JPH01118769A - 抗原特異的な抗体の一段階測定法およびそれに適する試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はある種の抗原に特異的でありかつイムノグロブ
リンクラスの１ｍである抗体の免疫学的検出ならびに測
定法に関する。この方法はイムノグロブリンクラスＡ、
　Ｍ、　ＤまたはＥの一種である抗体の高感度かつ特異
的な検出および測定に適する。

イムノグロブリンは外来物質（抗原例えば、病原体のタ
ンパク質、細面性多糖類、血清タンパク質、組織タンパ
ク質あるいはその他のイムノグロブリン）に対し生物体
の免疫系により形成される抗体である。イムノグロブリ
ン分子は４個のポリペプチド鎖の１つまたはそれ以上の
セットから成っており、分子量それぞれ約５３，０００
ダルトンを有する２個のＨ鎖および分子量それぞれ約２
２，０００ダルトンを有する２個のＬ鎖が、クスルフイ
ツド結合により連結されている。

イムノグロブリンは一般にＧ、　Ａ、Ｍ、　ＤまたはＥ
に分類され、従ってＩｇＧ　、　ＩｇＡ　、　ＩｇＭ　
、　ｔｇＤまたはＩｇＥで示される。これら５種のイム
ノグロブリンクラスはガンマ、アルファ、ミュー、デル
タおよびイプシロン鎖と呼ばれるＨ鎖の抗原決定基が相
異する。さらに、ＩｇＧ　、　ＩｇＡおよび工μではイ
ムノグロブリンサブクラスも存在する。

イムノグロブリンは抗原結合性質を保持したフラグメン
トまたは抗原結合性質を有しない７ラグメントに分解さ
れうる。抗原結合性フラグメントの例をあげればＦａｂ
　、　Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２フラグメントであ
る。抗原結合性質を有しないフラグメントの例をあげれ
ばＦｃおよびＦｃ’フラグメントである。

正常なヒトの血清中におけるイムノグロブリンの濃度は
ＩｇＣ）　８〜１６、工ｇＡ１．４〜４、ＩｇＭＱ、５
〜２、ＺｇＤｏ、０〜０．４そしてＩｇｇ　０．０００
０１７〜ｌ１１０００４５（ダ／１ｔｌ）である。

ヒト血清中においてはＩｇＧクラスのイムノグロブリン
が最も多量に存在する。１ｇＭクラスのイムノグロブリ
ンは感染後に非常に早期に出現し、従ってその測定が感
染性疾患の早期診断または急性感染症の診断に重要であ
るＯ ＩｇＡＩｇＥクラスノグロブリンは第２番目に多く出現
し、そして分泌される抗体では最も重要なものである。

ＩｇＤおよびＩｇＥクラスのイムノグロブリンはある種
の病的過程においては濃度が高まる。例えばＩｇＥはマ
スト細胞感受性化性質を有していて多数のアレルギー反
応の病因として重要な役割を演じている。ＩｇＤ抗体は
自己免疫疾患において見出される。

抗原特異的なイムノグロブリン、特にある種のイムノグ
ロブリンクラスの測定は寄生虫、細菌またはウィルスに
より惹起される特定の疾患を検出するのに特に重要であ
り、その場合急性疾患を全治した疾患から°区別できそ
して場合により予後判定を下すことが可能である。

イムノグロブリンの測定には多数の免疫学的方法が知ら
れている。イムノグロブリンを物理的にクラス分けする
方法例えば免疫拡散、免疫電気泳動または密度勾配遠心
分離は骨が折れ、不正確で妨害を受は易い。

抗原特異的なイムノグロブリンはイムノアッセイ法を用
いるいわゆる直接法で測定されうる。

その場合、測定すべき抗体クラスに対する結合アフイニ
テイを有する免疫成分を固形担体例えばヒトＩｇＭのμ
鎖に対する抗体に結合させ、そして抗原特異的なイムノ
グロブリンフラクションを標識された抗原により検出す
るか、または未標識抗原と抗原特異的な標識された抗体
この結合物として検出する。検出すべき抗体の濃度に正
比例するものである、固相に結合された標識された免疫
成分フラクションを測定する。

