JPH01104607A - 分散ポリマーおよびその製法 - Google Patents
分散ポリマーおよびその製法Info
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- JPH01104607A JPH01104607A JP22482388A JP22482388A JPH01104607A JP H01104607 A JPH01104607 A JP H01104607A JP 22482388 A JP22482388 A JP 22482388A JP 22482388 A JP22482388 A JP 22482388A JP H01104607 A JPH01104607 A JP H01104607A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F20/00—Homopolymers and copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride, ester, amide, imide or nitrile thereof
- C08F20/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms, Derivatives thereof
- C08F20/52—Amides or imides
- C08F20/54—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide
- C08F20/58—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide containing oxygen in addition to the carbonamido oxygen, e.g. N-methylolacrylamide, N-acryloylmorpholine
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアセタール基を有するビニルモノマーのポリマ
ーであるかまたはかかる七ツマ−と他のビニルモノマー
とのコポリマーであるラテックス粒子からなる分散ポリ
マー、およびその製法に関する。これらのポリマーは、
遊離のアミノ基を有する生物学的に活性な物質をそのポ
リマーに結合させることにより、血清学的または免疫学
的な測定法に適する生物学的に活性なラテックス接合体
の製造に使用され得る。
ーであるかまたはかかる七ツマ−と他のビニルモノマー
とのコポリマーであるラテックス粒子からなる分散ポリ
マー、およびその製法に関する。これらのポリマーは、
遊離のアミノ基を有する生物学的に活性な物質をそのポ
リマーに結合させることにより、血清学的または免疫学
的な測定法に適する生物学的に活性なラテックス接合体
の製造に使用され得る。
適当な免疫学的試薬が負荷された指示薬または担体粒子
の使用により血清学的または免疫学的測定法の感度を高
めることは知られている。
の使用により血清学的または免疫学的測定法の感度を高
めることは知られている。
担体粒子としては直径０．０２〜５μｍを有するラテッ
クス粒子が使用され得る。
クス粒子が使用され得る。
ヨーロッパ特許出願ＥＰ−Ａ−０，０８０，６１４号（
米国特許第４，４４８．９０８号）の記載から、アミド
基を介して結合されたアセタール官能基を含有するラテ
ックス粒子は知られている。水性媒体中において予め調
製されたラテックスコアは、アミド基を介して結合され
たアセタール基を含有するビニルモノマーを用いて膨潤
される。充分に水不溶性でなければならないこれらビニ
ルモノマーを次に親水性またはイオン性であることがで
きる他の七ツマ−と共重合させる。かかる試薬は血清タ
ンパク質、例えばＣ−反応性タンパク質の比濁測定に使
用されうる。
米国特許第４，４４８．９０８号）の記載から、アミド
基を介して結合されたアセタール官能基を含有するラテ
ックス粒子は知られている。水性媒体中において予め調
製されたラテックスコアは、アミド基を介して結合され
たアセタール基を含有するビニルモノマーを用いて膨潤
される。充分に水不溶性でなければならないこれらビニ
ルモノマーを次に親水性またはイオン性であることがで
きる他の七ツマ−と共重合させる。かかる試薬は血清タ
ンパク質、例えばＣ−反応性タンパク質の比濁測定に使
用されうる。
前記ヨー ０ ツバ特許出願ＥＰ−Ａ−０，０８０，６
１４号に記載された方法は手数がかかる、何故ならラテ
ックス粒子ははじめに核を調製して２段階で製造される
からである。その上シエル重合のためのコアの膨潤はす
べてのビニルモノマーとではなくてかかる充分に水不溶
性であるものとしか起らない。
１４号に記載された方法は手数がかかる、何故ならラテ
ックス粒子ははじめに核を調製して２段階で製造される
からである。その上シエル重合のためのコアの膨潤はす
べてのビニルモノマーとではなくてかかる充分に水不溶
性であるものとしか起らない。
さらに、現在のコアーシェル重合法では利用しうるラテ
ックスコアから出発して特定の寸法のラテックス粒子し
か生じない。
ックスコアから出発して特定の寸法のラテックス粒子し
か生じない。
それゆえ、アセタール基を有するビニル化合物を使用し
て任意の所望の寸法の分散ポリマーを製造するための一
段階共重合法が要求されていた。
て任意の所望の寸法の分散ポリマーを製造するための一
段階共重合法が要求されていた。
今、驚くべきことに、アミド基を介して結合されたアセ
タールを含有するアクリル酸またはメタクリル酸七ツマ
−を水性媒体中で他のビニルモノマーと一緒に重合させ
ることにより製造された担体粒子を使用することにより
、従来法の前記した欠点が克服されうろことが見出され
た。
タールを含有するアクリル酸またはメタクリル酸七ツマ
−を水性媒体中で他のビニルモノマーと一緒に重合させ
ることにより製造された担体粒子を使用することにより
、従来法の前記した欠点が克服されうろことが見出され
た。
従って本発明は水性媒体中における式■ＣＨ２＝ＣＲ＋
−Ｃｏ−ＮＨ−（ＣＨｘ）ｎ−ＣＨ（ＯＲｔ）ＯＲｓ
Ｉ〔式中、 ｎは１〜６であり、 Ｒ１はＨまたはＣＨ，でありそして Ｒ２およびＲ１は同一であるかまたは相異なっていて−
（ＣＨｘ）ｍ−ＣＨｚ （ここでｍはθ〜７である）ま
たは−〇（Ｘ）（Ｙ）Ｚ （、：、： −ｔ’ Ｘ 、
ＹおよびＺは同一であるかまたは相異なっていて（Ｃ
Ｈｘ）ｐＣＨｉを表わし、そしてｐは１〜３である）を
表わす〕を有する化合物の１種またはそれ以上、および
場合により他の１種またはそれ以上のビニル誘導体から
なる分散ポリマーに関する。
−Ｃｏ−ＮＨ−（ＣＨｘ）ｎ−ＣＨ（ＯＲｔ）ＯＲｓ
Ｉ〔式中、 ｎは１〜６であり、 Ｒ１はＨまたはＣＨ，でありそして Ｒ２およびＲ１は同一であるかまたは相異なっていて−
