JPH01145000A - 核酸塩基配列における突然変異の測定法 - Google Patents
核酸塩基配列における突然変異の測定法Info
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- JPH01145000A JPH01145000A JP62303316A JP30331687A JPH01145000A JP H01145000 A JPH01145000 A JP H01145000A JP 62303316 A JP62303316 A JP 62303316A JP 30331687 A JP30331687 A JP 30331687A JP H01145000 A JPH01145000 A JP H01145000A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は核酸上で起った突然変異等の塩基配列の変異を
検出する方法に関する。
検出する方法に関する。
（従来技術とその問題点）
近年、遺伝子工学の進歩に伴ない、動物、植物。
細Ｕ、ウィルス等の生物の遺伝情報が明らかになりつつ
ある。特に人間の遺伝子に対する解析は急速に進んでお
り、遺伝病、癌等においては核酸の塩基配列のレベルで
明らかになりつつある。その結果ある種の遺伝病では、
核酸に塩基配列の僅か一部分の変異、即ち点突然変異に
因ることも知られている０以上のように遺伝病等の診断
は、核酸の塩基配列を調べ正常な塩基配列と比較するこ
とにより可能である。従来の方法によれば２例えばまず
核酸試料を細胞から抽出し制限酵素により切断し、を気
泳動法等の方法で核酸の断片の大きさに従って分離し１
分離した該断片をサザンブロッティング法によりフィル
ターに固定化し、ラジオアイソトープで標識された核酸
プローブとハイブリダイズさせ、そのパターンにより変
異の有無を判定する方法があげられる。！！な、他の方
法として１例えば核酸試料を直接フィルターに固定化し
。
ある。特に人間の遺伝子に対する解析は急速に進んでお
り、遺伝病、癌等においては核酸の塩基配列のレベルで
明らかになりつつある。その結果ある種の遺伝病では、
核酸に塩基配列の僅か一部分の変異、即ち点突然変異に
因ることも知られている０以上のように遺伝病等の診断
は、核酸の塩基配列を調べ正常な塩基配列と比較するこ
とにより可能である。従来の方法によれば２例えばまず
核酸試料を細胞から抽出し制限酵素により切断し、を気
泳動法等の方法で核酸の断片の大きさに従って分離し１
分離した該断片をサザンブロッティング法によりフィル
ターに固定化し、ラジオアイソトープで標識された核酸
プローブとハイブリダイズさせ、そのパターンにより変
異の有無を判定する方法があげられる。！！な、他の方
法として１例えば核酸試料を直接フィルターに固定化し
。
これにラジオアイソトープで標識された核酸プローブを
ハイブリダイズさせ、ハイブリッドの安定性を測定して
変異の有無を判定する方法、あるいは、核酸試料と核酸
プロニブ°をハイブリダイズさせ、これをホルムアミド
勾配をつけたアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、ハイ
ブリッドの変性点をオートラジオグラフにより測定して
変異の有無を判定する方法等があげられる。しかしなが
ら。
ハイブリダイズさせ、ハイブリッドの安定性を測定して
変異の有無を判定する方法、あるいは、核酸試料と核酸
プロニブ°をハイブリダイズさせ、これをホルムアミド
勾配をつけたアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、ハイ
ブリッドの変性点をオートラジオグラフにより測定して
変異の有無を判定する方法等があげられる。しかしなが
ら。
例えば制限酵素を用いる方法では操作が複雑で時間がか
かり、また核酸塩基配列の変異が必ずしも制＠＃素によ
る切断パターンとして現れない等の問題点がある。また
、核酸試料と核酸１０−プのハイブリッドの安定性の変
化を調べて変異の有無を判定する方法においては、核酸
試料中の変異の有無の検出に先立って対照を定めて、該
対照の安定性について詳細な検討が必要である。この理
由は核酸試料と核酸１０−プがハイブリッドを形成する
ための塩基間の水素結合、即ちアデニン−チミンまなは
