JP7828356B2 - 損傷した神経を治療するためのキット - Google Patents

Description

本開示は損傷した神経の医学的治療の分野に存する。

本開示の主題の背景として関連すると考えられる参考文献を以下に列挙する：
－国際公開第２０１９／０５８３７３号パンフレット
－国際公開第２０１９／０５８３７５号パンフレット
－米国特許第９，１８０，１４２号明細書

本明細書における上記参考文献の認定は、これらが本開示主題の特許性に何らかの形で関連することを意味するものとして推論されるものではない。

本開示は、対象から引き抜かれ、制御された方法でその場で凝固される全血を使用することにより、対象の損傷した神経を成長誘導又は再生するための方法及びキット、又はその治療を提供する。治療される神経は、押し潰された神経、特定の疾患プロセス（例えば、炎症）によって損傷した神経、部分的に切断された神経、又は２つの神経の断端を残すように完全に切断された神経であり得る。いくつかの実施形態により、対象から引き抜かれた血液は、神経の損傷部分又はスリーブの反対側の端部からスリーブ内に取り込まれる対向する神経の断端の２つの端部を包む神経包囲スリーブの内腔に導入され、内腔内で制御可能に凝固しながら、そのような損傷した神経部分及び／又は２つの切断された神経断端の間に血餅又は凝固した血液マトリックスを形成する。この血餅は、神経の損傷部分と物理的に接触している間、神経の修復を向上し、その機能を部分的又は完全に回復し得る。他の実施形態では、切断された神経の２つの断端を橋渡しするために神経移植片が使用される。

「神経治療部分」又は「治療部分」という用語は、本明細書において、切断された神経の断端の２つの端部部分の間の、損傷した神経部分を横切って神経再生を誘導するために本開示に従って治療される神経の部分、又は切断された神経の断端の２つの端部部分とその間の神経移植片とを含む部分を示すために使用される。

本開示において使用される全血は、典型的には個人から引き抜かれた血液であるが、ドナー又は血液バンクから得られた血液である場合もある。したがって、「血液」又は「全血」という用語は、特に断りのない限り、その供給源にかかわらず全血を意味すると解釈すべきである。

「凝固誘導剤」という用語は、本明細書において、１種又は複数種の凝固剤及び／又は抗抗凝固剤（ａｎｔｉ－ａｎｔｉ－ｃｏａｇｕｌａｎｔ）を示すために使用される。「混合物」という用語は、本明細書において、全血と凝固誘導剤を含む混合物を示すために使用される。

「血餅（ｃｌｏｔ）」、「血餅（ｂｌｏｏｄ ｃｌｏｔ）」又は「凝固血液」という用語は、前記混合物から形成された凝固した全血マトリックスを示すために交換可能に使用される。

以下において、方法が記載される場合、方法の実施におけるステップの順序は、それらが書かれる順序であってもなくてもよい。

本開示に従って治療可能な対象は、ヒト又は非ヒト動物であり得る。

したがって、本開示の一態様は、神経治療部分内又は神経治療部分を横切って神経を再生するための方法を提供する。本方法は、内腔を有するスリーブを、前記内腔内に収容されるように神経治療部分を包むように取り付けることを含む。本方法はまた、全血と前記凝固誘導剤との混合物を（混合は、導入前又は導入中に行われる）前記内腔に導入することを含む。神経を包むスリーブは、その内面と神経治療部分との間に空間を維持しながら神経治療部分を包むように製造又は構成することができ、その空間への凝固血液の導入を可能にして、損傷した神経上に血餅を形成する。全血と凝固誘導剤との混合物は、通常、混合物の凝固が完了する前に前記内腔に導入される。

本開示のいずれの態様においても、全血を対象から抜き取り、その自然凝固を防止するために抗凝固剤と最初に混合してもよいことに留意されたい。所望のタイミングで、全血を凝固誘導剤と混合して、損傷した神経部分の全血を制御可能に凝固させ、そこに所望の血餅を形成する。

本方法のいくつかの実施形態において、前記取り付けは、フィルム又はシートを神経治療部分の上に配置し、前記シートで前記部分を包んで神経包囲スリーブを形成することを含む。他の実施形態では、スリーブは先験的な管状要素であってもよく、治療部分はその中に導入される。スリーブは、プラスチック材料又は他の適切で生体適合性のある材料で作られてもよい。

本開示のいずれかの態様に関して記載された実施形態のいずれかの組み合わせが適用可能であることに留意されたい。言い換えれば、本開示のいずれかの態様は、記載された実施形態のいずれかの組み合わせによって定義され得る。

本開示のさらに別の態様は、損傷した神経部分を横切って神経線維の成長を誘導する方法を提供する。この方法は、神経誘導導管などの内腔を有する神経包囲スリーブを、前記内腔内に存在するように前記神経部分を包むように取り付けること；及び前記混合物を、混合物の完全な凝固前に前記内腔内に導入することを含む。

本方法のいくつかの実施形態において、スリーブは神経誘導導管である。

本方法のいくつかの実施形態において、損傷した神経部分は切断された神経線維を含む。

本方法のいくつかの実施形態において、神経部分は、スリーブ内で外科的に接合されるか又は近接させられる２つの切断された神経断端を含む。

本方法のいくつかの実施形態において、前記取り付けることは、フィルム又はシートを治療部分の上に配置することと、前記導管を形成するために前記部分を前記シートで包むこととを含む。

