JPH01112155A - 過酸化水素の定量方法及びその定量用試薬 - Google Patents
過酸化水素の定量方法及びその定量用試薬Info
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- JPH01112155A JPH01112155A JP62269987A JP26998787A JPH01112155A JP H01112155 A JPH01112155 A JP H01112155A JP 62269987 A JP62269987 A JP 62269987A JP 26998787 A JP26998787 A JP 26998787A JP H01112155 A JPH01112155 A JP H01112155A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、新規な過酸化水素定量方法及びこれに用いる
定量用試薬に関する。
定量用試薬に関する。
近年、生体成分、例えば血液、尿などの体液に含まれる
成分を測定することが、疾病の診断並びに治療効果及び
疾病の機序を知る上で非常に重要になっている。
成分を測定することが、疾病の診断並びに治療効果及び
疾病の機序を知る上で非常に重要になっている。
現在、種々の生体成分の測定法が開発され、採用されて
いる中で、過酸化水素の定量が広く一般に普及し、極め
て重要なものとなっている。これは、一般には被分析成
分に適当なオキシダーゼを作用させて目的の被分析成分
量に相当する量の過酸化水素を生成させ、ペルオキシダ
ーゼの存在下、過酸化水素分析用試薬にて発色させ、比
色定量することにより被分析成分量を求めるという方法
であり、例えば尿や血液中のコレステロール、中性脂肪
、グルコース、リン脂質、遊離脂肪酸、尿酸、無機リン
、ぎルピン酸、Ｌ−乳酸、アミノ酸等の量、あるいはコ
リンエステラーゼ、α−アミラーゼ、モノアミンオキシ
ダーゼ、トランスアミナーゼ等の酵素活性の定量に用い
られている。
いる中で、過酸化水素の定量が広く一般に普及し、極め
て重要なものとなっている。これは、一般には被分析成
分に適当なオキシダーゼを作用させて目的の被分析成分
量に相当する量の過酸化水素を生成させ、ペルオキシダ
ーゼの存在下、過酸化水素分析用試薬にて発色させ、比
色定量することにより被分析成分量を求めるという方法
であり、例えば尿や血液中のコレステロール、中性脂肪
、グルコース、リン脂質、遊離脂肪酸、尿酸、無機リン
、ぎルピン酸、Ｌ−乳酸、アミノ酸等の量、あるいはコ
リンエステラーゼ、α−アミラーゼ、モノアミンオキシ
ダーゼ、トランスアミナーゼ等の酵素活性の定量に用い
られている。
従来、過酸化水素の定量に用いられている色原体として
は、４−アミノ−アンチピリンとフェノール、アニリン
、トルイジン、アニシジンまたはこれらの誘導体との組
み合わせ〔バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ ） 、第６巻、２４−２７頁（１９６９年）等〕
が一般的である。しかしながらこれらの組み合わせによ
る酸化縮合生成物は、その極大吸収波長（λｍａｘ ）
が５００ ｎｍ付近と短かいため、ヘモグロビン、ビリ
ルビン等の共存する有色物質の影響を受けやすく、また
濁シの影響も大きい。更に、感度が低いため、微量成分
の分析に問題があった。
は、４−アミノ−アンチピリンとフェノール、アニリン
、トルイジン、アニシジンまたはこれらの誘導体との組
み合わせ〔バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ ） 、第６巻、２４−２７頁（１９６９年）等〕
が一般的である。しかしながらこれらの組み合わせによ
る酸化縮合生成物は、その極大吸収波長（λｍａｘ ）
が５００ ｎｍ付近と短かいため、ヘモグロビン、ビリ
ルビン等の共存する有色物質の影響を受けやすく、また
濁シの影響も大きい。更に、感度が低いため、微量成分
の分析に問題があった。
本発明者らは、かかる問題点を克服すべく種々検討を行
なった結果、２価コバルト化合物と３価コバルト指示薬
を組み合わせて用いることにより、６００ ｎｍ以上の
測定波長で、極めて高感度に過酸化水素を定量できるこ
とを見い出し、本発明を完成した。
なった結果、２価コバルト化合物と３価コバルト指示薬
を組み合わせて用いることにより、６００ ｎｍ以上の
測定波長で、極めて高感度に過酸化水素を定量できるこ
とを見い出し、本発明を完成した。
すなわち本発明は、２価コバルト化合物を、ペルオキシ
ダーゼまたはペルオキシダーゼ様物質（以下両者をまと
めてＰＯＤと総称する）の存在下に過酸化水素と反応さ
