JPH01165392A - 抗胞子虫症剤および成長促進剤として有益な酸性多環エーテル - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は次式の絶対立体化学式を持つ新規酸性多環エー
テル抗生物質 ■ （式中Ｍａ＝ＣＩｉ３）　； その医薬として適当な陽イオン塩：家禽類、畜牛または
豚のための前記抗生物質を含む栄養飼料組成物：家禽類
においての抗胞子虫症剤としての、または畜牛または豚
においての成長促進剤とじての使用；その製造のための
発酵法：および前記発酵液において前記抗生物質を産生
ずるアクチノマズラ（ＡＣｌ　１ｎｏｔｎａｄ％デα）
峠、微生物に関する。

従来の技術 化合物（１１は抗生物質の酸性多環エーテル群の新規の
ものである。この系列にはモネンシン（メルクインデッ
クス、第１０版、メルク株式会社、ラーウエイ、Ｎ、Ｊ
、、　１９８３、モノグラフ番号６１００）、ニゲリシ
ン（前記引用文献中モノグラフ番号６３９０）、ナラジ
ン（前記引用文献中、モノグラフ番号６２７１）、ラサ
ロシド（前記引用文献中、モノグラフ番号５２０４）お
よびサリノマイシン（前記引用文献中、モノグラフ番号
８１９３）のごとくよく知られたものが含まれる。

この事についてはウェスドリーにより総括されている、
”ポリエーテル抗生物質”、アトパンセスイン　アプラ
イド　マイクロバイオロジー、２２巻、ｐｐ１７７−２
２３（１９７７）。これらの化合物は一般的に、胞子虫
症剤としておよび／または飼料添加−成長促進剤として
知られている。

本発明が解決しようとする課題点および課題を解好気的
条件下、水性培地中で発酵せしめた！！チノマズラ属に
属する種（Ａｃｔｉｓｏｎｔａｄｓｒａ　ａｐ、）（Ａ
ＴＣＣ５３６７６）の培養微生物は前に特定した式（１
１の構造を持つ新規酸性多環エーテル抗生物質を産生ず
る。

本発明は前記式（Ｉ）の化合物（その医薬として適当な
陽イオン塩を含む）および同化可能な炭素および窒素源
を含む水性栄養培地中、前記式（１１の化合物が回収可
能な量になるまで（好適には水中で好気的条件下）前記
アクチノマズラ属に属する種（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｖ、
ｒａ　ｓｐ、）　ＡＴＣＣ５３６７６を発酵せしめるこ
とを特徴とするその装造方法を請求の範囲に含む。抗胞
子虫剤および／または成長促進剤としての使用には、化
合物（１１は発酵液から分離され実質的に純粋な形で単
離されている必要はなく、菌糸体と混合された沈殿の形
（発酵培地の濾過により回収される）で、またはすべて
の発酵培地の噴霧または凍結乾燥により得られる固体の
形の粗生成物の形でも使用される。

前記医薬として適当な陽イオン塩には、ナトリウム、カ
リウム、カルシウム、アンモニウム、Ｎ、Ｎ’−ジベン
ジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン（メグル
ミン）およびジェタノールアミンの塩が挙げられるがし
かしそれに限定されるものではな（・。好適な陽イオン
塩はカリウムおよびナトリウムの塩である。

本発明はまた栄養飼料組成物も請求の範囲に含んでおり
、一つは畜牛または豚用で、前記畜牛または豚の成長を
促進および／または飼料利用を改良するのに有効量の式
（１１の化合物を含み、他方は家禽類用であり前記家禽
類の胞子虫症感染を押えるのに有効量の式（１１の化合
物を含んでいる。

本発明はさらに、畜牛または豚に成長促進または飼料利
用効率促進蓋の式（Ｉｔの化合物を特に栄養飼料組成物
の形で投与する事を特徴とする前記畜牛または豚の成長
促進および／または飼料利用効率の増加のための方法：
および家禽類に抗胞子虫症有効量の式（１１の化合物′
ｌｋ：特に栄誉飼料組成物の形で投与する事を特徴とす
る前記家禽類の胞子虫症感染の防止のための方法を請求
の項に含む。

最後に本発明は、アクチノマズラ属に属する種（Ａｅｔ
ｔｎｏｔｎａｄｓｒａ　ｇｐ、）　（ＡＴ　ＣＣ５３６
７６）の生物学的純粋培養物も目的とし、前記培養物は
同化できる炭素および窒素源を特徴とする水性栄養培地
中での発酵により回収できる童の式中の化合物を産生ず
る能力を持ち；前記培養物には凍結乾燥の形のものも含
まれる。

式（１１の本多環エーテル抗生物質を産生できる培養物
はアクチノマズラ属に属する１！　（Ａｃｔ　ｉｎｏｍ
ａ　−ｄｘｒａ　ａｐ−）と称され、アメリカン　タイ
プ　カルチャー　コレクション（ロックビル、メリーラ
ンド）に寄託番号ＡＴＣＣ５３６７６の培養物として寄
託されている。ロックビル、メリーランドのアメリカン
　タイプ　カルチャー　コレクションにおげろ本培養物
の寄託の永続性および一般からのその容易な入手は、特
許が付与された後特許が効力を有する期間を通じて与え
られる。出願が係属中は３７　ＣＦＲ１，１４および３
５　ＵＳＣＩ２２のもと培養物は入手可能である。寄託
された培養物に対する一般からの入手についての全ての
制限は特許の付与により非改変的に除去される。

本新規培養物は日本の富山県富山市本郷町で採取された
土壌試料から誘導され、ファイザー社の培養収集物でＮ
７４２−３４と同定されている。

その説明および分類がり、Ｉｉ、ハン博士によりなされ
ている。本培養物は狭い広がりの放線菌菌糸、胞子＠を
上に持つ気中菌糸体および分裂していない下層菌糸体を
作る。全細胞分析の結果はさらに、これがアクチノマズ
ラ（Ａｅｔｔｘｏｍａｄ％ｙａ）属に属することを示し
ている。

