JPH01240196A - 新規グリコペプチド系抗生物質ｐａ−４５０５２ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 イ、産業上の利用分野 本発明は式； またはＨ；　Ｒ，はａ（３またはＨを表わす。）で表わ
される抗生物質ＰＡ−４５０５２とそれらの製薬上許容
される塩、その製造方法、その産生菌、ならびにＰＡ−
４５０５２を有効成分とする動物用生長促進剤に関する
。

口、従来の技術 最近の抗生物質の汎用に伴い、多剤耐性菌特にメチシリ
ン耐性菌の出現が問題となってきている。メチシリン耐
性菌とは、単にメチシリンに対して耐性を示すだけでは
なく、アミノグリコシド系抗生物質、テトラサイクリン
系抗生物質、セフェム系抗生物質、ペニシリン系抗生物
質、カルバペネム系抗生物質、マクロライド系抗生物質
なと多くの抗生物質に対して耐性である。

このメチシリン耐性菌に対してグリコペプチド系抗生物
質特にバンコマイシン系抗生物質が活性を示すことが注
目されている（アンチマイクロバイアル・エージェント
・アンド・ケモセラピー（ＡＮ’ｆＩＭＩＣＲＯＢＩＡ
Ｌ　ＡＧＥＮＩ　ＡＮＤ　ＣＨＥＭＯＩＨＥＲＡＰＹ）
輩、６６０−６６２　（１９８５）　）。バンコマイシ
ンは古くから知られている抗生物質（特公昭３３−８４
５０）であり、また、新たなバンコマイシン類縁体も発
見されてきた（アンチマイクロバイアル・エージェント
・アンド・ケモセラピ−＜ＡＮＴＩＭＩＣＲＯＢＩＡＬ
　ＡＧＥＮＴ　ＡＮＤ　ＣＨＥＭＯＴＨＥＲＡＰＹ）　
２８，６６０−６６２　（１９８５）、ザ・ジャーナル
・才プ・アンチバイオティクス（ｒＨＥＪＯＵＲＮＡＬ
　ＯＦ　ＡＮＴＩＢＩＯＴＩＣ５）　３７．４４６−４
５３　（１９８４）、邦、　１−８　（１９８５）、隈
、　５１−５７　（１９８５）、特開昭６０−１３９６
２３．６０−１９９３９７．６ｏ−２３１６９８，６０
−２３７０９９、など）、また本発明者等は先にノカル
デイア属に属する菌株が強い抗菌活性を有するバンコマ
イシン系抗生物質ＰＡ−４２８６７−ＡおよびＰＡ−４
２８６７−Ｂを産生ずることを見出しく特願昭６ｌ−１
４３８９）、さらにその誘導体も創製した（特願昭６ｌ
−１８８８６５）。

しかし、本発明の抗生物質ＰＡ−４５０５２は以上の化
合物とは一致しない、全く新規な構造を有するバンコマ
イシン系抗生物質である。

従来より、数多くのバンコマイシンおよびその誘導体が
知られており、これらを動物に投与することによりその
生長を促進することができることも良く知られていた（
例えば、特開昭５７−１２９６９３、特開昭５９−２１
３３９４、特開昭５９−２１３３９５、特表昭６１−５
０２３３５、特開昭６１−１２２３００、特開昭６２−
１２６９７０、特開昭６０−１９９３９７、特開昭６０
−２３７０９９、特開昭６０−２３１６９８、特開昭６
１−２５１６９９、米国特許４５５８０３６、米国特許
４５３７７７０、欧州公開特許１１９５７５など）。ま
た、現在、動物用生長促進剤としてチオペブチンなどが
市販されている。

ハ０発明が解決しようとする課題 現在メチンリン耐性菌による感染症が臨床上で重大な問
題となりつつあり、グリコペプチド系抗生物質、特にバ
ンコマイシ系抗生物質が有効であると考えられている０
本発明は、そのような活性を有する新規なバンコマイシ
ン系抗生物質を提供することにあり、医薬の充実に大い
に貢献するものと思われる。また、本発明の化合物は高
い生長促進作用を有しており動物薬としても有用である
。

ニ０課題を解決するための手段 本発明者らは、ノカルデイア属に属する菌株が式； またはＨ：Ｒ，は０１．またはＨを表わす。）で示され
る、強い抗菌活性を有する化合物を産生することを見出
し、式中Ｒが Ｒ１がＨである化合物をＰＡ−４５０５２−Ａ、式中Ｒ
が０）Ｉ Ｒ７がＨである化合物をＰＡ−４５０５２−Ｂ、式中Ｒ
が）Ｉ、　Ｒ。

がＨである化合物をＰＡ−４５０５２−Ｃ，式中ＲがＲ
２がＣＨ，である化合物をＰＡ−４５０５２−Ｄ、式中
ＲがＨ Ｒ，がＣＨ，である化合物をＰＡ−４５０５２−Ｅ、式
中ＲがＨ５Ｒ１がＣＨｓである化合物をＰＡ−４５０５
２−Ｆと命名した。

本発明はこれらの化合物だけでなく、その製薬上許容さ
れる塩も包含する。なお、本明細書中で言うＰＡ−４５
０５２とは、主に上記の６化合物のうちのいずれか１つ
を意味するが、場合により全ての化合物を指す。

以下に本発明の化合物の物理化学的性状を示す。なお、
ＰＡ−４５０５２−Ａ（ＨＣＩ）、ＰＡ−４５０５２−
Ｂ（ＨＣＩ）、ＰＡ−４５０５２−Ｃ（ＨＣＩ）、ＰＡ
−４５０５２−Ｄ（ＨＣＩ）、ＰＡ−４５０５２−Ｅ（
ＨＣＩ）、ＰＡ−４５０５２−Ｆ（ＨＣＩ）はそれぞれ
塩酸塩であることを示す。

