨＭＫＭのプロファイルは、凝集の徴候を何ら示さず、平均分子量は約１４７～１４８ｋＤａであり、これは、この分析セットアップにおけるＩｇＧモノマーに関する予測範囲である（図２８Ａ）。Ｔａｕ０１ ＨＣＫＢ抗体のプロファイルは、１７９．６ｋＤａの分子量を生じるというデータを歪ませるブロードピークを有する（図２８Ｂ）。３つの抗体すべてが単分散（Ｍｗ／Ｍｎ＜１．０５）しており、凝集の徴候は何ら提示しない。

動的光散乱は、可溶な凝集の検出のために静的光散乱（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）に対する補完的な技術であり、ヒト化バリアントであるＴａｕ０１ ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ及びＨＭＫＥをＱＣするために使用した。抗体に関して、Ｚ平均径又は流体力学的径は、およそ１０であることと予測されている。分子量分散度（Ｐｄｌ）は、サンプルが単分散する場合には０．１未満である必要がある。図２９に示されるように、すべての抗体サンプルは、単分散であり、モノクローナル抗体のサイズと一致する１つの主要な集団を含有する。

抗体の正確な分子量を確認するため、質量分析を無変化抗体サンプル及び低減された抗体サンプル上で実施し、図３０Ａ～Ｇにこれを示す。分子量は、検査されたすべての抗体について予測された分子量及び確認されたアミノ酸配列と一致した。他の傾向性はフラグが立たなかった。全体的に見て、精製キメラ抗体及びヒト化抗体はＱＣを通過した。

タウＣ３に対するヒト化Ｔａｕ０１候補抗体の動態研究
結合相互作用の親和性を測定するため、アミンカップリングによるＣＭ５チップにおけるタウＣ３の固定化及びタウＣ３上でのそれぞれの抗体の濃度系列の挿入を含む、Ｂｉａｃｏｒｅ動態アッセイを開発した。キメラ抗体は５７ｐＭのＫＤでタウＣ３に結合する（図３１Ａ）。

図３１Ｂは、Ｔａｕ０１ ＨＣＫＢがタウＣ３に対して最も弱い結合剤である（１．２ｎＭ）ことを示し、次が１１０ｐＭの親和性でタウＣ３に対して結合するＨＭＫＭである（図３１Ｇ）。図３１Ｃ～Ｆに示される、Ｔａｕ０１ ＨＭＫＯ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＰ及びＨＭＫＥは、キメラ抗体と同等、又はこれよりも緊密なＫＤ値を有する。ただし、キメラと比較した場合、オフレートはすべてのヒト化候補でわずかに速い（ヒト化では０．００１～０．００４、対してキメラでは０．０００７）。ｋａは機器の限界に存在するため、絶対値は注意して比較されなければならない点に留意されたい。抗体ＨＭＫＮ、ＨＭＫＰ及びＨＭＫＥはピコモル濃度で結合し、検査されるすべてのヒト化バリアントの最も遅いオフレートを有すると結論付けることができる。

ヒト化Ｔａｕ０１候補抗体の融解温度（Ｔｍ）の決定
リード抗体であるＴａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＭ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰの融解温度を測定するために、サーマルシフトアッセイを実施した。サンプルを、蛍光色素（Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ）と共にｑＰＣＲサーマルサイクラーにてサイクルごとに１℃上昇させながら、７１サイクルにわたってインキュベートした（セクション８．２１）。ヒト化抗体のＴｍは６８～６９℃であると計算された。（図３２）。

ヒト化Ｔａｕ０１候補抗体の非特異的タンパク質－タンパク質相互作用（ＣＩＣ）
バルク精製されたヒトポリクローナルＩｇＧを使用する相互作用クロマトグラフィーは、非特異的タンパク質－タンパク質相互作用をモニタリングするための技術であり、例５に説明されるように下流の製造問題を引き起こし得る任意の溶解性の課題の指示を提供することができる。上昇した保持指数（ｋ’）は、自己相互作用性質及び低い溶解度を示す。ヒト化Ｔａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＭ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ候補抗体は、０．０３８未満の保持指数を示す。これは、非特異性相互作用及び良好な溶解性についての低い性質を示す（図３３）。

ヒト化Ｔａｕ０１候補抗体の溶解性
ヒト化Ｔａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＭ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ候補抗体を、溶媒吸収濃縮器（ＭＷＣＯ ７５００ｋＤａ）を使用して濃縮し、濃度を一定間隔で測定した。Ｔａｕ０１ ＨＭＫＰを１２３ｍｇ／ｍＬに濃縮し、Ｔａｕ０１ ＨＭＫＮ、ＨＭＫＭ及びＭｏＴａｕ０１ ＨｕＧ４Ｋ抗体を８７～８８ｍｇ／ｍＬに濃縮した（図３４）。Ｔａｕ０１ ＨＭＫＯ ＨｕＧ４Ｋを、見かけ上は沈殿させることなく５９ｍｇ／ｍＬに濃縮し、Ｔａｕ０１ ＨＭＫＥ ＨｕＧ４Ｋを５７ｍｇ／ｍＬに濃縮した。データは、抗体が最大５７ｍｇ／ｍＬの濃度では沈殿が易発しにくいことを示唆する。
円偏光二色性によるヒト化Ｔａｕ０１候補抗体の凍結／解凍及び熱応力分析

円偏光二色性（ＣＤ）は、本発明者らが精製されたタンパク質サンプルの全体的な二次構造を観察可能とする分光技術である。

凍結解凍（ＦＴ）応力試験は、精製候補抗体のサンプルを－８０℃で１５分間１０サイクルに供し、続いて室温で１５分間解凍することを含んだ。熱応力試験を実施するため、精製候補抗体のサンプルを、ａ）４℃、ｂ）室温（ＲＴ）、ｃ）３７℃及びｄ）５０℃の温度に、２５日間ばく露した。

次いで、サンプルを円偏光二色性により分析し、二次構造が保持されているかどうかを確認した（図３５）。検査されたすべてのヒト化バリアントは、本発明者らの内部しきい値を通過する。全体として、データは、熱応力及び凍結／解凍サイクルは、ヒト化Ｔａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＭ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ候補抗体の二次構造に影響しなかったことが示唆される。

ヒト化Ｔａｕ０１候補抗体の等電点分析
キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を使用し、ヒト化候補抗体のｐＩ分析を実施した。この技術により、キャピラリーを横断するｐＨグラジエントを使用し、抗体をそれらの等電点（ｐＩ）に従い分離することが可能である。図３６はクロマトグラムを示し、表１５は各抗体の１つ以上の主要なｐＩアイソフォーム（１０％のピーク領域より大きいと定義）及び各抗体に関するｐＩ範囲を提示する。ヒト化Ｔａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＭ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ候補についての主要な等電点は、約８．８６～８．８１である。

