JPH01109247A - カルシウムおよびリンの同時アッセイ法およびそれに用いる試薬システム - Google Patents
カルシウムおよびリンの同時アッセイ法およびそれに用いる試薬システムInfo
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- JPH01109247A JPH01109247A JP63237452A JP23745288A JPH01109247A JP H01109247 A JPH01109247 A JP H01109247A JP 63237452 A JP63237452 A JP 63237452A JP 23745288 A JP23745288 A JP 23745288A JP H01109247 A JPH01109247 A JP H01109247A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、同時反応において試料の電磁放射吸収特徴の
変化をモニターすることにより、単一の試薬で複数の基
質を同時に測定する方法および該方法に用いる試薬シス
テムに関する。さらに詳しくは、本発明は、２またはそ
れ以上の波長において二つの同時反応をモニターするこ
とにより、血清中のカルシウムおよびリン（無機リン酸
塩）を同時に測定する方法および該方法に用いる試薬シ
ステムに関する。
変化をモニターすることにより、単一の試薬で複数の基
質を同時に測定する方法および該方法に用いる試薬シス
テムに関する。さらに詳しくは、本発明は、２またはそ
れ以上の波長において二つの同時反応をモニターするこ
とにより、血清中のカルシウムおよびリン（無機リン酸
塩）を同時に測定する方法および該方法に用いる試薬シ
ステムに関する。
（従来の技術および発明が解決しようとする課題）診断
学の分野において、試料物質中に存在する基質を同定ま
たは定量するために種々のアッセイ法が考案されている
。しかし、残念なことに、所定の試料について２種以上
の基質を診断することが望ましいにもかかわらず、従来
のアッセイ法は通常、一つの型の基質に対してのみ特異
的である。
学の分野において、試料物質中に存在する基質を同定ま
たは定量するために種々のアッセイ法が考案されている
。しかし、残念なことに、所定の試料について２種以上
の基質を診断することが望ましいにもかかわらず、従来
のアッセイ法は通常、一つの型の基質に対してのみ特異
的である。
このため同じ試料について多数の試験を行うことが必要
となり、診断に要する費用を増大させ、効率も下がるこ
とになる。従って、複数の基質を効率的なやり方で同定
または定量することができるような診断試験法を開発す
ることが望まれている。
となり、診断に要する費用を増大させ、効率も下がるこ
とになる。従って、複数の基質を効率的なやり方で同定
または定量することができるような診断試験法を開発す
ることが望まれている。
たとえば、カルシウムおよびリンは、臨床化学の研究所
において日常的に行なわれる二つの試験である。一般に
直接分光光度法によるカルシウムの分析は、カルシウム
と有機分子との間で呈色錯体を形成させることによって
いる。近年では０−クレゾールフタレインコンプレクソ
ンが最もより使われている。このものはｐＨ１０〜１２
．５７０〜５７５ｎｍで赤色錯体を定量し、８−ヒドロ
キシキノリン化合物を用いてマグネシウムによる妨害を
除く。呈色錯体を生成させるためにアリザリン、アルセ
ナゾーｍ （ａｒｓｅｎａｚｏ −ｍ ）、クロロホス
ホナシ−ｍ （ｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈｏｎａｚｏ
−ｍ ）およびメチルチモールブルーが他のアッセイ法
において用いられる。いくつかの研究所では原子吸光分
析法、カルシウム対照法（ｃａｌｃｉｕｍ ｒｅｆｅｒ
ｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ）が用いられている［カブラン
（Ｋａｐｌａｎ、Ｌ、Ａ、）およびベジェ（Ｐｅａｃｅ
、 Ａ、 Ｊ 、）らのクリニカル・ケミストリー、１
９８４年、１０５２頁参照］。
において日常的に行なわれる二つの試験である。一般に
直接分光光度法によるカルシウムの分析は、カルシウム
と有機分子との間で呈色錯体を形成させることによって
いる。近年では０−クレゾールフタレインコンプレクソ
ンが最もより使われている。このものはｐＨ１０〜１２
．５７０〜５７５ｎｍで赤色錯体を定量し、８−ヒドロ
キシキノリン化合物を用いてマグネシウムによる妨害を
除く。呈色錯体を生成させるためにアリザリン、アルセ
ナゾーｍ （ａｒｓｅｎａｚｏ −ｍ ）、クロロホス
ホナシ−ｍ （ｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈｏｎａｚｏ
−ｍ ）およびメチルチモールブルーが他のアッセイ法
において用いられる。いくつかの研究所では原子吸光分
析法、カルシウム対照法（ｃａｌｃｉｕｍ ｒｅｆｅｒ
ｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ）が用いられている［カブラン