ウラシル（Ａ−ＴまたはＵ）、グアニン−シトシン（Ｇ
−Ｃ）において、Ｇ−Ｃ結合はＡ−Ｔ（またはＡ−Ｕ）
結合に較べ強力であり。
かり、また核酸塩基配列の変異が必ずしも制＠＃素によ
る切断パターンとして現れない等の問題点がある。また
、核酸試料と核酸１０−プのハイブリッドの安定性の変
化を調べて変異の有無を判定する方法においては、核酸
試料中の変異の有無の検出に先立って対照を定めて、該
対照の安定性について詳細な検討が必要である。この理
由は核酸試料と核酸１０−プがハイブリッドを形成する
ための塩基間の水素結合、即ちアデニン−チミンまなは
ウラシル（Ａ−ＴまたはＵ）、グアニン−シトシン（Ｇ
−Ｃ）において、Ｇ−Ｃ結合はＡ−Ｔ（またはＡ−Ｕ）
結合に較べ強力であり。
従ってＧ−Ｃ結合の割合によって該ハイブリッドの安定
性が変化する事による。
性が変化する事による。
（問題点を解決するための手段）
本発明者らは従来技術にみちれる問題点を解決すべく鋭
意研究を行なった結果、簡単な操作により迅速に実施可
能でしかも核酸試料塩基配列中の変異の有無を判定する
ための対照を必要としない方法を完成させた。即ち本発
明は核酸プローブをもちいて核酸塩基配列における変異
を検出する方法に於いて。
意研究を行なった結果、簡単な操作により迅速に実施可
能でしかも核酸試料塩基配列中の変異の有無を判定する
ための対照を必要としない方法を完成させた。即ち本発
明は核酸プローブをもちいて核酸塩基配列における変異
を検出する方法に於いて。
■ 担体に固定化した核酸１０−プに対し核酸試料をテ
トラアルキルアンモニウム塩溶液中でハイブリダイズさ
せ。
トラアルキルアンモニウム塩溶液中でハイブリダイズさ
せ。
■ ハイブリダイズしなかった核酸試料を除去した後。
■ ハイブリッド形成時の温度から０℃〜１００℃の範
囲に温度を上昇させて核酸試料を解離させ。
囲に温度を上昇させて核酸試料を解離させ。
■ 解離した核酸試料を測定する
ことを特徴とする核酸塩基配列における突然変異の測定
法に関するものである。
法に関するものである。
以下本発明の詳細な説明する。
本発明では、核酸試料への核酸プローブの特異性を得る
ために、１０塩基以上の長さを有する核酸プローブを用
いることが望ましい、また９例えば核酸試料と対応する
核酸プローブのハイブリッドが１００塩基対以上となる
場合においては、核酸試料中の変異による該ハイブリッ
ド中のミスマツチが少数であると、該ミスマツチに起因
するハイブリッドの安定性の変化は微妙となり測定しに
くくなる。従って、用いる核酸プローブは１０〜１００
塩基、更に好ましくは１５〜８０塩基程度のものがよい
、但し、この様な場合においてもハイブリッド中のミス
マツチが複数存在する場合。
ために、１０塩基以上の長さを有する核酸プローブを用
いることが望ましい、また９例えば核酸試料と対応する
核酸プローブのハイブリッドが１００塩基対以上となる
場合においては、核酸試料中の変異による該ハイブリッ
ド中のミスマツチが少数であると、該ミスマツチに起因
するハイブリッドの安定性の変化は微妙となり測定しに
くくなる。従って、用いる核酸プローブは１０〜１００
塩基、更に好ましくは１５〜８０塩基程度のものがよい
、但し、この様な場合においてもハイブリッド中のミス
マツチが複数存在する場合。
さらには核酸試料中の変異が複数個の塩基の欠失あるい
は挿入等によるときはこの限りではない。
は挿入等によるときはこの限りではない。
核酸試料としては、動物細胞例えば白血球細胞。
腎細胞、肝細胞等また。細菌、ウィルス等の微生物、さ
らには植物細胞等から抽出した核酸を用いることが出来
る。核酸１０−プは、核酸試料中の変異の有無を調べた
い部分とハイブリダイズ可能な状態で固定化されていれ
ば良く、この様に固定するため、末端固定が好ましい、
担体としては。
らには植物細胞等から抽出した核酸を用いることが出来
る。核酸１０−プは、核酸試料中の変異の有無を調べた
い部分とハイブリダイズ可能な状態で固定化されていれ
ば良く、この様に固定するため、末端固定が好ましい、
担体としては。
天然あるいは合成ポリマー等、水溶液に不溶性で通常の
生化学反応に適用される温度範囲で安定であるものであ
ればなんら制限はない、固定化の方法としては２例えば
セルロースを担体とした時は。
生化学反応に適用される温度範囲で安定であるものであ