ヒト化Ｔａｕ０１候補抗体の血清安定性評価
キメラ抗体及びヒト化抗体の精製サンプルを、マウス、ヒト及びカニクイザルの血清中で２１日間にわたってインキュベートさせた。３種類の異なる血清中でインキュベートされたＴａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＭ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ候補抗体の結合を、ＰＢＳ中でインキュベートされた抗体、及びタウＣ３に対する結合ＥＬＩＳＡによる４℃のポジティブコントロールサンプルと比較した（図３７）。Ｔａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＭ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ候補抗体は、マウス、ヒト及びカニクイザルの血清中でインキュベートされた後、それらの結合能を保持した。

ＭｏＴａｕ０１ ＨｕＧ４ｋと比較した、リードＴａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ、ＨＭＫＭヒト化候補に関するデータの概要
表１６は、キメラ抗体であるＭｏＴａｕ０１ ＨｕＧ４ｋと比較した、リードヒト化Ｔａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰ、ＨＭＫＭ抗体候補の、結合、動態親和性及び生物物理学的特性の概要を示す。すべてのヒト化候補は、ピコモル濃度範囲で結合するが、これらのうち、Ｔａｕ０１ ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ及びＨＭＫＰは、最も高い親和性及び最も遅いオフレートを有し、本発明者らの生物物理学的アッセイのすべてにも合格する。すべてのデータを考慮すると、最も高い親和性、遅いオフレートを有し、生物物理学的アッセイにおける潜在的な傾向性を何ら示さなかったため、Ｔａｕ０１ ＨＭＫＰをリードヒト化候補として選択した。Ｔａｕ０１ ＨＭＫＮ及びＴａｕ０１ ＨＭＫＯ及びＫＭＫＥは、優れた特性も有することから、バックアップ用リードヒト化候補としてすべてが良好である。

結論
このプロジェクトの目的は、ＭｏＴａｕ０１抗体をヒト化すること、及び得られた抗体が、キメラ抗体と比較した場合に、匹敵する親和性を伴ってタウＣ３に対して結合可能であると保証することである。ＭｏＴａｕ０１抗体は、結合親和性が著しく欠失することなしに、ヒト化抗体として設計され、発現する。Ｔａｕ０１ ＨＭＫＥ、ＨＭＫＭ、ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ、ＨＭＫＰヒト化抗体は、ピコモル濃度範囲にて、結合ＥＬＩＳＡ、Ｏｃｔｅｔランキング及びＢｉａｃｏｒｅを使用した動態研究における高い親和性を示し（図３１）、これらはまた、本発明者らの生物物理学的アッセイのすべてを合格する。

Ｔａｕ０１ ＨＭＫＰ抗体は、最良の薬物様特性、及び優れた結合の動態を示す。そのため、これはリード候補として選択された（表１６）。本発明者らの見解では、優れた結合、発現、熱安定性、親和性及び生物物理学的特徴といった特性の組み合わせにより、Ｔａｕ０１ ＨＭＫＰは更なる開発にとって好適な候補抗体となる。Ｔａｕ０１ ＨＭＫＮ、ＨＭＫＯ及びＨＭＫＥはまた、優れた特性を呈し、これらはヒト化リード候補の非常に良好なバックアップである。

例５（プロトコル）
以下のプロトコル／手順を例１～４にて使用した。

全ＲＮＡの単離用ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉプロトコル（Ｑｉａｇｅｎ）
１．バッファＲＬＴを追加することで細胞を破壊。ペレット状の細胞に関して、管をはじくことで細胞ペレットを完全にほぐす。バッファＲＬＴ（６００μＬ）を加え、ステップ２に進む。注意：細胞ペレットをほぐすのが不完全であることで、非効率的な溶解及び収量の減少を引き起こす可能性がある。
２．ＲＮａｓｅフリーシリンジに装着された１８～２０ゲージの針を少なくとも５回可溶化液に通過させた細胞を均質化する。
３．１容量の７０％エタノールを、均質化させた可溶化液に加え、ピペット操作により完全に混合させる。遠心分離はしてはならない。可溶化液の量は、均質化中の損失に起因して６００μＬ未満であり得る。
４．最大７００μＬの、それまでに形成された可能性のある任意の沈殿物を含むサンプルを、２ｍＬの採取管中に配置されたＲＮｅａｓｙスピンカラムに移す。蓋を静かに閉じ、８０００ｘｇ以上で１５秒間遠心分離させる。フロースルーを廃棄する。遠心分離管をステップ５にて再利用する。
５．７００μＬの緩衝液ＲＷ１をＲＮｅａｓｙカラムに加える。蓋を静かに閉じ、８０００ｘｇ以上で１５秒間遠心分離させてカラムメンブレンを洗浄する。
フロースルーを廃棄する。遠心分離管をステップ６にて再利用する。
６．５００μＬの緩衝液ＲＰＥをＲＮｅａｓｙカラムに加える。蓋を静かに閉じ、８０００ｘｇ以上で１５秒間遠心分離させてカラムメンブレンを洗浄する。
フロースルーを廃棄する。遠心分離管をステップ７にて再利用する。
６．別の５００μＬの緩衝液ＲＰＥをＲＮｅａｓｙカラムに加える。蓋を静かに閉じ、８０００ｘｇ以上で２分間遠心分離させ、ＲＮｅａｓｙスピンカラムメンブレンを乾燥させる。
７．新しい２ｍＬの採取管にＲＮｅａｓｙスピンカラムを配置し、フロースルーを含む古い採取管を廃棄する。蓋を静かに閉じ、最高速度で１分間遠心分離する。
８．溶出するために、ＲＮｅａｓｙカラムを新しい１．５ｍＬの採取管に移す。３０μＬのＲＮａｓｅフリー水を、ＲＮｅａｓｙスピンカラムメンブレン上へと直接加える。管を静かに閉じる。１分間静置し、次いで８０００ｘｇ以上で１分間遠心分離させる。

第１鎖ｃＤＮＡ合成のためのプロトコル（ＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）
１．微量遠心管中にＲＮＡサンプルを配置し、ＲＮａｓｅフリー水を加え、ＲＮＡを適切な容量とする（２０μＬ－１２倍希釈液、表Ａを参照されたい）。
２．ＲＮＡ溶液を６５℃まで１０分間加熱し、次いで氷上で冷却させる。バルク第１鎖ｃＤＮＡ反応ミックスを静かにピペット操作し、均一な懸濁液を得る。（保存時、ＢＳＡはミックス中に沈殿する場合がある。この沈殿物はインキュベーション中に溶解する）。
３．バルク第１鎖ｃＤＮＡ反応ミックス（１１μＬ）を滅菌した１．５ｍＬ又は０．５ｍＬの微量遠心管に加える。この管に、１μＬのＤＴＴ溶液、１μＬ（０．２μｇ、１：２５希釈液）のＮｏｔＩ－ｄ（Ｔ）１８プライマー及び熱変性ＲＮＡを加える。上下のピペット操作を数回行い、混合する。
４．３７℃で１時間インキュベートし、転写酵素を９５℃で５分間熱不活性化する。

