JPH01169360A - ウイルス抗体検出用試薬 - Google Patents
ウイルス抗体検出用試薬Info
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- JPH01169360A JPH01169360A JP32677487A JP32677487A JPH01169360A JP H01169360 A JPH01169360 A JP H01169360A JP 32677487 A JP32677487 A JP 32677487A JP 32677487 A JP32677487 A JP 32677487A JP H01169360 A JPH01169360 A JP H01169360A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は後天性免疫不全症候群関連ウィルス抗体検出用
試薬に関し、さらに詳しくは、遺伝子組み換えＨＩ Ｖ
抗原を用いた後天性免疫不全症候群関連ウィルス抗体検
出用間接凝集反応試薬に関する。
試薬に関し、さらに詳しくは、遺伝子組み換えＨＩ Ｖ
抗原を用いた後天性免疫不全症候群関連ウィルス抗体検
出用間接凝集反応試薬に関する。
［従来の技術］
後天性免疫不全症候群（Ａ ｃｑｕｉｒｅｄ Ｉｍｍｕ
ｎｏ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ二通
常ＡＩＤＳと呼ばれている）は、１９８１年に初めて認
められた新しい病気である［Ｍ、 Ｓ 、 Ｇ ｏｔ
ｔｉｌｂ ｅｔ ａｌ、、Ｎ、 Ｅｎｇ、 Ｊ、
Ｍｅｄ、、３０５．１４２５（１９８１）］。その後、
フランスでリンパ節疾患症候群（Ｌ ｙｎ＋ｐｈａｄｅ
ｎｏｐａｔｈｙ Ｓ ｙｎｄｒｏｍｅ ）患者からＬ
ＡＶとなすけられたレトロウィルスが［Ｆ、Ｂａｒ−ｒ
ｓ−Ｓ １ｎｏｕｓｓｉ ｅｔ ａｌ、＋５ｃｉｅｎ
ｃｅ、 ２２０．８６８（１９８３）］、そして、アメ
リカでＡＩＤＳ患者やｐｒｅ−ＡＩＤＳ患者からＨＴＬ
Ｖ−ｍ ［Ｍ、Ｐｏｐ−ｏｖｉｃ ｅｔａｌ、、５ｃ
ｉｅｎｃｅｓ ２２４．４９７ （１９８−４）］及び
ＡＲＶ ［Ｊ、 Ａ、 Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ、、
５ｃｉ−ｅｎｃｅ、 ２２５．８４０ （１９８４）
］ となずけられたレトロウィルスが相次いで発見され
た。最近、これらのＬＡＶＳＨＴＬＶ−Ｉ［［及びＡＲ
Ｖはその遺伝子の塩基配列が完全に解析され、これらの
レトロウィルスは同じウィルスの変異株であることが明
らかになった［ Ｌ 、 Ｒａｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ
、、Ｎ ａｔ −ｕｒｅ、３１３．２７７ （１９８５
） 、Ｒ，５ａｎ−ｃｈｅｚ Ｐｅ５ｃａｏｏｒ ｅ
ｔ ａｌ、＋５ｃｉｅｎｃｅ、 ２２７． ４−８４
（１９８５） 、 Ｓ、 ＷａｉｎＨｏｂｓｏｎ
ｅｔ ａｌ、。
ｎｏ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ二通
常ＡＩＤＳと呼ばれている）は、１９８１年に初めて認
められた新しい病気である［Ｍ、 Ｓ 、 Ｇ ｏｔ
ｔｉｌｂ ｅｔ ａｌ、、Ｎ、 Ｅｎｇ、 Ｊ、
Ｍｅｄ、、３０５．１４２５（１９８１）］。その後、
フランスでリンパ節疾患症候群（Ｌ ｙｎ＋ｐｈａｄｅ
ｎｏｐａｔｈｙ Ｓ ｙｎｄｒｏｍｅ ）患者からＬ
ＡＶとなすけられたレトロウィルスが［Ｆ、Ｂａｒ−ｒ
ｓ−Ｓ １ｎｏｕｓｓｉ ｅｔ ａｌ、＋５ｃｉｅｎ
ｃｅ、 ２２０．８６８（１９８３）］、そして、アメ
リカでＡＩＤＳ患者やｐｒｅ−ＡＩＤＳ患者からＨＴＬ