せ、生じる３価コバルトに３価コバルト指示薬を作用さ
せ、生成する有色性錯体を比色定量することを特徴とす
る過酸化水素の定量方法を提供するものである。
ダーゼまたはペルオキシダーゼ様物質（以下両者をまと
めてＰＯＤと総称する）の存在下に過酸化水素と反応さ
せ、生じる３価コバルトに３価コバルト指示薬を作用さ
せ、生成する有色性錯体を比色定量することを特徴とす
る過酸化水素の定量方法を提供するものである。
更に本発明は、上記定量方法に使用する定量用試薬、す
なわち２価コバルト化合物、ＰＯＤ及び３価コバルト指
示薬を含有することを特徴とする過酸化水素定量用試薬
を提供するものである。
なわち２価コバルト化合物、ＰＯＤ及び３価コバルト指
示薬を含有することを特徴とする過酸化水素定量用試薬
を提供するものである。
本発明の定量方法は、次の反応式によって示される。
すなわち、被検物質である過酸化水素と２価コバルト化
合物を、ＰＯＤの存在下に反応せしめ、生成した３価コ
バルトに３価コバルト指示薬を作用させ、生成する有色
性錯体の景を測定することによυ過酸化水素量を求める
ものである。
合物を、ＰＯＤの存在下に反応せしめ、生成した３価コ
バルトに３価コバルト指示薬を作用させ、生成する有色
性錯体の景を測定することによυ過酸化水素量を求める
ものである。
本発明に用いる２価コバルト化合物としては特に限定さ
れないが、具体的には塩化コバルト（■）、硫酸コバル
ト（■）、硝酸コバル） （Ｉｆ） 、ｉ酸：ｆｆ 、
ｚルト（ｎ）アンモニウム、酢酸コノ２ルト（Ｉｆ）、
ビス（アセチルアセトナト）コバルト（■）、エチレン
シアミンナトリウムコバルト（旧等その他これらと同様
の反応性を有するものが挙げられる。
れないが、具体的には塩化コバルト（■）、硫酸コバル
ト（■）、硝酸コバル） （Ｉｆ） 、ｉ酸：ｆｆ 、
ｚルト（ｎ）アンモニウム、酢酸コノ２ルト（Ｉｆ）、
ビス（アセチルアセトナト）コバルト（■）、エチレン
シアミンナトリウムコバルト（旧等その他これらと同様
の反応性を有するものが挙げられる。
また、本発明に使用する３価コバルト指示薬としては、
３価コバルトとの反応によって有色性錯体を生成する能
力を有するものであれば特に限定されず、代表的化合物
としては次式（Ｉ）で表わさｃ Ｘ れるペテロ項アゾアミノ安息香酸誘導体またはその塩が
挙げられる。
３価コバルトとの反応によって有色性錯体を生成する能
力を有するものであれば特に限定されず、代表的化合物
としては次式（Ｉ）で表わさｃ Ｘ れるペテロ項アゾアミノ安息香酸誘導体またはその塩が
挙げられる。
Ａ
（ＸおよびＹは同一または異なって、水素原子、ハロゲ
ン原子またはハロダン化アルキル基）を示し、Ｒ２およ
びＲ３は同一または異なって、水素原子、低級アルキル
基、スルホアルキル基またはω−スルホヒドロキシアル
キル基を示し、Ｒ４は水素原子または低級アルキル基を
示す〕 よシ具体的には、例えば次に示す化合物が挙げられる。
ン原子またはハロダン化アルキル基）を示し、Ｒ２およ
びＲ３は同一または異なって、水素原子、低級アルキル
基、スルホアルキル基またはω−スルホヒドロキシアル
キル基を示し、Ｒ４は水素原子または低級アルキル基を
示す〕 よシ具体的には、例えば次に示す化合物が挙げられる。
２−（２−チアゾリルアゾ）−４−メチル−５−スルホ
メチルアミノ安息香酸（ＴＡＭＳＭＢ ）２−（２−チ
アゾリルアゾ）−５−ジメチルアミノ安息香酸（ＴＡＭ
Ｂ） ２−（２−ベンゾチアゾリルアゾ）−５−ジメチルアミ
ノ安息香酸（ＢＴＡＭＢ） ｒ ２− Ｃ（３＋ ｓ ）−ジブロモ−２−ピリジルアゾ
〕−５−ジメチルアミノ安息香酸 （ＰＡＭＢ ） ２−（２−チアゾリルアゾ）−５−スルホメチルアミノ
安息香酸（ＴＡＳＭＢ） ｒ ２−（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−（
Ｎ−エチル−Ｎ−スルホゾロピルアミノ）安息香酸（Ｄ
ＳＡＢ） ｒ ２−（３，５−ゾプロモー２−ピリゾルアゾ）−５−（
Ｎ−スルホゾロピルアミノ）安息香酸 ｒ ２−（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−（
Ｎ−２−ヒドロキシ−３−スルホブロピルアミノ）安息
香酸 ２−（３，５−ジブロモ−２−ビリゾルアゾ）−５−（
Ｎ−エチル−Ｎ−２−ヒドロキシ−３−スルホゾロピル
アミノ）安息香酸 ２− （３，５−ゾプロモー２−ビリゾルアゾ）−５−
（Ｎ−スルホゾロぎルアミノ）安息香酸 ２−（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−（
Ｎ、Ｎ−ゾ（２−ヒドロキシ−３−スルホゾロビル）ア