ｃＤＮＡ精製
１．後のＰＣＲ反応に干渉する可能性がある混入している第１鎖ｃＤＮＡプライマーを除去するように設計された簡単なプロトコル。
２．９９μＬの緩衝液ＱＧ（Ｑｉａｇｅｎ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔから、Ｃａｔ．Ｎｏ：２８７０４）及び３３μＬのＩＰＡを加える。混合し、ＱｉａＱｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎカラムに加える。回転させ、フロースルーを廃棄する。
３．カラムを５００μＬの緩衝液ＱＧで１回洗浄する。フロースルーを廃棄する。
４．カラムを７５０μＬの緩衝液ＰＥで１回洗浄する。フロースルーを廃棄する。
５．カラムを回転させ、残留アルコールを除去し、カラムを乾燥させる。
６．６５℃に予め加熱した５０μＬの蒸留水でｃＤＮＡを溶出させる。

マウス可変領域のＰＣＲクローニング
１．表１及び表２にあるプライマーを使用し、精製されたｃＤＮＡ上のＰＣＲ反応をセットアップする。以下のように、各反応（ＭＨＶ１～１２及び１４及びＭＫＶ１～１１）にて異なるフォワードプライマーを使用する。

２．サイクル：

３．各ＰＣＲ反応からの５μＬサンプルを２％（ｗ／ｖ）アガロースゲル上にて電気泳動させ、どのリーダプライマーがＰＣＲ産物を産生するかを測定する。陽性ＰＣＲクローンのサイズは、約４２０～５００ｂｐである。
４．陽性クローンに対し、ＰＣＲはＱＩＡＧＥＮ製のＰＣＲ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎキットを使用して残存するサンプルを精製し、４０μＬのヌクレアーゼフリー水へと溶出させる。Ｍ１３フォワードプライマー及びＭ１３リバースプライマーを使用するＰＣＲ断片のシーケンシングのために外部の請負業者（例えば、ＧＡＴＣ）に送る。

ＱＩＡｑｕｉｃｋ ＰＣＲ精製微量遠心機及び真空プロトコル（ＱＩＡＧＥＮ）
１．すべての遠心分離ステップは、従来の卓上微量遠心機にて１７，９００ｘｇ（１３，０００ｒｐｍ）で行う。
２．５容量の緩衝液ＰＢを、１容量のＰＣＲ反応に加え、混合する。混合物の色がオレンジ色又は紫色の場合には、１０μＬの３Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）を加え、混合する。混合物の色は黄色に変化する。
３．ＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを供給される２ｍＬの採取管に、又は真空マニホールド中へと配置する。
４．ＤＮＡを結合するため、サンプルをＱＩＡｑｕｉｃｋカラムに適用して３０～６０秒遠心分離、又はサンプルがカラムを通って通過するまで、真空をマニホールドに適用する。フロースルーを廃棄し、ＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを同じ管へと戻す。
５．洗浄するために、０．７５ｍＬ緩衝液ＰＥをＱＩＡｑｕｉｃｋカラムに加え、３０～６０秒遠心分離、又は真空を適用する。フロースルーを廃棄し、ＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを同じ管に戻す。
６．２ｍＬの採取管（供給される）中でカラムを１分間遠心分離する。
７．清浄な１．５ｍＬの微量遠心管中に各ＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを配置する。
８．ＤＮＡを溶出するため、４０～５０μＬの緩衝液ＥＢ（１０ｍＭのトリスＣｌ、ｐＨ８．５）をＱＩＡｑｕｉｃｋメンブレンの中央に加え、カラムを１分間遠心分離する。

ＬＩＣによるｍＡｂ発現ベクターの生成
挿入物調製
１．配列を使用して、ＬＩＣプライマーを生成する。
２．ＬＩＣプライマーを使用して、コドン最適化され、合成された遺伝子（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）上でＬＩＣ ＰＣＲを実施（表４）。
３．ＰＣＲ反応を以下のようにセットアップする：

注意：このステップには、平滑末端ＰＣＲ産物を生成するポリメラーゼを使用する必要がある。Ｔオーバーハングを産生する他のポリメラーゼは好適ではない。
４．サイクル：

５．正確なサイズの産物（およそ３７０ｂｐでなければならない）を確認するため、ゲル上で５μＬのＰＣＲ産物を走らせる。
６．ＱＩＡＧＥＮ製のＰＣＲ精製キットを使用して産物をＰＣＲ精製し、ヌクレオチド及びプライマーを除去する。４０μＬのヌクレアーゼフリー水へと溶出させる。
７．Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼ処理には以下を含める：
ＰＣＲ産物 ４０μＬ
１０倍のＮＥＢ２ ４．５μＬ
ｄＴＴＰ（１００ｍＭ）ＮＥＢ １．２５μＬ
Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼ ＮＥＢ １μＬ
８．室温で３０分間インキュベートし、次いで７０℃で２０分間酵素を不活性化する。
ベクター調製
９．５０℃で３時間又は一晩、以下をインキュベートすることで、ＢｆｕＡＩを使用して、ＬＩＣベクター（図３及び図４にて示されるベクターマップ）を消化する：
１０倍ＮＥＢ緩衝液３ １０μＬ
１００倍ＢＳＡ １μＬ
ＢｆｕＡ１ ５μＬ
ＬＩＣベクター ５μｇ
ｄＨ_２Ｏ １００μＬまで
１０．ＢｆｕＡＩ消化後、２μＬのＢａｍ ＨＩを加え、３７℃で２時間インキュベートする。
１１．１％（ｗ／ｖ）アガロース／１倍のＳＹＢＲ安全ＤＮＡ染色を含有する１倍ＴＡＥゲル上で消化ベクターを実行する。２つのバンドが可視化され得る－より高いＭＷバンドを切り取り、ゲル抽出キットを使用して抽出し、５０μＬのＥＢで溶出させる。
１２．Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼはベクターを以下のように処理する：
１０倍ＮＥＢ緩衝液２ ６μＬ
１００ｍＭ ｄＡＴＰ １．５μＬ
Ｔ４ ＤＮＡ Ｐｏｌ １μＬ
ＢｆｕＡ１消化ベクター ５０μＬ
１３．室温で３０分間インキュベートし、次いで７０℃で２０分間酵素を不活性化する。
クローニング
１４．全１０μＬのヌクレアーゼフリー水にて２０分間室温にて、１μＬの挿入物と０．５μＬベクターとを混合する。ベクターの単独形質転換を常に実施する。
１５．ライゲーションミックスを使用し、製造業者の指示に従い２５～５０μＬの化学的な形質転換受容性のあるＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＴＯＰ１０細菌を形質転換し、カナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）を含有する９０ｍｍ径のＬＢ寒天プレート上で広げる。３７℃で一晩インキュベートする。
形質転換からコロニーを選択する
１６．Ｐｈｕｓｉｏｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒミックスを使用してＰＣＲ確認する。


