JPH03141290A - 抗腫瘍抗生物質ｂｍｙ―４１３３９ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の産業上の利用分野） 本発明は、本明細書中でＢＭＹ−４１３３９と称される
新規な抗腫瘍抗生物質及びアクチノマジュラ　ベルコツ
スポラ（八ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　ｖｅｒｒｕｃｏｓ
ｏｓｐｏｒａ）のＢＩＪＹ−４１３３９生産菌株の発酵
によるその調製に関する。

（従来の技術及び発明が解決しようとする課題）ＢＭＹ
−４１３３９は、米国特許第４．６７５．１８７号に開
示されたＢＢ＋Ｊ−１６７５複合体の新しく発見された
生物活性化合物である。その特許は、アクチノマジュＡ
１３２７Ｙ（ＡＴＣＣ３９６３ｇ）を発酵してｅｅｌ、
ｌ−１６７５複合体と称される潜在的な抗生物質の複合
体を生産すること及びこの複合体を二つの主要な生物活
性成分、即ちＢＢＬＩ−１６７５Ａ＋及びＡ２、並びに
四つの少量成分、即ちＢｅ！！−１６７５Ａ３、Ａ４、
Ｂｌ及びＢ２に分離することを開示している。

米国特許第４．５３０．８３５号は、ストレプトミセス
ｓｐ、ＡＴＣＣ３９３６３を発酵してＣＬ−１５７７Ａ
及びＢと称される抗腫瘍抗生物質を生産することを開示
している。その生産微生物、ＡＴＣＣ３９３６３は、米
国特許’Ｍ　４．６１５．９７５号に於いて、アクチノ
マジュラ　ベれる。ＢＢＬ１６７５　Ａｌ及びＡ２は、
夫々ＣＬ−１５７７Ａ及びＢと同じであると考えられる
。

Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ３８巻（１）号）、１６０
５〜１６０９頁（１９８５年）は、アクチノマジュラベ
ルコソスポラ菌株ｔ１９６４−６２　（ＡＴＣＣ３９３
３４）の発酵培養液から別の抗腫瘍抗生物質の単離を開
示している。成分Ａ　ｌｂはアクチノマジュラ　プルベ
ラセウス（ｐｕｌｖｅｒａｃｅｕｓ）　ＡＴＣＣ（３９
１００）の発酵により生産される米国特許第４．５７８
．２７１号に開示された抗腫瘍抗生物質ＷＳ−６０４９
−Ａと同じであると思われる。ＷＳ　６０４９−Ａ及び
ＢはＢＢＭ−１６７５Ａ　、及びＡ２に構造に於いて関
連する。

ＢＢＭ（６７５Ａｌ、Ａ２及びＡ、ｂの構造が解明され
、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　１０９巻、３４６２
〜３４６４頁（１９８７年）に開示されている。それら
は、異常な共役ジ−イン部分を特徴とし、これはまたミ
クロモノスポラ（ｍｉｃｒｏｍｏｎｏ−ｓｐｏｒａ）菌
株（Ｐｒｏｇｒａｍ　ａｎｄ＾ｂｓｔｒａｃｔ　ｏｆ　
２１３ｔｈ　Ｉｎｔｅｒ−ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｃｏｎｆｅ
ｒｅｎｃｅ　ｏｎ＾ｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｇｅ
ｎｔｓ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　　（抗菌
剤及び化学療法に関する第２６回国際科学会議のプログ
ラム及びアブストラクト、１９８６年９月、アブストラ
クト２２７））により生産されたカリケミシン（ｃａｌ
ｉｃｈｅｍｉｃｉｎｓ）　（Ｊ、Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　
Ｓｏｃ。

１０９巻＋３４６６〜３４６８頁、１９８７年）にも見
られた。

ＣＬ（５７７−８４と称される、ＣＬ−１５７７Ａまた
はＢのフラグメントが米国特許第４．６６１．３５３号
に開示されており、一方ＢＢＭ−１６７５Ｃ及びＤと称
されるＢＢＭ−１６７５Ａ、またはＡ２のフラグメント
が英国特許出願第２．１７９．６４９号Ａに開示されて
いる。

米国共同未決出願第２０８．３３０号（１９８８年６月
１０日出願）は、ミクロモノスポラ　ケルシナ（ｃｈｅ
ｒｓｉｎａ）　ＡＴＣＣ５３７１０の発酸により生産さ
れた、式 を有するａｌｌ−３４２０Ｔと称される抗腫瘍抗生物質
及びそのトリアセテート誘導体を開示している。