ミン）安息香酸 ２−（２−チアゾリルアゾ）−４−メチル−５−スルホ
ゾロビルアミノ安息香酸 （ＴＡＭＳＰＢ） ２−（２−チアゾリルアゾ）−４−メチル−５−スルホ
エチルアミノ安息香酸（ＴＡＭＳＥＢ）２−（２−チア
ゾリルアゾ）−５−シースルホブチルアミノ安息香酸３
ナトリウム塩（ＴＡＳＢＢ） なお、（１）〜（４）は市販のものを使用することがで
き、（５）は例えば分析化学、２８巻、５３５〜５４０
頁（１９７９年）、（６） 〜（１１）は例えばＡｎａ
ｌｙｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ、 １ 、４６１〜４６
５ （１９８５）、（１２）及び（１３）は例えばＭｉ
ｋｒｏｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ［Ｗｉｅｎ ：ｌ
。
メチルアミノ安息香酸（ＴＡＭＳＭＢ ）２−（２−チ
アゾリルアゾ）−５−ジメチルアミノ安息香酸（ＴＡＭ
Ｂ） ２−（２−ベンゾチアゾリルアゾ）−５−ジメチルアミ
ノ安息香酸（ＢＴＡＭＢ） ｒ ２− Ｃ（３＋ ｓ ）−ジブロモ−２−ピリジルアゾ
〕−５−ジメチルアミノ安息香酸 （ＰＡＭＢ ） ２−（２−チアゾリルアゾ）−５−スルホメチルアミノ
安息香酸（ＴＡＳＭＢ） ｒ ２−（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−（
Ｎ−エチル−Ｎ−スルホゾロピルアミノ）安息香酸（Ｄ
ＳＡＢ） ｒ ２−（３，５−ゾプロモー２−ピリゾルアゾ）−５−（
Ｎ−スルホゾロピルアミノ）安息香酸 ｒ ２−（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−（
Ｎ−２−ヒドロキシ−３−スルホブロピルアミノ）安息
香酸 ２−（３，５−ジブロモ−２−ビリゾルアゾ）−５−（
Ｎ−エチル−Ｎ−２−ヒドロキシ−３−スルホゾロピル
アミノ）安息香酸 ２− （３，５−ゾプロモー２−ビリゾルアゾ）−５−
（Ｎ−スルホゾロぎルアミノ）安息香酸 ２−（３，５−ジブロモ−２−ピリジルアゾ）−５−（
Ｎ、Ｎ−ゾ（２−ヒドロキシ−３−スルホゾロビル）ア
ミン）安息香酸 ２−（２−チアゾリルアゾ）−４−メチル−５−スルホ
ゾロビルアミノ安息香酸 （ＴＡＭＳＰＢ） ２−（２−チアゾリルアゾ）−４−メチル−５−スルホ
エチルアミノ安息香酸（ＴＡＭＳＥＢ）２−（２−チア
ゾリルアゾ）−５−シースルホブチルアミノ安息香酸３
ナトリウム塩（ＴＡＳＢＢ） なお、（１）〜（４）は市販のものを使用することがで
き、（５）は例えば分析化学、２８巻、５３５〜５４０
頁（１９７９年）、（６） 〜（１１）は例えばＡｎａ
ｌｙｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ、 １ 、４６１〜４６
５ （１９８５）、（１２）及び（１３）は例えばＭｉ
ｋｒｏｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ［Ｗｉｅｎ ：ｌ
。
１９８３１［［，２３５〜２４４の合成方法に準じて合
成することができる。（１４）は後述の実施例中で合成
例を示す。
成することができる。（１４）は後述の実施例中で合成
例を示す。
本発明に用いるペルオキシダーゼ様物質としては、ペル
オキシダーゼと同様の能力を有するものであれば特に限
定されず、例えばチトクロムＣ１ヘモクロビン、ミクロ
ペルオキシダーゼ等が使用できる。
オキシダーゼと同様の能力を有するものであれば特に限
定されず、例えばチトクロムＣ１ヘモクロビン、ミクロ
ペルオキシダーゼ等が使用できる。
本発明の定量方法を実施するには、一定温度（例えば室
温〜４０℃の任意の温度）に保持したｐＨ５〜１０の緩
衝液中に被検体、３価コバルト指示薬、２価コバルト化
合物及びＰＯＤを加えて反応を行ない、この反応液中に
生成した有色性錯体を光学的手段で測定することにより
行なわれる。
温〜４０℃の任意の温度）に保持したｐＨ５〜１０の緩
衝液中に被検体、３価コバルト指示薬、２価コバルト化
合物及びＰＯＤを加えて反応を行ない、この反応液中に
生成した有色性錯体を光学的手段で測定することにより
行なわれる。
２価コバルト化合物は、反応液中の濃度がｏ、ｏ ｉ〜
１０ ｍｍｏｔ／ｌ、好ましくは０．０５〜１ ｍｍｏ
ｔ／ｌ。
１０ ｍｍｏｔ／ｌ、好ましくは０．０５〜１ ｍｍｏ
ｔ／ｌ。
３価コバルト指示薬は０．０１〜２００ ｍｍｏｔ／ｌ
。
。
好ましくは０．０５〜１ ｍｍｏｔ／ｌ、 Ｐ ＯＤは
１〜１００００Ｕμ、好ましくは５００〜５０００ Ｕ
／ｌとなるように使用される。