（ＣＨｘ）ｍ−ＣＨｚ （ここでｍはθ〜７である）ま
たは−〇（Ｘ）（Ｙ）Ｚ （、：、： −ｔ’ Ｘ 、
ＹおよびＺは同一であるかまたは相異なっていて（Ｃ
Ｈｘ）ｐＣＨｉを表わし、そしてｐは１〜３である）を
表わす〕を有する化合物の１種またはそれ以上、および
場合により他の１種またはそれ以上のビニル誘導体から
なる分散ポリマーに関する。
第１図は縦軸上のＢＮＡ系（ＮＡ−ラテックス−ＣＲＰ
アッセイ、Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ社）での古
典的なネフエロメトリーによるアッセイと比較した本発
明によるポリマーを用いたタービジメトリーアッセイ（
横軸）におけるＣＲＰ測定の結果を示す。
アッセイ、Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ社）での古
典的なネフエロメトリーによるアッセイと比較した本発
明によるポリマーを用いたタービジメトリーアッセイ（
横軸）におけるＣＲＰ測定の結果を示す。
第２図はタービジメトリーアッセイ（横軸）における本
発明によるポリマーを用いたＩｇＥ測定の結果および縦
軸上の古典的なエンザイムイムノアツセイ（Ｅｎｚｙｇ
ｎｏｓｔ■ ＩｇＥ、 ＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅＡＧ
）を用いた測定結果を示す。
発明によるポリマーを用いたＩｇＥ測定の結果および縦
軸上の古典的なエンザイムイムノアツセイ（Ｅｎｚｙｇ
ｎｏｓｔ■ ＩｇＥ、 ＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅＡＧ
）を用いた測定結果を示す。
第３図はタービジメトリーアッセイ（横軸）における本
発明によるポリマーを用いたＡＦＰ測定の結果および縦
軸上の古典的なエンザイムイムノアツセイ（Ｅｎｚｙｇ
ｎｏｓｔ■ＡＦＰ％ＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅＡＧ）を
用いた測定結果を示す。
発明によるポリマーを用いたＡＦＰ測定の結果および縦
軸上の古典的なエンザイムイムノアツセイ（Ｅｎｚｙｇ
ｎｏｓｔ■ＡＦＰ％ＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅＡＧ）を
用いた測定結果を示す。
好ましい式Ｉの化合物はアセタール部分中に０２〜Ｃ８
アルキルを有するアクリル−またはメタクリル−アミド
アルカナールジアルキルアセクールである。特にアクリ
ル−またはメタクリル−アミドアセトアルデヒドジ−ｎ
−ペンチルアセタールが適当である。
アルキルを有するアクリル−またはメタクリル−アミド
アルカナールジアルキルアセクールである。特にアクリ
ル−またはメタクリル−アミドアセトアルデヒドジ−ｎ
−ペンチルアセタールが適当である。
式Ｉに該当しない適当なビニル誘導体の例をあげれば、
スチレン、ビニルナフタレン、ビニルトルエン、メタク
リル酸、アクリル酸またはクロトン酸である。
スチレン、ビニルナフタレン、ビニルトルエン、メタク
リル酸、アクリル酸またはクロトン酸である。
ヒドロキシル置換アクリル酸またはメタクリル酸のエス
テルまたはアミドからなる群の水溶性上ツマ−１例えば
Ｎ−（２，３−ジヒドロキシプロピル）メタクリルアミ
ド、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド
または２−ヒドロキシプロピルメタクリレートを付加的
に使用するのも好ましい。ベタイン構造を有する水溶性
上ツマ−例えばＮ−（３−スルホプロピル）−Ｎ−メタ
クリルオキシエチル−Ｎ、Ｎ−ジメチルアンモニウムベ
タインあるいはＮ−（３−スルホプロピル）−Ｎ−メタ
クリルアミドプロピル−Ｎ、Ｎ−ジメチルアンモニウム
ベタインを付加的に使用することも好ましくありうる。
テルまたはアミドからなる群の水溶性上ツマ−１例えば
Ｎ−（２，３−ジヒドロキシプロピル）メタクリルアミ
ド、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド
または２−ヒドロキシプロピルメタクリレートを付加的
に使用するのも好ましい。ベタイン構造を有する水溶性
上ツマ−例えばＮ−（３−スルホプロピル）−Ｎ−メタ
クリルオキシエチル−Ｎ、Ｎ−ジメチルアンモニウムベ
タインあるいはＮ−（３−スルホプロピル）−Ｎ−メタ
クリルアミドプロピル−Ｎ、Ｎ−ジメチルアンモニウム
ベタインを付加的に使用することも好ましくありうる。
本発明による分散系（「ラテックス」）は式Ｉを有する
１種またはそれ以上のビニルモノマーおよび場合により
他のビニルモノマー類をイオン系および／または非イオ
ン系界面活性剤の存在下に重合または場合により共重合
させることにより製造されうる。
１種またはそれ以上のビニルモノマーおよび場合により
他のビニルモノマー類をイオン系および／または非イオ
ン系界面活性剤の存在下に重合または場合により共重合
させることにより製造されうる。
それゆえ本発明はまた式■を有する化合物の１種または
それ以上および場合により他の１種またはそれ以上のビ
ニル誘導体を水性媒体中において乳化剤およびラジカル
形成性開始剤の存在下に重合させることからなる前記定
義されたポリマーの製法にも関する。
それ以上および場合により他の１種またはそれ以上のビ
ニル誘導体を水性媒体中において乳化剤およびラジカル
形成性開始剤の存在下に重合させることからなる前記定
義されたポリマーの製法にも関する。
適当な乳化剤（界面活性剤）の例をあげれば、好ましく
は１０〜２０個の炭素原子を有する長鎖脂肪族アルコー
ルとの、あるいはそのアルキル基中に好ましくは６〜１
２個の炭素原子を含有するアルキルフェノールとの、あ
るいはそのアルキル基が好ましくはそれぞれ３〜１２個
の炭素原子を有する分校状アルキル基であるジアルキル
フェノールまたはトリアルキルフェノールとのポリグリ
コールエーテルである。これらの例をあげれば、エチレ
ンオキシドとラウリルアルコール、ステアリルアルコー
ル、オレイルアルコール、ココナツ脂肪アルコール、オ
クチルフェノール、ノニルフェノール、ジイソプロピル
フェノール、トリイソプロピルフェノール、ジー第三ブ
チルフェノールまたはトリー第三ブチルフェノールとの
反応生成物である。エチレンオキシドとポリプロピレン
グリコールまたはポリブチレングリコールとの反応生成
物も同様に適する。
は１０〜２０個の炭素原子を有する長鎖脂肪族アルコー
ルとの、あるいはそのアルキル基中に好ましくは６〜１
２個の炭素原子を含有するアルキルフェノールとの、あ
るいはそのアルキル基が好ましくはそれぞれ３〜１２個
の炭素原子を有する分校状アルキル基であるジアルキル
フェノールまたはトリアルキルフェノールとのポリグリ