微生物の斜面培養物をＡＴＣＣ１７２プロス中へ播種し
、振とう器上２８℃にて４日間増殖せしめる。それを２
０分間遠ノし分離し、無醒蒸留水にて３回洗浄し、アク
チノマイセス（Ａｃｔｔｎｏ倶ｙｅｓｓ　）目の一員で
ある事の同定のために通常使用される培地上にまく。

ｆ＠養物な２８℃でインキュベートし、種々の時間（し
かし、最も普通には１４日目）に結果を読みとる。色は
通常の術胎学で記述されているが、正［な色はｆ　　カ
ラー　ハーモニー　マニュアル（１４版）からの色チッ
プと比較する事により決定された。全細胞アミノ酸およ
び糖分析の方法はジー、１２巻、ｐｐ４２１−４２３（
１９６４））、オロジー、２８巻、ｐｐ　２２６−２３
１（１９７４））巻、ｐｐ　９３４−９４４（１９６８
））により記載されている方法である。比較のため、ア
クチノマズ３１２８６を使用した。

培養物は以下のごとく同定された： 酵母エキスー麦芽エキス寒天（ＩＳＦ＋２培地、デイフ
コ）−増殖良、灰色がかった黄色、灰色から灰色がかっ
た黒（２ｇｅ＋２ｔａ＋２Ｌｔｒ２％ｔ）：盛り上がり
、ひだがあり；気中菌糸体まばら、白色から薄い灰色（
灰色系Ｍ、３ｄｃに近い）；裏面黄色がかった灰色、灰
色から灰色がかった黒（２ｄｇ。

２Ｌｓ＋２％ｌ）；可溶性色素はやや黄色（２ｊｃ）。

１ｃａ、１ｇｇ）；わずかに盛り上がり、平坦、気中菌
糸体なし；裏面は表面と同じ；可溶性色素は無色からク
リーム色（１−ＨｃｃＬ）。

薄く、平坦、気中菌糸体なしからまばら、無色；裏面は
表面と同じ；可溶性色素なし。

培地、デイフコ）−増殖貧弱から中程度、薄い桃色（３
６α）；薄いものかられずかに盛り上がる：気中菌糸体
なしからまばら、無色；裏面は薄い桃色（３ａａ）；　
　可溶性色素なし。

第２巻、培地＃１１．．３２８．１９６１）−増殖中程
度、クリーム色（ＩＨｃ８）；わすかに盛り上がり、平
坦；気中菌糸体はなしからまばら、無色；裏面無色から
クリーム色（１２６α）；可溶性色素なし。

地＃２）−増殖中程度；灰色がかった白、りＩＪ−ム色
、黄色がかった色から黄色がかった褐色（２ａｌＬ、２
１６．３１Ｃ）；わずかに盛り上がり、平坦、気中菌糸
体は灰色がかった白色：裏面は黄色がかった色から黄色
がかった褐色（２ｇＧｒ　３ｔ　６）　ｓ　　可溶性色
素は薄（黄色がかった色。

ｉ？二、６９：１４７−１５０．１９５５）−増殖中程
度、褐色（３１ｇ、３１ｇ）＊　　薄いしかしすしの末
端に向かって盛り上がる、平坦、気中菌糸体なし、裏面
褐色（３１ｇ）；　　可溶性色素は黄色がかった色（２
１ｃ）。

一増殖なし カゼイン寒天（ゴートンおよびスミス、前記文献）−増
殖中程度、黄色がかった褐色から褐色（３ｓ　ｃ　＋　
３４　ａ　）　ｓわずかに盛り上がり、平坦、気中菌糸
体なし：裏面黄色がかった色から黄色がかった褐色（２
％ｅ、３１ｃ）ｐ　　可溶性色素　黄色がかった褐色（
３Ｌｅ）。

ベネット寒天（ワクスマン、前記引用文献中、培地＃３
０、ｐ、３３１）−増殖良から優秀、黄色がかった褐色
から褐色（３ｉａ、４１ｇ、３％Ｎ）：盛り上がり、ひ
だがあり：気中菌糸体、白色から灰色がかった白色、ふ
ちへ向って産生；裏面暗い褐色（３１＄　＋　３　ｓ　
ｓ　）　ｔ　　可溶性色素黄色がかった色（２ｊｃ）。

３３１）−増殖良、黄色がかった灰色（２ｓ＃＋２１９
．２％４）、盛り上がり、ひだがあり；気中菌糸体薄い
灰色（灰色系ｌＡ３４　ｃに近い）：裏面黄色がかった
灰色から緑がかった灰色（２ｓｇ、１−Ｈ％ｇ）：可溶
性色素黄色がかった褐色（３ｓｇ）。

栄養寒天（上記文献、培地＃１４、ｐ、３３０）−増殖
貧弱から中程度、黄色がかった褐色から褐色（３Ｌｅ、
３ｔｃ＊３１ｍ）、　わずかに盛り上り、平坦だがいく
つかの領域に顆粒、支流または分離されたコロニーのご
とく現れる：気中菌糸体なし：裏面黄色がかった褐色（
：Ｈｃ）；　可溶性色素なし。

ゼラチン寒天（ゴートンおよびミーム、ジャーナル　オ
プ　バクテリオロジ−７３，１５−２７，１９５７）−
増殖中程度、褐色（３ｓａ、３！＃）；中程度に盛り上
がり、平坦だがすしの末端に向ってひだとなり、気中菌
糸体なし；裏面褐色（３１ｇ）；可溶性色素なし。