１〜１００００Ｕμ、好ましくは５００〜５０００ Ｕ
／ｌとなるように使用される。
緩衝液としては、前記ｐＨ範囲を保持できれば特に制限
されず、例えば酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝
液、トリス緩衝液、グリシン緩衝液、グツドの緩衝液等
が用いられる。
されず、例えば酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝
液、トリス緩衝液、グリシン緩衝液、グツドの緩衝液等
が用いられる。
検体中の過酸化水素量を求めるに当たっては、まず、生
成した色素に適した波長で吸光度変化量を測定するか、
または一定時間後に酸、アルカリまたは界面活性剤を加
えて反応を停止させて同様の波長で吸光度を測定する。
成した色素に適した波長で吸光度変化量を測定するか、
または一定時間後に酸、アルカリまたは界面活性剤を加
えて反応を停止させて同様の波長で吸光度を測定する。
次いで測定された吸光度から盲検の吸光度を差し引いて
得られた吸光度、または吸光度変化量を、あらかじめ求
めておいた標準液の吸光度または吸光度変化量と比較す
ることによシ、被検体中の過酸化水素量が求められる。
得られた吸光度、または吸光度変化量を、あらかじめ求
めておいた標準液の吸光度または吸光度変化量と比較す
ることによシ、被検体中の過酸化水素量が求められる。
本発明定量方法は反応溶液中で過酸化水素が生成する反
応、例えば酸化還元酵素が関与する多数の反応によって
生成される過酸化水素の定量にも使用でき、これにより
酵素及び基質の定量も可能となる。この例を次に示す。
応、例えば酸化還元酵素が関与する多数の反応によって
生成される過酸化水素の定量にも使用でき、これにより
酵素及び基質の定量も可能となる。この例を次に示す。
■酸化酵素を使用した体液成分の測定の例（尿酸につい
て） 以下余白 また、２価コバルト化合物、３価コバルト指示薬及び過
酸化水素を含有する試薬を用いれば、ＰＯＤの定量も可
能である。
て） 以下余白 また、２価コバルト化合物、３価コバルト指示薬及び過
酸化水素を含有する試薬を用いれば、ＰＯＤの定量も可
能である。
本発明によれば、過酸化水素を極めて高感度に定量する
ことができる。更に種々の物質（基質）に作用して過酸
化水素を生成するような酵素の活性、あるいはそのよう
な酵素反応と連結し得る自体公知の酵素反応に関与する
物質（基質）、酵素、補酵素の量若しくは活性などをヘ
モグロビン、ビリルビン、濁υ等の影響のない６００
ｎｍ以上の測定波長で容易に、しかも高感度に定量する
ことができる。
ことができる。更に種々の物質（基質）に作用して過酸
化水素を生成するような酵素の活性、あるいはそのよう
な酵素反応と連結し得る自体公知の酵素反応に関与する
物質（基質）、酵素、補酵素の量若しくは活性などをヘ
モグロビン、ビリルビン、濁υ等の影響のない６００
ｎｍ以上の測定波長で容易に、しかも高感度に定量する
ことができる。
次に実施例を挙げて本発明を説明する。
参考例Ｉ ＴＡＳＢＢ Ｃ化合物（］−４） ：］の
合成：メターアミノ安息香酸０．７５６ Ｆを水１２ｍ
１に懸濁し、炭酸ナトリウム０．７９５９を加え９５℃
に加熱し、攪拌下ブタンザルトン１．８３９を滴下した
。さらに炭酸ナトリウム１゜０６２、ブタンサルトン２
．４４？を加え、続いて水酸化ナトリウム０．４１を加
え、３０分間加熱下攪拌した。この反応溶液に塩酸を加
えてＩ）Ｈを４とし、これを反応液Ａとした。
合成：メターアミノ安息香酸０．７５６ Ｆを水１２ｍ
１に懸濁し、炭酸ナトリウム０．７９５９を加え９５℃
に加熱し、攪拌下ブタンザルトン１．８３９を滴下した
。さらに炭酸ナトリウム１゜０６２、ブタンサルトン２
．４４？を加え、続いて水酸化ナトリウム０．４１を加
え、３０分間加熱下攪拌した。この反応溶液に塩酸を加
えてＩ）Ｈを４とし、これを反応液Ａとした。
これとは別に、２−アミノチアゾール・硫酸塩０、７４
６ ？を３Ｎ−塩酸３ゴに溶かし、水冷下皿硝酸す）
ＩＪウム０．３４５ Ｆを少量づつ加えた後、スルファ
ミン酸をスフ９−チル１杯分加えた。この溶液を水冷上
反応液Ａに滴下した。この溶液は濃い紫色を呈した。こ
の反応溶液を濃縮乾固し、残査から目的物を逆相ＯＤＳ
カラムで分離した。仁の粗結晶をメタ、ノールに溶解し
、アセトンを加えて再結晶すると赤色結晶として純品が
得られｆｒ、。
６ ？を３Ｎ−塩酸３ゴに溶かし、水冷下皿硝酸す）
ＩＪウム０．３４５ Ｆを少量づつ加えた後、スルファ
ミン酸をスフ９−チル１杯分加えた。この溶液を水冷上
反応液Ａに滴下した。この溶液は濃い紫色を呈した。こ
の反応溶液を濃縮乾固し、残査から目的物を逆相ＯＤＳ
