JPH01163179A - 抗真菌発酵生産物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、未だ分類されていない真菌種微生物の培養に
よる発酵によって産生される化合物、および真菌抑制特
にヒトの真菌感染症の治療におけるその化合物の用途に
関する。化合物を生産および分離する方法は、これと同
時に出願される米国特許出願筒１０５，７９７号（１９
８７年１０月７日出願）に基づく優先権主張を伴う特許
出願で特許請求されている。

本発明により、最初に水から分離された未だ同定されて
いない微生物によって産生された新規物質が非常に有用
な抗真菌活性を有することを発見した。この化合物は、
特にカンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉ
ｃａｎｓ）　、カンジダパラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄ
ａ　ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）および他のカンジダ種
のような人間に感染する真菌病原体に対して広範囲スペ
クトル抗真菌活性を有する。この物質は以下に詳述され
る治療に特に適合する毒性の極めて低いリボペプチドで
ある。

この新規な有効薬剤は、次の物理的性質が特徴とされる
白色固形物である： 分解温度：２０６〜２１４℃； 高分解能ＦＡＢ　（高速原子衝撃質量スペクトル測定、
Ｃ５，＋１．□Ｎ８０１？　＋Ｌｉに対する計算値＝１
０８５．５９５８、実測値＝１０８５．６１４６）によ
って決定された実験式：　Ｃ５１Ｈｓ！ＮｓＯ＋ヮ　；
全酸水解物のトリメチルシリル誘導体のガスクロマトグ
ラム／質量スペクトルによって決定されたアミノ酸組成
：各々１当量のスレオニン、ヒドロキシプロリン、メチ
ルヒドロキ・シブロリンおよびヒドロキシグルタミン酸
； 第１図に示されるＣＤ３０Ｄ中４００　ＭＨｚにおける
’ＨＮＭＲスペクトル； 次の通りＣＤ３０Ｄ中１００ＭＨｚにおいて得られるＩ
″ＣＮＭＲＣＮＭＲケミカ ルシフト０．１１．６４．１９．７５．２０．２５．２
０．７８．２７．００゜２Ｂ、０７．３０．３３．３０
．３７．３０．６１．３０．７６、３１．１９゜３１．
２９．３２．９４．３４．８３．３６．６９．３８．１
０．３８．５４゜３９．０？、　３９．５３．４５．９
３．５１．３９．５３．０１．５５．５９゜５６．３１
．５７．１１．５８：３５．６２．４３．６８．１８．
７０．０８゜７０．５５．　７０．６１．　７１．２６
．　７３．９４．　７５．７２．　７５．８４゜７６．
８６．　１１６．０６（ｘ２）、　　１２９．４３（ｘ
２）、　　１３２．８６゜１５８．２２，１６８．８０
，１７２．１６，１７２．３５，１７２．４０゜１７３
．１２．　１７４．２４．　１７５．４７．　１７６．
８８　ｐｐｍ。

かかる性質を有する物質はスペクトルデータおよび他の
物理的性質に基づいて式Ｉで表わされる化合物と考えら
れる。

この化合物はケミカルアブストラクト命名法を使用して
１−　（（４Ｒ，５Ｒ）−４，５−ジヒドロキシ−Ｎ２
−（１０，１２−ジメチル−１−オキソテトラデシル）
−■７−オルニチン）−５−Ｄレオ−３−ヒドロキシ−
し−グルタミン）エチノカンジンＢとして同定されるこ
とができる。以後この化合物を便宜上化合物■と記す。

この化合物は、メタノール、エタノール、ジメチルホル
ムアミド、ジメチルスルホキシド、酢酸エチルなどの種
々の有機溶媒に可溶である。

本発明の化合物は、線状真菌および酵母の両方を含む種
々の真菌の抑制に使用されるのに適した有用な抗真菌活
性を有する。特にカンジダアルビカンス、カンジダパラ
プシロシスなどの病原真菌感染症の原因となるものに対
して有用であるが、単に高活性であるばかりでなく広範
囲の菌株にわたって一貫して高活性であることは注目さ
れる。

多くの抗生物質および他の抗真菌剤がカンジダアルビカ
ンスおよび特定の真菌病原体に対して有効であることが
知られているが、治療剤としての有用性はしばしば制限
される。例えば有効な抗真菌抗生物質であるアンフォテ
リシンＢは、一般に患者が進行性の致命的な真菌感染症
を潜在し、生命を救助できる薬剤の恩恵が都合の悪い危
険な副作用と釣り合うに違いないという状況に限定され
る。本発明の抗真菌剤は、極めて有効な抗真菌剤である
ばかりでなく、実質的に無毒であり実質的に望ましくな
い副反応がない。

多くの薬剤の欠点の１つは、有効服用量と患者に有害な
副反応を引き起こす薬剤濃度との差がかなり狭いことで
ある。有害な潜在的に致命的な副反応の１つは赤血球の
溶解である。有効服用量にほぼ等しい濃度でこの性質を
示す化合物は、適用性が制限される。化合物■は、予期
しないことに、抗真菌剤として極めて有効であることが
見出されたばかりでなく、さらに赤血球の溶解が生じる
には種々の治療用として予想されるよりもはるかに高い
薬剤濃度を必要とすることが見出された。

さらに化合物Ｉはカンジダアルビカンスに感染したマウ
スの生存を著しく延長し、さらに実験的に感染させたマ
ウスの腎臓からカンジダアルビカンスを根絶することを
見出した。これらの特性はヒトの真菌感染症の治療に極
めて有効である新規な抗真菌剤であることを示している
。

真菌感染症の治療において化合物【が治療剤として有用
である予期しない特性のほかに、本抗生物質によって示
される抗真菌性広範囲スペクトルは真菌抑制が望まれる
どのような場合にも有効成分として有用である。従って
本化合物は、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
）、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、アルテ
ルナリア（八ｌ　ｔｅｒｎａｒｉａ）、モニリア（Ｍｏ
ｎｉｌｉａ）、アウレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓ
　ｉｄ　ｉｕｍ）のような化粧品、皮、電気絶縁体、織
物、塗料および他の材料に見出される真菌の増殖を抑制
するために、またエリジベ　ポリゴニ（Ｅｒｙｓｉｐｈ
ｅ　ｐｏｌｙｇｏｎｉ）、アルテルナリア　ソラニ（八
１ｔｅｒｎａｒｉａ　５ｏｌａｎｉ）およびコクリオボ
ルスミャベアヌス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ　ｍ１ｙ
ａｂｅａｎｕｓ）のような植物、植物の一部および植物
生産物に感染する真菌の増殖を抑制するために、さらに
リツォクトニア　ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ　５
ｏｌａｎｉ）　、フサリウム　ソラニ（Ｆｕｓａｒｔｕ
Ｉｌｓｏｌａｎｔ）およびピチウムウルチムム（Ｐｙｔ
ｈｉｕｍ　ｕｌｔｉｍｕｍ）のような土壌に感染する真
菌、並びにレンツィテス　トラベア（Ｌｅｎｚｉｔｅｓ
　ｔｒａｂｅａ）およびセラトサイスチス　ピリフエラ
（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ　ｐｉｌｉｆｅｒａ）のよ
うな木材、パルプおよび紙に感染する真菌を抑制するた
めに使用することができる。

