JPH01168290A - 酢酸菌スフェロプラストの電気的融合法 - Google Patents
酢酸菌スフェロプラストの電気的融合法Info
- Publication number
- JPH01168290A JPH01168290A JP32726287A JP32726287A JPH01168290A JP H01168290 A JPH01168290 A JP H01168290A JP 32726287 A JP32726287 A JP 32726287A JP 32726287 A JP32726287 A JP 32726287A JP H01168290 A JPH01168290 A JP H01168290A
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- JP
- Japan
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- spheroplasts
- acetic acid
- osmotic pressure
- pressure regulator
- fusion
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は酢酸菌スフェロプラスト（Ｓｐｈｅｒｏｐｌａ
ｓｔ）を電気的に融合させる方法に関し、更に詳、シ＜
は、酢酸菌スフェロプラストを、浸透圧調節剤を含む水
溶液で洗浄した後、該洗浄スフェロプラストを浸透圧調
節剤を含む水溶液に懸濁し、高周波電界を加え、次いで
高電圧パルスを加えることにより酢酸菌スフェロプラス
トを融合処理し、得られた融合細胞を浸透圧調節剤を添
加した培地又は浸透圧調節剤及び再生促進剤を添加した
培地で再生することを特徴とする酢酸菌スフェロプラス
トの電気的融合法に関する。
ｓｔ）を電気的に融合させる方法に関し、更に詳、シ＜
は、酢酸菌スフェロプラストを、浸透圧調節剤を含む水
溶液で洗浄した後、該洗浄スフェロプラストを浸透圧調
節剤を含む水溶液に懸濁し、高周波電界を加え、次いで
高電圧パルスを加えることにより酢酸菌スフェロプラス
トを融合処理し、得られた融合細胞を浸透圧調節剤を添
加した培地又は浸透圧調節剤及び再生促進剤を添加した
培地で再生することを特徴とする酢酸菌スフェロプラス
トの電気的融合法に関する。
一般に、酢酸菌は食酢製造に古くから利用されており、
産業上重要な微生物である。近年、遺伝子組換え技術な
どにより、育種、改良が研究されているが、他の微生物
に比較し、遅れている。特に電気的細胞融合については
いまだ報告例がなく、技術開発が待たれている。
産業上重要な微生物である。近年、遺伝子組換え技術な
どにより、育種、改良が研究されているが、他の微生物
に比較し、遅れている。特に電気的細胞融合については
いまだ報告例がなく、技術開発が待たれている。
本発明においては、酢酸菌スフェロプラストの融合を簡
便に効率よく行うことができるので、酢酸菌の育種技術
に益するところ大なるものである。
便に効率よく行うことができるので、酢酸菌の育種技術
に益するところ大なるものである。
（従来技術）
スフェロプラストの調製方法については、ウェブ（Ｗｅ
ｂｂ）らの報告〔カナデイアン・ジャーナル・オブ・マ
イクロバイオロジー（Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａ
ｌｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、第８巻、第８４
１頁（１９６２年）〕および松下らの報告〔アグリカル
チュラル・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ
ｕｌｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ）、第４５巻、第１５１５頁（１９８１年）〕が知
られている。