コールエーテルである。これらの例をあげれば、エチレ
ンオキシドとラウリルアルコール、ステアリルアルコー
ル、オレイルアルコール、ココナツ脂肪アルコール、オ
クチルフェノール、ノニルフェノール、ジイソプロピル
フェノール、トリイソプロピルフェノール、ジー第三ブ
チルフェノールまたはトリー第三ブチルフェノールとの
反応生成物である。エチレンオキシドとポリプロピレン
グリコールまたはポリブチレングリコールとの反応生成
物も同様に適する。
イオン性乳化剤のうちでは、とりわけアニオン性乳化剤
、特にアルキルスルホネート、アリールスルホネートま
たはアルキルアリールスルホネートのアルカリ金属塩ま
たはアンモニウム塩、ならびにそれぞれの炭化水素基と
アニオン基との間に場合によりオキシエチレン単位を有
する適当な硫酸塩、燐酸塩またはホスホン酸塩のアルカ
リ金属塩またはアンモニウム塩が適当である。それらの
例をあげれば、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸
ナトリウム、オクチルフェノールグリコールエーテル硫
酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム
、ラウリルジグリコール硫酸ナトリウム、トリー第三ブ
チルフェノールペンタグリコール硫酸アンモニウム、お
よびトリー第三ブチルフェノールオクタグリコール硫酸
アンモニウムである。
、特にアルキルスルホネート、アリールスルホネートま
たはアルキルアリールスルホネートのアルカリ金属塩ま
たはアンモニウム塩、ならびにそれぞれの炭化水素基と
アニオン基との間に場合によりオキシエチレン単位を有
する適当な硫酸塩、燐酸塩またはホスホン酸塩のアルカ
リ金属塩またはアンモニウム塩が適当である。それらの
例をあげれば、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸
ナトリウム、オクチルフェノールグリコールエーテル硫
酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム
、ラウリルジグリコール硫酸ナトリウム、トリー第三ブ
チルフェノールペンタグリコール硫酸アンモニウム、お
よびトリー第三ブチルフェノールオクタグリコール硫酸
アンモニウムである。
ドデシル硫酸ナトリウムとオクチルフェノキシポリエト
キシエタノール（トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ■）Ｘ ４０
５）の混合物が使用されるのが好ましい。
キシエタノール（トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ■）Ｘ ４０
５）の混合物が使用されるのが好ましい。
モノマーからなる混合物に七ツマー混合物を基準として
２０重量％までのジメチルホルムアミドまたは粘度を低
下させるその他の物質を添加するのが好ましい。
２０重量％までのジメチルホルムアミドまたは粘度を低
下させるその他の物質を添加するのが好ましい。
重合または共重合はそれ自体慣用の方法で実施されうる
。しかしながら本発明方法の好ましい態様は、乳化剤お
よびラジカル形成性開始剤の水溶液中に重合条件、すな
わち＋ＩＯ’ｏ〜＋１２０℃好ましくは＋５０°Ｃ〜＋
９０°Ｃで、継続して撹拌しながらモノマーまたは七ツ
マー混合物を滴下することからなる計量法である。
。しかしながら本発明方法の好ましい態様は、乳化剤お
よびラジカル形成性開始剤の水溶液中に重合条件、すな
わち＋ＩＯ’ｏ〜＋１２０℃好ましくは＋５０°Ｃ〜＋
９０°Ｃで、継続して撹拌しながらモノマーまたは七ツ
マー混合物を滴下することからなる計量法である。
次に既知方法に従い過剰の七ツマ−および開始剤および
乳化剤の残分をポリマーから除去する。好ましい方法で
はポリマーを例えばＮａＨＣＯ。
乳化剤の残分をポリマーから除去する。好ましい方法で
はポリマーを例えばＮａＨＣＯ。
緩衝液（０，０１〜０．０５重量％）での透析にかける
。
。
本発明はさらに生物学的に活性な物質との接合体の製造
への本発明によるポリマーまたはコポリマーの使用にも
関する。
への本発明によるポリマーまたはコポリマーの使用にも
関する。
以下にラテックス接合体とも呼ばれるかかる接合体分散
系を製造するには、前記した播種重合されたラテックス
粒子の懸濁液を５より下、好ましくは３より下のｐＨ値
に調整しそしてこれを結合すべき免疫学的に活性な物質
、例えば抗体または抗原とインキュベーションすること
ができる。タンパク質のアミノ基と本発明によるラテッ
クス粒子上の遊離されたアルデヒドとの間の不安定な結
合は知られた方法で還元される。中性緩衝液中の水素化
硼素シアノナトリウムの溶液がこれに用いられるのが好
ましい。結合されなかった免疫学的に活性な物質または
その他の不純物は反応混合物から分離する。これは好都
合には遠心分離または適当な膜上で洗浄することにより
行われる。
系を製造するには、前記した播種重合されたラテックス
粒子の懸濁液を５より下、好ましくは３より下のｐＨ値
に調整しそしてこれを結合すべき免疫学的に活性な物質
、例えば抗体または抗原とインキュベーションすること
ができる。タンパク質のアミノ基と本発明によるラテッ
クス粒子上の遊離されたアルデヒドとの間の不安定な結
合は知られた方法で還元される。中性緩衝液中の水素化
硼素シアノナトリウムの溶液がこれに用いられるのが好
ましい。結合されなかった免疫学的に活性な物質または
その他の不純物は反応混合物から分離する。これは好都
合には遠心分離または適当な膜上で洗浄することにより
行われる。
播種重合された本発明によるラテックスは安定性が高い
点で優れている。これらは特に感度の良い試薬の製造に
適する。このことは重要である、なぜなら慣用の試薬の
欠点は、それらを用いて行われたネフエロメトリーまた
はタービジメトリーによる測定結果がエンザイムイムノ
アツセイの結果とあまり良く一致しないという事実にあ
るからである。実施例１および２に記載されるようにし
てＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）測定用の試薬が調製
された。この試薬を用いて実施例３に記載されるように
してタービジメトリーによる測定が行われた。
点で優れている。これらは特に感度の良い試薬の製造に
適する。このことは重要である、なぜなら慣用の試薬の
欠点は、それらを用いて行われたネフエロメトリーまた
はタービジメトリーによる測定結果がエンザイムイムノ
アツセイの結果とあまり良く一致しないという事実にあ
るからである。実施例１および２に記載されるようにし
てＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）測定用の試薬が調製
された。この試薬を用いて実施例３に記載されるように