（課題を解決するための手段） 本発明は、抗腫瘍抗生物質ＢＭＹ−４１３３９、並びに
それを調製し同時生産物質を実質的に含まない純粋状態
で単離する方法を提供する。抗生物質は、Ｔ９−ｆ−ツ
マジュラ　ベルコツスポラのＢＭＹ−４１３３９生産菌
株を同化性の炭素源及び窒素源を含む水性栄養培地中で
、相当な量のＢＭＹ−４１３３９が上記の培地中で上記
の生物により生産されるまで培養し、ついて同時に生産
される物質を実質的に含まない上記の培地からＢＭＹ−
４１３３９を回収することにより得られる。

ＢＭＹ−４１３３９は、抗菌活性を示し、しかも実験動
物中の腫瘍の増殖を抑制することがわかった。

（詳細な説明） 本発明により提供されるＢＭＹ−４１３３９抗生物質は
、下記の構造を有することが決定された。

それは分子式Ｃ５ｑＨ１ｌｏＮａＯｚｚＳ、及び分子量
１３５７．６５を有する。硫黄の分析は、１）．３％の
計算％に対して９．８７％の値を示した。

ＢＭＹ−４１３３９の赤外吸収スペクトル（ＫＢｒディ
スク）は、ｃｆｌ″′で示される下記の周波数に於ける
特徴的な赤外吸収帯を示す。

３５３４、２９５５．２９２０．１７２０．１６７０．
１５９０．１５７５゜１４０５、１４２５．１３９５．
１３５０．１２９０．１２３０．１）９０゜１）３５、
１０９５．　１０５０．　１０００．９７０．７３０゜
Ｂｌ’１Ｙ−４１３３９の紫外吸収スペクトルは、メタ
ノール中で測定した。観察された吸収最大値及び吸光係
数は、以下のとおりであった。

ス□、ｂ畦　　　　匡ＩＬ ３１８　　　　　４．０７ ２７７　　　　　４．２４ｓｈ ２５２　　　　　４、４４ ＢＭＹ−４１３３９のプロトン核磁気共鳴スペクトルは
、ＣＤ３０Ｄ中のＢＭＹ−４１３３９の溶液に関して測
定した。

観察された化学シフト及びパターンの説明は、以下のと
おりである。

化学シフト 一一瞳−戸」−−一 ８．４６ ７．６５ ６．６４ ６．２２ ６．０８ ５．９５ ５．５６ ５．５３ ５．４７ ５．３９ ４．９８ ４．６８ ４．６４ ４．５７ ４．２６ ４．２３ ４．１９ ３．９４ 多重度 結合定数 一−ユ肛Ｌ− ｄ ｒｄ ｄ ｒｓ ｒｄ ｄ ｄ ４．５．１０．５ １、１ ９．５ １．５，９．５ ３．１ ２．８，５．１ ２．５ １．７，１０．２ ２．５ ６．８ ７．８ ３．４ 化学シフト 一１圧ｍ ３．９１ ３．８８ ３．８５ ３．８０ ３．６６ ３、５−３．６５ ２．９８ ２．８５ ２．６２ ２．４２ ２．３６ ２．３２ ２．２５ ２．１３ １．９５ １．５９ １．３８ １．３２ 多重度 ｓ、　　３Ｈ ｓ、　　３Ｈ ｓ、　　３Ｈ ｒｓ ｒｍ ｒｍ ｓ、　　３Ｈ ｄ ｄ ｓ、　　３Ｈ ｍ、２Ｈ ｄ、３Ｈ ｄ、　　３Ｈ 結合定数 一一工旺Ｌ− ２．５，４．１ ２．６，１０゜５ ３．７ ９．８ ６．２ ６、１ 化学ソフト　　　　多重度　　　　結合定数″、ｐｐｍ
″、　　　　　　　　　　　　　　：二１（ｌ。

１．２６　　　　　　ｄ、３Ｈ６，５ １，１３ａ、３Ｈ６，２ １，０７ｄ、３Ｈ６，３ ０，８−１，０ｍ（不純物） ＢＭＹ−４１３３９のＣ１３咳磁気共鳴スペクトルは、
ＣＤＣβ３中の化合物の溶液に関して測定した。観察さ
れた化学シフトは、以下のとおりであった。

１３．７．１６．５．１７．５．　Ｌ９．８．２２．２
．２３．４．２３．５゜２９．０．２９．６．３４．０
．３５．１．４０．１．４７．３．５２．６゜５５．７
．　５６．０（Ｄｏｕｂｌｅ　　Ｉｎｔ、）、　　５６
．１（Ｄｏｕｂｌｅ　　Ｉｎｔ、）。