標識するには例えば螢光性および発色性物質あるいはラ
ジオアイソトープ、酵素、または免疫成分が負荷された
粒子例えをｆ赤血球１帽１ラテックス粒子が用いられる
・反応が起ったことを示すためＫは、用いられる抗原の
生物学的機能例えば溶血な用いることもできる。

従来法の欠点は、任意の個々のイムノグロブリンクラス
の抗原非特異的イムノグロブリンフラクションが固相上
の関連する抗体について抗原特異的フラクションと競合
することである。

それにより、たとえ抗原特異的な抗体フラクションが未
変化のままであってもそれらの量の比率の如何により異
なる結果を生ずる（かかる場合抗原非特異的イムノグロ
ブリンフラクションは５倍またはそれ以上のファクター
で変動しうる。

すべてのこれまで記載され引用されたいわゆる直接的お
よび間接的方法においては、固形担体上の免疫成分と検
体とを反応（インキュベーション）させたのち、および
検出用免疫成分この反応前Ｋ、結合されなかった物質を
洗い去ることが必須要件である。それゆえこれらの方法
は「２段階法」と呼ばれる。

従って、使用準備ずみの担体結合成分を用いるアッセイ
では少くとも２つの洗浄工程により相互に分離された少
くとも３種の反応工程（検体／第２の免疫成分／検出反
応）を必要とし、その場合各反応段階それ自体ある程度
の反応時間を必要とし、従ってそれらの合計が総アッセ
イ時間となる。

直接アッセイを短縮および簡素化し、・そして抗原特異
的な抗体７ラクシヨンの信頼し５る定量的測定を可能に
するために非抗原特異的なイムノグロブリンと抗原特異
的なイムノグロブリンこの間の競合を排除するという課
題が存在していた。

今驚くべきことに、検体の添加と標識された検出用免疫
成分の添加この間で洗浄を行うことなく、担体に結合し
た免疫成分、被分析物を含有する検体および標識された
検出用免疫成分を接触させることにより前記課題が解決
され５ることが見出された。

この「−段階法」は２つのありうる妨害を排除してはじ
めて可能となった。

第１には抗原特異的なＩｇＧ抗体の影響を排除し【、実
際の検出法を妨害することＫなろう抗原この反応を無く
すかまたはとるに足りないものとしなければならない。

この妨害は原則的にありうる、何故なら患者検体中にお
けるイムノグロブリンクラスＩｇＡ　、　ＩＫＭ　、　
Ｘｇ、ＥまたはＩｇＤから抗原特異的な抗体を測定する
に際し、大抵の場合抗原特異的なＩｇＧ抗体も同時にか
つ一般により高濃度で存在するからである。

第２にはりウマチ因子（ＲＦ）、すなわち種々のイムノ
グロブリンクラスに属するものであるＩｇＧに対する抗
体、の活性を抑制することである、というのはこのもの
は誤った結果をもたらしうるからである。ＲＦは固相担
体上の抗原に結合され、そしてＲＦそれ自体く結合する
抗原特異的なＩｇＧ抗原を介して結合されて偽陽性検出
反応を生ずるのでその結果過誤が起る可能性がある。

これら２種のありうる妨害は例えば検体に（例えば血清
）に抗ヒトＩｇＧ、ガンマ鎖（Ｂｅｈｒ　ｉｎｇｗｅｒ
ｋｅ社のｒｆｐ−吸着剤」）を添加することにより排除
できる。

本発明はイムノグロブリンクラスＡ、　Ｍ、　Ｄまたは
Ｅに対すご抗体またはかかる抗体のフラグメントが結合
されている固相を液体と接触させてそれＫより該液体中
のこのクラスのイムノグロブリンをこの固相に結合させ
、そしてこの固相を標識剤を場合により担持する抗原お
よび標識された抗体と、あるいは前記抗原カー標−識さ
れていない場合には前記抗原に対する標識された抗体７
ラグメントと接触させ一七して固相に結合した標識剤の
量からある抗原Ｉｃｅ異的でありかつ前記イムノグロブ
リンクラスの一つである抗体の量を測定して、ある抗原
に対して特異的でありかつイムノグロブリンクラスＡ、
　Ｍ％Ｄｆ。

