JPH01138460A - 親油性表面を用いての改良された両親媒性分析物アッセイ - Google Patents
親油性表面を用いての改良された両親媒性分析物アッセイInfo
- Publication number
- JPH01138460A JPH01138460A JP63201059A JP20105988A JPH01138460A JP H01138460 A JPH01138460 A JP H01138460A JP 63201059 A JP63201059 A JP 63201059A JP 20105988 A JP20105988 A JP 20105988A JP H01138460 A JPH01138460 A JP H01138460A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- analyte
- lipophilic
- lipophilic surface
- medium
- buffer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000003556 assay Methods 0.000 title abstract description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 5
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims abstract description 35
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 13
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims description 12
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 11
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 8
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 claims description 8
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 6
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 6
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical class C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 claims description 6
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 claims description 4
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003074 deoxycholic acid derivative Substances 0.000 claims description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- HEGSGKPQLMEBJL-RQICVUQASA-N (2r,3s,4s,5r)-2-(hydroxymethyl)-6-octoxyoxane-3,4,5-triol Chemical compound CCCCCCCCOC1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RQICVUQASA-N 0.000 claims description 2
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 229940009025 chenodeoxycholate Drugs 0.000 claims description 2
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 claims description 2
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 claims description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 1
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 claims 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 abstract description 2
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 abstract description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 abstract description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 abstract 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 3
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- 150000001343 alkyl silanes Chemical class 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 239000005060 rubber Substances 0.000 description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 2
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 2
- 101710099705 Anti-lipopolysaccharide factor Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001647378 Chlamydia psittaci Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical class C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 239000002812 cholic acid derivative Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000019262 disodium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002526 disodium citrate Substances 0.000 description 1
