JPH01131123A - マイコプラズマワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はマイコプラズマワクチン、及びこのようなワク
チンを投テすることにより家′＄！Ｊ’：マイコブラズ
マ感染から保護するための方法に１系る。

マイコプラズマ、より特定的にはＭ４ａｌ　ｌ　１ｓｅ
ｐｔｉａｕｔｏは、特に家禽に感染性の細菌である。商
業上重要な鳥預が該細菌に感染すると、多大な経済的損
失が生じる。

Ｍ、ｇａｌｌｉｓｅｐＬｉｃｕｍが原因となる症候群は
通常、ニワトリの場合「慢性呼吸器疾患」、シチメンチ
ョウの場合「恣染性静脈洞炎」と命名されている。閂。

Ｈａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ感染は、呼吸器ウィルス及
び大腸菌による感染を伴うことが多い。

Ｍ、ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ感染は、エリトロマイ
シン、ストレプトマイシン、クロロテトラサイクリン、
チロシン及びマグナマイシンのような所定の抗生物質で
対処することができ、これらの構成物質は通常飼料に混
合して使用されているが、細菌はかなりの程度まで該物
質に対する抵抗を増進し、その結果、駆除することけは
次第に困難となる。

Ｍ、ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ感染に対する家禽の免
疫保護のために種々のワクチンが開発されている。

不活化Ｍ、ｇａｌｌｉｓｃｐｔｉｃｕｍバクテリンが使
用され、様々の結果が得られている。これら。のバクテ
リンは、特に油エマルジヨンアジュバントと組み合わせ
て投与した場合に良好な血清学的応答をもたらしている
が、このようなワクチンで感染から保護することはでき
ないと考えられていた。

米国の少数の州、特に所謂「複数齢採卵場」では、Ｆ株
の弱毒活性Ｍ４ａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍを用いてワク
チン接種が実施された。語法は噴霧法により投与され、
気嚢炎症に対して妥当な保護を与え、非生産の低下を許
容可能なレベルまで押さえることができる。

公知の不活化ワクチンの欠点は数えきれない。

各動物に個々に注射しなければならない。ワクチンは非
常に高価である。動物は感染から保護されず、即ち、感
染後の動物は（毒性の）マイコプラズマを保菌し続は得
る。

更に、現存の生ワクチンにも問題がないとはいえない。

Ｆ株はニワトりにはほぼ無毒性であるが、シチメンチョ
ウには非常に病原性である。更に、ワクチン接種後、ニ
ワトリはワクチン株のキャリアであり続けるので、ワク
チン株は長期間伝播し続けることになる。

以上の欠点のないＭ、ｇａｌｌｉｓｅｐＬｉｃｕ…ワク
チンが新規に発見された。

本発明のマイコプラズマワクチンは、Ｉｎｔｅｒｖｅｔ
６／８５株の免疫特性を有するＭ、ｇａｌｌｉｓｅｐｔ
ｉｃｕｍ株から誘導されることを特徴とする。

Ｉｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株は新規Ｍ、ｇａｌｌｉｓ
ｃｐｔｉｃｕｍ株であり、公知の８６株（ＡＴＣＣ番号
１５３０２）の多数のｉｎ　ｖｉＬｒ０継代培養により
得られた突然変異株である。

従って、１９８７年７月７日付けでパリ、パスツール研
究所のＣｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　Ｎａｔｉｏｎａｌｅ　ｄ
ｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　ｄｅＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓ
ｍｅｓに寄託番号Ｔ−８７３で寄託されたこの新規法も
本発明に属する。該１ｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株と同
一の免疫特性を有する株も本発明に属する。

より特定的には、特に好ましい免疫特性を維持しながら
Ｉｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株から誘導される株も本発
明に属する。

Ｉｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株は以下に述べるように公
知のＨ１ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ株にまさる多数の
重要な利点を有しており、これらの利点により語法はワ
クチン用として極めて好適であり、公知のＭ、ｇａｌｌ
ｉｓｅｐｔｉｃｕｍから区別される。

