JP7828338B2 - 乳児又は低年齢の小児用フォーミュラ - Google Patents

Description

本発明は、乳児及び低年齢の小児のための栄養組成物、並びに乳児におけるその健康効果に関する。特に、本発明は、腸内マイクロバイオームの成熟を調節するための、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２ＦＬ）、及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラに関する。フォーミュラは、高度加水分解されたフォーミュラ（ｅＨＦ）又はアミノ酸ベースの乳児用フォーミュラ（ＡＡＦ）であってもよく、牛乳タンパク質アレルギーを有する乳児に使用されてもよい。

［背景技術］
牛乳タンパク質（ＣＭＰ）は、乳児の食物アレルギーの主要な原因であり、世界中で２～３％の小児に影響を及ぼしている。ＣＭＰアレルギー（ＣＭＰＡ）を有する小児のほとんどは、２つ以上の症状を有する：５０～７０％は皮膚症状があり；５０～６０％は胃腸症状があり；２０～３０％は気道症状がある。１０％の小児では、重篤な生命を脅かす症状が現れることがある。（Ｎｕｔｔｅｎ，２０１８．ＥＭＪ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３（１），ｐｐ．５０－５９）。

生後数ヶ月の健康な乳児にとって、ヒトの母乳及び母乳栄養は栄養の最適な形態であると考えられている。母乳は、ＣＭＰＡを有する乳児に栄養を与えるためのゴールドスタンダードであり続けている。欧州小児栄養消化器肝臓学会（ＥＳＰＧＨＡＮ）は、母乳栄養乳児において、母親の食事から牛乳を完全に排除することがＣＭＰＡの最善の治療法であると推奨している（Ｋｏｌｅｔｚｋｏ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，５５（２），ｐｐ．２２１－２２９）。

母乳栄養が不可能である場合は、特殊な乳児用フォーミュラが推奨される。ＥＳＰＧＨＡＮは、ＣＭＰＡを有する非母乳栄養乳児には、ＣＭＰＡを有する乳児に有効であることが証明されている高度加水分解されたタンパク質をベースとしたフォーミュラ（ｅＨＦ）を使用することを推奨している。重篤な又は生命を脅かす症状を有する乳児では、アミノ酸ベースの乳児用フォーミュラ（ＡＡＦ）が、第一選択となり得る（Ｋｏｌｅｔｚｋｏ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，５５（２），ｐｐ．２２１－２２９）。

乳児の腸内微生物組成が乳児宿主の免疫分化経路及びアレルギー発症に関与するという証拠が増えてきている（Ｑｕａｎｔｅ Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）ＢＭＣ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ １２：１０２１）。その結果、食事、汚染、都市生活、清浄度、及び出産方法などの環境要因が、免疫系の発達及びアレルギー疾患の発症と関連付けられてきた（Ｓｅｐｐｏ，Ａ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３９：７０８－１１ ｅ５；Ａｚａｄ，Ｍ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｊ Ｎｕｔｒ １４８：１７３３－４２）。

乳児期、特に生後１週間、３ヶ月、６ヶ月又は１２ヶ月は、バランスのとれた腸内微生物叢の確立のための重要な期間である。

乳児期の腸内微生物叢の調節は、将来の身体の健康状態に重大な影響を与える可能性があることが知られている。例えば、腸内マイクロバイオームは、その後の人生における強力な免疫系の発達、並びに正常な発育、更にはその後の人生における肥満の発達に影響を及ぼし得る。

しかしながら、乳児の発達中の腸内マイクロバイオーム及びその進化は、すなわち腸内細菌の多くの集団の存在と保有率（量）との間の微妙なバランスである。腸内細菌には、乳児の全体的な健康に対する影響に関して「一般的にプラス」として分類されるものもあれば、「一般的にマイナス」（又は病原性）として分類されるものもある。ビフィズス菌などの「一般的にプラス」の細菌の特定の種は、従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児では、母乳栄養乳児と比較して少数しか存在しない場合がある。同様に、いくつかの細菌集団は病原性であると考えられ、腸内微生物叢における保有率が低く維持されることが望ましい。

乳児用フォーミュラを与えられた乳児は、ヒト母乳のみ、又は主にヒト母乳で育てられた乳児に見られる健康でバランスのとれた腸管マイクロバイオームからの恩恵を受けない場合がある。生後数年における健康なマイクロバイオームの発達は複雑であり、環境因子による妨害を受けやすい。微生物の多くの分類群は、腸／腸管の高度に複雑な微小環境中に、それぞれ順次定義された割合で共存する。乳児又は低年齢の小児の微生物叢を定義する場合、定量的及び定性的次元が考慮されるべきである。さらに、腸内微生物叢の経時的な変動が、複雑さを追加する。胃腸管のそれぞれの場所に存在する細菌の全ての科、属、種及び株の微妙なバランス、並びにそれらの経時的な変動は全て、乳児及び低年齢の小児の「胃腸の健康」に寄与する。

最近の研究では、母乳をほとんど又は全く与えられていないフォーミュラ栄養乳児と比較して、母乳栄養乳児では、微生物叢齢（ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ａｇｅ）が着実に増えることが観察されている。フォーミュラ栄養乳児に関連する腸内微生物叢におけるこれらの初期の変化は、生後数ヶ月の乳児の免疫学的及び生物学的成熟と逆相関している（Ｓｔｅｗａｒｔ ＣＪ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２０１８；５６２：５８３－８；Ｈｏ ＮＴ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ２０１８；９：４１６９）。

適切で健康な腸内微生物叢は、乳児の粘膜免疫系の発達における重要因子である。他の成分の中でも、難消化性炭水化物（プレバイオティクス）は特に、特定の微生物叢の増進に影響を及ぼし得ることが知られている。

ヒト母乳は免疫学的に活性な流体であり、集合的にヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）として知られる構造の多様なオリゴ糖を豊富に含有しており、このオリゴ糖がいくつかの推定される機構を介して免疫機能を支持し得る。それらの機構には、粘膜免疫系の発達における重要因子である健康な腸内マイクロバイオームの発達及び維持をもたらすプレバイオティック効果が含まれる（Ｂｏｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０１２；２２（９）：１１４７－１１６２）。ＨＭＯはまた、腸内で可溶性デコイ受容体として機能し、腸内病原体から新生児を保護し得る（Ｎｅｗｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ ｍｉｌｋ ｇｌｙｃａｎｓ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｉｎｆａｎｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｅｎｔｅｒｉｃ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ．Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ２００５；２５：３７－５８）ほか、腸上皮細胞と直接相互作用して、宿主微生物相互作用に干渉し得る変化をもたらし得る（Ｂｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。

Ｎｅｓｔｅｃ ＳＡの国際公開第２００９０６００７３号は、乳児の生後数週間において、母乳栄養乳児で認められるものに匹敵する有益な腸内微生物叢、特にバクテロイデス種（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、クロストリジウム種（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）及びストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）などの他の集団を除く、ビフィドバクテリウム種（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及びラクトバチルス種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）の相当量の集団によって支配される腸内微生物叢の発達を促進するための、ラクト－Ｎ－テトラオース又はラクト－Ｎ－ネオテトラオースなどのオリゴ糖の使用に関する。

しかしながら、フォーミュラ栄養乳児における上記成人型マイクロバイオームへの早期シフトを遅延させるための現在利用可能な解決策はない。

したがって、腸内微生物叢の早期成熟を予防又は低減するために使用され得る乳児用フォーミュラ及び低年齢の小児用フォーミュラなどの栄養組成物、特に、牛乳アレルギーの乳児における腸内マイクロバイオームの成熟の調節に有効な乳児用又は低年齢の小児用フォーミュラが依然として大いに必要とされている。

副作用を誘導しない様式で、送達が容易であり、保護者又は医療従事者によって十分に許容できる様式で、かかる健康上の利益をこれらの乳児又は低年齢の小児に提供することに対するニーズが存在する。

［発明の概要］
本発明者らは、驚くべきことに、乳児用フォーミュラへのヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）の補給を有利に使用して、母乳を全く又はいくらかしか与えられていない乳児において、前述の成人型腸内マイクロバイオームへの早期シフトを抑制又は低減できることを見出した。

対照二重盲検無作為化介入臨床試験において、驚くべきことに、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及び／又はラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む低アレルギー性乳児用フォーミュラが、上記ＨＭＯを含まない対応する低アレルギー性乳児用フォーミュラと比較して、１２ヶ月齢において微生物多様性の低下及び腸内微生物叢齢の低減をもたらすことが見出された。

したがって、一態様において、本発明は、腸内微生物叢の早期成熟の抑制又は低減に使用するための、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを提供する。

一実施形態では、本発明は、腸内微生物叢の成熟の遅延に使用するための、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）、２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを提供する。

別の態様では、本発明は、それを必要とする乳児における腸内微生物叢の早期成熟を抑制又は低減する方法であって、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを乳児に投与することを含む方法を提供する。

一実施形態では、本発明は、それを必要とする乳児における腸内微生物叢の早期成熟を遅延させる方法であって、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを乳児に投与することを含む方法を提供する。

一実施形態では、本発明は、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）、及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラであって、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児の１２ヶ月齢における微生物叢と比較して、１２ヶ月齢において多様性が低い微生物叢を誘導する使用のための、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを提供する。

一実施形態では、本発明は、２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、１２ヶ月齢においてより低い微生物叢齢を誘導する使用のためのＨＭＯ ２’ＦＬ、及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを提供する。

驚くべきことに、ＨＭＯ類 ２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含む本発明の乳児又は低年齢の小児用フォーミュラの腸内マイクロバイオームに対する有利な効果が、本発明のフォーミュラによる食事摂取割合の低減を伴う食生活の多様化にもかかわらず１２ヶ月齢の乳児に認められた。

好ましい実施形態では、本発明によるヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児用又低年齢の小児用フォーミュラは、少なくとも１２ヶ月齢までの乳児によって消費される。

好ましい実施形態では、本発明によるヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラは、少なくとも１２ケ月齢までの乳児が消費する唯一の又は主要な乳児又は低年齢の小児用フォーミュラである。

上記フォーミュラは、特に、乳児又は低年齢の小児、特に牛乳タンパク質アレルギーを有する乳児又は低年齢の小児において、健康な発育をもたらすこと、健康な免疫系をもたらすこと、健康な腸機能をもたらすこと、及び／又は微生物叢ディスバイオーシスを予防することに使用できる。

乳児又は低年齢の小児用フォーミュラは、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含み得る。一実施形態では、フォーミュラは、０．５～３ｇ／Ｌ、０．８～１．５ｇ／Ｌ、若しくは約１ｇ／Ｌの２’ＦＬを含んでもよく、好ましくはフォーミュラは、約１ｇ／Ｌの２’ＦＬを含み；及び／又はフォーミュラは、０．２～１ｇ／Ｌ、０．５～０．８ｇ／Ｌ、若しくは約０．５ｇ／ＬのＬＮｎＴを含んでもよく、好ましくはフォーミュラは、約０．５ｇ／ＬのＬＮｎＴを含む。最も好ましくは、フォーミュラは、約１ｇ／Ｌの２’ＦＬ及び約０．５ｇ／ＬのＬＮｎＴを含む。