６２．４．６４．５．６６．７．６８．２．６８．９．
６９．２．６９．６゜７０．２．７１．９．７６．１．
７７．１．８３．５．８６．５．８８．５゜９０．６．
９７．２．９８．２．９９．６（Ｄｏｕｂｌｅ　Ｉｎｔ
、）、　ｌＱ３．８゜１０７．６．１）２．６．１２３
．１．１２４．９．１２８．７．１２９．８゜１３０．
８．１３６．７．１４４．１．１５４．０．１５４．５
．　１６０．７゜１６６．４．１７４．９．１９１．５
゜ＢＭＹ−４１３３９は、下記の条件下で高圧液体クロ
マトゲラフイー　（ｈｐｌｃ）にかける時、２５４ｎｍ
で９０％のピーク面積でもって１２．９分の保持時間を
示す。

ＨＰＬＣカラム：　Ｃ−１８ＲＰ 溶媒系；アセトニトリル；メタノール：Ｏ，ＯＳ酢酸ア
ンモニウム（３２，５：　３２．５　：　３５ν／ν）
溶媒系アセトニトリル：メタノール：水（３３−３３−
３４ｖ／ｖ）を用いてｌ　ｙｐｒｌ　７分の流量（直接
導入）に於けるサーモスプレー（ｔｈｅｒｍｏｓｐｒａ
ｙ）イオン化質量分析法は、分子イオン（Ｍ＋Ｈ）、ｍ
Ｈｚ　＝　１３５７を示した。

ＢＭＹ−４１３３９は、米国特許第４．６７５．１８７
号に開示されたアクチノマジュラ　ベルコツスポラ（Ａ
ＴＣＣ３９３３４の発酵の少量成分であることが本発明
者らにより発見された。その特許は、ＢＢＭ−１６７５
ＡＩ。

＾ｚ、　Ａ３＋　Ａ４＋　Ｂｌ及びＢ２の生産のための
発酵及び単離操作を記載しているが、本発明の主題であ
る新規なりＭＹ−４１３３９化合物を開示していない。

本発明の方法によりＢＭＹ−４１３３９の調製が、以下
に詳細に記載される。

途ヱヒ防 最も好ましい生産生物は、登録番号ＡＴＣＣ３９３３４
としてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
（ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒ
ｅ　Ｃｏ１）ｅｃｔｉｏｎ）（ロックビル、メリーラン
ド）に寄託されたヱ叉チノマジュラ　ペルコツスポラ菌
株Ｈ９６４−９２及ヒ登録番号ＡＴＣＣ３９６３８とし
て寄託されたアクチノマジュラ　ベルコツスポラ菌株Ａ
１３２７Ｙである。これらの微生物の充分な説明が、米
国特許第４，６７５゜１８７号に見られる。

しかしながら、本発明は特別な菌株ＡＴＣＣ３９３３４
または３９６３８の使用に限定されないことが理解され
るべきである。Ｘ−線照射、紫外線照射、ナイトロジエ
ンマスタードによる処理、ファージ曝露等の如き既知の
手段により寄託生物から生産し得る、寄託生物のその他
のＢＭＹ−４１３３９、生産変異株または突然変異株を
含むことが、特に意図される。

ＪＸユ１五奥生産 ＢＭＹ−４１３３９は、通常の水性栄養培地中でアクチ
ノマジュラ　ベルコツスポラ、好ましくはアクチノマジ
ュラ　ベルコツスポラＡＴＣＣ３９３３４もしくは３９
６３８　ｔたｉまそのＢλＩＹ−４１３３９生産突然変
異株もしくは変異株を培養することにより生産される。

生物は、放射菌類に関して知られる栄養源、すなわち同
化性の炭素源及び窒素源と任意の無機塩及びその他の既
知の増殖因子を含む栄養培地中で増殖される。液中好気
性条件が多量の抗生物質の生産に使用されることが好ま
しいが、制限量の生産に関して、表面培養及びびんがま
た使用し得る。その他の放射菌類の培養に使用される一
般操作が、本発明に適用し得る。

栄養培地は、グリセローノペしく＋）−アラビノース、
Ｄ−キシロース、Ｄ−リボース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−
グルコース、蔗糖、セロビオース、可溶性！１２粉、Ｄ
−マンニトールまたはイノシトールの如き適当な同化性
炭Ｓ源を含むべきである。

窒素源として、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
尿素、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、等が、単独
で使用されてもよく、あるいはペプトン、肉エキス、酵
母エキス、コーンステイープリカー、大豆粉、綿実粉、
等の如き、有機窒素源と組合せて１吏用されてもよい、
また、必要により、栄養無機塩が添加されて、ナトリウ
ム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、リン酸塩、
硫酸塩、塩化物、臭化物、炭酸塩、亜鉛、マグネシウム
、マンガン、コバルト、鉄等の源を与えてもよい。