（Ｋａｐｌａｎ、Ｌ、Ａ、）およびベジェ（Ｐｅａｃｅ
、 Ａ、 Ｊ 、）らのクリニカル・ケミストリー、１
９８４年、１０５２頁参照］。
一方、リンの分析は、普通、リン酸イオンをモリブデン
酸塩と反応させてリンモリブデン酸塩錯体を生成させる
ことに基づいている。生成した錯体は、３４０ｎ■、酸
性ｐＨで直接測定するか、またはモリブデン青に還元し
た後、６６０ｎｍにて測定する（上記カブランらの文献
１０７２頁参照）。
酸塩と反応させてリンモリブデン酸塩錯体を生成させる
ことに基づいている。生成した錯体は、３４０ｎ■、酸
性ｐＨで直接測定するか、またはモリブデン青に還元し
た後、６６０ｎｍにて測定する（上記カブランらの文献
１０７２頁参照）。
上記カルシウムおよびリンのアッセイは、別々の試薬を
用い別々のセルで行なわれる。このため臨床化学研究所
における時間と費用がかさむことになる。この二つの試
験を一つの試験にまとめることができれば、研究所は生
産性の向上と費用の削減を実現することができるであろ
う。
用い別々のセルで行なわれる。このため臨床化学研究所
における時間と費用がかさむことになる。この二つの試
験を一つの試験にまとめることができれば、研究所は生
産性の向上と費用の削減を実現することができるであろ
う。
二つの試験を一つにまとめることは容易にできる仕事で
はない。両基質の正確な測定ができるように条件を選択
しなければならない。たとえば、カルンウム０−クレゾ
ールフタレインコンプレクソン（ｐＨ１０〜１２）と非
還元リンモリブデン酸塩手順（ｐＨ約１）とを組み合わ
せることは、ｐＨが違い過ぎるために用いることができ
ない。さらに、カルシウムアッセイにおいてマグネシウ
ムの妨害を除去するために用いるキノリン化合物はリン
モリブデン酸塩錯体の近くで吸収を示すため、リンアッ
セイを妨害するであろうから、この組み合わせはできな
いことになる。
はない。両基質の正確な測定ができるように条件を選択
しなければならない。たとえば、カルンウム０−クレゾ
ールフタレインコンプレクソン（ｐＨ１０〜１２）と非
還元リンモリブデン酸塩手順（ｐＨ約１）とを組み合わ
せることは、ｐＨが違い過ぎるために用いることができ
ない。さらに、カルシウムアッセイにおいてマグネシウ
ムの妨害を除去するために用いるキノリン化合物はリン
モリブデン酸塩錯体の近くで吸収を示すため、リンアッ
セイを妨害するであろうから、この組み合わせはできな
いことになる。
単一の反応容器中において二つのアッセイを組み合わせ
る一つのやり方は、連続アッセイを行うことである。連
続アッセイでは、第一のアッセイ用の試薬を容器に加え
反応を進行させる。ある時間の経過後に第一の成分の濃
度を決定する。ついで第二の試薬を容器に加えて第二の
成分との反応を起こさせるのであ・るが、この第二の試
薬は第一の反応を停止させるものであるか、そうでない
場合は第一の反応が完了した後に加える′。ある時間の
経過後に第二の成分の濃度を決定する。これらの反応は
、フィルターホイールかまたはダイオードアレイを用い
ることにより、同じかまたは異なる波長でモニターする
ことができる。ルーダラ−（Ｌ ｕｄｅｒｅｒ）の米国
特許第４．４２５．４２７号明細書には、グルコースと
尿素との連続アッセイ、およびカルシウムとリンとの組
み合わせ以外の他の分析対象物の幾つかの同時アッセイ
が開示されている。
る一つのやり方は、連続アッセイを行うことである。連
続アッセイでは、第一のアッセイ用の試薬を容器に加え
反応を進行させる。ある時間の経過後に第一の成分の濃
度を決定する。ついで第二の試薬を容器に加えて第二の
成分との反応を起こさせるのであ・るが、この第二の試
薬は第一の反応を停止させるものであるか、そうでない
場合は第一の反応が完了した後に加える′。ある時間の
経過後に第二の成分の濃度を決定する。これらの反応は
、フィルターホイールかまたはダイオードアレイを用い
ることにより、同じかまたは異なる波長でモニターする
ことができる。ルーダラ−（Ｌ ｕｄｅｒｅｒ）の米国
特許第４．４２５．４２７号明細書には、グルコースと
尿素との連続アッセイ、およびカルシウムとリンとの組
み合わせ以外の他の分析対象物の幾つかの同時アッセイ
が開示されている。
米国特許第３．９２５．１６２号明細書には、体液流体
中の酵素活性の同時測定が記載されている。この方法で
は、同定しようとするそれぞれの酵素に対する基質を他
の試薬とともに反応媒体に加え、その後の反応システム
の吸光度または蛍光の変化を測定する。本発明は、反応
混合物の電磁シグナルをモニターすることにより、単一
の試薬システムを用いて基質を同時に同定または定量す
る方法を利用するものである。
中の酵素活性の同時測定が記載されている。この方法で
は、同定しようとするそれぞれの酵素に対する基質を他
の試薬とともに反応媒体に加え、その後の反応システム
の吸光度または蛍光の変化を測定する。本発明は、反応
混合物の電磁シグナルをモニターすることにより、単一
の試薬システムを用いて基質を同時に同定または定量す
る方法を利用するものである。
（課題を解決するための手段）
本発明は、反応混合物中で単一の試薬システムを用いて
カルシウムおよびリン（無機リン酸塩）を同時に決定す
るための方法を提供するものである。