１７．２％アガロースｅ－ゲルカセット上で各ＰＣＲ反応を実行し、１５分間実行して、ゲル上の任意のＰＣＲ産物バンドのサイズを決定する。
１８．カナマイシンを追加したＬＢを使用し、一晩スターター培養物を増殖させて構築物をミニプレップし、可変遺伝子のうち少なくとも２つの別個の陽性クローンからＤＮＡを（同じプライマーを使用して）配列決定し、ＰＣＲ反応自体に起因する何らかの可能性があるエラーを特定する。

ＴＯＰ１０（商標）大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の形質転換（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎプロトコル）
１．１つ以上のライゲーション反応液を含有する１本以上のバイアルを短時間遠心分離し、氷上に配置する。
２．１つ又は２つ以上のライゲーション／形質転換のため、氷上で、５０μＬバイアルのＯｎｅ Ｓｈｏｔ細胞を解凍する。
３．１～２μＬの各ライゲーション反応液を形質転換受容性細胞のバイアルへと直接ピペット操作して入れ、静かに叩くことで混合させる。上下にピペット操作することで混合してはならない。１つ以上の残りのライゲーション混合物を、－２０℃で保存することが可能である。
４．１本以上のバイアルを氷上で１５～３０分間インキュベートする。
５．４２℃の水浴中でちょうど３０秒間インキュベートし、次いで２分間氷上に配置する。
６．２５０μＬの予め加温したＳ．Ｏ．Ｃ培地を各バイアルに加える。
７．１本以上のバイアルを、３７℃でちょうど１時間、２２５ｒｐｍで振盪インキュベータ中にて振盪させる。
８．各形質転換バイアルから２００μＬを、５００μｇ／ｍＬのカナマイシンを含有する個々のラベル付けしたＬＢ寒天プレート上に広げる。
９．１枚以上のプレートを裏返し、３７℃で一晩インキュベートする。

ＱＩＡｐｒｅｐ（登録商標）（Ｑｉａｇｅｎプロトコル）を使用するプラスミドＤＮＡミニプレップ単離
１．２５０μＬの緩衝液Ｐ１中でペレット状の細菌細胞を再懸濁し、微量遠心管に移す。ＲＮａｓｅＡが緩衝液Ｐ１に加えられたことを確認する。
２．２５０μＬの緩衝液Ｐ２を加え、混合するために管を静かに４～６回反転させる。
３．３５０μＬの緩衝液Ｎ３を加え、管を直ちに、ただし静かに４～６回反転させる。溶液は濁るはずである。
４．卓上微量遠心機にて、１３，０００ｒｐｍ（約１７，９００ｘｇ）で１０分間遠心分離する。小型の白色ペレットが形成する。
５．ステップ４からの上清を、ピペット操作することによりＱＩＡｐｒｅｐスピンカラムに塗布する。
６．３０～６０秒間遠心分離する。フロースルーを廃棄する。
７．０．５ｍＬの緩衝液ＰＢを加え、３０～６０秒間遠心分離することでカラムを洗浄する。
８．０．７５ｍＬの緩衝液ＰＥを加え、３０～６０秒間遠心分離することでカラムを洗浄する。
９．フロースルーを廃棄し、更に１分間遠心分離にかける。
１０．清浄な１．５ｍＬの微量遠心管中にＱＩＡｐｒｅｐカラムを配置する。ＤＮＡを溶出するため、５０μＬのヌクレアーゼフリー水をＱＩＡｐｒｅｐスピンカラムの中央に加え、１分間静置し、１分間遠心分離する。

２４ウェルプレートでの１ｍＬのトランスフェクションにおけるＥｘｐｉＣＨＯトランスフェクション（ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍキット－Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）
１．細胞がおよそ４～６×１０^６生存細胞／ｍＬの密度に到達するまで、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞を継代培養し、かつ増やす。
２．トランスフェクション前日（－１日目）に、ＥｘｐｉＣＨＯ培養物を３～４×１０^６生存細胞の最終密度に分離し、この細胞を一晩増殖させる。
３．６×１０^６生存細胞／ｍＬまで細胞を希釈する。
４．トランスフェクションに使用される２４ウェルプレートの各ウェルへと０．９ｍＬの細胞を等分する。
５．ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ／ＤＮＡ複合体を調製する。
６．１μＬのＤＮＡをトランスフェクトされる各ウェルに対して５０μＬの最終容量であるＯｐｔｉＰｒｏを加えることで、プラスミドＤＮＡを希釈する（トランスフェクトされる培養容量ｍＬ当たり１μｇのプラスミドＤＮＡ）。
７．トランスフェクトされる各ウェルについて、４６μＬのＯｐｔｉＰｒｏ培地中に、４μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅＣＨＯ試薬を希釈させる（インキュベーション時間は必要ない）。
８．希釈したＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅＣＨＯを希釈したＤＮＡに加え、３～４回静かにピペット操作することで混合させる（インキュベーションは１～５分間）。
９．１００μＬの錯体形成混合物を、２４ウェルプレートの培養物を含有する各ウェルに加える。
１０．プレートをガス透過性の蓋で覆う。
１１．オービタルシェーカ上にて、８％のＣＯ２を含む３７℃のインキュベータ中の２４ウェルプレートをインキュベートする（１９ｍｍのオービタルスローを備えるシェーカに対する推奨振盪速度は２２５ｒｐｍ）。
１２．トランスフェクションの１８～２２時間後に、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅエンハンサ（６μＬのＥｘｐｉＣＨＯエンハンサ）及びＥｘｐｉＣＨＯフィード（１９０μＬのＥｘｐｉＣＨＯフィード）を加える。
１３．タンパク質発現は通常完了しており、上清はトランスフェクションの７日～８日後までに収集する準備ができている。