・物理化学的性質 紫外吸収スペクトル ＰＡ−４５０５２−Ａ（ＨＣＩ＞ λ０°０１ＮＨｃ１ｎｍ（Ｉ１４Ｈ−：　２８１．０　
（３６，４）ｍａｘ Ａ　’　”ＮＮａ０”８ｑｎｍ（Ｅ　’　）：　３０１
．８　（４０，４＞ｍａｘ　　　　　　　　１ｃｍ ＰＡ−４５０５２−Ｂ（ＨＣＩ＞ λ’　０１ＮＨｃ１ｎｍ（Ｅ　ｊＨｌ、ｌ）’　２８１
．２　（４１，１）ｍａｘ （以下余白） ＰＡ−４５０５２−Ｅ（ＨＣＩ） ［α　］２５°：　−５９，９±１．９°　　（ｃ・ｏ
、５２、　水）ＰＡ−４５０５２−Ｄ（ＨＣＩ） ［α］２５°：　−８６，１±２．５”　（ｃ・ｏ、５
０３、水）ＰＡ−４５０５２−Ｅ（ＨＣｌン ［αコ２５°：　　−７１，２±２．１＠　（ｃ＝０．
５２、　水）赤外吸収スペクトルＩＲ（ＫＢｒ）　ａｍ
−’（第１図参照）ＰＡ−４５０５２−Ａ（）ＩｃＩ） ３４１２、　　１６５８．　　　ｔ５ｇ９（ｓｂン、　
　　１５０６．　　１４２４．　　１３９７゜１３３６
、１２３２．１１３３．１０６５．１０１９．９０２．
８４３ＰＡ−４５０５２−Ｂ（ＨＣＩ） ３３９２、１６６５．１５８９（ｓｈ）、　１５０５．
１４２３．１４００゜１３３２、１２３１．１１３２．
１０６４．１０１５．８９２．８４８ＰＡ−４５０５２
−Ｃ（ＨＣｌ＞ ３３９２、１６６５．１６２４（ｓｈ）、　１６０３（
ｓｈ）、　１５１５゜１５０１（ｓｈ）、　１４３０．
１３９９．１２３３．１１３３．１０６０゜１００２、
８８９．８４８ ＰＡ−４５０５２−Ｄ（ＨＣＩ） ３４１２、　１６５５．　１５８ｇ、　　１５０４．　
１４２０．　１３９６．　１２２７゜１１３０、　１０
６２．　１０２５．　１０１４．　９９８．　９００Ｐ
Ａ−４５０５２−Ｅ（ＨＣｌ） ３４００、　１６５４．　１５８７．　１５０７．　１
４８９（ｓｂ）、　　１４２０゜１３９５、　１２２８
．　１１３０．　１０６２．　１０２６．　１０１４．
　１０００ＰＡ−４５０５２−Ｆ（ＨＣＩ） ３４００、　１６８７．　１６２２（ｓｈ）、　　１５
９５（ｓｈ）、　　１５１８゜１４９１（ｓｈ）、　　
　１４３１．　　１３９ｇ、　　　１２３３．　　１１
３３．　　１０６１゜１（１１５，９９９ 質量分析（５ＩＭ５）　＜第２図参照）ＰＡ−４５０５
２−Ａ（Ｆｒｅｅ）　　１５９１　（Ｗ＋Ｈ）”ＰＡ−
４５０５２−Ｂ（Ｆｒｅｅ）　　１４４８　（Ｍ＋Ｈ）
”ＰＡ−４５０５２−Ｃ（ＨＣＩ）　　１２８６　（Ｍ
＋Ｈ）”ＰＡ−４５０５２−Ｄ（ＨＣｌ）　　　１６０
５　（Ｍ＋Ｈ）”ＰＡ−４５０５２−Ｅ（ＨＣＩ）　　
　１４６２　（Ｍ＋Ｈ）”ＰＡ−４５０５２−Ｆ（ＨＣ
Ｉ）　　　１３００　（Ｍ＋Ｈ）”元素分析 ＰＡ−４５０５２−Ａ（ＨＣＩ） Ｃｙ＋ＨｓｓＯ＊ｓＮ＋ｏＣ１＊・３／２ＨＣ１・８Ｈ
＊Ｏとして理論値（に）：Ｃ；４８．９５．　Ｈ；５．
９４．　Ｎ；７．８２．　Ｃ１；６．９３実驕値（″）
：）：Ｃ；４９．０１．　Ｈ；５．８２．　Ｎ；７．９
８．　Ｃ１ニア、２９ＰＡ〜４５０５２−Ｂ（ＨＣＩ） Ｃａ＊ＨｔｉＯ＋ａＮｓＣ１＊’ＨＣ１’５Ｈ＊Ｏトシ
テ理論（ａｍ：Ｃ；５０．２１．　ｕ；ｓ、ａｓ、　Ｎ
；７．９８．　Ｃ１；６．７４実験値（Ｘ＞：Ｃ：５０
．３８．　Ｈ：５．６０．　Ｎ１．１３．　Ｃ１；６．
７５ＰＡ−４５０５２−Ｃ（ＨＣＩ） Ｃ６゜ＨａｉＯ＋　５Ｎｓｃ１ｔ・２ＨＣ１・６Ｈ９０
として理論値（Ｘ）：Ｃ；４９．０９．　ｕ；ｓ、４ｚ
、　Ｎ１．５９．　Ｃ１；９．６６実験値ｍ：ｃ；４９
．１４．　Ｈ：５．４９．　Ｎ１．７６、　Ｃ１；９．
８８ＰＡ−４５０５２−Ｄ（ＨＣＩ＞ Ｃｙ＝Ｈ−ａｏ＋ｓＮ＋−Ｃ１ａ・２ＨＣ１・１０Ｈ，
Ｏとして理論値＜Ｘ’）：Ｃ：４７．８０．　Ｈ：６．
０７．　Ｎ；７．５３．　Ｃ１；７．６３実験値（Ｘ）
：Ｃ；４７．６２．　Ｈｌ、ＯＯ，Ｎ；７．５０．　Ｃ
１；７．５３ＰＡ−４５０５２−Ｅ（ＨＣＩ） Ｃｇ　ｙＨｔ　？Ｏ！　ａＮｓｃ１１２ＨＣ１・８Ｈ８
０として理論値ｍ：ｃ；４７．８９．１（；５．７０．
　Ｎ；７．５０．　Ｃ１；８．４４実験値＜％’）：Ｃ
：４７’、７９．　Ｈ；５．４６．　Ｎ；７．８０．　
Ｃ１１，４７核磁気共鳴スペクトル ’Ｈ−ＮＭＲ［４００ＭＨｚ、　ｄｓ−ＤＭ５０　（ｉ
ｎｔｅｒｎａｌ　ＴＭＳ）］（ｐｐｍ）　　（第３図参
ＷＡ） ＰＡ−４５０５２−Ａ　（ｆｒｅｅ）　［ｔｅｍｐ、　
６０℃］８．４５　（ｂｒ−ｄ、　　−５）、　　８．
２９　（ｄ、　　〜６．２＞、　　８．０７　（ｄ。

７．５＞、　　７．８９　（ｓ−１ｉｋｅ）、　　７．
７８（ｂｒ）、　　７．４９　（ｂｒ−ｄ。

−８，５＞、　　７．３６　（ｓ−１ｉｋｅ）、　　７
．３６　（ｂｒ−ｄ、　　〜８）、　　７．２６　（ｂ
ｒ−ｄ、　　〜８）、　　７．２５　（ｄ、　　８．５
）、　　７．１４　（ｓ−１ｉｋｅ＞、　　６．７７　
（ｂｒ−ｄ、　　〜８．５＞、　　６．７０　（ｄ、　
　８．５）、　　６．５９（ｄ、　　〜７）、　　６．
４０　（ｓ−１ｉｋｅ）、　　６．３４　（ｓ−１ｉｋ
ｅ）、　　６．１３　（ｂｒ）、　　５．６９　　（ｂ
ｒ−ｄ、　　〜７．５）、　　５．６９　（ｓ−１ｉｋ
ｅ）。

５．６５　（ｄ、　　７．５＞、　　５．３４　（ｂｒ
）、　　５．１９　（ｓ−１ｉｋｅ＞。

５．１９　（ｓ−１ｉｋｅ）、　　５．１４　（ｄ、　
　〜３．５）、　　４．８１　　（ｂｒ）。

４．６９　（ｂｒ）、　　４．４８　（ｂｒ）、　　４
．４５　（ｄ、　　６．２）、　　４．３６（ｂｒ−ｍ
）、　　４．２２　（ｂｒ）、　　４．１４　（ｑｄ、
　　〜６．　９．５）、　　３．７４（ｂｒ−ｄ）、　
　３．６７　（ｔ−１ｉｋｅ、　　ｄｄ、　　７．５．
　９）、　　３．６７（ｂｒ−ｍ）、　　３．２９　（
ｍ＞、　　２．９９　　（ｂｒ−ｄ、　　９．５）、　
　２゜９６（ｂｒ−ｄ、　　〜９．５）、　　２．４７
　　（ｂｒ）、　　２．３１　　（ｓ）、　　２．１６
　　（ｄｄ、１６．　〜７）、　　１．９５　（ｂｒ−
ｄ、　　１３．５＞、　　１．８８　（ｂｒ−ｄ。

〜Ｌ３．５）、　　１．７４　（ｍ）、　　１．６６　
（ｂｒ）、　　１．６５　（ｂｒ）、　　１゜４９（ｍ
）、　　１．４２　（ｆｆｌ）、　　１．２１　　（！
ｌ）、　　１．１８　（ｄ、　　〜６）。

１．１７　（ｓ）、　　１．０９　（ｄ、　　６）、　
　０．９１　　（ｄ、　　６．７）、　　０．８７（ｄ
、　　６．７） ＰＡ−４５０５２−Ｂ　　（ｆｒｅｅ）　　［ｔｅｍｐ
、　　１００℃コ８．４０　　（ｂｒ）、　　８．２９
　　（ｄ、　　６．５）、　　８．０４　　（ｄ、　　
８．５）。

７．８８　　（ｄ、　　１．８＞、　　７．５２　　（
ｄｄ、　　８．４．　〜２）、　　７．４０　　（ｂｒ
−ｓ−１ｉｋｅ＞、　　７．３４　　（ｂｒ−ｄ、　　
８．４）、　　７．２７　　（ｄ、　　　８４）、　　
７．２３　　（ｂｒ）、　　７．１５　　（ｄ、　　２
．２）、　　６．８０　　（ｄｄ、　　８゜４、　２．
２）、　　６．７１　　（ｄ、　　８．４＞、　　６．
４５　（ｂｒ）、　　６．３９（ｄ、　　２．２）、　
　６．３８　　（ｄ、　　２．２＞、　　５．９６　（
ｂｒ−ｄ、　　〜１１）。

５．７３　　（ｓ−１ｉｋｅ）、５．７１　　（ｂｒ−
ｄ、　　〜８．５＞、　　５．３６（ｄ、７．４）、　
　５．２３　　（ｓ−１ｉｋｅ）、　　５．２０　　（
ｓ−１ｉｋｅ）、　　５．１４　　（ｄ、４．０）、　
　４．７６　　（ｄ、　　４．０＞、　　４．６７　　
（ｄ、　　４．２）。

