JPH04120464A - カルシウムおよび（または）マグネシウムの測定方法および測定用試薬組成物 - Google Patents
カルシウムおよび（または）マグネシウムの測定方法および測定用試薬組成物Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
［０００１］
本発明は、分析試料中のマグネシウムの定量方法、およ
び分析試料中のカルシウムとマグネシウムの両者の同時
的定量方法、およびこれらにおいて使用される新規試薬
組成物に関するものである。 ［０００２］ カルシウムは例外として、マグネシウムは最も豊富な細
胞内イオンである。それは、エネルギーに富むホスフェ
ートの移送におけるＡＴＰの活性化、脂質、炭化水素、
および蛋白質の代謝に関与する酵素の活性化、ならびに
ＤＮＡ、ＲＮＡおよびリポソームの高分子構造の保存を
含む多くの生理化学的工程に対して必須のものである。 また、マグネシウムは神経筋器官に対して顕著な影響を
有し、マグネシウムの濃度低下は、テタニーおよびケイ
レンを生じ得、一方その水準の増大は、全身性麻痺、呼
吸疾患および心停止を起こし得る。低下したマグネシウ
ム濃度によるテタニーは、低カルシウム濃度により起こ
るものと臨床的に区別できないため、血清マグネシウム
およびカルシウムの両者のアッセイを同時に行なうこと
が、しばしば必要となる。 ［０００３］ ホスフェート沈殿技術、錯形成滴定法、螢光分光測定お
よびチタンイエローを用いる色素吸着法を含む多くの方
法が、マグネシウム量の測定に使用されてきた。これら
の方法は、一般に時間を消費するか、技術的欠点に悩ま
されるものである。マグネシウムアッセイの為の最良の
方法は、一般には原子吸光分光測定であるが、これは高
価な装置を必要とし、小規模な試験所においてはしばし
ば実用的ではないものである。カルマガイト（ｃａｌｍ
ａｇｉｔｅ）との反応によるマグネシウムの測定も知ら
れているが、この方法では、試薬が不安定であり、また
測定も一般に種々の妨害を受は易い。 ［０００４］ 一般に、生物学的液体中の全カルシウム測定のための既
存の方法は、測定に先立って試料の多くの操作を含む。 重力的および滴定的方法は、通常大きい試料体積を必要
とする。色測定法は、手仕事および自動の雨音において
共通して高いアルカリ条件下での最終読取を含む。この
ような測定に使用される指示薬は、通常、該最終ｐＨに
おいて不安定であり、従って強塩基による試薬の希釈を
必要とする。クロロホスホナシＩＩＩを用いたカルシウ
ムおよびマグネシウムの測定が知られているが、しかし
ながら該クロロホスホナシＩＩＩを用いたカルシウムと
マグネシウムの同時測定方法は、一方のイオンの測定を
他方の妨害なしに行なうためにはｐＨの過激な変化を必
要とし、加えて信頼おける結果を得るためには実験条件
の綿密な調整が必要である。 ［０００５］ 本発明は、 一分析試料中のマグネシウム測定に有用な試薬組成物、
−分析試料中のマグネシウムおよびカルシウムの同時測
定に有用な試薬組成物−分析試料中のマグネシウムの測
定方法、−分析試料中のマグネシウムおよびカルシウム
の同時測定方法、に関するものである。 ［０００６］ 本発明は、第一には分析試料中のマグネシウム測定に有
用な試薬組成物に関するものである。本発明によるマグ
ネシウムの測定方法は、２段階工程である。第１段階に
おいて、第１の試薬（“′試薬１″）が、マグネシウム
を分析すべき試料に添加される。この試薬１は、基本的
にクロロホスホナシＩＩＩ （ＣＰＺ３） および
ＥＧＴＡまたは１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）
エタン−Ｎ、Ｎ、ＮＮ′−テトラ酢酸（ＢＡＰＴＡ）か
らなる群から選択されるキレート剤を含んでなる。該キ
レート剤は、好ましくはエチレングリコールビス（２−
アミノエチルエーテル） −Ｎ、 Ｎ、 Ｎ’ Ｎ’
−テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）である。試薬１は、約０．０
１〜１．０ｍＭのＣＰＺ３および０．１〜１００ｍＭの
ＥＧＴＡを含有すべきである。より好ましい範囲は、０
．０５〜０．３０ｍＭのＣＰＺ３およびＯ１〜１０ｍＭ
のＥＧＴＡであり、最適には約０．２０ｍＭのＣＰＺ３
および１０ｍＭのＥＧＴＡである。該試薬１は、付加的
に１種以上の緩衝剤、洗浄剤、抗微生物剤または抗発泡
剤を含んでもよい。好ましい緩衝剤は、イミダゾール、
ビス−トリスプロパン、すなわち１．３−（ビス〔トリ
ス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ〕プロパン、−塩
基性ホスフェート、テトラブチルアンモニウムヒドロキ
シド／ホウ酸、またはトリス、すなわち（トリス〔ヒド
ロキシメチル〕アミノメタン）である。最適には、該イ
ミダゾールは、約７．６のｐＨ、ビス−トリスプロパン
は、約８のｐＨ１−塩基性ホスフェートは約７〜８のｐ
Ｈ１およびトリスは８のｐＨであるべきである。限定さ
れるものではないが、コカミドプロピルアミンオキシド
（陽イオン性） ナトリウムラウリルエーテルスルフオ
スクシネート（陰イオン性）、オクチルフェノキシポリ
エトキシエタノール（非イオン性） 直鎖アルコールエ
トキシレート−ナトリウム（二価陰イオン性／非イオン
性） Ｎ−アルキルベタイン（両性） フルオロアルキ
ルアルコール（非イオン性） ポリプロポキシ四級アン
モニウムクロライド（陽イオン性） ココアミドプロピ
ルベタイン（両性） オレイルアミドプロピルベタイン
（両性） イソステアリルアミドプロピルベタイン（両
性） カプリツク／カプリリックアミドプロピルベタイ
ン（両性）およびココアミドベタイン、ならびにベタイ
ン類、ポリオキシエチレンエーテル類、ポリオキシエチ
レンソルビタン類、または非イオン性フッ素系界面活性
剤を含む多くの種類の洗浄剤が使用され得る。 ［０００７］ 好適な抗微生物剤は、トリメトプリムおよびスルファメ
トキサゾールに加え、チメロサール、アジド、クロラム
フェニコール、メチルパラベン（メチル ｐ −ヒドロ
キシベンゾエート）、プロピルパラベン、ｎ−プロピル
−ｐ−ヒドロキシベンゾエート、２．４−ジクロロベン
ジルアルコール、ゲンタマイシン、またはヒドロキシメ
チルアミノ酢酸ナトリウムであってよい。好適な抗発泡
剤は、シリコン基材消泡剤類のいずれかである。試薬１
は、好ましくはテトラブチルアンモニウムヒドロキシド
、イミダゾール、およびＴＥＳ等の緩衝剤を含み、好ま
しい抗微生物剤はスルファメトキサゾールおよびトリメ
トプリムであり、好ましい洗浄剤はポリオキシエチレン
ソルビタンモノラウレートであり、抗発泡剤はシリコン
基材消泡剤である。試薬１の必須ではない成分の有効な
濃度範囲は、１０〜６００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５０
０ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０％のポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート、１〜４０％のテト
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、ｍｌあたり１０〜
１００マイクログラムのスルファメトキサゾール、ｍｌ
あたり１〜１０マイクログラムのトリメトプリムおよび
０．０１〜１０％のシリコン基材消泡剤である。好まし
い範囲は、５０〜３００ｍＭのＴＥＳ、０゜１〜２．０
ｍＭのイミダゾール、０．１〜１％のポリオキシエチレ
ンソルビタンモノラウレート、１〜５％のテトラブチル
アンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ／ｍｌの
スルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメ
トプリムおよび０．０１〜１％のシリコン基材消泡剤で
ある。最も好ましくは、試薬１は、約３％のテトラブチ
ルアンモニウムヒドロキシド、ｍｌあたり５０μｇのス
ルファメトキサゾール、１４５ｍＭのＴＥＳ、１０ｍＭ
のＥＧＴＡ、１．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポ
リオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ｍｌあた
り５μｇのトリメトプリム、０．２００ｍＭのＣＰＺ３
および０．０７５％のシリコン基材消泡剤を含んでなる
。 ［０００８］ 本発明の方法に従ってマグネシウムを測定するために有
用な第２の試薬組成物は、試薬２と称される。試薬２の
必須成分はＥＤＴＡで−ある。−試薬２は、付加的に、
試薬１について適用可能なものと同様な１種以上の緩衝
剤、洗浄剤、抗微生物剤または挑発泡剤を含んでもよい
。試薬２は、約１〜５００ｍＭの範囲のＥＤＴＡを含ん
でよい。しかしながら、１０〜２５ｍＭの範囲が好まし
く、最適な態様は、約１６ｍＭの濃度である。試薬１と
同様に、好ましい緩衝剤は、テトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳであり；抗
微生物剤は、スルファメトキサゾールおよびトリメトプ
リムであり；洗浄剤はポリオキシエチレンソルビタンモ
ノラウレートであり；および該挑発泡剤は、シリコン基
材消泡剤である。試薬２の有効な濃度は、１０〜６００
ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５００ｍＭのイミダゾール、０
．０１〜１０％のポリオキシエチレンソルビタンモノラ
ウレート、１〜４０％のテトラブチルアンモニウムヒド
ロキシド、ｍｌあたり１０〜１００μｇのスルファメト
キサゾール、ｍｌあたり１〜１０μｇのトリメトプリム
および０．０１〜１０％のシリコン基材消泡剤である。 より好ましい濃度範囲は、５０〜３００ｍＭのＴＥＳ、
０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、０．１〜１％のポ
リオキシエチレンソルビタンモノラウレート、１〜１５
％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜１
１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０
μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０１〜１％のシ
リコン基材消泡剤である。試薬２は、最も好ましくは、
約３％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド１ｍｌ
あたり５０μｇのスル７７メトキサゾール、１００ｍＭ
のＴＥＳ、１６ｍＭのＥＤＴＡ、１．０ｍＭのイミダゾ
ール、０．１％のポリオキシエチレンソルビタンモノラ
ウレート、ｍｌあたり５μｇのトリメトプリムおよび０
．０７５％のシリコン基材消泡剤を含む。 ［０００９］ これらの２種の新規試薬は、本発明の方法に従ってマグ
ネシウムの測定において使用される。 ［００１０］ 本発明は、また、分析試料中のカルシウムおよびマグネ
シウムの両者の同時測定方法を包含するものである。こ
の測定法は、更に試薬３．４および５と称する新規試薬
を必要とする。試薬３は、試薬１について示したように
ＣＰＺ３および１種以上の緩衝剤、洗浄剤、抗微生物剤
、または抗発泡剤を含んでなる。試薬３において、好ま
しくは該緩衝剤はテトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ド、イミダゾール、およびＴＥＳであり、抗微生物剤は
スルフアメ・トキサゾールおよびトリメトプリムであり
、洗浄剤はポリオキシエチレンソルビタンモノラウレー
トであり、および抗発泡剤はシリコン基材消泡剤である
。試薬３の有効な濃度範囲は約０．０１〜１．０ｍＭの
ＣＰＺ３．１０〜６００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５００
ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０％のポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレート、１〜４０％のテトラ
ブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ／
ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌの
トリメトプリム、および０．０１〜１０％のシリコン基
材消泡剤である。より好ましくは、これらの範囲は、０
．０５〜０．３０のＣＰＺ３．５０〜３００ｍＭのＴＥ
Ｓ、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、０．１〜１％
のポリエトキシエチレンソルビタンモノラウレ−ト、１
〜１０％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、１