抑制することができる他の特定の線状真菌および酵母は
アスペルギルス種：Ａ、ニゲル（ｎｉｇｅｒ）、Ａ、フ
ラブス（ｆｌａｖｕｓ）　、Ａ、フミガーツス（ｆｕｍ
ｉｇａｔｕｓ）、Ａ、オリツエ（ｏｒｙｚａｅ）　、Ａ
、アワルマリ（ａｗａｌｍａｒｉ）　、Ａ、ベルシコラ
ー（ｖｅｒｓｔｃｏｌｏｒ）　、Ａ、　　シドウイ（ｓ
ｙｄｏｗｉ）　、Ａ。

ニデユランス（ｎｉｄｕｌａｎｓ）およびＡ、テレウス
（ｔｅｒｒｅｕｓ）　；またはペニシリウム種：Ｐ、ツ
タツム（ｎｏｔａｔｕｍ）、Ｐ、ロクエホルチ（ｒｏｑ
ｕｅｆｏｒｔｉ）、Ｐ、クリソゲヌム（ｃｈｒｙｓｏｇ
ｅｎｕｍ）、Ｐ、オキサリクム（ｏｘａｌｉｃｕｍ）　
、Ｐ、スビヌロスム（ｓｐｉｎｕｌｏｓｕｍ）　、Ｐ、
マルテンシ（ｍａｒｔｅｎｓｉ　ｉ）、Ｐ、シトリヌム
（ｃｔｔｒｉｎｕｍ）　、Ｐ、ジギタツム（ｄｉｇｉｔ
ａｔｕｍ）、ｐ、ｘキスパンジオン（ｅｘｐａｎｓｉｏ
ｎ）、Ｐ、イタルシウム（ｉｔａｌｃｉｕｍ）、Ｐ、シ
クロピウム（ｃｙｃｌｏｐｉｕｍ）およびＰ、フニクロ
スム（ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ）　；ニューロスポラ　
シトフィラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ　５ｉｔｏｐｈｉｌ
ａ）　　；フオマ　チルレストリス（Ｐｈｏｍａ　ｔｅ
ｒｒｅｓｔｒｉｓ）　　；リゾムコールミニヘイ（Ｒｈ
ｉｚｏｍｕｃｏｒ　ｍ１ｅｈｅｉ）　；アルテルナリア
ソラニ；カエトミウム　グロボスム（Ｃｈａｅｔｏｍｉ
ｕｍｇｌｏｂｏｓｕｍ）　　；　トリコデルマ　ハルツ
ィアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｈａｒｚｉａｎｕ
ｍ）　；フサリウム　オキシスボルム（Ｆｓａｒｉｕｍ
　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）　；ウスチラゴ　マイジス（Ｉ
Ｊｓｔｉｌａｇｏ　ｍａｙｄｉｓ）　；セラトサイスチ
スウルミ（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ　ｕｌｍｉ）　；
ベルチシリウムセルラエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ　
５ｅｒｒａｅ）　；ボトリチスアルイ（Ｂｏｔｒｙｔｉ
ｓ　ａｌｌｉｉ）　　；カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）種
たとえばＣ，アルビカンス（ａｌｂｉｃａｎｓ）　、Ｃ
。

トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）　、Ｃ，ルゴサ
（ｒＢｏｓａ）　、Ｃ，ギリエルモンジ（ｇｕｉｌｌｉ
ｅｒｍｏｎｄｉｉ）　、Ｃ，シュードトロピカリス（ｐ
ｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）およびトルロプシス
　ゲラブラタ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　ｇｌａｂｒａｔ
ａ）を包含する。

本発明の抗真菌剤、化合物■は、メルクアンドカンパニ
ー、ローウェイ、Ｎ、Ｊ、のカルチュアコレクションで
ＭＦ５１７１に指定されている微生物の未だ同定されて
いない菌株を培養し、該薬剤を培地から回収することに
より生産するのが便利である。化合物を生産することが
できる培養の試料は、アメリカンタイプカルチュア　コ
レクション、ＭＤ２０８５２、ロックビル、バークラウ
ンドライブ１２３０１のカルチュア　コレクションにブ
タペスト条約に基づいて寄託されている。

この試料は受託番号ＡＴＣＣ２０８６８を付与されてい
る。

ＡＴＣＣ２０Ｂ　６　Ｂのコロニーおよび形態の説明は
以下に示される。

Ａ、形態の説明 厚膜胞子に類似した直径約６．０μの球形厚壁暗色構造
が菌糸と一緒に発育し、しばしば介在しているように見
える。これらの構造は容易に分解しない４〜８個の細胞
の多細胞群を形成して分裂しているように見える。ある
培地では菌糸繊維はロープ状構造を形成して一緒に菌株
群になり、多細胞群は粘質物質によって一緒に保持され
るように大菌株群を形成する。

Ｂ、コロニーの説明 １、　ツアペック−ドックス寒天 コロニーは徐々に発育し、増殖は広がらず、扁平で不規
則な辺縁を有する。菌糸は黒色で光沢があり、表面はコ
ロニーの加齢につれて曇って顆粒が見え、黒色から帯緑
褐色になる。

２、　コーン寒天 コロニーは徐々に発育する。増殖は広がらない。

菌糸は黒色で光沢があり、表面はコロニーの加齢につれ
て粉末状の曇った黒色になる。

３、　ジャガイモ−デキストロース寒天、サブローマル
トース寒天および酵母エキス−麦芽エキス−デキストロ
ース寒天 コロニーは徐々に増殖する。増殖は広がらず、中央がわ
ずかに隆起し、辺縁が透明で規則的なサブローマルトー
ス寒天以外は不規則な辺縁が放射状にくぼんでいる。菌
糸は黒色で光沢があり、コロニーの加齢につれて曇った
粉末で黒色になる。

本発明が以下に主として特定の菌株について論じられる
が、微生物の性質が自然的および人工的に変化し得るこ
とは当業界で周知である。従って自然選択によって得ら
れるか、イオン化放射線または紫外線のような変異剤の
作用によっであるいはニトロソグアニジンのような化学
的変異誘発物質の作用によって産生されるかにかかわら
ず、いずれにせよ変種および変異体を包含する属ＡＴＣ
Ｃ２０８６Ｂの全菌株が本発明の範囲内にあることが企
１刃されている。

化合物Ｉは、未だ同定されていない真菌の菌株ＡＴＣＣ
２’０８６　Ｂの栄養培地で抗生物質活性の実質量が培
地に検出されるまで培養し、その後適当な溶媒中の発酵
培地から有効成分を回収し、有効成分の溶液を濃縮し、
そして濃縮した物質をクロマトグラフィ分離にかけるこ
とによって、薬剤用途に適合できる形態で製造すること
ができる。