ｂｂ）らの報告〔カナデイアン・ジャーナル・オブ・マ
イクロバイオロジー（Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａ
ｌｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）、第８巻、第８４
１頁（１９６２年）〕および松下らの報告〔アグリカル
チュラル・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃ
ｕｌｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ）、第４５巻、第１５１５頁（１９８１年）〕が知
られている。
さらに、本発明者らは先に、アセトバクター屈の細胞の
スフェロプラストを効率よく調製する方法及び再生方法
（特願昭６２−２７５７１２及び特願昭６２−２７５７
１３）について開発した。しかしながら、酢酸菌スフェ
ロプラストを電気的に融合させる方法については、報告
例がなく、技術開発が待たれていた。
スフェロプラストを効率よく調製する方法及び再生方法
（特願昭６２−２７５７１２及び特願昭６２−２７５７
１３）について開発した。しかしながら、酢酸菌スフェ
ロプラストを電気的に融合させる方法については、報告
例がなく、技術開発が待たれていた。
（発明が解決しようとする問題点）
上述のように、酢酸菌スフェロプラストを電気融合させ
る方法については、報告例がない。
る方法については、報告例がない。
本発明の目的は、融合効率が高く、簡便で安定性のよい
方法として、酢酸菌スフェロプラストの電気的融合法を
提供することである。
方法として、酢酸菌スフェロプラストの電気的融合法を
提供することである。
（問題を解決するための手段）
酢酸菌の細菌のスフェロプラスト調製方法については、
既にウェブら及び松下らの報告がある。
既にウェブら及び松下らの報告がある。
これらの報告に従って酢酸菌スフェロプラストを調製し
た後、電気的融合法により細胞融合させる方法を鋭意検
討し、本発明を完成させるに至った。
た後、電気的融合法により細胞融合させる方法を鋭意検
討し、本発明を完成させるに至った。
本発明は、酢酸菌スフェロプラストを、浸透圧調節剤を
含む水溶液で洗浄した後、該洗浄スフェロプラストを浸
透圧調節剤を含む水溶液に憑濁し、高周波電界を加え、
次いで高電圧パルスを加えることにより酢酸菌スフェロ
プラストを融合処理し、得られた融合細胞を浸透圧調節
剤を含む培地又は浸透圧調節剤及び再生促進剤を添加し
た培地で再生することを特徴とする酢酸菌スフェロプラ
ストの電気的融合法である。
含む水溶液で洗浄した後、該洗浄スフェロプラストを浸
透圧調節剤を含む水溶液に憑濁し、高周波電界を加え、
次いで高電圧パルスを加えることにより酢酸菌スフェロ
プラストを融合処理し、得られた融合細胞を浸透圧調節
剤を含む培地又は浸透圧調節剤及び再生促進剤を添加し
た培地で再生することを特徴とする酢酸菌スフェロプラ
ストの電気的融合法である。
本発明に用いる浸透圧調節剤としては、単糖類、三糖類
、糖アルコールが用いられる。単糖類としては、グルコ
ース、マンノース、キシロース、フラクトース、アラビ
ノースがあり、三糖類としては、ショ糖、マルトース、
イソマルトースがあり、糖アルコールとしては、ソルビ
トース、マンニトール、キシリトールがあり、これらが
適宜用いられる。その濃度に関しては、０．２Ｍ以上Ｉ
Ｍ以下。
、糖アルコールが用いられる。単糖類としては、グルコ
ース、マンノース、キシロース、フラクトース、アラビ
ノースがあり、三糖類としては、ショ糖、マルトース、
イソマルトースがあり、糖アルコールとしては、ソルビ
トース、マンニトール、キシリトールがあり、これらが
適宜用いられる。その濃度に関しては、０．２Ｍ以上Ｉ
Ｍ以下。
特に０．５Ｍ以上０．８Ｍ以下が好ましい。
浸透圧調節剤を含む水溶液は、無機塩等の電解質を全く
含まないものを用いる。
含まないものを用いる。