Ｖ−ｍ ［Ｍ、Ｐｏｐ−ｏｖｉｃ ｅｔａｌ、、５ｃ
ｉｅｎｃｅｓ ２２４．４９７ （１９８−４）］及び
ＡＲＶ ［Ｊ、 Ａ、 Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ、、
５ｃｉ−ｅｎｃｅ、 ２２５．８４０ （１９８４）
］ となずけられたレトロウィルスが相次いで発見され
た。最近、これらのＬＡＶＳＨＴＬＶ−Ｉ［［及びＡＲ
Ｖはその遺伝子の塩基配列が完全に解析され、これらの
レトロウィルスは同じウィルスの変異株であることが明
らかになった［ Ｌ 、 Ｒａｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ
、、Ｎ ａｔ −ｕｒｅ、３１３．２７７ （１９８５
） 、Ｒ，５ａｎ−ｃｈｅｚ Ｐｅ５ｃａｏｏｒ ｅ
ｔ ａｌ、＋５ｃｉｅｎｃｅ、 ２２７． ４−８４
（１９８５） 、 Ｓ、 ＷａｉｎＨｏｂｓｏｎ
ｅｔ ａｌ、。
Ｃｅ１ｌ、４０． （１９８５） ］。
このＡＩＤＳの病因ウィルスは一般にＨＩＶ （Ｈｕｍ
ａｎ Ｉ ｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｖ １
ｒｕｓ）と総称されているが、ＨＩＶはヒトとヒトとの
接触、輸血等により感染し、発病する。この際、感染し
たヒトの血液中にＡｌ５Ｄ関連ウイルスと特異的に反応
する抗体が生ずることも知られている。従ってこの抗体
を検出することによって、ＨＩＶ感染の有無を調べれば
、Ａｌ５Ｄの予防につながるものと考えられている。
ａｎ Ｉ ｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｖ １
ｒｕｓ）と総称されているが、ＨＩＶはヒトとヒトとの
接触、輸血等により感染し、発病する。この際、感染し
たヒトの血液中にＡｌ５Ｄ関連ウイルスと特異的に反応
する抗体が生ずることも知られている。従ってこの抗体
を検出することによって、ＨＩＶ感染の有無を調べれば
、Ａｌ５Ｄの予防につながるものと考えられている。
そこで、本発明者らは先に、ＨｒＶの抗原成分を感作し
た担体粒子からなるＡｌ５Ｄ関連ウィルス抗体検出用間
接凝集反応試薬を提案した（特開昭６２−１８２６６２
号公報参照）。
た担体粒子からなるＡｌ５Ｄ関連ウィルス抗体検出用間
接凝集反応試薬を提案した（特開昭６２−１８２６６２
号公報参照）。
一方、ＨＩＶはＲＮＡを核として持ち、これと逆転写酵
素を包む核タンパク（Ｃｏｒｅタンパク）と、さらにこ
れを包み込む外殻線タンパク（ｅｎｖタンパク）から構
成されている。
素を包む核タンパク（Ｃｏｒｅタンパク）と、さらにこ
れを包み込む外殻線タンパク（ｅｎｖタンパク）から構
成されている。
ＨＩＶの感染によって生体内ではこれらウィルスの構成
タンパクに対する抗体が産生されるが、これまでの研究
によれば、ＨＩＶには感染しているが発病していないい
わゆるキャリア群とＡ（ＤＳを発病した群との間で、ｐ
２４に代表されるＣ−ｏｒｅタンパクとｇｐ４１に代表
されるｅｎｖタンパクのそれぞれのタンパクに対する抗
体量に差異が見られたという報告がいくつか発表されて
いる。そしてＨＩ Ｖへの感染により通常ｃｏｒｅタン
パク及びｅｎｖタンパクの両方に対する抗体が産生され
るが、感染後ある程度の期間が経過すると、それらの産
生量に差異が生じ、ｃｏｒｅタンパクに対する抗体価が
低下しはじめる頃からＡＲＣ（Ａ Ｉ ＳＤ ｒｅｌ
−ａｂｅｄ ｃｏｕｐｌｅｘ ）の症状がではじめ、
Ａｌ５Ｄへと移行していくとの報告もされている（Ｊｏ
ｅｐｅｔ ａｌ、、Ｂｒ１ｔｉｓｈ Ｍｅｄ、 Ｊ
、 、 １９８６）。
タンパクに対する抗体が産生されるが、これまでの研究
によれば、ＨＩＶには感染しているが発病していないい