４．５２（ｄ、　　６．５）、　　４．５０　　（ｄ、
　　〜６．５）、　　４．３５　（ｂｒ−ｍ）。

４．２３（ｂｒ−ｄ、　　−１１）、　　３．７１　　
（ｄ−１ｉｋｅ、　　１１．５）、　　３．６２　　（
ｑ−ｄ、　　　６．０．　　９．７＞、　　　３．５５
　　（ｄｄ、　　　１１．乳　　４５）。

３．４４　　（ｔ−１ｉｋｅ）、３．１３　　（ｔ−１
ｉｋｅ）、３．１　　（ｍ）、２．８６　　（ｄ、９．
７）、　　２．５５　　（ｄｄ、　　１６．　７．２）
、　　２．３２　　（ｓ）。

２．１７　　（ｄｄ、　　１６．　７．２＞、　　１．
９０　　（ｂｒ−ｄ、　　１３．５＞、　　１．７７　
　（ｍ）、１．６１　　（ｄｄ、　　１３．５．　４．
２）、　　１．５２　＜ｍ）、　　１．４２（ｍ）、　
　１．１７　　（ｄ、　　６．０）、　　１．１３　　
（ｓ）、　　０．９２　　（ｄ、　　６゜５）、　　０
．８９　（ｄ、　　６．５）ＰＡ−４５０５２−Ｃ（Ｈ
ＣＩ）　　［ｔｅｍｐ、　　１００℃コ８．６３　　（
ｂｒ）、　　８．３７　　（ｄ、　　５．８）、　　７
．９６　　（ｂｒ−ｄ、　　〜８゜５）、　　７．８０
　　（ｂｒ）、　　７．５９　（ｂｒ−ｄ、　　〜８．
５＞、　　７．３６（ｂｒ）、　　７．３３　（ｂｒ）
、　　７．３０　（ｂｒ）、　　７．１９　（ｂｒ）。

７．１８　　（ｂｒ−ｓ−１ｉｋｅ）、　　６．８４　
　（ｂｒ−ｄ−１ｉｋｅ、　　〜８．５）。

６．５７　（ｄ、　　〜８．５＞、　　６．４３　（ｄ
、　　２．３＞、　　６．３３　（ｄ。

２．３＞、　　５．６２　（ｓ−１ｉｋｅ）、　　５．
５７　（ｂｒ）、　　５．２３（ｓ−１ｉｋｅ）、　　
５．２１　　（ｂｒ）、　　５．１８　　（ｓ−１ｉｋ
ｅ）、　　４．８７（ｂｒ）、　　　４．７６　　（ｄ
、　　　４．０＞、　　　４．５７　　（ｄ、　　５．
８＞、　　　４．５０（ｄ、　　５．８）、　　４．２
７　（ｄ、　　１２．０＞、　　３．６３　（ｑ−ｄ、
　　６．１゜９．５＞、　３．２８　（ｂｒ−ｄ、　〜
９．７）、　２．５１　（不明）、　２．３９（ｓ）、
　２．２５　（不明）、　１．７７　（ｍ）、　１５１
　（ｍ）。

１．４９　　（ｍ）、　　　１．４８（ｂｒ）、　　　
１．２３　　（ｄ、　　　６．１）、　　　０．９２（
ｄ、　　６．５）、　　０．９０　（ｄ、　　６．５）
ＰＡ＝４５０５２−Ｄ　　（ＨＣｌ）　　［ｔｅｍｐ、
　　１００℃コ８．３１２　（ｂｒ−ｄ、　　４．３）
、　　８．２８３　（ｄ、　　６．４）、　　７．８８
４（ｂｒ−ｄ、　　９．０）、　　７．８７４　（ｄ、
　　１．５）、　　７．５０８　（ｂｒ−ｄ。

８．８）、　　７．４６６　（ｂｒ−ｄ、　　８．８＞
、　　７．３３８　（ｄ、　　８．４＞。

７．３２７　　（ｂｒ−ｓ）、　　７．２３　（ｂｒ−
ｄ、　　８．２）、　　７．２２５　（ｄ。

８．４）、　　７．１５３　（ｄ、　　２．０）、　　
６．７９５　（ｄ、　　ｄ、　　２．０．　８゜４＞、
　６．７１１　（ｄ、　８．４）、　６．６４６　（ｂ
ｒ−ｄ、　７．０＞、　６．３７５　（ｓ−１ｉｋｅ）
、　　５．９５０　（ｂｒ−４，〜１０）、　　５．７
０　（ｂｒ−ｓ）、　　５．６６７　（ｄ、　　７．５
）、　　５．６４２　（ｂｒ−ｄ、　　８．０）、　　
５．３２８　（ｄ、　　４．５）、　　５．２１８　（
ｂｒ−ｓ）、　　５．１９３　（ｂｒ−ｓ）。

５．１７２　（ｄ、　　４．０）、　　４．８３１　　
（ｄ、　　ｄ、　　４．０．　９．０）、　　４゜６６
７　（ｄ、　　４．２＞、　　４．５２２　（ｄ、　　
６．４＞、　　４．５０６　（ｄ、　　６０）、　　４
．４１１　　（ｂｒ−ｍ＞、　　４．２３６　（ｂｒ−
ｄ、　　８．２）、　　４．１３１（ｑ、　　ｄ、　　
６．８．　９．５）、　　３．７３２　（ｂｒ−ｄ、　
　１０．２）、　　３．７０８　（ｂｒ−ｔ、　　８．
０）、　　３．６０７　（ｍ）、　　２．９１３　（ｂ
ｒ−ｄ、　　９６）、　　２．８６５　（ｂｒ−ｄ、　
　９．６）、　　２．４１９　（ｄ、　　ｄ、　　６．
２．　１５．９）、　　２．３１５　（ｓ）、　　２．
１７３　（ｄ、　　ｄ、　　６．５．　１５．９）−１
，８８６（ｂｒ−ｄ、　　〜１３．５）、　　１．８６
３　　（ｂｒ−ｄ、　　−１３，５＞。

１．３８　　（ｍ）、　　１．１８５　　（ｓ）、　　
１．１６５　　（ｄ、　　６．５＞、　　１．１４０（
ｓ）、　　１．０９４　　（ｄ、　　６．０）、　　０
．８７８　（ｄ、　　６．７）薄層クロマトグラフィー メルク　プリコーテッドＴＬＣプレート　シリカゲル６
０Ｆ２５４ 展開溶媒 クロロホルム：メタノール：濃アンモニア水：二級ブタ
ノール：水（５：　１０　：　５　：　５　：　２’）
ＰＡ−４５０５２−Ａ（ＨＣＩ）　　Ｒｆ＝０．２２Ｐ
Ａ−４５０５２−Ｂ（ＨＣＩ）　　Ｒｆ＝０．２２ＰＡ
−４５０５２−Ｃ（ＨＣＩ）　　　Ｒｆ＝０．２６高速
液体クロマトグラフイー カラム：コスモシル５Ｐｈ　ｄｒ　４．６　Ｘ　Ｌ５Ｑ
　ｍｍ（半井化学薬品株式会社） 検出：　ＵＶ　２２０　ｎｍ　　　流速：　１　ｍｌ／
ｍｉｎ。

動相：１０ｚアセトニトリル−０，０５Ｍリン酸バッフ
ァー（ｐＨ３，５） ＰＡ−４５０５２−Ａ（ＨＣＩ　） 保持時間：　４．１　ｍｉｎ。

ＰＡ−４５０５２−Ｂ（ＨＣＩ） 保持時間：９゜２　ｍｉｎ。

ＰＡ−４５０５２−Ｄ（ＨＣＩ　） 保持時間：　６．２２　ｍｉｎ。

ＰＡ−４５０５２−Ｅ（ＨＣＩ） 保持時間：　１３．６７　ｍｉｎ ：１７ｚアセトニトリルー０．０５Ｍリン酸バッファー
（ｐＨ３，５） ＰＡ−４５０５２−Ｃ（ＨＣＩ） 保持時間：　８．８　ｍｉｎ。

ＰＡ−４５０５２−Ｆ（ＨＣＩ　＞ 保持時間：　７．９３　ｍｉｎ。

カラム：ヌクレオシル５Ｃ８ −４，６ｘ　１５０　ｍｍ　（ケムコ社）検出：　ＵＶ
　２２０　ｎｍ　　　流速：　１　ｍｌ／ｍｉｎ動相：
１０ｚアセトニトリル−０，０５Ｍリン酸バッファー（
ｐＨ３，５＞ ＰＡ−４５０５２−Ａ（ＨＣＩ　） 保持時間：　５．６　ｍｉｎ。