一実施形態では、乳児又は低年齢の小児は、牛乳タンパク質アレルギーを有する。

一実施形態では、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラは低アレルギー性フォーミュラである。一実施形態では、低アレルギー性の乳児又は低年齢の小児用フォーミュラは、高度加水分解されたフォーミュラ（ｅＨＦ）又はアミノ酸ベースのフォーミュラ（ＡＡＦ）である。一実施形態では、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラは、ｅＨＦである。一実施形態では、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラは、ＡＡＦである。好ましくは、乳児用フォーミュラは、ｅＨＦである。代替的な実施形態では、又は低年齢の小児用フォーミュラ（ｔｈｅ ｏｒ ｙｏｕｎｇ ｃｈｉｌｄ ｆｏｒｍｕｌａ）は、部分加水分解されたフォーミュラ（ｐＨＦ）である。

ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約９５重量％、少なくとも約９８重量％、少なくとも約９９重量％、又は約１００重量％は、約３０００Ｄａ未満の分子量を有し得る。好ましくは、ｅＨＦ中には約３０００Ｄａ以上のサイズの検出可能なペプチドはない。

ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９８重量％、又は少なくとも約９９重量％は、約１５００Ｄａ未満の分子量を有し得る。好ましくは、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約９９％は、約１５００Ｄａ未満の分子量を有する。

ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約８５重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９８重量％、又は少なくとも約９９重量％は、約１２００Ｄａ未満の分子量を有し得る。好ましくは、ペプチドの少なくとも９８重量％は、約１２００Ｄａ未満の分子量を有する。

ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約４５重量％、少なくとも約５０重量％、４５～５５重量％、又は５０～５４重量％は、ジペプチド及びトリペプチドであり得る。好ましくは、ｅＨＦ中のペプチドの約５１～５３重量％、又はより好ましくは約５２重量％は、ジペプチド及びトリペプチドである。

ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約４５重量％、少なくとも約５０重量％、４５～５５重量％、又は５０～５４重量％は、２４０～６００Ｄａの分子量を有し得る。好ましくは、ｅＨＦ中のペプチドの約５１～５３重量％、又はより好ましくは約５２重量％は、２４０～６００Ｄａの分子量を有する。

ｅＨＦ中のタンパク質の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は約１００％は、ホエイタンパク質であり得る。好ましくは、タンパク質の供給源はホエイタンパク質である。

ｅＨＦは、遊離アミノ酸を含み得る。遊離アミノ酸は、アミノ酸の総重量に基づいて、５０重量％以下、４０重量％以下、３０重量％以下、又は２５重量％以下の濃度で存在し得る。好ましくは、遊離アミノ酸は、アミノ酸の総重量に基づいて、２０～２５重量％、２１～２３重量％、又は約２２重量％の濃度で存在する。

一実施形態では、乳児用フォーミュラは、タンパク質、炭水化物、及び脂肪を含むｅＨＦであり、該ｅＨＦが１００ｋｃａｌ当たり約２．４ｇ以下のタンパク質を含み、又は該ｅＨＦが１００ｋｃａｌ当たり約２．９ｇ以下のタンパク質を含み、該乳児用フォーミュラが、更に２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及び／又はラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含み、該脂肪の約３０重量％以下が中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）である。

別の実施形態では、乳児用フォーミュラは、タンパク質、炭水化物、及び脂肪を含むＡＡＦであり、１００ｋｃａｌ当たり約２．８ｇ以下のタンパク質、好ましくは１００ｋｃａｌ当たり２．７ｇ以下のタンパク質、より好ましくは１００ｋｃａｌ当たり２．６ｇ以下のタンパク質を含み、該ＡＡＦが、更に２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及び／又はラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含み、該脂肪の約３０重量％以下が中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）である。好適には、ＡＡＦは、１００ｋｃａｌ当たり２．５ｇ以下のタンパク質を含み得る。

一実施形態では、乳児用フォーミュラは、１００ｋｃａｌ当たり１．８～２．４ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．１～２．３ｇのタンパク質、又は１００ｋｃａｌ当たり２．１５～２．２５ｇのタンパク質を含む。好ましくは、乳児用フォーミュラは、１００ｋｃａｌ当たり約２．２ｇのタンパク質を含む。

一実施形態では、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラ中の脂肪の約３０重量％以下、約２５重量％以下、２０重量％以下、１５重量％以下、１０重量％以下、５重量％以下、又は１重量％以下が中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）であり得る。好ましくは、乳児用フォーミュラは、添加されたＭＣＴを含まない。

一実施形態では、乳児用フォーミュラは、１００ｋｃａｌ当たり９～１４ｇの炭水化物及び／又は１００ｋｃａｌ当たり４．０～６．０ｇの脂肪を含み得る。

初期から後期の糞便コミュニティ型（Ｆｅｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ Ｔｙｐｅ）（ＦＣＴ）クラスターの経時的発達を示す遷移モデルを、試験フォーミュラ（ＨＭＯ）を与えられた群（図１Ａ）又は対照フォーミュラを与えられた群（図１Ｂ）と比較して示す図である。 初期から後期の糞便コミュニティ型（Ｆｅｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ Ｔｙｐｅ）（ＦＣＴ）クラスターの経時的発達を示す遷移モデルを、試験フォーミュラ（ＨＭＯ）を与えられた群（図１Ａ）又は対照フォーミュラを与えられた群（図１Ｂ）と比較して示す図である。 １２ヶ月齢の乳児における試験フォーミュラ（ＨＭＯ）又は対照フォーミュラを与えられた群間の、遺伝子の豊富さ及びシャノン多様性によって表されるα多様性の差を示す図である。 試験フォーミュラ（ＨＭＯ）又は対照フォーミュラを与えられた群間の、１２ヶ月齢におけるＦＣＴ分布の差を示す図である。 試験フォーミュラ（ＨＭＯ）又は対照フォーミュラを与えられた群間の、１２ヶ月齢におけるＦＣＴ分布の差を示す図である。

［発明を実施するための形態］
次に、本発明の様々な好ましい特徴及び実施形態を、非限定的な実施例により記載する。

本明細書で使用される場合、以下の用語は、以下の意味を有する。

用語「乳児」は、月齢１２ヶ月未満（＜１２ヶ月齢）の小児を指す。

「低年齢の小児」という表現は、１歳～３歳未満（≧１歳～＜３歳）の小児を意味し、幼児とも呼ばれる。

「従来の乳児又は低年齢の小児用フォーミュラ」という表現は、既に市販されている乳児用フォーミュラ、フォローアップミルク又はグローイング・アップ・ミルクなどの標準的な合成栄養組成物を指す。

これに関連して、用語「微生物」、「細菌叢」、「マイクロバイオーム」及び「微生物叢」は、互換的に使用できる。

これに関連して、「腸内微生物叢」、「腸管微生物叢」、「腸内マイクロバイオーム」という表現は、互換的に使用することができる。

適切で健康な腸内微生物叢は、乳児の粘膜免疫系の発達における重要因子である。

「下方調節」及び「低減」という表現は、互換的に使用することができる。

「予防する」又は「予防」という表現は、ある身体的状態、ある状況又はそれらの結果の発生を回避すること、及び／又はその発生率を減少させること（すなわち、頻度の低減）を意味する。

「治療すること」又は「治療」という表現は、ある身体的状態、ある状況又はそれらの結果の持続時間及び／又は重症度の減少を意味する。

身体的状態、状況又はそれらの結果の予防及び／又は治療は、治療中（すなわち、本発明の組成物の投与の間、投与の開始直後又はいくらかの時間経過後、例えば開始数日後又は数週間後、のいずれか）に起こり得る。しかし、それらは、その後の人生における予防及び／又は治療も包含し得る。用語「その後の人生」は、介入又は治療の終了後の効果を包含する。「その後の人生」における効果は、１週間～数ヶ月間、例えば、２～４週間、２～６週間、２～８週間、１～６ヶ月間又は２～１２ヶ月間であり得る。

用語「プレバイオティクス」は、ヒトの結腸におけるビフィズス菌などの健康な細菌の増殖及び／又は活性を選択的に刺激することによって宿主に有益に影響する難消化性炭水化物を意味する（Ｇｉｂｓｏｎ ＧＲ，Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ ＭＢ．Ｄｉｅｔａｒｙ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎｉｃ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ：ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｐｔ ｏｆ ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ．Ｊ Ｎｕｔｒ．１９９５；１２５：１４０１－１２）。

用語「プロバイオティクス」は、宿主の健康又は生活の質に有益に働く微生物細胞の調製物又は微生物細胞の成分を意味する。（Ｓａｌｍｉｎｅｎ Ｓ，Ｏｕｗｅｈａｎｄ Ａ．Ｂｅｎｎｏ Ｙ．ｅｔ ａｌ．，「Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ：ｈｏｗ ｓｈｏｕｌｄ ｔｈｅｙ ｂｅ ｄｅｆｉｎｅｄ」，Ｔｒｅｎｄｓ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９：１０ １０７－１０）。微生物細胞は、広義には細菌又は酵母である。

用語「ｃｆｕ」は、コロニー形成単位として理解されるべきである。

全てのパーセント（％）は、特に明記しない限り、重量を基準とする。

更に、本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別段の指示がない限り、複数の指示対象を含むことについて留意する必要がある。

本明細書で使用する場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｏｆ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」又は「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」と同義であり、他を包含し得るもの、すなわちオープンエンドであり、かつ追加の、列挙されていない構成、要素、又は工程を除外しない。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｏｆ）」はまた、用語「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」を含む。

本明細書で使用するとき、用語「約」は、およそ、ほぼ、概ね、又はその付近、を意味する。用語「約」が数値又は範囲と共に使用される場合、その値又は範囲は、記載された数値（複数可）の上方及び下方の境界を拡大することによって、その値又は範囲を修正する。一般に、用語「約」及び「ほぼ」は、本明細書では、規定された値（複数可）を１０％超える及び下回る数値（複数可）を調整するために使用される。

本明細書で論じられる刊行物は、単に本出願の出願日より前にそれらが開示されていたがために提供されている。本明細書において引用されるいかなる文献も、これらの刊行物が本明細書に添付の特許請求の範囲に対する先行技術を構成するものであると認めるものとして解釈されるべきではない。

本開示は、本明細書に開示される例示的な方法及び材料によって限定されず、本明細書に記載されるものと類似又は同等の任意の方法及び材料を、本開示の実施形態の実施又は試験に使用することができる。数値範囲は、その範囲を画定する数を含む。

フォーミュラ
「乳児用フォーミュラ」という用語は、生後１年の間の乳児の特定栄養用途食品であって、当該フォーミュラ単独で、このカテゴリーに該当するヒトの栄養要件（２０１５年９月２５日の欧州委員会規則（ＥＵ）２０１６／１２７に定義される）を満たす、食品を指し得る。これは、乳児を対象とし、Ｃｏｄｅｘ Ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ（Ｃｏｄｅｘ ＳＴＡＮ７２－１９８１）で定義されているような栄養組成物、及び乳児用特別食（特別な医療目的用の食品を含む）も指す。「乳児用フォーミュラ」という表現は、「乳児用スターターフォーミュラ」及び「フォローアップフォーミュラ」又は「フォローオンフォーミュラ」の両方を包含する。いくつかの実施形態では、乳児用フォーミュラは早産児用フォーミュラである。