発酵は微生物によって同化され得る炭素および窒素源お
よび一般に低レベルの無機塩を含有する培地中で行なわ
れる。さらに、培地には、炭素および窒素の複合源が使
用される場合には通常その複合源中に存在するが、痕跡
金属を添加してもよい。

炭素源は、グリセロール、糖、デンプンおよびデキスト
ラン、セレロースのような他の炭水化物または炭水化物
誘導体並びにオート麦粉、コーンミール、キビ、トウモ
ロコシなどの複合栄養源を包含する。培地に利用される
炭素源の正確な量は、幾分培地中の他の成分に依存する
が、通常は培地の０．５〜５重量％の炭水化物量が適し
ていることが見出される。これらの炭素源は個々に使用
することもできるし、いくつかの炭素源を同一培地中で
混合してもよい。

窒素源は、グリシン、アルギニン、トレオニン、メチオ
ニンなどのアミノ酸並びに酵母加水分解物、酵母自己分
解物、酵母細胞、トマトペースト、大豆ミール、カゼイ
ン加水分解物、酵母エキス、コーン浸漬液、醸造可溶成
分、綿実粉、肉エキスなどの複合源を包含する。種々あ
窒素源は単独でまたは混合して培地の０．２〜９０重量
％の量で使用することができる。

培地中に混入することができる栄養無機塩類は、ナトリ
ウム、カリウム、マグネシウム、アンモニウム、カルシ
ウム、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、炭酸塩および類似の
イオンを生成することができる通例の塩である。またコ
バルト、マンガン、鉄、モリブデン、亜鉛、カドミウム
などの痕跡金属も包含される。

発酵を行なうのに適した培地は、固形でも液体でもよい
。

固形培地はキビ、トウモロコシ、オート麦、大豆または
小麦ベースを有することができる。キビヘースを有する
培地の一例は実施例■の培地２である。他の代表的な固
形培地は次を包含する。

２５０ｏ／！フラスコ当りの 韮　　　　　　重　または容 培地Ａ トウモロコシ（砕いた）　　　　　　　　　１０．０ｇ
酵母エキス　　　　　　　　　　　　　０．５ｇ酒石酸
ナトリウム　　　　　　　　　　　０．１ｇグルタミン
酸−ナトリウム　　　　　　　０．１ｇコーンオイル　
　　　　　　　　　　　　０．１　ｍｌ硫酸第一鉄　　
　　　　　　　　　　　０．０１　ｇ水　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１５−２０ｍ　ｌ
培地Ｂ キビ　　　　　　　　　　　　　　　　　１５ｇ酵母エ
キス　　　　　　　　　　　　　　０．５ｇ酒石酸すＩ
・リウム　　　　　　　　　　　０．１ｇ硫酸第二鉄・
７　Ｈｉｏ　　　　　　　　　　０．０１　ｇスクロー
ス　　　　　　　　　　　　　　　０．５ｇアルファル
ファ　　　　　　　　　　　　　０．５　ｇコーンオイ
ル　　　　　　　　　　　　　０．１ｍｆ水　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５ｍｊ！邦
１ｕ キビ　　　　　　　　　　　　　　　　１５ｇ酵母エキ
ス　　　　　　　　　　　　　　０．５ｇ酒石酸ナトリ
ウム　　　　　　　　　　　０．１ｇ硫酸第二鉄・７　
ＬＯＯ，０１ｇ シリカゲル　　　　　　　　　　　　　０．５ｇアルフ
ァルファ　　　　　　　　　　　　　０．５ｇグルタミ
ン酸−ナトリウム　　　　　　　０．１ｇコーンオイル
　　　　　　　　　　　　　　０．１ｍｌ水　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５ｍｆ
隻皿旦 キビ　　　　　　　　　　　　　　　　１５ｇ酵母エキ
ス　　　　　　　　　　　　　　０．５ｇ酒石酸ナトリ
ウム　　　　　　　　　　　０．１ｇ硫酸第二鉄・７　
ｔｂｏ　　　　　　　　　　Ｏ，０１ｇさらに培地は上
記のキビまたはトウモロコシを小麦、大麦、オート麦ま
たは大豆に置き換えて調製することができる。

また液体培地を使用することもできる。大規模な発酵は
一般に液体培地を使用して行なう方が便利である０通常
の液体培地が化合物Ｉを得るために使用することができ
るが、かかる培地は所望の抗生物質を良好な収量で得る
のには適していないことが見出された。しかしながらグ
リセロール約６〜９重量％を混入することによって良好
な収量の所望の抗生物質化合物が得られることが見出さ
れた。従って液体培地で化合物Ｉを生産する方法および
組成物は本発明の方法の一局面を構成する。

好適な液体培地は実施例■に記載される培地である。ま
た次のような他の通常の液体培地またはその修正培地を
使用することもできる。

培地Ｅ デキストロース　　　　　　　　　　　　　１０ｇグリ
セロール　　　　　　　　　　　　１０＋ｎｊ！大豆粉
　　　　　　　　　　　　　　　　４ｇ乳餅　　　　　
　　　　　　　　　　　　　４ｇトマトペースト　　　
　　　　　　　　　　　　　４ｇラード水　　　　　　
　　　　　　　　　　　４ｇリン酸二水素カリウム　　
　　　　　　　　２ｇ塩化コバルト６水和物　　　　　
　　　０．０１　ｇ蒸留水　　　　　　　　　　　　　
　　１００１００ＯＨ７ 本発明の化合物を生産するためのＡＴＣＣ２０８６８を
含有する発酵培地は、抗生物質産生菌の胞子または菌糸
を適当な培地に接種し、次に好気性条件下で培養するこ
とによって調製される。

一般に操作は、まず栄養培地を含有する寒天斜面から得
られる保存培養源を種子産生栄養培地に接種し、好まし
くは２段階操作により、抗真菌剤の生産において種子と
して働く微生物の発育を得ることである。

この方法において、保存培養ＡＴＣＣ２０８６８の斜面
切片をｐ）１５〜８，１至適ｐＨ６〜７．５の適当な液
体栄養種子培地に接種し、フラスコを撹拌しながらある
いはせずに約１５〜３０℃好ましくは２０〜２８℃の温
度で温度する。撹拌する場合は４００ｒｐｍ以下好まし
くは約２００〜２２０ｒｐｍであることができる。温度
は２〜３０日好ましくは２〜１４日にわたって行なわれ
る。増殖が多量の場合、通常２〜５日間で培養増殖を抗
真菌剤の生産のための生産培地に接種するために使用す
ることができる。しかしながら培養増殖の一部を接種し
た後、一般に約１〜３日の短縮温度期間を使用するほか
は同様の条件を使用する第２期発酵を行なうことが好ま
しい。次いで増殖は生産培地に接種するために使用され
る。