０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜
１０μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０１〜１％
のシリコン基材消泡剤である。試薬３は、好ましくは、
約３％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０
μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１４５ｍＭのＴ
ＥＳ、１．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポリオキ
シエチレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／ｍｌの
トリメトプリム、０．２００ｍＭのｃｐｚ３、および０
．０７５％のシリコン基材消泡剤を含む。 ［００１１］ 試薬４は、基本的に試薬２と同じ成分を、好ましい範囲
および有効な範囲の両者の濃度範囲において試薬２と同
じに含んでいる。唯一の差異は、試薬４の最良の形態に
おいてＥＤＴＡがＥＧＴＡにより置換されていることで
あり、該ＥＧＴＡ濃度は約６０ｍＭである。 ［００１２］ 試薬５は、基本的に試薬２と同じ成分を、好ましい範囲
および有効な範囲の両者の濃度範囲において試薬２と同
じに含んでいる。唯一の差異は、試薬５の最良の形態に
おいてＥＤＴＡの濃度が約３２ｍＭであることである。 ［００１３］ 本発明は、工程： ａ）試料を、ＣＰＺ３およびＥＧＴＡまたはＢＡＰＴＡ
からなる群から選択されるキレート剤を含んでなる試薬
（“試薬１″）と混合し、ｂ）該試料の吸光度を測定し
、 Ｃ）該反応混合物に第２のＥＤＴＡ含有試薬（“試薬２
″）を添加し、ｄ）該試料の吸光度を測定すること を含み、よって吸光度の差が該試料中のマグネシウムの
量に比例することを更に含有する分析試料中のマグネシ
ウムの測定方法に関するものである。 ［００１４］ マグネシウム測定の別法は、 ａ）試料を、ＣＰＺ３およびＥＧＴＡまたはＢＡＰＴＡ
からなる群から選択されるキレート剤を含んでなる試薬
（“′試薬１パ）と混合し、ｂ）該試料の吸光度を測定
すること を含み、よって吸光度の差が該試料中のマグネシウムの
量に比例することを更に含有するものである。 ［００１５］ 図に図は、本発明の方法によるマグネシウムの測定にお
ける種々の点での試料の吸光度曲線を示し、１）は、試
薬１および試料を含む混合物の種々の波長での吸光度、
２）は、該試薬１−試料混合物に試薬２を添加した後の
種々の波長での吸光度、３）は、種々の波長における吸
光度の差を示すものである。 ［００１６］ 好ましくは、キレート剤はＥＧＴＡである。いずれの分
析試料、例えば血清、血漿、または尿も好適であり、ま
た、他のいずれの試料、例えば公共水中の分析対象の濃
度試験の為の水試料等も好適である。この方法の好まし
い実施態様として、試薬１および２の両者の濃度は前記
のとおりである。血清または血漿を用いる場合には、血
液は、血清チューブまたはヘパリン、フッ化ナトリウム
もしくはオキサレート等の抗凝集剤を含むチューブにて
採取される。該方法の各段階における吸光度は、マグネ
シウム結合について敏感な波長、好ましくは５５０また
は６７５ナノメータ（ｎｍ）のいずれかの波長にて測定
される。該吸光度を５５０ｎｍにて測定する場合、試料
中のマグネシウムの量は、試料中のマグネシウムがＣＰ
Ｚ３と複合体を形成する場合の５５０ｎｍにおける吸光
度の減少により測定される。他方、吸光度を６７５ｎｍ
にて測定する場合には、試料マグネシウムがＣＰＺ３と
複合体を形成することに伴い吸光度が増大する。６７５
ｎｍが好ましいが、いずれの吸光度測定も可能である。 吸光度の差は、該試料中のマグネシウム量に比例する。 試薬２中のＥＤＴＡは、マグネシウムに結合し、試料−
試薬混合物に対するブランクを与える。該ブランクは、
トリグリセリド類、ヘモグロビン、およびビリルビン等
の測定波長における妨害物質の干渉を低減する。最適な
結果を得るためには、ＣＰＺ３試薬についてのｐＨは約
７．５でなければならない。このことは、試薬の安定性
の増大を与える。例えば、旧来のマグネシウム測定のた
めのカルツガイト法においては、１０〜１３のｐＨ範囲
が必要であり、これは試薬を不安定にしていた。本発明
のＣＰＺ３含有試薬のための中性ｐＨは、該試薬をかな
りの時間空気中にさらした場合にも、Ｃ０２の吸収およ
び試薬の不安定性を実質的に無くする。ｐＫａが７．５
であるため、ＴＥＳ緩衝剤は、該試薬に使用するために
好ましい緩衝剤であり、また試薬１中のＥＧＴＡは、試
料カルシウムの妨害を除去する。シリコン基材消泡剤は
、洗浄剤による発泡を低減するために両試薬に添加され
る。テトラブチルアンモニウムヒドロキシドに代えて、
他の塩基、例えばＫａＯＨまたはＫＯＨを使用すること
もできる。 ［００１７］ 本発明のアッセイは、Ｃ０ＢＡＳ ＢＩＯＴＭ Ｃ０
ＢＡＳ ＦＡＲＡＴＭ またはＣ０ＢＡＳ ＭＩＲ
ＡＴＭ（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ｉ
ｎｃ。 Ｎｕｔｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）等の標準的な
研究用分析装置によって行なうことができる。 ［００１８］ Ｃ０ＢＡＳ ＭＩＲＡにおいては、１００〜２７０μ
ｌの試薬１が、第１のサイクルにおいて２〜９５μｌの
試料と混合される。吸光度は、５５０ｎｍにて測定され
る。次いで、３０〜９０μｍの試薬２を加え、０．５〜
３分間（サイクル８）の後に第２の吸光度測定を５５０
ｎｍにて行なう。ここで、好ましくは、１８０μｌの試
薬１を、第１のサイクルにおいて４．５μｌの試料に混
合する。吸光度を、５５０ｎｍにて測定する。６０μｌ
の試薬を添加し、３分間（サイクル８）経過後、第２の
吸光度測定を５５０ｎｍにて行なう。吸光度変化は、試
料中のマグネシウム濃度に比例する。標準および対照を
、試料と組合せて走らせ、試料中のマグネシウム濃度を
、常法により標準曲線から計算する。 ［００１９］ 本発明のマグネシウム法は、Ｃ０ＢＡＳ ＦＡＲＡま
たはＣ０ＢＡＳ ＢＩＯにおいても測定可能である。 この場合には、３０〜２２５μｌの試薬１を２〜９５μ
ｌの試料と混合し、２０〜４０℃にて５〜１０００秒熟
成し、吸光度を６７５ｎｍにて測定する。好ましくは、
１８０μｍの試薬１を２μｍの試料と混合する。このア
ッセイは、３７℃にて、試料と試薬１との混合後に行な
い、該混合物を１２０秒間熟成し、後に、吸光度を６７
５ｎｍにて測定する。次いで試薬２を添加し、１００秒
後に第２の吸光度測定を６７５ｎｍにて行なう。２回の
測定の吸光度差は、試料中のマグネシウム濃度に比例す
る。 ［００２０］ また、本発明は、工程： ａ）試料を試薬３と混合し、 ｂ）該試料の吸光度を測定し、 Ｃ）試薬４を添加し、 ｄ）該試料の吸光度を測定し、 ｅ）試薬５を添加し、 ｆ）該試料の吸光度を測定する ことを含み、（ｄ）および（ｂ）の間の吸光度差が、試
料中のカルシウム量に比例しカリ（ｆ）および（ｄ）の
間の吸光度差が、試料中のマグネシウム量に比例するこ
とを更に含有する、分析試料中のカルシウムおよびマグ
ネシウムの同時測定方法に関する。 ［００２１］ 上述のように、分析試料は、血清、血漿、尿または他の
いずれの体液、あるいは水もしくは他の試料であっても
よい。吸光度は、５５０ｎｍまたは６７５ｎｍにて測定
する。試薬３．４および５は、前述のとおりの濃度が好
ましい。 ［００２２］ この方法においても、該アッセイをＣ０ＢＡＳ ＢＩ
Ｏ，Ｃ０ＢＡＳ ＭＩＲＡ、ｔたはｃＯＢＡｓ Ｆ
ＡＲＡにて行ナッテモヨイ。例エバ、Ｃ０ＢＡＳ Ｆ
ＡＲＡでは該アッセイを３７℃にて行なう。約３０〜２
２５μｌの試薬３を、２〜９５μｍの試料と混合し、吸
光度を６７５ｎｍにて測定する。次いで、５〜４０μｍ
の試薬４を添加し、吸光度を測定する。次いで５〜４０
μｌの試薬５を添加し、吸光度を測定する。最も好まし
くは、約１８０μｌの試薬３を２μｍの試料と混合し、
吸光度を６７５ｎｍにて測定する。次いで３０μｍの試
薬４を添加し、吸光度を測定する。次いで３０μｌの試
薬５を添加し、吸光度を測定する。カルシウム濃度は、
最初の２回の測定の間の吸光度変化から計算され、マグ
ネシウム濃度は、２および３の測定間から計算される。 ［００２３］ 試薬４のＥＧＴＡを、化合物８−ヒドロキシキノリンに
置換することも可能である。この場合には、（ｄ）と（
ｂ）との間の吸光度差からＭｇ２＋が第一に測定される
。げ）と（ｄ）との間の吸光度差は、試料中のカルシウ
ムに比例するであろう。 ［００２４］
び分析試料中のカルシウムとマグネシウムの両者の同時
的定量方法、およびこれらにおいて使用される新規試薬
組成物に関するものである。 ［０００２］ カルシウムは例外として、マグネシウムは最も豊富な細
胞内イオンである。それは、エネルギーに富むホスフェ
ートの移送におけるＡＴＰの活性化、脂質、炭化水素、
および蛋白質の代謝に関与する酵素の活性化、ならびに
ＤＮＡ、ＲＮＡおよびリポソームの高分子構造の保存を
含む多くの生理化学的工程に対して必須のものである。 また、マグネシウムは神経筋器官に対して顕著な影響を
有し、マグネシウムの濃度低下は、テタニーおよびケイ
レンを生じ得、一方その水準の増大は、全身性麻痺、呼
吸疾患および心停止を起こし得る。低下したマグネシウ
ム濃度によるテタニーは、低カルシウム濃度により起こ
るものと臨床的に区別できないため、血清マグネシウム
およびカルシウムの両者のアッセイを同時に行なうこと
が、しばしば必要となる。 ［０００３］ ホスフェート沈殿技術、錯形成滴定法、螢光分光測定お
よびチタンイエローを用いる色素吸着法を含む多くの方
法が、マグネシウム量の測定に使用されてきた。これら
の方法は、一般に時間を消費するか、技術的欠点に悩ま
されるものである。マグネシウムアッセイの為の最良の
方法は、一般には原子吸光分光測定であるが、これは高
価な装置を必要とし、小規模な試験所においてはしばし
ば実用的ではないものである。カルマガイト（ｃａｌｍ
ａｇｉｔｅ）との反応によるマグネシウムの測定も知ら
れているが、この方法では、試薬が不安定であり、また
測定も一般に種々の妨害を受は易い。 ［０００４］ 一般に、生物学的液体中の全カルシウム測定のための既
存の方法は、測定に先立って試料の多くの操作を含む。 重力的および滴定的方法は、通常大きい試料体積を必要
とする。色測定法は、手仕事および自動の雨音において
共通して高いアルカリ条件下での最終読取を含む。この
ような測定に使用される指示薬は、通常、該最終ｐＨに
おいて不安定であり、従って強塩基による試薬の希釈を
必要とする。クロロホスホナシＩＩＩを用いたカルシウ
ムおよびマグネシウムの測定が知られているが、しかし
ながら該クロロホスホナシＩＩＩを用いたカルシウムと
マグネシウムの同時測定方法は、一方のイオンの測定を
他方の妨害なしに行なうためにはｐＨの過激な変化を必
要とし、加えて信頼おける結果を得るためには実験条件
の綿密な調整が必要である。 ［０００５］ 本発明は、 一分析試料中のマグネシウム測定に有用な試薬組成物、
−分析試料中のマグネシウムおよびカルシウムの同時測
定に有用な試薬組成物−分析試料中のマグネシウムの測
定方法、−分析試料中のマグネシウムおよびカルシウム
の同時測定方法、に関するものである。 ［０００６］ 本発明は、第一には分析試料中のマグネシウム測定に有
用な試薬組成物に関するものである。本発明によるマグ
ネシウムの測定方法は、２段階工程である。第１段階に
おいて、第１の試薬（“′試薬１″）が、マグネシウム
を分析すべき試料に添加される。この試薬１は、基本的
にクロロホスホナシＩＩＩ （ＣＰＺ３） および
ＥＧＴＡまたは１，２−ビス（２−アミノフェノキシ）
エタン−Ｎ、Ｎ、ＮＮ′−テトラ酢酸（ＢＡＰＴＡ）か
らなる群から選択されるキレート剤を含んでなる。該キ
レート剤は、好ましくはエチレングリコールビス（２−
アミノエチルエーテル） −Ｎ、 Ｎ、 Ｎ’ Ｎ’
−テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）である。試薬１は、約０．０
１〜１．０ｍＭのＣＰＺ３および０．１〜１００ｍＭの
ＥＧＴＡを含有すべきである。より好ましい範囲は、０
．０５〜０．３０ｍＭのＣＰＺ３およびＯ１〜１０ｍＭ
のＥＧＴＡであり、最適には約０．２０ｍＭのＣＰＺ３
および１０ｍＭのＥＧＴＡである。該試薬１は、付加的
に１種以上の緩衝剤、洗浄剤、抗微生物剤または抗発泡
剤を含んでもよい。好ましい緩衝剤は、イミダゾール、
ビス−トリスプロパン、すなわち１．３−（ビス〔トリ
ス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ〕プロパン、−塩
基性ホスフェート、テトラブチルアンモニウムヒドロキ
シド／ホウ酸、またはトリス、すなわち（トリス〔ヒド
ロキシメチル〕アミノメタン）である。最適には、該イ
ミダゾールは、約７．６のｐＨ、ビス−トリスプロパン
は、約８のｐＨ１−塩基性ホスフェートは約７〜８のｐ
Ｈ１およびトリスは８のｐＨであるべきである。限定さ