たはＥの一種である抗体を免疫学的に測定するに当たり
、イムノグロブリンＧが固相に結合するのを、および場
合により抗原がイムノグロブリンＧに結合するのを阻止
する物質を添加して、固相な、測定すべき抗体を含有す
る液体、および場合により標識されていても良い抗原と
同時に接触させることを特徴とする方法に関する。

かかる物質の例をあげれば、ヒトイムノグロブリンＧの
ガンマ鎖に対する抗体（抗ヒト　ＩｇＧ。

ガンマ鎖）、集合したヒトまたは動物のＩｇＧまタハガ
ンマＦｃフラグメントに対する抗体、好ましくは抗ヒト
ＩｇＣ）、ガンマ鎖、である。これらの物質はまた作用
を増強するため組み合わせて使用することもできる。

かかる物質好ましくは抗ヒトＩｇＧ、ガンマ鎖（Ｂｅｈ
ｒｉｎｇｗｅｒｋｅ社のＲＦ’−吸着剤）は例えば検体
希釈用緩衝液中に、好ましくは（未希釈検体を基準とし
て）血清中の平均１５ｖ／ｄのＩｇＧを複合物形成させ
る量で添加することができる。

この措置により一段階法が可能となり、その場合検体は
従来法の二段階法（アッセイ希釈度１：１００〜１：２
００）に比較して３〜８倍高い希釈度で（例えば１ニア
００）アッセイされうる。

同時に前記した競合が事実上排除され、それＫより正確
で再現性のある測定が可能となりそしてより高い検出感
度が達成できた（第２表参照）。

本発明による方法では標識された抗原が使用されるのが
好ましい。

しかしながら、未標識抗原、およびこの抗原に対する標
識された抗体またはかかる抗体の標識されたフラグメン
トな使用することもできる。

標識するＫは例えば螢光性および発色性物質あるいはラ
ジオアイソトープ、酵素、または免疫成分が負荷された
粒子例えば赤血球またはラテックス粒子が用いられる。

反応が起ったことを示すためＫは、用いられる抗原の生
物学的機能例えば溶血な用いることもできる。

酵素が用いられるのが好ましい。

イムノグロブリンクラスＭに対する抗体、またはこのイ
ムノグロブリンこの反応性を保持したままのかかる抗体
のフラグメントを固相に結合させるのが好ましい。

本発明による方法はＢ型肝炎コアタンパク質、Ａ型肝炎
つィルス抗厚、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＭ）抗原、
風しんウィルス抗原またはサイトメガロウィルス抗原、
あるいは梅毒トレポネマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｐａｌ
ｌｉｄｕｍ）またはトキソプラズマゴンヂイ（Ｔｏｘｏ
ｐｌａｓｍａ　ｇｏｎｄｉｉ）抗原に対する抗体の測定
に用いられるのが好ましい。

本発明はさらに、少なくとも、ヒトイムノグロブリンク
ラスの１種に対する特異的な抗体が結合した担体、この
イムノグロブリンと特異的な標識された抗原、およびこ
の標識を検出または測定するための試薬からなる、本発
明方法を実施するための試薬にも関する。

かかる試薬は少なくとも、ヒトＩｇＭに対する特異的な
抗体が結合した担体、抗原、抗原特異的な標識された抗
体、およびこの標識を検出するための試薬からなるのが
好ましい。

本方法に必要な試薬のすべてを乾燥形で含有する一つの
エレメントからなるかかる試薬も好ましい。

固相用の担体物質として適当なものをあげれば、合成物
質例えばポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリアミドま
たはその他の合成−リマー、天然ポリマー例えばセルロ
ース、ならびに誘導体形成された天然ポリマー例えばア
セチルセルロースまたはニトロセルロース、ならびにガ
ラス、特にグラスファイバーである。