カルシウムおよびリン（無機リン酸塩）を同時に決定す
るための方法を提供するものである。
本発明の方法は、決定しようとするそれぞれの基質に対
する反応試薬を含有する試薬システムを加えることから
なる。この各反応試薬は、特定の基質について独特の電
磁放射吸光度を得ることができ、両基質の濃度を計算す
ることができるように選択される。各基質は、それぞれ
の化学反応が同時に起こるような条件下でそれぞれの試
薬と反応する。各基質の濃度の決定は、決定しようとす
るそれぞれの基質に特徴的な複数の波長において、その
後の反応混合物の吸光度または蛍光の変化を測定するこ
とにより行う。
する反応試薬を含有する試薬システムを加えることから
なる。この各反応試薬は、特定の基質について独特の電
磁放射吸光度を得ることができ、両基質の濃度を計算す
ることができるように選択される。各基質は、それぞれ
の化学反応が同時に起こるような条件下でそれぞれの試
薬と反応する。各基質の濃度の決定は、決定しようとす
るそれぞれの基質に特徴的な複数の波長において、その
後の反応混合物の吸光度または蛍光の変化を測定するこ
とにより行う。
本発明の他の実施態様において、本発明は、決定しよう
とするそれぞれの基質に対する発色団を含有する試薬シ
ステムを加えることにより、反応混合物中で単一の試薬
システムを用いてカルシウムおよびリン基質を同時に決
定するための方法を提供するものである。この各発色団
は、特定の基質について独特の吸光バンドを得ることが
でき、他の基質を決定することができるように選択され
る。各基質は、それぞれの化学反応が同時に起こるよう
な条件下でそれぞれの発色団と反応する。
とするそれぞれの基質に対する発色団を含有する試薬シ
ステムを加えることにより、反応混合物中で単一の試薬
システムを用いてカルシウムおよびリン基質を同時に決
定するための方法を提供するものである。この各発色団
は、特定の基質について独特の吸光バンドを得ることが
でき、他の基質を決定することができるように選択され
る。各基質は、それぞれの化学反応が同時に起こるよう
な条件下でそれぞれの発色団と反応する。
各基質の濃度の決定は、決定しようとするそれぞれの基
質に特徴的な複数の波長において、その後の反応混合物
の吸光度または蛍光の変化を測定することにより行う。
質に特徴的な複数の波長において、その後の反応混合物
の吸光度または蛍光の変化を測定することにより行う。
一般に、カルシウムとリンとの同時アッセイを行うため
の本発明の試薬システムは、カルシウムの終点決定を行
うに充分な濃度のアゾ染料、およびリンの終点決定を行
うに充分な量の界面活性剤とモリブデン酸塩とを含む酸
性水溶液からなる。
の本発明の試薬システムは、カルシウムの終点決定を行
うに充分な濃度のアゾ染料、およびリンの終点決定を行
うに充分な量の界面活性剤とモリブデン酸塩とを含む酸
性水溶液からなる。
本発明の同時アッセイを行うのに有用な試薬システムは
、カルシウムの終点決定を行うに充分な濃度のクロロホ
スホナゾーＩＩＩ、モリブデン酸ナトリウムまたはモリ
ブデン酸アンモニウム、試薬システムのｐＨを約２に調
節するに充分な量の酸（好ましくは硫酸）、およびリン
の終点決定を行うに充分な濃度の界面活性剤からなる。
、カルシウムの終点決定を行うに充分な濃度のクロロホ
スホナゾーＩＩＩ、モリブデン酸ナトリウムまたはモリ
ブデン酸アンモニウム、試薬システムのｐＨを約２に調
節するに充分な量の酸（好ましくは硫酸）、およびリン
の終点決定を行うに充分な濃度の界面活性剤からなる。
本発明の同時アッセイを行うのに有用な他の試薬システ
ムは、カルシウムの終点決定を行うに充分な濃度のクロ
ロホスホナシ−■またはアルセナゾーＩＩＩ、モリブデ
ン酸アンモニウム、試薬システムのｐＨを約４に調節す
るに充分な量の酢酸／ＮａＯＨ，およびリンの終点決定
を行うに充分な濃度の界面活性剤からなる。
ムは、カルシウムの終点決定を行うに充分な濃度のクロ
ロホスホナシ−■またはアルセナゾーＩＩＩ、モリブデ
ン酸アンモニウム、試薬システムのｐＨを約４に調節す
るに充分な量の酢酸／ＮａＯＨ，およびリンの終点決定
を行うに充分な濃度の界面活性剤からなる。
（発明の概要）
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
本発明は、生物学的流体中の複数の基質を同時に測定す
る方法に関する。本発明の方法は、幾つかの電磁シグナ
ルを同時にモニターすることにより各基質を測定するた
めに、試料に単一の試薬を加えることを含む。
る方法に関する。本発明の方法は、幾つかの電磁シグナ
ルを同時にモニターすることにより各基質を測定するた
めに、試料に単一の試薬を加えることを含む。
電磁シグナルのモニターは、分光光度計または分光蛍光
計によりモニターすることができる。反応混合物中にお
ける変化の測定は、通常の手順によりいかなる器具を用
いても行うことができる。
計によりモニターすることができる。反応混合物中にお
ける変化の測定は、通常の手順によりいかなる器具を用
いても行うことができる。
系における変化が特別のもの、すなわち波長であること
は重要ではないが、同時にモニターし得るならば波長の
変化または違いはできるだけ大きいことが好ましい。
