JPH01112991A - アミノ酸の回収方法 - Google Patents

アミノ酸の回収方法

Info

Publication number
JPH01112991A
JPH01112991A JP63198725A JP19872588A JPH01112991A JP H01112991 A JPH01112991 A JP H01112991A JP 63198725 A JP63198725 A JP 63198725A JP 19872588 A JP19872588 A JP 19872588A JP H01112991 A JPH01112991 A JP H01112991A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
exchange resin
amino acid
resin
ion exchange
liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP63198725A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2638971B2 (ja
Inventor
Shigenori Mori
森　重徳
Kinzo Iitani
欣三 飯谷
Masaki Yamamoto
正樹 山本
Tadashi Miyazawa
宮澤　正
Toyoichi Kaneko
豊一 金児
Tetsuya Kaneko
哲也 金子
Kenichi Yarita
鑓田　兼逸
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US07/083,590 external-priority patent/US4997754A/en
Application filed by Ajinomoto Co Inc filed Critical Ajinomoto Co Inc
Publication of JPH01112991A publication Critical patent/JPH01112991A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2638971B2 publication Critical patent/JP2638971B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
    • B01D61/14—Ultrafiltration; Microfiltration
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C227/28—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton from natural products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C227/38—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C227/40—Separation; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
    • C07C231/22—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C231/24—Separation; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C237/06—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atoms of the carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D209/20—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals substituted additionally by nitrogen atoms, e.g. tryptophane
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/64—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms, e.g. histidine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アミノ酸発酵液から画体−高分子物質及び色
素岬の不純物を除去する、アミノ酸を精製する技術に関
する。
〔従来の技術〕
Ｌ−アミノ酸発酵液には、多量の菌体や可溶性蛋白を含
有している。これらは、アミノ酸の結晶成長を阻害した
シ、さもなくばアミノ酸の収率低下をきたす為、あらか
じめ除去する必要がある。
また、培地や微生物の代謝由来の不純物である無機塩ｅ
　ｓ　ｓ色素等も発酵液中に含まれる。これらも、イオ
ン交換処理活性炭処理、晶析操作等の単離精製技術を適
切に組合せることにより除去しなければならない。
発酵液からのアミノ酸の単離精製は通常次のように行わ
れる。即ち、遠心分Ｍ、濾過・７１！集沈降などにより
園体及び不溶性成分を除去し次後、目的アミノｒＲが１
場イオンになるようにＰＨ１−ｇ４整し、強酸性陽イオ
ン交換樹脂に吸着させる。吸着され九アミノ醗は希アル
カリ溶液で溶出された後、活性炭で脱色され、濃縮・冷
却・中和のいずれかの晶析法で遊離のアミノ酸又はその
塩を分離する。
必要に応じて再結を行つて製品を得ることが出来る。こ
の方法に基づいて＃を製されるアミノ酸はアル一二ノ、
グルタミン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、フロ
リン、スレオニン、＋リン、バリンなど多数にのはシ、
工業的に生産されている。
この中で、陽イオン交換樹脂熟理法については、アミノ
酸のアミノ基の塩基性に基づいた優れた技術ではあるが
、陽イオンになシうる物質は総て樹脂に吸着する九め、
選択性という意味では大変に乏しい、ｉた陽イオン交換
樹脂はその骨格がスチレンとジビニルベンゼンの共重合
体が一般的であシ、陽イオン交換基（スルホン酸基）以
外の部分は極めて疎水性が高く、色素やタンノダク類な
ど疎水性の高い物質が吸着しやすい。そのうえ溶離剤で
あるアルカリに接すると、これら吸着した陽イオン物質
や疎水性物質が、電荷の変化やイオン強度の変化により
てほとんど溶出される。すなわち、吸着・溶離という複
雑な操作を行ない、酸やアルカリを大ｉｌＫ使用し、薄
い液や再生液など大量の排水を発生させたわシには、実
質的な不純物淘汰効果は少ないという好ましくない結果
となる。
一方、タンパク分解物からの抽出法と異なシ、アミノ酸
発酵の利点は特殊な微生物を培養することにより培養液
中に一徨類のアミノ酸だけが高濃度に蓄積され　　　　
　　　　　・特に、最近の薗株育楓技術は目ざましいも
のがあシ、副生物を極力減少させる努力がなされ、酵素
法に至っては副生物が全く無いという状況さえ生まれて
いる。
これらのことから、従来の古典的陽イオン交換法はその
意ｌ＆を化学的、省エネルギー的、環境保全的見地から
急速に失いつつあるといえ、る。
次に、菌体及び不溶性成分の除去を目的とした工業的装
置としては、遠心分離を基本原理とした遠心沈降分離機
、ノズＪｖ′ｍ出型連続遠沈機、バスケット型遠心沈降
機など、又、ろ過ではケイツク土をコートした減圧ろ過