- CEYULKASIQJZGP-UHFFFAOYSA-L disodium;2-(carboxymethyl)-2-hydroxybutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(C(=O)O)CC([O-])=O CEYULKASIQJZGP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 150000004756 silanes Chemical class 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56916—Enterobacteria, e.g. shigella, salmonella, klebsiella, serratia
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56927—Chlamydia
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- G01N2400/50—Lipopolysaccharides; LPS
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、両親媒性分析物についての改良されたアッセ
イ及び特に、細菌性病原菌についてのアッセイに関する
。
イ及び特に、細菌性病原菌についてのアッセイに関する
。
リポ多ｔＪ！（ＬＰＳ）及びリポタンパク質抗原は、し
ばしば、病気を引き起こす物質、たとえば旦翻μこ０旦
吐及びニジエリシャ 、ユ！Ｊ （Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ匹旦）である微生物についての診断である。しか
しながら、そのような両親媒性分析物の分析は、その両
親媒性分子が水性媒体中に容易に溶解しないためにひじ
ょうに難かしい。この困難さを避けるために、ＬＰＳに
ついてのいくつかのアッセイは、両親媒性分析物の検出
を避け、そしてむしろ、病原菌による感染により誘発さ
れた抗体について分析する。たとえばＴｅｒｈｏ屋Ｅ
、 、 Ｊ、Ｍｅｄ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。
ばしば、病気を引き起こす物質、たとえば旦翻μこ０旦
吐及びニジエリシャ 、ユ！Ｊ （Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ匹旦）である微生物についての診断である。しか
しながら、そのような両親媒性分析物の分析は、その両
親媒性分子が水性媒体中に容易に溶解しないためにひじ
ょうに難かしい。この困難さを避けるために、ＬＰＳに
ついてのいくつかのアッセイは、両親媒性分析物の検出
を避け、そしてむしろ、病原菌による感染により誘発さ
れた抗体について分析する。たとえばＴｅｒｈｏ屋Ｅ
、 、 Ｊ、Ｍｅｄ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。
（１９８０）１４ ： ７７ （これは、ラジオイムノ
アッセイ（ＲＩＡ）を用いてクーミー゛ アにより誘発
された抗体についてのタラミゾイア感染の分析を記載す
る）を参照のこと。
アッセイ（ＲＩＡ）を用いてクーミー゛ アにより誘発
された抗体についてのタラミゾイア感染の分析を記載す
る）を参照のこと。
抗体は感染の経過中に数週間発育し、そしてその後、実
質的な期間高められたまま残存することができるので、
そのようなアッセイは、抗原を測定するアッセイよりも
満足のいくものではない。
質的な期間高められたまま残存することができるので、
そのようなアッセイは、抗原を測定するアッセイよりも
満足のいくものではない。
他のアプローチは、臨床的検体又は分解された臨床的検
体を固体支持体に結合せしめることであった。たとえば
アメリカ特許第４，４９７．８９９号を参照のこと。し
かしながら、典型的に使用される固体支持体、たとえば
マイクロタイタープレート、試験管及び同様のものは、
荷電密度及び極性に関して一定でない、従って、両親媒
性分子は、表面上で多くの態様で方向づけられ得る。抗
原の方向性は、モノクローナル抗体結合及び従って分析
物の検出のために臨界であることが示された。ランダム
方向性は、細菌性病原菌、たとえばタラミゾイアを含む
と思われるサンプルに関して特に不適である。なぜなら
ば、その抗原は典型的には、少量で存在するからである
。
体を固体支持体に結合せしめることであった。たとえば
アメリカ特許第４，４９７．８９９号を参照のこと。し
かしながら、典型的に使用される固体支持体、たとえば
マイクロタイタープレート、試験管及び同様のものは、
荷電密度及び極性に関して一定でない、従って、両親媒
性分子は、表面上で多くの態様で方向づけられ得る。抗
原の方向性は、モノクローナル抗体結合及び従って分析
物の検出のために臨界であることが示された。ランダム
方向性は、細菌性病原菌、たとえばタラミゾイアを含む
と思われるサンプルに関して特に不適である。なぜなら
ば、その抗原は典型的には、少量で存在するからである
。
従って、両親媒性分析物のより敏感な検出を提供する改
良されたアッセイが探求される。
良されたアッセイが探求される。
次の開示は、細菌性病原菌についてのアッセイに関する
。アメリカ特許第４，４９７，８９９号（Ａｒｍｓｔｒ
ｏｎｇ）は、クラミゾイア トラコマチスについての固
相イムノアッセイを記載し、ここで分解された検体から
の抗原が裸の固体支持体上に被覆され、又は吸収されて
いる。ＴｅｒｈｏＦ、（ｇ、、Ｊ、Ｍｅｄ。
。アメリカ特許第４，４９７，８９９号（Ａｒｍｓｔｒ
ｏｎｇ）は、クラミゾイア トラコマチスについての固
相イムノアッセイを記載し、ここで分解された検体から
の抗原が裸の固体支持体上に被覆され、又は吸収されて
いる。ＴｅｒｈｏＦ、（ｇ、、Ｊ、Ｍｅｄ。
Ｍｔｃｒｏｂｉｏｌ 、 （１９８０） １４ ： ７
７は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を用いてのタラ
ミゾイア誘発性抗体についてのタラミゾイア感染の分析
を記載する。
７は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を用いてのタラ
ミゾイア誘発性抗体についてのタラミゾイア感染の分析
を記載する。
アメリカ特許第４，１８８．３７１号（Ｗｅｅｔａｌｌ
）は、イムノラジオメトリック サンドイッチ アッセ
イによる、酵素特異的抗体を用いてネイセリアにより開
放された酵素の検出を記載する。アメリカ特許第４．２
４１，０４５号（Ｇａａｔａｒ）は、ネイセリア ゴノ
ルヘアの存在を決定するための方法を開示し、ここでＬ
−抗原が、臨床検体中に存在する抗体を検出するために
固相上に吸収されている。
）は、イムノラジオメトリック サンドイッチ アッセ
イによる、酵素特異的抗体を用いてネイセリアにより開
放された酵素の検出を記載する。アメリカ特許第４．２
４１，０４５号（Ｇａａｔａｒ）は、ネイセリア ゴノ
ルヘアの存在を決定するための方法を開示し、ここでＬ
−抗原が、臨床検体中に存在する抗体を検出するために
固相上に吸収されている。
アメリカ特許第４，２５４，０８２号（Ｓｃｈ ｉｃｋ
）は、液体サンプル中における特異的結合物質を測定
するための方法及び試験手段を開示する。
）は、液体サンプル中における特異的結合物質を測定