れるものではないが、コカミドプロピルアミンオキシド
（陽イオン性） ナトリウムラウリルエーテルスルフオ
スクシネート（陰イオン性）、オクチルフェノキシポリ
エトキシエタノール（非イオン性） 直鎖アルコールエ
トキシレート−ナトリウム（二価陰イオン性／非イオン
性） Ｎ−アルキルベタイン（両性） フルオロアルキ
ルアルコール（非イオン性） ポリプロポキシ四級アン
モニウムクロライド（陽イオン性） ココアミドプロピ
ルベタイン（両性） オレイルアミドプロピルベタイン
（両性） イソステアリルアミドプロピルベタイン（両
性） カプリツク／カプリリックアミドプロピルベタイ
ン（両性）およびココアミドベタイン、ならびにベタイ
ン類、ポリオキシエチレンエーテル類、ポリオキシエチ
レンソルビタン類、または非イオン性フッ素系界面活性
剤を含む多くの種類の洗浄剤が使用され得る。 ［０００７］ 好適な抗微生物剤は、トリメトプリムおよびスルファメ
トキサゾールに加え、チメロサール、アジド、クロラム
フェニコール、メチルパラベン（メチル ｐ −ヒドロ
キシベンゾエート）、プロピルパラベン、ｎ−プロピル
−ｐ−ヒドロキシベンゾエート、２．４−ジクロロベン
ジルアルコール、ゲンタマイシン、またはヒドロキシメ
チルアミノ酢酸ナトリウムであってよい。好適な抗発泡
剤は、シリコン基材消泡剤類のいずれかである。試薬１
は、好ましくはテトラブチルアンモニウムヒドロキシド
、イミダゾール、およびＴＥＳ等の緩衝剤を含み、好ま
しい抗微生物剤はスルファメトキサゾールおよびトリメ
トプリムであり、好ましい洗浄剤はポリオキシエチレン
ソルビタンモノラウレートであり、抗発泡剤はシリコン
基材消泡剤である。試薬１の必須ではない成分の有効な
濃度範囲は、１０〜６００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５０
０ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０％のポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート、１〜４０％のテト
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、ｍｌあたり１０〜
１００マイクログラムのスルファメトキサゾール、ｍｌ
あたり１〜１０マイクログラムのトリメトプリムおよび
０．０１〜１０％のシリコン基材消泡剤である。好まし
い範囲は、５０〜３００ｍＭのＴＥＳ、０゜１〜２．０
ｍＭのイミダゾール、０．１〜１％のポリオキシエチレ
ンソルビタンモノラウレート、１〜５％のテトラブチル
アンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ／ｍｌの
スルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメ
トプリムおよび０．０１〜１％のシリコン基材消泡剤で
ある。最も好ましくは、試薬１は、約３％のテトラブチ
ルアンモニウムヒドロキシド、ｍｌあたり５０μｇのス
ルファメトキサゾール、１４５ｍＭのＴＥＳ、１０ｍＭ
のＥＧＴＡ、１．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポ
リオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ｍｌあた
り５μｇのトリメトプリム、０．２００ｍＭのＣＰＺ３
および０．０７５％のシリコン基材消泡剤を含んでなる
。 ［０００８］ 本発明の方法に従ってマグネシウムを測定するために有
用な第２の試薬組成物は、試薬２と称される。試薬２の
必須成分はＥＤＴＡで−ある。−試薬２は、付加的に、
試薬１について適用可能なものと同様な１種以上の緩衝
剤、洗浄剤、抗微生物剤または挑発泡剤を含んでもよい
。試薬２は、約１〜５００ｍＭの範囲のＥＤＴＡを含ん
でよい。しかしながら、１０〜２５ｍＭの範囲が好まし
く、最適な態様は、約１６ｍＭの濃度である。試薬１と
同様に、好ましい緩衝剤は、テトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳであり；抗
微生物剤は、スルファメトキサゾールおよびトリメトプ
リムであり；洗浄剤はポリオキシエチレンソルビタンモ
ノラウレートであり；および該挑発泡剤は、シリコン基
材消泡剤である。試薬２の有効な濃度は、１０〜６００
ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５００ｍＭのイミダゾール、０
．０１〜１０％のポリオキシエチレンソルビタンモノラ
ウレート、１〜４０％のテトラブチルアンモニウムヒド
ロキシド、ｍｌあたり１０〜１００μｇのスルファメト
キサゾール、ｍｌあたり１〜１０μｇのトリメトプリム
および０．０１〜１０％のシリコン基材消泡剤である。 より好ましい濃度範囲は、５０〜３００ｍＭのＴＥＳ、
０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、０．１〜１％のポ
リオキシエチレンソルビタンモノラウレート、１〜１５
％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜１
１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０
μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０１〜１％のシ
リコン基材消泡剤である。試薬２は、最も好ましくは、
約３％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド１ｍｌ
あたり５０μｇのスル７７メトキサゾール、１００ｍＭ
のＴＥＳ、１６ｍＭのＥＤＴＡ、１．０ｍＭのイミダゾ
ール、０．１％のポリオキシエチレンソルビタンモノラ
ウレート、ｍｌあたり５μｇのトリメトプリムおよび０
．０７５％のシリコン基材消泡剤を含む。 ［０００９］ これらの２種の新規試薬は、本発明の方法に従ってマグ
ネシウムの測定において使用される。 ［００１０］ 本発明は、また、分析試料中のカルシウムおよびマグネ
シウムの両者の同時測定方法を包含するものである。こ
の測定法は、更に試薬３．４および５と称する新規試薬
を必要とする。試薬３は、試薬１について示したように
ＣＰＺ３および１種以上の緩衝剤、洗浄剤、抗微生物剤
、または抗発泡剤を含んでなる。試薬３において、好ま
しくは該緩衝剤はテトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ド、イミダゾール、およびＴＥＳであり、抗微生物剤は
スルフアメ・トキサゾールおよびトリメトプリムであり
、洗浄剤はポリオキシエチレンソルビタンモノラウレー
トであり、および抗発泡剤はシリコン基材消泡剤である
。試薬３の有効な濃度範囲は約０．０１〜１．０ｍＭの
ＣＰＺ３．１０〜６００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５００
ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０％のポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレート、１〜４０％のテトラ
ブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ／
ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌの
トリメトプリム、および０．０１〜１０％のシリコン基
材消泡剤である。より好ましくは、これらの範囲は、０
．０５〜０．３０のＣＰＺ３．５０〜３００ｍＭのＴＥ
Ｓ、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、０．１〜１％
のポリエトキシエチレンソルビタンモノラウレ−ト、１
〜１０％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、１
０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜
１０μｇ／ｍｌのトリメトプリムおよび０．０１〜１％
のシリコン基材消泡剤である。試薬３は、好ましくは、
約３％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０
μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１４５ｍＭのＴ
ＥＳ、１．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポリオキ
シエチレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／ｍｌの
トリメトプリム、０．２００ｍＭのｃｐｚ３、および０
．０７５％のシリコン基材消泡剤を含む。 ［００１１］ 試薬４は、基本的に試薬２と同じ成分を、好ましい範囲
および有効な範囲の両者の濃度範囲において試薬２と同
じに含んでいる。唯一の差異は、試薬４の最良の形態に
おいてＥＤＴＡがＥＧＴＡにより置換されていることで
あり、該ＥＧＴＡ濃度は約６０ｍＭである。 ［００１２］ 試薬５は、基本的に試薬２と同じ成分を、好ましい範囲
および有効な範囲の両者の濃度範囲において試薬２と同
じに含んでいる。唯一の差異は、試薬５の最良の形態に
おいてＥＤＴＡの濃度が約３２ｍＭであることである。 ［００１３］ 本発明は、工程： ａ）試料を、ＣＰＺ３およびＥＧＴＡまたはＢＡＰＴＡ
からなる群から選択されるキレート剤を含んでなる試薬
（“試薬１″）と混合し、ｂ）該試料の吸光度を測定し
、 Ｃ）該反応混合物に第２のＥＤＴＡ含有試薬（“試薬２
″）を添加し、ｄ）該試料の吸光度を測定すること を含み、よって吸光度の差が該試料中のマグネシウムの
量に比例することを更に含有する分析試料中のマグネシ
ウムの測定方法に関するものである。 ［００１４］ マグネシウム測定の別法は、 ａ）試料を、ＣＰＺ３およびＥＧＴＡまたはＢＡＰＴＡ
からなる群から選択されるキレート剤を含んでなる試薬
（“′試薬１パ）と混合し、ｂ）該試料の吸光度を測定
すること を含み、よって吸光度の差が該試料中のマグネシウムの
量に比例することを更に含有するものである。 ［００１５］ 図に図は、本発明の方法によるマグネシウムの測定にお
ける種々の点での試料の吸光度曲線を示し、１）は、試
薬１および試料を含む混合物の種々の波長での吸光度、
２）は、該試薬１−試料混合物に試薬２を添加した後の
種々の波長での吸光度、３）は、種々の波長における吸
光度の差を示すものである。 ［００１６］ 好ましくは、キレート剤はＥＧＴＡである。いずれの分
析試料、例えば血清、血漿、または尿も好適であり、ま
た、他のいずれの試料、例えば公共水中の分析対象の濃
度試験の為の水試料等も好適である。この方法の好まし
い実施態様として、試薬１および２の両者の濃度は前記
のとおりである。血清または血漿を用いる場合には、血
液は、血清チューブまたはヘパリン、フッ化ナトリウム
もしくはオキサレート等の抗凝集剤を含むチューブにて
採取される。該方法の各段階における吸光度は、マグネ
シウム結合について敏感な波長、好ましくは５５０また
は６７５ナノメータ（ｎｍ）のいずれかの波長にて測定
される。該吸光度を５５０ｎｍにて測定する場合、試料
中のマグネシウムの量は、試料中のマグネシウムがＣＰ
Ｚ３と複合体を形成する場合の５５０ｎｍにおける吸光
度の減少により測定される。他方、吸光度を６７５ｎｍ
にて測定する場合には、試料マグネシウムがＣＰＺ３と
複合体を形成することに伴い吸光度が増大する。６７５
ｎｍが好ましいが、いずれの吸光度測定も可能である。 吸光度の差は、該試料中のマグネシウム量に比例する。 試薬２中のＥＤＴＡは、マグネシウムに結合し、試料−
試薬混合物に対するブランクを与える。該ブランクは、
トリグリセリド類、ヘモグロビン、およびビリルビン等
の測定波長における妨害物質の干渉を低減する。最適な
結果を得るためには、ＣＰＺ３試薬についてのｐＨは約
７．５でなければならない。このことは、試薬の安定性
の増大を与える。例えば、旧来のマグネシウム測定のた
めのカルツガイト法においては、１０〜１３のｐＨ範囲
が必要であり、これは試薬を不安定にしていた。本発明
のＣＰＺ３含有試薬のための中性ｐＨは、該試薬をかな
りの時間空気中にさらした場合にも、Ｃ０２の吸収およ
び試薬の不安定性を実質的に無くする。ｐＫａが７．５
であるため、ＴＥＳ緩衝剤は、該試薬に使用するために
好ましい緩衝剤であり、また試薬１中のＥＧＴＡは、試
料カルシウムの妨害を除去する。シリコン基材消泡剤は
、洗浄剤による発泡を低減するために両試薬に添加され
る。テトラブチルアンモニウムヒドロキシドに代えて、
他の塩基、例えばＫａＯＨまたはＫＯＨを使用すること
もできる。 ［００１７］ 本発明のアッセイは、Ｃ０ＢＡＳ ＢＩＯＴＭ Ｃ０
ＢＡＳ ＦＡＲＡＴＭ またはＣ０ＢＡＳ ＭＩＲ
ＡＴＭ（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ｉ