Ｂ’ＪＹ−４１３３９抗生物質の生産は、生産生物の満
足な増殖を促す温度、例えば１５℃〜４５℃で行なうこ
とができ、都合よくは約２７℃〜３２℃の温度で行なわ
れる。通常、最適の生産は、約８〜１０日の保温期間後
に得られる。タンク発酵が行なわれる場合には、生産生
物の斜面培養菌もしくは土壌培養菌または凍結乾燥培養
菌をブロース培地に殖菌することにより、栄養ブロース
中で栄養植菌物を生産することが望ましい。このように
して活性な植菌物を得た後、それは発酵タンク培地に無
菌的に移される。抗生物質生産は、試験生物として黄色
ブドウ球菌２０９Ｐを用いて濾紙円板寒天拡散分析によ
り監視し得る。

単離及び精製 ＢＭＹ−４１３３９は、ＢＢＭ−１６７５複合体の少量
成分として発酵中に同時生産される。発酵が完結する時
、ＢＢＭ−１６７５複合体は通常の単離繰作、例えば酢
酸エチルの如き、好適な有機溶媒による溶媒抽出により
ブロースから分離し得る。有機抽出物は全ＢＢＭ−１６
７５複合体を含み、これはｎ−ヘキサンの如き好適な貧
溶媒（ａｎｔｉｓｏｌｖｅｎｔ）の添加により溶液から
沈殿させることができる。

ＢＭＹ−４１３３９を含む、ＢＢＭ−１６７５複合体中
の種々の生物活性成分は、下記の実施例に記載されたよ
うな通常のクロマトグラフィー操作により分離、精製し
得る。ＢＭＹ−４１３３９は、例えば逐次のクロロホル
ム−メタノール−酢酸溶媒系中のシリカゲルによるクロ
マトグラフィーにより、ＢＢＭ−１６７５Ａ　。

と同時精製される。事実、本発明者らは、通常の相シリ
カクロマトグラフィによりＢＢＭ−１６７５八、と混合
してＢＭＹ−４１３３９を検出しなかった。それは、オ
クタデシルシリルシリカ媒体による分析用逆相高圧液体
クロマトグラフィ　（ｈｐｌｃ）によってのみ明らかに
された。典型的には、ＢＭＹ−４１３３９の量は、生産
されたＢＢＭ−１６７５Ａ　、の量の１〜５％である。

これらの二つの成分は、逆相分析用ｈｐｌｃ系中のそれ
らの異なる保持時間により識別し得る。例えば、３２．
５％のアセトニトリル、３２．５％のメタノール及び３
５％の５０ｍＭの水性酢酸アンモニウムからなる溶離剤
をｐｎ４．４で使用して、ＢＢＭ−１６７５Ａ、はツバ
バク（ＮＯＶＡＰＡＫ）　Ｃ１８（ウォーターズ・デイ
ビジョン（Ｗａｔｅｒｓ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）、ミリボ
ア・コーポレーション（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｃｏｒｐ
、））の１０ｃｍ　Ｘ　Ｑ、　４５　ｃ＋ａのカラムか
ら８．８分の保持時間で溶出するが、一方ＢＭＹ−４１
３３９は１２．９分の保持時間で溶出する。この保持時
間の差は、ＢＢＭ−１６７５＾。

からＢＭＹ−４１３３９の分取分離中に、下記の実施例
で利用される。

ＢＭＹ−４１３３９の生　−・ ＢＭＹ−４１３３９の抗菌活性が、連続２倍寒天希釈法
により種々のバクテリアに関して測定された。下記の表
に示されるように、ＢＭＹ−４１３３９は広いスペクト
ルの抗菌活性を示す。

ＢＭＷ−４１３３９の抗菌活性 Ｅ、ファエカ１ス（ｆａｅｃａｌｉｓ）＾２０６８Ｂ、
００２ 黄色ブドウ球菌Ａ　９５３７ 黄色ブドウ球菌Ａ　２０６９８ 黄色ブドウ球菌Ａ　２４４０７ 大腸菌Ａ　１５１）９ 大腸菌Ａ　２０６９７ 大腸菌Ａ　９７５１ 肺炎杆菌Ａ　９６６４ 肺炎杆菌へ２０４６８ Ｐ、フ゛ルガリス（ｖｕｌｇａｒｉｓ）八２１５５９．
００１ ．００１ ．００１ ．２５ ．２５ ．０１６ ．１３ 枯草菌へ９５０６−Ａ 、Ｏｏｌ ＢＭＷ−４１３３９の生体内抗腫瘍活性は、標準のＰ３
８８マウス白血病モデルに於いて測定した。ＢＭＷ−４
１３３９を用いて行なった実験の要約が、以下に示され
る。