するための方法及び試験手段を開示する。
シリコーン処理剤は、市販されており、そして種々の表
面への親水性物質の非特異的結合を妨げるために使用さ
れている。
面への親水性物質の非特異的結合を妨げるために使用さ
れている。
二極性分子の親油性末端が固体支持体の親油性表面（前
記極性末端を該表面から離れて方向づける）に結合され
る、両親媒性分析物をアッセイするための改良された方
法が提供される。この場合、分析物の親水性エピトープ
がアッセイ媒体中におけるモノクローナル抗体に利用さ
れ、少量の分析物を検出する能力をもたらす。
記極性末端を該表面から離れて方向づける）に結合され
る、両親媒性分析物をアッセイするための改良された方
法が提供される。この場合、分析物の親水性エピトープ
がアッセイ媒体中におけるモノクローナル抗体に利用さ
れ、少量の分析物を検出する能力をもたらす。
その方法は、水性媒体中に分散された両親媒性分析物と
実質的に均一の親油性表面とを、前記両親媒性分析物が
親油性表面に結合するのに十分な時間インキュベートし
；前記親油性表面から前記媒体を分離し；そして前記表
面上の両親媒性分析物の親水性エピトープについてアッ
セイすることを含んで成る。
実質的に均一の親油性表面とを、前記両親媒性分析物が
親油性表面に結合するのに十分な時間インキュベートし
；前記親油性表面から前記媒体を分離し；そして前記表
面上の両親媒性分析物の親水性エピトープについてアッ
セイすることを含んで成る。
本発明は、両親媒性分析物をアッセイする改良された方
法を提供する。この方法は、実質的に均一の親油性表面
を有する固体支持体に分析物を結合することによるもの
である。親油性表面は、両親媒性分子の獲得及び同友づ
けを可能にし、その結果、それらの分子の親水性エピト
ープが水性相に最適に付与されることが見出された。そ
れらの分子の獲得及び同友づけは、モノクローナル抗体
獲得により提供される機能に類似する機能を提供する。
法を提供する。この方法は、実質的に均一の親油性表面
を有する固体支持体に分析物を結合することによるもの
である。親油性表面は、両親媒性分子の獲得及び同友づ
けを可能にし、その結果、それらの分子の親水性エピト
ープが水性相に最適に付与されることが見出された。そ
れらの分子の獲得及び同友づけは、モノクローナル抗体
獲得により提供される機能に類似する機能を提供する。
これは、両親媒性分析物の疎水性エビ）−プに向けられ
たモノクローナル抗体の最適な結合を可能にする。
たモノクローナル抗体の最適な結合を可能にする。
本発明の方法は、親水性エピトープを含有し、そして水
性媒体中に分散されている両親媒性分析物と実質的に均
一の疎水性表面の固体支持体とを、前記分析物が前記表
面に結合するのに十分な時間インキュベートすることを
含んで成る。媒体は、洗浄することによって表面から分
離される。次に、親油性表面に結合された分析物の親水
性エビ）−プについてのアッセイが行なわれる。
性媒体中に分散されている両親媒性分析物と実質的に均
一の疎水性表面の固体支持体とを、前記分析物が前記表
面に結合するのに十分な時間インキュベートすることを
含んで成る。媒体は、洗浄することによって表面から分
離される。次に、親油性表面に結合された分析物の親水
性エビ）−プについてのアッセイが行なわれる。
脂質、たとえば６〜３０個の炭素原子により被覆された
又はそれらとの接合に起因する実質的に均一の親油性表
面が、本発明の方法に使用するために選択され得る。他
方、実質的に均一の親油性表面は、イムノアッセイのた
めに通常使用される固相材料のほとんどをシリコーン処
理剤により処理することによって達成され得る。適切な
シリコーン処理溶液は、有機溶媒中で調製されるアルキ
ルシランである。いくつかの調製物（たどえば八ｑｕａ
−５ｉ ｌ及び５ｉｌａｎｅ Ａ−１７４）が、希釈水
溶液とし・て使用される。シリコーン処理されるべきア
ルチオレス（Ａｒｔｉｏｌｅｓ）が溶液と接触せしめら
れ、そして次に乾燥せしめられ、その後使用される。他
の調製物（たとえばＳｉｇｍａｃｏｔｅ）は、厳密には
有機溶解性であり、そして水性希釈剤としては使用され
ない。シリコーン処理されるべき製品を接触せしめた後
、過剰のシリコーン処理剤を排出し、そしてその製品を
乾燥せしめる。シランは、被覆される表面上の反応基と
置換反応するか、又はそれらは表面を被覆する架橋され
たフィルムを形成するためにお互い反応するかいづれか
である。両者の場合、その表面は疎水性アルキルシラン
により変性される。たとえば、適切な市販のシリコーン
処理剤は、Ｓｉｇｍａｃｏｔｅ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅ＋
５ｉｃａｌ Ｃｏ、）＋Ａｑｕａ−Ｓｉｌ（Ｐｉｅｒｃ
ｅ Ｃｈｅ＋＋＋１ｃａｌ Ｃｏ、）及び５ｉｌａｎｅ
Ａ−１７４（ＥＭ ５ｃｉｅｎｃｅ）を含む。′逆相
”クロマトグラフィー材料のために使用される態様に類
似する態様での炭化水素鎖によるアルキル化はまた、両
親媒性分子を獲得することができる親油性表面を提供す
るためにも使用され得る。通常使用される逆相クロマト
グラフィー材料は、Ｃ−１８、Ｃ−８、Ｃ−４及びフェ
ニル誘導体化された多孔性微小球を含む。そのＣ値は、
疎水性脂肪族炭化水素鎖の長さに対応する。これらの材
料は、い（つかの供給者により商業的に製造され、そし
てＨｙｐｅｒｓｉｌ（Ｓｈａｎｄｏｎ） ＋ ５ｙｎｏ
ｃｈｒｏｐａｋ （Ｓｙｎｃｈｒｏｍ） ＋ Ｎｕｃｌ
ｅｏｓ ｉ Ｉ。
又はそれらとの接合に起因する実質的に均一の親油性表
面が、本発明の方法に使用するために選択され得る。他
方、実質的に均一の親油性表面は、イムノアッセイのた
めに通常使用される固相材料のほとんどをシリコーン処
理剤により処理することによって達成され得る。適切な
シリコーン処理溶液は、有機溶媒中で調製されるアルキ
ルシランである。いくつかの調製物（たどえば八ｑｕａ
−５ｉ ｌ及び５ｉｌａｎｅ Ａ−１７４）が、希釈水
溶液とし・て使用される。シリコーン処理されるべきア
ルチオレス（Ａｒｔｉｏｌｅｓ）が溶液と接触せしめら
れ、そして次に乾燥せしめられ、その後使用される。他
の調製物（たとえばＳｉｇｍａｃｏｔｅ）は、厳密には
有機溶解性であり、そして水性希釈剤としては使用され
ない。シリコーン処理されるべき製品を接触せしめた後
、過剰のシリコーン処理剤を排出し、そしてその製品を
乾燥せしめる。シランは、被覆される表面上の反応基と
置換反応するか、又はそれらは表面を被覆する架橋され
たフィルムを形成するためにお互い反応するかいづれか
である。両者の場合、その表面は疎水性アルキルシラン
により変性される。たとえば、適切な市販のシリコーン
処理剤は、Ｓｉｇｍａｃｏｔｅ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅ＋
５ｉｃａｌ Ｃｏ、）＋Ａｑｕａ−Ｓｉｌ（Ｐｉｅｒｃ
ｅ Ｃｈｅ＋＋＋１ｃａｌ Ｃｏ、）及び５ｉｌａｎｅ
Ａ−１７４（ＥＭ ５ｃｉｅｎｃｅ）を含む。′逆相
”クロマトグラフィー材料のために使用される態様に類
似する態様での炭化水素鎖によるアルキル化はまた、両
親媒性分子を獲得することができる親油性表面を提供す
るためにも使用され得る。通常使用される逆相クロマト
グラフィー材料は、Ｃ−１８、Ｃ−８、Ｃ−４及びフェ
ニル誘導体化された多孔性微小球を含む。そのＣ値は、
疎水性脂肪族炭化水素鎖の長さに対応する。これらの材