ｎｃ。 Ｎｕｔｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）等の標準的な
研究用分析装置によって行なうことができる。 ［００１８］ Ｃ０ＢＡＳ ＭＩＲＡにおいては、１００〜２７０μ
ｌの試薬１が、第１のサイクルにおいて２〜９５μｌの
試料と混合される。吸光度は、５５０ｎｍにて測定され
る。次いで、３０〜９０μｍの試薬２を加え、０．５〜
３分間（サイクル８）の後に第２の吸光度測定を５５０
ｎｍにて行なう。ここで、好ましくは、１８０μｌの試
薬１を、第１のサイクルにおいて４．５μｌの試料に混
合する。吸光度を、５５０ｎｍにて測定する。６０μｌ
の試薬を添加し、３分間（サイクル８）経過後、第２の
吸光度測定を５５０ｎｍにて行なう。吸光度変化は、試
料中のマグネシウム濃度に比例する。標準および対照を
、試料と組合せて走らせ、試料中のマグネシウム濃度を
、常法により標準曲線から計算する。 ［００１９］ 本発明のマグネシウム法は、Ｃ０ＢＡＳ ＦＡＲＡま
たはＣ０ＢＡＳ ＢＩＯにおいても測定可能である。 この場合には、３０〜２２５μｌの試薬１を２〜９５μ
ｌの試料と混合し、２０〜４０℃にて５〜１０００秒熟
成し、吸光度を６７５ｎｍにて測定する。好ましくは、
１８０μｍの試薬１を２μｍの試料と混合する。このア
ッセイは、３７℃にて、試料と試薬１との混合後に行な
い、該混合物を１２０秒間熟成し、後に、吸光度を６７
５ｎｍにて測定する。次いで試薬２を添加し、１００秒
後に第２の吸光度測定を６７５ｎｍにて行なう。２回の
測定の吸光度差は、試料中のマグネシウム濃度に比例す
る。 ［００２０］ また、本発明は、工程： ａ）試料を試薬３と混合し、 ｂ）該試料の吸光度を測定し、 Ｃ）試薬４を添加し、 ｄ）該試料の吸光度を測定し、 ｅ）試薬５を添加し、 ｆ）該試料の吸光度を測定する ことを含み、（ｄ）および（ｂ）の間の吸光度差が、試
料中のカルシウム量に比例しカリ（ｆ）および（ｄ）の
間の吸光度差が、試料中のマグネシウム量に比例するこ
とを更に含有する、分析試料中のカルシウムおよびマグ
ネシウムの同時測定方法に関する。 ［００２１］ 上述のように、分析試料は、血清、血漿、尿または他の
いずれの体液、あるいは水もしくは他の試料であっても
よい。吸光度は、５５０ｎｍまたは６７５ｎｍにて測定
する。試薬３．４および５は、前述のとおりの濃度が好
ましい。 ［００２２］ この方法においても、該アッセイをＣ０ＢＡＳ ＢＩ
Ｏ，Ｃ０ＢＡＳ ＭＩＲＡ、ｔたはｃＯＢＡｓ Ｆ
ＡＲＡにて行ナッテモヨイ。例エバ、Ｃ０ＢＡＳ Ｆ
ＡＲＡでは該アッセイを３７℃にて行なう。約３０〜２
２５μｌの試薬３を、２〜９５μｍの試料と混合し、吸
光度を６７５ｎｍにて測定する。次いで、５〜４０μｍ
の試薬４を添加し、吸光度を測定する。次いで５〜４０
μｌの試薬５を添加し、吸光度を測定する。最も好まし
くは、約１８０μｌの試薬３を２μｍの試料と混合し、
吸光度を６７５ｎｍにて測定する。次いで３０μｍの試
薬４を添加し、吸光度を測定する。次いで３０μｌの試
薬５を添加し、吸光度を測定する。カルシウム濃度は、
最初の２回の測定の間の吸光度変化から計算され、マグ
ネシウム濃度は、２および３の測定間から計算される。 ［００２３］ 試薬４のＥＧＴＡを、化合物８−ヒドロキシキノリンに
置換することも可能である。この場合には、（ｄ）と（
ｂ）との間の吸光度差からＭｇ２＋が第一に測定される
。げ）と（ｄ）との間の吸光度差は、試料中のカルシウ
ムに比例するであろう。 ［００２４］
本発明は、例示の目的をもってのみ示される以下の例と
関連させて更に完全に記述されるであろう。 ［００２５］ ＝″１ １リツトル ニア５ｍｌのテトラブチルアンモ
ニウムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのスルファメト
キサゾールを、約７５０ｍｌの脱イオン水に溶解した。 最終成分を、以下の順で試薬溶液に完全に溶解させた：
第１に３３．３ｇのＴＥＳ （遊離酸）；第２に３．９
２ｇのＥＧＴＡ （遊離酸）；第３に０．０６８１ｇの
イミダゾール：第４に０．００５０ｇのトリメトプリム
；第５に０．１５１５ｇのクロロホスフォナシＩＩＩ。 最終的に１．０ｇのポリオキシエチレンソルビタンモノ
ラウレート（Ｔｗｅｅｎ２０）および０．７５ｇのシリ
コン基材消泡剤（Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ）を添
加し、ＨＣＩにてｐＨを７．５に調節し、体積を１リツ
トルとした。試薬１の成分の濃度は、３％ テトラブチ
ルアンモニウムヒドロキシド１４５ｍＭ ＴＥＳ （
遊離酸） １０ｍＭ ＥＧＴＡ （遊離酸） １．０ｍＭ イミダゾール ５μｇ／ｍｌ ）リメトプリム ０．２０ｍＭ クロロホスフォナシエｌｌ００１％
Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ５０μｇ
／ｍｌ スルファメトキサゾールである。 ［００２６］ 試で２１リツトル ニア５ｍｌのテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのスルファメトキ
サゾールを、７５０ｍ１の脱イオン水に溶解させた。最
終成分を、以下の順で試薬溶液に完全に溶解させた：第
１に２２．９ｇのＴＥＳ遊離酸；第２に４．７２ｇのＥ
ＤＴＡ遊離酸；第３に０．０６８１ｇのイミダゾール；
第４に０．００５０ｇのトリメトプリム。最終的に、１
．０ｇのＴｗｅｅｎ２０および０．７５ｇのＦｏａｍａ
ｓｔｅｒ ＦＬＤを加え、ＨＣＩにてｐＨを７．５に
調節し、体積を１リツトルとした。試薬２の成分の最終
的濃度は１３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ド１００ｍＭ ＴＥＳ （遊離酸） １６ｍＭ ＥＧＴＡ （遊離酸） １．０ｍＭ イミダゾール ５０ｇｇ／ｍｌ スルファメトキサゾール５μｇ／ｍ
ｌ ）リメトプリム ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ ＦＯａｍａＳｔｅｒ ＦＬＤである。 ［００２７］ 何Ａ ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡでのマグネシウム ＝該アッセ
イは、３７℃にて行ない、第１のサイクルにおいては１
８０μｌの試薬１を４．５μｌの試料と混合した。吸光
度を５５０ｎｍにて測定した。６０ｍ１の試薬２を第２
のサイクルにおいて添加し、３分間後（サイクル８）に
第２の吸光度測定を５５０ｎｍにて行なった。２回の吸
光度変化は、試料中のマグネシウム濃度に比例する。標
準および対照を試料と組合せて走らせ、試料中のマグネ
シウム濃度を、常法に従って標準曲線から計算した。 ［００２８］ 以下の表は、本発明の方法によりマグネシウムを測定し
た場合の吸光度変化を例示するものである。 ０．４９ｍｍｏｌ／Ｉ Ｍｇ” ０．８５ １．０７ １．３２ １．７０７９ １、６５００ １、６３８６ １、６０９８ １．７７３７ １．７５２４ １．７６４５ １、７６０４ ０、０６５Ｂ ０、１０２４ ０、 Ｉ２５９ ０、１５０８ Δ（サイクル８− ０．４９ｍｍｏｌ／ ｌ Ｍ ｇ １．７０７９
１．１１３７ ０．０６５８十＋ ０．８５ １．６５００ １．７
５２４ ０．１０２４１．０７
１．６３８６ １．７６４５ ０．１
２５９１．３２ １．６０９６
１．７６０４ ０．１５０８１．５２
１．５７７２ １．７４８３
０．１７１１［００２９］ 伝え Ｃ０ＢＡＳ ＦＡＲＡでのマグネシウム測“該アッセ
イは、３７℃にて行ない、１８０ｍ１の試薬１を２μｍ
の試料と混合し、１２０秒間熟成し、吸光度を６７５ｎ
ｍにて測定した。６０μｌの試薬２を加え、１００秒後
に第２の吸光度測定を６７５ｎｍにて行なった。２回の
測定の間の吸光度変化は、試料中のマグネシウム濃度に
比例する。標準および対照を試料と組合せて走らせ、試
料中のマグネシウム濃度を、常法に従って標準曲線から
計算した。 ［００３０］ 以下の表は、本発明の方法によりマグネシウムを測定し
た場合の吸光度変化を例示するものである。
関連させて更に完全に記述されるであろう。 ［００２５］ ＝″１ １リツトル ニア５ｍｌのテトラブチルアンモ
ニウムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのスルファメト
キサゾールを、約７５０ｍｌの脱イオン水に溶解した。 最終成分を、以下の順で試薬溶液に完全に溶解させた：
第１に３３．３ｇのＴＥＳ （遊離酸）；第２に３．９
２ｇのＥＧＴＡ （遊離酸）；第３に０．０６８１ｇの
イミダゾール：第４に０．００５０ｇのトリメトプリム
；第５に０．１５１５ｇのクロロホスフォナシＩＩＩ。 最終的に１．０ｇのポリオキシエチレンソルビタンモノ
ラウレート（Ｔｗｅｅｎ２０）および０．７５ｇのシリ
コン基材消泡剤（Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ）を添
加し、ＨＣＩにてｐＨを７．５に調節し、体積を１リツ
トルとした。試薬１の成分の濃度は、３％ テトラブチ
ルアンモニウムヒドロキシド１４５ｍＭ ＴＥＳ （
遊離酸） １０ｍＭ ＥＧＴＡ （遊離酸） １．０ｍＭ イミダゾール ５μｇ／ｍｌ ）リメトプリム ０．２０ｍＭ クロロホスフォナシエｌｌ００１％
Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ５０μｇ
／ｍｌ スルファメトキサゾールである。 ［００２６］ 試で２１リツトル ニア５ｍｌのテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのスルファメトキ
サゾールを、７５０ｍ１の脱イオン水に溶解させた。最
終成分を、以下の順で試薬溶液に完全に溶解させた：第
１に２２．９ｇのＴＥＳ遊離酸；第２に４．７２ｇのＥ
ＤＴＡ遊離酸；第３に０．０６８１ｇのイミダゾール；
第４に０．００５０ｇのトリメトプリム。最終的に、１
．０ｇのＴｗｅｅｎ２０および０．７５ｇのＦｏａｍａ
ｓｔｅｒ ＦＬＤを加え、ＨＣＩにてｐＨを７．５に
調節し、体積を１リツトルとした。試薬２の成分の最終
的濃度は１３％ テトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ド１００ｍＭ ＴＥＳ （遊離酸） １６ｍＭ ＥＧＴＡ （遊離酸） １．０ｍＭ イミダゾール ５０ｇｇ／ｍｌ スルファメトキサゾール５μｇ／ｍ
ｌ ）リメトプリム ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ ＦＯａｍａＳｔｅｒ ＦＬＤである。 ［００２７］ 何Ａ ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡでのマグネシウム ＝該アッセ
イは、３７℃にて行ない、第１のサイクルにおいては１
８０μｌの試薬１を４．５μｌの試料と混合した。吸光
度を５５０ｎｍにて測定した。６０ｍ１の試薬２を第２
のサイクルにおいて添加し、３分間後（サイクル８）に
第２の吸光度測定を５５０ｎｍにて行なった。２回の吸
光度変化は、試料中のマグネシウム濃度に比例する。標
準および対照を試料と組合せて走らせ、試料中のマグネ
シウム濃度を、常法に従って標準曲線から計算した。 ［００２８］ 以下の表は、本発明の方法によりマグネシウムを測定し
た場合の吸光度変化を例示するものである。 ０．４９ｍｍｏｌ／Ｉ Ｍｇ” ０．８５ １．０７ １．３２ １．７０７９ １、６５００ １、６３８６ １、６０９８ １．７７３７ １．７５２４ １．７６４５ １、７６０４ ０、０６５Ｂ ０、１０２４ ０、 Ｉ２５９ ０、１５０８ Δ（サイクル８− ０．４９ｍｍｏｌ／ ｌ Ｍ ｇ １．７０７９
１．１１３７ ０．０６５８十＋ ０．８５ １．６５００ １．７
５２４ ０．１０２４１．０７
１．６３８６ １．７６４５ ０．１
２５９１．３２ １．６０９６
１．７６０４ ０．１５０８１．５２
１．５７７２ １．７４８３
０．１７１１［００２９］ 伝え Ｃ０ＢＡＳ ＦＡＲＡでのマグネシウム測“該アッセ
イは、３７℃にて行ない、１８０ｍ１の試薬１を２μｍ
の試料と混合し、１２０秒間熟成し、吸光度を６７５ｎ
ｍにて測定した。６０μｌの試薬２を加え、１００秒後
に第２の吸光度測定を６７５ｎｍにて行なった。２回の
測定の間の吸光度変化は、試料中のマグネシウム濃度に
比例する。標準および対照を試料と組合せて走らせ、試
料中のマグネシウム濃度を、常法に従って標準曲線から
計算した。 ［００３０］ 以下の表は、本発明の方法によりマグネシウムを測定し
た場合の吸光度変化を例示するものである。
【表２】
Ａ６□６
Ａ、７゜
ΔＡ （１２０秒−
０，４２ｍｍｏｌ／ｌ Ｍｇ”
０．８８
１．３２
１．７３
２．１１
１、５３１０
１、６６９８
１．８０３９
１．９１１８
２、０３９９
１、２４７７
１、２６２２
１．２７８７
１、２７６０
１、２８５９
０、２８３３
０、４０７６
０、５２５２
０、６３５８
０、７５４０
八６□５Ａ６□５ΔＡ（１２０秒−
試一一料 ユ其岨秒１１η岨秩［−一η岨秒Ｙ
十十 ０、４２ｍｍｏｌ／ ｌ Ｍ ｇ １．５３１