本方法のいくつかの実施形態において、前記取り付けることは、２つの神経断端をスリーブの両端から１つずつ前記スリーブ内に導入することと、前記神経包囲スリーブ内で２つの断端を互いに近接させることとを含む。いくつかの実施形態により、混合物は、２つの断端の間の空間を満たすように作られてもよい。

本方法のいくつかの実施形態において、前記近接させることは、縫合により前記スリーブ内に２つの断端を固定することを含む。

本方法のいくつかの実施形態において、前記導入は、前記神経部分と接触するように導管の内腔の一部を混合物で満たすことを含む。

本方法のいくつかの実施形態において、前記神経部分は切断された２つの神経断端を含み、前記導入は、前記混合物が前記断端と接触するように行われる。

いくつかの実施形態において、本方法は、前記導入の前（血液を凝固剤と混合する前、間又は後であり得る）に、酸素リッチガス、例えば酸素富化空気又は純酸素で血液を飽和させることをさらに含む。

いくつかの実施形態において、本方法は、前記導入の前に、血液を１つ又は複数の自己細胞と混合することをさらに含む。いくつかの実施形態において、前記１つ又は複数の自己細胞は、シュワン細胞を含む。

本開示のさらに別の態様は、切断された神経の第１及び第２の神経断端間の神経再生を促進する方法を提供する。一実施形態により、本方法は、神経誘導導管の第１の開放端部分を前記第１の神経断端上に取り付けて、例えば縫合により、固定することと、前記神経誘導導管の第２の開放端部分を前記第２の神経断端上に取り付けて固定することとを含む。前記神経誘導導管は、前記第１及び第２の開放端部分の間に延びる内腔を画定する。本方法はさらに、全血を凝固誘導剤と混合し、その混合物を、完全に凝固する前、すなわち、まだ流動可能な形態である間に前記内腔に導入し、血液を前記内腔内で凝固させることを含む。

本方法のいくつかの実施形態において、前記固定することは、前記第１及び第２の神経断端をそれぞれ第１及び第２の開放端部分に縫合することを含む。

本方法のいくつかの実施形態において、前記導入することは、前記内腔の一部を、第１及び第２の神経断端の両方に接触するように血液で満たすこと、すなわち、第１及び第２の神経断端の間の間隙又は空間を血液で満たし、神経断端及び血液の連続マトリックスを形成することを含む。

いくつかの実施形態において、本方法は、前記導入の前に、血液を酸素で飽和させることをさらに含む。

本方法のいくつかの実施形態において、抗抗凝固剤は、以下からなる群からの１つ又は複数である：ＡＣＤ－Ａ（抗凝固剤クエン酸デキストロース、溶液Ａ）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、クエン酸塩、ヘパリン及びシュウ酸塩（「第１の群」）。

本方法のいくつかの実施形態において、１つ又は複数の凝固剤又は抗抗凝固剤は、以下からなる群の１つ又は複数である：カオリン、Ｃａ^２＋、例えばグルコン酸カルシウムなどのカルシウム塩の形態のもの、Ｍｇ^２＋、負に帯電したリン脂質（ＰＬ）及び硫酸プロタミン（「第２の群」）；又は第１の群の１つ又は複数と第２の群の１つ又は複数との混合物。

いくつかの実施形態において、本方法は、前記導入の前に、血液に、ケラチン、幹細胞（あらゆる種類の）、成長因子、コラーゲン、骨髄、又は他の気体もしくは材料を添加するか、又は血液をそれらで飽和させることをさらに含む。

本方法のいくつかの実施形態において、前記導入は、血液アプリケータを管腔内に挿入することと、前記血液アプリケータ、例えば注射器によって血液を管腔内に注入することとを含む。

いくつかの実施形態において、本方法は、前記導入の前に、血液を１つ又は複数の自己細胞と混合することをさらに含む。いくつかの実施形態において、前記１つ又は複数の自己細胞は、シュワン細胞を含む。

本方法のいくつかの実施形態において、前記導管は、コラーゲン、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、及びブタ小腸粘膜下層（ＳＩＳ）から作られるか、又はそれらを含む。

本開示のさらに別の態様は、上記方法に採用され得る、対象の損傷した神経部分を治療、成長誘導、又は再生するためのキットを提供する。このキットは、前記損傷した神経部分を、前記部分が内腔の少なくとも一部内にあるように包囲するための内腔を有する神経包囲スリーブと；対象からの血液の引き抜きを可能にするための１つ又は複数の血液引き抜きデバイスと；任意選択的に、対象から引き抜かれた血液を受けるための１つ又は複数の血液収集レセプタクル、又は血液バンクから得られた全血を受けるための手段と；血液の凝固プロセスを開始するために、引き抜かれた血液と凝固誘導剤との混合を可能にするように構成された凝固アセンブリと；不完全凝固血液を前記内腔に導入するためのアプリケータとを備える。

キットのいくつかの実施形態において、１つ又は複数の収集レセプタクルは真空チューブである。

キットのいくつかの実施形態において、凝固アセンブリは、引き抜かれた血液を受容するための容器を備え、前記容器は、血液を前記凝固誘導剤と接触させるように構成される。

いくつかの実施形態において、キットは、引き抜かれた血液と混合するための１種又は複数種の凝固誘導剤をさらに備える。

キットのいくつかの実施形態において、１種又は複数種の凝固誘導剤は、前記１つ又は複数の血液収集レセプタクル内に含まれる。

キットのいくつかの実施形態において、抗抗凝固剤は、前記第１の群の１つ又は複数、又は前記第２の群の１つ又は複数、又は前記第１の群の１つ又は複数と前記第２の群の１つ又は複数との組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、キットは、神経包囲スリーブを形成するために前記損傷した神経部分の上に配置するためのフィルム又はシートをさらに備える。