「フォローアップフォーミュラ」又は「フォローオンフォーミュラ」は、６ヶ月目以降に与えられる。かかるフォーミュラは、このカテゴリーに該当する乳児の、次第に多様となっていく食生活において主要な液体要素を構成する。

「グローイング・アップ・ミルク（ｇｒｏｗｉｎｇ－ｕｐ ｍｉｌｋ）」（又はＧＵＭ）という表現は、低年齢の小児又は小児を対象とする、一般にビタミン及びミネラルが添加された乳飲料を指す。

特定の実施形態では、本発明の栄養組成物は、低アレルギー性フォーミュラである。「低アレルギー性フォーミュラ」という表現は、アレルギー反応を引き起こす可能性が低い乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを意味する。

本発明の乳児用フォーミュラは、高度加水分解された乳児用フォーミュラ（ｅＨＦ）又はアミノ酸ベースの乳児用フォーミュラ（ＡＡＦ）である。好ましくは、乳児用フォーミュラは、ｅＨＦである。

「高度加水分解された乳児用フォーミュラ」又は「ｅＨＦ」という用語は、高度加水分解されたタンパク質を含む乳児用フォーミュラを指し得る。ｅＨＦは、インタクトなＣＭＰを消化することができない、又はＣＭＰに対して不耐性若しくはアレルギーを有する乳児に対して完全栄養を提供する、低アレルギー性乳児用フォーミュラであり得る。

「アミノ酸ベースの乳児用フォーミュラ」又は「ＡＡＦ」という用語は、タンパク質の供給源として遊離アミノ酸のみを含む乳児用フォーミュラを指し得る。ＡＡＦは、検出可能なペプチドを含有しない場合がある。ＡＡＦは、食物タンパク質アレルギー及び／又は食物タンパク質不耐性を有する乳児に対して完全栄養を提供する低アレルギー性乳児用フォーミュラであり得る。例えば、ＡＡＦは、未処理のＣＭＰを消化することができない、又はＣＭＰに対して不耐性若しくはアレルギーを有する、また複数の食品に対して極めて重篤な若しくは生命を脅かす症状及び／若しくは感作を有し得る乳児に対して完全栄養を提供する低アレルギー性乳児用フォーミュラであり得る。

「低アレルギー性」組成物は、アレルギー反応を引き起こす可能性が低い組成物である。好適には、本発明の乳児用フォーミュラは、ＣＭＰＡを有する乳児の９０％超に耐容性がある。これは、米国小児科学会が提供するガイダンスに沿ったものである（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，２０００．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，１０６（２），ｐｐ．３４６－３４９）。好適には、本発明の乳児用フォーミュラは、ＣＭＰ特異的ＩｇＥ、例えばＣＭＰＡを有する対象のＩｇＥによって認識されるペプチドを含有し得ない。

乳児には乳児用フォーミュラのみを与えることができる、又は乳児用フォーミュラを、ヒト母乳を補完するものとして使用できる。

本発明の乳児用フォーミュラは、固体形態（例えば、粉末）又は液体形態であり得る。

液体は、例えば、濃縮液体乳児用フォーミュラ又はレディ・トゥ・フィード乳児用フォーミュラであってもよい。乳児用フォーミュラは、再構成した乳児用フォーミュラ（すなわち、粉末形態から再構成した液体乳児用フォーミュラ）の形態であってもよい。濃縮液体乳児用フォーミュラは、好ましくは、例えば水を加えることによって、乳児に与えるのに好適な液体組成物に希釈することができる。

一実施形態では、乳児用フォーミュラは粉末形態である。粉末は、例えば水を加えることによって、乳児に与えるのに好適な液体組成物に再構成することができる。

様々な成分の量は、それが固体形態、例えば粉末である場合、乾燥重量基準で組成物のｇ／１００ｇで表すことができ、又はそれが液体形態を指す場合、組成物のｇ／Ｌでの濃度として表すことができる（後者はまた、乳、水のような液体中での再構成後に粉末から得ることができる液体組成物、例えば再構成された乳児用フォーミュラ又はフォローオン／フォローアップフォーミュラ又は乳児用シリアル製品又は乳児期栄養のために設計された任意の他の処方を包含する）。成分の量は、１００ｋｃａｌ当たりのｇ数で表すこともできる。

乳児用フォーミュラは、指示通りに配合した場合、１００ｍＬ当たり約６０～７２ｋｃａｌのエネルギー密度を有し得る。好適には、乳児用フォーミュラは、指示通りに配合した場合、１００ｍＬ当たり約６０～７０ｋｃａｌのエネルギー密度を有し得る。

ヒトミルクオリゴ糖
本発明の乳児用フォーミュラは、１種以上のヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を含有する。

ヒト母乳には多くの種類のＨＭＯが見出される。各個々のオリゴ糖は、グルコース、ガラクトース、シアル酸（Ｎ－アセチルノイラミン酸）、フコース、及び／又はＮ－アセチルグルコサミンの組み合わせをベースに、それらの間に多種多様な結合を有するため、ヒト母乳中の異なるオリゴ糖は非常に多くなり、これまでに１３０を超えるそのような構造が特定されている。これらのオリゴ糖のほとんど全ては還元末端にラクトース残基を有し、非還元末端の末端位置にはシアル酸及び／又はフコース（存在する場合）が占める。ＨＭＯは、酸性（例えば、荷電シアル酸含有オリゴ糖）又は中性（例えば、フコシル化オリゴ糖）であり得る。

本発明の乳児用フォーミュラは、２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及び／又はラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む。

本発明の乳児用フォーミュラは、２’ＦＬを含んでもよい。いくつかの実施形態では、２’ＦＬ以外の種類のフコシル化オリゴ糖は存在しない、すなわち、本発明の乳児用フォーミュラは、フコシル化オリゴ糖として２’ＦＬのみを含む。

２’ＦＬは、酵素ベースの発酵技術（組換え酵素又は天然酵素）又は微生物発酵技術のいずれかを用いた、特定のフコシルトランスフェラーゼ及び／又はフコシダーゼを使用するバイオテクノロジー手段によって生成され得る。後者の場合、微生物が、それらの天然酵素及び基質を発現し得る、又はそれぞれの基質及び酵素を生成するように操作され得る。あるいは、２’ＦＬは、ラクトース及び遊離フコースからの化学合成によって生成され得る。

本発明の乳児用フォーミュラは、ＬＮｎＴを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＬＮｎＴ以外の種類のＮ－アセチル化オリゴ糖は存在しない、すなわち、本発明の乳児用フォーミュラは、Ｎ－アセチル化オリゴ糖としてＬＮｎＴのみを含む。

ＬＮｎＴは、例えば米国特許第５，２８８，６３７号及び国際公開第９６／１００８６号に記載されているように、グリコシルトランスフェラーゼを使用して、ドナー部分からアクセプター部分への糖単位の酵素的な転移によって化学的に合成され得る。あるいは、ＬＮｎＴは、Ｗｒｏｄｎｉｇｇ，Ｔ．Ｍ．；Ｓｔｕｔｚ，Ａ．Ｅ．（１９９９）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．３８：８２７－８２８。このようにして生成されたＮ－アセチル－ラクトサミンは、次いでアクセプター部分としてラクトースに転移され得る。

いくつかの実施形態では、本発明の乳児用フォーミュラは、２’ＦＬ及び／又はＬＮｎＴを含むオリゴ糖混合物を含む。好ましい実施形態では、本発明の乳児用フォーミュラは、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含むオリゴ糖混合物を含む。本発明の乳児用フォーミュラは、フコシル化オリゴ糖として２’ＦＬのみ及びＮ－アセチル化オリゴ糖としてＬＮｎＴのみを含み得る。

２’ＦＬは、本発明による乳児用フォーミュラ中に、乳児用フォーミュラ１Ｌ当たり０．５～３ｇ、例えば、０．８～１．５ｇの合計量（指示通りに配合した場合）で存在し得る。いくつかの実施形態では、２’－フコシルラクトースの合計量は、乳児用フォーミュラ１Ｌ当たり０．８５～１．３ｇ、例えば、０．９～１．２５ｇ又は０．９～１．１ｇ又は１～１．２５ｇ又は１～１．２ｇ（指示通りに配合した場合）であり得る。好ましくは、乳児用フォーミュラ（指示通りに配合した場合）は、約１ｇ／Ｌの２’－フコシルラクトースを含む。

ＬＮｎＴは、本発明による乳児用フォーミュラ中に、乳児用フォーミュラ１Ｌ当たり０．２～１ｇ、例えば、０．５～０．８ｇの合計量（指示通りに配合した場合）で存在し得る。いくつかの実施形態では、ＬＮｎＴの合計量は、乳児用フォーミュラ１Ｌ当たり０．５～０．７５ｇ又は０．５～０．７ｇ又は０．５～０．６ｇ（指示通りに配合した場合）であり得る。好ましくは、乳児用フォーミュラ（指示通りに配合した場合）は、約０．５ｇ／ＬのＬＮｎＴを含む。

これらの異なる範囲は全て、一緒に組み合わせることができる。

したがって、本発明の一実施形態では、乳児用フォーミュラ（指示通りに配合した場合）は、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含み、
（ｉ）２’ＦＬの合計量は、乳児用フォーミュラ１Ｌ当たり０．８～１．５ｇであり、及び／又は
（ｉｉ）ＬＮｎＴの合計量は、乳児用フォーミュラ１Ｌ当たり０．５～０．８ｇである。

別の実施形態では、本発明の乳児用フォーミュラ（指示通りに配合した場合）は、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含み、
（ｉ）２’ＦＬの合計量は、乳児用フォーミュラ１Ｌ当たり０．９～１．２５ｇであり、及び／又は
（ｉｉ）ＬＮｎＴの合計量は、乳児用フォーミュラ１Ｌ当たり０．５～０．７ｇである。

別の実施形態では、本発明の乳児用フォーミュラ（指示通りに配合した場合）は、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含み、
（ｉ）２’ＦＬの合計量は、乳児用フォーミュラ１Ｌ当たり１～１．２ｇであり、及び／又は
（ｉｉ）ＬＮｎＴの合計量は、乳児用フォーミュラ１Ｌ当たり０．５～０．６ｇである。

好ましい実施形態では、本発明の乳児用フォーミュラ（指示通りに配合した場合）は、約１ｇ／Ｌの２’ＦＬ及び約０．５ｇ／ＬのＬＮｎＴを含む。

本発明の乳児用フォーミュラは、０．０７５～０．５ｇ／１００ｋｃａｌ、０．１～０．３ｇ／１００ｋｃａｌ、又は０．１２～０．２５ｇ／１００ｋｃａｌの２’ＦＬ、及び約０．０３～０．１５ｇ／１００ｋｃａｌ、０．０５～０．１２ｇ／１００ｋｃａｌ、又は０．０５～０．１ｇ／１００ｋｃａｌのＬＮｎＴを含み得る。好ましくは、本発明の乳児用フォーミュラは、約０．１５ｇ／１００ｋｃａｌの２’ＦＬ及び約０．０７５ｇ／１００ｋｃａｌのＬＮｎＴを含む。