ＰＡ−４５０５２−Ｂ（ＨＣＩ） 保持時間：８．８ｍ１ｎ ＝１７ｚアセトニトリルー０．０５Ｍリン酸バッファー
（ｐＨ３，５） ＰＡ−４５０５２−Ｃ（ＨＣＩ　＞ 保持時間：　７．６　ｍｉｎ。

呈色反応：ニンヒドリン陽性 溶解性：水、ジメチルスルホキシドに可溶、メタノール
、エタノールに難溶、エーテル、ベンゼン、クロロホル
ム、酢酸エチルに不溶 性質二両性物質、白色非結晶粉末 以上の物理化学的性状から、本発明の化合物ＰＡ−４５
０５２は以下の立体構造を有するものと推定きれた。

（以下余白） Ｒ，はα、またはＨを表わす、） 以上のようにＰＡ−４５０５２は公知のグリコペプチド
系抗生物質とは異なる性状を有しており、新規グリコペ
プチド系抗生物質であると判断される。

ＰＡ−４５０５２の産生菌としては、−土壌試料から分
離されたＰＡ−４５０５２株が挙げられる。本菌株は分
類学的検討結果からノカルデイア・オリエンタリス（Ｎ
ｏｃａｒｄｉａ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）と同種である
と同定きれ、昭和６２年３月２６日から茨城基つくば南
東１丁目１番３号の微生物工業技衛研究所にノカルデイ
ア・オリエンタリスＰＡ−４５０５２（Ｎｏｃａｒｄｉ
ａｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　ＰＡ−４５０５２＞、微工研
条寄第１３２０号（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−１３２０）とし
て寄託されている。なお、本明細書でいうＰＡ−４５０
５２産生菌とは、ＰＡ−４５０５２−Ａ、−Ｂ、−Ｃ１
−Ｄ、　−Ｅおよび−Ｆのうち少なくとも１種の化合物
を産生ずる菌株をいう。

本菌株の菌学的性状は次に示す通りである。

（１）形態学的性状 本菌株はイースト麦芽寒天、チロシン寒天、ペンネット
寒天培地等で良好な成育を示し、気菌糸を良好に着生し
、胞子形成も豊富である０分枝は単純分枝で輪生技は見
られない。気菌糸は比較的長く伸長し、その先端は直状
ないし波状である。

電子顕微鏡による観察の結果、胞子は長円筒形でその大
きさは巾０．３〜０．５μｍ１長き１．２〜１．８μｍ
であり、その表面構造は平滑（Ｓｍｏｏｔｈ　ｔｙｐｅ
）である、胞子のう、鞭毛胞子、菌核はいずれも認めら
れない。

（以下余白） （２）培養上の諸性状（２８℃、１４日間培養）色名の
表示は１色の標準Ｊ（日本色彩研究新版）による。

生育温度（ペンネット寒天培地、各温度で１４日間培養
） １０°Ｃ：成育せず ２８°Ｃ：生育、気中菌糸形成、胞子着生いずれも良好 ３７°Ｃ：成育は良好、わずかに気菌糸を形成４５℃：
生育せず （３）生理学的諸性状（２８°Ｃ１１４日間培養）メラ
ノイド色素産生能　　　　陰性 チロシナーゼ反応　　　　　　陰性 ミルクの凝固　　　　　　　　陰性 ミルクのペプトン化　　　　　陽性 ゼラチンの液化能　　　　　　陽性 澱粉の氷解能　　　　　　　　陰性 （４）炭素源の利用能 生育に良く利用きれる糖 Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−フラクトース、シュークロース、イノシトール、ラ
ムノース、Ｄ−７ニトール生育に利用されない糖 ラフィノース （５）細胞壁の組成 ジアミノピメリン酸の種類はメゾ−（ｍｅｓｏ−）型で
ある。

以上の諸性状により本菌株はノカルデイア属に属する株
であると判断される。ワックスマン著、ジ・アクチノミ
セテス（Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｓ　）第２
巻（１９６１年）、シャーリングおよびゴツトリーブの
Ｉ　、　Ｓ　、　Ｐ　、　（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ　ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＰｒｏ　ｊｅｃｔ　）報
告［インターナショナル・ジャーナル・才ブ・システマ
テインク・バクテリオロジ−（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第１８巻（１９６８年）、
同第１９巻（１９６９年）、同第２２巻（１９７２年）
］およびバーシーズ・マニュアル・才ブ・デイターミネ
イティブ・バタテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａ
ｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａ−ｔｉｖｅ　’　
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第８版（１９７４年）な
らびに、その他の放線菌関連の文献の中から本菌株の近
縁種を検索すると、ノカルデイア・オリエンタリス（Ｎ
ｏｃａｒｄｉａ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ、以下に示す文
献ではＳｔｒｅ−ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌ
ｉｓとして記ｅａれている）［Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ第１８巻、１５４〜１５７頁（
１９６８年）、ｒｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、
第２巻、２５４〜２５５頁（１９６１年）　］が最も近
縁な種として挙げられる。ノカルデイア・オリエンタリ
スとＰＡ−４５０５２株の性状を比較した結果、シュー
クロースの利用能に差が認められたが、その他の主要な
諸性状は良く一致した。従って、ＰＡ−４５０５２株は
ノカルデイア・才り工ンタリスと同種であると同定され
、ノカルデイア・オリエンタリスＰＡ−４５０５２（Ｎ
ｏｃａｒｄｉａ　ｏｒｉｅｎｔａ−Ｌｉｓ　ＰＡ−４５
０５２）と命名された。

本発明においては、上記のＰＡ−４５０５２株ならびに
その天然および人工変異株は勿論のこと、ノカルデイア
属に属し、ＰＡ−４５０５２−Ａ、　−Ｂ、　−Ｃ，−
Ｄ、　−Ｅおよび／または−Ｆを産生ずる菌株はすべて
使用でき本発明の範囲内とする。

ＰＡ−４５０５２の生産はＰＡ−４５０５２産生株を栄
養培地に好気的条件下に培養し、培養終了後培養物から
ＰＡ−４５０５２を分離採取することにより行なう。以
下にＰＡ−４５０５２の一般的製造方法を記載する。

培地組成、培地条件などは抗生物質の生産に一般に用い
られているものを用いるとよい、培地は原則として、炭
素源、窒素源、無機塩などを含む。必要に応して、ビタ
ミン類、先駆物資などを加えてもよい、炭素源としては
、例えば、グルツース、澱粉、デキストリン、グリセリ
ン、糖蜜、有機酸などが単独でまたは混合物として用い
られる。窒素源としては、例えば、大豆粉、コーンスチ
ープリカー、肉エキス、酵母エキス、綿実粉、ペプトン
、小麦胚芽、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなと
が単独または、混合物として用いられる。無機塩として
は、例えば、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、硫酸マグネシウム、硫酸鋼、塩化マンガン、硫
酸亜鉛、塩化コバルト、各種リン酸塩などがあげられ、
必要に応して培地に添加する。

培養は一般に抗生物質の製造に用いられる方法に準じて
行なえばよく、好ましくは液体培養が、大量生産を行な
う場合は、深部通気培養がよい。

培地のｐＨが変動しうる場合には、培地に炭酸カルシウ
ムなどの緩衝剤を加えてもよい。培養は約２０〜４０℃
で行なうとよく、特に２５〜３２℃が好ましい。培養時
間は発酵の規模に大きく左右されるが、約５日〜７日が
大量生産を行なう場合に要する培養時間である。培養中
に激しい発泡が起こる場合には、培養前または培養中に
例えば、植物油、ラード、ポリプロピレングリコールな
どの消泡剤を適宜添加するとよい。

培養終了後、培養物からＰＡ−４５０５２を分離採取す
るには、通常の発酵生産物を分離採取する方法を適宜用
いる０例えば濾過、遠心分離、各種イオン交換樹脂やそ
の他の活性吸着剤による吸脱着やクロマトグラブイ−１
各種有機溶媒による抽出などを適当に組み合わせるとよ
い。

ＰＡ−４５０５２は分離操作のため、また医薬、動物薬
として使用する便宜上、塩とするのが望ましいことがあ
る。ＰＡ−４５０５２と塩を形成しうる塩基としてはカ
リウム、ナトリウムなどのアルカリ金属、アルミニウム
、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、また酸として
は塩酸、硫酸、硝酸などの無機酸および酢酸、フマル酸
などの有機酸が挙げられる。