キットのいくつかの実施形態において、前記スリーブは神経誘導導管である。

キットのいくつかの実施形態において、前記神経治療部分は、第１及び第２の神経断端を有する切断された神経である。

いくつかの実施形態において、前記キットは、前記神経治療部分を前記スリーブに固定するための固定要素又は保持要素をさらに備える。

いくつかの実施形態において、本キットは、損傷した神経部分を治療、成長誘導、又は再生するための方法における使用を意図している。本方法は、（ｉ）損傷した神経部分が内腔内に存在するように、内腔を有する前記スリーブで前記損傷した神経部分を包むこと、（ｉｉ）対象から全血を引き抜くこと、（ｉｉｉ）対象の血液を１種又は複数種の凝固誘導剤と混合すること、（ｉｖ）血液の凝固が完了する前に、凝固剤を含む血液を前記内腔内に導入すること、及び（ｖ）血液を前記内腔内で凝固させることを含む。

いくつかの実施形態において、キットは、上述の方法の実施形態のいずれか１つによる方法において使用することを意図されている。

本開示の他の態様により、切断された神経の２つの断端を橋渡しするために橋渡し神経移植片が採用される。これらの態様には、「神経移植片態様方法」と称する方法及び「神経移植片態様キット」と称するキットが含まれる。移植片態様によれば、神経線維の成長を誘導するため、又は第１の神経断端と第２の神経断端との間で神経を再生するための方法は、以下のことを含む：
（ｉ）第１の神経断端と第２の神経断端との間に神経移植片を位置決めすること。神経移植片は自己又は非自己の神経移植片であることができ、ドナー又は死体から得てもよく、同種異系又は異種であり得る。神経移植片は、部分的に合成されたもの、加工されたヒト神経同種移植片、又は完全に合成されたものであってもよい。神経移植片は、例えば適切な培地中に維持された新鮮なものであってもよいし、凍結されたものであってもよいし、他の方法で保存されたものであってもよい。神経移植片は、使用前に、例えば凍結によって無細胞になるように処理してもよい。神経移植片は、神経包囲スリーブ（例えば、チューブ）の内腔内に縫合することなく、それを片方の断端の上に取り付ける前に、又はそのように取り付けた後に、配置することができる。神経移植片は空の神経内膜チューブを含み、このチューブは、以前にそこを通過した軸索が残した微小チャネル／トンネルであり、第１と第２の神経断端間での神経の成長を可能にする。微小チャネルは、移植片が断端を連結しているとき、神経移植片の両端の間、すなわち、第１の神経断端と第２の神経断端の間に延びる；
（ｉｉ）全血と凝固誘導剤との混合物を、混合物の完全な凝固の前に、前記チャネルに導入することであって、前記導入は、前記位置決めの前又は後に実施される。これは、神経移植片の一端又は両端を前記混合物に接触させ、毛細管力によって血液が前記チャネルに入るのを許容することによって、又は他の任意の適切な手段によって、強制的な導入によって達成することができる。この導入は、前記位置決めの前でも後でもよい；及び、
（ｉｉｉ）血液を前記チャネル内で凝固させること。

凝固した全血の少なくとも一部は、第１の神経断端及び／又は第２の神経断端と接触し得ることに留意されたい。したがって、いくつかの実施形態では、本方法は、第１の神経断端と神経移植片との間、及び神経移植片と第２の神経断端との間に連続凝固全血マトリックスを形成し、それによって神経移植片チャネルを介して第１の神経断端と第２の神経断端とを連結することをさらに含む。

いくつかの実施形態において、神経移植片の態様の方法は、前記移植片を前記第１及び前記第２の神経断端の一方又は両方に固定することをさらに含む。

この方法のいくつかの実施形態では、前記固定することは、前記第１及び第２の神経断端を前記神経移植片に縫合することを含む。

いくつかの実施形態において、神経移植片の態様の方法は、前記導入の前に、血液を酸素で飽和させることをさらに含む。

いくつかの実施形態において、神経移植片の態様の方法は、前記導入の前に、血液を１つ又は複数の自己細胞と混合することをさらに含む。

神経移植片の態様の方法のいくつかの実施形態において、前記１つ又は複数の自己細胞はシュワン細胞を含む。

神経移植片の態様の方法のいくつかの実施形態において、前記１種又は複数種の凝固誘導剤は粉末の形態であり、前記粉末の粒子の少なくとも一部は前記チャネルに入るのに適合する大きさである。すなわち、粒子は十分に小さいので、その直径はチャネルの断面の直径よりも小さい。

いくつかの実施形態において、神経移植片の態様の方法は、粒子の少なくとも一部が２．５ミクロン未満、２ミクロン未満、１．５ミクロン未満、又はさらには１ミクロン未満のサイズを有する混合物を得るために、血液と混合する前に前記粉末をフィルタにかけることをさらに含む。いくつかの実施形態では、粉末は、前記チャネルに入るのに適合するサイズの粒子を５０％超含む。