ればなんら制限はない、固定化の方法としては２例えば
セルロースを担体とした時は。
核酸プローブの５′末端の燐酸基を介して隣酸エステル
の形で共有結合固定することが出来る。また核酸プロー
ブの末端に脂肪族アミノ基を有したような誘導体であれ
ば、アミノ基に対して反応性のある基を導入した担体に
対して１例えばアミド結合あるいはウレタン型結合等の
ような形で共有結合させることも出来る。
の形で共有結合固定することが出来る。また核酸プロー
ブの末端に脂肪族アミノ基を有したような誘導体であれ
ば、アミノ基に対して反応性のある基を導入した担体に
対して１例えばアミド結合あるいはウレタン型結合等の
ような形で共有結合させることも出来る。
本発明では、核酸試料と核酸プローブ間のハイブリッド
における塩基対組成に由来する安定性の違いを排除する
ために、全工程をテトラアルキルアンモニウム塩の存在
下で行なう、テトラアルキルアンモニウム塩はＡ−Ｔ
（あるいはＡ−Ｕ）結合及びＧ−Ｃ結合の結合強度を均
一にする。従ってハイブリッドの安定性は該ハイブリッ
ドの塩基対数にのみ依存する。このことはハイブリッド
の解離を引き起こす条件、即ちハイブリッドの安定性を
その塩基対数から容易に推測することを可能とするもの
であり１強いては核酸試料塩基配列の変異の有無を判定
するための対照を必要としないことを京味する。テトラ
アルキルアンモニウム塩は２．０〜３．５モル／リット
ル好ましくは２．４〜３．０モル／リットルの濃度が好
ましい、この濃度範囲以外では先に述べたような効果が
低下する。また、テトラアルキルアンモニウムのアルキ
ル鎖は、炭素数１〜２のものが好ましく炭素数３以上の
テトラアルキルアンモニウム塩では先に述べた様な効果
が低下する。核酸試料と核酸プローブをハイブリダイズ
させるには１通常類られた方法１例えば４０℃〜７０℃
の温度下で接触させ後に温度を徐々に低下させるなどし
て行なえばよい。
における塩基対組成に由来する安定性の違いを排除する
ために、全工程をテトラアルキルアンモニウム塩の存在
下で行なう、テトラアルキルアンモニウム塩はＡ−Ｔ
（あるいはＡ−Ｕ）結合及びＧ−Ｃ結合の結合強度を均
一にする。従ってハイブリッドの安定性は該ハイブリッ
ドの塩基対数にのみ依存する。このことはハイブリッド
の解離を引き起こす条件、即ちハイブリッドの安定性を
その塩基対数から容易に推測することを可能とするもの
であり１強いては核酸試料塩基配列の変異の有無を判定
するための対照を必要としないことを京味する。テトラ
アルキルアンモニウム塩は２．０〜３．５モル／リット
ル好ましくは２．４〜３．０モル／リットルの濃度が好
ましい、この濃度範囲以外では先に述べたような効果が
低下する。また、テトラアルキルアンモニウムのアルキ
ル鎖は、炭素数１〜２のものが好ましく炭素数３以上の
テトラアルキルアンモニウム塩では先に述べた様な効果
が低下する。核酸試料と核酸プローブをハイブリダイズ
させるには１通常類られた方法１例えば４０℃〜７０℃
の温度下で接触させ後に温度を徐々に低下させるなどし
て行なえばよい。
ハイブリッドを形成しなかった核酸試料は洗浄により除
去し、ハイブリッドを形成した核酸試料は引き続き該温
度を上昇させることにより再び解離させる。この時核酸
試料と核酸プローブ間にＡ−Ｔ （Ａ−Ｕ）、Ｇ−Ｃ結
合以外のミスマツチした部分が存在するハイブリッドで
は、完全に相補的に結合したハイブリッドに比べて安定
性が低いため比較的低い温度で核酸試料の解離が起こる
。完全相補的にハイブリダイズした核酸であっても９０
℃〜１００℃では解離しているので温度は核酸試料と核
酸プローブがハイブリッドを形成した時の温度を基準と
して０℃〜１００℃のＲ囲に上昇させればよい、解離し
てきた核酸試料は１例えば紫外域の吸光度、！！た操作
に先立って該核酸試料をラジオアイソトープあるいは蛍
光物質等の標識を施した場合には、それら標識を測定す
ることにより行なえばよい、また溶出してきた核酸試料
をポストラベルし測定してもよい０以上説明した様な操
作を迅速、簡便にかつ正確に行ない得る本発明の実施の
−ＷＸａｔとして核酸プローブを固定化した担体をカラ
ムに充填しテトラアルキルアンモニウム塩溶液を移相と
して用いたカラム形式を挙げることができる。この場合
には担体としてカラム充填の容易なビーズ状、あるいは
粒子状のものを用いることが好ましい０本形式において