デンプン寒天（上記文献）−増殖中程度、褐色（３ｓｇ
）；　　中程度に盛り上がり、平坦だが端に向ってひだ
があり；気中菌糸はなしからまばら、無色；裏面褐色（
３ｊｇ）；可溶性色素なし。

しかしただ３０？のじゃがいも、２．５２のにんしんお
よび２０９の寒天を使用）−増殖貧弱から中程度、クリ
ーム色（１２ｅα）；薄いかられずかに盛り上り、平坦
、気中菌糸体まばら、無色：裏面は無色からクリーム色
（１２ｅα）；　可溶性色素なし。

水道水寒天（２％）−増殖貧弱、無色からクリーム色（
２ｃｃ）；　薄い、平坦、気中菌糸体まばら、無色；裏
面無色；可溶性色素なし。

ガウゼ鉱物培地１（ガウゼら、”相反する放線菌の分類
における問題点”、英語版、ｐ１３．１９５７）−増殖
中程度、黄色がかった緑（ｌｓｃ）、薄い、平坦；気中
菌糸体まばら、無色；裏面薄い黄色がかった緑から黄色
がかった緑（ｌａｗ、１ｉｅ）；可溶性色素薄いクリー
ム色（１；、＋ｅＬ）。

ガウゼ鉱物培地２（上記文献）−増殖度、黄色がかった
褐色から桃色（３ｇｃ、３ｔｃ＊５ｒｔａ）、盛り上が
り、ひたあり、白色気中菌糸体；裏面黄色がかった褐色
から橙褐色（３ｇｃ、４１ａ）；　　可溶性色素なし。

形態的性質−一週間に一度七週目まで形態的性質を観察
する。培養物は無機塩−デンプン寒天な除く他のどの培
地上でも胞子を産生じなかった。

この培地上で７週インキュベートした後、胞子鎖の少量
の小さいパッチが産生される。それらは胞子鎖当り３か
ら９の胞子の短いもので、直線状、曲がりくねっている
かまたはかぎ状に湾曲している。胞子は球状、卵形から
楕円形で直径０．９−１．３μｍまたは１．０−１．６
Ｘ０．８Ｘ１．１μｍと測定された。走査型電子顕微鏡
で見るといぼ状であった。胞子に加えて、培養物はグル
コース−アスパラギン寒天、ベネット寒天、酵母エキス
−麦芽エキス寒天、無機塩−デンプン寒天およびグリセ
ロール−アスパラギン寒天上に褐色から暗褐色の菌糸の
塊も産生ずる。それらは密に互いが織り合わされた構造
で球状、半球状、楕円形、長（伸びるかまたは不規則な
形であり、直径５−２５μ惰または８−２５Ｘ７−２０
μ毒と測定された。

生化学的性質−メラニンは産生されない；硫化水素は産
生されない；ゼラチンを液化する；デンプンを加水分解
する；硝酸デキストロースプロス中で硝酸エステルは亜
硝酸エステルに還元される、しかし有機硝酸エステルブ
ロス中ではおきない；ジエンセンまたヲマレノイインお
よびシエーンラインセルロースブロスの両方ともで増殖
も分解本起きない；乳汁上で凝固および透明化：カゼイ
ン消化陽性；チロシン消化陽性。炭化水素利用ニゲルコ
ース、ラムノース、ショ糖、デンプンおよヒトレバロー
スが利用され：アラビノース、フルクトース、イノシト
ール、マンニトール、ラフィノース、キシロース、アド
ニトール、セロビオース、ズルシトール、エリスリトー
ル、ガラクトース、グリセロール、ラクトース、マルト
ース、マンノース、メレテトース、メリビオース、アル
ファーメチル−Ｄ−グルコシド、リポース、サリシン、
ソルビトールおよびソルボースは利用されない。

他の陽性試料として酢酸塩、プロピオン酸塩およびピル
ビン酸塩の利用が挙げられる。以下の試験は陰性であっ
た：アデニン、キサンチン、ヒボキサンチンおよびウレ
アーゼの分解；エスクリンおよび馬尿酸エステルの加水
分解；およびリゾチームへの低抗性。

温度との関係− ２１℃　　　２８℃　　３７℃　　　４５℃中程度の増
殖　良好な増殖　良好な増殖　　増殖なし全−細胞分析
−全一細胞加水分解物はメソ−ジアミノピメリン酸、グ
ルコース、ガラクトース、マズロースおよびリボースを
含む。

培養物Ｎ７４２−３４は白色から薄い灰色の気中菌糸体
；緑−黄、黄−褐色から褐色の下層菌糸体；短い直線状
から曲がり（ねった胞子鎖；およびいぼ状表面を持つ胞
子により特徴付けられる。

全一細胞加水分解物中におけるメソ−ジアミノピメリン
酸およびマズロースの存在は更に、それがアクテノマズ
ラ（Ａ６ｔ　ｉｎｏｍαｄｕｒａ　）属に属している事
を示している。

４０種を超えるアクチノマズラの中で５つが形態的にお
よび／または生化学性質について培養物フラバ（ｆＬａ
ｖα）の両方とも培養物Ｎ７４２−３４が行うごとくレ
モン−イエロー下層菌糸体を産生する。Ａ、フラバ＜ｆ
ｌａｖα）は長い胞子鎖および平滑表面の胞子を産生ず
るが、一方培養物Ｎ７４２−３４は短い胞子鎖およびい
ぼ状表面の胞子を形成する。培養物Ｎ７４２−３４と異
なり、Ａ、シトレア（ｃｉｔｙａａ）はアラビノース、
キシロース、マンニトールおよびフルクトースヲ利用ス
る。