神経移植片の態様の方法のいくつかの実施形態において、前記フィルタにかけることは、（ｉ）選択された時間の間、粉末を液体中に導入すること、（ｉｉ）浮遊粒子を収集すること、すなわち、液体の上部を収集すること、及び（ｉｉｉ）所望のフィルタにかけられた粒子を得るために前記粒子を乾燥することを含む。

神経移植片の態様の方法のいくつかの実施形態において、前記凝固誘導剤は、前記第１の群の１つ又は複数、あるいは前記第２の群の１つ又は複数、あるいは前記第１の群の１つ又は複数と前記第２の群の１つ又は複数との組み合わせである。

いくつかの実施形態において、神経移植片の態様の方法は、前記スリーブすなわち神経誘導導管を、第１の神経断端及び神経移植片の一部、第２の神経断端及び神経移植片の一部、又は第１の神経断端、神経移植片及び第２の神経断端のうちの少なくとも１つの上に取り付けることをさらに含み；前記導入することは、前記内腔を前記混合物で満たすことを含む。

第１の神経断端及び第２の神経断端を有する対象の損傷した神経部分の成長を誘導又は再生させるための神経移植片の態様のキットは、上記のキットの要素に加えて、さらに、それを通して神経の成長を可能にする微小チャネルを有する神経移植片、あるいはそのような神経移植片を採取又は作り出すための手段も備える。

神経移植片の態様のキットのいくつかの実施形態において、前記１つ又は複数の収集レセプタクルは真空管である。

神経移植片の態様のキットのいくつかの実施形態において、凝固アセンブリは、引き抜かれた血液を導入するための容器を備え、前記体積は、１種又は複数種の凝固剤又は抗抗凝固剤と接触可能である。

いくつかの実施形態において、神経移植片の態様のキットは、引き抜かれた血液と混合するための１種又は複数種の凝固誘導剤をさらに備える。

神経移植片の態様のキットのいくつかの実施形態において、１種又は複数種の抗凝固剤は前記１つ又は複数の血液収集レセプタクル内に含まれる。

神経移植片の態様のキットのいくつかの実施形態において、前記凝固誘導剤は、前記第１の群の１つ又は複数、あるいは前記第２の群の１つ又は複数、あるいは前記第１の群の１つ又は複数と前記第２の群の１つ又は複数との組み合わせである。

いくつかの実施形態において、神経移植片の態様のキットは、第１の神経断端及び神経移植片の一部、第２の神経断端及び神経移植片の一部、又は第１の神経断端、神経移植片及び第２の神経断端のうちの少なくとも１つの上に配置するための前記スリーブをさらに備える。アプリケータを用いることによって、凝固中の全血は前記スリーブの内腔に導入されることが意図される。そうすることにより、全血は、神経移植片のチャネルを介して、第１の神経断端と第２の神経断端との間に連続した凝固全血マトリックスを形成する。凝固した全血から形成された血餅は、神経の再生プロセスを向上させる。

キットのいくつかの実施形態において、前記スリーブは神経誘導導管である。

いくつかの実施形態において、神経移植片の態様のキットは神経移植片の態様の方法における使用を意図している。

いくつかの実施形態において、神経移植片の態様のキットは、神経移植片を使用する方法の上述の実施形態のいずれか１つ、又はそれらの任意の組み合わせにおける使用を意図している。