ｖＡ、圧搾ろ過膜等がよく用いられている。
しかしながらこの従来技術では遠心重力によりて菌体を
完全に除去することは簸しく、又、−過についてＦｉ菖
体は除去できるが、可溶性蛋白質などを除去することは
不可能である。
これにより、次工程のイオン交換樹脂カラムを閉塞させ
たυ、結晶化の際に成長を阻害したシ、加熱、濃縮で変
性、析出し、結晶に混入して純度を著しく下げていると
いう問題点を有してい友。
この結果、イオン交換樹脂処理は本来の性能を最大限発
揮することが出来ないばか〕でなく、目的の結晶純度を
得る為に、再結晶工程を繰シ返す傾向が１）−）次。
一方、陰イオン性物質０色素物質、高分子物質などが結
晶の成長阻害や、結晶の純度低下や着色褐変の一因とな
っている。これらを除去する手段として、陰イオン交換
樹脂参画性陰イオン交換樹脂、或は合成吸着樹脂などが
考えられるが、上記可溶性蛋白質は、これらの樹脂に吸
着し、その効果を著しく減らすと同時に、不可逆的吸着
などにより樹脂再生不能に陥る傾向がありた。
以上の様な点から、発酵液からアミノ酸を回収する新し
い改良技術開発の必要性がせまられていた。
〔発明が解決しようとする課題〕
本発明は、発酵液中の菌体及び結晶の成長阻害や純度低
下をきたす物質を除去し、しかも、アミノ酸を高収率で
回収できる簡便な処理法を提供することにある。
〔課題を解決するための手段〕
本発明は１本ｌｌ１題に対し、長年研究ｔ−重ねた結果
、新たな知見を見い出し、本発明を完成するに至り九、
すなわち、本発明は、発酵法又は酵素法により得られた
Ｌ−アミノ酸溶液からＬ−アミノ酸を回収する際に、発
酵液、酵素液又はその濃縮液を限外Ｆ過膜処理１次いで
、イオン交換樹脂処理又は吸着樹脂処理ｔすることによ
り、不純物を除去することに関するものである。
本発明を更に詳しく説明すると、以下の通シである。
一般に微生物のサイズとして、代表的な１ｉ’５ｃｈｅ
ｒｉａｈｉａ属で１．５〜１．１　ｆｉｍ　％５ｔａｐ
ｈｙ　１ｏｃｏａａｕｓ属で１．０〜０．５μｍ１もっ
とも小さいＰｓｅｕｄｏｍｏｎｍｓ属で１．０〜０．２
２ＩＩ４ｎと考えられている。これに対して、ブレコー
トフィルターの排除サイズは、１．０μｍといわれてい
る。更に、蛋白質については１分子量　６７．０００の
アルブミンで約３０　ｉ　（−０，００３μｖｎ）　ｅ
分子量−１３，０００のチトクロムＣで約２０又（−ｏ
、ｏ　Ｏ２ｐｍ’）であり、工業的レベルの遠心沈降や
ブレコート−過で、これらの除去は不可能である。
しかしながら、近年、水処塩やチーズ六ニーの精製に応
用されてきた、限外濾過膜は、通常の一過と異なシ、拡
散浸透ｔ−基本原理としておシ、その？アサイズにより
て分子量分画能力として、３０万からｔｏｏｏｔで対応
できる。生化学分野では蛋白質の精製などに広く応用さ
れておシ、工業的にも純水の製造やエンドトキシン（発
熱性物質）の除去に関する報告が多い。
本発明者は、これを発酵液中の菌体の除去および可溶性
タンノ々りの除去に応用すべく検討した結果、湿菌体容
積として、７０〜８０ｑ／ｂまでも濃縮が可能で有り、
更に濃縮液に水を加え再度透過させることによプ、アミ
ノ酸など低分子可溶性分を９９、Ｓ％迄回収することが
できた。限外濾過膜の透過液は澄明であシ、若干の色素
分子の淘汰及び粘度の低下がみられた。
濾過については、濾過面の閉塞による一過速度の低下が
問題であるが、限外濾過膜は拡散浸透であるため、膜面
の目づｔ）が比較的少ないうえ、液の攪はんや高速循環
により膜表面にある程度の液体線速を与えることによ抄
、膜表面のフテタリング物質を効果的に除去でき、姿定
した透過速度が得られた。膜の洗浄は、膜の素材に適し
た通常の洗浄剤でよく、例えば薄いアルカリ、薄い次亜
塩素酸ナトリクム溶液、市販の洗剤などの他ｔメーカー
から供給される膜厚用の洗浄剤も効果がある。これによ
って純水を用いた透過速度測定で、９５〜９８９Ｇの回
復率が得られた。
限外濾過膜の形式としては、平膜型、中空糸型、チ、−
プ２−型、スパイクル型何れでもよい。膜の材質もポリ
スルホン、フッ化ぼりビーニリデン、ポリアクリロニト
リル、セルロース等いずれ４可能である。
好ましくは、ポリスルホン又はセルロースの膜材質で、
平膜又は中空糸型の限外濾過膜が良い。
発酵液の−および温度は装置の材質および膜の素材によ
りある程度制約を受けるが、−リスルホンＰＨ１〜１４
、温度１５〜８０℃まで可能であシ、実質的には問題な
い。
好ましくは、Ｆ）Ｉ　２．５〜８．Ｏ１温度２０−７０
℃が良い。
又、限外濾過膜に適用する好ましい圧力は、入口圧４．
０〜６．０バール、出口圧１．０〜２．０バールが良い
・ｐ艮りト〉ｐゼ九月１７かｊｈな）歌（寥１）、ｂｏ
ｏ〜ダｏ、ｏρｏｔｔ”−ムく、−更に好ましくは６．
０００〜１０．０００が良い。流速は７０１７ｍ”／ｈ
　〜１５０　／／ｍ”／ｈが適切である。
発酵液又は酵素液中のアミノ酸最適濃度は次の通シであ
る。
１、−イソ６イシｙ（Ｌ−ｔＩｓ）　　　　：　　　２
０〜４０　　　ｇ／ｌＬ−トリブトフチｙ（Ｌ−Ｔｒｐ
）　　　　：　　　２０〜２１　　　ｇ／ｌＬ−アラニ
ン　　（Ｌ−Ａｌｍ）　　　　：　　　９５〜１３０　
　ｇ／ｌＬ−パリｙ　　　（Ｌ−Ｖａｌ）　　　　：　
　　４０〜７０　　９／ＩＬ−スレオ＝ｙ　　（１−Ｔ
ｈｒ）　　　　：　　　４０〜９０　　　　（ｇ／ｌＩ
Ｌ−ヒス？／ｙ（Ｌ−Ｈｌｍ）　　　　：　　　１５〜
４０　　　ｇ／ｌＬ−７ｚ＝／Ｌ’７う＝ｙ（Ｌ−Ｐｈ
＊）　　　：　　　２０〜３０　　　ｇ／ｌＬ−／”ｋ
ｌＺｙ　　（Ｌ−Ｇ　１　！ｌ）　　　　：　　　　３
０〜５０　　　ｇ／ｌ次に、菌体を除去しただけの発酵
液は、濃縮あるいは冷却して晶析させても高純度の結晶
が得られないという問題点がある。例えば、トリプトフ
アンでは、インドール環が酸化的に分解重合し次疎水性
物質や色素物質が多量に含まれている。これらは晶析の
際Ｋ、トリプトフアンの結晶成長阻害を起こし、微細な
結晶になると同時に色素や濁夛成分の取シ込みが多く、
再結晶しても容易に淘汰されない、また、アラニンでは
残存するアス／臂うギン酸が晶析阻害を起こし、結晶が
微細になる上、アスノダ２ギン酸が混入する現象がみら
れた。
を友、イソロイシンやバリンでは濃縮中に濁シが発生し
、結晶のす自まにとシこまれ、著しく結晶の純度を下げ
ている。
本発明者はこの原因について研究した結果、２つの要因
があることを見いだした。すなわち、第１の要因は、可
溶性蛋白質、核酸、多抛類など少なくとも分子８１万以
上の高分子物質である。これらは、濃縮時の加熱、−の
変化、イオン強度の変化によって容易に変性、凝集、溶
解度の低下をきたし、不溶化して結晶表面に付着或は混
入して結晶の純度ｔ−著しく下げていた。これらの不純
物として、２−アセチル−ビロール、２．５−ジメチル
テトラヒｒロフ２ン、２−ヒドロキシメチルイミダゾー
ル、２−ｎ−ブチルテトラヒトｏ７ラン、皆コール、イ
シドール、ブチロラクタム、ブチルアミンやグロピオン
駿などが含まれる。これらの大部分はｓ　２８０〜３４
０　ｎｍ　ＯＵ　Ｖ領域に吸収をもつ色素前駆体である
。
ｔｆｆＪ２の要因は、低分子量の色素及び疎水性の物質
である。これらは、アミノ酸の結晶化の際にその成長表
面に吸着し、その成長を妨げることにより結晶の微細化
、偏平化、集合化を引き起こし、分難の際、付着母液が
膨大になシ洗浄効果も上がらず相対的に結晶の純度を下
げていた。これらの物質は何れも量的には微量であるが
、結晶成長に絶大な影響を及ぼした。
本発明者は、これらの不純物要因を除去する為に以下に
述べる精製法で解決できることが判明したＯ 即ち、第１の要因については限外濾過膜を使用すること