ＰＡ−４５０５２およびその製薬上許容きれる塩は抗菌
剤の活性成分として経口的にまたは非経口的にヒトまた
は動物に投与できる。汎用される賦形剤、安定化剤、保
存剤、湿潤剤、界面活性剤などを用いて、錠剤、カプセ
ル剤、粉剤として経口投与することができ、注射剤、塗
布剤、半開として非経口的に投与することもできる。そ
の投与量は治療目的、患者の年齢、症状などによって異
なるが、静脈注射する場合には成人に対して１日おおよ
そ０．１〜１０ｇである。

きらに、本発明者らは、上記化合物が動物生長促進作用
の指標となる、クロストリジウム属に属する菌株に対す
る強い抗菌活性を有することを見出し、かつ、これら化
合物を動物飼料に添加して動物を飼育すると、その体重
が顕著に増加することを見出した。

本発明の生長促進剤を動物に投与する場合には、直接投
与する場合には、本発明に関わるグリコペプチド類を直
接経口投与してもよいが、−船釣には通常使用されてい
る担体（例えば、脱指米糠、脱脂大豆粉、ふすま、カオ
リン、タルク、炭酸カルシウム、乳糖、水など）と混合
したものを投与するか、あるいはこのように混合したも
のもしくはグリコペプチド類単独を動物飼料もしくは水
と混合して投与する方法が好ましい、ここで使用するグ
リコペプチド類は、必ずしも純品である必要はなく、例
えば本発明に関わるグリコペプチド生産菌を培地に培養
して得られた培養物を部分的に精製したものであっても
よい、さらに、グリコペプチドの製薬上許容される塩を
使用してもよく、カリウム、ナトリウムなどのアルカリ
金属、アルミニウム、マグネシウムなどのアルカリ土類
金属、塩酸、硫酸、硝酸などの無機酸および酢酸、フマ
ル酸などの有機酸との塩があげられる。

本発明に関わるグリコペプチド類の１または２以上を含
有する動物の飼料は、動物の飼料とじて一般に使用きれ
る飼料であればいずれでもよい。

その例を挙げると次の通りである。すなわち、とうもろ
こし、ふすま、米、麦、綿実粕、マイロ、大豆粕、魚粉
、脱脂米ぬか、油脂、アルファルファ、炭酸カルシウム
、リン酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化コリン、ビ
タミンＡ１　ビタミンＤ、ビタミンＥ１　ビタミンＢｌ
ｓ　　ビタミンＢ８、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、
パントテン酸カルシウム、ニコチン酸アミド、葉酸など
のビタミン剤、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸銅、硫
酸亜鉛、ヨウ化カリウム、硫酸コバルトなどの無機塩、
などの一部または全部を混合し使用される。

この他に、他の抗生物質や殺菌剤、抗コクシジウム剤、
駆虫剤などを添加してもよい。

また、本発明に係るグリコペプチド類１種または２種以
上の飼料中の含有量は、それらをそれぞれ単独に使用す
る場合、それらの任意の混合物を使用する場合、それら
を含有する菌体、それらを含む抽出粗製物を使用する場
合のいずれの場合でも、使用するグリコペプチド類とし
て、０．５〜１１００ｐｐの範囲が適当である。

この発明の生長促進剤は動物一般に使用でき、その例と
して、にわとり、七面鳥、あひる、うずら、牛、馬、豚
、羊、山羊、ミンク、うさぎなど家禽および家畜が挙げ
られる。

また動物の飼育法は、一般に行なわれている方法をその
まま用いればよい。

本発明の生長促進剤は、動物の生長を促進するのみなら
ず、動物の飼料要求率を改善する。また、細菌性疾患な
どにも有効である。きらに、動物に対して低毒性であり
、動物体内には全く残留しない特徴を有しているので、
極めて優れている。以下に、本発明に係る化合物のマウ
ス静注におけるＬＤ、。値を示す。

ＬＤ　　（ｍ／Ｋ） ＰＡ−４５０５２−Ａ　　　＞１．０００ＰＡ−４５０
５２−８１，４３９ 二８作用 本発明の化合物ＰＡ−４５０５２はダラム陽性菌特にメ
チシリン耐性菌に対して強い抗菌活性を示し、ヒトまた
は動物のための医薬として有用である。また、高純度で
採集可能であるので、経口剤としてはもちろんのこと、
注射剤として用いるのに適している。さらに、動物に対
して生長促進作用を有し動物用生長促進剤の有効成分と
なる。

ホ、実施例 以下に実施例によって本発明を詳述するが、本発明を何
ら限定するものではない。

実施例１ （ａ）発酵工程： 可溶性澱粉０．５％、グルコース０．５％、ポリペプト
ン０．５％、牛肉エキス０．５％、酵母エキス０．２５
％、食塩０．２５％、脱イオン水（ｐＨ７，０、殺菌前
）よりなる培地８００ｍ１を含む２！２容三角フラスコ
にノカルデイア・オリエンタリス　ＰＡ−４５０５２（
微工研条寄第１３２０号）の種培養スラントを接種し、
毎分１８０回転で、２８℃、４８時間振盪培養を行なう
。この培養液８００ｍ１ずつを、デキストリン３．６％
、糖蜜２．４％、バタトペブトン０．８４％、Ｌ−チロ
シン０．１２％、消泡剤Ｐ−２０００（大日本インキ製
）０．０５％、水道水（ｐＨ７，０、殺菌前）からなる
培地３０１を含む５ＯＮ容ジャーファーメンタ−に植菌
し、通気量３ｏ１／分、内圧０　、３５　ｋｇ／ｃｍ”
Ｇ、　Ｆｉｌ拌回転回転数５５Ｏｒｐ （ｂ）分離工程： 上記工程で得られた培養液は１０％水酸化ナトリウムに
てｐＨ１　０　、５に調整し、遠心分離によって上清液
３３１２を得る．この上清液をｐＨ’７、５に調整後、
３．３２のＨＰ−２０（三菱化成社製）のカラムに流し
、水２３２で洗浄後、１５％メタノール−０．００５Ｎ
塩酸１０２で洗浄し、５０％メタノール−０．００５Ｎ
塩酸で熔出する．枯草菌を用いたバルブディスク拡散法
で活性を示すフラクション９！を集め、ｐＨ７にｙＡ！
ｉする．これを減圧濃縮し、凍結乾燥するとＰＡ−４５
０５２の粗粉末４６．３ｇを得る。

（ｃ）精製工程： ・ＰＡ−４５０５２−Ａ，　−Ｂ，　−Ｃの精製上記粗
粉末１０ｇを水１　０　０　ｍ　ｌに懸濁し、ＩＮ塩酸
でｐＨ２．０に調整溶解させ、ＭＣＩ　ＧＥＬ　０ＩＦ
−２０Ｐ（三菱化成社製）１００ｍｌに付し、ＨＰＬＣ
でフラクション中の含有量をチエツクしながら、順次０
、０ＩＮ塩酸、１０％メタノール−０．０ＩＮ塩酸、２
５％メタノール−０．０ＩＮ塩酸で溶出し、ＰＡ−４５
０５２−Ａ％Ｂを含む分画とＰＡ−４５０５２−Ｃを含
む分画に分ける。

ＰＡ−４５０５２−Ａおよび一Ｂを含む分画をｐＨ６．
０に調整、濃縮後ＣＨＰ−２０Ｐ１００ｍｌに付し、Ｈ
ＰＬＣで含有程度をチエツクしながら水、次いで３０％
メタノール−水、５０％メタノール−水で順次溶出させ
ＰＡ−４５０５２−Ａ含有分画およびＰＡ−４５０５２
−Ｂ含有分画に分ける．　ＰＡ−４５０５２−Ａ含有分
画をｐＨ７．０に調整、濃縮後バツクドカラムＲＱ−２
（富士ゲル販売株式会社）に付し、ＨＰＬＣで純度をチ
エツクしながら１３％アセトニトリル−０、０５Ｍリン
酸塩緩衝液（以下ＰＢＳと略記）（ｐＨ７．０）次で１
５％アセトニトリル−０。

０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で溶出させＰＡ−４５０５
２−Ａ　（　ＨＰＬＣ純度９５％以上）分画を合わせ濃
縮しＣＨＰ−２０Ｐ１２ｍｌに付し水洗後５０％メタノ
ールー水で溶出し、ｐＨ４．Ｑに調整後、濃縮凍結乾燥
し、ＰＡ−４５０５２−Ａ（ＨＣＩ）　１　９　８　ｍ
　ｇ　ヲ得る。