料は、い（つかの供給者により商業的に製造され、そし
てＨｙｐｅｒｓｉｌ（Ｓｈａｎｄｏｎ） ＋ ５ｙｎｏ
ｃｈｒｏｐａｋ （Ｓｙｎｃｈｒｏｍ） ＋ Ｎｕｃｌ
ｅｏｓ ｉ Ｉ。
５ｐｈｅｒｉｓｏｒｂ及びＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂの商標
下で販売されている。
下で販売されている。
実質的に均一の親油性表面を提供するために処理され得
るイムノアッセイに使用されるすべての従来の固相材料
（たとえば、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ラテック
ス、ゴム、ガラス及び同様のもの）、たとえばシリコー
ン処理剤の層により被覆され得る材料が、本発明に使用
され得る。特に、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ラテ
ックス、ゴム、ガラス及び同様のものが適切である。そ
れらの材料は、マイクロタイタープレート、試験管、含
浸棒及び類似する固体支持体を含んで成る。試験される
広範囲の種類の材料のうち、ラテックス球だけは、ある
物質を有する固相として使用するためには特に適切でな
かった。その球は、シリコーン処理剤により被覆される
場合、凝集する傾向があった。イオン強度の調整がこの
問題を最小にすることができる。
るイムノアッセイに使用されるすべての従来の固相材料
（たとえば、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ラテック
ス、ゴム、ガラス及び同様のもの）、たとえばシリコー
ン処理剤の層により被覆され得る材料が、本発明に使用
され得る。特に、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ラテ
ックス、ゴム、ガラス及び同様のものが適切である。そ
れらの材料は、マイクロタイタープレート、試験管、含
浸棒及び類似する固体支持体を含んで成る。試験される
広範囲の種類の材料のうち、ラテックス球だけは、ある
物質を有する固相として使用するためには特に適切でな
かった。その球は、シリコーン処理剤により被覆される
場合、凝集する傾向があった。イオン強度の調整がこの
問題を最小にすることができる。
この方法は、モノクローナル抗体が特異的である親水性
エピトープを有する両親媒性分析物をアッセイするため
に有用である。そのような分析物の典型的なものは、リ
ポタンパク質及びリポ多糖である。病原菌の特徴である
リポ多糖又は内毒素、たとえばタラミゾイア トラコマ
チル、クラミゾイア プシタシ、ネイセリア ゴノルヘ
ア及びニジエリシャ コリにより産生される内毒素が特
に興味の対象である。
エピトープを有する両親媒性分析物をアッセイするため
に有用である。そのような分析物の典型的なものは、リ
ポタンパク質及びリポ多糖である。病原菌の特徴である
リポ多糖又は内毒素、たとえばタラミゾイア トラコマ
チル、クラミゾイア プシタシ、ネイセリア ゴノルヘ
ア及びニジエリシャ コリにより産生される内毒素が特
に興味の対象である。
そのような分析物を含むサンプルは、血清、血漿、組織
洗浄物、組織検体又は臨床スワブを含んで成る。分析物
がタラミゾイア トラコマチル又はタラミゾイア ブシ
タシのリポ多糖特徴である場合、その分析物は、素体及
び感染された宿主細胞の混合物として又は感染された個
人から得られたスワブからの抽出物として１、精製され
た形で（適切な希釈度で）アッセイされ得る。細胞含有
サンプル中におけるリポ多糖又はリポタンパク質分析物
をアッセイする場合、そのサンプルは、アッセイの効力
を最適にするために、アッセイの前、水性開放緩衝液と
共にインキュベートされ得る。
洗浄物、組織検体又は臨床スワブを含んで成る。分析物
がタラミゾイア トラコマチル又はタラミゾイア ブシ
タシのリポ多糖特徴である場合、その分析物は、素体及
び感染された宿主細胞の混合物として又は感染された個
人から得られたスワブからの抽出物として１、精製され
た形で（適切な希釈度で）アッセイされ得る。細胞含有
サンプル中におけるリポ多糖又はリポタンパク質分析物
をアッセイする場合、そのサンプルは、アッセイの効力
を最適にするために、アッセイの前、水性開放緩衝液と
共にインキュベートされ得る。
その開放衝面液は、両親媒性分子が親油性表面に結合さ
れ８８して方向づけされ得るように、素体、生物体又は
細胞からりボタンバク質又はリポ多糖抗原を開放する目
的を満たす。さらに、宿主細胞物質、たとえばそのよう
なサンプルの分析を実質的に妨げることができる粘液、
上皮細胞及び他の細胞物質の存在が、実質的に、開放緩
衝液により処理されるサンプルにおいて減じられる。開
放緩衝液による処理は、アッセイに使用される水性媒体
中に分散される両親媒性分析物をもたらす。
れ８８して方向づけされ得るように、素体、生物体又は
細胞からりボタンバク質又はリポ多糖抗原を開放する目
的を満たす。さらに、宿主細胞物質、たとえばそのよう
なサンプルの分析を実質的に妨げることができる粘液、
上皮細胞及び他の細胞物質の存在が、実質的に、開放緩
衝液により処理されるサンプルにおいて減じられる。開
放緩衝液による処理は、アッセイに使用される水性媒体
中に分散される両親媒性分析物をもたらす。
水性開放緩衝液は普通、０．１ Ｍ〜０．５Ｍ、最適に
は約０．３ Ｍの合計イオン強度を有し、そして０、Ｏ
ＩＭ〜０．２Ｍ、普通０．０５Ｍ〜０．１５モルのリン
酸ナトリウム緩衝液（合計イオン強度０．５Ｍを越えな
いＮａＣｊ！を有する）を含んで成る。その溶液は、６
．５〜８．５のｐｉｌ値、普通約７．４の生理的ｐＨ値
に緩衝化されるであろう。
は約０．３ Ｍの合計イオン強度を有し、そして０、Ｏ
ＩＭ〜０．２Ｍ、普通０．０５Ｍ〜０．１５モルのリン
酸ナトリウム緩衝液（合計イオン強度０．５Ｍを越えな
いＮａＣｊ！を有する）を含んで成る。その溶液は、６
．５〜８．５のｐｉｌ値、普通約７．４の生理的ｐＨ値
に緩衝化されるであろう。
その緩衝溶液はまた、通常０．０２５〜０．５０％（ｗ
／ｖ）で界面活性剤も含むであろう、（重量／体積）（
ｗ／ｖ）とは、緩衝溶液１０〇−中の界面活性剤のグラ
ム数を意味する。広範囲の種類の界面活性剤が使用され
得る。特に、イオン性、非イオン性、両性イオン性コー
ル酸誘導体（たとえばＣＩＩＡＰＳ）及びデオキシコー
ル酸誘導体が試験された。
／ｖ）で界面活性剤も含むであろう、（重量／体積）（
ｗ／ｖ）とは、緩衝溶液１０〇−中の界面活性剤のグラ
ム数を意味する。広範囲の種類の界面活性剤が使用され
得る。特に、イオン性、非イオン性、両性イオン性コー
ル酸誘導体（たとえばＣＩＩＡＰＳ）及びデオキシコー
ル酸誘導体が試験された。
界面活性剤のそれぞれは、精製された素体に対して試験
される場合、適切であった。しかしながら、精製された
素体のための最適濃度でのＣＩＩＡＰＳ界面活性剤は、
ＥＢ感染の細胞物質と共に使用される場合、不適切であ
ることがわかった。界面活性剤は、リポ多糖抗原を有す
る固相結合部位のために遊離されたリポ多糖と競争する
細胞からの物質を明らかに抽出した。好ましい界面活性
剤は、オクチルグルコピラノシド及びデオキシコール酸
誘導体、たとえばデオキシコレート及びケノデオキシコ
レートである。これらの界面活性剤に関する最適濃度は
、約０．１％（ｗ／ｖ）である。
される場合、適切であった。しかしながら、精製された
素体のための最適濃度でのＣＩＩＡＰＳ界面活性剤は、