は、テトラアルキルアンモニウム塩溶液の温度を随時上
昇させる事でハイブリッドの安定性に起因する核酸試料
の溶出を連続的に測定することが出来る。
去し、ハイブリッドを形成した核酸試料は引き続き該温
度を上昇させることにより再び解離させる。この時核酸
試料と核酸プローブ間にＡ−Ｔ （Ａ−Ｕ）、Ｇ−Ｃ結
合以外のミスマツチした部分が存在するハイブリッドで
は、完全に相補的に結合したハイブリッドに比べて安定
性が低いため比較的低い温度で核酸試料の解離が起こる
。完全相補的にハイブリダイズした核酸であっても９０
℃〜１００℃では解離しているので温度は核酸試料と核
酸プローブがハイブリッドを形成した時の温度を基準と
して０℃〜１００℃のＲ囲に上昇させればよい、解離し
てきた核酸試料は１例えば紫外域の吸光度、！！た操作
に先立って該核酸試料をラジオアイソトープあるいは蛍
光物質等の標識を施した場合には、それら標識を測定す
ることにより行なえばよい、また溶出してきた核酸試料
をポストラベルし測定してもよい０以上説明した様な操
作を迅速、簡便にかつ正確に行ない得る本発明の実施の
−ＷＸａｔとして核酸プローブを固定化した担体をカラ
ムに充填しテトラアルキルアンモニウム塩溶液を移相と
して用いたカラム形式を挙げることができる。この場合
には担体としてカラム充填の容易なビーズ状、あるいは
粒子状のものを用いることが好ましい０本形式において
は、テトラアルキルアンモニウム塩溶液の温度を随時上
昇させる事でハイブリッドの安定性に起因する核酸試料
の溶出を連続的に測定することが出来る。
（発明の効果）
テトラアルキルアンモニウム塩の存在により。
ハイブリッド中のＡ−Ｔ （Ａ−Ｕ）、Ｇ−Ｃ結合の結
合力を均一にすることが可能となる。従って。
合力を均一にすることが可能となる。従って。
本発明では、核酸試料と対応する核酸プローブとのハイ
ブリッド中のＧ−ＣＭ成を考にせず、該ハイブリッドの
長さ、つまり塩基対数のみを安定性の測定時に考慮すれ
ばよい、即ちある塩基対数の完全相補的なハイブリッド
が核酸プローブと核酸試料に解離する温度はテトラアル
キルアンモニウム塩溶液中では、塩基組成に左むされる
ことなく。
ブリッド中のＧ−ＣＭ成を考にせず、該ハイブリッドの
長さ、つまり塩基対数のみを安定性の測定時に考慮すれ
ばよい、即ちある塩基対数の完全相補的なハイブリッド
が核酸プローブと核酸試料に解離する温度はテトラアル
キルアンモニウム塩溶液中では、塩基組成に左むされる
ことなく。
同一温度で生じる。即ち、核酸試料と核酸プローブにミ
スマツチの存在するハイブリッドからの核酸プローブが
解離する温度は完全相補的なハイブリッドから、核酸試
料が解離する温度に比べ低温である。この安定性の変化
、即ちハイブリッドからの核酸試料の解離温度の変化を
測定することで。
スマツチの存在するハイブリッドからの核酸プローブが
解離する温度は完全相補的なハイブリッドから、核酸試
料が解離する温度に比べ低温である。この安定性の変化
、即ちハイブリッドからの核酸試料の解離温度の変化を
測定することで。
核酸試料中の変異を検出する事が出来る０本発明では、
上記の様に核酸試料中の変異の有無を測定する方法にお
いて、従来の制限酵素を用いた方法番こ比べ、より正確
に塩基配列の変異を把握する事が出来る。
上記の様に核酸試料中の変異の有無を測定する方法にお
いて、従来の制限酵素を用いた方法番こ比べ、より正確
に塩基配列の変異を把握する事が出来る。
また、更には核酸試料と核酸プローブ間のハイブリッド
中の塩基組成の影響を排除出来るため、検出のたびごと
にハイブリッドが完全相補的である場合の安定性を知る
ための対照を必要としない。
中の塩基組成の影響を排除出来るため、検出のたびごと
にハイブリッドが完全相補的である場合の安定性を知る
ための対照を必要としない。
（実施例）
以下の実施例により本発明のさらに詳細な説明を行なう
が２本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
が２本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
（実施ｇ４１）
「核酸１０−ブ固定化ゲルの調製」
ＤＮＡ合成装置により下記に示した塩基配列の５１ 末
端にアミノ基を有するオリゴヌクレオチド誘導体を合成
した。これをカルボニルジイミダゾールで活性化したセ