により、容易にこれを除去できることは既に述べた。飢
２の要因については前述のごとく陽イオン交換法ではそ
の除去が望めず、ま九結晶成長阻害物質が量的に微量で
あることから、何等かの機能性物質にこれらを選択的に
吸着させ、アミノ酸ｔ−素通りさせるととにより発酵液
ｔ−ａ製し、−回の晶析操作で高純度の結晶を取得する
ことを考えた。
結晶成長阻害物質は、その性質上、疎水性が高いことか
ら、吸着性を持つ樹脂に通液することにより目的を達す
ることができた。一般に、脱色を目的とした樹脂では、
弱塩基性陰イオン交換樹脂や両性イオン交換樹脂が知ら
れている。これらは、単に脱色という公知の機能のほか
に本研究で述べるところの発酵液の前処理として使用す
ることで驚くべき効果を発揮することを発見した。
弱塩基性アニオン交換樹脂の母体は、公知であるＩリス
チレン、／リフエノリック、工／中シ及びポリアクリレ
イトのいずれを含むものでも良い。
これらのうち、好ましくは、？リスチレンとポリアクリ
レイトである。一般に、これらのイオン交換樹脂は、母
体に少なくとも第１〜第３＠アミノ基（−ＮＲ２，−Ｎ
ＨＲ＊　−ＮＲ，”）　　のいずれかが結合したもので
ある。ここで、Ｂは、アルキル基（好ましくはＣ１〜Ｃ
１゜）や置換したアルキル基（好ましくは、Ｃ６〜Ｃｌ
２）である。例えば、アンバー２イトＩＲＡシリーズ（
ローム表）・−ス社）、デ、オフイト　Ａ３００　シリ
ーズ（デュオライド社）、メイヤオンＷＡシリー：ｆ（
三菱化成社）などがある。これらのうち、特に好ましい
イオン交換樹脂は、イオナックＡ−３６５（アクリレイ
トＷ）とアンバー２イト　ＥＲＡである。イオナック　
Ａ−３６５は、イオナック社の一部門であるシラロンに
よりて、製造されておシ、これは、多孔性ビーズ構造を
有した弱塩基性ポリアクリレイト型アニオン交換樹脂で
ある。アンバー２イト　ＩＲＡ−６８は、誤３級アミノ
基だけを有する多孔性アクリルアニオン交換樹脂である
。
両性イオン交換樹上は、多孔性芳香族プリマーの表面に
アミノ基とフェノール性水酸基が共存したもので、例え
ば、　１８樹脂、　Ｋ８樹脂（北越炭素工ｇａ■）であ
る。
Ｄ剤は、多孔性フェノール樹脂の表面にアミンとフェノ
ール基を有する両性イオン交換樹脂として好ましいもの
である。この樹脂は、強酸又は強アルカリの塩を分離す
ることはできない。しかしながら、Ｄ剤は、弱酸又は弱
アルカリ物ｉｔ−吸着することができる。Ｄ剤への吸着
は、酸性又は中性−領域で処理される。そして、吸着物
質は、アルカリ溶液で溶出されるう 樹脂処理工程での好ましい一領域は２．５〜８．０であ
る。又は、温度は、２０〜７０℃が好ましい。
樹脂への通液流速は、ＳＶａ〜５（樹脂ｊ／ｈｒ）、更
に好ましくは、ＳＶ４が良い。各種アミノ酸の好ましい
樹脂に対する負荷量は、次の通シである。
しかしながら、直接、発酵液にこれらの樹脂を使用した
場合、蛋白質、色素、核酸、オイルなどが不可逆的に吸
着或は沈着し、樹脂の活性表面を被覆してしまい、著し
く能力を減じ、また再生剤として酸、アルカリやアルコ
ール類を用いると、汚染物質は変性、凝集して樹脂に詰
ｉシ、しばしば再生不能に陥ることもあった。
そこで、本発明者は、限外濾過膜を透過させた発酵液を
、これらの樹脂に通液したところ、非常に効率よく脱色
あるいは疎水性物質の除去が可能なことを見いだし念。
樹脂通液前後の液性を比較してみると、Ｕｖスイクトル
では近紫外域２８０〜３５０　ａｍ付近の吸収が大幅に
減少していた。を九、グルクロマドグ２フイーでは分子
量１０００〜３０００程度の物質の除去が示されていた
。また、メタノールグラジ、エントヲ用いた疎水性クロ
マトグラフィーでは、メタノール濃度３０〜５９−程度
で溶出する非常に疎水性の高い物質が除去されているこ
とを示していた。同時に、螢光を発する物質も著しく減
少していることから、ベンぜン環やグリン環などを持り
た疎水性物質が効果的に除去されているものと考えられ
る。これらに付随し九効果としてａｍ時の発泡が大変少
なくなｐ％濃縮操作が非常に容易となりた。すなわち、
限外ろ過と吸着性樹脂を前処理として通過させるという
、非常に・簡単なグロセスでアミノ酸の高純度結晶化が
可能になりた。
〔実施例〕
以下、本発明に基づき一施例で詳細に説明する。
（実施例１） Ｌ−Ａｌａｔ−含有する発酵液は、攪拌装置付きの反応
槽において、　Ｌ−Ａｓｐ　ｔ−基質として、Ｌ−アス
／ダルテートβ−カルメキシラーゼ活性（ＥＣ４，１，
１，１２）を有するシュートモナスムロ　１８　（ＡＴ
ＣＣ１９１２１）を用いた酵素反応により調製され念。
この発酵液上市水で希釈し、　Ｌ−Ａ１ｍ濃度ヲ９９１
／ｌとした（残存Ｌ−Ａ膳ｐは０．１３１／ｌでありた
）。内に、これｔ−９５％硫酸でｐＨ３，３に１１１１
ｆｉ後、再生洗浄済のセルロース限外濾過膜（公称分画
分子ｆＩｃｔｏ、ｏｏｏ　）　ｔ−用いて一過し、懸濁
物質、油状成分、高分子物質を除去しｔに れにより得られた清澄液を弱填基性陰イオン交換ご脂で
あるＯＨ型のアンバーライト！ＲＡ−６８を充填し九カ
ラムに通液して残存Ｌ−Ａｓｐ　ｓその他のアニオン及
び色素成分を除去し念。この時のＬ−Ａｌｍの樹脂への
総負荷量は、６００１／ｌ−樹脂であった＠ カラムから溶出された目的画分は、３５ｓ塩酸で中和し
てＦ）１６．０とした後、減圧濃縮してＬ−Ａ１ｍ濃度
を１１０１／ｌとした。そして、更にこの＠縮液を攪拌
型カランドリアで減圧下、７５℃で濃縮して、Ｌ−Ａ１
ｍ濃度を６２０１／ｌとし友。得られ九このスラリーを
攪拌機付きジャケット型晶析缶に移し、１０℃まで冷却
して、過飽和のない状ＩＪｔで晶析させた。このスラリ
ー七ノヤスケット型遠心分離機にチャージし、母液を分
別したう次に、バスケット内の結晶ケーキ＠、Ｉ、−Ａ
ｌａ　１００１’１当たり１１．８ノの下水で遠心洗浄
した。こうして得られ７’ｌ−Ｌ−Ａ１ｍ結晶（１番結
晶）の純度は、９９慢以上であシ、Ｌ−Ａｓｐ含量は０
．０１慢以下であり九、この結晶１ｇを脱イオン水１０
０ｍＫ溶解し九液の透過率は９７９６でありた。
上記のバスケット型遠心分離機により分別除去された母
液は、Ｌ−Ａｌｍを１３６　Ｅｌ／ｌ含有しておシ、こ
れを、攪拌屋力２ンドリアで減圧下７５℃で濃縮晶析を
行ない、　Ｌ−Ａｉｍ　５５０１／ｌとし友。
そのスラリーを攪拌機付きジャケット型晶析缶にて、１
０℃で冷却晶析した。こうして得られた結晶は、バスケ
ット型遠心分離機で母液を分別し、結晶ケーキをＬ−Ａ
ｌｍ　１００に＃当た。）２６．１１の市水で遠心洗浄
した。（２番結晶） １番結晶と２番結晶を合わせたＬ−Ａｌｔ収率は、発酵
液中のＬ−Ａ１ｍ総量に対して９４．３’％であった。
（比較例１ａ） 実施例１で示した方法で調製された発酵液の上澄液１ｋ
ｐ１４６．０にＢｙ４ｇｌした。次に、これ金イオン交
換樹脂処理をせずに、直接、実施例１に記載し次如＜、
ｉＩ＆縮、冷却晶析した。得られ九結晶の純度は、９８
．７−で、Ｌ−Ａｓｐ含景はｏ、ｏｓｓ−ｔ”あっり。
この結晶１１ｆ’ｉ脱イオン水１００ＩＬｔで溶解した
液の透過率は、９１．９１であった。。
ま九、１番結晶と２香給晶を合わせたＬ−Ａｌ　ｍ収率
は９１．９憾であった。
これらの結晶の粒度は共に実施例１の結晶と比較して小
さかり九。これは、多分、Ｌ−ＡｓｐＫよる結晶成長速
度の遅滞によるものと考えられる。
（実施例２） Ｌ−１１・２１１１／ｌを含有する発酵液を３５慢塩酸
を用いてｐＨ３，０に調整した。−調整プロスを限外濾
過膜（公称分画分子ｆｋ６０００）ｔ−用いて、濾過を
行い、菌体、高分子物質の除去を行りた。限外Ｐ過膜に