ＯｃｔｅｔによるＩｇＧ定量化
１．１００μＬの各濃度の検量線及びＥｘｐｉＣＨＯ上清を、以下のように調製する。
ａ．希釈液としてＥｘｐｉＣＨＯ発現培地を使用した、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．２５、１５．６、７．８１、３．９μｇ／ｍＬにおけるＨｕＧ４Ｋアイソタイプ標準
ｂ．（未知の）試験サンプル
２．２００μＬのＥｘｐｉＣＨＯ発現培地中に、プロテインＧで覆われたバイオセンサ（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を予浸する（１０分以上）。
３．４５μＬの標準サンプルと試験サンプルを、培地のみのコントロールを含む、３８４ウェルの傾斜底プレートへと２回で等分する。プレートを密封し、ベンチトップ遠心分離機にて回転（１０００ｒｐｍで１分間）させる。
４．プレートシールを取り外し、プレート及び予浸されたセンサをＯｃｔｅｔへと挿入する。
５．以下のように定量化を実施する：
ａ．１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．５）中で５秒間、プロテインＧコーティングしたセンサを再生し、ＥｘｐｉＣＨＯ発現培地中で５秒間中和する。３回繰り返す。
ｂ．標準又はサンプルを１２０秒間測定する。
ｃ．再生ステップ及び中和ステップを上記のように繰り返す。
６．データを分析ソフトウェアへとインポートし、データを用量反応－５ＰＬ重み付けフィットにフィットさせ、ＩｇＧ濃度（μｇ／ｍＬ）を得る。

タウＣ３結合ＥＬＩＳＡ
１．９６／３８４ウェルプレートのそれぞれにて、ウェル当たり１μｇ／ｍＬのＰＢＳ中タウＣ３の５０／３０μＬアリコートを用いて９４／３８４ウェルのマキシソーププレートをコーティングする。４℃で一晩インキュベートする。
２．ＰＢＳ－Ｔ（０．１％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。
３．９６／３８４ウェルプレートそれぞれにおいて、ウェルあたり１５０／８０μＬのＰＢＳ＋５％のＢＳＡ＋０．１％のＴｗｅｅｎ２０でブロッキングする。
４．３７℃で１時間にわたりインキュベートする。ＰＢＳ－Ｔ（０．１％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。
５．ＰＢＳ＋０．２％のＢＳＡ＋０．１％のＴｗｅｅｎ２０中で段階希釈された５０／３０μＬの一次抗体をアッセイプレート（それぞれ９６／３８４ウェルプレート）に加える。約４μｇ／ｍＬから始まる３倍の段階希釈液を使用する。インキュベーションステップ及び洗浄ステップ（ステップ４）を繰り返す。
６．ＰＢＳ＋０．２％のＢＳＡ＋０．１％のＴｗｅｅｎ２０中で抗ヒトカッパ鎖ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ Ａ７１６４－１ｍＬ）を１０ｍＬあたり３μＬに希釈し、５０／３０μＬを９６／３８４ウェルプレートそれぞれの各ウェルに加える。インキュベーションステップ及び洗浄ステップ（ステップ４）を繰り返す。
７．ウェルあたり７５／２０μＬのＫ－Ｂｌｕｅ基質（Ｎｅｏｇｅｎ）を加え、室温で５～１０分間インキュベートする。
８．５０／１０μＬのＲＥＤ ＳＴＯＰ溶液（Ｎｅｏｇｅｎ）を、９６／３８４ウェルプレートそれぞれの各ウェルに加えることで反応を停止させる。
９．Ｐｈｅｒａｓｔａｒ Ｐｌｕｓを使用し、６５０ｎｍにて吸光度を読み取る。

ＯｃｔｅｔによるＴａｕ０１バリアントのスクリーニング及び親和性の決定
１．使用前直ちに、プロテインＧコーティングしたセンサ（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）をＨＢＳ－Ｐ^＋緩衝液で１０分間インキュベートする。
２．１μｇ／ｍＬの抗体を、プロテインＧセンサ上へとＨＢＳ－Ｐ^＋中で６００秒間充填する（０．８～１ｎｍの固定化レベル）。
３．センサをＨＢＳ－Ｐ^＋中で１８０秒間平衡化させる。
４．スクリーニングアッセイのため、６００秒間、１０ｎＭのタウＣ３を使用して会合ステップを実施する。動態アッセイのために、約０．５μｇ／ｍＬの抗体をＨＢＳ－Ｐ^＋中に１０分間充填し、２０ｎＭ～０．３１ｎＭの濃度範囲のタウＣ３を使用して１０分間、会合ステップを実施する。
５．ＨＢＳ－Ｐ^＋中で６００秒間、解離ステップを実施する。
６．１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．５～２．０）で５～３０秒間センサを再生し、ＨＢＳ－Ｐ^＋緩衝液中で３０～６０秒間インキュベートすることにより中和する。３回繰り返す。

ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ Ｓｉｔｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓキット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）
１．以下に示すように、１つ以上の反応液を調製する。
ａ．５μＬの１０倍反応緩衝液
ｂ．０．１２μＬ（２５ｎｇ）のＲＨＡ又はＲＫＡテンプレート
ｃ．１．３μＬ（１２５ｎｇ）のオリゴヌクレオチド変異フォワードプライマー
ｄ．１．３μＬ（１２５ｎｇ）のオリゴヌクレオチド変異リバースプライマー
ｅ．１μＬのｄＮＴＰミックス
ｆ．１．５μＬのＱｕｉｋＳｏｌｕｔｉｏｎ試薬
ｇ．５０μＬの最終容量までのｄｄＨ２Ｏ
ｈ．１μＬのＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ酵素
２．以下の表にて概要が述べられているサイクリングパラメータを使用して各反応をサイクルする。

３．２μＬのＤｐｎ Ｉ制限酵素を加える。
４．静かに、かつ完全に各反応を混合し、短時間微量遠心機にかけ、次いで３７℃で５分間直ちにインキュベートして親のｄｓＤＮＡを消化する。
５．各反応に由来するＤｐｎ Ｉ処理された２μＬのＤＮＡを、それぞれ４５μＬ（＋２μＬのβ－ＭＥ）のＸＬ１０－Ｇｏｌｄ ｕｌｔｒａｃｏｍｐｅｔｅｎｔ細胞のアリコートへと形質転換する（ＴＯＰ１０（商標）の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の形質転換を確認されたい）。
６．Ｐｈｕｓｉｏｎ法、ミニプレップを使用してコロニーをスクリーニングし、正確な変異を確認するために配列決定する。