培養増殖を接種した発酵生産培地は、撹拌しながらある
いはせずに３〜３０日、通常７〜１４日間装置される。

発酵は約２０〜４０″Ｃの温度で好気的に行なわれる。

最適結果のためにはこれらの発酵を約２４〜３０℃の温
度で行なうことが最も便利である。約２４〜２８℃の温
度が最も好ましい。

本化合物の生産に適当な栄養培地のｐＨは約５．０〜８
．５であることができ、約６．０〜７．５が好適である
。所望化合物の生産に適当な期間の後、後者は以下でさ
らに十分に記載されるような発酵培地から回収される。

有効物質は次を包含している一連の工程によって発酵培
地から回収することができる：（１）該培地にアルコー
ルを添加し、撹拌し、濾過して、得られた水性アルコー
ル性溶液中の有効成分を回収する； （２）水性アルコール性溶液を少量のほぼ水性の溶液に
濃縮する； （３）得られた濃縮アルコール性水性溶液を水と混和し
ない有機溶媒または芳香族もしくはハロゲン化炭化水素
溶媒と緊密に接触させて有効成分をその中に抽出または
分配し、！！１１する；（４）工程（３）で回収した物
質を少なくとも１回クロマトグラフィ分離にかけ、各々
のクロマトグラフィ分離で、溶出液から得られるカンジ
ダアルビカンスに対して活性を示す有効成分を合わせ、
濃縮して化合物■を回収する。

個々の工程の詳細は、発酵が液体または固形培地のいず
れで行なわれるか、いかなる溶媒が使用されるか、ある
いはいかなる吸着剤または吸着剤の混合物が使用される
かに依存して幾分具なってよい。

発酵が固形培地で行なわれる場合、第１段階は、アルコ
ール性溶媒を発酵培地に添加し、十分混和した後、濾過
し、回収して、水性アルコール濾液を濃縮することによ
って行なうことができる。好ましくは、濃縮濾液をまず
ヘキサンまたは他のアルカンのような低級脂肪族炭化水
素溶媒で逆抽出または洗浄してアルカン可溶性不純物を
取り除く。

アルカン洗浄濾液を水と混和しない酸素化有機溶媒また
は芳香族もしくはハロゲン化炭化水素溶媒で抽出または
分配し、得られた溶液を濃縮した後、少なくとも１段階
、一般には数段階のクロマトグラフィ分離のために−か
ラムに装填することができる。あるいは、水と混和しな
い溶媒による分配または抽出液を、濃縮してからまたは
濃縮しながらシリカゲル上に被覆し、被覆されたゲルを
クロマトグラフィ分離のためにシリカゲルカラムの上に
装填することができる。

発酵が液体培地で行なわれる場合、菌糸固形分は濾過さ
れて、発酵培地から回収される。アルコールを菌糸ケー
クに添加し、菌糸固形物をアルコールと十分に混和し、
濾過し、濾液を集め、濃縮する。次に固形培地から分離
するために記載したと同様の方法で、アルコール性水溶
液を水と混和しない酸素化有機溶媒または芳香族または
ハロゲン化炭化水素溶媒と緊密に混和してその中に産生
物を抽出または分配した後、得られた溶液をクロマトグ
ラフィ分離で使用する。

固形栄養培地または菌糸パッドから有効薬剤の最初の抽
出に使用されるアルコール性溶媒は、メタノール、エタ
ノール、イソプロパツールなどの低級アルコールのいず
れでもよい。メタノールが好ましい。

メタノール溶液から有効薬剤を抽出または分配するのに
有用な水と混和しない非極性有機溶媒は、酢酸エチル、
酢酸イソプロピル、酢酸ブチルなどのエステルおよびメ
チルエチルケトンのようなケトンである。しかしながら
、塩化メチレンのようなハロ炭化水素およびベンゼンま
たはトルエンのような芳香族炭化水素を使用することも
できる。

低級脂肪族エステルが好ましい。

クロマトグラフィ分離は、非イオン性樹脂による通常の
カラムクロマトグラフィを使用することによって、ある
いは逆相樹脂を使用する高性能液体クロマトグラフィに
よって行なうことができる。

抗生物質化合物Ｉを含有する画分は、生物学的自己描写
法によってカンジダアルビカンスを使用して検出するこ
とができる。一般に１段階以上のクロマトグラフィ分離
が使用される。最も好ましい操作では１段階以上の分離
がカラムクロマトグラフィを使用して行なわれ、最終分
離はＣｌ１ｌ逆相樹脂による高性能液体クロマトグラフ
ィ（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）を使用して行なわれる。

クロマトグラフィ分離に通常のカラムクロマトグラフィ
が使用される場合、シリカゲルが好適な吸着剤である。

通常１回以上のクロマトグラフィ分離が必要である。シ
リカゲルは異なる溶離剤を使用してすべての分離に使用
することができる。

しかしながら商品名セファデックスＬＨ−２０（ファー
マシア）として販売されているデキストラン吸着剤のよ
うな異なった吸着剤と併用することが宥和である。また
アルミナやダイアイオンＨＰ−２０、ＨＰ−３０、ＨＰ
−４０（三菱化成社）およびアンバーライトＸＡＤ−２
、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−１６（ロームアンドハース社）
として市販されているスチレン−ジビニルベンゼン共重
合体を使用することもできる。

シリカゲルによるクロマトグラフィにより有効成分を分
別回収するのには、アルコールの濃度を高めながらのエ
ステル／アルコール混合液が良好な分離を与える。酢酸
エチルとメタノールの混合液が特に有用であることが見
出されている。これらは均一（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ）、
段階勾配（ｓｔｅｐｇｒａｄ　ｉｅｎ　ｔ）または連続
勾配（ｃｏｎｔｉｎｎｏｕｓｇｒａｄｉｅｎｔ）系で使
用することができる。セファデックスＬＨ−２０のよう
なデキストラン吸着剤を使用する場合、クロロ炭化水素
／炭化水素／アルコール溶媒系を使用することができる
。特に塩化メチレン／ヘキサン／メタノールの混合液が
有用であることが見出されている。

ＨＰＬＣ分離を実施するには、通常のクロマトグラフィ
で回収した物質を含有するアルコール溶液を濃縮し、残
留物をメタノールに溶解し、市販の逆相樹脂で充填した
カラムに、または文献に詳細に報告される通り調製した
シリカゲル／Ｃｌｌ１逆相樹脂で充填したカラムに装填
する。次にカラムをアセトニトリル／水（１：１または
適宜他の比率）を使用して流速約２０５１ｊ！／分を生
じる８００〜２０００ｐｓｉ　　（５６〜１４０ｋｇｆ
　／ｃｆｆｌ）で操作する。分離は２１０ｎｍで監視さ
れる。

生成物は、カンジダアルビカンス有効画分を合わせで減
圧下で濃縮することによって、いずれのクロマトグラフ
ィ操作からも回収される。

真菌感染症の治療における本発明の抗生物質化合物Ｉの
治療剤としての優れた有用性は、抗真菌活性ばかりでな
く、治療濃度で赤血球が溶解せず、実質的に毒性のいか
なる形態も存在しないことにある。真菌特にヒト病原体
に対する効力は、カンジダアルビカンス、カンジダパラ
プシロシスおよび他の特定カンジダ種に対する試験結果
で例示することができる。