、４．ＩＪビダ（ｔ　１ｖｉｄａ　）はかぎ状の形また
は一回回ったらせん状の胞子鎖を形成するが、一方培養
物Ｎ　７４２−３４は直線状または曲がりくねった胞子
鎖を形成する。オートミール寒天およびガウゼ＃１鉱物
培地上で、Ａ、リビダ（ｌｉｔｒｉｄｔＬ）は薄い紫色
の可溶性色素を産生ずるが、培養物Ｎ７４２−３４はク
リーム色の可溶性色素を産生ずる。

Ａ、クレメア（ｃｒｇｍｇａ）はアラビノース、フルク
トース、マンニトール、キシロース、アドニトール、グ
リセロール、乳酸塩およびクエン酸塩を利用し；ショ糖
およびデンプンを利用できず；およびエスクリンを分解
するという点で培養物Ｎ７４２−３４と異なる。

Ａ、マフラ（ｍａｃデα）はほとんどの生化学的性質に
ついて非常に類似している。わずかな相違点が指摘され
る。前者と異なり、後者はラムノースおよびデンプンを
利用し、デンプンを加水分解し、乳汁を凝固し、カゼイ
ンを分解する。さらに、培養物、１Ｖ７４２−３４は大
部分黄−緑、黄−褐色または褐色の下層菌糸体およびい
ぼ状表面の胞子を産生ずるがニ一方Ａ、マクラ（ｍｔｓ
　ｃ　ｒα）は大部分クリーム色または灰色の下層菌糸
体および平滑表面の胞子を産生する。

上記の事に基づ（と、培養物Ｎ７４２−３４はアクチノ
マズラ（Ａａｔｉｎｏ常ａｄｕｒａ　）属の一員と考え
られアクチノマズラ属に属する種（Ａｅ　ｔ　ｉｎｏｍ
ａ−ｄｓｒａ　ａｐ、）と名付けられた。それはアクチ
ノマズ？属に属するｉｉ　（Ａｅｔｉｆｉｏｍａｄｕｒ
ａ　ｇｐ、）　　菌株であり、アメリカン　タイプ　カ
ルチャー　コレクションに寄託番号５３６７６で寄託さ
れている。

本発明の抗生物質化合物ｍはアクチノマズラ（ＡＣｔ　
ｉｎｏｍａｄｌＬｒａ　）培養物を、約２４°から約３
６℃で深部条件下に糖、デンプン、グリセロールのごと
き炭水化物源；大豆ミール、カザミノ酸、酵母エキスの
ごとき有機窒素源；穀物可溶物、魚ミール、綿実ミール
のごとき発育物質：鉄、コバルト、銅、亜鉛その他のｔ
量元素を含む鉱物塩および炭酸またはリン酸カルシウム
ヲ緩衝剤として含む培地をかき１ぜ、通気する事により
増殖せしめると容易に産生される。増殖が完了した後、
抗生物質は全ブロスな４０から８．０のｐｆｉ範囲にし
て外−ブタノール、メチルインブチルケトンまたはクロ
ロホルムのごとき有機溶剤で抽出し；沈殿している抗生
物質を含む菌糸体を濾過して戸液は廃棄し；または全ブ
ロスな単に噴霧または凍結乾燥する事により容易に回収
される。もしくは菌糸体または全乾燥プロスを前記有機
溶剤の一つで抽出する。もし精製された抗生物質化合物
を望むなら、有機抽出物から以下に例示するごとく、濃
縮、塩または遊離酸形成、クロマトグラフィー、沈殿お
よび／または結晶化のごとき常法により単離される。

発酵過程を実施する通常の方法では、アクチノマズラ（
Ａ６　ｔ　ｉｎｏｍａｄｓｒａ　）　ｊＴ６に属する２
ｊｌＡＴＣＣ５３６７６が接種しである斜面またはルー
瓶から適した培地上で増殖している増殖力のある細胞を
かき取る事により接種物を最初に準備する。得られた増
殖力のある細胞は続いて、同様に適した増殖培地を含む
振と５フラスコまたは接種タンクに接種する。もしくは
、接種タンクは振とうフラスコから接種される。適度の
増殖期間後（例えば１２０−１９６時間）、同様に適し
た増殖培地を含む発酵器に振と５フラスコまたは接種タ
ンクからの増殖力のあるブロスを接種する。増殖が完了
したら（例えば、１２０−１９６時間）、抗生物質化合
物が粗生成物として、またはもし望むなら前に記載した
一つまたは他の一般的方法により、または以下に例示す
る特別な方法により純粋な形で回収される。

式（１）の化合物は一つまたはそれ以上の微生物に対す
る最小阻害濃度（ＭＩＣ’ｓ）　　をｍＧ？／−で測定
する常法により４ｙ　　２）ｏ抗菌活性を試験する。そ
のような方法の一つは抗生物質感度試験における国際共
同研究により推奨されている方法（エリクソンおよびシ
エリス、アクタ、パンロジカ、エ　マイクロバイオロシ
ア　スカンジナビカ、補遺２１７、Ｂ区分：　６４−６
８（１９７１））　　であり、脳心臓浸出液（ＢＨＩ）
寒天および接極反復装置を用いる。基準接種物として使
用するため終夜増殖管を１００倍に希釈する（約０．０
０２ｍ１／中の２０．０００−１０，０００個の細胞を
寒天表面に置く；２０−のＢＨＩ寒天／皿）。検定化合
物の１２の２倍希釈液を用いるが、検定薬剤の最初の濃
度は２００ｍａｆ／−としである。３７℃で１８時間後
にプレートを読む場合単一コロニーは無視する。検定微
生物の感受性（ＭＩＣ）は裸眼により判定して、完全に
増殖阻害できる化合物の最低濃度として受は入れられる
。他の多環エーテル抗生物質に類似して、式（１１の本
化合物は表（ＩＩに例示したごとく、トレポネーマ　ヒ
ョデイセンテリエ（Ｔｒｇｐｏｎｍｍａ　ｈｙｏｄｙｓ
ａｓｔｇｒｉａａ　）　　に対する活性同様にグラム陽
性抗菌活性を典型的に示した。