ＥＢ感染の細胞物質と共に使用される場合、不適切であ
ることがわかった。界面活性剤は、リポ多糖抗原を有す
る固相結合部位のために遊離されたリポ多糖と競争する
細胞からの物質を明らかに抽出した。好ましい界面活性
剤は、オクチルグルコピラノシド及びデオキシコール酸
誘導体、たとえばデオキシコレート及びケノデオキシコ
レートである。これらの界面活性剤に関する最適濃度は
、約０．１％（ｗ／ｖ）である。
還元剤もまた、約０．０１ｍＭ〜１抛Ｈで開放緩衝液中
に存在する。Ｎ−アセチルシステインは、好ましい還元
剤である。最適な配合物は、０．１ ｍＭのＮ−アセチ
ルシステインを含む。場合によっては、緩衝液は保存剤
も含む。
に存在する。Ｎ−アセチルシステインは、好ましい還元
剤である。最適な配合物は、０．１ ｍＭのＮ−アセチ
ルシステインを含む。場合によっては、緩衝液は保存剤
も含む。
サンプルは、開放緩衝液と共に混合され、水性媒体中に
分散された分析物を提供する。サンプルが水性懸濁液と
して与えられる場合、抗原の溶解が、固相による接種の
間、生じる。サンプルがスワブ上に存在する場合、その
スワブは開放緩衝液を含む管内で１分間激しく撹拌され
、そして次に１０〜１５分間静置される。その後、その
スワブはさらに１５秒間撹拌され、そして抽出物がスワ
ブから管内に追い出される。次にその抽出物の一部が固
相と共にインキユベートされる。水性媒体中に分散され
た分析物は、親油性表面、たとえばシリコーン処理され
た固体支持体と共に、該表面に分析物が結合するのに十
分な時間インキュベートされる。典型的な検体、たとえ
ば患者のスワブに関しては、インキュベーションは、約
３７℃で、少なくとも約１〜１晩、好ましくは約１８時
間である。これらのインキュベーション時間は、表面へ
の利用できる抗原の約７０〜約ｌＯＯ％の結合をもたら
す。等量の結合を提供する時間が、室温又は他のインキ
ュベーション温度のために決定され得る。
分散された分析物を提供する。サンプルが水性懸濁液と
して与えられる場合、抗原の溶解が、固相による接種の
間、生じる。サンプルがスワブ上に存在する場合、その
スワブは開放緩衝液を含む管内で１分間激しく撹拌され
、そして次に１０〜１５分間静置される。その後、その
スワブはさらに１５秒間撹拌され、そして抽出物がスワ
ブから管内に追い出される。次にその抽出物の一部が固
相と共にインキユベートされる。水性媒体中に分散され
た分析物は、親油性表面、たとえばシリコーン処理され
た固体支持体と共に、該表面に分析物が結合するのに十
分な時間インキュベートされる。典型的な検体、たとえ
ば患者のスワブに関しては、インキュベーションは、約
３７℃で、少なくとも約１〜１晩、好ましくは約１８時
間である。これらのインキュベーション時間は、表面へ
の利用できる抗原の約７０〜約ｌＯＯ％の結合をもたら
す。等量の結合を提供する時間が、室温又は他のインキ
ュベーション温度のために決定され得る。
インキュベーションの後、水性媒体が表面からアスビレ
ーションにより分離される。普通、表面は、非結合物質
の除去を確保するために洗浄される。その洗浄段階は通
常、洗浄緩衝液により行なわれる。その緩衝液は、生理
的食塩緩衝液であり、そして界面活性剤、たとえばＴｗ
ｅｅｎ （ポリオキシエチレンソルビタン）を有するリ
ン酸緩衝溶液を含むことができる。
ーションにより分離される。普通、表面は、非結合物質
の除去を確保するために洗浄される。その洗浄段階は通
常、洗浄緩衝液により行なわれる。その緩衝液は、生理
的食塩緩衝液であり、そして界面活性剤、たとえばＴｗ
ｅｅｎ （ポリオキシエチレンソルビタン）を有するリ
ン酸緩衝溶液を含むことができる。
分析物の親水性エピトープに対して特異的なモノクロー
ナル抗体は、前記表面と共に、該抗体が分析物に結合す
るのに十分な時間インキユベートされる。便利には、イ
ンキュベーションは、３７℃で約３０分〜１時間であろ
う。インキュベーションの後、表面は洗浄緩衝液により
洗浄され、親水性エピトープに結合されていない抗体を
除去することができる。
ナル抗体は、前記表面と共に、該抗体が分析物に結合す
るのに十分な時間インキユベートされる。便利には、イ
ンキュベーションは、３７℃で約３０分〜１時間であろ
う。インキュベーションの後、表面は洗浄緩衝液により
洗浄され、親水性エピトープに結合されていない抗体を
除去することができる。
表面に結合されている親水性エピトープに結合された抗
体が検出される。典型的な検出手段は、ラベルされた抗
体、たとえば酵素結合性抗体の使用を含む。同様に、結
合された抗体は、第１抗体に対して特異的なラベルされ
た第２抗体により検出され得る。そのような抗体は、普
通、第１抗体、たとえばヤギ抗−マウス抗体の種特異的
部分に対して特異的である。検出段階の条件は、検出方
法により通常使用されるのと同じである。すなわち、親
油性表面の使用は、検出段階を変えない。
体が検出される。典型的な検出手段は、ラベルされた抗
体、たとえば酵素結合性抗体の使用を含む。同様に、結
合された抗体は、第１抗体に対して特異的なラベルされ
た第２抗体により検出され得る。そのような抗体は、普
通、第１抗体、たとえばヤギ抗−マウス抗体の種特異的
部分に対して特異的である。検出段階の条件は、検出方
法により通常使用されるのと同じである。すなわち、親
油性表面の使用は、検出段階を変えない。
次の例は、より理解する目的で提供され、限定ｔａｂｏ
′？″″！″パ・ 以下余白〔実 験〕 “低い”、“中間の”、及び“高い”結合性のポリスチ
レンを示すＢｅｈｒｉｎｇ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ
（ＮＵＮＣ）からのマイクロタイタープレートを、アッ
セイ方法に使用するために評価した。定められた結合能
力は、プラスチックの適切な処理を示す。Ａｑｕａ−３
ｉｌのシリコーン処理溶液（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｎ＋
１ｃａｌ Ｃｏ、）を用いて、それぞれのタイプのプレ
ート上に実質的に均一の親油性表面を提供した。シリコ
ーン処理の後、それぞれのプレートは、標準化アッセイ
において改良された性能を示し、そして媒体結合プレー
） （ＮｔｌＮＣ４−６９３２９）は、そのアッセイ
方法で最適に実施された。Ｉｍｍｕｌｏｎ ２ （口ｙ
ａａ ｔｅｃｈ ）プレートがまた評価され、そしてシ
リコーン処理の後、抗−ＬＰＳモノクローナル抗体の高
められた結合性を示した。
′？″″！″パ・ 以下余白〔実 験〕 “低い”、“中間の”、及び“高い”結合性のポリスチ
レンを示すＢｅｈｒｉｎｇ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ
（ＮＵＮＣ）からのマイクロタイタープレートを、アッ
セイ方法に使用するために評価した。定められた結合能
力は、プラスチックの適切な処理を示す。Ａｑｕａ−３
ｉｌのシリコーン処理溶液（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｎ＋
１ｃａｌ Ｃｏ、）を用いて、それぞれのタイプのプレ
ート上に実質的に均一の親油性表面を提供した。シリコ
ーン処理の後、それぞれのプレートは、標準化アッセイ
において改良された性能を示し、そして媒体結合プレー
） （ＮｔｌＮＣ４−６９３２９）は、そのアッセイ