実施形態
以下は、本開示の態様による任意選択の実施形態及びその組み合わせである。これらの実施形態は、上記に一般的に記載したような本明細書の開示に追加することを意図するものであり、限定するものではない。これらの実施形態において、方法ステップは、書かれている順序であってもなくてもよい。
１．損傷した神経部分内又は神経部分を横切って神経を再生する方法であって、
前記神経部分がスリーブの内腔に収容されるように、前記神経部分を包むようにスリーブを取り付けること、及び
典型的には対象から引き抜かれた全血（ただし、ドナー又は血液バンクからのものでもよい）と、凝固剤及び／又は抗抗凝固剤であり得る１種又は複数種の凝固誘導剤との混合物を、完全に凝固する前に前記内腔に導入すること、
を含む方法。
２．前記取り付けることが、フィルム又はシートを前記部分の上に配置し、前記シートで前記部分を包んで前記スリーブを形成することを含む、実施形態１に記載の方法。
３．損傷した神経部分を横切って神経線維の成長を誘導する方法であって、
前記神経部分を包むようにスリーブを取り付けること、及び
典型的には対象から引き抜かれた全血と１種又は複数種の凝固誘導剤との混合物を、完全に凝固する前に前記内腔に導入すること、
を含む方法。
４．損傷した神経部分が、切断された神経線維を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記神経部分が、外科的に接合されるか又は近接させられる２つの切断された神経断端を含む、実施形態４に記載の方法。
６．前記取り付けることが、
フィルム又はシートを前記部分の上に配置すること、及び前記部分を前記シートで包んで前記スリーブを形成することを含む、実施態様５に記載の方法。
７．前記取り付けることが、
２つの神経断端を、前記スリーブの両端から１つずつ、前記スリーブ内に導入することと、２つの断端を前記導管内で互いに近接させることと
を含む実施態様５に記載の方法。
８．前記近接させることが、縫合により前記スリーブ内で２つの断端を固定することを含む、実施形態７に記載の方法。
９．前記導入することが、前記スリーブの内腔の一部を、前記神経部分に接触するように混合物で満たすことを含む、実施形態３～８のいずれか１つに記載の方法。
１０．前記神経部分が２つの切断された神経断端を含み、前記導入することは、前記混合物が前記断端と接触して断端の間に凝固した血液マトリックスを形成するように行われる、実施形態９に記載の方法。
１１．前記導入の前に、血液を酸素リッチガスで飽和させることを含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記導入の前に、血液を１つ又は複数の自己細胞と混合することを含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．前記１つ又は複数の自己細胞がシュワン細胞を含む、実施形態１２に記載の方法。
１４．切断された神経の第１の神経断端と第２の神経断端との間で神経線維の成長を誘導するための方法であって、
前記第１の神経断端の上にスリーブの第１の開放端部分を取り付けて固定すること、及び前記第２の神経断端の上にスリーブの第２の開放端部分を取り付けて固定することであって、前記スリーブが前記第１及び第２の開放端部分の間に延びる内腔を画定する、取り付けて固定することと、
対象から引き抜かれた全血を１種又は複数種の凝固誘導剤と混合し、それを混合物の凝固が完了する前に前記内腔に導入することと、
血液を前記内腔内で凝固させることと
を含む方法。
１５．前記固定することが、前記第１及び第２の神経断端をそれぞれ前記第１及び第２の端部分に縫合することを含む、実施態様１４に記載の方法。
１６．前記導入することが、前記混合物及びそこから形成される凝固血液マトリックスが前記第１及び第２の神経断端の両方に接触するように、前記内腔又はその一部を前記混合物で満たすことを含む、実施形態１４又は１５に記載の方法。
１７．前記導入の前に、血液を酸素で飽和させることを含む、実施形態１４～１６のいずれか１つに記載の方法。
１８．前記導入することが、血液アプリケータを管腔内に挿入することと、前記血液アプリケータによって血液を管腔内に注入することとを含む、実施形態１４～１７のいずれか１つに記載の方法。
１９．前記導入の前に、血液を１つ又は複数の自己細胞と混合することを含む、実施形態１４～１８のいずれか１つに記載の方法。
２０．前記１つ又は複数の自己細胞がシュワン細胞を含む、実施形態１９に記載の方法。
２１．対象の損傷した神経部分を成長誘導又は再生するためのキットであって、
前記損傷した神経部分が内腔の少なくとも一部に存在するように前記損傷した神経部分を包むための内腔を有するスリーブと、
任意選択的に、対象から血液を引き抜くための１つ又は複数の血液引き抜きデバイスと、
血液を受け取るための１つ又は複数の血液収集レセプタクルと、
引き抜かれた血液の凝固プロセスを開始するための１種又は複数種の凝固誘導剤と、引き抜かれた血液との混合を可能にするように構成された凝固アセンブリと、
不完全凝固血液を前記内腔に導入するためのアプリケータと、
を備えるキット。
２２．前記１つ又は複数の収集レセプタクルが真空管である、実施形態２１に記載のキット。
２３．前記凝固アセンブリが、血液を受け入れるための容器を備え、前記容器は、血液を前記凝固誘導剤と接触させるように構成されている、実施態様２１又は２２に記載のキット。
２４．１種又は複数種の凝固誘導剤を備える、実施形態２１～２３のいずれか１つに記載のキット。
２５．前記１種又は複数種の凝固誘導剤が、前記１つ又は複数の血液収集レセプタクル内に含まれる、実施形態２４に記載のキット。
２６．前記凝固誘導剤が、ＡＣＤ－Ａ（抗凝固剤クエン酸デキストロース、溶液Ａ）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、クエン酸塩、ヘパリン及びシュウ酸塩からなる群から選択される抗抗凝固剤である、実施形態２４又は２５に記載のキット。
２７．前記１種又は複数種の凝固誘導剤が、カオリン、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、負に帯電したリン脂質（ＰＬ）及び硫酸プロタミンから選択される、実施形態２１～２６のいずれか１つに記載のキット。
２８．前記神経包囲スリーブを形成するために、前記損傷した神経部分の上に配置するためのフィルム又はシートを備える、実施形態２１～２７のいずれか１つに記載のキット。
２９．前記神経包囲スリーブが神経誘導導管である、実施形態２１～２７のいずれか一項に記載のキット。
３０．前記損傷した神経部分を前記神経包囲スリーブに固定するための固定要素を備える、実施形態２１～２９のいずれか１つに記載のキット。
３１．前記損傷した神経部分が、第１及び第２の神経断端を有する切断された神経である、実施形態２１～３０のいずれか１つに記載のキット。