カラムで分離した。仁の粗結晶をメタ、ノールに溶解し
、アセトンを加えて再結晶すると赤色結晶として純品が
得られｆｒ、。
元素分析 ＣｔｓＨｚｔＮ＋０ｓＳｓＮａｓ ａ Ｈ２
Ｏとして計算値 Ｃ：３５．７６％Ｈ；３．８３％Ｎ；
９．２６チ分析値 Ｃ；３６．０４％Ｈ： ３．８９％
Ｎ；９．２１チ実施例１ 過酸化水素の定量： ０、０２５ ｍｍｏｔ／ｌの硫酸コバルト（ＩＩ）アン
モニウム、０．０４ ｍｍｏｔ／ｌのＴＡＳＢＢ及び２
０００Ｕμのペルオキシダーゼを含む５０ ｍｍｏ７／
ｌのすン酸緩衝液（ｐＨ７，０）ＩＩＩ！／に、過酸化
水素を含む被検体１０ｐＬを加え、３７℃で５分間加温
後、盲検を対照として波長６７８ ｎｍの吸光度を測定
した。この結果を表１に示す。
Ｏとして計算値 Ｃ：３５．７６％Ｈ；３．８３％Ｎ；
９．２６チ分析値 Ｃ；３６．０４％Ｈ： ３．８９％
Ｎ；９．２１チ実施例１ 過酸化水素の定量： ０、０２５ ｍｍｏｔ／ｌの硫酸コバルト（ＩＩ）アン
モニウム、０．０４ ｍｍｏｔ／ｌのＴＡＳＢＢ及び２
０００Ｕμのペルオキシダーゼを含む５０ ｍｍｏ７／
ｌのすン酸緩衝液（ｐＨ７，０）ＩＩＩ！／に、過酸化
水素を含む被検体１０ｐＬを加え、３７℃で５分間加温
後、盲検を対照として波長６７８ ｎｍの吸光度を測定
した。この結果を表１に示す。
表１
検量線は原点を通る直線を示した。
実施例２ 過酸化水素の定量：
０、１ ｍｍｏ７／ｌのビス（アセチルアセトナト）コ
バルト（Ｕ）、０．０７ ｍｍｏＬ／１のＴＡＭＳＭＢ
及び１０００ Ｕ／ｌのペルオキシダーゼを含む２゜ｍ
ｍｏｔ／ｌのリン酸緩衝液（ｐａ ５．０ ） ３ ｍ
ｌに、過酸化水素を含む被検体２ｏμｔを加え、３７℃
で５分間加温後、盲検を対照として波長６５５ ｎｍの
吸光度を測定した。この結果を表２に示す。
バルト（Ｕ）、０．０７ ｍｍｏＬ／１のＴＡＭＳＭＢ
及び１０００ Ｕ／ｌのペルオキシダーゼを含む２゜ｍ
ｍｏｔ／ｌのリン酸緩衝液（ｐａ ５．０ ） ３ ｍ
ｌに、過酸化水素を含む被検体２ｏμｔを加え、３７℃
で５分間加温後、盲検を対照として波長６５５ ｎｍの
吸光度を測定した。この結果を表２に示す。
表２
検量線は原点を通る直線を示した。
実施例３ グルコースの定量：
０、０５ ｍｍｏｔ／ｌの硫酸コバルト（ＩＩ）アンモ
ニウム、０．０４ ｍｍｏｔ／ｌのＴＡＳＢＢ、２００
０Ｕ／ｌのペルオキシダーゼ及び１０００ Ｕ／ｌのグ
ルコースオキシダーゼを含む５０ ｍｍｏｔ／ｌのリン
酸緩衝液（ｐＨ７，０） １． Ｏｄに、グルコースを
含む被検体１０μｔを加え、３７℃で５分間加温後、盲
検を対照として波長６７８ ｎｍの吸光度を測定した。
ニウム、０．０４ ｍｍｏｔ／ｌのＴＡＳＢＢ、２００
０Ｕ／ｌのペルオキシダーゼ及び１０００ Ｕ／ｌのグ
ルコースオキシダーゼを含む５０ ｍｍｏｔ／ｌのリン
酸緩衝液（ｐＨ７，０） １． Ｏｄに、グルコースを
含む被検体１０μｔを加え、３７℃で５分間加温後、盲
検を対照として波長６７８ ｎｍの吸光度を測定した。
この結果を表３に示す。
表３
検量線は原点を通る直線となり、良好な定量性を示して
いる。
いる。
実施例４ 尿酸の定量：
尿酸を含む被検体１０μｔに０．０８ ｍｍｏ７／ｌの
ＴＡＳＢＢ及び２００ Ｕ／ｌ （７）ウリカーゼを含
む５０ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ５，５） ０
．５ｍｌを加え、３７℃で５分間加温後、ｏ、 １ ｍ
ｍｏｔ／ｌの硝酸コバル） （ＩＩ）及び４０００ Ｕ
／ｌのペルオキシダーゼを含む５０ ｍｍｏｔ／ｌのリ
ン酸緩衝液（ｐａ ６．５ ） ０．５ゴを加え、３７
℃で５分間加温後、盲検を対照として波長６７８ ｎｍ
で吸光度を測定した。この結果を表４に示す。
ＴＡＳＢＢ及び２００ Ｕ／ｌ （７）ウリカーゼを含
む５０ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ５，５） ０
．５ｍｌを加え、３７℃で５分間加温後、ｏ、 １ ｍ
ｍｏｔ／ｌの硝酸コバル） （ＩＩ）及び４０００ Ｕ
／ｌのペルオキシダーゼを含む５０ ｍｍｏｔ／ｌのリ
ン酸緩衝液（ｐａ ６．５ ） ０．５ゴを加え、３７
℃で５分間加温後、盲検を対照として波長６７８ ｎｍ
で吸光度を測定した。この結果を表４に示す。
表４
実施例５ 感度及び極大吸収波長の比較：０．０３重量
％の４−アミノアンチぎリン、０．０２重量％のフェノ
ール及び２０００ Ｕ／ｌのベルオキシダーゼを含む５
０ ｍｍｏ！、／Ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ６，５）１、
Ｏｄに、過酸化水素を含む被検体１０μｔを加え、３７