ａ、ニワトリに対して無毒性であり、臨床症候群を全く
生じず、気管炎症が事実上止じない。

ｂ、シチメンチョウに対して無毒性である。

ｃ、Ｆ株は動物のほぼ１００％に長期間分泌され続ける
が、Ｉｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株は投与４週間後には
ごく少数の動物にしか保菌されない。

ｄ、第１図に示すようなエンドヌクレアーゼ制限パター
ンを示す。

本発明のワクチンは、好ましくは生ワクチンの形態で家
禽に投与されるが、不活化ワクチンとして使用すること
もできる。

マイコプラズマワクチンは類似のワクチンで一般的な方
法で投与され得るが、本発明のワクチンは特にエアゾー
ル投与に適している。ワクチンの極微細エアゾールは、
例えばＶｉｎｅｌａｎｄエアゾール装置により調製され
得る。

本発明のマイコプラズマワクチンは、例えば凍結乾燥形
態で市販され得る。水性液体、例えば水道水を加えるこ
とにより、この形態から懸濁液を調製することができる
。ワクチンは当然懸濁液として市販することもできる。

必要に応じてマイコプラズマ材料の他に１種以上の安定
剤（例えばスキムミルク又はカゼイン氷解物）及び／又
は１種以上の抗生物質（例えばアムピシリン又はポリミ
キシン）をワクチンに加えてもよい。

本発明は家禽のマイコプラズマ感染の駆除に適している
。特に、ニワトリ及びシチメンチョウのマイコプラズマ
感染の駆除に適している。ワクチンは好ましくは８〜１
５週齢の飼育期間に、産卵期間中の生産低下の保護とし
て投与すると最適である。ワクチン接種は以下の理由に
より、好ましくは飼育期間中に実施すべきである。

ａ、ワクチン接種に起因し得る弱い接種反応はこの段階
では産卵に影響しない。

ｂ、動物が産卵を開始する時点で保護すれば十分である
。

Ｃ１動物を飼育場から感染が通学生じる産卵場に移すと
きに動物を保護すべきである。

本発明のワクチンの好ましい特徴の１つは、ニワトリに
対する毒性が非常に低いことである。

このことは、白色レグポンブリーダーてＩｎｔｅｒｖｅ
ｔ　６／８５株、Ｒ株及び１株の効果を比較することに
より立証された。Ｒ株は非常に毒性のＭ、ｇａｌｌｉｓ
ｅｐＬｉｃｕｍ株と見なされる。１株は米国ではワクチ
ン株として使用されている。両者株はジョーシア大学の
Ｓ、ＫＩｅｖｅｎ氏から入手した。Ｒ及び１株は、Ｆｒ
ｅｙ他（Ｍ、Ｃ，Ｆｒｅｙ、　　Ｒ，Ｐ、　　ｌ１ａｎ
ｓｏｎ及びり、Ｐ、　　八ｎｄｅｒｓｏｎ　　（１９６
８）八ｍｅｒ、Ｊ、ＶｅＬ、Ｒｅｓ、２９．２１６４−
７１）により記載されている培地で培養し、Ｉｎｔｅｒ
ｖｅｔ　６／８５株は八ｄｌｅｒの変形培地（１１，Ｅ
、＾ｄｌｅｒ、　Ｒ，Ｙａｍａｍｏｔｏ及びＳ、　Ｂａ
ｎｋｏｕ＋ｓｋｉ、　（１９５４）＾ｍｅｒ、Ｊ、Ｖｅ
ｔ、Ｒｅｓ　１５．４６３−５）で培養した。＾ｄｌｅ
ｒの変形培地は、ｌ１ａｃｔｏ　ＰＰＬＯブイヨンの代
わりにプロテアーゼペブ）・ン、ウマ血清の代わりにブ
タ血清を使用子ることにより構成した。