してタービジメトリーによる測定が行われた。
このＣＲＰ試薬により約５〜２５０ｍｇ／ （ｌのＣＲ
Ｐの測定ができる。すなわち診断上重要な測定範囲が完
全にカバーされる。第１図から明らかなとおり、ネフエ
ロメトリーによるアッセイ（Ｎａ−ラテックス−ＣＲＰ
試薬、Ｂａｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ）の結果とよく
一致する。相関定数は Ｙ（タービジメトリー）＝０．９０９Ｘ（ＢＮＡ）＋５
．８２ｈ＋＋ｇ／Ｑ、 ｒ−０，９６７である。本発明
によるポリマーを用いて痕跡タンパク質測定用の試薬も
調製されうる。
Ｐの測定ができる。すなわち診断上重要な測定範囲が完
全にカバーされる。第１図から明らかなとおり、ネフエ
ロメトリーによるアッセイ（Ｎａ−ラテックス−ＣＲＰ
試薬、Ｂａｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ）の結果とよく
一致する。相関定数は Ｙ（タービジメトリー）＝０．９０９Ｘ（ＢＮＡ）＋５
．８２ｈ＋＋ｇ／Ｑ、 ｒ−０，９６７である。本発明
によるポリマーを用いて痕跡タンパク質測定用の試薬も
調製されうる。
実施例４に記載されるようにしてイムノグロブリンＥ
（ＩｇＥ）のタービジメトリーによる測定のための試薬
が、そして実施例６に記載されるようにしてα−フェト
プロティン（ＡＦＰ）のタービジメトリーによる測定の
ための試薬が製造された。ＩｇＥのタービジメトリーに
よる測定は実施例５に記載されるようにして、モしてＡ
ＦＰのそれは実施例７に記載されるようにして行われた
。ＩｇＥ試薬の測定範囲は３０〜２０００１０／＋ｘｆ
ｆである。血清プールについては、第２図に示されるよ
うにエンザイムイムノアツセイ（ＥｎｚｙｇｎｏｓｔＩ
ｇＥＳＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ）の結果と良く
一致している。相関定数は Ｙ（タービジメトリー）＝０．９６２Ｘ（ＥＩＡ）＋１
１．６９１Ｕ／ｍｆｆ、 ｒ＝０．９７３である。
（ＩｇＥ）のタービジメトリーによる測定のための試薬
が、そして実施例６に記載されるようにしてα−フェト
プロティン（ＡＦＰ）のタービジメトリーによる測定の
ための試薬が製造された。ＩｇＥのタービジメトリーに
よる測定は実施例５に記載されるようにして、モしてＡ
ＦＰのそれは実施例７に記載されるようにして行われた
。ＩｇＥ試薬の測定範囲は３０〜２０００１０／＋ｘｆ
ｆである。血清プールについては、第２図に示されるよ
うにエンザイムイムノアツセイ（ＥｎｚｙｇｎｏｓｔＩ
ｇＥＳＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ）の結果と良く
一致している。相関定数は Ｙ（タービジメトリー）＝０．９６２Ｘ（ＥＩＡ）＋１
１．６９１Ｕ／ｍｆｆ、 ｒ＝０．９７３である。
ＡＦＰ試薬の測定範囲は５０〜１５００ｎｇ／ ｍＱで
ある。
ある。
血清および血漿試料に関しては第３図に示されるように
エンザイムイムノアツセイ（ＥｎｚｙｇｎｏｓｔＡＦＰ
、 Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ）の結果とよく一
致した。相関定数は Ｙ（タービジメトリー）−０，９６５Ｘ（ＥＩＡ）＋４
．３１ｎｇ／ｍ１２． ｒ−０，９４５である。
エンザイムイムノアツセイ（ＥｎｚｙｇｎｏｓｔＡＦＰ
、 Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ）の結果とよく一
致した。相関定数は Ｙ（タービジメトリー）−０，９６５Ｘ（ＥＩＡ）＋４
．３１ｎｇ／ｍ１２． ｒ−０，９４５である。
これらラテックス接合体は粒度変化を測定するすべての
診断法、例えば視覚によるラテックス凝集試験による物
質の定量的および半定量的測定、および直接的または競
合的凝集試験またはラテックス−ハプテン阻害試験にお
ける痕跡量のタンパク質のネフエロメトリーまたはター
ビジメトリーによる測定において使用されうる 以下の実施例により本発明を説明する。
診断法、例えば視覚によるラテックス凝集試験による物
質の定量的および半定量的測定、および直接的または競
合的凝集試験またはラテックス−ハプテン阻害試験にお
ける痕跡量のタンパク質のネフエロメトリーまたはター
ビジメトリーによる測定において使用されうる 以下の実施例により本発明を説明する。
実施例 ｌ
シードポリマー
蒸留水（Ｎａ飽和） ７７ｍＱをオクチルフェノキシポ
リエトキシエタノール（トリトン（Ｔｒ １ｔｏｎ■）
ｘ４０５、蒸留水ＺｍＱ中に溶解）２ＩＩ１ｇおよびド
デシル硫酸ナトリウム５０１＋Ｉｇと一緒に重合容器中
に加えそして酸素を除去した。これにさらに蒸留水中Ｌ
６ｒｎｙ／ｍＱのベルオキシジ硫酸カリウム溶液ＬｍＱ
を加えた。スチレン０．４ｍＱ、メタクリルアミドアセ
トアルデヒドジーｎ−ペンチルアセタール０．４ｍＱお
よびメタクリル酸０．００２＋＋ｌαからなる混合物を
調製した。
リエトキシエタノール（トリトン（Ｔｒ １ｔｏｎ■）
ｘ４０５、蒸留水ＺｍＱ中に溶解）２ＩＩ１ｇおよびド
デシル硫酸ナトリウム５０１＋Ｉｇと一緒に重合容器中
に加えそして酸素を除去した。これにさらに蒸留水中Ｌ
６ｒｎｙ／ｍＱのベルオキシジ硫酸カリウム溶液ＬｍＱ
を加えた。スチレン０．４ｍＱ、メタクリルアミドアセ
トアルデヒドジーｎ−ペンチルアセタール０．４ｍＱお
よびメタクリル酸０．００２＋＋ｌαからなる混合物を
調製した。
この七ツマー混合物をはげしく撹拌されている水溶液中
に＋７０℃で６０分間かけてゆっくりと滴下した。次に
この混合物を同じ温度でさらに５時間撹拌した。室温ま
で冷却しモしてヒダ折りが紙で濾過するとポリマー７８
ｍＱが得られた。
に＋７０℃で６０分間かけてゆっくりと滴下した。次に
この混合物を同じ温度でさらに５時間撹拌した。室温ま
で冷却しモしてヒダ折りが紙で濾過するとポリマー７８
ｍＱが得られた。
次にこれをＮａＨＣＯ、緩衝液（０、２５；ｙ ／ Ｑ
、ｐＨ８〜８．２）で約２０時間透析した。固形物含量
０．７１重量％を有するラテックス懸濁液８０ｍＱが得
られた。
、ｐＨ８〜８．２）で約２０時間透析した。固形物含量
０．７１重量％を有するラテックス懸濁液８０ｍＱが得
られた。
実施例 ２
本発明によるポリマーへの抗−ＣＲＰ抗体の結合精製さ
れたＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）を用いてウサギを
免疫することにより抗血清を得た。このものからＤＥ
−３２セルロースを使用してイオン交換することにより
ガンマグロブリンフラクションを得た。このフラクショ
ンをタンパク質含量約１０１１ｇ／ｌＲ１２で使用した
。
れたＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）を用いてウサギを