わゆるキャリア群とＡ（ＤＳを発病した群との間で、ｐ
２４に代表されるＣ−ｏｒｅタンパクとｇｐ４１に代表
されるｅｎｖタンパクのそれぞれのタンパクに対する抗
体量に差異が見られたという報告がいくつか発表されて
いる。そしてＨＩ Ｖへの感染により通常ｃｏｒｅタン
パク及びｅｎｖタンパクの両方に対する抗体が産生され
るが、感染後ある程度の期間が経過すると、それらの産
生量に差異が生じ、ｃｏｒｅタンパクに対する抗体価が
低下しはじめる頃からＡＲＣ（Ａ Ｉ ＳＤ ｒｅｌ
−ａｂｅｄ ｃｏｕｐｌｅｘ ）の症状がではじめ、
Ａｌ５Ｄへと移行していくとの報告もされている（Ｊｏ
ｅｐｅｔ ａｌ、、Ｂｒ１ｔｉｓｈ Ｍｅｄ、 Ｊ
、 、 １９８６）。
従って、抗ＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ ２４）クンバク
抗体及び抗ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１あるいはｐ
４１）タンパク抗体の検出は１（ｒＶへの感染からキャ
リアを経てＡＲＣ，ＡＩＤＳ発症へと移行する過程を追
跡する上で臨床的意義が極めて大きいといえる。
抗体及び抗ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１あるいはｐ
４１）タンパク抗体の検出は１（ｒＶへの感染からキャ
リアを経てＡＲＣ，ＡＩＤＳ発症へと移行する過程を追
跡する上で臨床的意義が極めて大きいといえる。
従来よりこれら抗ＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ ２４）タ
ンパク抗体、ＨＩ Ｖ −ｅｎｖ （ｇｐ４１あるい
はｐ４１）タンパク抗体をウェスターン・プロット法（
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法）又はＥＩＡ法で測定す
ることが提案されている ［ＬＡＮＣＥＴ、１９８６年
１１月２９日号１２３３〜１２３７頁参照］。しかし、
前者のウェスターン・プロット法はＨＩＶ抗原タンパク
成分をＳＤＳ電気電気泳動後口トロセルロース膜写し、
この膜を被検血清とＥＩＡ法やＲＩＡ法で反応させるも
のであるが、操作が煩雑で結果が出るまでに２日以上も
の時間がかかるという欠点がある。また後者のＥＩＡ法
（Ａｂｂｏｔ社法）においても、検体との反応に十数時
間を要し、反応の工程数も多く手段的にも煩雑である。
ンパク抗体、ＨＩ Ｖ −ｅｎｖ （ｇｐ４１あるい
はｐ４１）タンパク抗体をウェスターン・プロット法（
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法）又はＥＩＡ法で測定す
ることが提案されている ［ＬＡＮＣＥＴ、１９８６年
１１月２９日号１２３３〜１２３７頁参照］。しかし、
前者のウェスターン・プロット法はＨＩＶ抗原タンパク
成分をＳＤＳ電気電気泳動後口トロセルロース膜写し、
この膜を被検血清とＥＩＡ法やＲＩＡ法で反応させるも
のであるが、操作が煩雑で結果が出るまでに２日以上も
の時間がかかるという欠点がある。また後者のＥＩＡ法
（Ａｂｂｏｔ社法）においても、検体との反応に十数時
間を要し、反応の工程数も多く手段的にも煩雑である。
［本発明が解決しようとする問題点コ
本発明は、上記従来法における欠点を克服し、簡便で迅
速に抗ＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ ２４）タンパク抗体
及び抗ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１あるいはｐ４１
）タンパク抗体を検出することのできる検出用試薬を提