高周波電界を加える条件としては、周波数が０．２５Ｍ
ｔｌｚ以上２．０Ｍ１１ｚ以下、特に０．５ＭＨｚ以上
１．０Ｍ１（ｚ以下が好ましい。電圧は、２０Ｖ以上４
０Ｖ以下、特に３０Ｖ以上４０Ｖ以下が好ましい。高周
波電界を加える時間は、スフェロプラストがバールチェ
ーンを形成するまでの時間であり、５秒以上９０秒以下
である。
ｔｌｚ以上２．０Ｍ１１ｚ以下、特に０．５ＭＨｚ以上
１．０Ｍ１（ｚ以下が好ましい。電圧は、２０Ｖ以上４
０Ｖ以下、特に３０Ｖ以上４０Ｖ以下が好ましい。高周
波電界を加える時間は、スフェロプラストがバールチェ
ーンを形成するまでの時間であり、５秒以上９０秒以下
である。
次いで、高電圧パルスが加えられるが、その電解強度は
、０．５ｋＶ／ｃｍ以上５．０ｋＶ／ｃｍ以下、特に０
．７ｋＶ／ｃｍ以上３．０ｋＶ／ｃｍ以下が好ましい。
、０．５ｋＶ／ｃｍ以上５．０ｋＶ／ｃｍ以下、特に０
．７ｋＶ／ｃｍ以上３．０ｋＶ／ｃｍ以下が好ましい。
パルス幅は５μＳｃｃ以上５０μｓｅｃ以下、特に１０
μｓｅＣ以上３０μＳｅｅ以下が好ましい。高電圧パル
スを加える回数は１回以上１０回以下、特に１回以上５
回以下が好ましい。高電圧パルスを加えた後は、１５分
以上静置し融合株を安定化させるのが好ましい。
μｓｅＣ以上３０μＳｅｅ以下が好ましい。高電圧パル
スを加える回数は１回以上１０回以下、特に１回以上５
回以下が好ましい。高電圧パルスを加えた後は、１５分
以上静置し融合株を安定化させるのが好ましい。
そしてこの融合処理は、室温（１０℃以上３０℃以下）
あるいは３７℃前後にて実施させる。
あるいは３７℃前後にて実施させる。
本発明において、融合したスフェロプラストは、該融合
細胞を浸透圧調節剤を添加した培地又は浸透圧調節剤及
び再生促進剤を添加した培地で再生させる。
細胞を浸透圧調節剤を添加した培地又は浸透圧調節剤及
び再生促進剤を添加した培地で再生させる。
浸透圧調製剤に再生促進剤を併用することにより、再生
効率があがる。この除用いる培地は、固体培地、液体培
地のいづれでもよい。固体培地の同化剤としては、寒天
、ジェランガム等が用いられ、本発明においては寒天が
好ましく用いられる。
効率があがる。この除用いる培地は、固体培地、液体培
地のいづれでもよい。固体培地の同化剤としては、寒天
、ジェランガム等が用いられ、本発明においては寒天が
好ましく用いられる。
再生促進剤としては、ゼラチン、デキストラン。
ポリビニルピロリドン、牛血清アルブミン及び馬血清が
用いられる。その濃度に関しては、ゼラチン、デキスト
ラン、ポリビニルピロリドンを使用する際には１％以上
４％以下、特に１．５％以上３％以下が好ましい。牛血
清アルブミンについては０．０１％以上０．１％以下、
特に０．０２％以上０．０７％以下が好ましい。馬血清
については０．１％以上１％以下、特に０．２％以上０
．７％以下が好ましい。
用いられる。その濃度に関しては、ゼラチン、デキスト
ラン、ポリビニルピロリドンを使用する際には１％以上
４％以下、特に１．５％以上３％以下が好ましい。牛血
清アルブミンについては０．０１％以上０．１％以下、
特に０．０２％以上０．０７％以下が好ましい。馬血清
については０．１％以上１％以下、特に０．２％以上０
．７％以下が好ましい。
寒天培地及び液体培地での培養温度は、通常の培養温度
１例えば２５℃以上３５℃以下が適する６以上の構成を
採用することにより、酢酸菌スフェロプラストを融合し
、融合したスフェロプラストを再生して酢酸菌の電気的
細胞融合を行うことが可能になる。
１例えば２５℃以上３５℃以下が適する６以上の構成を
採用することにより、酢酸菌スフェロプラストを融合し
、融合したスフェロプラストを再生して酢酸菌の電気的
細胞融合を行うことが可能になる。
スフェロプラストの調製方法は、ウェブらの方法や松下
らの方法に従えば良いが、他の方法で調製してもよい。
らの方法に従えば良いが、他の方法で調製してもよい。
本発明の方法で使用する酢酸菌に特に限定はないが、例