マウス： ＤＢ＾／２及び（Ｂａｌｂ／ｃＸＤＢＡ／２）Ｆｔ（Ｃ
ＤＦｔ）雑種マウスを、チャールズ・リバー・ブリーデ
ィング・カンパニイ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｂ
ｒｅｅｄｉｎｇ　Ｃｏ、）　　（ウイルミントン、ＭＡ
）から購入した。それらに食料及び水を随時与えた。

Ｕ： Ｐ３８８マウス腹水白血病は、ＤＢ＾／２マウス中毎週
の生体内通過により保った。

泉ｐト ニスペラマイシン（Ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）Ａ＋及び
ＢＭＹ４１３３９を、エタノールに？８解した。エタノ
ール濃度（ｖ／ｖ　）が１０％になるまで、０．９％Ｎ
ａＣ１（食塩水）で更に希釈した。それ故、投与は食塩
水ビヒクル中の１０％エタノール中で行なった。

ｉｐ注射のため、化合物の濃度は、注射されるマウスの
各群の平均初期体重に応じて調節し、その結果、所望の
投薬量が０．５　ｍｌの注射容量中に含まれる。注射容
量がＱ、２ｔｎｌであった。以外は、同じ操作をｉｖ化
合物投与に使用した。

坑■簾往伍： 抗腫瘍実験は、１０６個のＰ３８８白血病細胞をｉｐま
たはｉνのいずれかでＣＤＦ、マウスに移植することに
より開始した。ＢＭＷ−４１３３９及びニスペラマイシ
ンＡｌ　（陽性の規準化合物として含まれる）を、ｐ３
８８でｉｐ移植されたマウスにｉｐ注射したか、あるい
は、Ｐ２Ｏ３で２口重のポストインブラントのみでｉｖ
移植されたマウスにｉｖ注射した。２倍の増分でもって
、ＢＭＹ−４１３３９の８つの異なる投薬量を、行なっ
た二つの実験の夫々で評価した。

活性は、増大された寿命を基準として判断し、これは薬
剤治療された（Ｔ）マウスのメジアン生存時間（Ｍ　Ｓ
　Ｔ）を腫瘍対照（Ｃ）マウスのＭＳＴで割り１００を
掛けて計算することにより決定され、Ｔ／Ｃ（％）で表
わされた。Ｔ／ｃ（％）の値が１２５以上である場合に
は、これらのモデルに於いて活性を示すと考えられた。

！！： 実験番号８１０２に於いて、１０”個のＰ３８８細胞で
ｉｐ移植された未処置の白血病対照マウスは１０日間の
メジアン生存時間を有していた。これと比較して、０．
１μｇ　／　ｋｇより多いＢＭＹ−４１３３９の１回の
注射のみでもって２口重に治療されたマウスは、１３５
％以上のＴ／Ｃ（％）値により反映されるように、寿命
の有意な増大を有していた。

試験された最高の投薬！３．２μｇ　／　ｋｇは１４０
％のＴ／Ｃを生じた（　１．６　ｐ　ｇ　／　ｋｇは１
４５％のＴ／Ｃを生じた）が、過剰の薬剤に関連する毒
性（例えば、過度の体重損失、早死）の明らかな徴候が
観察されず、これは投薬量を更に増加する可能性を示す
。これらの同じ投薬量で、ＢＭＹ−４１３３９はｉν移
植された白血病に対して、ｉν投与された時に有効でな
かったが、最高の許容投薬量に達したという指示がまた
なかった。陽性の規準物質として含まれたＢＢＭ−１６
７５Ａ　＋　は、これらのモデルの両方で活性であった
。

Ｐ３８８実験番号８１０９に於いて、１０６個のＰ３８
８細抱で１ｐ移植された未処置の白血病対照マウスは、
１０．５日のＭＳＴを有していた。先の研究で評価され
たよりも多い投薬量で、ＢＭＹ−４１３３９は、０．５
〜３２μｇ　／　ｋｇが投与された時に、寿命の活性な
増大を生じた。観察された最良の効果、１７１％のＴ／
Ｃは、試験された最高の投薬量、３２μｇ／ｋｇで得ら
れた。また、ＢＢＭ−１６７５＾１はこの実験のｉ、Ｖ
、　Ｐ３８８移植部分中でこの実験で活性であった。Ｂ
　！Ａ　Ｙ　−４１３３９は、評価された二つの投薬量
で寿命の活性な増大を生じた。１３９％及び１５６％の
Ｔ／Ｃ値は、ＢＭＹ−４１３３９の１６μｇ／ｋｇ及び
３２μｇ　／　ｋｇのＩＶ注射と夫々関連していた。