よって得られた、澄明な透過液を、０人 剤を充填したカラムに通液しブロム中に含有する色素成
分、υＶ物質をＤ剤に吸着して除去した。
Ｄ剤に対する通算負荷量はＬ−！１・７２０　ｆ）／ｌ
−樹脂であり九。
口 脱色した貫流液をロータリーエバポレーターで減圧下５
０℃で濃縮晶析を行い、仕上げ０Ｌ−１１・濃度は２０
０１１／ｌでありた。濃縮スラリーｔ−２７−苛性ソー
ダでｐＨ５，６に調整したのち、攪拌後付き晶析槽に移
しグロダラムコントロールにより５０℃から２０℃まで
冷却晶析を行う。このスラリーをバスケット型遠心分離
機によ〕結晶と母液　゛に分離した。
結晶のケーキをバスケット内で３００１　Ｌ−１１・当
シロ００ｄの市水で遠心洗浄した。結晶の純度はＩ、−
１１・９５嗟であシ、又、溶液の透過率は９４悌であり
九。最初の晶析母液はＬ−Ｅｌ＠３４１／ｌ含有してお
シ、これを減圧下濃縮晶析を行い、Ｌ−！１・濃度１０
０１／ｌとした。そのスラリー全攪拌機付き晶析槽に移
し、１０℃まで冷却晶析を行り九・その２番結晶スラリ
ーをバスケット型遠心分１ｌｌｉ機で母液から分離しさ
らに結晶ケーキ３０ｇＬ−１１・当り１０Ｒｔの市水で
遠心洗浄した。
１番結晶と２番結晶の合計Ｌ−１１・収率はプロス中０
Ｌ−１１・含有量に対して％９４．３俤であり九。
尚、限外濾過処理のみでＤ剤貫流をしない場合の結晶純
度は９２チ、収率８９慢、溶液の透過率３４ｇ６であり
た。
父、遠心分離盤除菌液ｔ−Ｄ剤貫流した場合の結晶純度
は８７鳴、収率９０−１溶液の透過率７２チでありた。
（比較例２ｍ） 実施例２で示した方法で調製された発酵液の上澄液を強
酸性カチオン交換樹脂（Ｎａ型）を充填し九カラムに通
液し、　Ｌ−１１・を吸着させたう次に、Ｌ−！１・ｔ
−０，５Ｎ水酸化ナトリウム溶液で溶出した。
この溶出液を実施例２と同じ濃縮及び晶析方法で処理し
た。得られた結晶純度は、Ｌ−Ｔｌ・９２％で、透過率
は４９チであっ九。
（比較例２ｂ） 実施例２で示した方法で調製された発酵液の上澄液を２
７１水酸化ナトリウム溶液を使りてＰＨ５，５に調整し
友。次に、イオン交換樹脂処理をせずに実施例２に示し
たｌ！！縮及び晶析方法で直接処理し九。こうして得ら
れた結晶純度は、！、（１・８７僑で、透過率は１２％
であり、又、結晶の粒度は小さい為、分離が固層であり
た。
（比較例２ａ） 実施例２で示した方法で調製された発酵液を−ｖ４４ｉ
した後、菌体を連続遠心分ｌｖ機で除去し念。
これにより透明でない上Ｕ液が得られ念。この上澄液を
実施例２と同様にして、　ＨＳ＊脂力２ムに通液し友。
この際、Ｉ／Ｍ脂カツカラム層に沈降物かたまり九為％
流速が徐々に低下した。従りて、逆洗する必要が生じた
。こうして得られたカラムからの溶出液は、実施例２に
記載した方法と同様にして濃縮及び晶析をした。取得し
た結晶純度は、Ｌ−１１・８２慢、透過率は６７優であ
りた。
（実施例３） Ｌ−Ｔｈｒ　５０１１７１　ｔ−含有する発酵液を３５
４塩酸を用いてｐＨ３゜０に′ｇ４ｇＭした。ＰＦＩ調
整プロスを限外濾過膜（公称分画分子量５ｏｏｏ）ｔ−
用いて一過を行い菌体、高分子物質の除去を行りた。
限外濾過膜によりて得られたｆ！ｉ明な透過液をＤ剤を
充填したカラムに通液し、プロス中に含有する色素成分
、ＵＶ物質ＱＤ剤に吸着除去した。Ｄ剤に対する通算負
荷量は、Ｌ−Ｔｈｒ　１．０００９／ｌ樹脂であった。
脱色された、ｊｊ流液ｔ−２７１苛性ソーダを用いてｐ
Ｈ５，６に調整し九のち、四−タリーエバポレーターで
減圧下５０℃で濃縮を行いＬ−Ｔｈｒ　＠度１２０１１
／ｌでｓＭ１Ｈ１Ｏ１（対Ｔｈｒ　）　ｔ−シードし、
更に晶析しながら、濃縮を行い、仕上げのＬ−Ｔｈｒ　
濃度は３５０１／ｌであり几。濃縮スラリーを攪拌機付
き晶析槽に移し、プログラムコントロールにより、５０
℃から１０℃まで冷却晶析を行−）た。このスラリーを
バスケット型遠心分離機により結晶と母液に分離し九。
結晶のケーキをバスケット内で３００１　Ｌ−Ｔｈｒ当
、９１５０Ｍｔの市水で遠心洗浄を行り九・ 結晶の純度はＬ−Ｔｈｒ　９７　慢以上であり、ホそセ
リン２４であり九。Ｌ−〒ｈｒ収率は、ブロス中のＬ−
Ｔｈｒ含景に対して８３％であり九。
（実施例４） Ｌ−Ｍａｌ　６５ｇ／ｌｔ−含有する発酵液ｔ−３５１
１塩酸を用いて−１３，０に調整した。−１ｌ１１！１
１ツ四スを限外Ｆ過膜（公称分画分子量６０００）を用
いて濾過を行い、菌体、高分子物質の除去を行りた。
限外濾過膜によりて得られた澄明な透過液ｔ−Ｄ剤を充
填し九カラムに通液しプロス中に含有する色素成分、Ｕ
Ｖ物質をＤ剤に吸着して除去したＯＤ剤に対する通算負
荷量は、Ｌ−Ｖａｌ　１＊２００１１／ｌ　−樹脂であ
り危。
脱色した貫流液をロータリーエバポレーター−で減圧下
５０Ｃで濃縮晶析を行い、仕上げのＩ、−Ｖａ　１濃度
は２００　ｆｉ／ｌであった。濃縮スラリーを２７チ苛
性ソーダでｐＨ５，６に？Ｊ！４整し九のち、攪拌機付
き晶析槽に移しプログラムコントロールにより５０℃か
ら１０℃まで冷却晶析を行う。このスラリーをバスケッ
ト製遠心分ｐｍ＠によ多結晶と母液に分離し九ゆ ！晶のケーキをバスケット内で２４０　ｆｉ　Ｌ−Ｖａ
ｌ当、９５０Ｗ！Ｌｔの市水で遠心洗浄した。結晶の純
度はＬ−Ｖａｌ　９６−以上であった。
最初の晶析母液はＬ−Ｖａｌ　５１１１／ｌ含有してお
シ１これを減圧下５０℃濃縮晶析を行い、Ｌ−Ｖａｌ　
１００ｆＪ／ｌとした。そのスラリーを攪拌機付き晶析
槽に移し１０℃まで冷却晶析を行り九。その２番結晶ス
ラリーをバスケット型遠心分離機で母液から分離し、更
に結晶ケー＊　３０１　Ｌ−Ｍａｌ当り１０１ＲＩの市
水で遠心洗浄した。
１４ｔｒ結晶と２番結晶合計のＬ−Ｖａ　１収率はプロ
ス中のＬ−ｖａｌ含有量に対して、９１．３９Ｇであっ
た。
（実施例５） Ｌ−Ｈｌｉ　２３　Ｉｌｌ　ｔ”含有する発酵液ｆｔ３
５１塩酸を用いて−１３，０にｖ４ｅｔ、、た。−１調
幣プロスを限外Ｐｉ膜（公称分画分子ｆ６０００）ｔ−
用いて濾過を行い菌体、高分子物質の除去を行りた。
限外濾過膜によりて得られた澄明な透過液ｔ−Ｄ剤を充
填したカラムに通液しブロム中に含有する色素成分、Ｕ
Ｖ物質ｔ−Ｄ剤に吸着除去した。Ｄ剤に対する通算負荷
量は、Ｌ−Ｈｌｍ　９０ＯＮ／ｊ−Ｒでありｔ。
脱色された貫流液をロータリー二ノダ４レータ−で減圧
下５０℃でａ縮を行い、仕上げのＬ−１１−濃度は２５
０１１／ｌでありた。
濃縮スラリーを攪拌付龜晶析！ｉ！ＩＫ移し、グログ２
ムコントロールにより、５０℃から１０℃まで冷却晶析
を行りた。このスラリーをノ櫂スケット型遠心分Ｉｍ＋
ＩＡによＪ＞Ｌ−Ｈｌａ・ＨＣｔ・Ｈ２０結晶と母液に
分離した。
結晶のケーキをバスケット内で４００１　Ｌ−Ｈｌａ・
ＨＣＡ−Ｈ２Ｏ当り８０ｍ１の市水で遠心洗浄した。
結晶の純度はＬ−Ｈｌａ　９９　’４以上であり、Ｌ−
Ｈ１ｇ収率はプロス中のＬ−Ｈｌ　ｍ含量に対し８２チ
であっ九。
（実施例６） Ｌ−Ｔｒｐ　ｋ　２０１／ｌ含有する発酵液１６０４　
Ｈ２ＳＯ４を用いて、ＩＩ（４，０にＩ／ｌ整後、限外
濾過膜（公称分画分子量６，０００、−リスルホン膜）
ｔ−用いて濾過し、菌体、高分子物質の除去を行なった
。
限外濾過によりて得九溌明な透過液を、Ｄ剤（メタツェ
エレンジアミンとレゾルシンをホルマリンで縮合した両
性イオン交ｙＡＭ脂。）を充填したカラムに通液し、Ｌ
−Ｔｒｐ関連成分の着色物質の除去を行なった。この際
に、Ｌ−Ｔｒｐの一部が吸着されるが脱イオン水で回収
を行なった。Ｌ−Ｔｒｐの通算負荷量は５０（１＃−樹
脂であり九。
噌脂処理された貫流液と水弁液を合せて５悌ＮａＯＨを
用いて−（４にｖ４ｊｉ後、攪拌機つきカランドリャ型
１１！ＩＲＭ缶で減圧下４５℃で１５０　！Ｉ／ｌまで