ルロースと反応させることにより核酸プローブを固定化
したゲルを調製した。
端にアミノ基を有するオリゴヌクレオチド誘導体を合成
した。これをカルボニルジイミダゾールで活性化したセ
ルロースと反応させることにより核酸プローブを固定化
したゲルを調製した。
５’ ８８２− ＡＧＧ ＴＧＡ ＡＴＴ Ｔ
ＣＴＴＡＡ ＡＣＡ ＧＣＴ ３’ 続いて、前述の核酸１０−プと完全相補的な塩基配列を
持つ２１Ｊｌ＃■、及び５′側から１１番目に１ミスマ
ツチを有する２１量体■の計２種類のオリゴヌクレオチ
ドを、 ＤＮＡ合成装置により合成した。塩基配列は
以下の通り。
ＣＴＴＡＡ ＡＣＡ ＧＣＴ ３’ 続いて、前述の核酸１０−プと完全相補的な塩基配列を
持つ２１Ｊｌ＃■、及び５′側から１１番目に１ミスマ
ツチを有する２１量体■の計２種類のオリゴヌクレオチ
ドを、 ＤＮＡ合成装置により合成した。塩基配列は
以下の通り。
■ ３’ ＴＣＣＡＣＴ ＴＡＡ ＡＧＡ Ａ
ＴＴ ＴＧＴ ＣＧＡ ５’ ■ ３’ ＴＣＣＡＣＴ ＴＡＡ ＡＣＡ Ａ
ＴＴ ＴＧＴ ＣＧＡ ５’ 温度グラジェント槽内に核酸プローブを固定化したカラ
ムをセットし、 ３１４テトラメチルアンモニウム、Ｍ
ｔｍ溶液（１５ｓＨＮａＣｌ、１．５ｓＨＮａ−Ｃ１ｔ
ｒａｔｅ、ｐＨ７，０）で平衡化し、槽内の温度を５０
℃に保ちつつ、パルプより試料核酸を注入しカラム内で
ハイブリダイズさせた。
ＴＴ ＴＧＴ ＣＧＡ ５’ ■ ３’ ＴＣＣＡＣＴ ＴＡＡ ＡＣＡ Ａ
ＴＴ ＴＧＴ ＣＧＡ ５’ 温度グラジェント槽内に核酸プローブを固定化したカラ
ムをセットし、 ３１４テトラメチルアンモニウム、Ｍ
ｔｍ溶液（１５ｓＨＮａＣｌ、１．５ｓＨＮａ−Ｃ１ｔ
ｒａｔｅ、ｐＨ７，０）で平衡化し、槽内の温度を５０
℃に保ちつつ、パルプより試料核酸を注入しカラム内で
ハイブリダイズさせた。
この間、温度を４０℃まで徐々に下げハイブリッド形成
を促進させ、３０分後にＦｌｏｗを開始しく１００μＩ
／ｍｉｎ、）ハイブリダイズしなかった試料を洗い出し
た。５０分に温度上昇を開始しカラム内でハイブリダイ
ズしている試料を溶出させ、溶出してきた核酸を紫外吸
収＜２６０ｎｍ）でモニターし検出した０図１は完全相
補２１量体■及び中央に１ミスマツチをもつ２１１体■
の混合試料を前述のシステムを用い分離した例である。
を促進させ、３０分後にＦｌｏｗを開始しく１００μＩ
／ｍｉｎ、）ハイブリダイズしなかった試料を洗い出し
た。５０分に温度上昇を開始しカラム内でハイブリダイ
ズしている試料を溶出させ、溶出してきた核酸を紫外吸
収＜２６０ｎｍ）でモニターし検出した０図１は完全相
補２１量体■及び中央に１ミスマツチをもつ２１１体■
の混合試料を前述のシステムを用い分離した例である。
それぞれの溶出時間は６７分及び８２分でであった。結
果を図１に示す。
果を図１に示す。
図１は実施例１の測定結果を示すものである。
ｉ！１軸は吸光度及び温度、横軸は時間である。
図中のＡＮＮＥＡＬＩＮＧは核！！５２試料をカラム内
でハイブリダイズさせている時間で、この間は移動相の
流れはない、 ＦＬＯＷ Ｓ丁ＡＲＴで移動相を流し始
め。 ５ＥＰＡＲＡＴＩＮＧで核酸試料の分離を開始する。ｉ
＆初の振り切れているピークはハイブリッドを形成しな
かった過剰の核酸試料で２番目のピークはｌミスマツチ
を有する核酸試料、３番目のピークが完全相補的な核酸
試料の溶出をそれぞれ現している。
でハイブリダイズさせている時間で、この間は移動相の
流れはない、 ＦＬＯＷ Ｓ丁ＡＲＴで移動相を流し始
め。 ５ＥＰＡＲＡＴＩＮＧで核酸試料の分離を開始する。ｉ
＆初の振り切れているピークはハイブリッドを形成しな
かった過剰の核酸試料で２番目のピークはｌミスマツチ
を有する核酸試料、３番目のピークが完全相補的な核酸
試料の溶出をそれぞれ現している。
Claims (2)
- （１）核酸プローブを用いて、核酸塩基配列における変
異を検出する方法において、 ［１］担体に固定化した核酸試料に対応した核酸プロー
ブと核酸試料をテトラアルキルアンモニウム塩溶液存在
下でハイブリダイズさせ ［２］ハイブリダイズしなかった核酸試料を除去した後 ［３］ハイブリッド形成時の温度から０℃〜１００℃の
範囲に上昇させて核酸試料を解離させ、［４］解離した
核酸試料を測定する ことを特徴とする核酸塩基配列における突然変異の測定