表　　Ｉ 鶏のひなにおける胞子虫症感染に対する式（ＩＩの化合
物およびその塩の効力データは以下の方法で得られる。

３−５の群の生後１０日の病原体を持たない白色レグホ
ンコツカレル鶏に均一に分散した化合物ｍまたはそのす
）　ＩＪウムおよび／またはカリウム塩を含むマツシュ
規定食を与える。この食料にして２４時間後、も々の鶏
に経口で試験するアイメリア（Ｅ　１ｔｎａ　ｒ　４α
）の特定の種の卵母細胞を接種する。３−５の他の群の
生後１０日の鶏には化合物（１１またはその塩を含まな
い同様のマツシュ規定食を与える。これらもまた２４時
間後に感染せしめ、感染対照群として役立つ。さらに生
後１０日の鶏の３−５の他の群には抗生物質なしのマツ
シュ規定食を与え、胞子虫症に感染させないようにする
。これらは通常の対照として役立つ。

処置の結果はＥ、アセルブリナ（ａｃｏｒｇ％ｌ　１ｓ
Ｇ）の場合は５日後、他の全てのテストでは６日後に評
価する。

抗胞子虫症枯性測定に使用する指標は、Ｅ、テネラ（ｔ
ａ％ｍＬＬａ）に対しては、Ｊ、Ｅ、リンチ（゛抗胞子
虫症活性の基本的評価の新規な方法”、た障害得点Ｏか
ら４から成り；および、他の種に対しては、Ｊ、ジョン
ソンおよび１Ｆ’−Ｉｌ、ライド（゛抗胞子虫症薬剤。

鶏における家禽小屋および床囲い中での障害得点技術”
、エクスペリメンタル　パラサイトロジー、２８．３０
−３６．１９７０）らにより考案された得点記録計の改
良に基づいた０から３である。各々処置した群の障害得
点を感染対照群の障害得点で割る事により活性を測定し
た。この検定において、化合物（Ｉ）およびその陽イオ
ン塩を鶏のひなのマツショ規定食に約２．５から５０　
ｐｐｍの水準で取り込ました場合、れた活性を示した。

家禽類における胞子虫症の予防または制御のためにを１
、本発明の化合物は適当な担体中家偶類に経口で投与さ
れる。都合が良いのは、薬物治療を飲み水または家禽類
飼料中で簡便に実施することであり、それにより薬剤の
治療に必要な用量は毎日飲む水筒たは家禽類飼料ととも
に摂取される。

薬剤は飲用水の中へ直接供給でき（好適には液体、水溶
性濃縮物）、またはそれ自体または使用前混合物または
濃縮物の形で直接飼料に添加できる。

担体と混ぜた治療薬剤の前混合物または濃縮物を飼料中
に薬剤を包含せしめるために普通に用いる。

治療薬剤は実質的に純粋な形（例えば、遊離酸、または
その医薬として適当な塩）でもよく、湿潤または乾燥繭
糸体または乾燥全ブロスのごとく分析された粗生成物の
形でもよい。適した担体は望撞れるように水、種々のミ
ールのごとき液体または固体であり：例えば大豆油ミー
ル、亜麻仁油ミール、とうもろこし穂軸ミール、および
家禽類飼料に通常使われる鉱物混合物である。特に有効
な担体は家１に類飼料それ自身である；即ち、家禽類飼
料のごく一部。担体は前混合物が混和されている仕上が
った飼料中における宿性物質の均一な分布を容易にする
。この事はと（少ない本強力薬剤の比率が必要とされる
ので重要である。化合物が前混合物続いての飼料に十分
に混和されている事が重要である。この点については、
薬剤を大豆油、とうもろこし油、綿実油およびその類似
物のごとき適当な油性媒介物または揮発性の有機溶剤中
に分散または溶解した後担体と混和せしめるのがよい。

望まれる治療薬剤の含量を得るには適当な比率の前混合
物を飼料と混和する事により最終的な飼料中の薬剤の童
をｙ４Ｉｉできるので、濃縮物中の活性物質の比率は広
範囲の変動ができる事が認められるであろう。

高度に効力のある濃縮物は飼料製造者により大豆油ミー
ルおよびその他のミールのごときタンパク質性担体と前
記のとと（して混和され、家禽類への直接の給餌に適し
た濃縮物補給品が製造される。そのような例においては
家禽類は通常の規定食をとる事が許される。もしくは、
そのような濃縮物補給品を直接家禽類飼料に添加して、
本発明の一つまたはそれ以上の化合物を治療に有効な含
量で含む栄養的に平衡のとれた最終的飼料が作られる。

混合物はトウインシエルプレンダーを用いるごとき常法
により十分に混和し、均一性を確かにする。

家禽類における使用において、本明細書に記載した化合
物の使用含量は異った環境下では変化するであろう。成
長期の間の連続的な低含量薬物処理は有効な予防法であ
る：即ち、鶏のひなの最初の５から１２週間の間。確認
された感染の処置においては、より高い含量が感染の克
服に必要とされるであろう。飼料中の化合物（■）の使
用含量は一般的に約２．５から５０　ｐｐｔｍの範囲に
、好適には約２．５から１２．５ｐｐｍの範囲になるで
あろう。飲料水中で投与する場合、−日平均消費飼料量
と一日平均消費水量の重量比で率を出し、同じ日用量の
薬物治療となるような量の含量にされるであろう。