鏝縮晶折を行なつ九。濃縮スラリーを攪拌機つきジャケ
ット型晶析缶に移し、４５℃から５℃まで冷却晶析し次
。
冷却スラリ・−をバスケット型遠心分離機で結晶と母液
に分離した。結晶ケーキはバスケット内でＬ−Ｔｒｐ　
１００　ｋｌ当り９０１の脱イオン水で遠心洗浄し次。
かき取りた結晶′ｆ：Ｌ−Ｔｒｐ　１００り当り４００
１の脱イオン水で、攪拌機つきジャケット型晶析缶でス
ラリー化し、２０℃で１時間攪拌後）々スケット型遠心
分離機で結晶と母液に分離した。
結晶ケーキはバスケット内でＬ−Ｔｒｐ　１００ゆ当シ
９０１の脱イオン水で遠心洗浄した。かき取りた結晶は
囲段型乾燥器で減圧下４０℃で乾燥した。
収率は７２係でありた。Ｌ−Ｔｒｐの含量は９９．９俤
で、他のアミノミ！類は０．０１１以下であり九。結晶
ＩＩを脱イオン水１００Ｒｔに溶解した液の透過率は９
３慢であった。
（比較例６ｍ） Ｔ、−Ｔｒｐ　１に２０１／ｌ含有する発酵液を６０１
）１．ＳＯ２を用イテｐＨ４，０ＫＡｌｌ！！後、限外
濾過＆Ｉ　（公称分ａｊｉ分子量６，０００　、　／リ
スルホン膜）ｔ−用いて濾過し。
菌体、高分子物質の除去を行なり九。
限外Ｆ遇によって得た澄明な透過液を攪′拌機りき力２
ンドリャ型濃縮缶で減圧下４５℃でｌｏ。
１／ｌまで濃縮晶析を行りた。濃縮スラリーを攪拌機つ
きジャケット型晶析缶に移し、４５℃から５℃まで冷却
晶析した。
このスラリーをバスケット型遠心分離機で結晶と母液に
分離した。結晶ケーキはノ肴スケット内でＬ−Ｔｒｐ　
１００　ｋｌ当Ｆ）９０１の脱イオン水で遠心洗浄した
。かき取りた結晶ｔ−Ｌ−Ｔｒｐ　１００ｋｌ当り４０
０！の脱イオン水で、攪拌機つきジャケット型晶析缶で
スラリー化し、２０℃で１時間攪拌後バスケット型遠心
分離機で結晶と母液に分離した。
結晶ケーキはバスケット内でＬ−〒ｒｐｌｏｏｋｇ当シ
９０ノの脱イオン水で遠心洗浄した。かき取りた結晶は
棚段型乾燥器で減圧下４０℃で乾燥した。
収率は６６チであ−）次。Ｌ−Ｔ　ｒ　ｐの含量は９８
２ｍ！で、他のアミノ酸類は０．１１以下でありた。結
晶１ｇｔ脱イオン水１００ｎｔに溶解し友液の透過率Ｆ
ｉ９．２　％でありた・ 更に以下のｉ＃Ｉ製を行なった。リスラリ−洗浄し７？
、結晶ｔ−Ｌ−Ｔｒｐ　１００　ｋｇ当、９１．０００
ノの脱イオン水でスラリー化後３５℃まで加熱し、６０
１Ｈ２Ｓｏ４でｐ）１２．０に調整溶解した。溶解液に
活性炭をＬ−Ｔｒｐｌｏｏに２当、９２０に＃添加して
１時間攪拌を続けた。
その後、−過し活性炭ケーキとＦ液にＦ別した。
戸液は３５℃に加熱しながらｌＯ慢ＮａＯＨで徐々にｐ
Ｈ６，Ｏｆで中和して結晶を析出させた。引き続きスラ
リーｔ−５℃まで冷却し友。
冷却スラリーをバスケット型遠心分離機で結晶と母液に
分離し友。結晶ケーキはバスケット内でＬ−Ｔｒｐ１０
０に＃当り、９０ノの脱イオン水で遠心洗浄した。かき
取り九結晶ｔ？Ｌ−Ｔｒｐ　１０　ｏｋ！ｇ当り４００
１の脱イオン水で、攪拌機つきジャケット型晶析缶でス
ラリー化し、２０℃で１時間攪拌後バスケット型遠心分
離機で結晶と母液に分離した。
結晶ケーキはバスケット内でＬ−Ｔｒｐ　１００ゆ当〕
９０１の脱イオン水で遠心洗浄し念。かき取りた結晶は
棚段型乾燥器で減圧下４０℃で乾燥した。
収率は７６俤であり九。Ｌ−Ｔｒｐの含量は９９．１−
でありた。他のアミノ！！！類は０．０５嘔以下であり
た。結晶１２を脱イオン水１００ｄに溶解した液の透過
率は２０．５１であった。
（比較例５ｂ） Ｌ−Ｔｒｐ　２０１／ノを含有する発酵液１に６０％■
２Ｓ０４を用いてｐＦ（４，Ｏに調整後、遠心沈降分ｍ
機で菌体を遠心沈降分離し念。除菌液をカチオン交換樹
脂（Ｃ１：Ｒ、架橋度４　％　ｊ　Ｎａ型）ｔ−充填し
たカラムにＬ−Ｔｒｐの通算負荷が１５０ｇ／Ｌ−Ｈに
なるまで通液してＬ−Ｔｒｐの吸着を行なり九。吸着し
九Ｌ−Ｔｒｐは。
溶離槽のＰ）Ｉｔ　２７　係ＮａＯＨでｐＨ１２，５か
ら１３．０にコントロールしつつ、カラム下部から樹脂
を適度に流動させながら通液し、溶離液はカラム上部か
ら引抜き溶離槽へ戻しつつ２時間循環して溶離を行なり
九。循環終了後０．５　ｆｂ　ＮａＯＨで押液を行なり
九。
Ｌ−Ｔｒｐ　ｌｋ高濃度に含有する溶離液部を攪拌機つ
きジャケット型晶析缶に移し、４５℃に加熱後６０　＃
　Ｈ，ＳＯ４を用いて中和晶析を行ない更に５℃まで冷
却晶析した。
冷却スラリーをバスケット型遠心分離機で結晶と母液に
分離した。結晶ケーキはバスケット型遠心分離機内でＬ
−Ｔｒｐ　１００ゆ当シ９０４の脱イオン水で遠心洗浄
した。かき取った結晶ｔ−Ｌ−Ｔｒｐ１００に＃当、ｊ
７４００７の脱イオン水で、攪拌檎つきジャケット型晶
析缶でスラリー化し、２０’Ｃで１時間攪拌技バスケッ
ト型遠心分離機で結晶と母液に分離した。結晶ケーキは
バスケット内でＬ−Ｔｒｐ１００呻当Ｆ）９０１の脱イ
オン水で遠心洗浄した。
かき取った結晶は棚段渋乾燥器で減圧下４０℃で乾燥し
た。収率は６２−でありた。Ｌ−Ｔｒｐの含量は９９．
０係であった。他のアミノ酸類はｏ、０５憾以下であり
た。結晶１１ｔ−脱イオン水１００Ｒｔに溶解した液の
透過率は１５慢であった。更に常法により精製しても透
過率はほとんど向上しなかった。
表−１に実施例−１，２，３の透過率の一覧表を示し九
。υＦ−Ｄ剤の組合せによる透過率の改善効果が一目瞭
然である。
表−１ 処理法　　　　ＵＦ４−Ｄ剤　　　ＵＦ　　　遠心沈降
子〇ＥＲ透過率　　　　９３．０係　　　９．２％　　
　１５．０％Ｂ９　　　　７２Ｔｏ　　　　６６１　　
　６２１再結納晶 透過率　　　　　　　　　２０．５　　　　−収率　　
　　　７６チ　− （実施例７） Ｌ−Ｖａｌ　　５５１／ｌ　ｔ−含有する発酵液３．８
４１（Ｌ−Ｖａｌ　　２１１５１含有）を再生洗浄済の
限外濾過膜（公称分画分子量１ｏ、ｏｏｏ）を用いて濾
過し、菌体及び高分子物質を除去し念。
得られた清澄液はｐＨ７，５であり、これを、弱塩基性
イオン交換樹脂イオナック入−３６５１，Ｏｌ　ｔ−充
填したカラムに通液し、アニオン不純物を除去した。Ｌ
−Ｖａ　１の樹脂に対する通算負荷量は２０５ｇ／ｌｔ
−樹脂でありた。カラムからの貫流液のｐ）Ｉは８．２
であった。
次に、との貫流液をロータリーエバポレータで減圧下５
０℃で濃縮し、アンそニアを除去し友。
この操作によりＬ、−Ｍａｌ濃度は７５１／ｌとなり九
。
この濃縮液に３５嗟塩酸を加えて−１，０に調整し、こ
れを、再度ロータリー二パデレータ−ｔ”Ｆ［下７０℃
で６８０ｍの溶液量まで濃縮し、Ｌ−Ｖａｌ議度が３０
０１／　ｌ　　ｅ　　Ｌ−Ｍａｌ　ｔとして２０４Ｉを
得た。
次に、この濃縮液を攪拌磯付き晶析缶に入れた後、Ｌ−
ｖａｌ−）ＩＣ／！−Ｈ２Ｏとして晶析する為に、３５
チ塩酸２０４１１ｔを徐々に添加した。塩酸添加終了後
、温度を７０℃から１０℃にして、その冷却速度をコン
トロールしつつＡ析した。
得られ几ス２リーを、バスケット凰遠心分離機にチャー
ジし、結晶と母液を分離した。結晶ケーキは、２０チ塩
酸水溶液５１　Ｒｔ（Ｌ−Ｖａｔ　１００１当ｔ、　１
３３１．５　ｍｌ　）を用いて遠心洗浄した。
得られたＬ−Ｖ；１・ＨＣｔ−Ｈ２０結晶量は、ウェッ
ト量テ２８８．８１　＊　Ｌ−ｖａｌ換算で１７９．３
Ｆであり　ｆｅ、　ｏ　発酵液からの回収率は、８５幅
となり九。
（実施例８） Ｌ−！１・２４！ｌ／ｌを含有する発酵液３．５５１　
（ｔ−ｔｌ・８５１１含有）ｔ−１再生洗浄済のセルロ
ース限外濾過膜（公称分画分子ｉ　１０．０００　）　
ｔ”用いてＰＡをし、菌体及び高分子物質を除去し友。
得られた清登液は−７，４であル、これを弱塩基性イオ
ン交換樹脂イオナックＡ−３６５１，Ｏｌ　’ｅ充填し