えばアセトバクター・アセチ （Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ）Ｎａ１０２３
（ＦＥＲＭ Ｐ−７１２２）の変異から得られたアセト
バクター・アセチ （Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ）１０−８Ｓ２
（ｐｒｏ−）、アセトバクター０アセチ（Ａｃｅｔｏｂ
ａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ） ）Ｊｎ２Ｐ（Ｃｙｓ−）、
又はアセトバクター・アルトアセチゲネス（Ａｃｅｔｏ
ｂａｃｔｅｒ ａｌｔｏａｃｅｔｉｇｅｎｅｓ）Ｍｔｌ
−２４（ＦＥＲＮ ＢＰ−４９１）などがあげられる。
えばアセトバクター・アセチ （Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ）Ｎａ１０２３
（ＦＥＲＭ Ｐ−７１２２）の変異から得られたアセト
バクター・アセチ （Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ）１０−８Ｓ２
（ｐｒｏ−）、アセトバクター０アセチ（Ａｃｅｔｏｂ
ａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ） ）Ｊｎ２Ｐ（Ｃｙｓ−）、
又はアセトバクター・アルトアセチゲネス（Ａｃｅｔｏ
ｂａｃｔｅｒ ａｌｔｏａｃｅｔｉｇｅｎｅｓ）Ｍｔｌ
−２４（ＦＥＲＮ ＢＰ−４９１）などがあげられる。
本発明によれば、酢酸菌スフェロプラストが効率的に融
合させることができ、酢酸菌の細胞融合技術に適用して
極めて有用である。
合させることができ、酢酸菌の細胞融合技術に適用して
極めて有用である。
次に、本発明の実施例を示す。
実施例１
アセトバクター・アセチＮｎ１０２３ （ＦＥＲＭ Ｐ
−７１２２）より大森らの報告〔アグリカルチュラル・
バイオロジカル・ケミストリー （Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第４６巻、第３８１頁（１９８
２年）〕に従ってＮＴＧ処理して得たプロリン要求性を
有するアセトバクター・アセチ（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅ
ｒ ａｃｅｔｉ）１０−８Ｓ２（ｐｒｏ−）、及びシス
チン要求性を有するアセトバクター・アセチ（Ａｃｅｔ
ｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ）Ｎａ２Ｐ（ｃｙｓ−）を
使用した。グルコース３％、酵母エキス（大五栄養化学
株式会社製）０．５％、ポリペプトン（大五栄養化学株
式会社ｇ）０．２％を含みρ■６．５に調製された”／
ＰＧ培地にて上記菌株を３０℃にて振どう培養し、対数
増殖後期の細胞を遠心分離（６、０００ｘｇ、１０分）
で集めマクイルパイン緩衝液（ｐＨ７，０）で洗浄した
。洗浄した菌体を、１０ｍＭ トリス−塩酸、１ ｍＭ
ＥＤＴＡ、０．８Ｍショ糖を含む緩衝液（ｐＨ７，
０）に懸濁した。この菌体懸濁液に、卵白リゾチーム（
シグマ社製）を２ ｍｇ／ｍＱ加え、３０°Ｃで３時間
反応させ、各菌株のスフェロプラストを得た。この各ス
フェロプラストを０．８Ｍショ糖を含む水溶液で３回洗
浄後、 ０．８Ｍショ糖を含む水溶液にｌＸｌ０１０個
／ｍ１２となる様に再び１艷濁した。各０．１＋＋＋Ｑ
を融合チャンバー５ＳＨ−Ｃｏｔ（株式会社島津製作所
製）に入れ、島津細胞融合装置ＳＳＩ＋−１（株式会社
島津製作所製）を用い酢酸菌スフェロプラストの電気的
融合を行った。高周波電界の周波数は１．０ＭＨｚ、
電圧は４０Ｖで２０秒間加えた。
−７１２２）より大森らの報告〔アグリカルチュラル・
バイオロジカル・ケミストリー （Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第４６巻、第３８１頁（１９８