方法で最適に実施された。Ｉｍｍｕｌｏｎ ２ （口ｙ
ａａ ｔｅｃｈ ）プレートがまた評価され、そしてシ
リコーン処理の後、抗−ＬＰＳモノクローナル抗体の高
められた結合性を示した。
タラミゾイアについての典型的なアッセイを、次のよう
にして行なった。マイクロタイタープレート（ＮＵＮＣ
・４−６９３２９）を、製造業者の注意書きに従って調
製されたＡｑｕａ−５ｉｌ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅａ＋
１ｃａｌ Ｃｏ、）のシリコーン処理溶液２００ Ｉｌ
ｌをそれぞれのウェル１に添加することにより、又はＡ
ｑｕａ−Ｓｉ）溶液の容器中にマイクロタイタープレー
トを含浸することにより２度被覆した。
にして行なった。マイクロタイタープレート（ＮＵＮＣ
・４−６９３２９）を、製造業者の注意書きに従って調
製されたＡｑｕａ−５ｉｌ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅａ＋
１ｃａｌ Ｃｏ、）のシリコーン処理溶液２００ Ｉｌ
ｌをそれぞれのウェル１に添加することにより、又はＡ
ｑｕａ−Ｓｉ）溶液の容器中にマイクロタイタープレー
トを含浸することにより２度被覆した。
タラミゾイアの存在のために処理されるべきサンプル、
すなわち素体（ＥＢ）を含む臨床スワブを、開放緩衝液
０．５ ｄにより希釈した。アッセイのためのその開放
緩衝液の配合は次の通りであった： ０．１Ｍ リン酸ナトリウム、ｐＨ７，４０，０８８％
ナトリウム デオキシコレート１ｎ＋ＭＮ−アセチル
システィン ０．０２％ チメロサール（保存剤）。
すなわち素体（ＥＢ）を含む臨床スワブを、開放緩衝液
０．５ ｄにより希釈した。アッセイのためのその開放
緩衝液の配合は次の通りであった： ０．１Ｍ リン酸ナトリウム、ｐＨ７，４０，０８８％
ナトリウム デオキシコレート１ｎ＋ＭＮ−アセチル
システィン ０．０２％ チメロサール（保存剤）。
スワブ及び添加される開放緩衝液を、ガラス管中で撹拌
した。スワブの内容物を、管の壁に対してスワブを押し
つけることによってできるだけ完全に管中に押し出し、
水性媒体中に分散された分析物を提供した。その媒体１
００ＪＩｌを、前処理されたマイクロタイタープレート
に添加し、そして３７℃で１時間インキュベートした。
した。スワブの内容物を、管の壁に対してスワブを押し
つけることによってできるだけ完全に管中に押し出し、
水性媒体中に分散された分析物を提供した。その媒体１
００ＪＩｌを、前処理されたマイクロタイタープレート
に添加し、そして３７℃で１時間インキュベートした。
およそ７０〜８０％の利用できる抗体が３７℃で１時間
で結合する。
で結合する。
インキュベーションの後、サンプル含有緩衝液をウェル
からアスピレートし、そしてそのウェルを、Ｐｕｓ／Ｔ
ｗｅｅｎ洗浄緩衝液（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐ
ｆ１７．４．０．１５ＭのＮａＣｊ！ 、 ０．１％Ｔ
ｗｅｅｎ２０）２５０Ｊ１１により一度洗浄した。
からアスピレートし、そしてそのウェルを、Ｐｕｓ／Ｔ
ｗｅｅｎ洗浄緩衝液（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐ
ｆ１７．４．０．１５ＭのＮａＣｊ！ 、 ０．１％Ｔ
ｗｅｅｎ２０）２５０Ｊ１１により一度洗浄した。
抗−クラミゾィア抗体（５０％ウシ胎児血清、０．０２
５ＭのＴｒｉｓ （ｐＨ８，０） 、０．ＯＩＭのクエ
ン酸ミナトリウム、０．０２％チメロサール溶液中に希
釈されたＣ、トラコマチス及びＣ，プシタシのリポ多糖
抗原に対して特異的なネズミモノクローナル抗体）
１００ｍを、それぞれのウェルに添加し、そして３７℃
で３０分間インキュベートした。それぞれのウェルを、
洗浄緩衝液２５０ Ｊｌｌにより２度洗浄した。抗体接
合体（ホースラディシュペルオキシダーゼ酵素に接合さ
れ、そして抗−クラミゾィア抗体と同じ緩衝液に希釈さ
れたヤギ抗−マウス抗体） １００ｍを、それぞれの
ウェルに添加し、そして３７℃で３０分間インキュベー
トした。それぞれのウェルを、洗浄緩衝液により３度洗
浄した。
５ＭのＴｒｉｓ （ｐＨ８，０） 、０．ＯＩＭのクエ
ン酸ミナトリウム、０．０２％チメロサール溶液中に希
釈されたＣ、トラコマチス及びＣ，プシタシのリポ多糖
抗原に対して特異的なネズミモノクローナル抗体）
１００ｍを、それぞれのウェルに添加し、そして３７℃
で３０分間インキュベートした。それぞれのウェルを、
洗浄緩衝液２５０ Ｊｌｌにより２度洗浄した。抗体接
合体（ホースラディシュペルオキシダーゼ酵素に接合さ
れ、そして抗−クラミゾィア抗体と同じ緩衝液に希釈さ
れたヤギ抗−マウス抗体） １００ｍを、それぞれの
ウェルに添加し、そして３７℃で３０分間インキュベー
トした。それぞれのウェルを、洗浄緩衝液により３度洗
浄した。
ＴＭＢ酵素基質（Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉ
ｃｓ） １００Ｉ１１を、ウェル当りに添加し、そして
３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーシ
ョンの後、停止溶液（ＩＭの硫酸溶液） ｕｌｍｌをそ
れぞれのウェルに添加し、そして得られた溶液を４５０
ｎｍで読み取った。
ｃｓ） １００Ｉ１１を、ウェル当りに添加し、そして
３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーシ
ョンの後、停止溶液（ＩＭの硫酸溶液） ｕｌｍｌをそ
れぞれのウェルに添加し、そして得られた溶液を４５０
ｎｍで読み取った。
結合は、未処理プレートよりも２倍〜２０倍高められた
ことが種々のモノクローナル抗体を用いて見出された。
ことが種々のモノクローナル抗体を用いて見出された。
本明細書中に言及されたすべての出版物及び特許出願は
、零発に関与する当業者の熟練のレベルを示す。すべて
の出版物及び特許出願は、引用により本明細書中に組込
まれている。
、零発に関与する当業者の熟練のレベルを示す。すべて
の出版物及び特許出願は、引用により本明細書中に組込
まれている。
本発明の好ましい態様を詳細に示し、そして記載したが
、これによって本発明の範囲を限定するものではない。
、これによって本発明の範囲を限定するものではない。
第１図は、典型的な固体支持体上の両親媒性分子のラン
ダム配向を例示し；そして 第２図は、実質的に均質の親油性表面上での両親媒性分
子の配向を特徴する
ダム配向を例示し；そして 第２図は、実質的に均質の親油性表面上での両親媒性分
子の配向を特徴する
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、親水性エピトープを含有する両親媒性分析物（該分
析物は水性媒体中に分散されている）をアッセイするた
めの方法であって： （ａ）実質的に均一の親油性表面を含んで成る固体支持
体と共に前記媒体を、前記両親媒性分析物が前記親油性
表面に結合するのに十分な時間インキュベートし； （ｂ）前記親油性表面から前記媒体を分離し；そして （ｃ）前記親油性表面上の前記両親媒性分析物の前記親
水性エピトープについてアッセイすることを含んで成る
方法。 ２、前記固体支持体を、シリコーン処理剤を用いて変性
し、前記実質的に均一の親油性表面を提供する請求項１