Ｑｉａｇｅｎ ＨｉＳｐｅｅｄ Ｍａｘｉｐｒｅｐシステムのプロトコル
１．新たに画線された選択プレート又は対象のクローンのグリセロールストックから選択し、カナマイシンを追加した２～５ｍＬのＬＢ培地のスターター培養物に接種する。２５０～３００ｒｐｍで振盪させながら、３７℃で約８時間インキュベートする。
２．スターター培養物を１／１０００に希釈し、スターター培養物からカナマイシンを追加した１５０～２５０ｍＬのＬＢ培地に接種し、２５０～３００ｒｐｍで振盪させながら、３７℃で一晩インキュベートする（１２～１６時間）。
３．６，０００ｘｇにて１５分間、細胞を収集する。上清を廃棄する。
４．ボルテックス操作又はピペット操作することにより、１０ｍＬの緩衝液Ｐ１中に細胞ペレットを完全に懸濁させる。
５．１０ｍＬの緩衝液Ｐ２を加える。勢いよく４～６回反転させて混合する。室温で５分間インキュベートする。
６．１０ｍＬの冷却された緩衝液Ｐ３を加える。勢いよく４～６回反転させて混合する。
７．ＱＩＡｆｉｌｔｅｒカートリッジのバレルへと可溶化液を注ぐ。室温で１０分間インキュベートする。
８．１０ｍＬの緩衝液ＱＢＴを塗布することでＨｉＳｐｅｅｄ Ｍａｘｉ Ｔｉｐを平衡化し、重力流により空にする。
９．ＱＩＡｆｉｌｔｅｒを使用し、可溶化液をろ過し、平衡化されたＨｉＳｐｅｅｄ Ｍａｘｉ Ｔｉｐに入れる。可溶化液を重力流により樹脂に入れる。
１０．ＨｉＳｐｅｅｄ Ｍａｘｉ Ｔｉｐを６０ｍＬの緩衝液ＱＣで洗浄する。
１１．１５ｍＬの緩衝液ＱＦでＤＮＡを溶出する。
１２．１０．５ｍＬのイソプロパノールを溶出されたＤＮＡに加えることで、ＤＮＡを沈殿させる。室温で５分間、混合してインキュベートする。
１３．溶出液／イソプロパノール混合物を３０ｍＬのシリンジに移し、ＱＩＡｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｏｒモジュールに通してろ過する。
１４．ＱＩＡｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｏｒ中で、２ｍＬの７０％エタノールでＤＮＡを洗浄する。ＱＩＡｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｏｒにより空気を何度も押し込むことでメンブレンを乾燥させる。
１５．５ｍＬのシリンジを使用し、１ｍＬのヌクレアーゼフリー水にＤＮＡを溶出させる。溶出液をシリンジに移し、再度溶出させる。

熱安定性の比較
１．完全ヒト化抗体及びキメラコントロールを、ＰＢＳ／０．２％Ｔｗｅｅｎにて１μｇ／ｍＬに希釈し、ＥＣ８０濃度にとって適切な容量にてＰＣＲ管へと当分する。同じ緩衝液を用いて容量を最大１００μＬとする。
２．各管を、５℃間隔で３０℃～８５℃の間の温度で１０分間別々に加熱し、４℃に冷却する。
３．１μｇ／ｍＬストックを１時間凍結させ、次いでＥＣ８０濃度に希釈する。
４．９６ウェルプレートにおいて、ウェルあたり１００μＬの各抗体（２回で各温度をアッセイする）を使用し、タウＣ３に対する結合アッセイ（セクション８．１１）を実施する。

Ｂｉａｃｏｒｅオフレートランキング及びＴａｕ０１ヒト化抗体の動態研究
オフレートランキング
１．ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）中、１つのフローチャネルにて、酢酸緩衝液（ｐＨ５）中０．５μｇ／ｍＬのヒトタウＣ３をアミンカップリングする。ランニング緩衝液としてＨＢＳ－ＥＰ＋を使用し、約１５ＲＵを目標とする固体化ウィザードを使用する。
２．３０μＬ／分の流速で３００秒間、２．５ｎＭのＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液で抗体上清を充填し、続いて６００秒解離させ、３ＭのＭｇＣｌ_２を使用して３０秒再生する。生データをエクスポートし、緩衝液の基線を減算し一相減衰又は二相減衰を使用し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでデータをフィットする。
動態
１．ＣＭ５チップ中、１つのフローチャネルにて、酢酸緩衝液（ｐＨ５）中０．５μｇ／ｍＬのヒトタウＣ３をアミンカップリングする。ランニング緩衝液としてＨＢＳ－ＥＰ＋を使用し、約１５ＲＵを目標とする固体化ウィザードを使用する。
２．各抗体を５ｎＭに希釈し、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中で０．０８ｎＭまで低下した２倍の希釈系列を作成する。３０μＬ／分で３００秒間、各濃度を注入し、続いて６００秒解離させ、３ＭのＭｇＣｌ_２を使用して３０秒再生させ、サイクル間に６００秒の安定化期間をとる。１：１のグローバルフィットを使用してデータをフィットする。
結合試験ＦＬタウ
１．プロテインＧチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に１０μＬ／分にて３０秒間、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中、０．２５μｇ／ｍＬの抗体を充填する。流速を３０μＬ／分に上昇させ、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中の２５０ｎＭのＦＬタウを１８０秒間加える。１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．５）を使用して３０秒間再生する。
抗体候補の精製
機器：ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＡＫＴＡｘｐｒｅｓｓ（商標）精製システム
ソフトウェア：ＵＮＩＣＯＲＮ
カラム：ＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ，１ｍＬ；ＨｉＬｏａｄ １６／６００ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ｐｇ
移動相：ＩｇＧ溶出緩衝液、ダルベッコの１倍ＰＢＳ
サンプル調製：０．２２μｍを通してろ過
注入量：ＤＰＢＳ中、２００ｍＬのＥｘｐｉ２９３条件培地（１：１）
流速：０．５ｍＬ／分でサンプル充填、１．５ｍＬ／分でゲルろ過、１ｍＬ／分で溶出

ＳＥＣ－ＭＡＬＳ
１．１０μＬの各サンプル（１ｍｇ／ｍＬ）をＳＥＣカラム（ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏ ＳＥＣ ３００Å，４．６ｘ１５０ｍｍ，２．７μｍ，ＬＣカラム，Ａｇｉｌｅｎｔ）上に注入し、その後、以下の３台の直列検出器により検出した。
ａ．ＵＶ（サーモスタットカラムコンパートメントを有するＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＨＰＬＣシステム）
ｂ．光散乱（Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＤＡＷＮ ＨＥＬＥＯＳ）
ｃ．示差屈折率検出器（Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｏｐｔｉｌａｂ ＴＲｅｘ）
２．０．０５％のアジ化ナトリウムを含有するＧｉｂｃｏのＰＢＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）の移動相を使用して０．４ｍＬ／分の一定の流速を適用した。すべての実験を２５℃で実行した。
３．Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＳＴＲＡソフトウェア（バージョン６．１．２．８３）及び０．１８５に設定された屈折率増分（ｄｎ／ｄｃ）でデータを分析した（すなわち、タンパク質分析のため）。
４．すべてのサンプルを、ＳＥＣ－ＭＡＬＳによる分析前に４℃で保存した。

動的光散乱（ＤＬＳ）
１．１．３ｍｇ／ｍＬにて５０μＬのサンプルを調製し（ダルベッコＰＢＳ中、Ｓｉｇｍａ Ｄ８５３７）、３８４ウェルポリプロピレンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ－ｏｎｅ）へと等分する。
２．データをＺｅｔａｓｉｚｅｒ ＡＰＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ）に記録する。すべての値を３回記録し、関連するＺｅｔａｓｉｚｅｒソフトウェア（バージョン７．１１）を使用して処理した。
３．キュムラント分析を実施し、平均粒子径（ｚ平均）及び分子量分散度（ＰＤＩ）を得た。