３２．損傷した神経部分を治療、成長誘導、又は再生するための方法において使用するための、実施形態２１～３１のいずれか１つに記載のキットであって、前記方法は、
（ｉ）前記損傷した神経部分が内腔内に収容されるように、内腔を有するスリーブで前記損傷した神経部分を包むことと、
（ｉｉ）対象から全血を引き抜くことと、
（ｉｉｉ）対象の血液を１種又は複数種の凝固誘導剤と混合することと、
（ｉｖ）血液の凝固が完了する前に、血液を凝固誘導剤とともに前記内腔に導入することと、
（ｖ）前記内腔内で血液を凝固させることと
を含むキット。
３３．実施形態１～２０のいずれか１つによる方法において使用するための、実施形態２１～３１のいずれか１つに記載のキット。
３４．第１の神経断端と第２の神経断端との間の神経線維の成長を誘導する方法であって、
第１の神経断端と第２の神経断端との間に神経移植片を配置し、任意選択的に、第１の神経断端と第２の神経断端のそれぞれを神経移植片の異なる端部に取り付けることであって、前記神経移植片は、第１の神経断端と第２の神経断端との間の神経の成長を可能にする微小チャネルを含む、配置し、任意選択的に取り付けることと、
全血、典型的には対象から引き抜いた血液と１種又は複数種の凝固誘導剤との混合物を、混合物の完全な凝固前に前記チャネルに導入することであって、前記導入は、前記配置の前又は後に実施される、導入することと、
血液を前記チャネル内で凝固させることと
を含む方法。
３５．前記移植片を前記第１及び第２の神経断端の一方又は両方に固定することを含む、実施態様３４に記載の方法。
３６．前記固定することが、前記第１及び第２の神経断端を前記神経移植片に縫合することを含む、実施態様３５に記載の方法。
３７．前記導入の前に、血液を酸素で飽和させることを含む、実施形態３４～３６のいずれか１つに記載の方法。
３８．前記導入の前に、血液を１つ又は複数の自己細胞と混合することを含む、実施形態３４～３７のいずれか１つに記載の方法。
３９．前記１つ又は複数の自己細胞がシュワン細胞を含む、実施形態３９に記載の方法。
４０．前記１種又は複数種の凝固剤及び／又は抗抗凝固剤が粉末の形態であり、前記粉末の粒子の少なくとも一部が前記チャネルに入るのに適合するサイズである、実施形態３４～３９のいずれか１つに記載の方法。
４１．粒子の少なくとも一部が２．５ミクロン未満のサイズを有する混合物を得るために、前記粉末を血液と混合する前にフィルタにかけることを含む、実施態様４０に記載の方法。
４２．前記フィルタにかけることが、
選択された時間の間、粉末を液体中に導入することと、
浮遊粒子を収集することと、
所望のフィルタにかけられた粒子を得るために、収集された粒子を乾燥することと
を含む、実施形態４１に記載の方法。
４３．前記凝固誘導剤が、ＡＣＤ－Ａ（抗凝固剤クエン酸デキストロース、溶液Ａ）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、クエン酸塩、ヘパリン及びシュウ酸塩からなる群から選択される抗抗凝固剤である、実施形態３４～４２のいずれか１つに記載の方法。
４４．前記１種又は複数種の凝固剤が、カオリン、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、負に帯電したリン脂質（ＰＬ）及び硫酸プロタミンからなる群から選択される、実施形態３４～４２のいずれか１つに記載の方法。
４５．第１の神経断端及び神経移植片の一部、第２の神経断端及び神経移植片の一部、又は第１の神経断端、神経移植片及び第２の神経断端のうちの少なくとも１つの上に包囲スリーブを取り付けることを含み、
前記導入することが、前記スリーブの内腔を前記混合物で満たすことを含む、
実施形態３４～４３のいずれか１つに記載の方法。
４６．第１の神経断端と第２の神経断端との間の神経線維の成長を誘導するためのキットであって、
第１の神経断端と第２の神経断端との間の神経線維の成長を可能にする微小チャネルを有する神経移植片と、
任意選択的に、対象から血液を引き抜くための１つ又は複数の血液引き抜きデバイスと、
血液を受け入れるための１つ又は複数の血液収集レセプタクルと、
引き抜かれた血液の凝固プロセスを開始するために、引き抜かれた血液を１種又は複数種の凝固誘導剤と混合するように構成された凝固アセンブリと、
不完全凝固血液を前記チャネルに導入するためのアプリケータと
を備えるキット。
４７．前記１つ又は複数の収集レセプタクルが真空管である、実施形態４６に記載のキット。
４８．前記凝固アセンブリが、血液を受け入れるための容器を備え、前記容器が、血液を前記凝固誘導剤と接触させるように構成されている、実施態様４６又は４７に記載のキット。
４９．１種又は複数種の凝固誘導剤を備える、実施形態４６～４８のいずれか１つに記載のキット。
５０．前記１種又は複数種の凝固誘導剤が、前記１つ又は複数の血液収集レセプタクル内に含まれる、実施形態４９に記載のキット。
５１．前記凝固誘導剤が、ＡＣＤ－Ａ（抗凝固剤クエン酸デキストロース、溶液Ａ）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、クエン酸塩、ヘパリン及びシュウ酸塩からなる群から選択される抗抗凝固剤である、実施形態４９又は５０に記載のキット。
５２．前記１種又は複数種の凝固誘導剤が、カオリン、Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、負に帯電したリン脂質（ＰＬ）及び硫酸プロタミンからなる群から選択される、実施形態４６～５１のいずれか１つに記載のキット。
５３．第１の神経断端及び神経移植片の一部、第２の神経断端及び神経移植片の一部、又は第１の神経断端、神経移植片及び第２の神経断端のうちの少なくとも１つの上に配置されるスリーブとして使用するための少なくとも１つの管状要素を備える、実施形態４６～５２のいずれか１つに記載のキット。
５４．前記神経包囲中空要素が神経誘導導管である、実施態様５３に記載のキット。
５５．第１の神経断端と第２の神経断端との間の神経線維の成長を誘導するための方法における使用のための、実施形態４６～５４のいずれか１つに記載のキットであって、方法は、
（ｉ）前記第１の神経断端と前記第２の神経断端との間に、その中を延びる微小チャネルを含む神経移植片を配置し、任意選択的に、前記神経移植片の第１の端部を前記第１の神経断端に取り付け、前記神経移植片の第２の端部を前記第２の神経断端に取り付ける、配置し、任意選択的に取り付けることと、
（ｉｉ）血液、任意選択的に対象から引き抜かれた全血を得ることと、
（ｉｉｉ）血液を１種又は複数種の凝固誘導剤と混合することと、
（ｉｖ）血液の凝固が完了する前に、混合物を移植片の微小チャネルに導入することと、
（ｖ）前記微小チャネル内で血液を凝固させることと
を含む、キット。
５６．実施形態３４～４５のいずれか１つに記載の方法において使用するための、実施形態４６～５４のいずれか１つに記載のキット。