活性は、酵母窒素ベースデキストロース寒天培地を使用
する寒天希釈検定で示されることができる。検定の実施
には、化合物ｌを１滴のトウィーン２０を加えた１０％
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に可溶化した。滅国
蒸留水／１０％ＤＭＳＯで２倍希釈液を生成して、寒天
希釈検定平板中最終薬剤濃度１２８〜０．０６μｇ／ｍ
１．を得た。

酵母マルトース（ＹＭ）ブイヨン中に維持される酵母培
養は新しいＹＭ培地に移植し、振盪しながら（２５０ｒ
ｐｍ）３５℃で一晩装置した。温置後各々の培養を滅菌
食塩水で希釈して最終濃度３×１０５〜３Ｘ１０’コロ
ニー形成単位（ＣＦＵ）／ｎｕを生成した。

各々の調製した平板はデンレーマルチポイントイノキュ
レータ−（Ｄｅｎｌｅｙ　ＭｕｌｔｉｐｏｉｎｔＩｎｏ
ｃｕｌａｔｏｒ）　　（デンレー、サセックス（Ｓｕｓ
ｓｅｘ）英国）を使用して接種した。これは寒天面に約
０．００１　　ｍ　４１！を加え、３Ｘ１０２〜３Ｘ１
０３ＣＦＵの接種を生じる。平板は２８℃で４８時間温
置した。最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、発育しないかある
いは３ＣＦＵ／スポツト以下を示す薬剤の最低濃度とし
て記録した。

有用な抗真菌特性は、次の表で示されるように種々のカ
ンジダ種に対する化合物Ｉの優れた有効性を示す結果を
もって例示されることができる。

菌株　　　　最小阻止濃度 カンジダアルビカンス　　　ＭＹ１０５８　　　０．２
５Ｃ，アルビカンス　　　　　ＭＹ１０５５　　　０．
５０Ｃ，アルビカンス　　　　　ＭＹＯ９９２０，５０
Ｃ，アルビカンス　　　　　ＭＹ１０１３　　　＜０．
０６Ｃ，アルビカンス　　　　　ＭＹ　１０２９　”＞
１２８．ＯＣ，パラブシロシス　　　　ＭＹ１００９　
　　　Ｂ、ＯＣ，パラプシロシス　　　　ＭＹＩＯＩＯ
８，０Ｇ、）ロビカリス　　　　　　ＭＹＩ　Ｏ１１０
，２５Ｃ，）ロピカリス　　　　　　ＭＹ１０１２　　
１２８．ＯＣ，シュードトロピカリス　ＭＹ１０４０　
　　１．ＯＣ，クルセイ　　　　　　　　ＭＹ１０２０
　　　２．ＯＣ，ステラトイデア　　　　ＭＹＩ　Ｏ１
７０，２５Ｃ，ルゴサ　　　　　　　　ＭＹ１０２２　
　３２．０＊実質的発育の低下が観察された。薬剤活性
で培地干渉が起こり得る。

同様の検定で、化合物■をカンジダアルビカンスの異な
る３４菌株およびカンジダパラプシロシスの異なる１３
菌株の増量パネルに対して試験した。カンジダアルビカ
ンスの場合には、２８菌株に対してＭＩＧは０．０６３
〜０．２５μｇ　／　ｒｎｉ！、であり、５菌株のみが
１μｇ／ｍ１．であることが見出された。カンジダパラ
プシロシスの場合には、１３のうち１２菌株に対して２
．０〜８の範囲であることが見出された。

上述の結果は、単に化合物Ｉによって示される優れた矛
盾のない抗真菌特性の具体例である。順次示される通り
、化合物は他のヒト病原体を包含する多くの真菌種に対
して有効な広範囲スペクトル抗生物質である。

赤血球を溶解するためには治療服用量レベルよりはるか
に高い薬剤濃度を必要とする化合物■の特性は、ＣＤ−
１雌のマウスから採取した新しい血液を使用する標準滴
定／溶血検定において発見した。５％デキストロース中
０．３９〜４００μｇ／■ｌの薬剤濃度および薬剤のな
い対照を使用した。

定量を実施するには、適当な薬剤希釈液２１１２と赤血
球０．５　ｔａｌｌを一緒に混合して調製した検定試験
管を緩やかに振盪して内容物を混合した後、試験管を２
５℃で２時間温置した。温置後、完全なあるいは一部の
赤血球溶血を視覚によって試験し、薬剤のない対照と比
較した。最小溶菌濃度（ＭＬＣ）は赤血球を溶解しない
最大薬剤濃度とした。化合物■に対するＭＬＣは４００
μｇ／ｍＩ！、であった。アンフォテリシンＢを用いて
行なった同一試験は、アンフォテリシンＢに対するＭＬ
Ｃが１２．５μｇ／ｍｊ２であることを示した。

種々の試験結果から、治療用として患者の健康状態、体
重、年令および薬剤に対する応答に影響する他の因子を
考慮しながら、一般的には抗生物質約１．４〜２．８■
／体重眩を使用することができる。人間に適当な服用量
として表示される場合、これらの量は、経口または非経
口投与による日用置駒１００〜２００■の範囲にある。

上記の特性は、化合物が通常の医薬配合技術により医薬
的に使用し得る担体と共に新規な医薬組成物に処方され
る場合、最も有効に利用される。

新規な組成物は、少なくとも１重量％の有効化合物を含
有する。組成物の調製には、化合物Ｉは通常の医薬媒質
のいずれかと緊密に混和される。

組成物は経口用量形態で調製されるのが好ましい。抗真
菌剤は、液体製剤用には、水、グリコール、オイル、ア
ルコールなどの液体担体と、カプセル剤や錠剤などの固
形製剤用にはデンプン、糖、カオリン、エチルセルロー
ス、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウ
ム、タルク、ラクトースのような固形担体および一般に
ステアリン酸カルシウムのような滑沢剤と結合剤、崩壊
剤などと共に処方される。投与の容易さから錠剤および
カプセル剤が最も有利な経口用量形態を示す。

投与の容易さおよび用量の均一性に対して単位用量形態
の組成物を処方することが特に有利である。

単位用量形態の組成物は本発明の一局面を構成する。

抗真菌剤は、注射用抗真菌組成物で処方され、必要があ
れば防腐剤を添加したアンプルまたは多回投与用容器の
単位用量形態で存在させることができる。また組成物は
、水中０．８５％塩化ナトリウムまたは５％デキストロ
ースのような油性または水性賦形剤中の懸濁液、溶液ま
たはエマルシヨンのような形態を使用することができ、
沈殿防止剤、安定剤および／または分散剤のような処方
剤を含有することができる。食塩水またはグルコースの
ような緩衝剤並びに添加剤は等張な溶液を生成するため
に添加することができる。あるいは有効成分は、投与前
に適当な賦形剤と一緒に再構成するために粉末形態にあ
ることができる。