０ １．２４１１ ０．２８３３０．８８
１．６６９８ １．２６
２２ ０．４０７６１．３２
１．８０３９ １．２７８７ ０
．５２５２１．７３ １．９１１
８ １．２７６０ ０．６３５８２．１
１ ２．０３９９ １．２
８５９ ０．７５４０［００３１］ 伝李 ′−′−との目ＩＩ只 ９４人の無作為に選んだ患者からの血清試料を、Ｓｉｇ
ｍａ Ｃａｌｍａｇｉｔｅマグネシウム法（試験キッ
トカタログ番号５９５−ｍ）に加え、例２の方法に従っ
てＣ０ＢＡＳ ＭＩＲＡにてアッセイを行なった。２
４０μｌの試薬（等量の試薬１および２を合わせて調製
した）を、キュベツト中にピペットで取り、吸光度を５
５０ｎｍにて測定した。次いで２．４μｌの試料を加え
、１分間後に第２の吸光度測定を５５０ｎｍにて行なっ
た。２回の測定における吸光度変化は、試料中のマグネ
シウム濃度と相関関係があった。例２の方法に従ってア
ッセイされた試料は、Ｓｉｇｍａ Ｃａｌｍａｇｉｔ
ｅ法に従ってアッセイされた同じ試料と相関関係を有し
ていた。線形回帰線は、Ｙを本発明のアッセイ方法によ
り得た試料の値、Ｘを先行技術のＣａｌｍａｇｉｔｅ法
により得た試料の値とした場合９５４４である。 ［００３２］ 伝Σ Ｃ０ＢＡＳ ＦＡＲＡでのカルシウムおよびマグネシ
ウムの測“このアッセイは、３７℃にて行ない、１８０
μｍの試薬３を２μｍの試料と混合し、吸光度を６７５
ｎｍにて測定した。３０μｍの試薬５を加え、吸光度を
６７５ｎｍにて測定した。カルシウム濃度を（１）およ
び（２）の測定間の吸光度変化から計算し、またマグネ
シウム濃度を（２）および（３）の測定間の吸光度差か
ら計算した。 ［００３３］ 試薬３１リツトル ニア５ｍｌのテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのスルファメトキ
サゾールを約７５０ｍ１の脱イオン水に溶解させた。最
終成分を試薬中に完全に溶解させた：３３．３ｇのＴＥ
Ｓ遊離酸；０．０６８１ｇのイミダゾール：０．００５
０ｇのトリメトプリム；および０．１５１５ｇのＣＰＺ
３゜最終的に、１．０ｇのＴｗｅｅｎ２０および０．７
５ｇのＦ。 ａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤを加えた。ｐＨをＨＣＩを用
いて７．５．Ｑ：調節し、体積を１リツトルにした。試
薬３の成分の濃度は２３％ テトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド５０μｇ／ｍｌ スルファメトキサゾー
ル１４５ｍＭ ＴＥＳ遊離酸 １．０ｍＭ イミダゾール ５μｇ／ｍｌ トリメトプリム ０．２０ｍＭ クロロホスフォナシｌｌｌ０．１％
Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤである。 ［００３４］ 試薬ｔ：試薬４を、以下の成分濃度をもって試薬２と同
様な方法で調製した２３％ テトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド５μｇ／ｍｌ ）リメトプリム ５０μｇ／ｍｌ スルファメトキサゾール１００ｍＭ
ＴＥＳ遊離酸 １．０ｍＭ イミダゾール ６０ｍＭ ＥＧＴＡ遊離酸 ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ ｐ
Ｈ７，５［００３５］ 試薬旦：試薬５を、以下の成分濃度をもって試薬２と同
様な方法で調製した：３％ テトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド５μｇ／ｍｌ ）リメトプリム ５０μｇ／ｍｌ スルファメトキサゾール１００ｍＭ
ＴＥＳ遊離酸 １．０ｍＭ イミダゾール ３２ｍＭ ＥＤＴＡ遊離酸 ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ ｐ
Ｈ７，５［００３６］ 伍ヱ カルシウムの妨宝 アッセイを例２および３に記述したのと同様にして行な
った。単一の血清試料を複数の試料に分別し、下記のよ
うに各分別量に対して異なった量のカルシウムを加えた
。試薬１中のＥＧＴＡは、カルシウムにキレート化する
作用をし、かくしてマグネシウムアッセイにおける妨害
を最少にする。 ［００３７］ 下記の表は、カルシウムによる最少の妨害を例示してい
る。 Ｏｍｇ／ｄ ＋ ５ｍｇ／ｄ ＋１０ｍｇ／ｄ ＋１５ｍｇ／ｄ ＋２０ｍｇ／ｄ （皿ｏ１／１） ０．７５ ０．７４ ０．７６ ０．７８ ０．７８ （ｍｍｏｌ／ ｌ ） ０．７７ ０．７７ ０．７８ ０．８０ ０．８０ 試料に加えた 例２で測定した 例３で測定した 例８ ０ｍｇ／ｄｉ ＋ ５ｍｇ／ｄｉ ＋１０ｍｇ／ｄｉ ＋１５ｍｇ／ｄｉ 十２０ｍｇ／ｄｌ 十３０ｍｇ／ｄｉ ［００３８］ （ｍｍｏｌ／ １ ） ０．７５ ０．７４ ０．７６ ０．７８ ０．７８ ０．７９ （ｍｍｏｌ／ｌ） ０．７７ ０．７７ ０．７８ ０．８０ ０．８０ ０．７８ ５５℃にて３ケ月間保存した後も、試薬１および２の性
能に変化は無かった。 下記の表は、強制された試薬（５５℃にて３ケ月保存さ
れた）の性能を新鮮な試
十十 ０、４２ｍｍｏｌ／ ｌ Ｍ ｇ １．５３１
０ １．２４１１ ０．２８３３０．８８
１．６６９８ １．２６
２２ ０．４０７６１．３２
１．８０３９ １．２７８７ ０
．５２５２１．７３ １．９１１
８ １．２７６０ ０．６３５８２．１
１ ２．０３９９ １．２
８５９ ０．７５４０［００３１］ 伝李 ′−′−との目ＩＩ只 ９４人の無作為に選んだ患者からの血清試料を、Ｓｉｇ
ｍａ Ｃａｌｍａｇｉｔｅマグネシウム法（試験キッ
トカタログ番号５９５−ｍ）に加え、例２の方法に従っ
てＣ０ＢＡＳ ＭＩＲＡにてアッセイを行なった。２
４０μｌの試薬（等量の試薬１および２を合わせて調製
した）を、キュベツト中にピペットで取り、吸光度を５
５０ｎｍにて測定した。次いで２．４μｌの試料を加え
、１分間後に第２の吸光度測定を５５０ｎｍにて行なっ
た。２回の測定における吸光度変化は、試料中のマグネ
シウム濃度と相関関係があった。例２の方法に従ってア
ッセイされた試料は、Ｓｉｇｍａ Ｃａｌｍａｇｉｔ
ｅ法に従ってアッセイされた同じ試料と相関関係を有し
ていた。線形回帰線は、Ｙを本発明のアッセイ方法によ
り得た試料の値、Ｘを先行技術のＣａｌｍａｇｉｔｅ法
により得た試料の値とした場合９５４４である。 ［００３２］ 伝Σ Ｃ０ＢＡＳ ＦＡＲＡでのカルシウムおよびマグネシ
ウムの測“このアッセイは、３７℃にて行ない、１８０
μｍの試薬３を２μｍの試料と混合し、吸光度を６７５
ｎｍにて測定した。３０μｍの試薬５を加え、吸光度を
６７５ｎｍにて測定した。カルシウム濃度を（１）およ
び（２）の測定間の吸光度変化から計算し、またマグネ
シウム濃度を（２）および（３）の測定間の吸光度差か
ら計算した。 ［００３３］ 試薬３１リツトル ニア５ｍｌのテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシドおよび０．０５０ｇのスルファメトキ
サゾールを約７５０ｍ１の脱イオン水に溶解させた。最
終成分を試薬中に完全に溶解させた：３３．３ｇのＴＥ
Ｓ遊離酸；０．０６８１ｇのイミダゾール：０．００５
０ｇのトリメトプリム；および０．１５１５ｇのＣＰＺ
３゜最終的に、１．０ｇのＴｗｅｅｎ２０および０．７
５ｇのＦ。 ａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤを加えた。ｐＨをＨＣＩを用
いて７．５．Ｑ：調節し、体積を１リツトルにした。試
薬３の成分の濃度は２３％ テトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド５０μｇ／ｍｌ スルファメトキサゾー
ル１４５ｍＭ ＴＥＳ遊離酸 １．０ｍＭ イミダゾール ５μｇ／ｍｌ トリメトプリム ０．２０ｍＭ クロロホスフォナシｌｌｌ０．１％
Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤである。 ［００３４］ 試薬ｔ：試薬４を、以下の成分濃度をもって試薬２と同
様な方法で調製した２３％ テトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド５μｇ／ｍｌ ）リメトプリム ５０μｇ／ｍｌ スルファメトキサゾール１００ｍＭ
ＴＥＳ遊離酸 １．０ｍＭ イミダゾール ６０ｍＭ ＥＧＴＡ遊離酸 ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ ｐ
Ｈ７，５［００３５］ 試薬旦：試薬５を、以下の成分濃度をもって試薬２と同
様な方法で調製した：３％ テトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド５μｇ／ｍｌ ）リメトプリム ５０μｇ／ｍｌ スルファメトキサゾール１００ｍＭ
ＴＥＳ遊離酸 １．０ｍＭ イミダゾール ３２ｍＭ ＥＤＴＡ遊離酸 ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０７５％ Ｆｏａｍａｓｔｅｒ ＦＬＤ ｐ
Ｈ７，５［００３６］ 伍ヱ カルシウムの妨宝 アッセイを例２および３に記述したのと同様にして行な
った。単一の血清試料を複数の試料に分別し、下記のよ
うに各分別量に対して異なった量のカルシウムを加えた
。試薬１中のＥＧＴＡは、カルシウムにキレート化する
作用をし、かくしてマグネシウムアッセイにおける妨害
を最少にする。 ［００３７］ 下記の表は、カルシウムによる最少の妨害を例示してい
る。 Ｏｍｇ／ｄ ＋ ５ｍｇ／ｄ ＋１０ｍｇ／ｄ ＋１５ｍｇ／ｄ ＋２０ｍｇ／ｄ （皿ｏ１／１） ０．７５ ０．７４ ０．７６ ０．７８ ０．７８ （ｍｍｏｌ／ ｌ ） ０．７７ ０．７７ ０．７８ ０．８０ ０．８０ 試料に加えた 例２で測定した 例３で測定した 例８ ０ｍｇ／ｄｉ ＋ ５ｍｇ／ｄｉ ＋１０ｍｇ／ｄｉ ＋１５ｍｇ／ｄｉ 十２０ｍｇ／ｄｌ 十３０ｍｇ／ｄｉ ［００３８］ （ｍｍｏｌ／ １ ） ０．７５ ０．７４ ０．７６ ０．７８ ０．７８ ０．７９ （ｍｍｏｌ／ｌ） ０．７７ ０．７７ ０．７８ ０．８０ ０．８０ ０．７８ ５５℃にて３ケ月間保存した後も、試薬１および２の性
能に変化は無かった。 下記の表は、強制された試薬（５５℃にて３ケ月保存さ
れた）の性能を新鮮な試
【表４】
０．４８
１．３９
０．４７
１．３８
０．４８ ０．４７１．３９
１．３８２．２５
２．２１［００３９］ 原子吸光分光測定法（ＡＡ）は、マグネシウム測定に使
用される周知の方法である。８４人の患者の血清試料を
、Ｔｉｅｔｚｃ７）Ｃ１ｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ （１９８６）に従ってＲｏｃｈｅ Ｂｉｏ
ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｓ。 Ｒａｒ ｉ ｔ ａｎ、ＮＪ、により、ＡＡを用いてカ
ルシウムについて分析した。同じ試料を、前述の例２お
よび３の方法に従ってカルシウムについて分析した。結
果は、以下のとおりである。 例２ ＭＩＲＡ（ｙ）対ＡＡ （ｘ） ｙ＝１．
０６ｘ −，０７０，９４０５例３ ＦＡＲＡ（ｙ）
対ＡＡ （ｘ） ｙ＝１．０４ｘ −，０２０，９
４９６例２ ＭＩＲＡ（ｙ）対ＡＡ （ｘ） ｙ
＝１．０６ｘ −，０７例３ ＦＡＲＡ（Ｖ）対ＡＡ
（ｘ） ｙ＝１．０４ｘ −，０２［００４０］ 上記に証明されるように、ＡＡと本発明の方法との間の
相関は、および０．９４９６である。 ０、９４０５ ０、９４９６ Ｏ６ ［００４１３ 試薬２は、アッセイに対して試料ブランクを与えるもの
であるが、該アッセイは、試薬ｚ無しでもなお行ない得
る。 ［００４２］ ＭＩＲＡでのアッセイ １００−６００μｍ ２−９５
μｍ１８０μｍの試薬１を４．５μｍの試料と混合し、
吸光度を５５０ｎｍにて測定した。この吸光度を水ブラ
ンクから差引き、該吸光度差が試料マグネシウム濃度に
比例した。 ブランク ０．４９ ｍｍｏｌ／１ ０．８５ １．０７ １．３２ １．５２ １．７７６８ Ｍｇ １．７０７９ １．６５００ １．６３８６ １、６０９６ １．５７７２ 、０６８９ ０、１２６８ ０、１３８２ ０、１６７２ ブランク ０．４９ ｍｍｏｌ／ｌ Ｍｇ ０．８５ １．０７ １．３２ １．５２ ［００４３］ ＦＡＲＡでのアッセイ １０−３７０μｍ １、１１６８ １、 ’１０１９ １、６５００ １、６３８６ １、６０９６ １、５７’１２ 、０６８９ ０、１２６８ ０、１３８２ ０、１６７２ ０、１９９６ １−９５μｍ １８０μｍの試薬１を２μｌの試料と混合し、吸光度を
６７５ｎｍにて測定した。水ブランクから得た吸光度を
試料の吸光度から差引き、この吸光度変化が試料マグネ
シウム濃度に比例した。
１．３８２．２５
２．２１［００３９］ 原子吸光分光測定法（ＡＡ）は、マグネシウム測定に使
用される周知の方法である。８４人の患者の血清試料を
、Ｔｉｅｔｚｃ７）Ｃ１ｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ （１９８６）に従ってＲｏｃｈｅ Ｂｉｏ
ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｓ。 Ｒａｒ ｉ ｔ ａｎ、ＮＪ、により、ＡＡを用いてカ
ルシウムについて分析した。同じ試料を、前述の例２お
よび３の方法に従ってカルシウムについて分析した。結
果は、以下のとおりである。 例２ ＭＩＲＡ（ｙ）対ＡＡ （ｘ） ｙ＝１．
０６ｘ −，０７０，９４０５例３ ＦＡＲＡ（ｙ）
対ＡＡ （ｘ） ｙ＝１．０４ｘ −，０２０，９
４９６例２ ＭＩＲＡ（ｙ）対ＡＡ （ｘ） ｙ
＝１．０６ｘ −，０７例３ ＦＡＲＡ（Ｖ）対ＡＡ
（ｘ） ｙ＝１．０４ｘ −，０２［００４０］ 上記に証明されるように、ＡＡと本発明の方法との間の
相関は、および０．９４９６である。 ０、９４０５ ０、９４９６ Ｏ６ ［００４１３ 試薬２は、アッセイに対して試料ブランクを与えるもの
であるが、該アッセイは、試薬ｚ無しでもなお行ない得
る。 ［００４２］ ＭＩＲＡでのアッセイ １００−６００μｍ ２−９５
μｍ１８０μｍの試薬１を４．５μｍの試料と混合し、
吸光度を５５０ｎｍにて測定した。この吸光度を水ブラ
ンクから差引き、該吸光度差が試料マグネシウム濃度に
比例した。 ブランク ０．４９ ｍｍｏｌ／１ ０．８５ １．０７ １．３２ １．５２ １．７７６８ Ｍｇ １．７０７９ １．６５００ １．６３８６ １、６０９６ １．５７７２ 、０６８９ ０、１２６８ ０、１３８２ ０、１６７２ ブランク ０．４９ ｍｍｏｌ／ｌ Ｍｇ ０．８５ １．０７ １．３２ １．５２ ［００４３］ ＦＡＲＡでのアッセイ １０−３７０μｍ １、１１６８ １、 ’１０１９ １、６５００ １、６３８６ １、６０９６ １、５７’１２ 、０６８９ ０、１２６８ ０、１３８２ ０、１６７２ ０、１９９６ １−９５μｍ １８０μｍの試薬１を２μｌの試料と混合し、吸光度を
６７５ｎｍにて測定した。水ブランクから得た吸光度を
試料の吸光度から差引き、この吸光度変化が試料マグネ
シウム濃度に比例した。
【表７】
ブランク
０．４２ ｍｍｏｌ／ｌ Ｍｇ”
０．８８
１．３２
１．７３
２．１１
１、３７６２
１．５３１０
１、６６９８
１、８０３９
１、９１１８
２、０３９９
０、１５４８
０、２９３６
０、４２７７
０、５３５６
０、６６３７
ブランク １．３７６２十＋
０．４２ ｍｍｏｌ／ｌ Ｍｇ １．５３１０
０．１５４８０、８８
１．６６９８ ０
．２９３６１、３２ １．８
０３９ ０．４２１１１、７３
１．９１１８
０．５３５６２、１１
２．０３９９ ０．６６３７
［００４４］ 本発明の好ましい実施態様は、更に以下のとおりに例示
される。 （１） 試薬１としての、１〜５％のテトラブチルア
ンモニウムヒドロキシド、５０〜３００ｍＭのＴＥＳ、
０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、０．１〜１０ｍＭ
のＥＧＴＡ、０．１〜１％のポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルフ
ァメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリ
Ａ、 ０．０５〜０．３０ｍＭのＣＰＺ３、および０．
０１〜１．０％のシリコン基材消泡剤を含む組成物。 （２） 試薬１としての、約３％のテトラブチルアン
モニウムヒドロキシド、５０μｇ７ｍｌのスルファメト
キサゾール、１４５ｍＭのＴＥＳ、１０ｍＭのＥＧＴＡ
、１．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／ｍｌのトリ
メトプリム、０．２００ｍＭのＣＰＺ３、および０．０
７５％のシリコン基材消泡剤を含む（１）に記載の組成
物。 ［００４５］ （３） 試薬２としての、約１〜５％のテトラブチル
アンモニウムヒドロキシド５０〜３００ｍＭのＴＥＳ、
１０〜２５ｍＭのＥＤＴＡ、０．１〜２．０ｍＭのイミ
ダゾール、１０〜１００μｇ／ｍ１のスル７７メトキサ
ゾール、１〜１０．ｚｇ／ｍｌのトリメトプリム、０．
１〜１％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレー
ト、および０．０１〜１．０％のシリコン基材消泡剤を
含む組成物。 （４）試薬２としての、約３％のテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシド、５０μｇ／ｍｌのスル７７メトキサ
ゾール、１００ｍＭのＴＥＳ、１６ｍＭのＥＤＴＡ、１
．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポリオキシエチレ
ンソルビタンモノラウレート、５μｇ／ｍｌのトリメト
プリム、および０．０７５％のシリコン基材消泡剤を含
む（３）に記載の組成物。 ［００４６］ （５） ０．０１〜１．０ｍＭのＣＰＺ３を含む試薬
３としての組成物。 （６） １０〜６００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５０
０ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０％のポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート、１〜４０％のテト
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ
／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌ
のトリメトプリム、および０．０１〜１０％のシリコン
基材消泡剤を含む試薬３としての（５）に記載の組成物
。 の ０．０５〜０．３ｍＭのＣＰＺ３．１〜５％のテ
トラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００ｍ
ＭのＴＥＳ、０．１〜２．０ＴＥＳイミダゾール、１０
〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１
０μｇ／ｍｌのトリメトプリム、０．１〜１％のポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート、および０．０
１〜１％のシリコン基材消泡剤を含む（６）に記載の組
成物。 （８）約３％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド
、５０μｇ／ｍｌのスル７７メトキサゾール、１４５ｍ
ＭのＴＥＳ、１．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポ
リオキシエチレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／
ｍｌのトリメトプリム、０．２００ｍＭのＣＰＺ３、お
よび０．０７５％のシリコン基材消泡剤を含む前記試薬
３としての組成物。 ［００４７］ （９） 分析試料が、血清、血漿、または尿であるマ
グネシウムの分析方法。 （１０）吸光度を５５０ｎｍまたは６７５ｎｍにて測定
する（９）に記載の方法。 （１１） １００〜２７０μｇｌの試薬１を第１のサ
イクルにおいて２〜９５μｍの試料と混合し、吸光度を
５５０ｎｍにて測定し、次いで３０〜９０μｍの試薬２
を添加し、０．５〜３分間後に第２の吸光度を５５０ｎ
ｍにて測定し、これにより吸光度差が試料中のマグネシ
ウム濃度に比例する１０に記載の方法。 （１２） １８０１ｉｌの試薬１を４．５μｍの試料
と混合し、吸光度を５５０ｎｍにて測定し、次いで６０
μｍの試薬２を添加し、３分間後に吸光度を５５０ｎｍ
にて測定し、これにより吸光度差が試料中のマグネシウ
ム濃度に比例する（１１）に記載の方法。 ［００４８］ （１３）工程： ａ）試料を試薬３と混合し、 ｂ）該試料の吸光度を測定し、 Ｃ）試薬４を添加し、 ｄ）該試料の吸光度を測定し、 ｅ）試薬５を添加し、 ｆ）該試料の吸光度を測定する ことを含んでなり、これにより（ｄ）および（ｂ）の間
の吸光度差が試料中のカルシウム量に比例し、かつげ）
および（ｄ）の間の吸光度差が試料中のマグネシウム量
に比例する、分析試料中のカルシウムおよびマグネシウ
ムの測定方法。 （１４）分析試料が、血清、血漿、または尿である（１
３）に記載の方法。 （１５）吸光度を５５０ｎｍまたは６７５ｎｍにて測定
する（１４）に記載の方法。 （１６） ３０〜２２５μｌの試薬３を２〜９５μｌの
試料と混合し、６７５ｎｍにて吸光度を測定し、次いで
５〜４０μｌの試薬４を添加し、６７５ｎｍにて吸光度
を測定し、次いで５〜４０μｌの試薬５を添加し、６７
５ｎｍにて吸光度を測定する（１５）に記載の方法。 （１７）約１８０μｍの試薬３を２μｍの試料と混合し
、６７５ｎｍにて吸光度を測定し、次いで３０μｍの試
薬４を添加し、６７５ｎｍにて吸光度を測定し、次いで
３０μｌの試薬５を添加し、６７５ｎｍにて吸光度を測
定する（１６）に記載の方法［００４９］
０．１５４８０、８８
１．６６９８ ０
．２９３６１、３２ １．８
０３９ ０．４２１１１、７３
１．９１１８
０．５３５６２、１１
２．０３９９ ０．６６３７
［００４４］ 本発明の好ましい実施態様は、更に以下のとおりに例示
される。 （１） 試薬１としての、１〜５％のテトラブチルア
ンモニウムヒドロキシド、５０〜３００ｍＭのＴＥＳ、
０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、０．１〜１０ｍＭ
のＥＧＴＡ、０．１〜１％のポリオキシエチレンソルビ
タンモノラウレート、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルフ
ァメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリ
Ａ、 ０．０５〜０．３０ｍＭのＣＰＺ３、および０．
０１〜１．０％のシリコン基材消泡剤を含む組成物。 （２） 試薬１としての、約３％のテトラブチルアン
モニウムヒドロキシド、５０μｇ７ｍｌのスルファメト
キサゾール、１４５ｍＭのＴＥＳ、１０ｍＭのＥＧＴＡ
、１．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポリオキシエ
チレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／ｍｌのトリ
メトプリム、０．２００ｍＭのＣＰＺ３、および０．０
７５％のシリコン基材消泡剤を含む（１）に記載の組成
物。 ［００４５］ （３） 試薬２としての、約１〜５％のテトラブチル
アンモニウムヒドロキシド５０〜３００ｍＭのＴＥＳ、
１０〜２５ｍＭのＥＤＴＡ、０．１〜２．０ｍＭのイミ
ダゾール、１０〜１００μｇ／ｍ１のスル７７メトキサ
ゾール、１〜１０．ｚｇ／ｍｌのトリメトプリム、０．
１〜１％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレー
ト、および０．０１〜１．０％のシリコン基材消泡剤を
含む組成物。 （４）試薬２としての、約３％のテトラブチルアンモニ
ウムヒドロキシド、５０μｇ／ｍｌのスル７７メトキサ
ゾール、１００ｍＭのＴＥＳ、１６ｍＭのＥＤＴＡ、１
．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポリオキシエチレ
ンソルビタンモノラウレート、５μｇ／ｍｌのトリメト
プリム、および０．０７５％のシリコン基材消泡剤を含
む（３）に記載の組成物。 ［００４６］ （５） ０．０１〜１．０ｍＭのＣＰＺ３を含む試薬
３としての組成物。 （６） １０〜６００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５０
０ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０％のポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート、１〜４０％のテト
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ
／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌ
のトリメトプリム、および０．０１〜１０％のシリコン
基材消泡剤を含む試薬３としての（５）に記載の組成物
。 の ０．０５〜０．３ｍＭのＣＰＺ３．１〜５％のテ
トラブチルアンモニウムヒドロキシド、５０〜３００ｍ
ＭのＴＥＳ、０．１〜２．０ＴＥＳイミダゾール、１０
〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１
０μｇ／ｍｌのトリメトプリム、０．１〜１％のポリオ
キシエチレンソルビタンモノラウレート、および０．０
１〜１％のシリコン基材消泡剤を含む（６）に記載の組
成物。 （８）約３％のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド
、５０μｇ／ｍｌのスル７７メトキサゾール、１４５ｍ
ＭのＴＥＳ、１．０ｍＭのイミダゾール、０．１％のポ
リオキシエチレンソルビタンモノラウレート、５μｇ／