質量分析
精製されたキメラ候補抗体及びヒト化候補抗体の質量分析を図３０に示す。

サーマルシフトの比較
１．サンプルを直接調製し、２５μＬの最終容量で９６ウェルホワイトＰＣＲプレートへと入れる（１～２μＭの精製抗体最終濃度）。
２．Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ－ＰＢＳ緩衝液中で１：１００のストックを作製し、次いで１：１０を最終サンプルに加える（例えば、２５μＬ中２．５μＬ）。
３．ｑＰＣＲ装置へと充填し、ＭｘＰｒｏソフトウェア、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ法を使用する（フィルタ＝ＦＲＲＯＸ、参照色素なし）。熱プロファイル設定－１°上昇の７１サイクル
４．結果をプロットし、Ｔｍを決定する。

相互作用クロマトグラフィー（ＣＩＣ）
１．２つの個別の２０μＬの注入（０．５ｍｇ／ｍＬ）、すなわち、最初に、３０ｍｇのヒトポリクローナルＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ １４５０６）と結合した１ｍＬのＮＨＳ活性化樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に、次にコントロールカラムとして空で結合された１ｍＬのＮＨＳ活性化樹脂上に注入することにより、サンプルを分析した。
２．移動相は、０．０１％のアジ化ナトリウム（０．１ｍＬ／分）を含有するダルベッコのＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ Ｄ８５３７）からなり、すべての実験を２５℃で実施した。
３．溶出されたサンプルを、ＵＶ吸光度（サーモスタット（ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｔｅｄ）カラムコンパートメントを有するＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＨＰＬＣシステム）により検出し、データをＷｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＳＴＲＡソフトウェア（バージョン６．１．２．８３）を使用して、サンプルのピーク保持時間を測定した。次いでこれらを使用して保持係数ｋ’：

（式中、Ｔ_ｒはポリＩｇＧカラム上でのサンプルの保持時間であり、Ｔ_ｍは偽（コントロール）カラム上での保持時間である）を計算した。

溶解度
Ｖｉｖａｐｏｒｅ溶媒吸収濃縮器（７５００ｋＤａ ＭＷＣＯ）（ＶＰ０５０２ Ｓａｔｏｒｉｕｓ）に、ＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬにて３．５～５．０ｍＬの抗体溶液で充填する。
１．Ｎａｎｏｄｒｏｐ ２０００（ε＝１．４）にて測定用の少量をサンプリングすることにより、抗体濃度を１０分ごとにモニタリングし、これを濃縮量が約３０～５０μＬのデッドボリュームに到達するまで継続する。
２．対応する時点に対する濃度値（ｍｇ／ｍＬ）をプロットし、濃度プロファイルを生成する。

円偏光二色性
１．１ｍｇ／ｍＬにて、３０μＬのサンプルを調製する（ダルベッコのＰＢＳ、Ｓｉｇｍａ Ｄ８５３７）。
２．１ｍｇ／ｍＬのサンプルを、１０ｍＭのリン酸緩衝液を用いて０．１５倍へと希釈する。
３．１ｍＭのｓｐｅｃｔｒｏｓｉｌキュベットにて読取りを行った。読取りは、４秒間のＤＩＴ、及び２０ｎｍ／分の走査速度を用いて、１ｎｍのステップサイズにて行った。
４．平均化した空スペクトルをサンプルスペクトルから減算し、次いでスペクトルをΔεに変換した。次いで、スペクトルの２５６～２６０ｎｍの値に対し、スペクトルをゼロとした。平滑化を、７つ（－２、３、６、７、６、３、－２）のウインドウサイズを有する二次の多項式を使用し、カスタムエクセル関数であるｓｇＦｉｌｔｅｒ（）を用いてサビツキー・ゴーレイフィルタにより実施した。スペクトルはエラーバーと共に示されるが、このエラーバーは＋／－２ｎｍの波長では標準偏差の平均である。

ｃＩＥＦを使用するｐＩ分析
１．サンプルを５ｍｇ／ｍＬ超に濃縮し、５０ｍＭ未満のＮａＣｌレベルに脱塩した。その上で、１０μＬを、４．５／５．１／９．５及び１０のｐＩマーカを含有する２４０μＬのファルマライト（ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ）／尿素ゲルのＭａｓｔｅｒミックスに加えた。
２．サンプルを少なくとも５分混合し、次いで２００μＬをサンプルＰＣＲバイアルに加えた。
３．サンプルをｃＩＥＦゲル、カソード液、アノード液と共にＰＡ８００サンプルブロックへと充填し、ケミカルモビライザーリンス緩衝液をケミカルバッファブロックへと充填した。ＰＡ８００にニュートラルキャピラリーを装填し、デフォルトの「コンディション」方法を実行してサンプル分析用のキャピラリーを調製した。
４．各サンプルを、サンプル内に存在する尿素のレベルに依存する正確な「分離」方法を使用して実行した。
５．データを、３２Ｋａｒａｔソフトウェアを使用して分析し、ｐＩマーカはサンプルのピークｐＩ値を定量する検量線を提供する。

抗体血清安定性評価
１．ＰＢＳ中、０．４ｍｇ／ｍＬで６００μＬのポリッシュした抗体を調製する。
２．Ｓｅｒａｌａｂからのマウス血清（ＳＣＤ－８０８）、ヒト血清（Ｓ－１２３）及びカニクイザル血清（Ｓ－１１８）を使用する。丸底９６ウェルプレートに１５０μＬの血清及びＰＢＳコントロールを等分し、５０μＬで０．４ｍｇ／ｍＬのＰＢＳ中抗体溶液（１００μｇ／ｍＬの最終濃度）を、組織培養用キャビネット（ＢＳＬ－２）にて各血清タイプへと３回で加える。コントロールとして使用するため、一部を４℃に保つ。
血清インキュベーションプレートのレイアウト

３．プレートを密封し、３７℃でインキュベートする。
４．混入を回避するため、滅菌条件（ＢＳＬ－２）の下、特定の間隔で（例えば１０日目、２０日目で）２０μＬのサンプルを採取する。分析まで－２０℃にて凍結させる。
５．最初に最長のインキュベーションを分析する。サンプルを適切に希釈し、各サンプルについてのＥＬＩＳＡ結合曲線を作成することでタウＣ３への抗原結合についてアッセイする（３^＊希釈）（セクション８．１１）。コントロール（ＮＩ）として非インキュベート抗体を使用し、同じプレート上のｍＡｂサンプルあたりＰＢＳ／すべての血清を比較する。

本明細書に引用されるすべての参考文献、刊行物及び特許文献、並びに図及び配列表に示されるテキストは、それぞれがそのように個別に示されているのと同程度に、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