ＢＢＭ−１６７５Ａ＋がこの研究に含まれ、試験された
投薬量の一つで活性であった。１０６個のＰ３８８細胞
でＩＶ移植された、未処置の腫瘍対照マウスは９日のＭ
ＳＴを有していた。実験番号８１０９に関するデータが
、以下に示される。

猪論： ＲＭＹ−４１３３９は、確かな実験結果に基いてＰ３８
８白血病に対して活性である。最も印象的なことに、充
分な投薬量が投与された時に、ＢＭＷ−４１３３９は播
種ｉｖ移植されたＰ３８８白血病モデルに対して活性で
あった・ 上で示されたように、ＢＭＹ−４１３３９は広いスペク
トルのバクテリアに対して抗菌活性を有する。かくして
、その化合物は、このようなバクテリアによりひき起こ
される感染症に関して、哺乳類及びその他の動物の治療
に有用である。更に、それは医療用及び歯科用の装置の
殺菌如き、抗菌剤のその他の通常の用途に使用し得る。

マウスの実験的な腫瘍、例えばＰ３８８白血病に対して
示される著しい抗腫瘍活性は、Ｂ？ＩＹ−４１３３９が
哺乳類の腫瘍の増殖を抑制するのに治療的に有用である
ことを示す。

それ故、本発明は、バクテリア感染または悪性腫瘍に冒
された動物宿主に有効な抗菌もしくは腫瘍抑制投薬量の
ＢＭＹ−４１３３９またはその製薬組成物を投与するこ
とを特徴とする、上記の宿主の治療方法を提供する。

その他の局面に於いて、本発明は、不活性な製薬的に許
容し得る担体または希釈剤と組合せて有効な抗菌もしく
は腫瘍抑制量のＢＭＷ−４１３３９を含むことを特徴と
する製薬組成物を提供する。これらの組成物は、非経口
投与に適したあらゆる製薬形態でつくることができる。

非経口投与に関する本発明の製剤は、無菌の水性もしく
は非水性の溶液、懸濁液またはエマルジョンを含む。ま
た、それらは、使用の直前に無菌の水、生理食塩水また
はその他の或種の無菌の注射可能な媒体に溶解し得る、
無菌の固体組成物の形態で製造し得る。

使用されるＢＭＹ−４１３３９抗生物質の実際の好まし
い量は、配合される特別な組成物、適用方法並びに治療
される、特別な位置、宿主及び疾患に応じて変化するこ
とが理解される。薬剤の作用を変更する多くの因子、例
えば、年令、体重、性別、食事、投与時間、排泄の時間
、宿主の状態、薬剤の組合せ、反応感受性及び疾患の重
度が、当業者により考慮される。投与は、最大の許容投
薬量の範囲内で、連続的または周期的に行なうことがで
きる。所定の組の条件に関する最高の適用速度は、に記
のガイドラインに鑑みて、通常の投薬量投与試験を用い
て当業者により確かめることができる。

以下の実施例は、説明の目的のみに示されるものであり
、本発明の範囲を限定することを目的とするものではな
い。

全ての操作は、生物活性成分の光感受性のため、黄色の
蛍光（シルバニア　ゴールド（ＳｙｌｖａｎｉａＧｏｌ
ｄ）　　Ｆ　４０／　６０）の下に、行なった。フラッ
シュクロマトグラフィーは、直径１０ｃｍのフラッシュ
クロマトグラフィーカラムで最大充填１００でもって、
ステイル（Ｓｔｉｌｌ）らにより実質的に記載されたよ
うに行なった。物質回収は、典型的に充填物質の９０％
であった。フラッシュクロマトグラフィー用のシリカは
、メルク（Ｍｅｒｃｋ）　１ｌｈ９３８５であった。圧
縮窒素を、圧力源として使用した。

全ての両分を、３５℃で蒸発乾固し、−２０℃で乾燥し
て貯蔵した。逆相）（ＰＬＣは、１０ｄのＤＭＳＯまた
はアセトニトリル中の注入当り２５０■の装填量でもっ
て、ライニン・ダイナマックス（Ｒａｉｎｉｎ　Ｄｙｎ
ａＩＩＩａｘ）　ＣＩ　８カラム（４０ｍｍＸ２５ｃｍ
）を備えたウォーターズ・デルタープレブ（Ｗａｔｅｒ
ｏ　Ｄｅｌｔａ−Ｐｒｅｐ）　４０００を用いて行なっ
た。

全ての精製溶媒は）（ｐ　ｒ、　ｃ銘柄（アメリカン・
ブーデイック・アンド・ジャクソン（Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｂｕｒｄｉｃｋ　＆　Ｊａｃｋｓｏｎ　）　）であった
が、一方回収溶媒は工業銘柄またはＡＣ３銘柄であった
。両分の純度は、ウォーターズ　ノバーバタＣＩ８カラ
ムで分析用ｈｐｌｃにより測定した。