九カラムに通液し、アニオン不純物を除去した。Ｌ−Ｔ
ｌ・の樹脂に対する通算負荷量は、１３９１／ｌ−樹脂
であり九。カラムからの貫流液は−８，２でありた。
次に、この貫流液をロータリーエバポレータで減圧下５
０℃で濃縮し、アンモニアを除去した。
この操作によりＬ−４１・濃度は４０１１／ｌとなった
。
この濃縮液に３５１塩酸を加えてＰＩ（１，０に調整し
、これを再度ロータリーエバポレータでＦＪＩＥ下７０
℃で３４０Ｒ６（ＤＷＪ液量まで濃縮し、Ｉ、−１１＠
濃度が２４０１／ｌ　ｓ　Ｌ−ｆｌＩ量として８２９を
得た。
次に、この濃縮液を攪拌機付き晶析缶に入れた後、Ｌ−
Ｉ　１　＠　・ＨＣＬ−Ｈ２ＯトＬ　テ晶析”ｔ”　ル
為に３５１塩酸２０４ｙｄ２徐々に添加した。塩酸添加
終了後、７０℃から１０℃にして、その冷却速度をコン
トロールしつつ晶析した。
得られ友スラリーをバスケット型遠心分離機にチャージ
し、結晶と母液を分離した。結晶ケーキは、２０憾塩酸
水溶液３Ｑｍ（Ｌ−１１・１００ｇ当たり４２ｍ１）ｔ
−用いて遠心洗浄し次。
得られたＬ−Ｅ　１　ａ　・ＨＣＬ−Ｈ２０゛結晶景は
、ウェット量で１３４．７　！ｉ／　、　Ｌ−１１・換
算で７１．４ＪＦでありた。発酵液からの回収率は、８
４慢となった。
（実施例９） Ｌ−Ｇｉｎ　４２９／ｌ含有する発酵液ｔ−３５憾塩酸
を用いて−１５，６に調整した。これを平膜凰限外濾過
膜（公称分画分子ｔｃｓｏｏｏ）を用いて一過を行い、
菌体及び高分子物質の除去を行なりた。得られた澄明な
透過液を１弱塩基性アニオン交換樹脂（アンバーライト
　ｏｔＡ−ａｓ　）　を充填した力２ムに通液し、発酵
液中に存在する色素物質、Ｌ−Ｇｆｎ　＋ＰＣＡ及びそ
の他の陰イオンを吸着除去した・樹脂に対する負荷量は
樹脂ＩＩｌあたシＩ、−Ｇｌｎ　５００１でありｔ、留
脂処理された貫流液を、ロータリー二ノ兜ボレーターで
減圧下４５℃で濃縮晶析を行りた。濃縮後のＬ−０１ｍ
濃度は２８０ｇ／ｉｔでありた・濃縮スラリーを攪拌機
付きの晶析槽に移し４５℃から１０℃まで冷却晶析番付
い、このスラリーをバスケット型遠心分離機により母液
と分離し次。
結晶のケーキをノ青スケット内で１００ｇの結晶に対し
、５０ｔＩＬｔの市水で遠心洗浄した。
この結晶の純度はＬ−Ｇｉｎ　９７　％であシ、発酵液
からの回収率は８７．５１でありた。
〔発明の効果〕
以上、述べた如く１本発明によれば、発酵液。
酵素液又はその＠縮液の限外濾過膜処理次いで、イオン
交換置脂又は吸着樹脂処理という簡便な処理フローで容
易にＬ−アミノ酸を回収できることから、産業上の利用
価値が高いものである。
【図面の簡単な説明】
第１図は、結晶成長に関する発酵液中の不純物の影７ｆ
ｔ−示したものである。この図は結晶成長は、発酵液中
の不純物によって阻害されることを示している。 第２図は、Ｄ剤と活性炭の−に対する脱色性能を示し念
ものである。 ＠３図は、吸着剤の着色溶液の通液量に対する脱色曲線
である。 第４図及び第５図は、Ｄ剤の脱色曲線である。 第６図は、発酵液中における色素物質の形成フローであ
る。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、発酵法又は酵素法により得られたＬ−アミノ酸溶液
    からＬ−アミノ酸を回収する際に、発酵液、酵素液又は
    その濃縮液を、 （１）限外濾過膜処理 その後、 （２）イオン交換樹脂又は吸着樹脂処理 により、不純物を除去することを特徴とするＬ−アミノ
    酸の回収方法。 ２、Ｌ−アミノ酸の発酵液、酵素液又はその濃縮液のＬ
    −アミノ酸濃度が下記の範囲である請求項１記載の方法
    。 Ｌ−Ｉｌｅ：２０−４０ｇ／ｌ Ｌ−Ｔｒｐ：２０−２１ｇ／ｌ Ｌ−Ａ１ａ：９５−１３０ｇ／ｌ Ｌ−Ｖａｌ：４０−７０ｇ／ｌ Ｌ−Ｔｈｒ：４０−９０ｇ／ｌ Ｌ−Ｈｌａ：１５−４０ｇ／ｌ Ｌ−Ｐｈｅ：２０−３０ｇ／ｌ Ｌ−Ｇｌｎ：３０−５０ｇ／ｌ ３、限外濾過工程における条件が、ｐＨ２．５〜８．０
    、温度２０〜７０℃、流束７０ｌ／ｍ＾２／ｈ〜１５０
    ｌ／ｍ＾２／ｈ、入口圧４．０〜６．０バール、出口圧
    １．０〜２．０バールである請求項１記載の方法。 ４、イオン交換樹脂が、弱塩基性陰イオン交換樹脂及び
    両性イオン交換樹脂のいずれかを含むものである請求項
    １記載の方法。 ５、イオン交換樹脂又は吸着樹脂処理工程における条件
    が、ｐＨ２．５〜８．０、温度２０〜７０℃、空間速度
    ＳＶ３〜５である請求項１記載の方法。 ６、イオン交換樹脂又は吸着樹脂処理工程におけるＬ−
    アミノ酸の樹脂負荷量が下記の範囲である請求項１記載
    の方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ ７、弱塩基性陰イオン交換樹脂が、第１、第２又は第３
    級のアミノ基を有するポリスチレン又はポリアクリロニ
    トリルを母体とした樹脂のいずれかもしくは混合物を含
    むものである請求項４記載の方法。 ８、（２）項により得られるＬ−アミノ酸含有溶液を濃
    縮及び冷却してＬ−アミノ酸結晶を分離することを特徴
    とする請求項１記載の方法。
JP63198725A 1987-08-10 1988-08-09 アミノ酸の回収方法 Expired - Lifetime JP2638971B2 (ja)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/083,590 US4997754A (en) 1987-08-10 1987-08-10 Process for recovering L-amino acids from fermentation liquors containing them
US07/083,590 1987-08-10
US07/211,268 US5017480A (en) 1987-08-10 1988-06-24 Process for recovering L-amino acid from fermentation liquors
US08/211,268 1988-06-24
US8/211,268 1988-06-24
US7/83,590 1988-06-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH01112991A true JPH01112991A (ja) 1989-05-01
JP2638971B2 JP2638971B2 (ja) 1997-08-06

Family

ID=26769465

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP63198725A Expired - Lifetime JP2638971B2 (ja) 1987-08-10 1988-08-09 アミノ酸の回収方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US5017480A (ja)
JP (1) JP2638971B2 (ja)
KR (1) KR950009318B1 (ja)
DE (1) DE3827159C2 (ja)
FR (1) FR2619380B1 (ja)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008001837A1 (fr) * 2006-06-28 2008-01-03 Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. Procédé de purification d'un oligopeptide