明細書中で使用される場合、“単位用量形態′。

なる用語は、物理的に分けられた単位を意味し、各々の
単位は医薬担体と共に所望の治療効果を生じるように計
算された有効成分の所定量を含有している。かかる単位
用量形態の具体例は、錠剤、カプセル剤、火剤、粉末包
、オブラート包、アンプルまたは多回投与用容器に計量
された単位などである。本発明の単位用量は一般に各々
の構成薬剤１００〜２００■を含有する。

適用が局所である場合には、薬剤は白色ワセリン、無水
ラノリン、セチルアルコール、コールドクリーム、グリ
セリルモノステアレート、ローズ水などの通常のクリー
ム剤および軟膏で処方される。通常１〜２％のクリーム
または溶液が調製され、治療される面に適用される。

また化合物■は広範囲スペクトル抗真菌活性を示す。こ
れは酵母および線状真菌（糸状菌）に対するディスク拡
散法を使用する抗真菌検定で示される。

ディスク拡散法では、種子を接種した検定平板をまず微
生物のタイプにより次の方法の１つで調製される。

線状真菌に対する接種物は、ジャガイモデキストロース
寒天上に維持された保存平板面を湿った滅菌ダクロン綿
棒でこすることによって調製される。次に胞子および菌
糸をジャガイモデキストロース滅菌ブイヨン１０ｎ＋１
に懸濁させ、６６０ｎｍで７０％透過率に調節する。

酵母に対する接種物は、ブイヨン培養で一晩調製した後
、６６０　ｎｍで４０％あるいは７０％透過率の最終濃
度までジャガイモデキストロース寒天に希釈する。

カンジダアルビカンスの３菌株およびサツカロミセス　
セレビシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖ
ｉｓｉａｅ）の１菌株に対しては、ジャガイモデキスト
ロースブイヨンの代わりに滅菌食塩水を使用する。検定
平板は、接種物を適当に溶解した寒天培地に希釈し、４
５℃に冷却して最終濃度４％（容量／容量）を得ること
によって調製される。

こうして調製された種子接種寒天培地は、検定用ペトリ
皿に分配される（１皿につきｌｌｎ／り。

抗真菌剤の生産に供試される試料は、６．２ｍｍ濾紙デ
ィスクに適用（２５μｉ／デイスク）し、２４℃で風乾
する。試験される試料が粗ブイヨンである場合、適用前
に遠心分離することができる。

次に試験される物質をつけたディスクを滅菌条件を使用
して種子接種検定平板に適用し、試料を２５％滅菌水性
ジメチルスルホキシド（２５μｌ／デイスク）で再び湿
らせる。次に検定平板を２８あるいは３７℃で２４時間
温置する。温直後、阻止帯を測定し、記録する。

良好な抗真菌特性は、線状真菌コクリオボルスミャベア
ヌス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ　ｍ１ｙａｂｅａｎｕ
ｓ）、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）種（３
菌株）、アスペルギルス　ニゲル（Ａｓｐｅｒｇｔｌｌ
ｕｓ　ｎｉｇｅｒ）、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅ
ｒｍａ）種、トリコデルマ　リグノルム（Ｔｒｉｃｈｏ
ｄｅｒｍａ　ｌｉｇｎｏｒｕｍ）　、アルテルナリアソ
ラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　５ｏｌａｎｉ）、ベルチ
シリウムセルレ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ　５ｅｒｒ
ａｅ）、ボトリチス　アリ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ａｌｌ
ｉｉ）　、スコプラリオブシス　コムニス（Ｓｃｏｐｕ
ｌａｒｉｏｐｓｉｓ　ｃｏｎ＋ｍｕｎｉｓ）、セファロ
スポリウム（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ）種、セル
コスポラベチコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ　ｂｅｔｉｃ
ｏｌａ）、リゾムコルミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ
　ｍ１ｅｈｅｉ）、アスペルギルスフラブス（Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｌａｖｕｓ）およびアスペルギルス
　フミガラス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｍｉｇａ
ｔｕｓ）に対して；および酵母サツカロミセス　セレビ
シェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ）　、カンジダ　アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　
ａｌｂｉｃａｎｓ）　、カンジダ　ルゴサ（Ｃａｎｄｉ
ｄａ　ｒｕｇｏｓａ）　、、ブレツタノミセス　ブルキ
セレンシス（Ｂｒｅｔｔａｎｏｍｙｃｅｓ　ｂｒｕｘｅ
ｌｌｅｎｓｉｓ）、トルロスポラ　ハンセニイ（Ｔｏｒ
ｕｌｏｓｐｏｒａｈａｎｓｅｎｉｔ）　、カンジダ　ギ
リエルモンジイ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｇｕｉｌｌｉｅｒｍ
ｏｎｄｉｉ）　、カンジダ　シュードトロピカリス（Ｃ
ａｎｄｉｄａ　ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、
トルロプシス　ゲラブラタ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓｇｌ
ａｂｒａｔａ）およびクルイベロミセス　フラギリス（
Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ）に対
して示されることが見出された。

活性の広範囲スペクトルから考えて、本発明の抗生物質
は抗真菌組成物の様々な適用に利用されるのに適合でき
る。かかる使用において、化合物は生物学的に不活性な
担体および一般に界面活性分散剤の助剤と共に混和する
ことができ、その種類は、用途が人間または動物に感染
する病原体の抑制のためであるか・、あるいは土壌また
は植物関係のような農業における真菌の抑制のためであ
るか、あるいは無生物における真菌の抑制のためである
かに依存して異なる。

治療用組成物は、前述の通り調製されることができる。

非医療用には、本発明の産生物は、単独でまたは混合物
として、微細乾燥または液状希釈剤、増量剤、充填剤、
コンディショナーおよび賦形剤、たとえば種々のクレー
、ケンソウ土、タルクなどまたは水および低級アルカノ
ール、例えばエタノールおよびイソプロパツールまたは
ケロセン、ベンゼン、トルエンおよび他の石油留分また
はその混合物などの種々の有機液体を包含する不活性担
体中の組成物で使用することができる。

本発明の実施では、組成物の抗真菌量は真菌抑制が望ま
れる面に直接適用することができる。

次の実施例は、本発明を具体的に説明するものであり、
限定するものとして解釈されるべきではない。

実施例１ １Ｍ ＡＴＣＣ２０８６８と同定されうる、水から最初に分離
されメルクカルチエアコレクションに保存されている培
養８５２５−３０７Ｐのアイソレート２のグリセロール
中の凍結培養を発酵に使用した。

凍結培養の２　ｍ４２部分を解凍し、培地１を５４ｍｊ
２含有する２５０ｍｊ２のバッフルのない三角フラスコ
に無菌的に移植した。接種後、培地１を２８℃で３日間
回転撹拌（２２０ｒｐｍ　、２”スロウシェーカー、（
ｔｈｒｏｗ　５ｈａｋｅｒ））　Ｌ／た後、増殖培地２
．０ｍｆを培地１を含有するいくつかの２５０ｍ１のバ
ッフルのない三角フラスコの各々に無菌的に移植した。