は重要ではないが、同時にモニターし得るならば波長の
変化または違いはできるだけ大きいことが好ましい。
同時アッセイにおいては、測定しようとする基質と反応
するすべての成分を含有する試薬を試料に加え、反応を
器具によりモニターする。一般に同時アッセイは、単一
の試薬を用いて単一セル中で行うので、第二の試薬を投
入したりする必要性や一般に多基質アッセイに付随する
他の随意の工程を省略することができる。
するすべての成分を含有する試薬を試料に加え、反応を
器具によりモニターする。一般に同時アッセイは、単一
の試薬を用いて単一セル中で行うので、第二の試薬を投
入したりする必要性や一般に多基質アッセイに付随する
他の随意の工程を省略することができる。
同時アッセイを設計するに際してのポイントは、複数の
反応を同時に進行させることができ、しかも臨床学的に
意味のある範囲において両方の分析対象物質を正確に決
定できるような試薬を選択することにある。決定しよう
とする各基質に対する反応試薬は、それぞれの反応試薬
について特定の基質に対し独特の電磁放射吸収が得られ
るように選択する。上記反応試薬は、発色団または指示
染料であってよく、反応はスペクトル波長によりモニタ
ーする。たとえば適当な発色団を選択することにより、
以下に記載するごとく、カルシウムとリンとを同時に測
定できるアッセイ法を開発することができる。
反応を同時に進行させることができ、しかも臨床学的に
意味のある範囲において両方の分析対象物質を正確に決
定できるような試薬を選択することにある。決定しよう
とする各基質に対する反応試薬は、それぞれの反応試薬
について特定の基質に対し独特の電磁放射吸収が得られ
るように選択する。上記反応試薬は、発色団または指示
染料であってよく、反応はスペクトル波長によりモニタ
ーする。たとえば適当な発色団を選択することにより、
以下に記載するごとく、カルシウムとリンとを同時に測
定できるアッセイ法を開発することができる。
適当な反応試薬が選択されたら、該適当な反応試薬を含
有する試薬システムに試料を加える。つ 。
有する試薬システムに試料を加える。つ 。
いて試薬と試料とを、反応が同時に起こるような条件下
で各基質がそれぞれの反応試薬と接触するように混合す
る。上記添加および試料と試薬との混合は、起こってい
る反応に適した測定器具によりモニターする。たとえば
、測定しようとする各。
で各基質がそれぞれの反応試薬と接触するように混合す
る。上記添加および試料と試薬との混合は、起こってい
る反応に適した測定器具によりモニターする。たとえば
、測定しようとする各。
基質に特徴的な複数の波長において、その後得られた反
応混合物の吸光度または蛍光の変化を測定するなどのや
り方である。
応混合物の吸光度または蛍光の変化を測定するなどのや
り方である。
反応混合物のモニターは、試薬と試料とを互いに混合す
るや否や開始するのが好ましい。このことにより、反応
速度の変化かまたは終点の反応変化を特定の電磁シグナ
ルとしてモニターすることができるようになる。
るや否や開始するのが好ましい。このことにより、反応
速度の変化かまたは終点の反応変化を特定の電磁シグナ
ルとしてモニターすることができるようになる。
本発明の方法により、単一の試薬を用いて血清中のカル
シウムおよびリン（無機リン酸塩）を同時に測定するこ
とができる。カルシウムおよびリンの反応は同時に進行
し、分光光度計により二つの別々の波長において二つの
異なる反応を測定する。
シウムおよびリン（無機リン酸塩）を同時に測定するこ
とができる。カルシウムおよびリンの反応は同時に進行
し、分光光度計により二つの別々の波長において二つの
異なる反応を測定する。
分光光度計には、多数の波長を同時にモニターすること
ができるダイオードアレイ検出器を用いている。
ができるダイオードアレイ検出器を用いている。
一般に、カルシウムとリンとの同時アッセイを行つため
の本発明の試薬システムは、カルシウムの終点決定を行
うに充分な濃度のアゾ染料、およびリンの終点決定を行
うに充分な量の界面活性剤とモリブデン酸塩とを含む酸
性水溶液からなる。
の本発明の試薬システムは、カルシウムの終点決定を行
うに充分な濃度のアゾ染料、およびリンの終点決定を行
うに充分な量の界面活性剤とモリブデン酸塩とを含む酸
性水溶液からなる。
本発明の一実施態様においては、カルシウムの測定はク
ロロホスホナシ−■のようなアゾ染料を用いることによ
り行う。吸光度の最大は６６０ ｎｍの近くにあり、約
３３０〜約４０Ｏｎ−で比較的小さな吸光度の変化がみ
られる。このことにより、モリブデン酸塩および界面活
性剤を用いたｐＨ２のリン試薬と上記カルシウム試薬と
を組み合わせることが可能になる。というのは、このリ
ン試薬は約６６ＯｎＩ１１で吸光度の変化をきたすこと
なく約３３０〜約４００ｕ＋でモニターすることができ
るからである。さらに、アゾ染料はｐＨ２〜５ではマグ
ネシウムによる妨害を実質的に受けることなく充分なモ
ル吸光性を示すため、ｐＨ２のリン試薬と組み合わせる
には理想的であるといえる［ＣＲＣハンドブック・オブ
・オーガニック・アナリティカル・リージェンッ（ＣＲ
ＣＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆＯｒｇａｎｉｃ Ａｎａｌｙ
