JPH01121204A - 洋ラン類の成長促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、洋ラン類の成長促進剤に関する。

従来の技術とその問題点 従来洋ラン類を組織培養するに当っては、洋ラン類の発
根及び成長を促進するために、組織培養用培地に、成長
促進剤として、オーキシン系植物ホルモン、サイトカイ
ニン系植物ホルモン及びヤシ油（ココナツミルク）を混
合添加している。これらの成長促進剤は３者が一併用さ
れた場合に優れた効果を示すが、化学合成品であるため
製造、反応、分離、精製が困難であり、コストが高くな
るという欠点を有している。しかも、その効果を充分発
現させるためには、夫々極微量添加することが要求され
るので、計量等の取扱い操作が繁雑となる。

問題点を解決するための手段 本発明者は、上記従来技術の問題点に鑑みて鋭意研究を
重ねた結果、イ）原生動物であるユーグレナの細胞の熱
水抽出物が、洋ラン類に対して、従来の成長促進剤３種
を併用した場合よりも更に優れた成長促進効果を示し、
口）その添加量、を、取扱いが繁雑にならない程度の適
度に広い範囲から選択しても、その効果が何ら変わりな
く発現することを見出し、本発明を完成した。

即ち本発明は、ユーグレナ細胞の熱水抽出物を有効成分
とする洋ラン類の成長促進剤に係る。

本発明で使用する原生動物ユーグレナは、その細胞内に
葉緑体を保持し、通常、河川、湖沼等の淡水に生息し、
炭酸ガスを炭素源とした光合成機能を有する独立栄養及
び外部環境に存在する有機物質を炭素源とした従属栄養
による生活ステージを有している。、ユーグレナの具体
例としては、ユーグレナ・グラシリス、ユーグレナ・ビ
リデ、ユーグレナ・インタミゾイア等のユーグレノイド
、河川、湖沼等で生息する野生株及びそれらの変異株等
のユーグレナ属の全ての種が挙げられる。またその培地
及び培養形態についても一切制限は無く、暗黒下で従属
栄養的に培養されたもの、太陽光又は人工光照射下に光
合成条件下に培養されたもの等の全てのものが使用可能
である。勿論培地や培養条件を変えることにより、ユー
グレナ細胞内の成分は多少変化するが、本発明の目的を
達成するには何らの支障もない。

上記の方法で培養したユーグレナ細胞の熱水抽出物は、
例えば以下のようにして製造できる。

まず上記方法で培養したユーグレナ細胞を、例えば遠心
分離、濾過分離等の公知の微生物菌体回収方法に従って
培養液中から回収する。次いで回収されたユーグレナ細
胞を、必要に応じて例えば水道水、純水、イオン交換水
等で適当な回数（通常２〜３回程度）洗浄した後、遠心
分離、重力沈降法等の公知の方法で水分とユーグレナ細
胞とを分離し、得られたユーグレナ細胞を乾燥する。乾
燥方法としては公知の方法が採用でき、例えば凍結乾燥
、熱風乾燥、自然風乾等を例示できる。このようにして
得られるユーグレナ細胞の乾燥物（以下乾燥細胞という
）を下記の熱水処理に供する。尚、回収されたユーグレ
ナ細胞及び水洗後のユーグレナ細胞（以下これらを湿潤
細胞という）も熱水処理の原料として使用できる。

熱水処理は、乾燥細胞又は湿潤細胞の水懸濁液を、必要
に応じて加圧下に、加熱することにより行なわれる。水
懸濁液中の乾燥細胞又は湿潤細胞の量は特に制限されな
いが、通常重量比率（細胞／水）が１／２０〜１／２程
度となるようにすればよい。加熱温度及び時間は特に制
限されないが、通常加熱温度は６０〜１２０℃程度、加
熱時間は５〜１２０分程度とすればよい。尚本発明では
、６０〜１２０℃程度の温度の水を熱水とする。熱水処
理された乾燥細胞又は湿潤細胞の水懸濁液を室温に冷却
後、該水懸濁液中の固形分を、例えば遠心分離、濾過等
の公知の分離方法によって除去し、ユーグレナの熱水抽
出物溶液を得る。

本発明では、上記で得られるユーグレナの熱水抽出物溶
液をそのまま若しくは希釈して又は濃縮して洋ラン類の
培地に添加してもよく、或いは公知の方法に従って乾燥
物としてから添加してもよいが、熱水抽出の際の細胞と
水との使用比率が上記比率（１／２０〜１／２）である
場合は、得られる熱水抽出液を水で１０〜１００００倍
程度に希釈して使用するのが好ましい。

本発明のユーグレナ熱水抽出物を用いて洋ラン類を組織
培養するに際しては、公知の方法に従い、例えば以下の
ようにして行えばよい。

洋ラン類の組織培養用培地としては従来より用いられて
いるものが何れも使用でき、例えば、ムラシゲ−スタッ
グ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ−８ｋｏｏｇ　）培地（以下Ｍ
Ｓ培地という）、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ　）培地、リン
ゴ果汁等の果汁に市販の各種無機肥料等を添加した培地
等を例示できる。

本発明では、上記培地にユーグレナ細胞の熱水抽出物を
添加して、本発明の洋ラン類の組織培養用培地とする。

ユーグレナ細胞の熱水抽出物の添加量は特に制限されな
いが、ユーグレナ細胞と水とを上記比率（１／２０〜１
／２程度）で熱水抽出処理して得られる熱水抽出液を使
用する場合は、通常培地中に該抽出液が１０〜１１００
０００ｐｐ程度含まれているようにすればよい。１０ｐ
ｐｍ未満では、洋ラン類の成長促進効果が不充分となる
傾向があり、一方１０００００　ｐｐｍを越えると洋ラ
ン類の生育が却って低下する傾向がある。