前述の明細書では、特定の例示的な実施形態及びその例を参照して本発明を説明した。しかしながら、添付の特許請求の範囲に記載される本発明のより広い精神及び範囲から逸脱することなく、様々な修正及び変更を行うことができることは明らかであろう。したがって、本明細書及び図面は、限定的な意味ではなく例示的な方法で考慮されるべきである。

本明細書における任意の文書の引用は、そのような文書が関連する先行技術であること、又は本出願の任意の請求項の特許性の重要性と考えられることを認めるものではない。書類の内容又は日付に関する記載は、出願時に出願人が入手可能な情報に基づくものであり、当該記載の正当性を認めるものではない。

配列表１ ＜２２３＞ｈｔａｕ４０
配列表２ ＜２２３＞タウ ２Ｎ３Ｒ
配列表３ ＜２２３＞タウ １Ｎ４Ｒ
配列表４ ＜２２３＞タウ ０Ｎ４Ｒ
配列表５ ＜２２３＞タウ １Ｎ３Ｒ
配列表６ ＜２２３＞タウ ０Ｎ３Ｒ
配列表７ ＜２２３＞重鎖 ＣＤＲ１
配列表８ ＜２２３＞重鎖 ＣＤＲ２
配列表９ ＜２２３＞ＶＧＧＧＤＦ
配列表１０ ＜２２３＞軽鎖 ＣＤＲ１
配列表１１ ＜２２３＞軽鎖 ＣＤＲ２
配列表１２ ＜２２３＞ＬＱＹＶＲＹＰＷＴ
配列表１３ ＜２２３＞重鎖 ＨＭ
配列表１４ ＜２２３＞軽鎖 ＫＥ
配列表１５ ＜２２３＞軽鎖 ＫＮ
配列表１６ ＜２２３＞軽鎖 ＫＯ
配列表１７ ＜２２３＞軽鎖 ＫＰ
配列表１８ ＜２２３＞軽鎖 ＫＭ
配列表１９ ＜２２３＞免疫化するペプチド
配列表２０～１０４ ＜２２３＞プライマー
配列表１０５～１２１ ＜２２３＞重鎖
配列表１２２～１３８ ＜２２３＞軽鎖
配列表１３９～１４１ ＜２２３＞プライマー

Claims (21)

1. 単離された抗タウＣ３抗体であって、前記抗体が、１×１０^－１０～１×１０^－１２ＭであるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有し、
   （ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチドであって、配列番号１３と少なくとも９０％配列同一性を有する可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに
   （ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドであって、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも９０％配列同一性を有する可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含み、
   前記抗体がヒト化抗体又はキメラ抗体である、抗タウＣ３抗体。
2. 単離された抗タウＣ３抗体であって、前記抗体が、１×１０^－１０～１×１０^－１２ＭであるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）、及び１×１０^－４～１×１０^－８Ｍである完全長タウについての結合親和性（ＫＤ）を有し、
   （ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチドであって、配列番号１３と少なくとも９０％配列同一性を有する可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに
   （ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドであって、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも９０％配列同一性を有する可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含み、
   前記抗体がヒト化抗体又はキメラ抗体である、抗タウＣ３抗体。
3. タウＣ３についてのオフレートＫ_ｄが１×１０^－４～１×１０^－３ｓ^－１である、請求項１又は請求項２に記載の抗タウＣ３抗体。
4. 前記可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチドが配列番号１３を含み、前記可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドが配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、及び配列番号１８からなる群から選択される配列を含む、請求項１又は請求項２に記載の抗タウＣ３抗体。
5. 前記可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチドにおいて、ＣＤＲ１が配列番号７のポリペプチドであり、ＣＤＲ２が配列番号８のポリペプチドであり、ＣＤＲ３が配列番号９のポリペプチドであり、前記可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドにおいて、ＣＤＲ１が配列番号１０のポリペプチドであり、ＣＤＲ２が配列番号１１のポリペプチドであり、ＣＤＲ３が配列番号１２のポリペプチドである、請求項１又は請求項２に記載の抗タウＣ３抗体。
6. 前記可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチドが配列番号１３のポリペプチドであり、前記可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドが配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１８のポリペプチドである、請求項５に記載の抗タウＣ３抗体。
7. 配列番号１３と少なくとも９５％配列同一性を有するＶ_H鎖ポリペプチド、及び配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１８と少なくとも９５％配列同一性を有するＶ_L鎖ポリペプチドを含む、請求項１又は請求項２に記載の抗タウＣ３抗体。
8. ５０ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの水溶解度を有する、請求項１又は請求項２に記載の抗タウＣ３抗体。
9. ヒト化抗体である、請求項１又は請求項２に記載の抗タウＣ３抗体。
10. キメラ抗体である、請求項１又は請求項２に記載の抗タウＣ３抗体。
11. １０ｐＭ～４０ｐＭである、タウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有するヒト化抗体である、請求項１又は請求項２に記載の抗タウＣ３抗体。
12. １０ｐＭ～３５ｐＭである、タウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項１１に記載の抗タウＣ３抗体。
13. タウオパチーを処置するための、請求項１に記載の抗タウＣ３抗体又は請求項２に記載の抗タウＣ３抗体を含む医薬組成物。
14. 前記タウオパチーが、アルツハイマー病、進行性核上性麻痺、前頭側頭型認知症、外傷性脳損傷、ピック病、大脳皮質基底核変性症、及び前頭側頭葉変性症からなる群から選択される、請求項１３に記載の医薬組成物。
15. 前記タウオパチーがアルツハイマー病である、請求項１４に記載の医薬組成物。
16. （ｉ）請求項１に記載の抗タウＣ３抗体又は請求項２に記載の抗タウＣ３抗体、及び（ｉｉ）１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、タウオパチーを処置するための医薬組成物。
17. 前記抗タウＣ３抗体が、（ａ）配列番号７により表されるＣＤＲ１、配列番号８により表されるＣＤＲ２、及び配列番号９により表されるＣＤＲ３を含む可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ポリペプチド、並びに（ｂ）配列番号１０により表されるＣＤＲ１、配列番号１１により表されるＣＤＲ２、及び配列番号１２により表されるＣＤＲ３を含む可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ポリペプチドを含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
18. 前記抗タウＣ３抗体が、５０ｍｇ／ｍｌ～２００ｍｇ／ｍｌの水溶解度を有する、請求項１７に記載の医薬組成物。
19. 前記抗タウＣ３抗体が、１×１０^－１１Ｍ～４×１０^－１１ＭであるタウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有するヒト化抗体である、請求項１８に記載の医薬組成物。
20. １０ｐＭ～４０ｐＭである、タウＣ３についての結合親和性（ＫＤ）を有する、請求項１７に記載の医薬組成物。
21. 前記抗体がヒト化抗体である、請求項１３に記載の医薬組成物。