ＰＡ−４５０５２−Ｂ含有分画をｐＨ７．０に調整、濃
縮後バツクドカラムＲＱ−２に付しＨＰＬＣで純度をチ
エ７りしながら８％アセトニトリル−ｏ．。

５ＭＰＢＳ（　ｐＨ３　、５　）次いで１ｏ％アセトニ
トリルー０．０５ＭＰＢＳ（ｐＨ３．５）で溶出させＰ
Ａ−４５０５２−Ｂ（ＨＰＬＣ純度９５％以上）分画を
合わせｐＨ７．０に調整、濃縮後ＣＨＰ−２０Ｐ１２ｍ
ｌに付し、水洗後５０％メタノールー永で溶出させる０
着色しているため、再度ｐＨ７．０に調整、濃縮後ｐＨ
４．０に調整し、ＣＨＰ−２０Ｐ２ｍｌに付し、０．０
０１Ｎ塩酸で溶出きせて脱色り，　ＰＡ−４５０５２−
Ｂ（７）分画を集／）て１）Ｈ７．０４ｍ調整、濃縮後
ＣＨＰ−２０Ｆ１２ｍｌに吸着水洗後５０％メタノール
ー水で溶出させ、濃縮しｐＨ４、０に調整、凍結乾燥し
、ＰＡ−４５０５２−Ｂ（ＨＣＩ）　２９０ｍｇを得る
。

ＰＡ−４５０５２−Ｃ含有画分をｐＨ８，５に調整ＣＨ
Ｐ−２０Ｆ１００ｍｌに吸着し、水次いで５０％メタノ
ール−水で洗浄後、５０％メタノール−０゜０１Ｎ塩酸
で溶出きせる。ＰＡ−４５０５２−Ｃ含有分画を合わせ
濃縮後バツクドカラムＲＱ−２に付しＨＰＬＣで純度を
チエツクしながら１５％アセトニトリル−０，０５ＭＰ
ＢＳ（ｐＨ３，５）次いで１８％アセトニトリル−０，
０５ＭＰＢＳ（ｐＨ３，５）で溶出きせる。ＰＡ−４５
０５２−Ｃ（ＨＰ　Ｌ　Ｃ純度９０％以上）の分画を合
わせてｐＨ８，０に調整、濃縮後ＣＨＰ−２０Ｐ１２ｍ
ｌに付しＨＰＬＣで純度をチエツクしながら１８％アセ
トニトリル−０，０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７，０）次いで２
１％アセトニトリル−０，０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７。

０）で溶出し、ＰＡ−４５０５２−Ｃ（ＨＰＬＣ純度９
５Ｘ以上）のフラクションを合わせ濃縮後、ＣＨＰ−２
０Ｐ１２ｍｌに付して水洗、脱塩後５０％メタノール−
水次いで５０％メタノール−０，０１Ｎ塩酸で溶出許せ
濃縮後ｐＨ２，５に調整、凍結乾燥し、ＰＡ−４５０５
２−Ｃ（ＨＣＩ）　３６５　ｍ　ｇを得る。

・ＰＡ−４５０５２−Ｄの精製 上記粗粉末２０ｇを水１４０ｍ１に懸濁後、ＩＮ塩酸で
ｐＨ２，０に調整して溶解する。この溶液をＭＣＩ　　
ＧＥＬ　　ＣＨＰ２０Ｐ（三菱化成）１００ｍｌに付し
、０．０ＩＮ塩酸で溶出する。ＨＰＬＣでフラクション
をチエ・ツクしＰＡ−４５０５２−Ｂ。

−Ｃ含有画分をｐＨ６，４に調整、濃縮後ＣＨＰ２０Ｐ
１００ｍｌに付し再び０．０ＩＮ塩酸で溶出し、ＰＡ−
４５０５２−Ｂ、−Ｃ含有画分を得る０次に、このＰＡ
−４５０５２−Ｂ、−Ｃ含有画分をｐＨ７，０に調整後
濃縮し、バツクドカラムＲＱ−２（富士ゲル販売株式会
社）に付し、０．０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７，０）、１３％
ＣＨ＋ＣＮ−０、０５ＭＰ　ＢＳ（ｐＨ７、０）、１５
％ＣＨ，ＣＮ−０、０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７、０）、１８
％ＣＨ，ＣＮ−０．０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７，０）、３０
％ＣＨ，Ｃト０．０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７，０）で順次溶
出する。３０％ＣＨ，ＣＮ−０、０５ＭＰＢ　５（ｐＨ
７，０）溶出部からＰＡ−４５０５２−Ｃ含有画分を得
る。　ＰＡ−４５０５２−Ｃ含有画分を濃縮後、ＭＣＩ
ＧＥＬ　　ＣＨＰ２０Ｐ１０ｍｌに吸着し、水で洗浄後
、２５％ＣＨ，０Ｈ−Ｈ，０１５０％ＣＨ＄０Ｈ−Ｈ，
Ｏで順次溶出する。脱塩フラクションを集めて濃縮後、
塩酸でｐＨ４，０に調整し凍結乾燥して、白色非結晶粉
末としてＰＡ−４５０５２−Ｄ（６６５ｍ　ｇ、塩酸塩
）を得る。

・ＰＡ−４５０５２−Ｈの精製 上記粗粉末２０ｇを水１４０ｍ１に懸濁後、ＩＮ塩酸で
ｐＨ２，０に調整して溶解する。この溶液をＭＣＩ　　
ＧＥＬ　　ＣＨＰ２０Ｐ（三菱化成）１００ｍｌに付し
、０．０ＩＮ塩酸、１０％メタノール−０，０ＩＮ塩酸
、２５％メタノール−０゜０１Ｎ塩酸で順次溶出する。

ＨＰＬＣでフラクションをチエツクしＰＡ−４５０５２
−Ａ、　−Ｂ、　−Ｄ、　−Ｅ含有画分とＰＡ−４５０
５２−Ｃ，−Ｆ含有画分を得る。　ＰＡ−４５０５２−
Ａ、−Ｂ、−〇、−Ｅ含有画分をｐＨ６，４に調整、濃
縮後ＣＨＰ２０Ｆ１００ｍｌに付し再び０．０１Ｎ塩酸
で溶出し、Ａ含有画分とＢ、　Ｄ％Ｅ含有画分を得る０
次に、このＢ、　Ｄ、　Ｅ含有画分をｐＨ７，０に調整
後濃縮し、バツクドカラムＲＱ−２（富士ゲル販売株式
会社）に付し、０．０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７，０）、１３
％ＣＨ，ＣＮ−０、０５ＭＰＢ　Ｓ　（ｐＨ７，０）、
　１５％ＣＨ，ＣＮ−０，０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７，０）
、　１８％ＣＨ，ＣＮ−０，０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７，０
）、３０％ＣＨ，ＣＮ−０，０５ＭＰＢＳ（ｐＨ７，０
）で順次溶出する。３０％Ｃ１，ＣＮ−０、０５ＭＰＢ
Ｓ（ｐ’Ｈ７，ｏ）溶出部からＣ含有画分とＥ含有画分
を得る。ＰＡ−４５０５２−Ｅ含有画分を濃縮後、ＭＣ
Ｉ　　ＧＥＬ　　ＣＨＰ２０Ｆ１０ｍｌに吸着し、水で
洗浄後、２５％ＣＨｓＯＨ−Ｈ＊０．５０％ＣＨ，０Ｈ
−Ｈ，０で順次溶出する。Ｅ含有フラクションを集めて
濃縮後、塩酸でｐＨ４，０にＵ４整し凍結乾燥して、白
色非結晶粉末としてＰＡ−４５０５２−Ｅ（２４５ｍ　
ｇ　。