これらの比軸実験で使用したニワトリは、Ｍ、ｇａｌ　
Ｉ　１ｓｅｐｔ　ｉｃｕｍ及びＭ、５ｙｎｏｖｉａｅに
対して血清反応陰性であることが前以て確認されたもの
を使用した。

実験から約１週間前、１０羽のニワトリを減圧アイソレ
ーター内においた。エアゾール法によりこれらのニワ１
〜りにマイコプラズマを投与した。夫々のマイコフ゛ラ
ズマ培養１勿１０ｏｚＮをアイソレーター内に１０分間
噴寝し、排気は遮断しておいた。投与したＩｎｔｅｒｖ
ｅｔ　６／８５懸濁液の生存可能な微生物の含有量は１
０１０個／ｍｌであり、Ｆ及びＲ１懸濁液の生存可能な
微生物の含有量は１０８個／Ｉ１１であった。

マイコプラズマの投与から１０及び２４日後に夫々５羽
のニワトリに対して死後試験を実施した。気管損傷、卵
巣変性及びＭ４ａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍを車前可能な
動物の数に関してニワトリを試験した。結果は、実施例
２の夫々ａ、ｂ及びＣの項に記載したように表した。

結果を下表に示す。

２７゛かニワトリの感染 ＊６羽のニワトリの平均。

以上のデータから明らかなように、Ｉｎｔｅｒｖｅｔ　
６／８５株はＲ及びＦ株に比較して気嚢及び卵巣損傷が
明らかに少ない。

更に、（ｌｊｅｒｖｅｔ　６／８５株は約４週後には３
染したニワトリにもはや検出できないが、Ｒ及びＦ株で
は実際にその時点でも検出され得る。

４適齢の白色シチメンチヨウで同様の実験を行った。結
果を下表に示す。

シチメンチョウはニワトリの場合にワクチン株として使
用されているＦ株のような比較的毒性の低い株であって
もＭ、ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍには特に感受性であ
ることが知られている。

しかしながら、上記の結果によると新規１ｎｔｅｒｖｅ
ｔ　６／８５株はシチメンチョウにも非常に低毒性であ
り、事実上損傷を生じない。

Ｉｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株の毒性転換についても調
査した。このために、株をニワトリで５回継代培養し、
［気管スワブ（ｔｒａｃｈｅａｌ　ｓｗａｂ）」により
再単離したマイコプラズマを各培養毎に新しいニワトリ
に投与した。結果を下表に示す。５回継代培養後も毒性
の増加は認められなかった。

Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍの
Ｉｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株の約ＩＭ１の量の種材料
を１０Ｈ１の変形Ａｄｌｅｒ培地で復元し、３７℃でイ
ンキュベートした。

加えたインジケータ（フェノールレッド）の色の変化に
より十分増殖したことが確認されたら、別の変形＾ｄｌ
ｅｒ培地に懸濁液を１：２０の容量比で接種し、上述の
ように再びインキュベートした。

使用すべき発酵器に接種するに十分大きい接種材料（１
００ｉ’の発酵器につき約５１の接種材料が必要である
）が得られるまでこの増殖を繰り返した。

発酵器に接種後、ｐｌ＋７．５、温度３７℃及び一定の
撹拌速度及び曝気条件で２４〜３０時間インキュベーシ
ョンを実施した。

次に遠心分離により細胞を収集し、予めアムビシリンを
加えたスキムミルク（１０％）中に抽出した。

適当なガラスびんに充填後、ワクチンを凍結乾燥し、ガ
ラスびんを密閉した。

１０羽１群のニワトリ２群にエアゾール法により夫々Ｒ
株及びＩｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株をワクチン接種し
、減圧アイソレーター中に収容した。

２週間後、これらの２群とワクチン接種しない対照群と
に毒性Ｒ株を感染させ、１０日後に殺した。

気嚢損傷、卵巣変性及び殺した動物中に存在するＭ、ｇ
ａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍの相対量を以下の方法で決定
した。