豚または畜牛における成長促進および／または飼料利用
効率の増加についての式（１）の化合物およびその塩の
活性は動物の検定群に飼料中の化合物（１）またはその
塩を種々の含量で給餌する事により直接測定できる。し
かしながら、より便利な技術がイギリス特許出願第１，
１９７．８２６号に記載されており、それは飼料の評価
のための４ｙとトロ瘤胃法を詳述している。飼料に起こ
った変化（微生物により引き起こされると）はそれによ
り非常な正確さで容易に測定される。この技術は動物の
消化過程を実行する器具を使用し、４ｙとトロで研究さ
れる。動物飼料、瘤胃接種物および穐々の成長促進剤を
導入し、注意深く制御された条件下実験室装置から引き
出し、微生物による飼料の消費の間に起こる変化を批判
的につぎつぎに研究する。痛胃液のプロピオン酸含量の
増加は飼料組成物中の成長促進剤により引き起こされて
いる全反別動物の作業への望ましい応答を示している。

プロピオン酸含量の変化は対照瘤胃液中に観察されるプ
ロピオン酸含量のパーセントとして衣現される。長期間
の±Ｚ　ぐ°給飼研究は、反別動物（例えは畜生、羊）
または単′Ｉ４（例えば豚）のどちらにおいても瘤胃液
中のプロピオン酸の増加と改良された動物作業の間に信
頼できる相関がある事を示している。

詳しく記すと、市販の肥蓄食料および干し草で給餌して
いる４管形成した雌牛から瘤胃液を集める。瘤胃液は直
ちにチーズ布を通して濾過し、１０ｍを４００ｍ９の基
準基質（６８％とうもろこしデンプン＋１７％セルロー
ス＋１５％大豆ミール）、１０−のｐＥ６．８の緩衝液
および検定化合物を含む５０−のコニカルフラスコに加
える。フラスコに酸素を含まない窒素を約２分間供給し
、振とう水浴中３９℃にて約１６時間インキュベートす
る。すべての検定は三重に実施する。インキュベーショ
ン後５ｄの試料”ｋｌｗｔの２５％メタリン酸と混合す
る。１０分後、０．２５−のギ酸を添加し、混合物は１
５００デｊＨＩｌＫで１０分間遠心分離する。試料はり
、ｉケロングの方法により（ジャ１９６０．１９６９）
ガスクロマトグラフィーにより分析する。非処置および
処置インキュベーション　フラスコからの試料の酢酸、
プロピオン酸および酪酸のピーク高度を決定する。

このイン　ビトロ法で検定した場合、ミリリットル当り
１０マイクログラムの濃度の式（１）の化合物は、式（
Ｉ）の化合物の添加がない対照溶液において産生される
プロピオン酸より、その産生において約９７％の増加な
生ぜしめた。

畜牛または豚における成長促進および／ｌたは飼料利用
の効率の増加に使用の為には、飼料添加物として好適に
投与される。飼料は前に詳細に記載した家禽類飼料の製
造のための方法と完全に同じ方法で製造されるが、治療
薬剤が均一に分散されているかという同一の心配が飼料
の製造にある。

畜牛または豚飼料中の化合物（Ｉ）の使用水準は一般に
約０．２５から５０　ｐｐｔｎの範囲になるであろう。

反別動物においては式（Ｉ）の化合物は巨丸薬の形でも
経口投与でき、それは瘤胃網状嚢中に保持され、長時間
の期間にわたり本質的に一定の速度で治療薬剤を放出し
、（例えば４−８週間）、飼料中の前記日用量と同等の
用量を提供する、即ち： そのような制御された巨丸薬の放出の典槃的なものはカ
ージナル、米国特許第４．６０１，８９３号ノものであ
る。

本発明は以下の実施例により例示される。しかしながら
、本発明はこれらの実施例の特定の細目に限定されない
事を理解されるべきである。

実施例１゜ まず、アクテノマズラ属に属する槙（，４６ｔｉｔＬＯ
−ｍａｄｘｒａ　ａｐ、）　ＡＴＣＣ５３６７６を、以
下のごとき組成を持ち合成されるＡＴＣＣ培地第１７２
号を用い、ＡＴＣＣ５３６７６培養物を斜面またはルー
瓶上の固体培地へ接種する事により増殖せしめた。

グルコース　　　　　　　　　　　　　　　１０可溶性
デンプン　　　　　　　　　　　　　２０酵母エキス　
　　　　　　　　　　　　５力ゼイ／酵素的加水分解物
　　　　　　　　１炭酸カルシウム　　　　　　　　　
　　１一方、以下の培地の一方または他方を用い振とり
フラスコを準備する： グルコース　　　　１０　　　グルコース　　　１０粉
末大豆　　　　　１０　　　コーンスターチ　　５塩化
ナトリウム　　　５　　　塩化コバルト　　　０．００
２塩化コバル）　　　　　０．００２　　炭酸カルシウ
ム　　３炭酸カルシウム　　　１ １００ｍｌの培地を３００．ｄの振とりフラスコに加懸
濁液を接種する。１．５から２．５インチおよび一分間
当り１５０から２００回転（ＣＰＭ）の変位を持つ。振
とり器上２８℃にて５から７日間フラスコを振とりする
。

一方、以下の培地のうちの一つの培地を３リットル含む
５リツトルの発酵容器を準備するニゲルコース　　　１
０　　　グルコース　　　１０コーンスターチ　１０　
　　コーンスターチ　　５塩化コバル）　　　　０．０
０２　　炭酸カルシウム　　３炭酸カルシウム　　１ または グルコース　　　　　　　　　４５ 粉本大豆　　　　　　　　　　１０ とうもろこし浸出液　　　　　１０ 塩化コバルト　　　　　　　　　０．００２硫酸マグネ
シウム　　　　　　　０１０炭酸カルシウム　　　　　
　　　３ 硫酸マンガン　　　　　　　　　０．１０硫酸第二鉄　
　　　　　　　　　０．１０消泡剤（ポリプロビレ／グ
リコール、Ｐ２Ｏ００、ｉｔで１０％のエチレンオキサ
イドを含む、１−）を添加し、容器を密對し、１２０°
Ｃおよびｐ　、ａ　、ｔ　−にて４５分間ｆｆｆｉする
。容器に振とうフラスコ−つ分を接種しく約３％接種物
）分当り液体容量当り１空気容量の流速で空気を通気し
、分当り１７００回転（ＲＰＭ）で撹拌しながら３０℃
にて１２０から１６８時間発酵せしめる。