本発明による乳児用フォーミュラに含まれる２’ＦＬ及びＬＮｎＴは、典型的には、２’ＦＬ：ＬＮｎＴ比が、２．０：０．５４～２．０：２．２６、例えば、２．０：０．７６～２．０：１．８又は２．０：０．８～２．０：１．４で存在する。特に有利な実施形態では、この比は、２．０：１又は約２．０：１である。

タンパク質
「タンパク質」という用語は、ペプチド及び遊離アミノ酸を含む。乳児用フォーミュラのタンパク質含有量は、当業者に既知の任意の方法によって計算され得る。好適には、タンパク質含有量は、窒素タンパク質換算法によって算出され得る。例えば、Ｍａｕｂｏｉｓ，Ｊ．Ｌ．ａｎｄ Ｌｏｒｉｅｎｔ，Ｄ．，２０１６．Ｄａｉｒｙ ｓｃｉｅｎｃｅ＆ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９６（１），ｐｐ．１５－２５に記載のとおりである。好ましくは、タンパク質含有量は、２０１５年９月２５日の欧州委員会規則（ＥＵ）２０１６／１２７に定義されるように、窒素含有量×６．２５として計算される。窒素含有量は、当業者に既知の任意の方法によって特定され得る。例えば、窒素含有量は、ケルダール法によって測定され得る。

タンパク質濃度
ｅＨＦは、典型的には、１００ｋｃａｌ当たり２．６～２．８ｇのタンパク質を含有し、ＡＡＦは、典型的には、１００ｋｃａｌ当たり２．８～３．１ｇのタンパク質を含有するものであり、重度の吸収不良を含む胃腸病変のある乳児、又は高い代謝率を補うためにタンパク質及びカロリーをより多く必要とする乳児のニーズに対応する。

本発明者らは、驚くべきことに、より低いタンパク質含有量を有するｅＨＦ又はＡＡＦが、アレルギー乳児の適切な発育及び発達をサポートし得ることを示した。更に、本発明者らは、驚くべきことに、本フォーミュラには安全性及び耐容性があることを示した。

したがって、本発明のｅＨＦは１００ｋｃａｌ当たり約２．４ｇ以下のタンパク質を含む、又は本発明のＡＡＦは１００ｋｃａｌ当たり約２．９ｇ以下のタンパク質、好ましくは１００ｋｃａｌ当たり２．８ｇ以下のタンパク質を含む。例えば、本発明の乳児用フォーミュラは、１００ｋｃａｌ当たり約２．３ｇ以下のタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．２５ｇ以下のタンパク質、又は１００ｋｃａｌ当たり２．２ｇ以下のタンパク質を含み得る。

好適には、乳児用フォーミュラは、１００ｋｃａｌ当たり約１．８ｇ以上のタンパク質を含む。例えば、本発明の乳児用フォーミュラは、１００ｋｃａｌ当たり約１．８６ｇ以上のタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり１．９ｇ以上のタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．０ｇ以上のタンパク質、又は１００ｋｃａｌ当たり２．１ｇ以上のタンパク質を含み得る。好ましくは、乳児用フォーミュラは、現行ＥＵ規制（ＥＦＳＡ ＮＤＡ Ｐａｎｅｌ，２０１４．ＥＦＳＡ ｊｏｕｒｎａｌ，１２（７），３７６０）に沿って、１００ｋｃａｌ当たり約１．８６ｇ以上のタンパク質を含む。

本発明のｅＨＦは、１００ｋｃａｌ当たり１．８～２．４ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり１．８６～２．４ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり１．９～２．４ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．４ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．３ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．１～２．３ｇのタンパク質、又は１００ｋｃａｌ当たり２．１５～２．２５ｇのタンパク質を含み得る。

本発明のＡＡＦは、１００ｋｃａｌ当たり１．８～２．９ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり１．９～２．８ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．７ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．６ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．５ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．４ｇのタンパク質、１００ｋｃａｌ当たり２．１～２．３ｇのタンパク質、又は１００ｋｃａｌ当たり２．１５～２．２５ｇのタンパク質を含み得る。

好ましくは、本発明の乳児用フォーミュラは、１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．４ｇのタンパク質、例えば１００ｋｃａｌ当たり２．１～２．３ｇのタンパク質、又は１００ｋｃａｌ当たり２．１５～２．２５ｇのタンパク質を含む。

好ましくは、乳児用フォーミュラは、１００ｋｃａｌ当たり約２．２ｇのタンパク質を含む。

タンパク質の供給源
タンパク質の供給源は、乳児用フォーミュラにおける使用に好適な任意の供給源であり得る。好適には、タンパク質は牛乳タンパク質である。

高度加水分解／加水分解されたホエイベースのフォーミュラは、高度加水分解／加水分解されたカゼインベースのフォーミュラよりも嗜好性が高い場合があり、及び／又は対象はカゼインタンパク質にのみ感作される場合がある。したがって、好適には、タンパク質の約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、又は約１００％がホエイタンパク質である。好ましくは、タンパク質の供給源はホエイタンパク質である。

ホエイタンパク質は、チーズの製造に由来するホエイであってよく、特に、レンネットによるカゼインの凝固により得られるものなどのスイートホエイ、酸によるカゼインの凝固又は発酵物の酸性化により得られる酸性ホエイ、あるいは更には酸による及びレンネットによる凝固により得られる混合ホエイであってよい。この原料は、イオン交換により及び／又は電気透析により脱塩された、脱塩乳清タンパク質（ＤＷＰ）として知られる乳清であり得る。

ホエイタンパク質の供給源は、カゼイノ－グリコマクロペプチド（ＣＧＭＰ）が完全に又は部分的に除去されたスイートホエイであり得る。このホエイは、変性スイートホエイ（ＭＳＷ）と呼ばれる。スイートホエイからＣＧＭＰを除去すると、スレオニン及びトリプトファン含有量がヒト母乳により近いタンパク質材料が得られる。スイートホエイからのＣＧＭＰの除去プロセスは、欧州特許第８８０９０２号に記載されている。

ホエイタンパク質はＤＷＰ及びＭＳＷの混合物であってよい。

いくつかの実施形態では、乳児用フォーミュラ中のカゼインの量は検出不可能であり、例えば、０．２ｍｇ／ｋｇ未満である。カゼインの量は、当業者に既知の任意の方法によって特定され得る。

加水分解度
加水分解タンパク質は、加水分解反応が実施される程度により、「部分加水分解」又は「高度加水分解」として評価され得る。現在、ＷＡＯ（Ｗｏｒｌｄ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ、国際アレルギー学会）による、牛乳タンパク質アレルギー（ＣＭＡ）についてのガイドラインに準拠する、高度加水分解生成物は、法律上／臨床上の定義合意には至っていないものの、ＷＡＯによると、かかる加水分解フォーミュラは、ＣＭＡに罹患している乳児のためのタンパク質源として有用であることが証明されており、広く使用されていることが認められる。本発明において、部分加水分解されたタンパク質は、タンパク質／ペプチド集団の６０～７０％が１０００ダルトン未満の分子量を有するタンパク質であるのに対し、高度加水分解されたタンパク質は、タンパク質／ペプチド集団の少なくとも９５％が１０００ダルトン未満の分子量を有するタンパク質である。現在、工業界ではこれらの定義が使用されている。部分加水分解されたタンパク質は、通常、低アレルギー性（ＨＡ）であると考えられるのに対し、高度加水分解されたタンパク質は、通常、非アレルギー性であると考えられる。

ｅＨＦでは、タンパク質は「高度加水分解され」、その結果、ｅＨＦはＣＭＰＡを有する乳児の９０％超に耐容性があり得る。

タンパク質加水分解物は、非タンパク質窒素を全窒素で除算した値×１００を指すＮＰＮ／ＴＮ％で特徴付けられる加水分解の程度を有し得る。非タンパク質窒素は、トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）などの試薬と自由に反応するアミノ窒素を指す。ＮＰＮ／ＴＮ％は、当業者に既知の任意の方法によって特定され得る。例えば、ＮＰＮ／ＴＮ％は、Ａｄｌｅｒ－Ｎｉｓｓｅｎ（Ａｄｌｅｒ－Ｎｉｓｓｅｎ，Ｊ．（１９７９）Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．２７：１２５６－１２６２）に記載の通りに測定され得る。好適には、タンパク質は、９０％超、９５％超、又は９８％超のＮＰＮ／ＴＮ％を有し得る。

加水分解の程度はまた、加水分解度によって特定され得る。「加水分解度」（ＤＨ）は、タンパク質加水分解物中の切断されたペプチド結合の割合として定義され、当業者に既知の任意の方法によって特定され得る。好適には、加水分解度は、ｐＨスタット、トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）、ｏ－フタルジアルデヒド（ＯＰＡ）、トリクロロ酢酸可溶性窒素（ＳＮ－ＴＣＡ）、又はホルモール滴定法によって特定される。（Ｒｕｔｈｅｒｆｕｒｄ，Ｓ．Ｍ．，２０１０．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡＯＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，９３（５），ｐｐ．１５１５－１５２２）。タンパク質の加水分解度（ＤＨ）は、９０超、９５超、又は９８超であり得る。

加水分解の程度はまた、ペプチド分子量分布によって特定され得る。ペプチド分子量分布は、高性能サイズ排除クロマトグラフィーによって、任意にＵＶ検出器を用いて（ＨＰＳＥＣ／ＵＶ）決定され得る（Ｊｏｈｎｓ，Ｐ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，２０１１．Ｆｏｏｄ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１２５（３），ｐｐ．１０４１－１０５０）。例えば、ペプチド分子量分布は、２０５ｎｍ、２１４ｎｍ、又は２２０ｎｍで特定されたＨＰＳＥＣピーク面積ベースの推定値であり得る。好適には、ペプチド分子量分布がＨＰＳＥＣ／ＵＶによって特定される場合、ある特定の分子量を有する「ペプチドの重量パーセント」は、２０５ｎｍ、２１４ｎｍ、又は２２０ｎｍで特定された、その分子量を有する「総ピーク面積の百分率としてのピーク面積の分率」によって推定され得る。好適には、加水分解の程度は、国際公開第２０１６／１５６０７７号に記載されている方法によって特定され得る。あるいは、ペプチド分子量分布は、当業者に既知の任意の方法、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって決定され得る（Ｃｈａｕｖｅａｕ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２０１６．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２７（５），ｐｐ．５４１－５４３）。

理論的には、細胞膜結合型ＩｇＥと結合するためには、ペプチドは約１５００Ｄａ（約１５アミノ酸）を超えるサイズである必要があり、ＩｇＥ分子を架橋して免疫反応を誘導するためには、約３０００Ｄａ（約３０アミノ酸）を超えるサイズである必要がある（Ｎｕｔｔｅｎ，２０１８．ＥＭＪ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３（１），ｐｐ．５０－５９）。

したがって、好適には、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約９５重量％、少なくとも約９８重量％、少なくとも約９９重量％、又は約１００重量％は、約３０００Ｄａ未満の分子量を有する。ｅＨＦ中には約３０００Ｄａ以上のサイズの検出可能なペプチドは存在し得ない。