ｔｉｃａｌ Ｒｅａｇｅｎｔｓ）、チェング（Ｋ。
ロロホスホナシ−■のようなアゾ染料を用いることによ
り行う。吸光度の最大は６６０ ｎｍの近くにあり、約
３３０〜約４０Ｏｎ−で比較的小さな吸光度の変化がみ
られる。このことにより、モリブデン酸塩および界面活
性剤を用いたｐＨ２のリン試薬と上記カルシウム試薬と
を組み合わせることが可能になる。というのは、このリ
ン試薬は約６６ＯｎＩ１１で吸光度の変化をきたすこと
なく約３３０〜約４００ｕ＋でモニターすることができ
るからである。さらに、アゾ染料はｐＨ２〜５ではマグ
ネシウムによる妨害を実質的に受けることなく充分なモ
ル吸光性を示すため、ｐＨ２のリン試薬と組み合わせる
には理想的であるといえる［ＣＲＣハンドブック・オブ
・オーガニック・アナリティカル・リージェンッ（ＣＲ
ＣＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆＯｒｇａｎｉｃ Ａｎａｌｙ
ｔｉｃａｌ Ｒｅａｇｅｎｔｓ）、チェング（Ｋ。
Ｌ 、 Ｃｈｅｎｇ）、ウエノ（Ｋ、Ｕｅｎｏ）、イマ
ムラ（Ｔ、１ｍａｍｕｒａ）、ＣＲＣブレス、ボコφラ
ドン、ＦＬ。
ムラ（Ｔ、１ｍａｍｕｒａ）、ＣＲＣブレス、ボコφラ
ドン、ＦＬ。
１７３頁、第５図、１９８２参照〕。このことにより、
カルシウムアッセイにおけるマグネシウムの妨害を、化
合物を加えることによってではなくｐＨの選択によって
除くことができるのであり、そのような化合物は、同時
に行うリンアッセイを妨害するおそれがあるのである。
カルシウムアッセイにおけるマグネシウムの妨害を、化
合物を加えることによってではなくｐＨの選択によって
除くことができるのであり、そのような化合物は、同時
に行うリンアッセイを妨害するおそれがあるのである。
リンアッセイに用いるモリブデン酸塩は、モリブデン酸
ナトリウムまたはモリブデン酸アンモニウムであるのが
好ましい。本発明による同時アッセイ試薬システム法の
リンアッセイに関する部分は、ムノツ（Ｍｕｎｏｚ）ら
のＣｌ１ｎ、Ｃｈｅｔ２９：３７２（１９８３）の手順
と類似の方法であり、アゾ染料を用いるよう改変したも
のである。とりわけ、硝酸はアゾ染料を分解するので、
これの代わりに硫酸を用いたことが改変に含まれる（Ｃ
ＲＣハンドブック、１７１頁参照）。
ナトリウムまたはモリブデン酸アンモニウムであるのが
好ましい。本発明による同時アッセイ試薬システム法の
リンアッセイに関する部分は、ムノツ（Ｍｕｎｏｚ）ら
のＣｌ１ｎ、Ｃｈｅｔ２９：３７２（１９８３）の手順
と類似の方法であり、アゾ染料を用いるよう改変したも
のである。とりわけ、硝酸はアゾ染料を分解するので、
これの代わりに硫酸を用いたことが改変に含まれる（Ｃ
ＲＣハンドブック、１７１頁参照）。
同時アッセイを行うための他の方法では、試薬システム
のカルシウムアッセイに関する部分は、アゾ染料、好ま
しくはｐＨ約４のクロロホスホナシー■またはアルセナ
ゾー■からなる。反応のモニターは約６６０ｎｍで行う
。３４０ｍｍまたは３６４ｍｍでは吸光度の変化がほと
んどないので、この反応はリンアッセイの部分を妨害し
ないであろう。
のカルシウムアッセイに関する部分は、アゾ染料、好ま
しくはｐＨ約４のクロロホスホナシー■またはアルセナ
ゾー■からなる。反応のモニターは約６６０ｎｍで行う
。３４０ｍｍまたは３６４ｍｍでは吸光度の変化がほと
んどないので、この反応はリンアッセイの部分を妨害し
ないであろう。
上記のごとく、マグネシウムによる妨害をなくすように
ｐＨを選択する。
ｐＨを選択する。
本発明の試薬システムのリンまたはリン酸塩に関する部
分は、ＮａＯＨでｐＨ４に調節した、モリブデン酸アン
モニウムまたはモリブデン酸ナトリウム、界面活性剤、
゛および酢酸からなる。本発明の試薬システムに用いる
ことのできる代表的な界面活性剤は、Ｂｒ１ｊ−３５［
ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテルに対する
ＩＣ＋Ｃｌリカ（ＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａｓ、 Ｅ
ｎｃ、、）、ウイルミングトン、プラウエアの登録商標
］、およびドデシル硫酸ナトリウムである。リンアッセ
イ法はアトキンンン（Ａｔｋｉｎｓｏｎ）らのビオキミ
カル・エト・ビオフイジカ・アクタ（Ｂ １ｃｂｉ＊１
ｃａｌ ｅｔ Ｂ １ｏｐｈｙｓｉｃａ ＡｃＬａ）
３２０、：１９５（１９７３）に記載の手順に類似した
ものであり、血清成分を溶解させるために界面活性剤の
濃度を増加させる改変をしている。血清成分を可溶性に
するため、ドデシル硫酸ナトリウムを増加させるのが好
ましい。リン酸塩とモリブデン酸塩との反応は、約３３
０〜約４００ ａｍ、より好ましくは約３４０〜約３６
４ ｎａでモニターする。
分は、ＮａＯＨでｐＨ４に調節した、モリブデン酸アン
モニウムまたはモリブデン酸ナトリウム、界面活性剤、
゛および酢酸からなる。本発明の試薬システムに用いる
ことのできる代表的な界面活性剤は、Ｂｒ１ｊ−３５［
ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテルに対する