発酵が完了したら（枯草菌ＡＴＣＣ６６３３に対する抗
生物質ディスク検定に基づいて）発酵を中止し、中性、
Ｈでケイツク士の助けをかり戸遇する。濾過ケーキはメ
タノール中でスラリー状とし、真空下濃縮し、２−３容
量の水で希釈した後２から×各錘のメチルイソブチルケ
トンまたは算−ブタノールで２回抽出する。吸引または
遠心分離により水相から有機相を分離し、真空上泡立た
せｍ縮して式（Ｉ）の抗生物質を粗生成物の形で粘稠な
油状物として得る。

ブロスおよび続いての回収操作物の生物活性は枯草菌Ａ
ＴＣＣ６６３３または黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ６５３８
の感受性株を用いて追跡できる。

ブロスおよび回収操作物中の組成物はアナルテクシリカ
ゲルＧＦプレートを使用し、酢酸エチルを展開液として
用いる事により見えるようにする事ができる。展開した
プレートはバニリン試薬（７５ゴのエタノールに溶解し
た３１のバニリンおよび２５ゴの８５％リン酸）を噴霧
し、８０℃に加熱する。式（１）の抗生物質の生成物は
赤色スポットとして現れる。展開したｔｉｅプレートは
また黄色ブドウ球菌または枯草菌を播種しである寒天（
それには２．３．５−）ジフェ水相−２Ｈ−テトラゾリ
ウムクロリド１水相物がすでに添加しである）上にも層
状でき、抗生物質を視覚化するため３７℃で１６時間イ
ンキュベートする（桃色の背景に対し白いスポット）。

より大ぎな発酵器へのスケールアップは０．７リツトル
のＣ′　またはＪＤＹＴＴ　培地を含む振とりフラスコ
を調製する事により実施される。振とりフラスコ接ａ物
を２８℃に’（５から７日間発酵せしめ、１００リツト
ルのＵＫｌ−２培地を含む２００リットル発酵容器を接
種するのに使用する。約１リツトルの接種物をタンクに
使用する。７から１０日間発酵を進行せしめた後発酵物
を採取する。

中性ｐＨにて号容量のメチルイソブチルケト／で全ブロ
スを抽出し、デラバル分離器により分離し、最初サイク
ロン蒸留器、最終的にはロータリーエバポレーター中で
真空上溶剤を濃縮し、式（ＩＪの粗抗生物質を油状物と
して得、その全てを以下実施例２で使用する。

前の実施例の大規模発酵のすべての粗生成物はへキサン
でスラリー状とした５００？のカラム用シリカゲル上ク
ロマトグラフィーを行い、カラムは酢酸エチルで溶出す
る。溶出液はシリカゲルプレート上クロロホルム−イソ
プロパツール（９５：５）で展開し、３．３Ｘのバニリ
ンを溶解したエタノール−リン酸（２：１）で噴霧する
薄層クロマトグラフィーにより試験する。８０℃に加熱
すると目的の式（１）の抗生物質はＲｆ　０１３００所
に赤色スポットとして現れる。所望の生成物を含む分画
な真空下濃縮し、酢酸エチルで希釈して活性炭処理し濾
過する。濾過の溶媒は最初にり／酸と次にナトリウムリ
ン酸二塩基緩衝液と振とうし、ナトリウム塩を形成せし
める。硫酸ナトリウムで乾燥後、溶剤を濃縮した後へブ
タンの添加により抗生物質化合物が結晶化し、９５０■
の白色固体を得る。１００ｖの３２−６３ミクロンのシ
リカゲルカラムを用い、９５：５から５０　：　５０ク
ロロホルム−酢酸エチルのグラジェントを用いるフラッ
シュクロマトグラフィーにより更なる精製が達成される
。生成物は７０　：　３０クロロホルム−酢酸エチルで
溶出され、８５２■の精製された生成物が続いての真空
下での溶媒の留去により得られる；惰、ｐ、１７５−１
７７℃；〔アルファ〕Ｌ５−＋１２．８６（ｃ＝１　、
メタノール） 元素分析：　Ｃ，、Ｈ，，０，７Ｎａ　、Ｈ２Ｏとして
計算値：（１；’、５９．７５；Ｈ，８−６７実測値：
Ｃ，５９，４７：Ｈ，８，５４゜Ｃ−１３５ｔａｒ（Ｃ
Ｉ）ＣＬ、　　中の化学シフト（ｐｐｙ＋ｓ）、かっこ
内に結合している水素の数が示しである）：１８０．８
（０）、１０６．７（０）、９９．６（０）、９８．４
　（０）、９６．６（１）、９４．７（１）、８８．８
（１）、８４．７（１）、８３．４（１）、８３．３（
０１，８０，３（０）、８０．３（１）、８０．３　（
ＩＪ、７９．８（１）、７９．３（１１，７９，１（１
）、　７４．３　（１）、７４．０（１）、６７．５　
（１１，６１７（３）、６１．６（１）、６０．２　（
３）、５９．９（３）、５８．９（３）、５６．８＋３
１．４６．３（１１，４６，１（１）、　　４５．５（
１）、　４０．７（１）、　　３９．４（１３、３６，
９（ＩＪ　、３２、５　（２１，３１，９（２１，３１
，１（２１，２９，２（２１，２８，４（３）、２７．
７（２Ｊ、２６．６（３）、２５．６（２）、２４−２
（２３，２３，０＋２）、１８−５（３）、１３．１（
３１，１２，７（３）、１２．５（３）、１２．０（３
１，１１，５（３Ｊ、１１．５（３）および１０．０（
３）。