したがって、好適には、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約９５重量％、少なくとも約９８重量％、少なくとも約９９重量％、又は約１００重量％は、約１５００Ｄａ未満の分子量を有する。好ましくは、ペプチドの少なくとも９９重量％は、約１５００Ｄａ未満の分子量を有する。ｅＨＦ中には約１５００Ｄａ以上のサイズの検出可能なペプチドは有り得ない。

好ましくは、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約８５重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９８重量％、又は少なくとも約９９重量％は、約１２００Ｄａ未満の分子量を有する。より好ましくは、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも９５重量％又は９８重量％は、約１２００Ｄａ未満の分子量を有する。

好適には、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約８０重量％、少なくとも約８５重量％、少なくとも約９０重量％、又は少なくとも約９５重量％は、約１０００Ｄａ未満の分子量を有する。好ましくは、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約９５重量％は、約１０００Ｄａ未満の分子量を有する。

好ましくは、本発明のｅＨＦは、約３０００Ｄａ以上のサイズの検出可能なペプチドを有しておらず、ペプチドの少なくとも約９５重量％、約１２００Ｄａ未満の分子量を有する。

ジペプチド及びトリペプチドの割合が高いと、腸機能障害のある患者でも窒素（タンパク質）吸収が改善され得る。ＰＥＰＴ１は、低分子ペプチド（例えば、ジペプチド及びトリペプチド）の吸収を促進する専用の輸送経路である。生後数週間においては、腸のＰＥＰＴ１は栄養摂取に重要であり、その後は離乳後の食移行に重要である。

したがって、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約３０重量％、少なくとも約４０重量％、又は少なくとも約５０重量％は、ジペプチド及びトリペプチドであり得る。好ましくは、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約４５重量％、少なくとも約５０重量％、４５～５５重量％、又は５０～５４重量％は、ジペプチド及びトリペプチドである。より好ましくは、ｅＨＦ中のペプチドの約５１～５３重量％、又はより好ましくは約５２重量％は、ジペプチド及びトリペプチドである。

好適には、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約３０重量％、少なくとも約４０重量％、又は少なくとも約５０重量％は、２４０～６００Ｄａの分子量を有する。好ましくは、ｅＨＦ中のペプチドの少なくとも約４５重量％、少なくとも約５０重量％、４５～５５重量％、又は５０～５４重量％は、２４０～６００Ｄａの分子量を有する。より好ましくは、ｅＨＦ中のペプチドの約５１～５３重量％、又は最も好ましくは、約５２重量％は、２４０～６００Ｄａの分子量を有する。

ｅＨＦ中のペプチドは、３００Ｄａ～３７０Ｄａ、好ましくは３２０Ｄａ～３６０Ｄａの分子量中央値を有し得る。

主要な牛乳アレルゲンとしては、α－ラクトアルブミン（ａＬＡ）、β－ラクトグロブリン（ｂＬＧ）、及びウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）が認識されている。

したがって、好適には、ｅＨＦは、検出不可能なａＬＡ含有量、例えば、約０．０１０ｍｇ／ｋｇ以下のａＬＡを有し得、ｅＨＦは、検出不可能なｂＬＧ含有量、例えば、約０．０１０ｍｇ／ｋｇ以下のｂＬＧを有し得、及び／又はｅＨＦは、検出不可能なＢＳＡ含有量、例えば、約０．０１０ｍｇ／ｋｇ以下のＢＳＡを有し得る。好ましくは、本発明のｅＨＦは、検出可能な量のａＬＡ、ｂＬＧ、及びＢＳＡを含まない。ａＬＡ、ｂＬＧ、及びＢＳＡの含有量は、当業者に既知の任意の方法、例えばＥＬＩＳＡによって特定され得る。

好ましい実施形態では、本発明のｅＨＦは、約３０００Ｄａ以上のサイズの検出可能なペプチドを有しておらず、ペプチドの少なくとも約９５重量％は、約１２００Ｄａ未満の分子量を有し；任意に、ペプチドの少なくとも約４５重量％、少なくとも約５０重量％、若しくは４５～５５重量％は、２４０～６００Ｄａの分子量を有し、及び／又はジペプチド若しくはトリペプチドであり；本発明のｅＨＦは、約１ｇ／Ｌの２’－フコシルラクトース及び約０．５ｇ／Ｌのラクト－Ｎ－ネオテトラオース、並びに／又は約０．１５ｇ／１００ｋｃａｌの２’－フコシルラクトース及び約０．０７５ｇ／１００ｋｃａｌのラクト－Ｎ－ネオテトラオースを含み；また、ｅＨＦは添加されたＭＣＴを含まない。

加水分解方法
本発明の乳児用フォーミュラに使用するためのタンパク質は、当該技術分野において既知の任意の好適な方法によって加水分解され得る。例えば、タンパク質は、例えばプロテアーゼを使用して、酵素加水分解され得る。例えば、タンパク質は、アルカラーゼを使用して加水分解され得る（例えば、約１～１５重量％の酵素：基質比で、約１～１０時間の持続時間）。温度は、約４０℃～６０℃の範囲、例えば、約５５℃であり得る。反応時間は、例えば、１～１０時間であり得、加水分解を開始する前のｐＨ値は、例えば、６～９、好ましくは６．５～８．５、より好ましくは７．０～８．０の範囲内にあり得る。

加水分解プロセスには、ブタ酵素、特にブタ膵臓酵素が使用され得る。例えば、国際公開第９３０４５９３（Ａ１）号は、トリプシン及びキモトリプシンを使用した加水分解プロセスについて開示している。このプロセスには２ステップの加水分解反応が含まれており、プロセス間には、最終的な加水分解物を、インタクトなアレルゲン性タンパク質を実質的に含まないものにすることを担保すべく、熱変性ステップが含まれている。これらの方法に使用されるトリプシン及びキモトリプシンは、ブタ膵臓抽出物により製造される調製物である。

国際公開第２０１６１５６０７７（Ａ１）号は、乳ベースのタンパク性材料を、微生物由来アルカリセリンプロテアーゼと、ブロメライン、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）由来のプロテアーゼ、及びバシラス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のプロテアーゼの組み合わせとにより加水分解することを含む、乳タンパク質加水分解物の調製プロセスについて開示している。

遊離アミノ酸
本発明の乳児用フォーミュラは、遊離アミノ酸を含み得る。

遊離アミノ酸の濃度は、乳児栄養に十分なアミノ酸プロファイル、特に栄養規則（例えば、欧州委員会指令２００６／１４１／ＥＣ）を満たすアミノ酸プロファイルを提供するように選択され得る。

例えば、遊離アミノ酸は、ペプチドに含まれるアミノ酸を補完するために本発明のｅＨＦに組み込まれ得る。

ＡＡＦでは、乳児用フォーミュラのタンパク質含有量は、遊離アミノ酸によって提供される。

本発明の乳児用フォーミュラに使用するための遊離アミノ酸の例としては、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、チロシン、スレオニン、トリプトファン、バリン、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、プロリン、セリン、カルニチン、タウリン、及びそれらの混合物が挙げられる。

したがって、好適には、ｅＨＦ中の遊離アミノ酸は、アミノ酸の総重量に基づいて、５０重量％以下、４０重量％以下、３０重量％以下、又は２５重量％以下の濃度で存在し得る。好ましくは、ｅＨＦは、アミノ酸の総重量に基づいて、２５重量％以下の遊離アミノ酸を含む。より好ましくは、ｅＨＦ中の遊離アミノ酸は、アミノ酸の総重量に基づいて、２０～２５重量％、２１～２３重量％、又は約２２重量％の濃度で存在する。

遊離アミノ酸含有量は、当業者に既知の任意の方法によって特定され得る。好適には、遊離アミノ酸含有量は、イオン交換クロマトグラフィーによる水性サンプル抽出物中に存在する遊離アミノ基の分離及びニンヒドリン試薬によるポストカラム誘導体化後の光検出によって得られ得る。総アミノ酸含有量は、窒素下、６ｍｏｌ／ＬのＨＣｌ中での試験部分の加水分解によって、及び上記のようにイオン交換クロマトグラフィーによる個々のアミノ酸の分離によって得られ得る。

好ましい実施形態では、本発明のｅＨＦは、約３０００Ｄａ以上のサイズの検出可能なペプチドを有しておらず、ペプチドの少なくとも約９５重量％は、約１２００Ｄａ未満の分子量を有し；任意に、ペプチドの少なくとも約４５重量％、少なくとも約５０重量％、若しくは４５～５５重量％は、２４０～６００Ｄａの分子量を有し、及び／又はジペプチド若しくはトリペプチドであり、及び／又はアミノ酸の総重量に基づいて２０～２５重量％、２１～２３重量％、若しくは約２２重量％であり；本発明のｅＨＦは、約１ｇ／Ｌの２’－フコシルラクトース及び約０．５ｇ／Ｌのラクト－Ｎ－ネオテトラオース、並びに／又は約０．１５ｇ／１００ｋｃａｌの２’－フコシルラクトース及び約０．０７５ｇ／１００ｋｃａｌのラクト－Ｎ－ネオテトラオースを含み；また、ｅＨＦは添加されたＭＣＴを含まない。

炭水化物
本発明の乳児用フォーミュラの炭水化物含有量は、好ましくは、１００ｋｃａｌ当たり９～１４ｇの範囲の炭水化物である。

炭水化物は、乳児用フォーミュラにおける使用に好適な任意の炭水化物であり得る。

本発明の乳児用フォーミュラに使用するための炭水化物の例としては、ラクトース、サッカロース、マルトデキストリン、及びデンプンが挙げられる。炭水化物の混合物を使用してもよい。

一実施形態では、炭水化物含有量は、マルトデキストリンを含む。一実施形態では、総炭水化物含有量の少なくとも約２０重量％、少なくとも約２５重量％、少なくとも約３０重量％、少なくとも約３５重量％、少なくとも約４０重量％、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、又は少なくとも約７０重量％は、マルトデキストリンである。

一実施形態では、炭水化物含有量は、ラクトースを含む。一実施形態では、総炭水化物含有量の少なくとも約２０重量％、少なくとも約２５重量％、少なくとも約３０重量％、少なくとも約３５重量％、少なくとも約４０重量％、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、又は少なくとも約７０重量％は、ラクトースである。

一実施形態では、炭水化物は、ラクトース及びマルトデキストリンを含む。

脂肪
本発明の乳児用フォーミュラの脂肪含有量は、好ましくは、１００ｋｃａｌ当たり４．０～６．０ｇの範囲の脂肪である。

脂肪は、乳児用フォーミュラにおける使用に好適な任意の脂質又は脂肪であり得る。

本発明の乳児用フォーミュラに使用するための脂肪の例としては、ヒマワリ油、低エルカ酸菜種油、ベニバナ油、キャノーラ油、オリーブ油、ココナッツ油、パーム核油、大豆油、魚油、パームオレイン、高オレイン酸ヒマワリ油及び高オレイン酸ベニバナ油、並びに長鎖多価不飽和脂肪酸を含有する微生物発酵油（ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｉｌ）が挙げられる。