記載の方法。 ３、前記固体支持体を、炭化水素鎖によるアルキル化に
よって変性し、前記実質的に均一の親油性表面を提供す
る請求項１記載の方法。 ４、臨床用スワブ又は組織検体を含んで成る細胞含有サ
ンプル中におけるリポ多糖又はリポタンパク質分析物を
アッセイするための方法であって：（ａ）水性媒体中に
分散された前記分析物を提供するために、細胞からリポ
多糖及びリポタンパク質を開放するのに十分な時間、前
記サンプルを、０．２Ｍ〜０．４Ｍの合計イオン強度及
び６．５〜８．５のｐＨ値を有する水性開放緩衝液（該
水性開放緩衝液の合計イオン強度０．５Ｍを越えない、
ＮａＣｌを有する０．０１Ｍ〜０．２Ｍのリン酸ナトリ
ウム緩衝液、０．０２５〜０．５０％（ｗ／ｖ）の界面
活性剤及び０．０１ｍＭ〜１０ｍＭの還元剤を含んで成
る）と共にインキュベートし； （ｂ）実質的に均質の親油性表面のシリコーン処理され
た固体支持体と共に前記媒体を、前記分析物が前記親油
性表面に結合するのに十分な時間インキュベートし； （ｃ）前記新油性表面から前記サンプル含有媒体を分離
し； （ｄ）前記親油性表面を洗浄し； （ｅ）前記分析物の親水性エピトープに対して特異的な
抗体を前記表面と共に、前記抗体が前記エピトープに結
合するのに十分な時間インキュベートし；そして （ｆ）前記親油性表面に結合された前記両親媒性分析物
の前記親水性エピトープに結合された前記抗体を検出す
ることを含んで成る方法。 ５、前記開放緩衝液が０．０５Ｍ〜０．１５Ｍのリン酸
ナトリウム／０．０５〜０．３Ｍの塩化ナトリウム緩衝
液を含んで成る請求項４記載の方法。 ６、前記開放緩衝液が０．０５Ｍ〜０．１５Ｍのリン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）を含んで成る請求項４
記載の方法。 ７、前記開放緩衝液が０．０２５〜０．２５％（ｗ／ｖ
）のオクチルグルコピラノシド又はデオキシコール酸誘
導体界面活性剤を含んで成る請求項４記載の方法。 ８、前記開放緩衝液が約０．１％（ｗ／ｖ）のデオキシ
コレート又はケノデオキシコレート界面活性剤を含んで
成る請求項７記載の方法。 ９、前記開放緩衝液が０．０１ｍＭ〜１０ｎＭのＮ−ア
セチルシステインを含んで成る請求項４記載の方法。 １０、前記分析物が病原菌の抗原特徴である請求項４記
載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US8507687A | 1987-08-13 | 1987-08-13 | |
| US085076 | 1987-08-13 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01138460A true JPH01138460A (ja) | 1989-05-31 |
Family
ID=22189304
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63201059A Pending JPH01138460A (ja) | 1987-08-13 | 1988-08-13 | 親油性表面を用いての改良された両親媒性分析物アッセイ |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0303515B1 (ja) |
| JP (1) | JPH01138460A (ja) |
| AT (1) | ATE82397T1 (ja) |
| CA (1) | CA1335563C (ja) |
| DE (1) | DE3875857D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015169616A (ja) * | 2014-03-10 | 2015-09-28 | 応用酵素医学研究所株式会社 | シリコーン表面処理タンパク質・ペプチド支持体 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5155023A (en) * | 1990-02-09 | 1992-10-13 | Synbiotics Corporation | Enzyme immunoassay procedure for amphipathic analytes |
| US5187066A (en) * | 1990-02-14 | 1993-02-16 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Methods for detecting amphiphilic antigens |
| US6261792B1 (en) | 1990-12-07 | 2001-07-17 | The Liposome Company, Inc. | Lipid-dependent diagnostic assays |
| ATE140798T1 (de) * | 1990-12-07 | 1996-08-15 | Liposome Co Inc | Lipid-abhängige diagnostische analysenverfahren |
| US5773234A (en) * | 1995-08-07 | 1998-06-30 | Quidel Corporation | Method and device for chlamydia detection |
| JP5416159B2 (ja) * | 2011-03-31 | 2014-02-12 | 富士フイルム株式会社 | 高感度なイムノクロマトグラフ方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2319495C2 (de) * | 1973-04-17 | 1985-01-10 | Yeda Research And Development Co., Ltd., Rehovot | Verfahren zum selektiven, reversiblen Binden von Biomolekülen an ein Adsorbens in einer chromatographischen Säule |
| US4241045A (en) * | 1978-05-15 | 1980-12-23 | Research Corporation | Purified antigen to test for Neisseria gonorrheae antibodies |
| US4497899A (en) * | 1982-04-12 | 1985-02-05 | Abbott Laboratories | Immunoassay for Chlamydia trachomatis antigens |
| FI69639C (fi) * | 1982-07-02 | 1986-03-10 | Orion Yhtymae Oy | Preparat foer anvaendning vid klamydia-diagnostik |
| US4766065A (en) * | 1984-08-23 | 1988-08-23 | Becton Dickinson And Company | Detection of cell membrane protein |
| GB8427006D0 (en) * | 1984-10-25 | 1984-11-28 | Iq Bio Ltd | Determination of chlamydia trachomatis |