本明細書において開示される主題をよりよく理解するため、及びそれが実際にどのように実施され得るかを例示するために、次に実施形態を、非限定的な例としてのみ、添付の図面を参照して記載する。

本開示の態様による損傷又は切断された神経を成長誘導又は再生する方法の異なる段階を例示する概略図である。 本開示の態様による損傷した神経を成長誘導又は再生する方法の異なる段階を例示する概略図である。 本開示の態様による方法の実施形態を例示する概略図である。 本開示の態様による方法の実施形態を例示する概略図である。 本開示の方法でウサギの切断神経を処理した試験結果を、標準的な一般的方法で処理したウサギの切断神経と比較して示す。図５Ａは、２つの試験群の神経の中間部分における軸索密度のヒストグラムを示し、図５Ｂは、２つの試験群の神経の中間部分の断面を示す。

図１Ａ～１Ｄを参照する。それらは本開示の態様に従う損傷又は切断された神経を成長誘導又は再生する方法の異なる段階を例示する概略図である。図１Ａは、治療される対象の切断された神経の第１及び第２の断端１０２及び１０４を示す。スリーブ１０６、例えば神経誘導導管は、内腔１０７を有し、第１及び第２の開放端１０８及び１１０の間に延在し、それぞれの開放端を通して断端１０２／１０４のそれぞれを受容するように構成され、それによってスリーブ１０６は第１及び第２の断端１０２及び１０４の上に取り付けられる。図１Ａ～１Ｄ及び図２Ａ～２Ｂでは、スリーブは透明であり、そうでなければ隠れてしまうであろう要素を見ることができるようになっているが、スリーブは完全な透明と完全な不透明の間の任意の透明度を持つ材料で作ることができることに注意されたい。

図１Ａでは、神経の断端１０２／１０４がそれぞれ第１及び第２の開放端１０８及び１１０を介して導入され、断端を包むスリーブの部分に縫合などにより固定されている。図１Ｂは、断端１０２及び１０４がスリーブ１０６内にあり、断端１０３及び１０５のそれぞれの端部を含む部分がスリーブ１０６の内腔内にあり、断端のそれぞれがそれぞれの開口部を越えて延びるように固定要素１１２によって所定の位置に固定されている状態を示している。

図１Ｃに見られるように、全血、典型的には対象から引き抜かれた血液と、１種又は複数種の凝固剤及び／又は１種又は複数種の抗抗凝固剤である１種又は複数種の凝固誘導剤との混合物１１４が、混合物の完全な凝固前、すなわち血液がまだ流動可能な状態にあるときに、内腔１０７内に導入される。内腔への混合物の導入は、注射器１０９又は任意の適切な手段によって行うことができる。混合物が断端のそれぞれの少なくとも一部に接触するように、内腔１０７は混合物で満たされる。図１Ｄは、混合物が２つの断端１０２／１０４を連結する連続的なマトリックスを形成していることを示している。混合物が内腔１０７内にあるときに、断端１０２／１０４の１つ又は２つに接触するかそれを包む血餅が形成されるまで、混合物の凝固プロセスが進行する。スリーブ１０６は神経の断端にぴったりとフィットするように作られてもよい。しかしながら、そうでない場合には、混合物を内腔１０７内に保持するために、第１及び第２の開放端１０８及び１１０を、例えば布、ドレッシング手段、又は任意の適切なシール手段によってシールしてもよい。

次に、本開示の態様による実施形態の非限定的な例の概略図である図２Ａ～２Ｃを参照する。図２Ａは、対象の神経ＮＥの損傷部分２１１の上に取り付けられたスリーブ２０６を示す。スリーブは、神経ＮＥの周囲に巻かれたシートによって形成されてもよいし、神経上に配置するために開くことができるように、その壁に軸方向に延びる切れ目を有する可撓性の管状要素から形成されてもよい。スリーブ２０６が所定の位置に設置されると、全血、典型的には対象から引き抜かれた血液と１種又は複数種の凝固誘導剤との混合物２１４が、混合物の凝固が完了する前、すなわち図２Ｂに見られるように血液がまだ流動可能な形態であるときに、スリーブ２０６の内腔２０７に導入される。混合物２１４は神経ＮＥの損傷部分２１１に接触するかそれを包むように内腔２０７を満たし、図２Ｃに見られるように、神経ＮＥの損傷部分２１１に接触するかそれを包む血餅を形成するように内腔に維持される。やがて、血餅は損傷した神経の再生又は成長を誘導する。