ｍｌのトリメトプリム、０．２００ｍＭのＣＰＺ３、お
よび０．０７５％のシリコン基材消泡剤を含む前記試薬
３としての組成物。 ［００４７］ （９） 分析試料が、血清、血漿、または尿であるマ
グネシウムの分析方法。 （１０）吸光度を５５０ｎｍまたは６７５ｎｍにて測定
する（９）に記載の方法。 （１１） １００〜２７０μｇｌの試薬１を第１のサ
イクルにおいて２〜９５μｍの試料と混合し、吸光度を
５５０ｎｍにて測定し、次いで３０〜９０μｍの試薬２
を添加し、０．５〜３分間後に第２の吸光度を５５０ｎ
ｍにて測定し、これにより吸光度差が試料中のマグネシ
ウム濃度に比例する１０に記載の方法。 （１２） １８０１ｉｌの試薬１を４．５μｍの試料
と混合し、吸光度を５５０ｎｍにて測定し、次いで６０
μｍの試薬２を添加し、３分間後に吸光度を５５０ｎｍ
にて測定し、これにより吸光度差が試料中のマグネシウ
ム濃度に比例する（１１）に記載の方法。 ［００４８］ （１３）工程： ａ）試料を試薬３と混合し、 ｂ）該試料の吸光度を測定し、 Ｃ）試薬４を添加し、 ｄ）該試料の吸光度を測定し、 ｅ）試薬５を添加し、 ｆ）該試料の吸光度を測定する ことを含んでなり、これにより（ｄ）および（ｂ）の間
の吸光度差が試料中のカルシウム量に比例し、かつげ）
および（ｄ）の間の吸光度差が試料中のマグネシウム量
に比例する、分析試料中のカルシウムおよびマグネシウ
ムの測定方法。 （１４）分析試料が、血清、血漿、または尿である（１
３）に記載の方法。 （１５）吸光度を５５０ｎｍまたは６７５ｎｍにて測定
する（１４）に記載の方法。 （１６） ３０〜２２５μｌの試薬３を２〜９５μｌの
試料と混合し、６７５ｎｍにて吸光度を測定し、次いで
５〜４０μｌの試薬４を添加し、６７５ｎｍにて吸光度
を測定し、次いで５〜４０μｌの試薬５を添加し、６７
５ｎｍにて吸光度を測定する（１５）に記載の方法。 （１７）約１８０μｍの試薬３を２μｍの試料と混合し
、６７５ｎｍにて吸光度を測定し、次いで３０μｍの試
薬４を添加し、６７５ｎｍにて吸光度を測定し、次いで
３０μｌの試薬５を添加し、６７５ｎｍにて吸光度を測
定する（１６）に記載の方法［００４９］
【図１】
図１は、本発明の方法によるマグネシウムの測定におけ
る種々の点での試料の吸光度曲線を示すグラフである。
る種々の点での試料の吸光度曲線を示すグラフである。
【図１】
図面
【出願番号】
【手続補正 １】
＊＊＊
手続補正書
平成３年７月１７日
Claims (21)
- 【請求項１】ＣＰＺ３、およびＥＧＴＡまたはＢＡＰＴ
Ａからなる群から選択されるキレート剤を含有してなる
、分析試料中のマグネシウムの測定に有用な試薬組成物
（“試薬１”）。 - 【請求項２】該キレート剤がＥＧＴＡである請求項１に
記載の組成物。 - 【請求項３】該試薬１が、約０．０１から１．０ｍＭの
ＣＰＺ３および０．１〜１００ｍＭのＥＧＴＡを含む請
求項２に記載の組成物。 - 【請求項４】１種以上の緩衝剤、洗浄剤、抗微生物剤ま
たは抗発泡剤を更に含有する請求項３に記載の組成物。 - 【請求項５】該緩衝剤がテトラブチルアンモニウムヒド
ロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳであり；該抗微
生物剤がスルファメトキサゾールおよびトリメトプリム
であり；該洗浄剤がポリオキシエチレンソルビタンモノ
ラウレートであり；および該抗発泡剤がシリコン基材の
消泡剤である請求項４に記載の組成物。 - 【請求項６】１０〜６００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５０
０ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０％のポリオキシ
エチレンソルビタンモノラウレート、１〜４０％のテト
ラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μｇ
／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍｌ
のトリメトプリムおよび０．０１〜１０％のシリコン基
材消泡剤を含んでなる請求項５に記載の組成物。 - 【請求項７】ＥＤＴＡ、および１種以上の緩衝剤、洗浄
剤、抗微生物剤または抗発泡剤を含有してなる、分析試
料中のマグネシウムの測定に有用な試薬組成物（“試薬
２”）。 - 【請求項８】１〜５００ｍＭのＥＤＴＡを含む請求項７
に記載の組成物。 - 【請求項９】該緩衝剤がテトラブチルアンモニウムヒド
ロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳであり；該抗微
生物剤がスルファメトキサゾールおよびトリメトプリム
であり；該洗浄剤がポリオキシエチレンソルビタンモノ
ラウレートであり；および該抗発泡剤がシリコン基材消
泡剤である請求項８に記載の組成物。 - 【請求項１０】１０〜６００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜５
００ｍＭのイミダゾール、０．０１〜１０％のポリオキ
シエチレンソルビタンモノラウレート、１〜４０％のテ
トラブチルアンモニウムヒドロキシド、１０〜１００μ
ｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜１０μｇ／ｍ
ｌのトリメトプリムおよび０．０１〜１０％のシリコン
基材消泡剤を含んでなる請求項９に記載に組成物。 - 【請求項１１】ＣＰＺ３、および１種以上の緩衝剤、洗
浄剤、抗微生物剤または抗発泡剤を含有してなる、分析
試料中のカルシウムおよびマグネシウムの同時測定に有
用な試薬組成物（“試薬３”）。 - 【請求項１２】該緩衝剤がテトラブチルアンモニウムヒ
ドロキシド、イミダゾール、およびＴＥＳであり；該抗
微生物剤がスルファメトキサゾールおよびトリメトプリ
ムであり；該洗浄剤がポリオキシエチレンソルビタンモ
ノラウレートであり；および該抗発泡剤がシリコン基材
の消泡剤である請求項１１に記載の組成物。 - 【請求項１３】１〜５％のテトラブチルアンモニウムヒ
ドロキシド、５０〜３００ｍＭのＴＥＳ、０．１〜２．
０のイミダゾール、０．１〜１００ｍＭのＥＧＴＡ、０
．１〜１％のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレ
ート、１０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾー
ル、１〜１０μｇ／ｍｌのトリメトプリム、および０．
０１〜１．０％のシリコン基材消泡剤を含有する請求項
６に記載の組成物（“試薬４”）。 - 【請求項１４】該試薬４が約３％のテトラブチルアンモ
ニウムヒドロキシド、５μｇ／ｍｌのトリメトプリム、
５０μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１００ｍＭ
のＴＥＳ、１．０ｍＭのイミダゾール、６０ｍＭのＥＧ
ＴＡ、０．１％のＴｗｅｅｎ２０、０．０７５％のシリ
コン基材消泡剤および０．２３ｍＭのＣＰＺ３を含有す
る請求項１３に記載の組成物。 - 【請求項１５】１〜５％のテトラブチルアンモニウムヒ
ドロキシド、５０〜３００ｍＭのＴＥＳ、１０〜５０ｍ
ＭのＥＤＴＡ、０．１〜２．０ｍＭのイミダゾール、１
０〜１００μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１〜
１０μｇ／ｍｌのトリメトプリム、０．１〜１％のポリ
オキシエチレンソルビタンモノラウレートおよび０．０
７５％のシリコン基材消泡剤を含有してなる請求項１０
に記載の組成物（“試薬５”）。 - 【請求項１６】該試薬５が約３％のテトラブチルアンモ
ニウムヒドロキシド、５μｇ／ｍｌのトリメトプリム、
５０μｇ／ｍｌのスルファメトキサゾール、１００ｍＭ
のＴＥＳ、１．０ｍＭのイミダゾール、３２ｍＭのＥＤ
ＴＡ、０．１％のポリオキシエチレンソルビタンモノラ
ウレートおよび０．０７５％のシリコン基材消泡剤を含
有してなる請求項１５に記載の組成物。 - 【請求項１７】工程： ａ）試料を、ＣＰＺ３およびＥＧＴＡまたはＢＡＰＴＡ
からなる群から選択されるキレート剤を含んでなる試薬
（“試薬１”）と混合し、ｂ）該試薬の吸光度を測定し
、 ｃ）該反応混合物に第２のＥＤＴＡ含有試薬（“試薬２
”）を添加し、ｄ）該試料の吸光度を測定すること を含み、よって吸光度の差が該試料中のマグネシウムの
量に比例することを特徴とする分析試料中のマグネシウ
ムの測定方法。 - 【請求項１８】該キレート剤がＥＧＴＡである請求項１
７に記載の方法。 - 【請求項１９】 ａ）試薬１の容器、および ｂ）試薬２の容器 を含んでなる分析試料中のカルシウム測定に有用な診断
用試験キット。 - 【請求項２０】 ａ）試薬３の容器、 ｂ）試薬４の容器、および ｃ）試薬５の容器 を含んでなる分析試料中のカルシウムおよびマグネシウ
ムの測定に有用な診断用試験キット。 - 【請求項２１】工程： ａ）試料を、ＣＰＺ３およびＥＧＴＡまたはＢＡＰＴＡ
からなる群から選択されるキレート剤を含んでなる試薬
（“試薬１”）と混合し、ｂ）該試薬の吸光度を測定す
ること を含み、よって吸光度の差が該試料中のマグネシウムの
量に比例することを特徴とする分析試料中のマグネシウ
ムの測定方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US45138689A | 1989-12-15 | 1989-12-15 | |
| US451386 | 1989-12-15 |
Publications (2)
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|---|---|
| JPH04120464A true JPH04120464A (ja) | 1992-04-21 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| EP (1) | EP0432642B1 (ja) |
| JP (1) | JP2500233B2 (ja) |
| AU (1) | AU641453B2 (ja) |
| CA (1) | CA2032053C (ja) |
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| ES (1) | ES2118062T3 (ja) |
| NZ (1) | NZ236439A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002012867A1 (en) * | 2000-07-28 | 2002-02-14 | Japan Science And Technology Corporation | Fluorescent probe for magnesium ion determination |
| JP2007322336A (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Mitsubishi Kagaku Iatron Inc | カルシウム測定試薬及び測定方法 |
| JP2008058033A (ja) * | 2006-08-29 | 2008-03-13 | Kanto Chem Co Inc | カルシウム濃度測定試薬および測定方法 |
| JP2008537144A (ja) * | 2005-04-19 | 2008-09-11 | スペシャルティー アッセイズ，インコーポレーテッド | 分析試料中のカルシウム、マグネシウムおよびナトリウムの定量にホスホナゾｉｉｉを用いる方法 |
| US7544516B2 (en) | 2004-07-08 | 2009-06-09 | Nitto Boseki Co., Ltd. | Reagent for determination of calcium and determination method |
| WO2011120913A1 (en) | 2010-03-30 | 2011-10-06 | Roche Diagnostics Gmbh | Method for measurement of calcium ions |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997004308A1 (en) * | 1995-07-18 | 1997-02-06 | Waters Investments Limited | Buffer/additives electrolyte combinations for electrokinetic chromatography |
| US5914271A (en) * | 1996-04-19 | 1999-06-22 | Actimed Laboratories, Inc. | Fertility test |
| JP3331408B2 (ja) * | 1999-02-24 | 2002-10-07 | メタルサイエンス有限会社 | アルミ合金の溶湯中のマグネシウムの含有量を測定する法 |