脂肪はまた、パームオレイン、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）、及び脂肪酸（例えば、アラキドン酸、リノール酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ドコサヘキサエン酸、リノレン酸、オレイン酸、ラウリン酸、カプリン酸、カプリル酸、カプロン酸など）のエステルなどのこれらの油に由来する画分の形態であり得る。

更なる脂肪の例としては、構造化脂質（すなわち、構造を変化させるための化学的又は酵素的な修飾を受けた脂質）が挙げられる。好ましくは、構造化脂質は、ｓｎ２構造化脂質であり、例えば、トリグリセリドのｓｎ２位にパルミチン酸を有する割合が高められているトリグリセリドが含まれる。構造化脂質は、添加してもよく、又は含めなくてもよい。

あらかじめ形成されたアラキドン酸（ＡＲＡ）及び／又はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を多量に含有する魚油又は微生物油などの油を添加してもよい。

ジホモ－γ－リノレン酸、アラキドン酸（ＡＲＡ）、エイコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの長鎖多価不飽和脂肪酸を添加してもよい。

乳児用フォーミュラは、１００ｋｃａｌ当たり２～２０ｍｇのＡＲＡ、１００ｋｃａｌ当たり５～１５のＡＲＡ、若しくは１００ｋｃａｌ当たり約１０ｍｇのＡＲＡ及び／又は１００ｋｃａｌ当たり２～２０ｍｇのＤＨＡ、１００ｋｃａｌ当たり５～１５のＤＨＡ、若しくは１００ｋｃａｌ当たり約１０ｍｇのＤＨＡを含み得る。好ましくは、乳児用フォーミュラは、１００ｋｃａｌ当たり約１０ｍｇのＡＲＡ及び１００ｋｃａｌ当たり約１０ｍｇのＤＨＡを含む。

中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）
高濃度のＭＣＴは、早期の体重増加を損なう可能性がある。ＭＣＴは蓄積されず、脂肪の蓄積をサポートしない。例えば、Ｂｏｒｓｃｈｅｌらは、ＭＣＴを含まないフォーミュラを与えた乳児は、ＭＣＴ由来の脂肪を５０％含有するフォーミュラを与えた乳児よりも、１～５６日の間に体重が有意に増加したと報告している（Ｂｏｒｓｃｈｅｌ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２０１８．Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ，１０（３），ｐ．２８９）。

したがって、本発明の乳児用フォーミュラにおいて脂肪の約３０重量％以下は中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）であり得る。

いくつかの実施形態では、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）は、脂肪の約２５重量％以下、２０重量％以下、１５重量％以下、１０重量％以下、５重量％以下、４重量％以下、３重量％以下、２重量％以下、１重量％以下、０．５重量％以下、又は０．１重量％以下である。

いくつかの実施形態では、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）は、脂肪の０～３０重量％、０～２５重量％、０～２０重量％、０～１５重量％、０～１０重量％、０～５重量％、０～４重量％、０～３重量％、０～２重量％、０～１重量％、０～０．５重量％、又は０～０．１重量％である。

好ましくは、乳児用フォーミュラは、添加されたＭＣＴを含まない。好適には、ＭＣＴは、脂肪の約０重量％であり、及び／又は乳児用フォーミュラは、検出可能なＭＣＴを含まない。好適には、乳児用フォーミュラは、ＭＣＴを含まない。

好ましい実施形態では、本発明のｅＨＦは、約３０００Ｄａ以上のサイズの検出可能なペプチドを有しておらず、ペプチドの少なくとも約９５重量％は、約１２００Ｄａ未満の分子量を有し；ペプチドの４５～５５重量％は、２４０～６００Ｄａの分子量を有し；遊離アミノ酸は、アミノ酸の総重量に基づいて２０～２５重量％の濃度で存在し；ｅＨＦは、添加されたＭＣＴを含まない。

更なる成分
本発明の乳児用フォーミュラはまた、好ましくは、毎日の食事に必須と考えられるあらゆるビタミン及びミネラルを、栄養に有意な量で含有する。特定のビタミン及びミネラルに関しては、最小必要量が確立されている。

本発明の乳児用フォーミュラに使用するためのビタミン、ミネラル、及びその他の栄養素の例としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、葉酸、イノシトール、ナイアシン、ビオチン、パントテン酸、コリン、カルシウム、リン、ヨウ素、鉄、マグネシウム、銅、亜鉛、マンガン、塩素、カリウム、ナトリウム、セレン、クロム、モリブデン、タウリン、及びＬ－カルニチンが挙げられる。ミネラルは、通常、その塩形態で添加される。

本発明の乳児用フォーミュラは、１種以上のカロテノイドを含み得る。

本発明の乳児用フォーミュラはまた、少なくとも１種のプロバイオティクスを含み得る。「プロバイオティクス」という用語は、宿主の健康又はウェル・ビーイングに有益な効果を有する微生物細胞の調製物又は微生物細胞の成分を指す。具体的には、プロバイオティクスは、腸内バリア機能を改善することができる。

好ましいプロバイオティクスは、全体として安全で、Ｌ（＋）乳酸産生培養物であり、最大２４ヶ月間安定かつ有効なままであることが要求される製品に対して許容可能な保存期間を有するものである。

本発明の乳児用フォーミュラに使用するためのプロバイオティクス微生物の例としては、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、デバロマイセス属（Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）、及びトルロプシス属（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）などの酵母、並びにビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、メリソコッカス属（Ｍｅｌｉｓｓｏｃｏｃｃｕｓ）、プロピオニバクテリウム属（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ペプトストレプトコッカス属（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｏｃｏｃｃｕｓ）、バシラス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ペディオコッカス属（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、リューコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、ワイセラ属（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ）、アエロコッカス属（Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、オエノコッカス属（Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）、及びラクトバチルス属（ＬａｃｔｏＢａｃｉｌｌｕｓ）などの細菌が挙げられる。

好適なプロバイオティクス微生物の具体例は、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｅａｅ）、バチルス・コアグランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・アリメンタリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ亜種カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ． ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・カゼイ・シロタ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・デルブリッキー亜種ラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・ファルシミナス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ジョンソニ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）（ラクトバチルスＧＧ）、ラクトバチルス・サケ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｋｅ）、ラクトバチルス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ミクロコッカス・バリアンス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｖａｒｉａｎｓ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス・ペントサス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス・ハロフィルス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・フェカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、スタフィロコッカス・カルノーシス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｒｎｏｓｕｓ）及びスタフィロコッカス・キシローサス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｘｙｌｏｓｕｓ）である。

本発明の乳児用フォーミュラはまた、プレバイオティクス、ラクトフェリン、食物繊維、ヌクレオチド、ヌクレオシドなどの、有益な効果を有し得る他の物質を含有してもよい。

健康上の利益
ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む本発明の乳児又は低年齢の小児用フォーミュラは、有利には、母乳を全く又はいくらかしか与えられていない乳児において、前述の成人型腸内マイクロバイオームへの早期シフトを抑制又は低減するために使用できる。

本発明による、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及び／又はラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む低アレルギー性乳児用フォーミュラは、有利には、上記２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない相対する従来の（市販の）低アレルギー性乳児用フォーミュラと比較して、１２ヶ月齢における微生物多様性の低下及び腸内微生物叢齢の低減を誘導するために使用することができる。

本発明の乳児又は低年齢の小児用フォーミュラは、対象の乳児又は低年齢の小児の全体的な微生物叢に対してプラスの効果を有し、当該フォーミュラは、上記２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の栄養組成物を主に又は排他的に与えられた乳児又は低年齢の小児と比較して、本発明の栄養組成物を与えられた乳児又は低年齢の小児の腸内微生物叢の早期老化を抑制又は低減する。

驚くべきことに、ＨＭＯ類 ２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含む本発明の乳児又は低年齢の小児用フォーミュラの腸内マイクロバイオームに対する有利な効果は、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラによる乳児の食事摂取の割合の低減を伴う食生活の多様化にもかかわらず１２ヶ月齢の乳児において認められた。

適切で健康な腸内微生物叢は、乳児の粘膜免疫系の発達における重要因子である。

一態様において、本発明は、腸内微生物叢の早期成熟の抑制又は低減に使用するための、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを提供する。

一実施形態では、本発明は、腸内微生物叢の成熟の遅延に使用するための、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを提供する。

一実施形態では、本発明は、腸内微生物叢の成人型腸内微生物叢への成熟の遅延に使用するための、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを提供する。

別の態様において、本発明は、それを必要とする乳児における腸内微生物叢の早期成熟を抑制又は低減するための方法であって、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを乳児に投与することを含む方法を提供する。

一実施形態では、本発明は、それを必要とする乳児における腸内微生物叢の早期成熟を遅延させる方法であって、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを乳児に投与することを含む方法を提供する。

一実施形態では、本発明は、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）、及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラであって、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児の１２ヶ月齢における微生物叢と比較して、１２ヶ月齢において多様性が低い微生物叢を誘導する使用のための、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを提供する。

一実施形態では、本発明は、２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、１２ヶ月齢においてより低い微生物叢齢を誘導する使用のための、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’ＦＬ、及びＬＮｎＴを含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを提供する。

驚くべきことに、ＨＭＯ類 ２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含む本発明の乳児又は低年齢の小児用フォーミュラの腸内マイクロバイオームに対する有利な効果が、本発明のフォーミュラによる食事摂取割合の低減を伴う食生活の多様化にもかかわらず１２ヶ月齢の乳児に認められた。

好ましい実施形態では、本発明によるヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児用又低年齢の小児用フォーミュラは、少なくとも１２ヶ月齢までの乳児によって消費される。

好ましい実施形態では、本発明によるヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラは、少なくとも１２ケ月齢までの乳児が消費する唯一の又は主要な乳児又は低年齢の小児用フォーミュラである。

一実施形態では、腸内微生物叢の早期成熟を抑制又は低減することは、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、１２ヶ月齢においてより低い微生物多様性を誘導することを意味する。

一実施形態では、腸内微生物叢の早期成熟を抑制又は低減することは、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、１２ヶ月齢においてより低い微生物叢齢を誘導することを意味する。

一実施形態では、１２ヶ月齢においてより低い微生物叢齢とは、上記２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、初期型糞便コミュニティ型（ＦＣＴ）クラスターに富む腸マイクロバイオームを有することを意味する。

一実施形態では、１２ヶ月齢においてより低い微生物叢齢とは、上記２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、後期型糞便コミュニティ型（ＦＣＴ）クラスターが減少した腸マイクロバイオームを有することを意味する。

「初期」型ＦＣＴは、一般的に、低年齢の母乳栄養乳児、例えば、６ヶ月齢までの乳児に関連するＦＣＴクラスターである。以下の実施例に記載される研究に関連して、初期型ＦＣＴは、ＦＣＴクラスターＧＣ１、ＧＣ２及びＧＣ３に対応する。

「後期」型ＦＣＴは、年長の乳児、小児及び成人に一般的に関連するＦＣＴクラスターである。以下の実施例に記載される研究に関連して、初期型ＦＣＴは、ＦＣＴクラスターＧＣ５に対応する。