図３は、本開示の態様による方法の実施形態の非限定的な例の概略図である。この例では、損傷神経は、第１の神経断端３０２及び第２の神経断端３０４を有する切断神経である。２つの断端３０２及び３０４は、それを通して神経の成長を促進するチャネル３２２を有する神経移植片３２０を介して互いに連結されている。神経移植片３２０のチャネル３２２は、神経移植片３２０の第１の端部３２４と第２の端部３２６との間に延びている。第１の端部３２４は第１の神経断端３０２と接合され、第２の端部３２６は第２の神経断端３０４と接合される。通常、治療される対象から引き抜かれる全血は、１種又は複数種の凝固誘導剤（すなわち、凝固剤及び／又は抗抗凝固剤）と混合され、全血と凝固誘導剤との混合物３１５を得、これは次にアプリケータ３０９によって、チャネル３２２に導入される。この導入は、一方又は両方の端部３２４／３２６を混合物中に置いて、毛細管力による混合物の微小チャネル内への進入を可能にすることによっても可能である。混合物３１５は、任意選択的に、神経移植片３２０と各神経断端３０２及び３０４との間の界面にも適用することができる。次いで、全血は、微小チャネルを通して２つの断端間の神経線維の成長を向上させる血餅を形成するために、チャネル内及び任意選択的に界面上で凝固される。

図４は、本開示の一態様による方法の実施形態の非限定的な例を示す概略図である。この例は、各神経の断端と神経移植片との間の界面をスリーブ４０６で包囲し、任意選択的に断端のそれぞれをスリーブ４０６及び／又は神経移植片４２０に固定することによって、図３のものとは異なる。スリーブ４０６の内腔４０７は、神経移植片４２０のチャネル４２２が凝固開始剤と全血の混合物４１５で完全又は部分的に満たされるように凝固する全血で満たされ、また、断端４０２及び４０４と神経移植片４２０との間の間隙も凝固する全血で満たされ、その結果、２つの断端の間に連続した血餅が生じる。

ウサギを用いた本発明の方法の試験
本開示の方法をウサギで試験した。ウサギの脛骨神経の２．５ｃｍの部分を切断した。神経誘導導管を、神経の断端の２つの縁とそれらの間の隙間の上に取り付けた。両縁を縫合して神経誘導導管に固定した。ウサギから自己全血を引き抜き、凝固開始剤と混合して血液凝固を開始させた。その後、神経誘導導管の内腔をウサギの活性化全血で満たし、２つの縁を連結する内腔内に血餅マトリックスを形成した。ウサギの神経の成長と再生の状態を４ヵ月後に調べた。図５Ａは、４ヵ月後の神経の所与の領域における軸索の割合のヒストグラムを示す。各ヒストグラムの左のバーは神経の近位部における結果を示し、各ヒストグラムの右のバーは神経の中間部における結果を示す。「ＡｃｔｉＧｒｆｔ使用」と記載された群は、本開示の方法で試験されたウサギを表す。近位部と中間部のいずれの部分においても、導管内で全血餅を使用した群では、使用しなかった群よりも多くの軸索が認められた。

図５Ｂは、４ヵ月後の切断神経の中間部の断面図を示す。左の断面は本開示の方法を用いなかった対照群で、導管は未充填のままであり、右の断面は本開示の方法を用いた被検群で、導管はウサギの凝固全血で満たされた。ミエリンを標識し、認識できるようにし、被検群の断面は対照群よりもはるかに高い軸索密度を示している。

Claims (6)

1. 対象の損傷した神経部分を成長誘導又は再生するためのキットであって、
   前記損傷した神経部分が内腔の少なくとも一部に存在するように前記損傷した神経部分を包むための内腔を有する神経包囲中空要素と、
   対象からの血液の引き抜きを可能にするための１つ又は複数の血液引き抜きデバイスと、
   前記対象から引き抜かれた血液を受け取るための１つ又は複数の血液収集レセプタクルと、
   引き抜かれた血液の凝固プロセスを開始するための１種又は複数種の凝固誘導剤と、引き抜かれた血液との混合を可能にするように構成された凝固アセンブリであって、前記凝固アセンブリが、前記引き抜かれた血液を導入するための容積を備え、前記容積が、１種又は複数種の凝固剤又は抗抗凝固剤と接触可能である、凝固アセンブリと
   不完全凝固血液を前記内腔に導入するためのアプリケータと
   を備えるキット。
2. 前記引き抜かれた血液と混合するための１種又は複数種の抗凝固剤を含む、請求項１に記載のキット。
3. 前記神経包囲中空要素を形成するために、前記損傷した神経部分の上に配置するためのフィルム又はシートを備える、請求項１又は２に記載のキット。
4. 前記神経包囲中空要素が神経誘導導管である、請求項１～３のいずれか一項に記載のキット。
5. 前記損傷した神経部分を前記神経包囲中空要素に固定するための固定要素を備える、請求項１～４のいずれか一項に記載のキット。
6. 第１の神経断端と第２の神経断端との間の、それを通る神経の成長を可能にする微小チャネルを有する神経移植片を含み、
   前記アプリケータは、不完全凝固血液を前記チャネルに導入するためのアプリケータであり、
   前記神経包囲中空要素は、前記第１の神経断端及び前記神経移植片の一部、前記第２の神経断端及び前記神経移植片の一部、又は前記第１の神経断端、前記神経移植片及び前記第２の神経断端のうち少なくとも１つの上に配置されるためのものである、請求項１～５のいずれか一項に記載のキット。