接種したフラスコを２８℃で２日間温置した。

成熟種子ブイヨン１２．５　ｍｌを培地２を含有する５
本の生産フラスコに接種し、静止状態で２５℃で７日間
温置して発酵培地中の抗生物質化合物を得た。

上述の発酵に使用される培地は次の通りである。

培地１　（ＫＦ種子培地） トウモロコシ浸漬液　　　　　　　　　５ｇトマトペー
スト　　　　　　　　　　　　４０ｇオート麦粉　　　
　　　　　　　　　　１０ｇグルコース　　　　　　　
　　　　　　１０ｇ痕跡元素混合物　　　　　　　　　
　　１０ｍ２蒸留水　　　　　　　　　　　　　　１０
００ｍｊ１００Ｏ６，８ 痕跡元素混合物 ＦｅＳＯ４・７１１ｚＯ１ｇ ＭｎＳＯ４−４ＨｚＯ１ｇ ＣｕＣｌ　ｚ　・２）１ｚ０　　　　　　　　　　　　
２５ｍｇＣａｃ、２１００■ Ｈ３Ｂ０．　　　　　　　　　　　　　　　５６■（Ｎ
１１４）６ＭＯＯ□・４１１．０　　　　　　　　　　
１９■ＺｎＳＯ４・７Ｈｚ０　　　　　　　　　　　２
００■蒸留水　　　　　　　　　　　　　　１０００　
ｍｌ培地２（Ｆ２０４固形培地） 用ｉｔ／フラスコ キビベース　　　　　　　　　　　　　　１５ｇ酵母抽
出液　　　　　　　　　　　　　、５ｇ酒石酸ナトリウ
ム　　　　　　　　　　　、１ｇ硫酸第一鉄結晶　　　
　　　　　　　　、ｏｔ　ｇグルタミン酸モノナトリウ
ム　　　　　、１ｇコーンオイル　　　　　　　　　　
　　　、１ｍ２頒 メタノール５００ｍｆｆ１を５本の２１フラスコの固相
発酵の各々に添加した０次にフラスコの内容物を合わせ
、撹拌してメタノール可溶性物質を抽出した後、混合物
を濾過した。廃ケークをさらに２５００ｍｆｆのメタノ
ールと撹拌してさらにメタノール可溶性物質を抽出した
後、混合液を濾過した。

濾液と洗液を合わせ５００ｎ＋ｊ！に濃縮した。

こうして得られた水性メタノール性濃縮液を次に酢酸エ
チル５００ｎｌで２回抽出した。廃水性溶液をダイアイ
オンＨＰ−２０カラムにｉｔして有効物質を吸着し、次
に後者をメタノールで溶離した。溶出液を先に得られた
酢酸エチル抽出液と合わせ、合わせた酢酸エチル溶液を
濃縮乾固した。

残留物を溶離液として５７５：２の塩化メチレン／ヘキ
サン／メタノールを使用してセファデックスＬＨ−２０
，２００ｎ／！によりクロマトグラフィ処理した。

カンジダアルビカンスによって決定された有効な画分を
合わせ、酢酸エチル／メタノールでの段階勾配溶離を使
用してシリカゲル（ＥＭサイエンス、キーセルゲル６０
．２３０〜４００メツシユ）２００＋／！によりクロマ
トグラフィ処理した。このクロマトグラフィからの有効
画分を合わせ、濃縮し、７５：２５の酢酸エチル／メタ
ノール均一系（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ　ｓｙｓｔｅｍ）を
使用してシリカゲルによりクロマトグラフィ処理した。

次にこのクロマトグラフィから得た有効部分を合わせ、
溶離溶媒としてメタノールを使用してセファデックス１
、Ｈ−２０，１００ｎ＋ｊ！に置いた。

溶出液は溶媒を蒸発させた後、精製化合物９５■を生成
した。化合物は第１図に示される通りの’　ＨＮＭＲス
ペクトルを存する白色固体であった。

実施例■ ｌ困 実施例Ｉの記載と同様の方法で、メルクカルチエアコレ
クションのＡＴＣＣ２０８６８の凍結ヴアイアル１個の
内容物を解凍し、０．４％の寒天を含有するＫＦ培地（
培地１）５４ｍｌを含有する２５０ｍｆのバッフルのな
いフラスコに無菌的に移植した。接種後、修正培地■を
２８℃で４８時間２２０　ｒｐｍで撹拌しながら温置し
た後、増殖培地１０ｍ１を０．４％の寒天を含むＫＦ培
地５００ｍ１を含有する２１のバッフルのないフラスコ
に移植した。温間後、得られた培地を２８℃で２４時間
２２０　ｒｐｍで撹拌しながら温置した。

培地２を１２０ｇおよび 酵母エキス　　　　　　　　　　　　　５重量部酒石酸
ナトリウム　　　　　　　　　１重量部硫酸第一鉄結晶
　　　　　　　　　０．１重量部グルタミン酸−ナトリ
ウム　　　　　　１重量部コーンオイル　　　　　　　
　　　　　１重量部からなる保存溶液１２０ｎ＋ｊｌ！
を各々含有する２１フラスコ２０本を１２２℃で２０分
間オートクレーブにかけた後、水８０ＩＩ１１！、とさ
らに２０分間１２２℃で再びオートクレーブにかけた。

フラスコを冷却しておいた後、上述のように調製した種
子培地２０ｍｆを接種し、接種したフラスコを２５℃で
静止状態で１４日間温温置た。

」 ２１の固形発酵フラスコ１９本の各々にメタノール１１
を添加し、内容物を混合、撹拌、濾過した。廃ケークを
メタノール６１で２回抽出した。

次に水性メタノール濾液を濃縮し、濃縮物を酢酸エチル
３１で２回抽出した。酢酸エチル抽出液を合わせ、乾燥
し、約１００ｍＡに濃縮した。

次に濃縮物をメタノール１００ｍｆおよびシリカゲル１
００ｍｆを添加し、成分を緊密に接触させた後、回転蒸
発器で溶媒を除去することによってシリカゲルに被覆し
た。次に乾燥したシリカゲルをシリカゲル５００ｍｊ２
のカラムに適用し、カラムを酢酸エチルで洗浄して不純
物を除去し、９：１の酢酸エチル／メタノールで溶離し
た。カンジダアルビカンスに対して陽性試験の抗生物質
を含有する溶出液を回収し、合わせた。

シリカゲルクロマトグラフィから得た抗生物質に冨む留
分を１０：１０：１の塩化メチレン／ヘキサン／メタノ
ール２００＋／！に溶解し、得られた溶液をセファデッ
クスＬＨ−２０，４０ｎＦ！（予め、メタノールに一晩
浸漬した後、塩化メチレン／ヘキサン／メタノール２０
０ＩＩＩ！２で２回洗浄することによって調製したもの
）と混合した。