供することを目的とするものであり、本発明者らはこれ
を目的に鋭意検討を行った結果、今回、ＨＩ Ｖ−ｃｏ
ｒｅ （ｐ２４）クンバク及び／又はＨｒＶ−ｅｎｖ
（ｇｐ４１あるいはｐ４１）タンパクを成る特定のｐ
Ｈ条件下で感作した担体粒子を用いると、間接凝集反応
により、簡便かつ迅速に検体中の抗ＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ
（ｐ ２４）タンパク抗体、抗ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ
（ｇｐ４ Ｌあるいはｐ４１）タンパク抗体等を検出し
うろことを見い出し本発明を完成するに至った。
速に抗ＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ ２４）タンパク抗体
及び抗ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１あるいはｐ４１
）タンパク抗体を検出することのできる検出用試薬を提
供することを目的とするものであり、本発明者らはこれ
を目的に鋭意検討を行った結果、今回、ＨＩ Ｖ−ｃｏ
ｒｅ （ｐ２４）クンバク及び／又はＨｒＶ−ｅｎｖ
（ｇｐ４１あるいはｐ４１）タンパクを成る特定のｐ
Ｈ条件下で感作した担体粒子を用いると、間接凝集反応
により、簡便かつ迅速に検体中の抗ＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ
（ｐ ２４）タンパク抗体、抗ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ
（ｇｐ４ Ｌあるいはｐ４１）タンパク抗体等を検出し
うろことを見い出し本発明を完成するに至った。
［問題点を解決するための手段］
しかして、本発明によれば、ＨＩＶ−ｐ２４及び／又は
ＨＩＶ−ｇｐ４１あるいはｐ４１をｐＨ７，３〜８．５
において感作した担体粒子からなることを特徴とする後
天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連ウィルス抗体検出
用間接凝集反応試薬が提供される。
ＨＩＶ−ｇｐ４１あるいはｐ４１をｐＨ７，３〜８．５
において感作した担体粒子からなることを特徴とする後
天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連ウィルス抗体検出
用間接凝集反応試薬が提供される。
ＨＩＶ−ｐ２４はＨＩＶ（７）核に存在するＲＮＡをと
り囲む分子量が約２４００のｃｏｒｅタンパクの一種で
あり、またＨＩＶ−ｇｐ４１はＨＩＶの包被を構成する
糖タンパクの一種（分子量約４１００）でｐ４１はその
タンパクから糖を除いた成分であり、これらタンパクは
いずれも既知であり、例えば、ＡＮＡＬＹＴＩＣＡＬ
ＢＩＯＣＨＥＭＩ−３ＴＲＹ １６１３．３７０〜
３７９（１９８７）に記載の方法に従い、大腸苗等の菌
を用いた遺伝子組換え法によりＨＩＶ−ｐ２４及びＩ（
ＩＶ−ｐ４Ｌを得ることができ動物細胞を用いた遺伝子
組換え法によりＨＩ ｖ−ｇｐｔ ４１を得ることがで
きる。これらＨＩＶ−ｐ２４及びＨＩＶ−ｇｐ４１ある
いはｐ４１はそれぞれ単独で用いてもよく、或いは両者
を併用してもよい。
り囲む分子量が約２４００のｃｏｒｅタンパクの一種で
あり、またＨＩＶ−ｇｐ４１はＨＩＶの包被を構成する
糖タンパクの一種（分子量約４１００）でｐ４１はその
タンパクから糖を除いた成分であり、これらタンパクは
いずれも既知であり、例えば、ＡＮＡＬＹＴＩＣＡＬ
ＢＩＯＣＨＥＭＩ−３ＴＲＹ １６１３．３７０〜
３７９（１９８７）に記載の方法に従い、大腸苗等の菌
を用いた遺伝子組換え法によりＨＩＶ−ｐ２４及びＩ（