℃で５分間加温後、盲検を対照として波長５０５ ｎｍ
で吸光度を測定した。
％の４−アミノアンチぎリン、０．０２重量％のフェノ
ール及び２０００ Ｕ／ｌのベルオキシダーゼを含む５
０ ｍｍｏ！、／Ｌのリン酸緩衝液（ｐＨ６，５）１、
Ｏｄに、過酸化水素を含む被検体１０μｔを加え、３７
℃で５分間加温後、盲検を対照として波長５０５ ｎｍ
で吸光度を測定した。
また、実施例１と同様に操作して、各種３価コバルト指
示薬によシ過酸化水素の定量を行ない、上記方法による
感度を１としたときの各方法の感度の相対比及び各方法
における極大吸収波長を求めた。この結果を表５に示す
。
示薬によシ過酸化水素の定量を行ない、上記方法による
感度を１としたときの各方法の感度の相対比及び各方法
における極大吸収波長を求めた。この結果を表５に示す
。
表５
実施例６ ペルオキシダーゼの定量：
ペルオキシダーゼを含む被検体１ｏｏμｔに０．０６ｍ
ｍａｌ／ｌのＴＡＭＳＭＢ及び０．０６ ｍｍｏｔ／ｌ
の硝酸コバルト（ｎ）及び０．６２５ ｍｍｏｔ／ｌの
過酸化水素を含む３０ ｍｍｏｊ／ｌの酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ４，０）１０−を加え、３７℃で５分間加温後、盲検
を対照として波長６５４ ｎｍで吸光度を測定した。こ
の結果を表６に示す。
ｍａｌ／ｌのＴＡＭＳＭＢ及び０．０６ ｍｍｏｔ／ｌ
の硝酸コバルト（ｎ）及び０．６２５ ｍｍｏｔ／ｌの
過酸化水素を含む３０ ｍｍｏｊ／ｌの酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ４，０）１０−を加え、３７℃で５分間加温後、盲検
を対照として波長６５４ ｎｍで吸光度を測定した。こ
の結果を表６に示す。
表６
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、２価コバルト化合物を、ペルオキシダーゼまたはペ
ルオキシダーゼ様物質の存在下に過酸化水素と反応させ
、生じる３価コバルトに３価コバルト指示薬を作用させ
、生成する有色性錯体を比色定量することを特徴とする
過酸化水素の定量方法。 ２、３価コバルト指示薬が次の一般式（ I ）▲数式、
化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＿１は▲数式、化学式、表等があります▼、
▲数式、化学式、表等があります▼または ▲数式、化学式、表等があります▼（ＸおよびＹは同一
または異なつて、水素原子、ハロゲン原子またはハロゲ
ン化アルキル基）を示し、Ｒ＿２およびＲ＿３は同一ま
たは異なつて、水素原子、低級アルキル基、スルホアル
キル基またはω−スルホヒドロキシアルキル基を示し、
Ｒ＿４は水素原子または低級アルキル基を示す〕 で表わされる化合物又はその塩である特許請求の範囲第
１項記載の過酸化水素の定量法。 ３、２価コバルト化合物、３価コバルト指示薬及びペル
オキシダーゼもしくはペルオキシダーゼ様物質を含有す
ることを特徴とする過酸化水素定量用試薬。 ４、３価コバルト指示薬が次の一般式（ I ）▲数式、
化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＿１は▲数式、化学式、表等があります▼、
▲数式、化学式、表等があります▼または ▲数式、化学式、表等があります▼（ＸおよびＹは同一
または異なつて、水素原子、ハロゲン原子またはハロゲ
ン化アルキル基）を示し、Ｒ＿２およびＲ＿３は同一ま
たは異なつて、水素原子、低級アルキル基、スルホアル
キル基またはω−スルホヒドロキシアルキル基を示し、
Ｒ＿４は水素原子または低級アルキル基を示す〕 で表わされる化合物またはその塩である特許請求の範囲
第３項記載の過酸化水素定量用試薬。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62269987A JP2516381B2 (ja) | 1987-10-26 | 1987-10-26 | 過酸化水素の定量方法及びその定量用試薬 |
| ES88117687T ES2056870T3 (es) | 1987-10-26 | 1988-10-24 | Metodo de analisis cuantitativo de peroxido de hidrogeno y reactivo para el mismo. |
| EP88117687A EP0314046B1 (en) | 1987-10-26 | 1988-10-24 | Method of quantitative analysis of hydrogen peroxide and reagent therefor |