かくして得られる洋ラン類の組織培養用培地を、＝　６
− 従来の方法と同様にして、充填及び殺菌した後適当な洋
ラン類の組織片を接種して培養すればよい。

発明の効果 本発明におけるユーグレナ細胞の熱水抽出物は洋ラン類
に対して、従来の成長促進剤よりも優れた成長促進効果
を示す。該抽出物を用いて洋ラン類を培養する場合には
、取扱いが繁雑にならない程度の適度に広い範囲から添
加量を選択しても、その効果が変わりなく発現する。

実施例 以下に実施例及び比較例を挙げ、本発明をより一層明瞭
なものとする。

実施例１ １）　ユーグレナ細胞の熱水抽出物の調製ユーグレナの
乾燥物５０ｇを水道水３００　ｍＱに懸濁し、オートク
レーブにて温度１２０℃で１０分間熱水抽出を行なった
後、遠心分離（１００００×Ｇ）で固形分を除去し、ユ
ーグレナ細胞の抽出原液を得た。

２）　組織培養用培地の調製 Ａ液 ＮＨ４ＮＯ３２６，４ｇ ＫＮＯ３３０，４ｇ ＣａＣＱ２争２Ｈ２０７，０ｇ Ｍｇ　Ｓ　Ｏ４・７Ｈ２０５，９ｇ ＫＨ２ＰＯ４２，７ｇ 上記各成分を３Ｑの蒸留水に溶かし、最終的に４９とし
た。

Ｂ液 ＭｎＳＯ４Φ４Ｈ２０２５，Ｏｇ Ｈ３ＢＯ３，１０，０ｇ Ｚｎ５Ｏｔ　ニアＨ２０１０，Ｏｇ ＫＩ　　　　　　　１．Ｑｇ Ｎａ２　ＭｏＯ４・２Ｈ２０２５０，０ｍｇＣｕＳＯ４
争　５Ｈ２０２５，Ｏｍｇ ＣｏＣＱ２１１６Ｈ２０２５，０■ 上記各成分を蒸留水ＩＱに溶解した。

Ｃ液 ミオイノシトール　　　　　　１０．０ｇニコチン酸　
　　　　　　５００．０ｍｇグリシン　　　　　　　　
　２００．０ｍｇビタミンＢ１　　　　　　　　　５０
．０ｍｇビタミンＢｓ　　　　　　　　　　５０．Ｏｍ
ｇｄ−ビオチン　　　　　　　　　　５．０ｍｇ上記各
成分を蒸留水ＩＱに溶解した。

Ｄ液 葉酸５０．０ｍｇを蒸留水１００ｍＱに溶解した。

Ｅ液 Ｎ　ａ２６　ＥＤＴＡ　　　７．４６　ｇＦｅＳＯ４・
７Ｈ２０５，５６ｇ ６ｇ上記各成蒸留水ＩＱに溶解した。

Ａ液２５０ｍ（？ＳＢ液１ｍ１２ＳＣ液５ｍ１２．Ｄ液
１ｍＱ。

Ｅ液５ｍＱ、ショ糖１０ｇ１寒天８ｇ及び１）で得られ
たユーグレナ細胞の熱水抽出原液１００ｍＱ（乾燥重量
２１．７ｇ）　、１０ｍＧ又は１ｍ１２に水を加えて全
量を１９年、組織培養用培地を調製した（ｐＨ５，４）
。

３）　組織培養 ２）で得られた培地を、径３０ｃｍＸ長さ１５０ｅｌｌ
ｌのガラス製平底試験管２０本に各２０１ＴＩＱずつ入
れ、１２０℃で１５分オートクレーブ殺菌した。

冷却後、各試験管毎に未発根幼苗を植付けた。未発根幼
苗としては、デンドロビウム属の洋ランにおいて、茎頂
点のメリクローン栽培によって得られたものを用いた。

植付は後、２０〜２３℃の温度下に９０日間培養し、発
根状態（根長及び板数）を調べた。結果は、熱水抽出原
液の添加濃度に殆ど依存せず、根長１．４８〜１．　５
２ｃｍ、板数７．１〜８．０本（標準偏差０．７０１）
であった。

実施例２ 熱水抽出原液に代えて熱水抽出原液の乾燥物１Ｏｇ、Ｉ
ｇ又は０．１ｇを使用する以外は、実施例１と同様にし
て培養を行なった。結果は乾燥物の添加量に殆ど依存せ
ず、根長１．４３〜１．４６ｃｍ、板数７．５〜８．２
本（標準偏差０．７５０）であった。

比較例１ 熱水抽出原液を使用しない以外は実施例１と同様にして
培養を行なった。根長は０．６７４ｃｍ。

板数は５．７本（標準偏差０．５６３）であった。

比較例２ 熱水抽出原液に代えて、植物ホルモン（オーキシン系及
びサイトカイニン系）各１　ｐｐｍ及びココナツツミル
ク１５％を使用する以外は実施例１と同様にして培養を
行なった。根長は１．４２０ｃｍ、板数は７．５本（標
準偏差０．８０８）であった。

（以　上）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ユーグレナ細胞の熱水抽出物を有効成分とする洋
   ラン類の成長促進剤。