本発明の乳児又は低年齢の小児用フォーミュラは、特に、乳児又は低年齢の小児、特に牛乳タンパク質アレルギーを有する乳児又は低年齢の小児において、健康な発育をもたらすこと、健康な免疫系をもたらすこと（例えば、感染の発生を予防又は低減すること）、健康な腸機能をもたらすこと、及び／又は微生物叢ディスバイオーシスを予防することに使用できる。

製造方法
本発明の乳児用フォーミュラは、任意の好適な方法で調製することができる。

例えば、本乳児用フォーミュラは、加水分解タンパク質の供給源、炭水化物の供給源、及び脂肪の供給源を、適切な割合で一緒にブレンドすることによって調製することができる。更に乳化剤を使用する場合、この時点で含めることができる。この時点でビタミン及びミネラルを添加してもよいが、通常、ビタミンは熱分解を避けるために後で添加する。任意の親油性ビタミン及び乳化剤などを、ブレンド前に脂肪の供給源に溶解してもよい。次いで、水、好ましくは逆浸透処理した水を混合して、液体混合物を形成することができる。市販の液化装置を用いて液体混合物を形成することができる。次いで、液体混合物を均質化してもよい。

次いで、液体混合物を熱処理して、細菌含有量を低減することができる。この熱処理は、例えば、蒸気注入によって、又はオートクレーブ若しくは熱交換器、例えば、プレート熱交換器を使用して行うことができる。

次いで、液体混合物を冷却、及び／又は均質化してもよい。均質化した混合物のｐＨ及び固形分含有量は、この時点で調整することができる。

次いで、均質化した混合物を、噴霧乾燥機又は凍結乾燥機などの好適な乾燥装置に移し、粉末に変換することができる。乳児用液体フォーミュラが好ましい場合、均質化された混合物を滅菌し、次いで適切な容器に無菌充填してもよく、又は最初に容器に充填し、次いでレトルト処理してもよい。

［実施例］
次に、実施例により本発明を更に説明するが、これらの実施例は、当業者が本発明を実施するのに役立てるために提供することを意味するものであり、本発明の範囲を限定することを決して意図するものではない。

実施例１－高度加水分解された乳児用フォーミュラの例示
以下は、本発明による例示的な高度加水分解された乳児用フォーミュラである。本発明のｅＨＦは、好ましくは、毎日の食事に必須と考えられるあらゆる栄養素、ビタミン、及びミネラルを、栄養に有意な量で含有する。特定の栄養素、ビタミン、及びミネラルに関しては最小必要量が確立されている。

実施例２－牛乳タンパク質アレルギーを有する乳児における腸マイクロバイオーム発達に対する、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを添加した高度加水分解された乳児用フォーミュラの効果
試験デザイン
牛乳タンパク質アレルギー（ＣＭＰＡ）を有する乳児における糞便マイクロバイオームに対する、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを添加した高度加水分解された乳児用フォーミュラ（ｅＨＦ）の効果を、２つの並行フォーミュラ供給群の対照二重盲検無作為多施設介入臨床試験において調査した。

ＣＭＰＡを有する０～６ヶ月齢の乳児を無作為化して、登録から１２ヶ月齢まで、２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含む又は含まないラクトース含有市販ｅＨＦ（Ａｌｔｈｅｒａ）と、タンパク質レベルが低く、２つのヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ） ２’ＦＬ及びＬＮｎＴ（試験処方）を含む並行ｅＨＦ（Ａｌｔｈｅｒａ ２．２）とを与えた。市販のｅＨＦは、現在、特定医療目的用食品として承認されている（規制（ＥＵ）２０１６／１２８）。

試験対象集団は、標準的な臨床診療に従って医師がＣＭＰＡと診断し、選択基準ごとに少なくとも２つの症状を有する満期産乳児であった。４ヶ月間の試験フォーミュラ摂取を完了する１３０人の乳児が必要であった。

選択基準は、以下の通りとした。
１．満期出産乳児（３７週間≦在胎≦４２週間）；
２．２５００ｇ≦出生体重≦４５００ｇ；
３．乳児の保護者（国の規制により必要な場合は両親）又は法定代理人（ＬＡＲ）の書面によるインフォームド・コンセントを得ていること；
４．生後６ヶ月までの乳児；
５．登録時にフォーミュラのみを与えられている者、又は母乳栄養をしているＣＭＰＡ乳児の母親で、登録前にフォーミュラのみを与えることを自主的に選択した者：並びに
６．標準的な臨床診療に従って医師がＣＭＰＡと診断した（かつ、高度加水分解乳又はアミノ酸乳児用フォーミュラによる治療を受けたことがない）乳児で、以下の症状のうち少なくとも２つが存在する者－泣く、吐き戻し、液状便又は便秘、アトピー性皮膚病変、蕁麻疹又は呼吸器症状。陽性ＩｇＥ血液試験、皮膚プリック試験、パッチ試験、又は食物負荷試験のいずれかに基づく診断の場合、上記のうち、１つのみの症状が存在すればよい。

除外基準は、以下の通りとした。
１．発育に影響を及ぼし得る先天性疾患又は先天異常。
２．ＣＭＰＡによるものではないことが実証された慢性吸収不良。
３．登録前にＣＭＰＡ以外の重大な出生前及び／又は出生後の重篤な疾患（治験責任医師の医学的判断による）。
４．未成年である親（両親）。
５．保護者又は介護者が試験の手順を遵守することが期待できない乳児。
６．現在、別の臨床試験に参加している、又は生まれてから参加したことがある。

試験フォーミュラ及び対照フォーミュラを以下に示す。

試験フォーミュラ及び対照フォーミュラにおいて、
・ ペプチドの９９重量％超は３０００Ｄａ未満の分子量であった。
・ ペプチドの９５重量％超は１２００Ｄａ未満の分子量であった。
・ ペプチドの約５２重量％はジペプチド及びトリペプチド（６００～２４０Ｄａの分子量のペプチド）であった。
・ 総アミノ酸の約２２．４重量％は、試験フォーミュラ及び対照フォーミュラ中の遊離アミノ酸であった。
・ 検出可能なβ－ラクトグロブリンはなかった（すなわち、β－ラクトグロブリン含有量は０．０１ｍｇ／ｋｇ未満であった）。
・ 検出可能なカゼインはなかった（すなわち、カゼイン含有量は０．２ｍｇ／ｋｇ未満であった）。

両方のフォーミュラは粉末形態であり、缶の製品ラベルに印刷されている説明に従って、乳児が体重、年齢、及び食欲に適した量を経口摂取できるように調製した。

乳児には、最低でもベースライン後４ヶ月まで（主要試験期間）、そして医療による指示に従って乳児が必要とする期間（最長で１２ヶ月齢まで）、試験フォーミュラを与えた。

乳児が必要とする１日当たりの摂取量は、年齢、体重、及び食欲によって異なった。製品は乳児に自由に与えられるが、保護者又は介護者はラベルに印刷された１日に与えるべき適切な摂取量に関するガイドラインに従った、及び／又は試験担当者からの助言を受けた。

乳児は、最大７回の試験診察を受けた：ベースライン（登録時）、ベースラインから４ヶ月後まで毎月（＋１、＋２、＋３、＋４ヶ月）、ベースラインから６ヶ月後。乳児が１２ヶ月齢に達する時に、更に１回の最終診察が計画される。

無作為化は、試験フォーミュラ群当たり１：１の比率であり、Ｍｅｄｉｄａｔａ Ｂａｌａｎｃｅにおける最小化により実施した。層別化は、登録時の年齢（０～６０日、６１～１２０日、１２０日超）、性別、分娩様式（経膣分娩又は帝王切開）により行われた。双子が登録されている場合は、同じフォーミュラに無作為化した。

糞便微生物叢
糞便サンプルを、ベースライン（Ｖ０）、ベースラインから１ヶ月（Ｖ１）及び３ヶ月（Ｖ３）、並びに１２ヶ月齢（Ｖ６）の１３２人の乳児（プロトコル遵守集団（ｐｅｒ－ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｓｅｔ）から収集した。

マイクロバイオーム組成は、メタゲノミクス種（ＭＧＳ）アプローチ［Ｎｉｅｌｓｅｎ，ＨＢ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１４；３２：８２２］を使用したメタゲノミクス配列によってプロファイリングした。各ＭＧＳは、種又は亜種レベルでの既知クレード又は新規クレードを表す。類似のマイクロバイオーム組成を有するサンプルを５つの糞便コミュニティ型（ＦＣＴ）にクラスター化し、遷移モデル内で追跡して経時的発達を分析した［Ｓｔｅｗａｒｔ ＣＪ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２０１８；２２（５６２）：５８３－８]。

微生物の豊富さ及び多様性（シャノン指数）を、各時点において群間で比較した。Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓ非類似度に基づく並べ替えＡＮＯＶＡを使用して、マイクロバイオームに対するＨＭＯの効果を比較した。分類学的組成における差異を、属、科及び門レベルでの富化分析によって評価した。

試験結果
マイクロバイオームの推移は、「初期」から「後期」ＦＣＴへ（図３）、及びより低いα多様性からより高いα多様性への、特徴的な経時的発達を示した。マイクロバイオーム発達は、年齢による影響を強く受けた。Ｖ１及びＶ３では試験群間に有意差が検出されなかったが、これは一部には、各時点での年齢範囲が広いからである。１２ヶ月齢（Ｖ６）において、ＨＭＯ治療乳児は、より低いα多様性を有し（Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ、ＭＷＵ、ＭＷＵ、ｐ［豊富さ］＜０．００３、ｐ［多様性］＜０．００６）、初期型ＦＣＴに富んだ（両側ＭＷＵ、ｐ＝０．０１４）。

図１Ａは、診察ごとに階層化された試験群と対照群との間のＦＣＴ分布の差を示す。ＦＣＴを順序付き因子（ＧＣ１＝１、ＧＣ２＝２など）としてコード化して、ＭＷＵ検定によって、上記の群をペアワイズに比較した。図は、試験群「ＨＭＯ群」（２’ＦＬ及びＬＮｎＴ添加ｅＨＦ）は、対照群と比較して「初期」ＦＣＴクラスター、特にＧＣ１、ＧＣ２、ＧＣ３の保有率が高いこと、及び対照群と比較して「後期」ＦＣＴクラスター、特にＧＣ５の保有率が低いことを示す。これにより
図１Ｂは、最も豊富な門の各ＦＣＴ（ＧＣ１～ＧＣ５）内の平均存在量を示す、門レベルでの各ＦＣＴクラスターの分類群の分類学的概要を示す。

属レベルで得られたＦＣＴクラスターの特徴は、以下のように要約することができる。

ＧＣ１（新生児に典型的）：
最も低いα多様性
少量のバクテロイデス（門）
多量のプロテオバクテリア（門）及び腸内細菌科（科）
低いブチレート産生

ＧＣ２（１ヶ月齢～８ヶ月齢の乳児に典型的）：
中程度のα多様性
多量のアクチノバクテリア（門）及びビフィドバクテリウム（属）
少量のバクテロイデス（門）

ＧＣ３（３ヶ月齢～１歳の乳児に典型的）：
中程度のα多様性
多量のファーミキューテス（門）、ラクノスピラ（科）、及びラクノクロストリジウム（属）

ＧＣ４（＞６ヶ月齢の乳児に典型的）
中程度のα多様性
多量のフィルミクテス（門）
中程度の量のビフィドバクテリウム（属）

ＧＣ５（＞９ヶ月齢の乳児に典型的）
最高のα多様性
多量のファーミキューテス（門）及びフィーカリバクテリウム（属）
多量のバクテロイデス（科）
より高いブチレート産生