ＩＣ＋Ｃｌリカ（ＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａｓ、 Ｅ
ｎｃ、、）、ウイルミングトン、プラウエアの登録商標
］、およびドデシル硫酸ナトリウムである。リンアッセ
イ法はアトキンンン（Ａｔｋｉｎｓｏｎ）らのビオキミ
カル・エト・ビオフイジカ・アクタ（Ｂ １ｃｂｉ＊１
ｃａｌ ｅｔ Ｂ １ｏｐｈｙｓｉｃａ ＡｃＬａ）
３２０、：１９５（１９７３）に記載の手順に類似した
ものであり、血清成分を溶解させるために界面活性剤の
濃度を増加させる改変をしている。血清成分を可溶性に
するため、ドデシル硫酸ナトリウムを増加させるのが好
ましい。リン酸塩とモリブデン酸塩との反応は、約３３
０〜約４００ ａｍ、より好ましくは約３４０〜約３６
４ ｎａでモニターする。
６６０ｎ−では有為の吸光度変化が認められないので、
この反応は本アッセイのカルシウムアッセイに関する部
分を妨害しないであろう。
この反応は本アッセイのカルシウムアッセイに関する部
分を妨害しないであろう。
つぎに実施例に基づいて本発明をさらに詳しく説明する
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１（カルシウム／リン同時アッセイ）本実施例に
記載するのは、カルシウムおよびリンの両反応の終点を
モニターすることによりカルシウムおよびリンの同時ア
ッセイを行うための方法である。モリブデン酸ナトリウ
ム（２０ａ＋Ｍ）および４０％トリエタノールアミンラ
ウリルサルフェ−）（２５０ｍ（／のからなる水溶液を
調製することにより、単一の試薬システムを調製した。
記載するのは、カルシウムおよびリンの両反応の終点を
モニターすることによりカルシウムおよびリンの同時ア
ッセイを行うための方法である。モリブデン酸ナトリウ
ム（２０ａ＋Ｍ）および４０％トリエタノールアミンラ
ウリルサルフェ−）（２５０ｍ（／のからなる水溶液を
調製することにより、単一の試薬システムを調製した。
上記水溶液を１７ 、８ Ｍ Ｈ＊ Ｓ Ｏ，により
ｐＨ２に調節し、脱イオン水で希釈して容積を増加させ
、クロロホスホナシ−Ｉ［［（０，１ｍＭ）を加えた。
ｐＨ２に調節し、脱イオン水で希釈して容積を増加させ
、クロロホスホナシ−Ｉ［［（０，１ｍＭ）を加えた。
ヒト血清試料を試薬に対してｌ：２５の比で加え、混合
した。２分後、リンについては３４０ｎｓで、カルシウ
ムについては６６０ｎ−で吸光度ヲ読み取った。別のア
ッセイをすでに記載した通りにして行ったが、吸光度の
読み取りは、リンについては３６４ ｎｍで、カルシウ
ムについては６６０ｎｓで行った。濃度については標準
曲線で比較することにより計算した。
した。２分後、リンについては３４０ｎｓで、カルシウ
ムについては６６０ｎ−で吸光度ヲ読み取った。別のア
ッセイをすでに記載した通りにして行ったが、吸光度の
読み取りは、リンについては３６４ ｎｍで、カルシウ
ムについては６６０ｎｓで行った。濃度については標準
曲線で比較することにより計算した。
実施例２（カルシウム／リン同時アッセイ）本実施例に
記載するのは、カルシウムおよびリンの両反応の終点を
モニターすることによりカルシウムおよびリンの同時ア
ッセイを行うための方法である。七モリブデン酸アンモ
ニウム（２，９ｍＭ）および４０％トリエタノールアミ
ンラウリルサルフェート（２５０ｘＩ２／のからなる水
溶液を調製することにより、単一の試薬システムを調製
した。上記水溶液を１７．８Ｍ Ｈ，Ｓｏ、によりｐ
Ｈ２に調節し、脱イオン水で希釈して容積を増加させ、
クロロホスホナシ−Ｉｌｌ（０，１ｍＭ）を加えた。
記載するのは、カルシウムおよびリンの両反応の終点を
モニターすることによりカルシウムおよびリンの同時ア
ッセイを行うための方法である。七モリブデン酸アンモ
ニウム（２，９ｍＭ）および４０％トリエタノールアミ
ンラウリルサルフェート（２５０ｘＩ２／のからなる水
溶液を調製することにより、単一の試薬システムを調製
した。上記水溶液を１７．８Ｍ Ｈ，Ｓｏ、によりｐ
Ｈ２に調節し、脱イオン水で希釈して容積を増加させ、
クロロホスホナシ−Ｉｌｌ（０，１ｍＭ）を加えた。
ヒト血清試料を試薬に対してｌ：２５の比で加え、混合
した。２分後、リンについては３４０ｎｍで、カルシウ
ムについては６６０ｎｍで吸光度を読み取った。別のア
ッセイをすでに記載した通りにして行ったが、吸光度の
読み取りは、リンについては３６４ ｎｉで、カルシウ
ムについては６６０ｎｍで行った。濃度については標準
曲線で比較することにより計算した。
した。２分後、リンについては３４０ｎｍで、カルシウ
ムについては６６０ｎｍで吸光度を読み取った。別のア
ッセイをすでに記載した通りにして行ったが、吸光度の
読み取りは、リンについては３６４ ｎｉで、カルシウ
ムについては６６０ｎｍで行った。濃度については標準
曲線で比較することにより計算した。
実施例３（カルシウム／リン同時アッセイ）本実施例に
記載するのは、カルシウムおよびリンの両反応の終点を
モニターすることによりカルシウムおよびリンの同時ア
ッセイを行うための方法である。下記の成分を含有する
水溶液を調製することにより、試薬システムを調製した
。