免疫することにより抗血清を得た。このものからＤＥ
−３２セルロースを使用してイオン交換することにより
ガンマグロブリンフラクションを得た。このフラクショ
ンをタンパク質含量約１０１１ｇ／ｌＲ１２で使用した
。
実施例１に記載されたポ、リマ−３，２２ｍｆｆを抗−
ＣＲＰ抗体溶液０−ｒａＱと混合した。次にこれにエイ
コサオキシエチレンソルビタンラウレート（ツイーン（
Ｔｗｅｅｎ■）２０）の２０ｇ／１００＋ＩＩａ水溶液
０．０５ｖｓＱを加え、全体をもう一度混合した。。こ
れにｌ Ｎ ＨＣｌ２０．０５ｍ１２を加えてｐＨ約２
となした。
ＣＲＰ抗体溶液０−ｒａＱと混合した。次にこれにエイ
コサオキシエチレンソルビタンラウレート（ツイーン（
Ｔｗｅｅｎ■）２０）の２０ｇ／１００＋ＩＩａ水溶液
０．０５ｖｓＱを加え、全体をもう一度混合した。。こ
れにｌ Ｎ ＨＣｌ２０．０５ｍ１２を加えてｐＨ約２
となした。
室温で３０分間インキュベーションしたのちこれに飽和
燐酸水素ジナトリウム水溶液（ｐＨ６，５）０．２５ｍ
Ｑおよび水素化硼素シアノナトリウム（２５ｍｙ／ ｒ
ａＱ） ０．２５ｔＱを加えて、充分に混合した。
燐酸水素ジナトリウム水溶液（ｐＨ６，５）０．２５ｍ
Ｑおよび水素化硼素シアノナトリウム（２５ｍｙ／ ｒ
ａＱ） ０．２５ｔＱを加えて、充分に混合した。
次に室温で１時間インキュベーションした。
この負荷混合物を約５００００ＸＳＦで３０分間遠心分
離した（Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ２０
．ＯＯＯｒｐｍ） ａ上澄み液は捨てた。残留物をグリ
シン／ＮａＣＱ緩衝液（０，１Ｍグリシン、０．１７Ｍ
ＮａＣ＋２．０．５ｇ／１０（１ｍＩ２エイコサオキ
シエチレンソルビタンラウレート（ツイーン２０） 、
ｐＨ８，２） ２ ｍＱ中に再懸濁させた。
離した（Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ２０
．ＯＯＯｒｐｍ） ａ上澄み液は捨てた。残留物をグリ
シン／ＮａＣＱ緩衝液（０，１Ｍグリシン、０．１７Ｍ
ＮａＣ＋２．０．５ｇ／１０（１ｍＩ２エイコサオキ
シエチレンソルビタンラウレート（ツイーン２０） 、
ｐＨ８，２） ２ ｍＱ中に再懸濁させた。
次に２秒間超音波処理（Ｂｒｏｎｓｏｎ ５ｏｎｙｆｉ
ｅｒＢ１５）した。かくして再分散された試薬をｐＨ８
，２の０．０２５Ｍイミダゾール緩衝液（３ｇ／ｌＯＯ
ｍＱのスクロース、０．０５ｇ／ ｔｏ（ｈ１２のヒト
アルブミン、０．０５ｇ／ ｌｏＯｍＱのＮａＮ ｓ
）を用いて容量比ｌ：４０に希釈した。
ｅｒＢ１５）した。かくして再分散された試薬をｐＨ８
，２の０．０２５Ｍイミダゾール緩衝液（３ｇ／ｌＯＯ
ｍＱのスクロース、０．０５ｇ／ ｔｏ（ｈ１２のヒト
アルブミン、０．０５ｇ／ ｌｏＯｍＱのＮａＮ ｓ
）を用いて容量比ｌ：４０に希釈した。
実施例 ３
血清検体中におけるＣＲＰ濃度のタービジメトリー測定
実施例２に記載されるようにして抗−ＣＲＰ抗体を本発
明によるポリマーに結合させることにより調製されたＣ
Ｒ’Ｐ試薬を患者の血清中におけるＣＲＰの測定に用い
た。
明によるポリマーに結合させることにより調製されたＣ
Ｒ’Ｐ試薬を患者の血清中におけるＣＲＰの測定に用い
た。
標準物としてはＣＲＰ濃度２６１１９ ／ Ｑを有する
ＣＲＰ標準血清（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ）が
用いられた。
ＣＲＰ標準血清（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ）が
用いられた。
この標準物を生理食塩水を用いて１：１０，１：２０、
ｌ：４０、ｌ：８０、ｌ ： １６０および１：３２
０に希釈した。患者血清は生理食塩水を用いてｌ：１０
０に希釈した。
ｌ：４０、ｌ：８０、ｌ ： １６０および１：３２
０に希釈した。患者血清は生理食塩水を用いてｌ：１０
０に希釈した。
測定を行うには、患者血清希釈物または標準血清希釈物
８０μＱを反応緩衝液（０，１Ｍグリシン、０．１７Ｍ
ＮａＣｆｆ、 ４９／１００ｍｆｆポリエチレングリ
コール６０００．０．５ｇ／１００ｍ１２ツイーン２０
、ｐＨ８，２）４５０μａおよび実施例２記載のＣＲＰ
試薬１５０μａとマイクロキュベツト（Ｉ Ｘｏ−４ｃ
ｍ５５ａｒｓｔｅｄｔ製）中で混合した。このキュベツ
トに関する１０秒後および３分後の波長３３４ｎｍでの
吸光度をエツペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）光度計
で測定した。測定値は１０秒値と３分値との差として計
算されＩこ 。
８０μＱを反応緩衝液（０，１Ｍグリシン、０．１７Ｍ
ＮａＣｆｆ、 ４９／１００ｍｆｆポリエチレングリ
コール６０００．０．５ｇ／１００ｍ１２ツイーン２０
、ｐＨ８，２）４５０μａおよび実施例２記載のＣＲＰ
試薬１５０μａとマイクロキュベツト（Ｉ Ｘｏ−４ｃ
ｍ５５ａｒｓｔｅｄｔ製）中で混合した。このキュベツ
トに関する１０秒後および３分後の波長３３４ｎｍでの
吸光度をエツペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）光度計
で測定した。測定値は１０秒値と３分値との差として計
算されＩこ 。
標準物を測定した曲線は横軸に濃度そして縦軸に吸光度
をとって半対数紙上に作成し、このものに基づき患者血
清についての測定値を評価し ｊ二 。
をとって半対数紙上に作成し、このものに基づき患者血
清についての測定値を評価し ｊ二 。
実施例 ４
抗−ＩｇＥ抗体の本発明による実施例１記載のポリマー
への結合 精製イムノグロブリンＥ （ＩｇＥ）を用いてウサギを
免疫することにより抗血清を得た。このものから担体に
結合されたＩｇＥを用いる免疫吸着法により抗体を得た
。次にこれをタンパク質含量約１０ｍｇ／ｍｆｆとなる
まで濃縮した。
への結合 精製イムノグロブリンＥ （ＩｇＥ）を用いてウサギを
免疫することにより抗血清を得た。このものから担体に
結合されたＩｇＥを用いる免疫吸着法により抗体を得た
。次にこれをタンパク質含量約１０ｍｇ／ｍｆｆとなる
まで濃縮した。
実施例１に記載されるようにして調製されたポリマー５
−６４ｒｔｒＱを抗−ＩｇＥ抗体溶液０．ｆＱと混合し
た。
−６４ｒｔｒＱを抗−ＩｇＥ抗体溶液０．ｆＱと混合し
た。
次にエイコサオキシエチレンソルビタンラウレート（ツ
イーン２０）の２０ｇ／ １００ｍＱ水溶液０．０５ｍ
ｄを加えて全体をもう一度混合した。これにＩＮＨＣＱ
Ｏ，１８ｒｒｒＱを加えるとｐＨ値が約２となった。
イーン２０）の２０ｇ／ １００ｍＱ水溶液０．０５ｍ
ｄを加えて全体をもう一度混合した。これにＩＮＨＣＱ
Ｏ，１８ｒｒｒＱを加えるとｐＨ値が約２となった。
室温で３０分間インキュベーションしたのち飽和燐酸水