ナトリウム塩のクロロホルム溶液を分液ロート中当量の
塩酸とｐＨ２で激しく振とりする事により抗生物質化合
物（Ｉ）の遊離酸型が合成される。相を分離し、クロロ
ホルム層を水で洗浄し、真壁下溶媒を留去すると遊離酸
を得る：　ｍ、１．　９５−１０２℃：〔アルファ）　
２５−＋ｚｏ、２＠（ｃ　−１、メタノール）； 元素分析”　ＣｄＨｋ”１７−馬Ｏとして計算値：Ｃ，
６１，１０：＃、９．００実測値：Ｃ，６１，５３；Ｈ
，９，３１す）　ＩＪウム塩への再変換には遊離ｆＲ（
元のナトリウム塩２．６１から）を５００威のクロロホ
ルムに溶解する。５００１０ｇ、ｏに溶解したＡ’　ａ
ｔＣＯｓ（１２）を添加し、得られる混合物は分液ロー
ト内で数分間激しく振とつする。ｔＩ２０層を分離し、
新しいクロロホルムで洗浄する。合併した有機相を乾燥
し真空上蒸発乾固せしめると２．１２のナトリウム塩を
得る。スペクトルの性質および分析データは前記の発酵
により直接得られたす）　ＩＪウム塩で観察されたもの
と同一であった。

式（１）の抗生物質のルビジウム塩の合成には、遊離酸
（１００１ｎ９）を１００ゴのクロロホルムに溶解する
。クロロホルムに炭酸ルビジウム（１５０■を１００Ｎ
の水に溶解）を加え、混合物は分液ロート内で約５分間
激しく振とつする。有機相を分離し、水で一回抽出し、
蒸発乾固せしめると白色固体を得る。ジエチルエーテル
からのゆっくりした蒸留によりルビジウム塩を再結晶し
、Ｘ線構造は得られた結晶を用いＪ、ポルドナー博士に
より決定された。

式（１）の抗生物質のカリタム塩の会成には、２２９■
の遊離酸を１００Ｎのクロロホルムに溶解する。

１００１１１ノ１１．０に溶解したｘ、ｃｏ、　（７５
Ｉｎ９）を加え、得られる混合物は１５分間撹拌し、続
いて分液ロートく移し、数分間激しく振とりする。有機
相を分離し、真空上蒸発乾固せしめると２２４１Ｒ９の
化合物（１）をカリウム塩として得る：　ｍ、ｐ、１７
５−１７９℃；　（７ルア　７　）　Ｘ５−＋１３．８
　＠（ｃ−１−メタノール）； 元素分析；　Ｃ４９Ｈ８，０，、に、Ｈ，０として計算
値：Ｃ，５８，７８：Ｒ，８，５６実測値：Ｃ，５９，
１７；Ｈ，８，８９（外４名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、絶対立体化学式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｍ＿６はＣＨ＿５である。） の化合物、またはその医薬として適当な陽イオン塩。 ２、ナトリウムまたはカリウム塩の形の特許請求の範囲
   第１項記載の化合物。 ３、特許請求の範囲第１項記載の化合物の製造方法であ
   って、同化可能な炭素および窒素源を含む水性栄養培地
   中、深部好気的条件下、前記化合物が回収可能な量生成
   するまで￥アクチノマズラ￥種（￥Ａｃｔｉｎｏｍａｄ
   ｕｒａ￥ｓｐ、）ＡＴＣＣ　５３６７６を発酵せしめる
   ことからなる方法。 ４、前記化合物が発酵培地から分離される特許請求の範
   囲第３項記載の方法。 ５、発酵培地の濾過により前記化合物が沈殿の形で菌糸
   体からなる混合物として回収される特許請求の範囲第３
   項記載の方法。 ６、全発酵培地の噴霧−または凍結−乾燥により、前記
   化合物が粗生成物の形で回収される特許請求の範囲第３
   項記載の方法。 ７、畜牛または豚のための栄養飼料組成物であって、前
   記畜牛または豚の成長の促進および／または飼料利用効
   率の改良に有効な量の特許請求の範囲第１項記載の化合
   物を含む組成物。 ８、豚または畜牛において成長促進および／または飼料
   利用効率を増進せしめる方法であって、前記豚または畜
   牛に成長促進または飼料利用効率促進量の特許請求の範
   囲第１項記載の化合物を投与することからなる方法。 ９、化合物が栄養飼料組成物の形で投与される特許請求
   の範囲第８項記載の方法。 １０、家禽類のための栄養飼料組成物であって、前記家
   禽類における胞子虫症感染を制御するのに有効量の特許
   請求の範囲第１項記載の化合物を含む組成物。 １１、家禽類における胞子虫症感染を制御する方法であ
   って、前記家禽類に抗胞子虫症有効量の特許請求の範囲
   第１項記載の化合物を投与することからなる方法。 １２、化合物が前記家禽類に栄養飼料組成物の形で投与
   される特許請求の範囲第１１項記載の方法。 １３、￥アクチノマズラ￥属に属する種（￥Ａｃｔｉｎ
   ｏｍａｄｕｒａ￥　ｓｐ．）ΛＴＣＣ　５３６７６の生
   物学的に純粋な培養物であって、前記培養物は同化可能
   な炭素および窒素源を含む水性栄養培地中の発酵により
   回収可能な量の特許請求の範囲第１項記載の化合物を産
   生できるもの。 １４、凍結乾燥された形の特許請求の範囲第１３項記載
   の培養物。 １５、￥アクチノマズラ￥属に属する種（￥Ａｃｔｉｎ
   ｏｍａｄｕｒａ￥　ｓｐ．）ＡＴＣＣ　５３６７６。