記載するのは、カルシウムおよびリンの両反応の終点を
モニターすることによりカルシウムおよびリンの同時ア
ッセイを行うための方法である。下記の成分を含有する
水溶液を調製することにより、試薬システムを調製した
。
クロロホスホナシ−ＤＩ（０，１ｍＭ）４％Ｂｒｆｊ
３５（１００ｘ（２／のｌＯ％ドデンル硫酸ナトリウ
Ａ（１００ｚＣ／１２）七モリブデン酸アンモニウム（
２５０ｍ（１／（１，１。
３５（１００ｘ（２／のｌＯ％ドデンル硫酸ナトリウ
Ａ（１００ｚＣ／１２）七モリブデン酸アンモニウム（
２５０ｍ（１／（１，１。
３％）
Ｅ）、 １７Ｍ酢酸（５５０ｉ＆／Ｑ）、ＮａＯＨにＴ
ａＨ２に調整 ヒト血清試料を試薬に対してｌ：２５の比で加え、混合
した。２分後、リンについては３４０ｎｍで、カルシウ
ムについては６６０ｒｕ＋＋で吸光度を読み取った。別
のアッセイをすでに記載した通りにして行ったが、吸光
度の読み取りは、リンについては３６４ｎ−で、カルシ
ウムについては６６０ｎ＋ｍで行った。濃度については
標準曲線で比較することにより計算した。
ａＨ２に調整 ヒト血清試料を試薬に対してｌ：２５の比で加え、混合
した。２分後、リンについては３４０ｎｍで、カルシウ
ムについては６６０ｒｕ＋＋で吸光度を読み取った。別
のアッセイをすでに記載した通りにして行ったが、吸光
度の読み取りは、リンについては３６４ｎ−で、カルシ
ウムについては６６０ｎ＋ｍで行った。濃度については
標準曲線で比較することにより計算した。
特許出願人 アボット・ラボラトリーズ代理人弁理士青
山 葆 ほか１名
山 葆 ほか１名
Claims (7)
- （１）反応混合物中で単一の試薬システムを用いてカル
シウムおよびリン基質を同時に決定する方法であって、 （ａ）決定しようとする各基質に対する反応試薬を含有
する試薬システムを加え、その際、各反応試薬は、特定
の基質について独特の電磁放射吸光度を得ることができ
、他の基質を決定することができるように選択したもの
であり、 （ｂ）それぞれの反応が同時に起こるような条件下で各
基質をそれぞれの反応試薬と同時に反応させ、ついで （ｃ）決定しようとする各基質に特徴的な複数の波長に
おいて、その後の反応混合物の吸光度または蛍光の変化
を測定する ことを特徴とする方法。 - （２）反応混合物中で単一の試薬システムを用いてカル
シウムおよびリン基質を同時に決定する方法であって、 （ａ）決定しようとする各基質に対する発色団を含有す
る試薬システムを加え、その際、各発色団は、特定の基
質について独特の吸光バンドを得ることができ、他の基
質を決定することができるように選択したものであり、 （ｂ）それぞれの反応が同時に起こるような条件下で各
基質をそれぞれの発色団と同時に反応させ、ついで （ｃ）決定しようとする各基質に特徴的な複数の波長に
おいて、その後の反応混合物の吸光度または蛍光の変化
を測定する ことを特徴とする方法。 - （３）前記試薬システムが、カルシウムの終点決定を行
うに充分な濃度のアゾ染料、およびリンの終点決定を行
うに充分な濃度の界面活性剤とモリブデン酸塩とを含む
酸性水溶液からなる特許請求の範囲第（２）項記載の方
法。 - （４）前記試薬システムが、カルシウムの終点決定を行
うに充分な濃度のクロロホスホナゾーIII、モリブデン
酸ナトリウムまたはモリブデン酸アンモニウム、試薬シ
ステムのｐＨを約２に調節するに充分な量の硫酸、およ
びリンの終点決定を行うに充分な濃度の界面活性剤から
なる特許請求の範囲第（３）項記載の方法。 - （５）前記試薬システムが、カルシウムの終点決定を行
うに充分な濃度のクロロホスホナゾーIII、モリブデン
酸アンモニウム、試薬システムのｐＨを約４に調節する
ための酢酸／ＮａＯＨ、およびリンの終点決定を行うに
充分な濃度の界面活性剤からなる特許請求の範囲第（３
）項記載の方法。 - （６）前記試薬システムが、カルシウムの終点決定を行
うに充分な濃度のアルセナゾーIII、モリブデン酸アン
モニウム、試薬システムのｐＨを約４に調節するための
酢酸、およびリンの終点決定を行うに充分な濃度の界面
活性剤からなる特許請求の範囲第（３）項記載の方法。 - （７）特許請求の範囲第（３）項、第（４）項、第（５
）項または第（６）項に記載のカルシウムおよびリンの
同時決定のための試薬システム。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US9958787A | 1987-09-22 | 1987-09-22 | |
| US099587 | 1987-09-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01109247A true JPH01109247A (ja) | 1989-04-26 |
Family
ID=22275722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63237452A Pending JPH01109247A (ja) | 1987-09-22 | 1988-09-21 | カルシウムおよびリンの同時アッセイ法およびそれに用いる試薬システム |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0308670B1 (ja) |