担体は球状、棒状、管状およびミクロアッセイプレート
の形態をとることができる。シート様構造物例えば紙片
、小プレートおよび膜も同様に適する。担体の表面は水
溶液に対して透過性であることもできるしまた不透過性
であってもよい。

好ましい担体はミクロアッセイプレートである。

本発明方法に適する固相は、抗体調製物を担体に不可逆
的に結合させ、ることにより形成される。「固相」なる
用語は本明細書においては担体それ自体のみならず免疫
化学的反応体が結合した担体にも用いられる。

本発明方法で意味する不可逆的結合は例えば以下の場合
に存在する。

１）本方法に用いられる試薬例えば標識された免疫試薬
、希釈溶液または緩衝溶液により分解されないものであ
る吸着性結合、 ２）免疫化学的（高度に親和性の高い抗゛体）あるいは
非免疫化学的に結合したスペーサーに仲介された生物親
和性結合、ここでスペーサーはビオチンとアビジンから
なるか、あるいはその他レセプターとりガントこの結合
からなることができる。

３）共有による直接結合、あるいは ４）二官能性の化学的スペーサーを介した共有結合。

水透過性担体が使用される場合は共有結合が好ましく、
また水透過性ならびに水不透過性担体が使用される場合
は吸着結合が好ましい。

ガンマ線で処理したポリスチレンとしての担体に抗体調
製物が直接吸着結合されるのが特に好ましい。

抗体の標識にはモノクローナル抗体またはポリクローナ
ル抗体、ならびに従来法により得られるその抗原結合性
７ラグメントも使用できる。

標識された抗原を調製するための抗原としては、それら
の調製法が従来技術文献に記載されている古典的に精製
されたタンパク質、合成ペプチｒまたは遺伝子工学によ
り調製されたタンパク質が適当である。

標識化は前記したマーカーについて従来法に記載されて
いる方法により行われる。

酵素としてのペルオキシダーゼを用いて抗体を標識する
場合は、過ヨウ素酸塩法（Ｊ、　Ｈｌｓｔｏｃｈｅｍ・
Ｃｙｔｏｃｈｅｍ、　１９７４．２２．１０８４〜１０
９０）またはＪ。

Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　（１９８３）　４　ｅ　２０
９〜３２７に記載される方法を用いることができ、これ
らにおいては相手をヘテロニ官能性試薬を用いて結合さ
せている。

ここに記載される本発明の一段階イムノアツセイは原則
的にはすでに以前に記載された直接的および間接的多段
階アッセイと同じで′ある。

本発明の新規な方法はそれらとは三つの点で好都合に墨
なる。すなわち 被分析物を含有する検体および標識された免疫学的試薬
を同時にインキュベーションすることによりインキュベ
ーション段階の一つおよび洗浄工程の一つが省略され、
そのことによりアッセイ操作がかなり簡素化されること
となった。

また実施例から分かるとおり、この−段階法によりアッ
セイＫかかる総時間が大きく短縮され、このことはこの
方法が実際上有利に実施されうると言う主要な利点の他
に病院での急性感染症の速やかな検出にとっても大へん
重要なことである。

第３に、検体を高度に希釈してアッセイすることがこの
一段階法により可能となったことで、それによりありう
る競合が排除でき、したがって抗原特異的なイムノグロ
ブリンの信頼しうる、再現性のある、かつ同時により検
出感度の高い測定が可能となった。

以下の実施例により本発明の態様を記載するが、本発明
はそれらに限定されるものではない。

実施例１ ヒト血清中のトキソプラズマ特異的なイムノグロデリ／
Ｍの測定 Ａ　ポリクローナル抗ヒトＩｇＭ（７）調製ヤイー抗ヒ
トＩｇＭはＭｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｔｏａｔｉ
ｃＡｎａｌｙｓｉｓ、　３版、１９８６、Ｘ巻、Ａｎｌ
ｉｉｇｅｎ５！　ａｎｄＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　１、主
編集者：　Ｈａｍｓ　Ｕｌｒｉｃｈ　Ｂｅｒｇｍｅｙｅ
ｒ。