アクチノマジュラ　へルコソス亜フ菌株Ａ１３２７Ｙ（
ＡＴＣＣ３９６３Ｂ）の調製物夫々５ｉを含む、−７０
℃で貯蔵された４個のプラスチック　バイアルを、２８
℃で解凍し、夫々１００−の種培地を含む４個の５００
−のじゃま板付き三角フラスコを植菌するのに使用した
（以下、接種段階１と称する）。

このため及びひき続いてのフラスコ接種段階のための種
培地は、ｌ　Ｏｇ／ｌの綿実かす、２０ｇ／ｌのトウモ
ロコシ澱粉、５ｇ／ｌのグルコース１水和物、１０ｇ／
ｌの乾燥酵母及び２ｇ／ｌのＣａＣ０，からなるもので
あった。培地を、オートクレーブ処理の前にｐＨ７，０
に調節した。接種段階１を回転振とう器で２８℃で２日
間保温した。

接種段階ｌからの４個のフラスコのうち３個を使用して
、段階１に記載された物質及び方法により調製された２
０００−の培地を含む３個の４０００−のじゃま板付き
三角フラスコの夫々を植菌した（以下、接種段階２と称
する）。接種段階２を２日間培養し、その時に４個のフ
ラスコのうち２個の内容物を、１）の種発酵槽を植菌す
るのに使用するための無菌アスピレーターフラスコに無
菌プールした（容量、３〜４１）。

接種段階２で調製された植菌物を、６８１の逆浸透脱イ
オン（ＲＯＤＩ）水中に構成されたｌＯｇ／Ｉｌの綿実
かす、２０ｇ／ｌのトウモロコシ澱粉、５　ｇ　／　ｌ
！のグルコース１水和物、１０ｇ／ｌ’の乾燥酵母、２
ｇ／７７のＣａＣＯ５及び２　ｄ／　ｌ　Ｏ）ポリグリ
コール消泡剤からなる熱滅菌培地（１２１℃で１時間）
　６８１を含む１）０ｘの種発酵槽に無菌的に移した。

培地を滅菌の前にｐＨ６，８〜７．２に調節した。植菌
された培養菌を２８℃に保ち、７３．６７’／分の流量
で通気した。

種発酵槽を４８時間の期間にわたって培養し、この時に
、種発酵槽の全内容物を、６８０１の無菌培地を含む１
）００／の生産発酵槽に無菌的に移した。生産培地は、
ＲＯＤ　Ｉ水６８０１中に構成された、６０　ｇ　／　
ｌのさとうきび糖みつ、２０ｇ／Ｉ！のトウモロコシ澱
粉、２０　ｇ　／　１の微細魚粉、０．１ｇ／ｌのＣｕ
ＳＯ４・５１）ｚＯ：　２　ｇ　／　１のＣａＣＯ５，
０，５ｍｇ／　ｌのＮａｌ及び１０ｓｔｌ／ｌのポリグ
リコール消泡剤からなっていた（滅菌の前にｐｌ＋を６
．８〜７．２に調節した）。生産培養菌を、４５３１／
分の流量で通気し、１８０　ＲＰＭで攪拌した。

培養菌を２８℃で８〜１０日間保ち、この時発酵を停止
し、抗生物質回収のためブロースを収穫した。ＢＭＷ−
４１３３９の生産は、培養ｐＨ及び／または培養菌に利
用可能な酸素の量により影響され得る。

実路外ｌ 因習」υ■」へ１）支艷捺製 実施例１の操作により得られた全ブロース（６８゜ｌ）
を、等量の酢酸エチルと混合した。ついで珪藻土を添加
し、混合物をフィルタープレス上の珪藻土床により濾過
し、相を分離した。ぬぐい取り残膜エバポレーター（Ｗ
ｉｐｅｄ−ｆｉｌｍ　ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）及び回転
エバポレーターを使用して、酢酸エチル相を８１の油に
濃縮した。１０倍容量のヘキサンに油を懸濁し、ついで
珪藻土で予め被覆したバグフィルタ−により濾過するこ
とにより、消泡剤を殆ど除去した。残留物質（２３６ｇ
）を１９１の酢酸エチルで抽出し、ヘキサン中のスラリ
ー化及び再発蒸の数回のサイクルでもって蒸発により珪
藻土　２．４　ｋｇの上に付着した。珪藻土を、クロマ
トグラフィーカラムに送るヘキサン中でスラリーとし、
４７Ｉ！のヘキサン、Ｉ４１のヘキサン−トルエン、１
８１の塩化メチレン、１８１のクロロホルム及び１２Ｎ
のメタノールで逐次溶出した。