２〜３分後、上澄み液を濾過によって除去し、セファデ
ックスＬＨ−２０を塩化メチレン／ヘキサン／メタノー
ル２０Ｏｎ＋ｊ！で洗浄した後濾過した。

濾液は有効成分を含有しないことがわかり廃棄した。デ
キストラン　セファデックスＬＨ−２０ビーズに分配し
た有効成分をメタノール２００ｍＡで２回洗浄すること
によって抽出し、これらのメタノール洗液を合わせ、濃
縮した。

次にメタノール濃縮物をシリカゲル２００１１ｊ２に適
用し、７５：２５の酢酸エチル／メタノールで溶離し、
溶出液を合わせ、溶媒を蒸発させて化合物Ｉを得た。化
合物Ｉは分解点２０６〜２１４℃を有する白色粉末であ
る。

実施例■ 叩 種子ブイヨンを実施例Ｉの記載と同様の方法でＡＴＣＣ
２０８６８で調製した。成熟種子ブイヨン２　ｍｌを１
フラスコにつき培地３を４５＋ａｆ含有する生産フラス
コに接種し、２５℃１相対湿度５０％で、２２０ｒｐｍ
の回転振盪機で１３日間撹拌して、発酵培地中の抗生物
質化合物■を得た。

培地３は次の組成を有する。

培地３ （ｇ＃！　Ｈ２Ｏ） グリセロール　　　　　　　　　　　　８５ｇペクチン
　　　　　　　　　　　　　　　１０ｇ落花生油　　　
　　　　　　　　　　　　４ｇ乳餅　　　　　　　　　
　　　　　　　　　４ｇトマトペースト　　　　　　　
　　　　　　４ｇコーン浸漬液　　　　　　　　　　　
　　　４ｇラード水　　　　　　　　　　　　　　　　
　４ｇグリシン　　　　　　　　　　　　　　　２ｇＫ
ＨｇＰＯｎ　　　　　　　　　　　　　　　　　２　ｇ
ｐＨ＝７．０ 実施例■ 」 液体培地での発酵の完了により培地を濾過して菌糸固形
分を除去する。菌糸ケークに過剰のメタノールを添加し
、菌糸固形分をメタノールと十分に混合し、混合液を濾
過した後、濾液を濃縮する。

酢酸エチルを濃縮物に添加し、それに物質を分配または
抽出する。次に酢酸エチル抽出液を濃縮し、濃縮溶液を
酢酸エチル／メタノール混合液を使用するシリカゲルカ
ラムによりクロマトグラフィ処理して所望の生成物を得
る。

実施例Ｖ 各々に化合物Ｉを含有する１０００個の圧縮錠剤を次の
処方で調製する。

■ 化合物■５００ デンプン　　　　　　　　　　　　　　　　７５０含水
二塩基性リン酸カルシウム　　　　５０００ステアリン
酸カルシウム　　　　　　　　　２．５微粉末の成分を
十分に混合し、１０％デンプンペーストと顆粒にする。

顆粒を乾燥し、錠剤に圧縮する。

実施例■ 各々に化合物■２１０■を含有する１０００個の硬ゼラ
チンカプセルを次の処方で調製する。

■立腹　　　　　　　　　　　　　　　　　ｌ化合物ｌ
５００ デンプン　　　　　　　　　　　　　　　　２５０ラク
トース　　　　　　　　　　　　　　　　７５０タルク
　　　　　　　　　　　　　　　　　２５０ステアリン
酸カルシウム　　　　　　　　　１０上記成分の均一な
混合物を混和により調製し、２ピースの硬ゼラチンカプ
セルに充填するために使用した。

実施例■ 注射用溶液２５０ｍｊｌ！を次の処方を有する通常の操
作によって調製する。

デキストロース　　　　　　　　　　　　１２．５　ｇ
水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
２５０ａ＋ｆ化合物１　　　　　　　　　　　　　　　
４００■上記成分を混和した後、使用のために滅菌する
。

実施例■ 化合物１１３■を市販のポリエチレン／炭化水素ゲル１
ｇに緊密に分散させることによって局所適用に適当な軟
膏を調製することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＣＤ３ＯＤ中４００ＭＨｚにおける’ＨＮＭＲ
スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ａ、分解温度２０６〜２１４℃； ｂ、高分解能高速原子衝撃質量スペクトル分析により得
   られる実験式Ｃ＿５＿１Ｈ＿８＿２Ｎ＿８Ｏ＿１＿７；
   ｃ、第１図に記録されるＣＤ＿３ＯＤ中４００ＭＨｚに
   おける＾１ＨＮＭＲスペクトル； ｄ、ＣＤ＿３ＯＤ中１００ＭＨｚにおける＾１＾３ＣＮ
   ＭＲケミカルシフト： １１．２０、１１．６４、１９．７５、２０．２５、２
   ０．７８、２７．００、２８．０７、３０．３３、３０
   ．３７、３０．６１、３０．７６、３１．１９、３１．
   ２９、３２．９４、３４．８３、３６．６９、３８．１
   ０、３８．５４、３９．０７、３９．５３、４５．９３
   、５１．３９、５３．０１、５５．５９、５６．３１、
   ５７．１１、５８．３５、６２．４３、６８．１８、７
   ０．０８、７０．５５、７０．６１、７１．２６、７３
   ．９４、７５．７２、７５．８４、７６．８６、１１６
   ．０６（ｘ２）、１２９．４３（ｘ２）、１３２．８６
   、１５８．２２、１６８．８０、１７２．１６、１７２
   ．３５、１７２．４０、１７３．１２、１７４．２４、
   １７５．４７、１７６．８８ｐｐｍ； を有する白色無定形固形物である抗真菌抗生物質化合物
   。 ２、微生物ＡＴＣＣ２０８６８の培養により生産される
   請求項１記載の化合物。 ３、式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で表わされ、１−〔（４Ｒ，５Ｒ）−４，５−ジヒドロ
   キシ−Ｎ＾２−（１０，１２−ジメチル−１−オキソテ
   トラデシル）−Ｌ−オルニチン〕−５−（トレオ−３−
   ヒドロキシ−１−グルタミン）−エチノカンジンＢと命
   名される請求項１記載の化合物。 ４、生物学的に不活性な担体と混和した請求項３記載の
   化合物を包含している抗真菌組成物。 ５、担体が医薬的に使用し得る担体である請求項４記載
   の組成物。 ６、請求項３記載の化合物の抗真菌的に有効な量を増殖
   を抑制すべき領域に適用することを特徴とする真菌増殖
   の抑制方法。 ７、請求項３記載の化合物の抗真菌的に有効な量を治療
   を必要としている動物に投与することを特徴とする、真
   菌感染症を赤血球の溶解を起こさずに抑制する方法。 ８、感染を引き起こす真菌がヒト病原体であり、投与さ
   れる量が治療上有効な量である請求項７記載の方法。 ９、病原体がカンジダアルビカンスである請求項８記載
   の方法。 １０、病原体がカンジダパラプシロシスである請求項８
   記載の方法。