ａ）気嚢損傷の等吸付けは次のように分類した。

Ｏ＝気嚢が清浄であり、リンパ小胞損傷がない。

１＝２つの気嚢の一方にやや濁りがあるか、あるいは２
つの気嚢の一方にリンパ小胞損傷がある。

３＝両方の気嚢に１と同様の症状があるか、あるいは１
又は２つの気管に強い濁りがあるか、あるいは１又は２
つの気嚢にチーズ状分泌があるか、あるいは１又は２つ
の気嚢が厚い肉質になっている。

３＝両方の気嚢が強く濁っているか、あるいはチーズ状
分泌があるか、あるいは厚い肉質になっている。

４＝３の症状の組み合わせ。

ｂ）卵巣変性の程度は次のように分類した。

Ｏ＝卵巣が活性であり、変性がない。

１＝卵巣の数個の小胞が変性している。

２＝全小胞が変性し出血しているものもある。

３＝全小胞が変性し、出血を伴う。

ｃ）Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕ
ｍを再単離することができたニワトリの数を決定した。

これを各群のニワトリの合計数の百分率で表した。

各種の齢のニワトリのワクチン接種後の上記実験の結果
を以下に示す。

＊Ｒ株とＩｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株との間に区別し
なかった。

■、３５週かのニワトリのワクチン妾 本Ｒ株、Ｒ株及びＩｒ＋Ｌｅｒｖｅｔ　６／８５の間に
区別しながった。

＊Ｒ株、Ｆ株及びＬｎｔｃｒｖｅｔ　６／８５の間に区
別なし。

これらの実験から、Ｉｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株は重
度の感染の結果である気嚢損傷及び卵巣変性に対して、
Ｆ株で得られる保護に匹敵し得る保護を実現すると結論
することができる。

【図面の簡単な説明】

図面はＩｎｔｅｒｖｅｔ　６／８５株のエンドヌクレア
ーゼ制限パターンを示す。 図、１可の浄Ｑ（内容に変更なし） ＦＩＧＵＲＥ　　１ 手続ン市正ｐＩ 昭和６３年１１月７８ １、’Ｊｉ件の表示　　昭和６３年特許願第２３２１５
７号２、発明の名称　　マイコプラズマワクチン３、補
１をする省 を件との関係　特許出願人 名　称　　　アクゾ・エヌ・ヴ工− ４、代　理　人　　東京都新宿区新宿１丁目１番１４号
　山ｍビル６、補正により増加する請求項の数 ７、補正の対象　　図面 ８、補正の内容 （１）１式図面を別紙の通り補充する。（内容に変更な
し）手続ンｆｔｌ正蓼切 昭和６３年１１月７日 １、事件の表示　　昭和６３年特許願第２３２１５７号
２、発明の名称　　マイコプラズマワクチン３、補正を
する者 事件との関係　特許出願人 名　称　　　アクゾ・エヌ・ヴニー ４、代　理　人　　東京都新宿区新宿１丁目１番１４号
　山田ビル５、補正命令の日付　　　自　発 ６、補正により増加する請求項の数 ７、補正の対象　　明Ｎ書 ８、補正の内容

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）Ｉｎｔｅｒｖｅｔ６／８５株の免疫特性を有する
   Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ株
   から誘導されることを特徴とする家禽のマイコプラズマ
   感染の駆除用ワクチン。
2. （２）Ｉｎｔｅｒｖｅｔ６／８５株の免疫特性を有する
   活性Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕ
   ｍ株を含むことを特徴とする請求項１に記載のワクチン
   。
3. （３）Ｉｎｔｅｒｖｅｔ６／８５株から誘導されること
   を特徴とする請求項１又は２に記載のワクチン。
4. （４）Ｉｎｔｅｒｖｅｔ６／８５株の免疫特性を有する
   Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ株
   。
5. （５）Ｉｎｔｅｒｖｅｔ６／８５Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ
   　ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ株。
6. （６）請求項１から３のいずれかに記載のワクチンを家
   禽に投与することを特徴とする家禽のマイコプラズマ感
   染の駆除方法。