ＢＭＹ−４１３３９は塩化メチレン画分中に溶出し、蒸
留すると、固体物質３３ｇは、この時点で１％より多い
ＢＭＹ　−４１３３９を含んでいた。

フラッシュクロマトグーフ クロロホルム−メタノール（９５：　５ｖ／ｖ　）を用
いてシリカによるクロマトグラフィーは、主成分、Ｎ−
アセトアミド−ｐ−ヒドロキシベンジルアミンを含む塩
化メチレン珪藻土カラム溶出物からの物質の５０％より
多くを除去した。これは、１２、８　ｇの粗複合体を残
した。ヘキサン−アセトン（１：　ｌｖ／ｖ　）を用い
る第二工程は、青色顔料を含む残存汚染物の殆どを除去
し、少量のＢＭＹ　−４１３３９と共に、主としてＢＢ
Ｍ−１６７５ＡＩ及びＡ２からなる７、６ｇを残した。

ついで、ＢＢＭ−１６７５ＡＩを、クロロホルム−ｔ−
ブタノール（１００：５ν／ν）を用いるクロマトグラ
フィーにより効果的に除去し、ここでＢＢＭ−１６７５
ＡＩ及びＢＭＹ−４１３３９は移行したが、ＢＢＭ−１
６７５Ａ２は移行しなかった。クロロホルム−メタノー
ル−酢酸（９５：　５　：　０．１ｖ／ｖ　）を用いる
最後のフラッシュクロマトグラフィー工程で、少量の褐
色の顔色を除去した。これは、約３％のＢＭＹ−４１３
３９と共に９７％の純粋なりＢＭ−１６７５Ａ、５．５
ｇを与えた。

糠に反丈逆皿街 メタノール−アセトニトリル−５０ｍＭの酢酸アンモニ
ウムｐＨ４，４（３２，５：　３２．５　：　３５）を
用いるＣ１０での逆相ｈｐｌｃによるクロマトグラフィ
ーは、ＢＭＹ−４１３３９からＡ１の分離を与えた。カ
ラム流出液の迅速な希釈を、分液漏斗中で等容量のクロ
ロホルム及び蒸留水を用いて行ない、抽出し、相分離し
、第二容量のクロロホルムで再抽出した。

ついで、合わせたクロロホルム相を蒸発乾固した。

この時点で、ＢＭＷ−４１３３９画分は約１：ｌのＢＭ
Ｙ４１３３９とＢＢＭ−１６７５＾、との混合物であっ
た。同じ溶媒系中の逆相再クロマトグラフィーは、同じ
逆抽出法の後に、純粋なりＭＷ−４１３３９を与えた。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する抗腫瘍抗生物質ＢＭＹ−４１３３９。
2. （２）￥アクチノマジュラ￥￥ベルコソスポラ￥のＢＭ
   Ｙ−４１３３９生産菌株を同化性の炭素源及び窒素源を
   含む水性栄養培地中で液内好気性条件下で、相当な量の
   ＢＭＹ−４１３３９が上記の培地中の培養により生産さ
   れるまで培養し、ついでそれと同時に生産される物質を
   実質的に含まない培地からＢＭＹ−４１３３９を回収す
   ることを特徴とする、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる抗腫瘍抗生物質ＢＭＹ−４１３３９の調製
   方法。
3. （３）生産微生物が￥アクチノマジュラ￥￥ベルコソス
   ￥￥ポラ￥菌株Ｈ９６４−９２（ＡＴＣＣ３９３３４）
   、￥アクチノマ￥￥ジュラ￥￥ベルコソスポラ￥菌株Ａ
   １３２７Ｙ（ＡＴＣＣ３９６３８）、及びそれらのＢＭ
   Ｙ−４１３３９生産突然変異株または変異株からなる群
   から選ばれる、請求項２記載の方法。
4. （４）不活性な製薬的に許容し得る担体または希釈剤と
   組合せて有効な抗菌量のＢＭＹ−４１３３９を含むこと
   を特徴とする、製薬組成物。
5. （５）不活性な製薬的に許容し得る担体または希釈剤と
   組合せて有効な腫瘍抑制量のＢＭＹ−４１３３９を含む
   ことを特徴とする、製薬組成物。
6. （６）細菌性感染に冒された動物宿主に有効な抗菌投薬
   量のＢＭＹ−４１３３９を投与することを特徴とする、
   上記の宿主の治療方法。
7. （７）哺乳類に腫瘍抑制投薬量のＢＭＹ−４１３３９を
   投与することを特徴とする悪性の哺乳類腫瘍の増殖を抑
   制する方法。