素ジナトリウム水溶液（ｐＨ６，５） ０．２５ｉＱお
よび水素化硼素シアノナトリウム（２５ｍｇ／ ｍＱ）
０．２５ｍ４を加えてよく混合した。次に室温で１時間
インキュベーションした。この負荷混合物を約５０，０
００Ｘｇで３０分間遠心分離した（ Ｂｅｃｋｍａｎｃ
ｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ２０．００Ｏｒｐｍ） ａ上澄み
液を捨てた。
素ジナトリウム水溶液（ｐＨ６，５） ０．２５ｉＱお
よび水素化硼素シアノナトリウム（２５ｍｇ／ ｍＱ）
０．２５ｍ４を加えてよく混合した。次に室温で１時間
インキュベーションした。この負荷混合物を約５０，０
００Ｘｇで３０分間遠心分離した（ Ｂｅｃｋｍａｎｃ
ｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ２０．００Ｏｒｐｍ） ａ上澄み
液を捨てた。
残留物をグリシン／ Ｎ ａ ＣＱ緩衝液（０，１Ｍグ
リシン、０．１７Ｍ ＮａＣｌ２．０．５９／１００
１１１１２のエイコサオキシエチレンソルビタンラウレ
ート、ｐＨ８，２） ２ ｍＤ。
リシン、０．１７Ｍ ＮａＣｌ２．０．５９／１００
１１１１２のエイコサオキシエチレンソルビタンラウレ
ート、ｐＨ８，２） ２ ｍＤ。
中に再懸濁させた。次に２秒間超音波処理（Ｂｒｏｎｓ
ｏｎ ５ｏｎｙｆｉｅｒ Ｂ １５） Ｌ／た。かくし
て再分散された試薬をｐＨ８，２の０．０２５Ｍイミダ
ゾール緩衝液（３ｇ／ １００ｍｇのスクロース、０．
０５９／ ｌｏＯｍＱのヒトアルブミン、０．０５９／
１００１１１１２のＮａＮ５）を用いて容量比ｌ：２
０に希釈した。
ｏｎ ５ｏｎｙｆｉｅｒ Ｂ １５） Ｌ／た。かくし
て再分散された試薬をｐＨ８，２の０．０２５Ｍイミダ
ゾール緩衝液（３ｇ／ １００ｍｇのスクロース、０．
０５９／ ｌｏＯｍＱのヒトアルブミン、０．０５９／
１００１１１１２のＮａＮ５）を用いて容量比ｌ：２
０に希釈した。
実施例 ５
血清検体中のＩｇＥ濃度のタービジメトリー測定実施例
４の記載に従って抗−ＩｇＥ抗体を本発明によるラテッ
クス調製物に結合させることにより調製されたＩｇＥ測
定用試薬を患者血清中のＩｇＥの測定に用いた。
４の記載に従って抗−ＩｇＥ抗体を本発明によるラテッ
クス調製物に結合させることにより調製されたＩｇＥ測
定用試薬を患者血清中のＩｇＥの測定に用いた。
標準物としてはＩｇＥ濃度４３３１ Ｕ ／ ｍ （１
を有するＩｇＥ標準血清（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ
ＡＧ）が用いられた。この標準物を生理食塩溶液を用い
てさらにｌ ：２、■ ：４、ｔａｇ、１：１６、Ｉ
：３２および１：６４に希釈した。患者血清は生理食塩
溶液を用いて１：５に希釈した。
を有するＩｇＥ標準血清（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ
ＡＧ）が用いられた。この標準物を生理食塩溶液を用い
てさらにｌ ：２、■ ：４、ｔａｇ、１：１６、Ｉ
：３２および１：６４に希釈した。患者血清は生理食塩
溶液を用いて１：５に希釈した。
測定を行うには、患者血清希釈物または標準血清希釈物
８０μａを反応緩衝液（０，１Ｍグリシン、０．１７Ｍ
ＮａＣＱ、 ４ｇ／ｌｏＯｍ（２ポリエチＬ／７グリ
コール６０００．０−５ｇ／ ｌ ＯＯｍａ ツイー
ン２０． ｐＨ８−２）４５０μＱおよび６ｇ／１００
ｍＱのＮａＣＱおよび４９／１００ｍＱのツイーン２０
を含有する溶液中でｌ：３２に希釈されたウサギ血清の
溶液４０μＱ１ならびに実施例４記載のＩｇＥ試薬１５
０μａとマイクロキュベツト（ｌ Ｘ Ｏ，４ｃｍ％５
ａｒｓｔｅｄｔ製）中で混合した。このキュベツトに関
する１０秒後および３分後の波長３３４ｎｍでの吸光度
をエツペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）光度計で測定
した。測定値は１０秒値と３分値との差として計算され
た。
８０μａを反応緩衝液（０，１Ｍグリシン、０．１７Ｍ
ＮａＣＱ、 ４ｇ／ｌｏＯｍ（２ポリエチＬ／７グリ
コール６０００．０−５ｇ／ ｌ ＯＯｍａ ツイー
ン２０． ｐＨ８−２）４５０μＱおよび６ｇ／１００
ｍＱのＮａＣＱおよび４９／１００ｍＱのツイーン２０
を含有する溶液中でｌ：３２に希釈されたウサギ血清の
溶液４０μＱ１ならびに実施例４記載のＩｇＥ試薬１５
０μａとマイクロキュベツト（ｌ Ｘ Ｏ，４ｃｍ％５
ａｒｓｔｅｄｔ製）中で混合した。このキュベツトに関
する１０秒後および３分後の波長３３４ｎｍでの吸光度
をエツペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）光度計で測定
した。測定値は１０秒値と３分値との差として計算され
た。
標準物を測定した曲線は横軸に濃度そして縦軸に吸光度
をとって半対数紙上に作成し、このものに基づき患者血
清についての測定値を評価し Ｉこ 。
をとって半対数紙上に作成し、このものに基づき患者血
清についての測定値を評価し Ｉこ 。
実施例 ６
抗−ＡＦＰ抗体の本発明によるポリマーへの結合精製σ
−フ二トプロテイン（ＡＦＰ）を用いてウサギを免疫す
ることにより抗血清を褥だ。このものから担体に結合さ
れたＡＦＰを用いる免疫吸着法により抗体を得た。次に
これをタンパク質含量約１０ｎｇ／１１２となるまで濃
縮した。
−フ二トプロテイン（ＡＦＰ）を用いてウサギを免疫す
ることにより抗血清を褥だ。このものから担体に結合さ
れたＡＦＰを用いる免疫吸着法により抗体を得た。次に
これをタンパク質含量約１０ｎｇ／１１２となるまで濃
縮した。
実施例１に記載されるようにして調製されたポリ？
５．６４ｍ１２を抗−ＡＦＰ抗体溶液０．１ｒｐｒＱと
混合し ｊこ 。
５．６４ｍ１２を抗−ＡＦＰ抗体溶液０．１ｒｐｒＱと
混合し ｊこ 。
次にエイコサオキシエチレンソルビタンラウレート（ツ
イーン２０）の２０ｇ／ ｌｏｏｍＱ水溶液０．０５ｍ
４を加えて全体をもう一度混合した。これにＩＮＨＣ（
ｌ Ｑ、１８ｍ（２を加えるとｐＨ値が約２となった。
イーン２０）の２０ｇ／ ｌｏｏｍＱ水溶液０．０５ｍ
４を加えて全体をもう一度混合した。これにＩＮＨＣ（
ｌ Ｑ、１８ｍ（２を加えるとｐＨ値が約２となった。
室温で３０分間インキュベーションしたのチ、飽和燐酸
水素ジナトリウム水溶液（ｐＨ６，５） ０．２５ｍｆ
ｆおよび水素化硼素シアノナトリウム（２５１１９／
１ｆｆ）０．２５ｍＱを加えてよく混合した。次に室温
で１時間インキュベーションした。
水素ジナトリウム水溶液（ｐＨ６，５） ０．２５ｍｆ
ｆおよび水素化硼素シアノナトリウム（２５１１９／
１ｆｆ）０．２５ｍＱを加えてよく混合した。次に室温
で１時間インキュベーションした。
次にこの負荷混合物を約５０．０００Ｘ ｇで３０分間