法 - （２）核酸プローブを固定化した担体をカラムに充填し
、テトラアルキルアンモニウム塩溶液を移相として用い
ることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の方
法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62303316A JPH01145000A (ja) | 1987-12-02 | 1987-12-02 | 核酸塩基配列における突然変異の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62303316A JPH01145000A (ja) | 1987-12-02 | 1987-12-02 | 核酸塩基配列における突然変異の測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01145000A true JPH01145000A (ja) | 1989-06-07 |
| JPH0563160B2 JPH0563160B2 (ja) | 1993-09-09 |
Family
ID=17919496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62303316A Granted JPH01145000A (ja) | 1987-12-02 | 1987-12-02 | 核酸塩基配列における突然変異の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01145000A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2750504A1 (fr) * | 1996-06-27 | 1998-01-02 | Appligene Oncor | Procede d'analyse d'acides nucleiques par hybridation et dispositif pour sa mise en oeuvre |
| JPH10239300A (ja) * | 1997-02-28 | 1998-09-11 | Kagaku Gijutsu Shinko Jigyodan | 全自動遺伝子解析システム |
| EP1072960B1 (en) * | 1999-07-09 | 2005-10-05 | Seiko Epson Corporation | Process cartridge of an image forming apparatus, comprising a charging roller and a cleaning unit movable into contact with the charger by a motor driver |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01108999A (ja) * | 1987-10-23 | 1989-04-26 | Tosoh Corp | 核酸塩基配列における突然変異の検出法 |
-
1987
- 1987-12-02 JP JP62303316A patent/JPH01145000A/ja active Granted
Patent Citations (1)
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| EP1072960B1 (en) * | 1999-07-09 | 2005-10-05 | Seiko Epson Corporation | Process cartridge of an image forming apparatus, comprising a charging roller and a cleaning unit movable into contact with the charger by a motor driver |
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| JPH0563160B2 (ja) | 1993-09-09 |
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