| JP4168557B2 (ja) * | 1999-11-25 | 2008-10-22 | 三浦工業株式会社 | 硬度測定用指示薬および硬度測定方法 |
| US20020156725A1 (en) * | 2001-04-23 | 2002-10-24 | Harara Marwan Ahmed | Method and means for conducting cashless financial transactions |
| US6790666B2 (en) | 2001-12-28 | 2004-09-14 | Nalco Company | Method to ascertain whether soluble hardness is calcium or magnesium based |
| US7807473B2 (en) * | 2005-10-26 | 2010-10-05 | General Electric Company | Material compositions for sensors for determination of chemical species at trace concentrations and method of using sensors |
| US7883898B2 (en) * | 2007-05-07 | 2011-02-08 | General Electric Company | Method and apparatus for measuring pH of low alkalinity solutions |
| US20100173417A1 (en) * | 2009-01-04 | 2010-07-08 | Lennart Minthon | Diagnostic method |
| US8956875B2 (en) * | 2013-03-14 | 2015-02-17 | Ecolab USA, Inc. | Water hardness monitoring via fluorescence |
| CN104076027A (zh) * | 2013-03-25 | 2014-10-01 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 一种食品生产设备清洗效果评估方法 |
| US10317385B2 (en) | 2015-07-01 | 2019-06-11 | Ecolab Usa Inc. | Calibration method for water hardness measurement |
| CN108982385A (zh) * | 2018-04-18 | 2018-12-11 | 宁夏林业研究院股份有限公司 | 枸杞叶多糖内源性矿质元素吸收率测定方法 |
| WO2020148640A2 (en) | 2019-01-15 | 2020-07-23 | Precision Planting Llc | Soil analysis compositions and methods |
| CN111239120A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-06-05 | 绍兴市人民医院 | 一种血液钙离子检测试纸 |
| ES3038433T3 (en) * | 2020-07-15 | 2025-10-13 | Prec Planting Llc | Soil analysis method |
| CN113686799A (zh) * | 2021-09-14 | 2021-11-23 | 西安乐析医疗科技有限公司 | 一种同时测定平衡盐溶液中钾和钠含量的测定方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5248839A (en) * | 1975-10-14 | 1977-04-19 | Rockwell International Corp | Lifting check valve |
| JPS5429700A (en) * | 1977-08-08 | 1979-03-05 | Eastman Kodak Co | Element for liquid analysis |
| JPS5442386A (en) * | 1977-09-09 | 1979-04-04 | Unitika Ltd | Adsorbent having excellent selective adsorbability and it manufacture and adsorption method |
| JPS57141300A (en) * | 1980-10-08 | 1982-09-01 | Suroannketaaring Inst Fuoo Kiy | Diagnostic implement of excretion latent blood |
| JPS58153166A (ja) * | 1982-03-08 | 1983-09-12 | Fujihira Kogyo Kk | マグネシウム定量用発色試薬 |
| JPS62266460A (ja) * | 1986-05-14 | 1987-11-19 | Osaka Soda Co Ltd | 濃厚塩溶液中の微量カルシウム及びマグネシウムの自動分析法 |
| JPS6451100A (en) * | 1987-08-24 | 1989-02-27 | Unitika Ltd | Magnesium ion determining reagent |
| JPH01109247A (ja) * | 1987-09-22 | 1989-04-26 | Abbott Lab | カルシウムおよびリンの同時アッセイ法およびそれに用いる試薬システム |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3934977A (en) * | 1974-08-09 | 1976-01-27 | American Hospital Supply Corporation | Reagent and method for determining total calcium in body fluids |
| US4383043A (en) * | 1981-07-13 | 1983-05-10 | American Monitor Corporation | Magnesium assay with calmagite or eriochrome black T reagents |
| JPS5853758A (ja) * | 1981-09-28 | 1983-03-30 | Wako Pure Chem Ind Ltd | マグネシウム測定試薬 |
| US4454230A (en) * | 1982-07-12 | 1984-06-12 | American Monitor Corporation | Assay method and reagent composition for the determination of magnesium |
-
1990
- 1990-12-06 ES ES90123418T patent/ES2118062T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-06 EP EP90123418A patent/EP0432642B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-06 DE DE69032422T patent/DE69032422T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-12 NZ NZ236439A patent/NZ236439A/xx unknown
- 1990-12-12 CA CA002032053A patent/CA2032053C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-14 JP JP2402508A patent/JP2500233B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-14 AU AU68074/90A patent/AU641453B2/en not_active Ceased
-
1994
- 1994-07-28 US US08/281,808 patent/US5482866A/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5248839A (en) * | 1975-10-14 | 1977-04-19 | Rockwell International Corp | Lifting check valve |
| JPS5429700A (en) * | 1977-08-08 | 1979-03-05 | Eastman Kodak Co | Element for liquid analysis |
| JPS5442386A (en) * | 1977-09-09 | 1979-04-04 | Unitika Ltd | Adsorbent having excellent selective adsorbability and it manufacture and adsorption method |
| JPS57141300A (en) * | 1980-10-08 | 1982-09-01 | Suroannketaaring Inst Fuoo Kiy | Diagnostic implement of excretion latent blood |
| JPS58153166A (ja) * | 1982-03-08 | 1983-09-12 | Fujihira Kogyo Kk | マグネシウム定量用発色試薬 |
| JPS62266460A (ja) * | 1986-05-14 | 1987-11-19 | Osaka Soda Co Ltd | 濃厚塩溶液中の微量カルシウム及びマグネシウムの自動分析法 |
| JPS6451100A (en) * | 1987-08-24 | 1989-02-27 | Unitika Ltd | Magnesium ion determining reagent |
| JPH01109247A (ja) * | 1987-09-22 | 1989-04-26 | Abbott Lab | カルシウムおよびリンの同時アッセイ法およびそれに用いる試薬システム |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002012867A1 (en) * | 2000-07-28 | 2002-02-14 | Japan Science And Technology Corporation | Fluorescent probe for magnesium ion determination |
| US7109043B2 (en) | 2000-07-28 | 2006-09-19 | Japan Science And Technology Corporation | Fluorescent probe for magnesium ion determination |
| US7544516B2 (en) | 2004-07-08 | 2009-06-09 | Nitto Boseki Co., Ltd. | Reagent for determination of calcium and determination method |
| JP2008537144A (ja) * | 2005-04-19 | 2008-09-11 | スペシャルティー アッセイズ，インコーポレーテッド | 分析試料中のカルシウム、マグネシウムおよびナトリウムの定量にホスホナゾｉｉｉを用いる方法 |
| JP2007322336A (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Mitsubishi Kagaku Iatron Inc | カルシウム測定試薬及び測定方法 |
| JP2008058033A (ja) * | 2006-08-29 | 2008-03-13 | Kanto Chem Co Inc | カルシウム濃度測定試薬および測定方法 |
| WO2011120913A1 (en) | 2010-03-30 | 2011-10-06 | Roche Diagnostics Gmbh | Method for measurement of calcium ions |
| JP2013524187A (ja) * | 2010-03-30 | 2013-06-17 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | カルシウムイオンの測定のための方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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