遠心分離した（Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ
２０．００Ｏｒｐｍ）。
遠心分離した（Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ
２０．００Ｏｒｐｍ）。
上澄み液を捨てた。残留物をグリシン／ＮａＣＱ緩衝液
（０，１Ｍグリシン、０．１７Ｍ ＮａＣＱ、 ０．５
ｇ／１００Ｉｌαのツイーン２０、ｐＨ８，２） ２ｔ
ａ（ｌ中に再懸濁サセた。
（０，１Ｍグリシン、０．１７Ｍ ＮａＣＱ、 ０．５
ｇ／１００Ｉｌαのツイーン２０、ｐＨ８，２） ２ｔ
ａ（ｌ中に再懸濁サセた。
次に２秒間超音波処理（Ｂｒｏｎｓｏｎ ５ｏｎｙｆｉ
ｅｒＢ １５）した。かくして再分散された試薬をｐＨ
８，２の０．０２５Ｍイミダゾール緩衝液（３ｇ／１ｏ
ＯＩＩＩＱノスクロース、０．０５ｇ／ １００１１１
１２のヒトアルブミン、０．０５ｇ／ １００１１１２
のＮａＮｘ）を用いて容量比１：４０４．：希釈した。
ｅｒＢ １５）した。かくして再分散された試薬をｐＨ
８，２の０．０２５Ｍイミダゾール緩衝液（３ｇ／１ｏ
ＯＩＩＩＱノスクロース、０．０５ｇ／ １００１１１
１２のヒトアルブミン、０．０５ｇ／ １００１１１２
のＮａＮｘ）を用いて容量比１：４０４．：希釈した。
実施例 ７
血清検体中のＡＦＰ濃度のタービジメトリー測定実施例
６の記載に従って抗−ＡＦＰ抗体を本発明によるラテッ
クス調製物（実施例１記載）に結合させることにより調
製されたＡＦＰｆｉ定用試薬音用試薬清中のＡＦＰの測
定に用いた。
６の記載に従って抗−ＡＦＰ抗体を本発明によるラテッ
クス調製物（実施例１記載）に結合させることにより調
製されたＡＦＰｆｉ定用試薬音用試薬清中のＡＦＰの測
定に用いた。
標準物としてはＡＦＰ濃度３００ 、０００ｎｇ／ ｒ
ａＱを有するＡＦＰ標準血清（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋ
ｅ ＡＧ）が用いられた。
ａＱを有するＡＦＰ標準血清（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋ
ｅ ＡＧ）が用いられた。
この標準物をＡＦＰを含有しない血清プール中で段階的
に６００ ｎ ｇ ／ ｍ （ｌまで希釈した。この希
釈物から生理食塩溶液を用いて・ｌ：２、ｌ：４、ｌ：
８．１：１６、ｌ：３２およびｌ：６４に希釈すること
により漸減するＡＦＰ濃度を有する標準系列物を調製し
た。患者血清は生理食塩溶液を用いてｌ：５に希釈した
。
に６００ ｎ ｇ ／ ｍ （ｌまで希釈した。この希
釈物から生理食塩溶液を用いて・ｌ：２、ｌ：４、ｌ：
８．１：１６、ｌ：３２およびｌ：６４に希釈すること
により漸減するＡＦＰ濃度を有する標準系列物を調製し
た。患者血清は生理食塩溶液を用いてｌ：５に希釈した
。
測定を行うには患者血清希釈物または標準血清希釈物８
０１を反応緩衝液（０，１Ｍグリシン、０．１７Ｍ Ｎ
ａＣｌ２．４９／ｌｏＯｍｆｆポリエチレングリコール
６０００．０．５ｇ／１００１１１２ツイーン２０、ｐ
Ｈ８，２）４５０μＱ、 ８９／ １００ｍ１２ Ｎ
ａＣｌ２および５９／ １００ｍ［ツイーン２０を含有
する溶液中にｌ：８に希釈されたウサギ血清の溶液ｌＯ
μａ１ならびに実施例６記載のＡＦＰ試薬１５０μＱと
マイクロキュベツト（ＩＸＯ，４ｃｎ＋、 ５ａｒｓｔ
ｅｄｔ製）中で混合した。このキュベツトに関する１０
秒後および３分後の波長３３４ｎｍでの吸光度をエラペ
ンドル７ （Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）光度計で測定した。
０１を反応緩衝液（０，１Ｍグリシン、０．１７Ｍ Ｎ
ａＣｌ２．４９／ｌｏＯｍｆｆポリエチレングリコール
６０００．０．５ｇ／１００１１１２ツイーン２０、ｐ
Ｈ８，２）４５０μＱ、 ８９／ １００ｍ１２ Ｎ
ａＣｌ２および５９／ １００ｍ［ツイーン２０を含有
する溶液中にｌ：８に希釈されたウサギ血清の溶液ｌＯ
μａ１ならびに実施例６記載のＡＦＰ試薬１５０μＱと
マイクロキュベツト（ＩＸＯ，４ｃｎ＋、 ５ａｒｓｔ
ｅｄｔ製）中で混合した。このキュベツトに関する１０
秒後および３分後の波長３３４ｎｍでの吸光度をエラペ
ンドル７ （Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）光度計で測定した。
この測定値は１０秒値と３分値との差として計算された
。
。
標準物を測定した曲線は横軸に濃度そして縦軸に吸光度
をとって半対数紙上に作成し、このものに基づき患者血
清についての測定値を評価した。
をとって半対数紙上に作成し、このものに基づき患者血
清についての測定値を評価した。
第１図は縦軸上のＢＮＡ系（ＮＡ−ラテックス−ＣＲＰ
アッセイ、Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ社）での古
典的なネフエロメトリーアツセイと比較した。タービジ
メトリーアッセイ（横軸）における本発明によるポリマ
ーを用いたＣＲＰ測定の結果を示す。 第２図はタービジメトリーアッセイ（横軸）における本
発明によるポリマーを用いたＩｇＥ測定の結果および縦
軸上の古典的なエンザイムイムノアツセイ（１：ｎｚｙ
ｇｎｏｓｔ■ ＩｇＥ、 Ｂｅｂｒ ｉｎｇｗｅｒｋｅ
ＡＧ）を用いた測定結果を示す。 第３図はタービジメトリーアッセイ（横軸）における本
発明によるポリマーを用いたＡＦＰ測定の結果および縦
軸上の古典的なエンザイムイムノアツセイ（Ｅｎｚｙｇ
ｎｏｓＬ■ＡＦＰ％ＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅＡＧ）を
用いた測定結果を示す。 特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲゼル
シャフト 外２名 ０ ５０ １Ｃ）Ｏ１５（Ｊ
どＵＩＪ ｋｊｌＪＦＩＧ、 ２ ０ １２０ ２４０ ３６０ ４８
０ ｔ１５００ＦＩ［３，３
アッセイ、Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ ＡＧ社）での古
典的なネフエロメトリーアツセイと比較した。タービジ
メトリーアッセイ（横軸）における本発明によるポリマ
ーを用いたＣＲＰ測定の結果を示す。 第２図はタービジメトリーアッセイ（横軸）における本
発明によるポリマーを用いたＩｇＥ測定の結果および縦
軸上の古典的なエンザイムイムノアツセイ（１：ｎｚｙ
ｇｎｏｓｔ■ ＩｇＥ、 Ｂｅｂｒ ｉｎｇｗｅｒｋｅ
ＡＧ）を用いた測定結果を示す。 第３図はタービジメトリーアッセイ（横軸）における本
発明によるポリマーを用いたＡＦＰ測定の結果および縦
軸上の古典的なエンザイムイムノアツセイ（Ｅｎｚｙｇ