２年）〕に従ってＮＴＧ処理して得たプロリン要求性を
有するアセトバクター・アセチ（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅ
ｒ ａｃｅｔｉ）１０−８Ｓ２（ｐｒｏ−）、及びシス
チン要求性を有するアセトバクター・アセチ（Ａｃｅｔ
ｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ）Ｎａ２Ｐ（ｃｙｓ−）を
使用した。グルコース３％、酵母エキス（大五栄養化学
株式会社製）０．５％、ポリペプトン（大五栄養化学株
式会社ｇ）０．２％を含みρ■６．５に調製された”／
ＰＧ培地にて上記菌株を３０℃にて振どう培養し、対数
増殖後期の細胞を遠心分離（６、０００ｘｇ、１０分）
で集めマクイルパイン緩衝液（ｐＨ７，０）で洗浄した
。洗浄した菌体を、１０ｍＭ トリス−塩酸、１ ｍＭ
ＥＤＴＡ、０．８Ｍショ糖を含む緩衝液（ｐＨ７，
０）に懸濁した。この菌体懸濁液に、卵白リゾチーム（
シグマ社製）を２ ｍｇ／ｍＱ加え、３０°Ｃで３時間
反応させ、各菌株のスフェロプラストを得た。この各ス
フェロプラストを０．８Ｍショ糖を含む水溶液で３回洗
浄後、 ０．８Ｍショ糖を含む水溶液にｌＸｌ０１０個
／ｍ１２となる様に再び１艷濁した。各０．１＋＋＋Ｑ
を融合チャンバー５ＳＨ−Ｃｏｔ（株式会社島津製作所
製）に入れ、島津細胞融合装置ＳＳＩ＋−１（株式会社
島津製作所製）を用い酢酸菌スフェロプラストの電気的
融合を行った。高周波電界の周波数は１．０ＭＨｚ、
電圧は４０Ｖで２０秒間加えた。
続いて電界強度が１ 、５ｋＶ／ｃｎ＋、パルス幅が５
μｓｅｃの高電圧パルスを５回加えた。電気的融合処理
後、約２０分間チャンバーを静置した後、融合細胞を０
．５Ｍソルビ１−−ル、２％ゼラチンを含む最小寒天培
地に塗抹した。３０℃にて約５日間培養した後、平板上
に、アミノ酸要求性を有さない再生した融合株が得られ
た。
μｓｅｃの高電圧パルスを５回加えた。電気的融合処理
後、約２０分間チャンバーを静置した後、融合細胞を０
．５Ｍソルビ１−−ル、２％ゼラチンを含む最小寒天培
地に塗抹した。３０℃にて約５日間培養した後、平板上
に、アミノ酸要求性を有さない再生した融合株が得られ
た。
実施例２
実施例１と同じ２菌株を用いて、実施例１と同様の処理
により調製した各スフェロプラストｖＩ濁液を、０．５
Ｍソルビトールを含む水溶液で３回洗浄後、０．５Ｍソ
ルビトールを含む水溶液に１×１０１１１個／ｍ１２と
なる様に再び懸濁した。各０．１ｍＱを融合チャンバー
５ＳＩＩ−Ｃｏｔ（株式会社島津製作所製）に入れ。
により調製した各スフェロプラストｖＩ濁液を、０．５
Ｍソルビトールを含む水溶液で３回洗浄後、０．５Ｍソ
ルビトールを含む水溶液に１×１０１１１個／ｍ１２と
なる様に再び懸濁した。各０．１ｍＱを融合チャンバー
５ＳＩＩ−Ｃｏｔ（株式会社島津製作所製）に入れ。
島津細胞融合装置ＳＳＩ＋−１（株式会社島津製作所製
）を用い酢酸菌スフ二ロプラストの電気的融合を行った
。高周波電界の周波数は１．５ＭＨｚ、電圧は４０Ｖで
５秒間加えた。続いて電界強度が２．ＯｋＶ／ａｍ、パ
ルス幅が２０μｓｅｃの高電圧パルスを３回加えた。
）を用い酢酸菌スフ二ロプラストの電気的融合を行った
。高周波電界の周波数は１．５ＭＨｚ、電圧は４０Ｖで
５秒間加えた。続いて電界強度が２．ＯｋＶ／ａｍ、パ
ルス幅が２０μｓｅｃの高電圧パルスを３回加えた。
電気的融合処理後、約３０分間チャンバーを静置した後
、融合細胞を０．５Ｍソルビトール、３％デキストラン
を含む液体培地に懸濁し、３０℃にて４時間培養後、同
一組成の寒天培地に塗抹した。 ３０℃で約４日間培養
した後、平板上に、アミノ酸要求性を有さない再生した
融合株が得られた。
、融合細胞を０．５Ｍソルビトール、３％デキストラン
を含む液体培地に懸濁し、３０℃にて４時間培養後、同
一組成の寒天培地に塗抹した。 ３０℃で約４日間培養
した後、平板上に、アミノ酸要求性を有さない再生した