ｐ、２９２〜３０８に記載されるようにして調製した。

Ｂ　トキソプラズマ抗原の調製 トキソゾラ身マコ０ンデイ（Ｔｏｘｏｐｌａａｍａ　ｇ
ｏｎｄｉｉ）寄生虫をマウス腹腔内で３日間増殖させた
。マウスを殺したのち、りん酸塩緩衝食塩水、ｐＨ７，
２、を用いて腹腔を洗浄することにより寄生虫を取得し
、遠心分離により反復し℃沈降させて洗浄しそして再懸
濁させた。かくして調製された懸濁液を冷却下に超音波
処理し、遠心分離しそして上澄み液を酵素標識用の抗原
として用いた。

Ｃ抗原の酵素による標識 ａ）ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）　−２０＃をｐＨ７，
０のりん酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）　０．５−中にとり
、過ヨウ素酸ナトリウム０．６ＷＬｌの添加により活性
化した。

室温で約３０分後に過ヨウ素酸塩の過剰をクロマトグラ
フィー（セファデックスＧ２５）により除去し、褐緑色
溶出液（活性化されたＰＯＤ　）を集めた。

ｂ）　　抗原へのペルオキシダーゼの結合２重量部の活
性化されたペルオキシダーゼＫｐｉ−１９，５の食塩／
炭酸塩緩衝液と一緒の１１景部のトキソプラズマ抗原を
加えて混合した。室温で２時間インキュベーションした
のち、生成したシッフ塩基を水素化ホウ素ナトリウム（
１η／１■ＰＯＤ　）の添加により還元したー。着色し
た接合体を１　ｍ９／　１　ｒｔｔｌのフェノールおよ
び２％ウシ血清アルゾミンの添加により安定化した。ア
ッセイにおいて用いられる最適の希釈度はチェッカーゼ
ード滴定により判定し、トキソプラズマＩｇＭ−陽性お
よび一陰性の血清をＥ項に記載されるようにして種々の
濃度の抗原／ペルオキシダーゼ接合体を用いて１段階ア
ッセイで評価した。

最適な濃度としては、陽性検体と陰性検体のシグナルの
差が最大となるような値が選択された。

Ｄ　抗ヒトエｇＭによるポリスチレンミクロ滴定プレー
トの被覆 照射されたポリスチレンミクロ滴定プレート（ヨーロッ
パ特許第０．０６１，１６７号参照）を各ウェル当りｐ
Ｈ７，５の燐酸塩緩衝食塩溶液中の抗ヒトＩｇＭの溶液
１００μｌずっと室温で数時間インキュベーションした
。抗体溶液の最適な濃度は予めこの被覆物を連続希釈お
よび試験することにより決定した。次にプレートを吸引
して空にし、燐酸塩緩衝食塩水で洗い、シリカゲルで乾
燥しそして空気および水分を遮断して包装した。