JP2008000136A (ja) * 2006-06-21 2008-01-10 Degussa Gmbh ホールセル−生体内変換からの反応溶液の後処理
WO2014065364A1 (ja) * 2012-10-25 2014-05-01 東レ株式会社 有機酸またはその塩の製造方法
JP2024545770A (ja) * 2021-12-24 2024-12-11 シージェイ チェイルジェダン コーポレーション 発酵液からアミノ酸含有製品の製造方法

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2668956B2 (ja) * 1988-07-11 1997-10-27 味の素株式会社 Ｌ−グルタミンの精製方法
DE4010641C2 (de) * 1990-04-03 1997-05-22 Bayer Ag Farbbildner-Mischung für druck- und wärmeempfindliche Aufzeichnungssysteme
US5491259A (en) * 1994-09-13 1996-02-13 The Dow Chemical Company Process to produce aminocarboxylic acids containing low residual salt
JP3617091B2 (ja) * 1994-11-30 2005-02-02 味の素株式会社 塩基性アミノ酸の精製方法
DE19824614A1 (de) * 1998-06-02 1999-12-09 Dyneon Gmbh Verfahren zur Rückgewinnung von fluorierten Alkansäuren aus Abwässern
DE19933696A1 (de) * 1999-07-17 2001-01-18 Dyneon Gmbh Verfahren zur Rückgewinnung fluorierter Emulgatoren aus wässrigen Phasen
AU2001241095A1 (en) * 2000-03-13 2001-09-24 Hisamitsu Pharmaceutical Co. Inc. Preventives and/or remedies for hyperphosphatemia
EP1580277A4 (en) * 2002-12-27 2007-04-18 Ajinomoto Kk METHOD FOR THE PRODUCTION OF AMINO ACID OR ITS SALT BY MEANS OF PILLAR METHOD AND PRODUCTION DEVICE THEREFOR
US20060035310A1 (en) * 2004-08-13 2006-02-16 Millipore Corporation Media for recovery of microorganism in the presence of antibiotics
DE102005017507A1 (de) * 2005-04-15 2006-10-19 Basf Ag Verfahren zur Gewinnung einer basischen Aminosäure aus einer Fermentationsbrühe
US20080015304A1 (en) 2006-07-13 2008-01-17 Klaus Hintzer Aqueous emulsion polymerization process for producing fluoropolymers
US7671112B2 (en) * 2005-07-15 2010-03-02 3M Innovative Properties Company Method of making fluoropolymer dispersion
GB2430437A (en) * 2005-09-27 2007-03-28 3M Innovative Properties Co Method of making a fluoropolymer
CN101605728B (zh) * 2007-02-16 2013-07-24 3M创新有限公司 用于从水中去除含氟化合物的系统和方法
US20080264864A1 (en) * 2007-04-27 2008-10-30 3M Innovative Properties Company PROCESS FOR REMOVING FLUORINATED EMULSIFIER FROM FLUOROPOLMER DISPERSIONS USING AN ANION-EXCHANGE RESIN AND A pH-DEPENDENT SURFACTANT AND FLUOROPOLYMER DISPERSIONS CONTAINING A pH-DEPENDENT SURFACTANT
JP5748191B2 (ja) * 2010-04-14 2015-07-15 日本化薬株式会社 エポキシ化合物の製造方法
US9266818B2 (en) 2012-02-10 2016-02-23 Council Of Scientific And Industrial Research Process for purification of free bio-amino acids
CN111187178B (zh) * 2020-01-13 2023-06-23 廊坊梅花生物技术开发有限公司 谷氨酰胺晶体的制备方法
CN113828157A (zh) * 2021-11-01 2021-12-24 同舟纵横（厦门）流体技术有限公司 一种谷氨酰胺提取液高压浓缩的方法
CN113968794B (zh) * 2021-12-02 2024-07-12 大连医诺生物股份有限公司 一种分离纯化谷氨酰胺的工艺方法
EP4317426A1 (en) 2022-08-04 2024-02-07 Dynveo New channel for glycine synthesis

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5467093A (en) * 1977-11-07 1979-05-30 Ajinomoto Co Inc Purification of amino acid
JPS58895A (ja) * 1981-06-26 1983-01-06 Mitsui Toatsu Chem Inc Ｌ−トリプトフアンの製造方法
JPS5914794A (ja) * 1982-07-16 1984-01-25 Ajinomoto Co Inc 限外「ろ」過法
JPS60207593A (ja) * 1984-03-31 1985-10-19 Ajinomoto Co Inc 発酵液から塩基性アミノ酸の分離方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3127443A (en) * 1958-11-21 1964-03-31 Dow Chemical Co Decolorization of amino acids
FR1323359A (fr) * 1962-05-25 1963-04-05 Commercial Solvents Corp Procédé de purification du glutamate monosodique