融合株が得られた。
代理人 弁理士 戸 １）親 男
Claims (7)
- （１）酢酸菌スフェロプラストを、浸透圧調節剤を含む
水溶液で洗浄した後、該洗浄スフェロプラストを浸透圧
調節剤を含む水溶液に懸濁し、高周波電界を加え、次い
で高電圧パルスを加えることにより酢酸菌スフェロプラ
ストを融合処理し、得られた融合細胞を浸透圧調節剤を
添加した培地又は浸透圧調節剤及び再生促進剤を添加し
た培地で再生することを特徴とする酢酸菌スフェロプラ
ストの電気的融合法。 - （２）浸透圧調節剤が、単糖類、二糖類、糖アルコール
である特許請求の範囲第１項記載の酢酸菌スフェロプラ
ストの電気的融合法。 - （３）浸透圧調節剤を含む水溶液が、電解質を全く含ま
ないことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の酢酸
菌スフェロプラストの電気的融合法。 - （４）高周波電解を加える際の周波数が０．２５ＭＨｚ
以上２．０ＭＨｚ以下、電圧が２０Ｖ以上４０Ｖ以下で
ある特許請求の範囲第１項記載の酢酸菌スフェロプラス
トの電気的融合法。 - （５）高電圧パルスの電界強度が０．５ｋＶ／ｃｍ以上
５．０ｋＶ／ｃｍ以下、パルス幅が５μｓｅｃ以上５０
μｓｅｃ以下である特許請求の範囲第１項記載の酢酸菌
スフェロプラストの電気的融合法。 - （６）再生促進剤が、ゼラチン、デキストラン、ポリビ
ニルピロリドン、牛血清アルブミン、馬血清の中から選
ばれた１種若しくは２種以上の再生促進剤である特許請
求の範囲第１項記載の酢酸菌スフェロプラストの電気的
融合法。 - （７）酢酸菌がアセトバクター属及びグルコノバクター
属に属する菌株である特許請求の範囲第１項記載の酢酸
菌スフェロプラストの電気的融合法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32726287A JPH01168290A (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | 酢酸菌スフェロプラストの電気的融合法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32726287A JPH01168290A (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | 酢酸菌スフェロプラストの電気的融合法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01168290A true JPH01168290A (ja) | 1989-07-03 |
Family
ID=18197153
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32726287A Pending JPH01168290A (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | 酢酸菌スフェロプラストの電気的融合法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01168290A (ja) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPS6027389A (ja) * | 1983-07-25 | 1985-02-12 | Yakult Honsha Co Ltd | 乳酸桿菌属の細菌のプロトプラストの融合、再生方法 |
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-
1987
- 1987-12-25 JP JP32726287A patent/JPH01168290A/ja active Pending
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