| JP (1) | JPH01109247A (ja) |
| KR (1) | KR890005509A (ja) |
| AT (1) | ATE105415T1 (ja) |
| AU (1) | AU610646B2 (ja) |
| CA (1) | CA1324066C (ja) |
| DE (1) | DE3889402T2 (ja) |
| ES (1) | ES2056084T3 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04120464A (ja) * | 1989-12-15 | 1992-04-21 | F Hoffmann La Roche Ag | カルシウムおよび（または）マグネシウムの測定方法および測定用試薬組成物 |
| JP2008058033A (ja) * | 2006-08-29 | 2008-03-13 | Kanto Chem Co Inc | カルシウム濃度測定試薬および測定方法 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5057435A (en) * | 1990-10-12 | 1991-10-15 | Synermed, Inc. | Reagent and methods for calcium determination |
| US7288414B2 (en) * | 2005-04-19 | 2007-10-30 | Specialty Assays, Inc. | Use of phosphonazo III for the measurement of calcium, magnesium and sodium in analytical samples |
| CN110793992A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-02-14 | 沈阳师范大学 | 一种应用能量色散x射线荧光光谱分析含磷饲料中磷元素含量的方法 |
-
1988
- 1988-08-24 AT AT8888113754T patent/ATE105415T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-08-24 EP EP88113754A patent/EP0308670B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-24 ES ES88113754T patent/ES2056084T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-24 DE DE3889402T patent/DE3889402T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-09-21 AU AU22459/88A patent/AU610646B2/en not_active Ceased
- 1988-09-21 JP JP63237452A patent/JPH01109247A/ja active Pending
- 1988-09-21 CA CA000578063A patent/CA1324066C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-09-21 KR KR1019880012176A patent/KR890005509A/ko not_active Ceased
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04120464A (ja) * | 1989-12-15 | 1992-04-21 | F Hoffmann La Roche Ag | カルシウムおよび（または）マグネシウムの測定方法および測定用試薬組成物 |
| JP2008058033A (ja) * | 2006-08-29 | 2008-03-13 | Kanto Chem Co Inc | カルシウム濃度測定試薬および測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0308670B1 (en) | 1994-05-04 |
| CA1324066C (en) | 1993-11-09 |
| AU610646B2 (en) | 1991-05-23 |
| AU2245988A (en) | 1989-03-23 |
| ATE105415T1 (de) | 1994-05-15 |
| DE3889402T2 (de) | 1994-08-25 |
| EP0308670A1 (en) | 1989-03-29 |
| KR890005509A (ko) | 1989-05-15 |
| ES2056084T3 (es) | 1994-10-01 |
| DE3889402D1 (de) | 1994-06-09 |
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