US4276224A (en) * 1978-06-07 1981-06-30 Ciba-Geigy Corporation Anthraquinone sulphonamide compounds and preparation
DE3326633C1 (de) * 1983-07-23 1985-01-03 Kali-Chemie Ag, 3000 Hannover Verfahren zur Gewinnung bestimmter Aminosäure-Fraktionen und deren Verwendung zur Gewinnung einzelner Aminosäuren
JPS6078588A (ja) * 1983-10-04 1985-05-04 Ajinomoto Co Inc 限外濾過流束改良法
US4523999A (en) * 1983-12-16 1985-06-18 Ajinomoto Co., Inc. Ultrafiltration method
US4734401A (en) * 1986-03-17 1988-03-29 W. R. Grace & Co. Process for spray drying amino acid compositions
US4886889A (en) * 1986-05-16 1989-12-12 Henkel Corporation Process for recovery of an amino acid from aqueous mixtures thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5467093A (en) * 1977-11-07 1979-05-30 Ajinomoto Co Inc Purification of amino acid
JPS58895A (ja) * 1981-06-26 1983-01-06 Mitsui Toatsu Chem Inc Ｌ−トリプトフアンの製造方法
JPS5914794A (ja) * 1982-07-16 1984-01-25 Ajinomoto Co Inc 限外「ろ」過法
JPS60207593A (ja) * 1984-03-31 1985-10-19 Ajinomoto Co Inc 発酵液から塩基性アミノ酸の分離方法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008000136A (ja) * 2006-06-21 2008-01-10 Degussa Gmbh ホールセル−生体内変換からの反応溶液の後処理
WO2008001837A1 (fr) * 2006-06-28 2008-01-03 Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. Procédé de purification d'un oligopeptide
WO2014065364A1 (ja) * 2012-10-25 2014-05-01 東レ株式会社 有機酸またはその塩の製造方法
JP2024545770A (ja) * 2021-12-24 2024-12-11 シージェイ チェイルジェダン コーポレーション 発酵液からアミノ酸含有製品の製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
KR950009318B1 (ko) 1995-08-19
FR2619380A1 (fr) 1989-02-17
DE3827159C2 (de) 1999-11-25
US5017480A (en) 1991-05-21
DE3827159A1 (de) 1989-03-30
JP2638971B2 (ja) 1997-08-06
KR890003956A (ko) 1989-04-19
FR2619380B1 (fr) 1991-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH01112991A (ja) アミノ酸の回収方法
US4855494A (en) Process for producing citric acid
Dechow et al. Separation and purification techniques in biotechnology
CN114874062B (zh) 用于提纯芳香族氨基酸的方法
EP3688005A1 (en) Process for the purification of a neutral human milk oligosaccharide (hmo) from microbial fermentation
Boonmee et al. Improved lactic acid production by in situ removal of lactic acid during fermentation and a proposed scheme for its recovery
CN101503366B (zh) 膜分离与工业色谱分离联用提取分离l-缬氨酸的方法
CN101497574B (zh) 膜分离与工业色谱分离联用提取分离l-异亮氨酸的方法
AU2017342361B2 (en) High purity lactose
AU2021370933A1 (en) Process for the purification of an acidic human milk oligosaccharide from fermentation broth
US4584399A (en) Purification of L-phenylalanine
US4997754A (en) Process for recovering L-amino acids from fermentation liquors containing them
US4543261A (en) Separating whey components into high purity products by ion exchange
JPH08157433A (ja) 塩基性アミノ酸の精製方法
CN112778358A (zh) 一种体外多酶体系制备的小分子化合物的分离提取方法
EP0196782A1 (en) Purification and recovery of phenylalanine
JP4103172B2 (ja) 高純度エリスリトール結晶の製造方法
JPS5930443B2 (ja) 膜分離方法
JPS63145288A (ja) 改良されたフイチン酸の製造方法
JPS604168A (ja) トリプトフアンの晶析法
JP2001190244A (ja) スピルリナからの青色色素の製造方法
JPH03147794A (ja) Ｌ‐トリプトファンの分離法
DK202330368A1 (en) Separation of human milk oligosaccharides from a fermentation broth
CN121226467A (zh) 一种从胞二磷胆碱酶催化反应液中分离纯化胞二磷胆碱的方法
CN105418807A (zh) 一种用陶瓷膜去除粗品肝素钠中杂质的方法

Legal Events

Date Code Title Description
EXPY Cancellation because of completion of term
FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090425

Year of fee payment: 12