| DE3889845T DE3889845T2 (de) | 1987-10-26 | 1988-10-24 | Verfahren zur Massanalyse von Wasserstoff-Peroxyd und Reagens dafür. |
| AT88117687T ATE106453T1 (de) | 1987-10-26 | 1988-10-24 | Verfahren zur massanalyse von wasserstoff-peroxyd und reagens dafür. |
| US07/262,720 US4933277A (en) | 1987-10-26 | 1988-10-26 | Method of quantitative analysis of hydrogen peroxide and reagent therefor |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62269987A JP2516381B2 (ja) | 1987-10-26 | 1987-10-26 | 過酸化水素の定量方法及びその定量用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01112155A true JPH01112155A (ja) | 1989-04-28 |
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| JP62269987A Expired - Fee Related JP2516381B2 (ja) | 1987-10-26 | 1987-10-26 | 過酸化水素の定量方法及びその定量用試薬 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4933277A (ja) |
| EP (1) | EP0314046B1 (ja) |
| JP (1) | JP2516381B2 (ja) |
| AT (1) | ATE106453T1 (ja) |
| DE (1) | DE3889845T2 (ja) |
| ES (1) | ES2056870T3 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005049858A1 (ja) * | 2003-11-19 | 2005-06-02 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | ヘモグロビン含有試料中の基質の測定方法 |
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|---|---|---|---|---|
| SE9003496D0 (sv) * | 1990-11-02 | 1990-11-02 | Eka Nobel Ab | Analysmetod |
| DE10105528A1 (de) * | 2001-02-07 | 2002-08-08 | Basf Ag | Verfahren zur Online-Bestimmung von Wasserstoffperoxid |
| US7534394B1 (en) | 2005-07-11 | 2009-05-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Potentiometric titration method for quantitative determination of hydrogen peroxide |
| TWI411467B (zh) * | 2010-08-02 | 2013-10-11 | Ind Tech Res Inst | 金屬孔洞材料、其製備方法及含氮化合物之檢測方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54145189A (en) * | 1978-05-02 | 1979-11-13 | Masaomi Tsuchiya | Method of measuring quantity of metal ions by complex consisting of metal and 44hydroxyydimethylaminoo55nitrosoo66 aminopyrimidine |