-
1988
- 1988-08-12 EP EP88307523A patent/EP0303515B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-12 DE DE8888307523T patent/DE3875857D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-12 CA CA000574652A patent/CA1335563C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-08-12 AT AT88307523T patent/ATE82397T1/de active
- 1988-08-13 JP JP63201059A patent/JPH01138460A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015169616A (ja) * | 2014-03-10 | 2015-09-28 | 応用酵素医学研究所株式会社 | シリコーン表面処理タンパク質・ペプチド支持体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3875857D1 (de) | 1992-12-17 |
| ATE82397T1 (de) | 1992-11-15 |
| EP0303515A1 (en) | 1989-02-15 |
| EP0303515B1 (en) | 1992-11-11 |
| CA1335563C (en) | 1995-05-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4294817A (en) | Method of fluoro immunoassay | |
| EP0468585B1 (en) | Biologically active reagent, analytical element and methods for use of the reagent | |
| EP0279517B1 (en) | Non-immunochemical binding of lipopolysaccharides and sandwich essays therefore | |
| US5132205A (en) | High ph extraction composition and its use to determine a chlamydial, gonococcal or herpes antigen | |
| WO1980001515A1 (en) | Improvements in or relating to processes and materials for detecting and determining proteinaceous specific binding agents and materials bindable thereto | |
| EP0670042A1 (en) | Immunoassays for antibodies in urine to microorganisms associated with sexually transmitted diseases | |
| WO2017150733A1 (ja) | イムノクロマトグラフィー装置 | |
| JP2014167439A (ja) | マイコプラズマ・ニューモニアの検出方法 | |
| US5047326A (en) | Immunmological reagent composition and its use in the determination of chlamydial or gonococcal antigens | |
| JPH04297871A (ja) | クラミジア・トラコマティス抗体測定方法及びクラミジア・トラコマティス感染症診断用製剤 | |
| US5075220A (en) | Determination of a chlamydial or gonococcal antigen using a positively-charged ionically binding support | |
| EP0363108B1 (en) | Wash solution containing a cationic surfactant and its use in chlamydial and gonococcal determinations | |
| JPH07108230B2 (ja) | 単純ヘルペスウイルス抗原の抽出または測定のための抽出組成物、抽出方法および診断試験キット | |
| JP4030438B2 (ja) | 免疫学的測定方法および免疫クロマトグラフィー法測定キット。 | |
| JPH01138460A (ja) | 親油性表面を用いての改良された両親媒性分析物アッセイ | |
| JP4115728B2 (ja) | フロースルー式検査法用組成物、これを用いたキット及び検査法 | |
| US5085986A (en) | Diagnostic test kit and method for determination of chlamydial antigen using a membrane having surface hydroxy groups | |
| US5231004A (en) | Use of heme-containing proteins as stabilizers for enzyme-labeled immunoreactants | |
| US5089389A (en) | Buffered composition, coated article test device and a method for their use | |
| US5032504A (en) | Diagnostic test kit and method for determination of chlamydial or gonococcal antigens using a microporous membrane | |
| JPH0722514B2 (ja) | クラミジア主要外層膜蛋白抗原抽出へのカチオン界面活性剤の使用 | |
| US5234817A (en) | Wash solution containing a cationic surfactant and its use in chlamydial and gonococcal determinations | |
| JP3718896B2 (ja) | クラミジア・ニューモニエ抗原、その製造法、それを用いた抗クラミジア・ニューモニエ抗体の測定法及び抗クラミジア・ニューモニエ抗体測定用試薬 | |
| EP0456307A1 (en) | Use of enzyme-labeled antibody fragment in determination of chlamydial or gonococcal antigens | |
| JPH04212062A (ja) | アクチノバシラス・アクチノマイセテムコミタンスに対する抗体組成物およびその診断における使用 |