塩酸塩）を得た。

・ＰＡ−４５０５２−Ｆの精製 ＰＡ−４５０５２−Ｃ，−Ｆ含有画分をｐＨ８，０に調
製、ＣＨＰ２０Ｆ１００ｍｌに吸着し、水、５０％メタ
ノール水ｆｉｓ後、ｓｏ％メタノール−０，０ＩＮ塩酸
で溶出させる。　ＰＡ−４５０５２−Ｃ，−Ｆ含有画分
を濃縮後、バツクドカラムＲＱ−２に付し、１５％ＣＨ
、ＣＮ−０，０５ＭＰＢＳ（ｐＨ３，５）、１８％ＣＨ
、ＣＮ−０，０５ＭＰＢＳ（ｐＨ３，５）で溶出し、Ｐ
Ａ−４５０５２−Ｃ１−Ｆ含有画分を得る。このＣ，Ｆ
含有画分をｐＨ８，０に調整、濃縮し、ＣＨＰ２０Ｐ１
０ｍｌに付し、１８％ＣＨ，ＣＮ−０，０５ＭＰＢＳ（
ｐＨ７，０）、２１％ＣＨ，ＣＮ−０，０５ＭＰＢＳ（
ｐＨ７，０）、３０％ＣＨ，ＣＮ−０、０５ＭＰＢＳ（
ＰＨ７，０）、５０％ＣＨ，０Ｈ−０、０Ｉ　Ｎ塩酸で
順次溶出し、ＰＡ−４５０５２−Ｃ含有画分とＰＡ−４
５０５２−Ｆ含有画分を得る。Ｐａ−４５０５２−Ｆ含
有画分を濃縮後、ＣＨＰ２０Ｆ１０ｍｌに吸着し、水洗
脱塩後、５０％メタノール水、５０％メタノール−０，
０ＩＮ塩酸で溶出、濃縮後ｐＨ２，５に調整、凍結乾燥
してＰＡ−４５０５２−Ｆ　（塩酸塩）３０ｍｇを得る
。

実施例２ （ａ）発酵工程： 可溶性澱粉０，５％、グルコース０，５％、ポリペプト
ン０．５％、牛肉エキス０．５％、酵母エキス０．２５
％、食塩０．２５％、脱イオン水（ｐＨ７，０、殺菌前
）よりなる培地８００＋ｎｌを含む２Ｐ容三角フラスコ
にノカルデイア・オリエングリス　ＰＡ−４５０５２（
微工研条寄第１３２０号）の種培養スラントを接種し、
毎分１８０回転で、２８°Ｃ１４８時間振盪培養を行な
う。この培養液８００ｍ１を、上記と等しい成分から成
る培地１８！を含む３（Ｂ容ジ〜−ファーメンタ−に植
菌し、通気量１８ｊ２／分、内圧０　、３５　ｋｇ／ｃ
ｍ”Ｇ、攪拌回転数２０Ｏｒｐｍで、３２℃、２３時間
培養する０次いでこの培養液８１２を、ボテトスタープ
２．０％、グルコース１．０％、糖蜜３゜０％、バクト
ペブトン１．１％、消泡剤Ｐ−２０００（大日本インキ
製）０．０５％、水道水（ｐＨ７，０、殺菌前）からな
る培地１６５Ｐを含む２５（Ｂ容発酵タンクに植菌し、
通気量１６５Ｐ／分、内圧５ｐｓｉ、攪拌回転数３５　
Ｏｒｐｍで、３２℃、１６４時間培養する。

（ｂ）分離工程： 上記工程で得られた培養液は１０％水酸化ナトリウムに
てｐＨ１０，５に調整し、遠心分離によって上清液１４
０！を得る。この上清液をｐＨ７，５に調整後、１５１
のＨＰ−２０（三菱化成社製）のカラムに流し、水２３
ｊ２で洗浄後、１５％メタノール−０，００５Ｎ塩酸３
０１で洗浄し、５０％メタノール−０，００５Ｎ塩酸で
溶出する。枯草菌を用いたバルブディスク拡散法で活性
を示すフラクション５３ｊ！を集め、ｐＨ７に調整する
。これを減圧濃縮し、凍結乾燥するとＰＡ−４５０５２
の粗粉末１５０．８ｇを得る。

実施例３ 以下に、各化合物の生長促進剤としての飼料への添加例
を示す。

（１）　　とうもろこし　　　　　　　４６．４５’Ｘ
マイロ　　　　　　　　　Ｌ５．００　％大豆粕　　　
　　　　　　　５．００％魚粉　　　　　　　　　　　
　３．０ＯＸ脱脂米ぬか　　　　　　　　２５．ＯＯＸ
アルファルファ　　　　　　　３．０ＯＸ炭酸カルシウ
ム　　　　　　ｔ、ｏｏｘリン酸カルシウム　　　　　
　０．７０％塩化ナトリウム　　　　　　０．４０％ビ
タミンＡ、Ｄ、Ｅ混合物　　　０．０５％０無機塩混合
物　　　　　　　０．１ｘＯビタミンＢ群混合物　　　
　０．１ｘＰＡ−４５０５２−Ａ　　　　　　　　　１
０　ｐｐｍ上記をよく混合する。

・無機塩混合物：硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸鋼、硫
酸コバルト、ヨウ化カリウム １ビタミンＢ群混合物：ビタミンＢｌｓ　　ビタミンＢ
１、ビタミンＬ　、ビタミンＢ１２、ビオチン、葉酸、
パントテン酸カルシウム ■　とうもろこし　　　　　　　４１．００　Ｘマイロ
　　　　　　　　　２５．ＯＯＸ大豆粕　　　　　　　
　　　１９．１０χ魚粉　　　　　　　　　　　　ｓ、
ｏｏｘ油脂　　　　　　　　　　　　４．００％炭酸カ
ルシウム　　　　　　　１．４０　％リン酸カルシウム
　　　　　　０．８５％０ビタミン無機塩混合物　　　
０．２６％メチオニン　　　　　　　　０．ＬＯＸ塩化
ナトリウム　　　　　　０．２９ＸＰＡ−４５０５２−
Ｂ　　　　　　　　　２０　ｐｐｆｆｉ上記をよく混合
する。

８ビタミン無機塩混合物：ビタミンＡ、ビタミンＤ１、
ビタミンＥ１　　ビタミンＢ１、ビタミンＢ３、ビタミ
ンＢ、、ビタミンＢ１１、パントテン酸カルシウム、ニ
コチン酸アミド、ビタミンに４％塩化コリン、硫酸マグ
ネシウム、硫酸鉄、硫酸銅、硫酸亜鉛、硫酸コバルト、
ヨウ化カリウム （３）　　とうもろこし　　　　　　　７８　　％大豆
油粕　　　　　　　　　９ｘ 魚粉　　　　　　　　　　　１０　　χ脂肪　　　　　
　　　　　　　３．９ｘ粗繊ｆｉ　　　　　　　　　　
　２．４％粗灰分　　　　　　　　　　５．１ｘ カルシウム　　　　　　　　　１．０７％リン酸　　　
　　　　　　　　０．７３％アルファルファミール〜食
塩１ 炭酸カルシウムの混合物　　３ｚ ＰＡ−４５０５２−８２０ｐｐｍ 上記をよく混合する。

（４）　　ＰＡ−４５０５２−Ｃ，−Ｄ、−Ｅ、−Ｆに
関しても上記（１）、（り、０）と同様に混合して、薬
剤添加飼料とする。

へ１発明の効果 ＰＡ−４５０５２−Ａ、−Ｂ、−Ｃ，−Ｄ、　−Ｅおよ
び−Ｆのｉｎ　ｖｉｔｒＯでの抗菌力を日本化学療法学
会所定の方法に準し、以下の条件下で測定した。

■　菌体懸濁液の調製 斜面培地上の被検菌株１白金耳を成育培地（トリプトソ
イプロス、栄研化学（株））１ｍｌに接種し、３７℃で
１８〜２０時間培養する。培養物の１００倍希釈物を接
種用菌体懸濁液として使用する。

■　サンプル溶液 サンプルを９−１０ｍｇ正確に秤量し、蒸留水に２　ｍ
ｇ／ｍｌとなるように溶解する。

■　寒天平板 サンプル溶液を滅菌水で段階倍数希釈する（２０００〜
０．２５μｓ／ｍｌ　）　、希釈サンプル溶液それぞれ
の０．５ｍｌを滅菌プラスチックペトリ皿（直径９ｃｍ
）に移し、そこへ９．５ｍｌの寒天培地（感受性試験培
地、栄研化学（株））を注ぎ、緩やかに攪拌した後、凝
固させる。

■　ＭＩＣ値の測定接種用懸濁液１白金耳（０゜５−１
μｍ）を上記方法で調整した様々な濃度のサンプルを含
む寒天平板の表面に移す、３７℃で１８−２０時間培養
した後、寒天表面での菌の成育を観察する。菌の成育が
完全に阻止されたと観察される最低濃度をＭＩＣとしμ
ｇ／ｍｌで表わす。