図２は、群の遺伝子の豊富さ（図２Ａ）及びシャノン多様性指数（図２Ｂ）（すなわち、細菌集団が各サンプル中でいかに多様であるか）を示す。図は、１２ヶ月齢の試験群「ＨＭＯ群」（２’ＦＬ及びＬＮｎＴ添加ｅＨＦ）の乳児は、対照群よりも低いα多様性を有したことを示す。

図３は、「初期」から「後期」ＦＣＴクラスターへの経時的発達を例示する遷移モデルを示す。遷移モデルは、４８１のサンプル全てを使用して、各ＦＣＴを経るサンプルの進行を示す。ノードサイズは、年齢群（列）当たりの所与のクラスターにおける乳児の割合を表し、線幅は、年齢群（列）当たりの遷移の割合を表す。図３は、試験群「ＨＭＯ群」（２’ＦＬ及びＬＮｎＴ添加ｅＨＦ）を示す。図３Ａは、対照群と比較して、「初期」から「後期」ＦＣＴクラスターへの経時的発達が遅いことを示した。図３Ｂは、対照群と比較して、試験群「ＨＭＯ群」における微生物叢齢が低いことに対応する。

上記の結果から、腸マイクロバイオームは、両方の試験群において年齢とともに進化し、食事及び環境曝露の変化を反映したと結論付けることができる。ＨＭＯ添加ＥＨＦの摂食は、１２ヶ月齢におけるより低い微生物多様性及び低減された腸内微生物叢齢と関連していた。したがって、ｅＨＦ乳児用フォーミュラへの２’ＦＬ及びＬＮｎＴの添加は、母乳を全く又はいくらかしか与えられていない乳児において前述の成人型腸マイクロバイオームへの早期シフトを遅延させることが観察された。

この観察されたマイクロバイオーム発達の初期段階における乳児の持続、すなわち、より低い「マイクロバイオーム年齢」は、生後１年における全体的な感染率の低減と関連付けることができ（過去に公開された研究結果：Ｖａｎｄｅｎｐｌａｓ Ｙ ｅｔ ａｌ．，Ｏｒａｌ ｐｏｓｔｅｒ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ＃１８８５ ａｔ ＥＡＡＣＩ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ，Ｊｕｎｅ ２０２０）、上気道感染の頻度において最大の低減が観察された。

実施例３－アミノ酸ベースの乳児用フォーミュラの例示
以下は、本発明によるアミノ酸ベースの乳児用フォーミュラの例示である。本発明のＡＡＦは、好ましくは、毎日の食事に必須と考えられるあらゆる栄養素、ビタミン、及びミネラルを、栄養に有意な量で含有する。特定の栄養素、ビタミン、及びミネラルに関しては最小必要量が確立されている。

上記明細書で言及した全ての刊行物は、参照により本明細書に援用される。開示された本発明の方法、細胞、組成物、及び使用の、本発明の範囲及び趣旨から逸脱することのない様々な修正及び変更が、当業者には明白であろう。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して開示されているが、特許請求される本発明は、このような特定の実施形態に過度に限定されるべきではないことを理解されたい。実際、本発明を実施するために開示された様式の種々の改変は、当業者には自明であり、以下の特許請求の範囲の範囲内であることを意図している。
［項目１］
ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラであって、乳児又は低年齢の小児において腸内微生物叢の早期成熟を抑制若しくは低減すること、及び／又は前記腸内微生物叢の成熟を遅延すること、並びに／又は２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児の１２ヶ月齢における微生物叢と比較して、１２ヶ月齢において多様性が低い微生物叢を誘導すること、並びに／又は２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、１２ヶ月齢においてより低い腸内微生物叢齢を誘導することにおける使用のための、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラ。
［項目２］
１２ヶ月齢におけるより低い微生物叢齢が、前記２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、初期型糞便コミュニティ型（ＦＣＴ）クラスターに富む腸内マイクロバイオームを有することを意味する、項目１に記載の使用のための乳児又は低年齢の小児用フォーミュラ。
［項目３］
１２ヶ月齢におけるより低い微生物叢齢が、前記２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、後期型糞便コミュニティ型（ＦＣＴ）クラスターが少ない腸マイクロバイオームを有することを意味する、項目１に記載の使用のための乳児又は低年齢の小児用フォーミュラ。
［項目４］
前記乳児用フォーミュラが、０．５～３ｇ／Ｌ、０．８～１．５ｇ／Ｌ、又は約１ｇ／Ｌの２’ＦＬを含み、好ましくは、前記乳児用フォーミュラが、約１ｇ／Ｌの２’ＦＬを含む、項目１～３のいずれか一項に記載の使用のための乳児用フォーミュラ。
［項目５］
前記乳児用フォーミュラが０．２～１ｇ／Ｌ、０．５～０．８ｇ／Ｌ、又は約０．５ｇ／ＬのＬＮｎＴを含み、好ましくは、前記乳児用フォーミュラが、約０．５ｇ／ＬのＬＮｎＴを含む、項目１～４のいずれか一項に記載の使用のための乳児用フォーミュラ。
［項目６］
前記乳児用フォーミュラが、約１ｇ／Ｌの２’ＦＬ及び約０．５ｇ／ＬのＬＮｎＴを含む、項目１～５のいずれか一項に記載の使用のための乳児用フォーミュラ。
［項目７］
前記乳児用フォーミュラが、ｅＨＦであり、前記乳児用フォーミュラが、１００ｋｃａｌ当たり１．８～２．４ｇのタンパク質、好ましくは１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．４ｇのタンパク質、好ましくは１００ｋｃａｌ当たり２．１～２．３ｇのタンパク質、又は１００ｋｃａｌ当たり２．１５～２．２５ｇのタンパク質を含む、項目１～６のいずれか一項に記載の使用のための乳児用フォーミュラ。
［項目８］
前記乳児用フォーミュラが、ＡＡＦであり、前記乳児用フォーミュラが、１００ｋｃａｌ当たり１．８～２．９ｇのタンパク質、好ましくは１００ｋｃａｌ当たり１．９～２．８ｇのタンパク質、好ましくは１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．７ｇのタンパク質、より好ましくは１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．６ｇのタンパク質、又は１００ｋｃａｌ当たり２．０～２．４ｇを含む、項目１～６のいずれか一項に記載の使用のための乳児用フォーミュラ。
［項目９］
前記乳児用フォーミュラが、１００ｋｃａｌ当たり約２．２ｇのタンパク質を含む、項目１～８のいずれか一項に記載の使用のための乳児用フォーミュラ。
［項目１０］
前記乳児用フォーミュラ中の脂肪の約２５重量％以下、２０重量％以下、１５重量％以下、１０重量％以下、５重量％以下、又は１重量％以下が、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）である、項目１～９のいずれか一項に記載の使用のための乳児用フォーミュラ。
［項目１１］
前記乳児用フォーミュラが、添加されたＭＣＴを含まない、項目１～１０のいずれか一項に記載の使用のための乳児用フォーミュラ。
［項目１２］
前記乳児用フォーミュラが、１００ｋｃａｌ当たり９～１４ｇの炭水化物及び／又は１００ｋｃａｌ当たり４．０～６．０ｇの脂肪を含む、項目１～１１のいずれか一項に記載の使用のための乳児用フォーミュラ。
［項目１３］
前記乳児が、牛乳タンパク質アレルギーを有する、項目１～１２のいずれか一項に記載の使用のための乳児用フォーミュラ。
［項目１４］
腸内微生物叢の早期成熟を抑制若しくは低減させることを必要とする乳児における腸内微生物叢の早期成熟を抑制若しくは低減させる、及び／又は前記腸内微生物叢の成熟を遅延させる方法であって、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを前記乳児に投与することを含む、方法。
［項目１５］
２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児の１２ヶ月齢での微生物叢と比較して、１２ヶ月齢において多様性が低い微生物叢を誘導し、並びに／又は２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、１２ヶ月齢においてより低い腸内微生物叢齢を誘導する方法であって、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む乳児又は低年齢の小児用フォーミュラを前記乳児に投与することを含む、方法。

Claims (12)

1. ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）２’－フコシルラクトース（２’ＦＬ）及びラクト－Ｎ－ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）を含む、高度加水分解されたフォーミュラ（ｅＨＦ）又はアミノ酸ベースのフォーミュラ（ＡＡＦ）である、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラであって、前記乳児又は低年齢の小児は、牛乳タンパク質アレルギーを有し、乳児又は低年齢の小児において腸内微生物叢の早期成熟を抑制若しくは低減すること、及び／又は前記腸内微生物叢の成熟を遅延すること、並びに／又は２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児の１２ヶ月齢における微生物叢と比較して、１２ヶ月齢において多様性が低い微生物叢を誘導すること、並びに／又は２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない従来の乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、１２ヶ月齢においてより低い腸内微生物叢齢を誘導することにおける使用のための、乳児又は低年齢の小児用フォーミュラ。
2. １２ヶ月齢におけるより低い微生物叢齢が、前記２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、初期型糞便コミュニティ型（ＦＣＴ）クラスターに富む腸内マイクロバイオームを有することを意味する、請求項１に記載のフォーミュラ。
3. １２ヶ月齢におけるより低い微生物叢齢が、前記２’ＦＬ及びＬＮｎＴを含まない乳児用フォーミュラを与えられた乳児と比較して、後期型糞便コミュニティ型（ＦＣＴ）クラスターが少ない腸マイクロバイオームを有することを意味する、請求項１に記載のフォーミュラ。
4. 前記フォーミュラが、０．５～３ｇ／Ｌの２’ＦＬを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のフォーミュラ。
5. 前記フォーミュラが０．２～１ｇ／ＬのＬＮｎＴを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のフォーミュラ。
6. 前記フォーミュラが、約１ｇ／Ｌの２’ＦＬ及び約０．５ｇ／ＬのＬＮｎＴを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のフォーミュラ。
7. 前記フォーミュラが、ｅＨＦであり、前記フォーミュラが、１００ｋｃａｌ当たり１．８～２．４ｇのタンパク質を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のフォーミュラ。
8. 前記フォーミュラが、ＡＡＦであり、前記フォーミュラが、１００ｋｃａｌ当たり１．８～２．９ｇのタンパク質を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のフォーミュラ。
9. 前記フォーミュラが、１００ｋｃａｌ当たり約２．２ｇのタンパク質を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のフォーミュラ。
10. 前記フォーミュラ中の脂肪の約２５重量％以下が、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）である、請求項１～９のいずれか一項に記載のフォーミュラ。
11. 前記フォーミュラが、添加されたＭＣＴを含まない、請求項１～１０のいずれか一項に記載のフォーミュラ。
12. 前記フォーミュラが、１００ｋｃａｌ当たり９～１４ｇの炭水化物及び／又は１００ｋｃａｌ当たり４．０～６．０ｇの脂肪を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載のフォーミュラ。