ｎｏｓＬ■ＡＦＰ％ＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅＡＧ）を
用いた測定結果を示す。 特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲゼル
シャフト 外２名 ０ ５０ １Ｃ）Ｏ１５（Ｊ
どＵＩＪ ｋｊｌＪＦＩＧ、 ２ ０ １２０ ２４０ ３６０ ４８
０ ｔ１５００ＦＩ［３，３
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）水性媒体中における式 I ＣＨ＿２＝ＣＲ＿１−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ＿２）＿ｎ−
ＣＨ（ＯＲ＿２）ＯＲ＿３ I 〔式中、 ｎは１〜６であり、 Ｒ＿１はＨまたはＣＨ＿３でありそして Ｒ＿２およびＲ＿３は同一であるかまたは相異なってい
て−（ＣＨ＿２）＿ｍ−ＣＨ＿３（ここでｍは０〜７で
ある）または−Ｃ（Ｘ）（Ｙ）Ｚ（ここでＸ、Ｙおよび
Ｚは同一であるかまたは相異なって（ＣＨ＿２）＿ｐＣ
Ｈ＿３を表わしそしてｐは１〜３である）を表わす〕を
有する化合物の１種またはそれ以上、および場合により
他の１種またはそれ以上のビニル誘導体からなる分散ポ
リマー。 ２）式 I の化合物がＣ＿２〜Ｃ＿８アルキルを有する
アクリル−またはメタクリル−アミドアルカナールジア
ルキルアセタールである請求項１記載のポリマー。 ３）式 I の化合物がアクリル−またはメタクリル−ア
ミドアセトアルデヒドジ−ｎ−ペンチルアセタールであ
る請求項１記載のポリマ ー。 ４）他の１種のビニル誘導体がスチレン、ビニルナフタ
レン、ビニルトルエン、メタクリル酸、アクリル酸また
はクロトン酸である請求項１記載のポリマー。 ５）他の１種のビニル誘導体がヒドロキシル置換アクリ
ル酸またはメタクリル酸のエステルまたはアミドからな
る群の水溶性モノマーであるかまたはベタイン構造を有
する水溶性モノマーである請求項１記載のポリマー。 ６）式 I を有する化合物の１種またはそれ以上、およ
び場合により他の１種のまたはそれ以上のビニル誘導体
を水性媒体中において乳化剤およびラジカル形成性開始
剤の存在下に重合させることからなるポリマーの製法。 ７）生物学的に活性な物質との接合体の製造への請求項
１記載のポリマーまたはコポリマーの使用。 ８）イムノグロブリンとの接合体の製造への請求項１記
載のポリマーまたはコポリマーの使用。 ９）Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）に対する抗体、α
−フエトプロテイン（ＡＦＰ）に対する抗体またはイム
ノグロブリンＥ（ＩｇＥ）に対する抗体との接合体の製
造への請求項１記載のポリマーまたはコポリマーの使用
。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3730515.8 | 1987-09-11 | ||
| DE19873730515 DE3730515A1 (de) | 1987-09-11 | 1987-09-11 | Dispersionspolymere, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01104607A true JPH01104607A (ja) | 1989-04-21 |
Family
ID=6335773
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22482388A Pending JPH01104607A (ja) | 1987-09-11 | 1988-09-09 | 分散ポリマーおよびその製法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0306797A3 (ja) |
| JP (1) | JPH01104607A (ja) |
| AU (1) | AU621552B2 (ja) |
| DE (1) | DE3730515A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013530400A (ja) * | 2010-06-14 | 2013-07-25 | シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッド | アッセイ試薬として使用するための組成物 |
Families Citing this family (3)
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|---|---|---|---|---|
| DE3613111A1 (de) * | 1986-04-18 | 1987-10-22 | Behringwerke Ag | Dispersionspolymere, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
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1987
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-
1988
- 1988-08-30 EP EP88114089A patent/EP0306797A3/de not_active Withdrawn
- 1988-09-09 AU AU22041/88A patent/AU621552B2/en not_active Ceased
- 1988-09-09 JP JP22482388A patent/JPH01104607A/ja active Pending
Patent Citations (3)
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| JP2013530400A (ja) * | 2010-06-14 | 2013-07-25 | シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッド | アッセイ試薬として使用するための組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0306797A3 (de) | 1990-08-01 |
| AU2204188A (en) | 1989-03-16 |
| DE3730515A1 (de) | 1989-03-23 |
| AU621552B2 (en) | 1992-03-19 |
| EP0306797A2 (de) | 1989-03-15 |
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