■　特殊培地における馬血清の添加 ストレプトフッカスに対するＭＩＣを測定するための寒
天培地は、注入前に０．５％（Ｖ／Ｖ）馬血清を添加す
る。

結果を、表１に示す。

（以下余白） 次に、ｉｎ　ｖｉｖｏでのＰＡ−４５０５２−Ａ、−Ｂ
、および（の抗菌活性を表２に示す。

試験方法：　５ｌｃ−ＩＣＲ雌マウマウス群８匹）に被
検菌を腹腔的接種し、１時間後と５時 間後の計２回ＰＡ−４５０５２−Ａ、−Ｂ、または−Ｃ
（倍数希釈）を皮下投与する。

結果ニア８後のマウスの生存率から５０％有効量（ＥＤ
ｓ　＊　）を算出する。

（以下余白） ＰＡ−４５０５２のクロストリジウム・ベルフリンジェ
ンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎ
ｓ）に対するｉｎ　ｖｉｔｒｏ試験とブロイラー雛に対
する生長促進効果試験を実施した。

１　、　Ｃ１，ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓに対するｉｎ　
ｖｉｔｒｏ試験試験菌のＣ１，ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ
は牛および鶏由来の合計１１株を用いた。感受性測定方
法は、測定用培地としてＣＡＭ寒天培地（日本）を用い
て、寒天平板希釈法による嫌気培養（ガスバック法）を
行なった。判定は、３７’Ｃで２４時間培養した後、肉
眼で明らかに発育が阻止された最低濃度（ＭＩＣ）をも
ってその薬剤のＭＩＣ値とした。

生長促進を目的とした抗生物質のｉｎ　ｖｉｔｒｏスク
リーニングでは、ダラム陽性菌に対する活性、特にＣ１
，ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓに対する活性が１つの目安と
されている（Ｐｏｕｌｔｒｙ　５ｃｉｅｎｃｅ　６２．
１６３３〜１６３８．１９８３；　Ｐｏｕｌｔｒｙ　５
ｃｉｅｎｃｅ　６３．２０３６〜２０４２．１９８４）
。

結果を表３に示す。

（以下余白） 表３　　Ｃ１，ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓに対するｉｎ　
ｖｉｔｒｏ成績ＮＣｆＣ−１０２３９牛　　　　０．２
　　　　Ｇ、２　　　０．１ＦＣ２２０８／７５　　　
　牛　　　　０．３９　　　０．３９　　　０．ｌ５−
７９　　　　　　　牛　　　　０．３９　　　０．３９
　　　０．１ＣＭ−１９７０牛　　　　０．３９　　　
０．３９　　　０．２６ト１０　　　　　　牛　　　　
０．３９　　　０．３９　　　０．２ＮαＣ−８２３９
牛　　　　０．２　　　　０．２　　　　　Ｑ、２ＮＣ
ｒＣ−８７９８牛　　　　０．３９　　　０．３９　　
　０．２５ＰＯ７鶏　　　　０．２　　　　０．２　　
　　０．１９Ｃ−０２鶏　　　　０．３９　　　０．３
９　　　０．２３Ｃ−０１鶏　　　　０．７８　　　０
．７８　　　０．２０２４４１　　　　　　　鶏　　　
　０．３９　　　０．３９　　　０．２化合物１　：Ｐ
Ａ−４５０５２−Ａ 化合物２　：　ＰＡ−４５０５２−Ｂ 化合物３　：　ＰＡ−５０５２７−Ｃ ２、′Ｍに対する生長効果試験 ＰＡ−４５０５２のプａイ′＞雛（８日令、アバ−ニー
カ一種ンに対ｒる生長促進効果を、既知抗生物質チオベ
ブデンを対照薬剤として用いて検討した。添加ａ度は、
それぞれ抗菌剤無添加飼料マツシュ（粗蛋白濃度（ＣＰ
）　：　１８Ｘ）に２０ｐｐｍノ添力ａｌｊＪ度テ１４
日間ケえバタリー飼育方式で検討した。実験方法は、初
生雛を８日令時までＣＰａ度２３Ｘの飼料で平飼い飼育
した後、１群２４羽（雌雄者１２羽）ずつ各群の体重が
均一になるように合計５群の実験群に区分した。各実験
群は、ＰＡ−４５０５２−Ａ、−Ｂおよび−Ｅ群２０ｐ
ｐｍｘ１４日間、チオベプチン２０ｐｐｍｘ１４日間、
無添加対照群ＣＰ１８％飼料１４日間である。これらの
各実験群は、６〜７羽ずつケージ（４３５ｘ６００ｘ４
１０ａ＋ｍ）に収容した後、１４日間（２２２日令環境
温度２６±２”Ｃの条件下で飼育した。有効性の評価法
は、試験期間中（１４日間）の増体重と飼料要求率から
評価した。

試験成績は表４に示す通りである。

【図面の簡単な説明】

第１図はＰＡ−４５０５２−Ａ、　ＰＡ−４５０５２−
Ｂ％ＰＡ−４５０５２−Ｃ％ＰＡ−４５０５２−Ｄ、　
ＰＡ−４５０５２−ＥおよびＰＡ−４５０５２−Ｆ（７
）赤外線吸収スペクトラム、第２図はＰＡ−４５０５２
−Ａ。 ＰＡ−４５０５２−Ｂ、　ＰＡ−４５０５２−Ｃ，ＰＡ
−４５０５２−Ｄ、　ＰＡ−４５０５２−ＥおよびＰＡ
−４５０５２−Ｆの質量分析スペクトラム（但し、＃の
付されたピークは、マーカー補正用標準物質のピーク）
、第３図はＰＡ−４５０５２−Ａ％ＰＡ−４５０５２−
Ｂ、　ｐＡ−ａｓｏｓｚ−ｃオヨヒＰＡ−４５０５２−
Ｄノ’Ｈ−ＮＭＲｔ　ヘクトラムを示す。 特許出願人　塩野義製薬株式会社 第　１　図（その１）ＰＡ−４５０５２−ＡＰＡ−４５
０５２−Ｂ ＷＡＶＥＮＵＭ　ＢＥＲ（ｃｍ勺 第２図（その１） ＰＡ−４５０５２−Ａ 第　２図（壬の　２） ＰＡ−４５０５２−Ｂ 事２図　（そ／１３） ＰＡ−４５０５２−Ｃ

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. （１）式； ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒは▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式
   、化学式、表等があります▼ またはＨ；Ｒ＿１はＣＨ＿３またはＨを表わす。）で示
   される化合物ＰＡ−４５０５２およびその製薬上許容さ
   れる塩。
2. （２）式中Ｒが ▲数式、化学式、表等があります▼ Ｒ＿１がＨである請求項１に記載の化合物ＰＡ−４５０
   ５２−Ａ。
3. （３）式中Ｒが ▲数式、化学式、表等があります▼ Ｒ＿１がＨである請求項１に記載の化合物ＰＡ−４５０
   ５２−Ｂ。
4. （４）式中ＲがＨ、Ｒ＿１がＨである請求項１に記載の
   化合物ＰＡ−４５０５２−Ｃ。
5. （５）式中Ｒが ▲数式、化学式、表等があります▼ Ｒ＿１がＣＨ＿３である請求項１に記載の化合物ＰＡ−
   ４５０５２−Ｄ。
6. （６）式中Ｒが ▲数式、化学式、表等があります▼ Ｒ＿１がＣＨ＿３である請求項１に記載の化合物ＰＡ−
   ４５０５２−Ｅ。
7. （７）式中ＲがＨ、Ｒ＿１がＣＨ＿３であるである請求
   項１に記載の化合物ＰＡ−４５０５２−Ｆ。
8. （８）ノカルディア属に属するＰＡ−４５０５２産生菌
   を培地に培養し、培養物からＰＡ−４５０５２を分離採
   取することを特徴とするＰＡ−４５０５２の製造法。
9. （９）該産生菌がノカルディア・オリエンタリス種に属
   する菌である請求項８に記載の製造法。
10. （１０）該産生菌がノカルディア・オリエンタリスＰＡ
    −４５０５２である請求項８に記載の製造法。
11. （１１）ノカルディア属に属するＰＡ−４５０５２産生
    菌。
12. （１２）ノカルデイア・オリエンタリス種に属する請求
    項１１に記載の産生菌。
13. （１３）ノカルデイア・オリエンタリスＰＡ−４５０５
    ２である請求項１１に記載の産生菌。
14. （１４）請求項１〜７に記載の化合物およびその塩から
    なる群から選択される１種以上の化合物を有効成分とす
    る動物用生長促進剤。