| JPS6091997A (ja) * | 1983-10-22 | 1985-05-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | モノアミンオキシダ−ゼ活性の測定方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU433394A1 (ja) * | 1972-01-03 | 1974-06-25 | Способ Кинетического Определения | |
| DE2856487A1 (de) * | 1977-12-29 | 1979-07-12 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Verfahren zur bestimmung von peroxidischen substanzen und hierfuer brauchbare verbindungen |
| JPH0654318B2 (ja) * | 1986-02-24 | 1994-07-20 | 第一化学薬品株式会社 | 還元性物質の定量方法及びその定量用試薬 |
| DE3618752A1 (de) * | 1986-06-04 | 1987-12-10 | Bayer Ag | 4,6-dinitrobenzthiazolonhydrazone(2) |
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-
1987
- 1987-10-26 JP JP62269987A patent/JP2516381B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1988
- 1988-10-24 DE DE3889845T patent/DE3889845T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-10-24 EP EP88117687A patent/EP0314046B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-24 AT AT88117687T patent/ATE106453T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-10-24 ES ES88117687T patent/ES2056870T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-26 US US07/262,720 patent/US4933277A/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54145189A (en) * | 1978-05-02 | 1979-11-13 | Masaomi Tsuchiya | Method of measuring quantity of metal ions by complex consisting of metal and 44hydroxyydimethylaminoo55nitrosoo66 aminopyrimidine |
| JPS6091997A (ja) * | 1983-10-22 | 1985-05-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | モノアミンオキシダ−ゼ活性の測定方法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005049858A1 (ja) * | 2003-11-19 | 2005-06-02 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | ヘモグロビン含有試料中の基質の測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE106453T1 (de) | 1994-06-15 |
| JP2516381B2 (ja) | 1996-07-24 |
| ES2056870T3 (es) | 1994-10-16 |
| US4933277A (en) | 1990-06-12 |
| EP0314046A3 (en) | 1990-11-28 |
| DE3889845D1 (de) | 1994-07-07 |
| EP0314046A2 (en) | 1989-05-03 |
| DE3889845T2 (de) | 1995-01-26 |
| EP0314046B1 (en) | 1994-06-01 |
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