Ｅ　本発明による一段階法によるトキソプラズマＩｇＭ
抗体の測定 ａ）血清検体、ならびにトキソプラズマＩｇＭ陽性対照
およびトキソプラズマＩｇＭ陰性対照検体のそれぞれ１
つずつを、トキソプラズマ抗体を含まないウシ血清５ｄ
／１００ｍ、ライ−ｙ　（Ｔｗｅｅｎ”　）２０（ポリ
オキシエチレンソルビタンモノラウＬ／−））Ｏｌｌ　
ｍｌ／　１００ｓｕ　、および未希釈検体を基準として
５ｏａｐ／ｌ１１１のＩｇＭが結合されるような濃度の
ヒト　ＩｇＧ　（ガンマ鎖）に対する抗体を含有するｐ
Ｈ７，５０Ｑ、３モル／ｌのトリス緩衝溶液を用いて１
：３５０に希釈し、 ｂ）同じ緩衝液中の、予めチェッカーゼード滴定により
決定された最適濃度のペルオキシダーゼ標識トキソプラ
ズマ抗原の５０μノずつを各ウェルに予め加えた前記被
覆されたミクロ滴定プレートの各ウェルに前記ａ）項で
得られた溶液５０μｌずつを加え、 Ｃ）アッセイプレートを被覆して３７℃で２時間インキ
ュベートし、 ｄ）内容物を吸い出して除去し０．１ｄ／１００ｄのツ
イーン２０を含有するＰＢＳで３回洗い、ｅ）ｐｉ４５
．５のクエン酸塩／燐酸塩緩衝液中の色ｉ　体（ｏ−）
ユニレンジアミン・Ｈｃｔ　）　１００μｌずつを各ウ
ェルに加え、室温で３０分間インキュベーションし、 ｆ）次に酵素による基質の反応を停止させるために１Ｎ
硫酸１００μｌずっを各ウェルに加え、この溶液を光度
計中４９２　ｎｍで測定した。

ｇ）得られた結果の例を以下に示す。

第　　１　　表　　： ミリ吸光（ｍＥ　４９２ｎｍ） 強陽性対照　　　　　　　１０８０ 弱陽性対照　　　　　　　　３１４ 陰性対照　　　　　　　　５８ 陽性検体　　　　　　　１３０２ 陰性検体　　　　　　　　１０４ 検体は、それが陰性対照の吸光プラス１００　ｍＥ（こ
の実施例で１５８　＋ｎＥ　）より高い値が得られる場
合に陽性であると見なされる。

Ｆ　従来法の二段階法によるＩｇＭ抗体の測定Ｃｂ）項
に記載されたと同じ方法により調製されたペルオキシダ
ーゼ標識されたトキソプラズマ抗原、およびＤ項に記載
されたと同じ方法で調製されたミクロアッセイプレート
を用いた。

ａ）第２表に示される血清検体をトキソプラズマ抗体を
含有しないウシ血清５ａｌｌ　１００−およびライ−ｙ
　２０　０．１ｄ／　１００ｔｙｉｌを含有するｐＨ７
，５の０．３モル／ｌ　ト＋）ス緩衝溶液を用いてそれ
ぞれ１：２００に希釈し、 ｂ）その５０μｌずつを前記被覆されたミクロアッセイ
プレートの各ウェルに加え、 Ｃ）アッセイプレートを被覆して３７℃で１時間インキ
ュベーションし、 ｄ）内容物を吸い出しそして０．１ｄ／１００ａ＃のツ
イーン２０を含有するＰＢＳで３回洗い、θ）次に各ウ
ェルにペルオキシダーゼ標識されたトキソプラズマ抗原
５０μｌずっを加え、ｆ）再びアッセイプレートを被覆
しそして５７℃で２時間インキュベーションし、 ｇ）次に内容物を吸い出してＱ、１ｔ／／１００ｄのツ
イーン２０を含有するＰＢＳで３回洗い、ｈ）ｐＨ５，
５のクエン酸塩／燐酸塩緩衝液中の色原体（０−）ユニ
レンジアミン・Ｈｃｚ　）　１ｏｏμｊずつを各ウェル
に加え、室温で３０分間インキュベーションし、 １）次に酵素による基質の反応を停止させるために１Ｎ
硫酸１００μｌずつを各ウェルに加え、この溶液を光度
計中４９２　ｎｕで測楚した。

第２表に示される血清検体をＥａ）ｍＥ　ｆ）項記載の
一段階法によっても処理した。

これら２種の方法の結果を第２表に示す。

第２表： ミリ吸光（吐４９２皿） １段階法　　　　２段階法 アッセイ時間２．０時間　アッセイ時間３．５時間陽性
対照　　　１．４００（＄６００）　　　　　２，３０
０陰性対照　　　　８８（１４１）　　　　　１３６患
者の血清１　　２０４（１４５）　　　　　　１５５７
”　　１４８０（４２８）　　　　　　　　６２１（）
　ＲＦ吸着剤を添加しない１段階法で得られた吸光。

＊　　３０ｔ／ｌのＩｇＧを含有。

血清中におけるトキソプラズマエｇＭ抗体の含量の尺度
である測定された吸光値から、−段階法では患者血清１
〜６で陽性の結果を生ずるが（ｍＥ　４９２　ｎｍが８
８＋１００より大）、２段階法では陰性結果を生ずる（
　ｍＥ　４９２　ｎｍが１５６＋１００より低い）こと
が明らかである。

−段階法でＵ吸着剤を省くと、カッコ内の数値から明ら
かなよ５Ｋ、多くの血清例えば血清１〜６で偽陰性値を
生じるか、あるいは例えば血清７では値が低くなってい
る。

それゆえ１段階法によるトキソプラズマエｇＭ抗体の検
出は、Ｅ項とＦ項に示される２種の方法を比較しても判
るように、より感度が高く、そして前記のおよびその他
の抗体の検出がより速かでかつより簡単に行われうる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）イムノグロブリンクラスＡ、Ｍ、ＤまたはＥに対す
   る抗体またはかかる抗体のフラグメントが結合されてい
   る固相を液体と接触させてそれにより該液体中のこのク
   ラスのイムノグロブリンをこの固相に結合させ、そして
   この固相を標識剤を場合により担持する抗原および標識
   された抗体と、あるいは前記抗原が標識されていない場
   合には前記抗原に対する標識された抗体フラグメントと
   接触させ、そして固相に結合した標識剤の量からある抗
   原に特異的でありかつ前記イムノグロブリンクラスの一
   つである抗体の量を測定して、該液体中のある抗原に対
   して特異的でありかつイムノグロブリンクラスＡ、Ｍ、
   ＤまたはＥの一種である抗体を測定するに当たり、イム
   ノグロブリンＧが固相に結合するのを、および場合によ
   り抗原がイムノグロブリンＧに結合するのを阻止する物
   質を添加して、固相を測定すべき抗体を含有する液体、
   および場合により標識されていても良い抗原と同時に接
   触させることを特徴とする方法。 ２）標識された抗原が使用されることを特徴とする、請
   求項１記載の方法。 ３）未標識抗原、およびこの抗原に対する標識された抗
   体またはかかる抗体の標識されたフラグメントが使用さ
   れることを特徴とする、請求項１記載の方法。 ４）抗ヒトＩｇＧ、集合したヒトＩｇＧまたはガンマー
   Ｆｃフラグメントが添加されることを特徴とする、請求
   項１記載の方法。 ５）１種または２種の抗体がモノクローナル抗体または
   モノクローナル抗体のフラグメントであることを特徴と
   する、請求項１記載の方法。 ６）測定すべき抗体が、Ｂ型肝炎コアタンパク質、Ａ型
   肝炎ウィルス抗原、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）抗
   原、風しんウィルス抗原またはサイトメガロウイルス抗
   原、あるいは梅毒トレポネマまたはトキソプラズマゴン
   ヂイのタンパク質に対するイムノグロブリンクラスＭの
   抗体であることを特徴とする、請求項１記載の方法。 ７）標識剤が酵素であることを特徴とする、請求項１記
   載の方法。 ８）標識剤が赤血球であることを特徴とする、請求項１
   記載の方法。 ９）少なくとも、ヒトＩｇＭに対する特異的な抗体が結
   合した担体、このＩｇＭに対して特異的な標識された抗
   原、およびこの標識を検出または測定するための試薬か
   らなる、請求項１記載の方法を実施するための試薬。 １０）少なくとも、ヒトＩｇＭに対する特異的な抗体が
   結合した担体、抗原、抗原特異的な標識された抗体、お
   よびこの標識を検出するための試薬からなる、請求項１
   記載の方法を実施するための試薬。 １１）この方法に必要な試薬のすべてを乾燥形で含有す
   る一つのエレメントからなる、請求項１記載の方法を実
   施するための試薬。