ＩＶ−ｐ４Ｌを得ることができ動物細胞を用いた遺伝子
組換え法によりＨＩ ｖ−ｇｐｔ ４１を得ることがで
きる。これらＨＩＶ−ｐ２４及びＨＩＶ−ｇｐ４１ある
いはｐ４１はそれぞれ単独で用いてもよく、或いは両者
を併用してもよい。
上記ＨＩＶ−ｐ２４及び／又はＨＩＶ−ｇｐ４１あるい
はｐ４１で感作するための担体粒子としては、間接凝集
反応に一般に使用されている免疫学的に不活性な粒子で
あれば特に制限はなく任意の担体を用いることができ、
例えば、ヒト、羊、ニワトリ等の動物の赤血球：ゼラチ
ン粒子（この粒子の製造法については特開昭５７−１５
３６５８号公報参照）等の人工の固体粒子が拳げられる
。
はｐ４１で感作するための担体粒子としては、間接凝集
反応に一般に使用されている免疫学的に不活性な粒子で
あれば特に制限はなく任意の担体を用いることができ、
例えば、ヒト、羊、ニワトリ等の動物の赤血球：ゼラチ
ン粒子（この粒子の製造法については特開昭５７−１５
３６５８号公報参照）等の人工の固体粒子が拳げられる
。
特にゼラチン粒子は非特異反応が少なく、用途に応じた
性質を付加できる等、ＡＩＤＳ関連ウィルス抗体検出の
ための間接凝集反応用担体として優れた長所を有してい
る。
性質を付加できる等、ＡＩＤＳ関連ウィルス抗体検出の
ための間接凝集反応用担体として優れた長所を有してい
る。
これから担体粒子へのＨＩＶ−ｐ２４及び／又はＨＩＶ
−ｇｐ４１あるいはｐ４１の感作は、それ自体既知の方
法を用いて行うことができ、例えばタンニン酸、グリタ
ールアルデヒド、ビスジアジベンジジン、トリレンジイ
ソシアネート、ジフロロジニトロベンゼン、カルボジイ
ミド類、キノン類、塩化クロム等のいわゆるカップリン
グ剤を使用して化学的に結合させる方法或いは物理的に
吸着させる方法などによって行うことができる。
−ｇｐ４１あるいはｐ４１の感作は、それ自体既知の方
法を用いて行うことができ、例えばタンニン酸、グリタ
ールアルデヒド、ビスジアジベンジジン、トリレンジイ
ソシアネート、ジフロロジニトロベンゼン、カルボジイ
ミド類、キノン類、塩化クロム等のいわゆるカップリン
グ剤を使用して化学的に結合させる方法或いは物理的に
吸着させる方法などによって行うことができる。
感作は弱アルカリ性の条件下で行うのがよく、特にｐＨ
７，３〜８．５、好ましくはｐＨ７，５〜８．０の範囲
内で行うのがよく、このｐＨ範囲外で感作した場合には
一般に検出感度に優れた試薬は得られない。例えば、後
記実施例１又は２に記載の方法と同様にしてゼラチン粒
子に各種ｐＨ条件下にＨＩＶ−ｇｐ４１又はＨＩＶ−ｐ
２４を感作させた場合の感作粒子の感度を試験した結果
を示せば下記第１表のとおりである。
７，３〜８．５、好ましくはｐＨ７，５〜８．０の範囲
内で行うのがよく、このｐＨ範囲外で感作した場合には
一般に検出感度に優れた試薬は得られない。例えば、後
記実施例１又は２に記載の方法と同様にしてゼラチン粒
子に各種ｐＨ条件下にＨＩＶ−ｇｐ４１又はＨＩＶ−ｐ
２４を感作させた場合の感作粒子の感度を試験した結果
を示せば下記第１表のとおりである。
垣−」−二り
一５■」シＨ−一−−じ１４！！ｊＬｉ 力１Ｆｉ
ｆＸｙ６、 ０ − −７
、０ ＋７、５
＝ ８、０ − ９、０ ＋１０．０
＋ 判定不能上記第１表において、−
は凝集反応が生じなかったことを、そして＋は凝集反応
が生じたことを示す。また、対照試験とは、ＡＩＤＳ関
連ウィルス抗体を全く含まない血清希釈溶液を検体とじ
て用いた試験であり、この試験で十の結果を示すのは偽
反応である。一方、力価試験は抗ＨＩＶ−ｅｎ−ｖ（ｇ
ｐ４１）タンパク抗体又はＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ２
４）タンパク抗体を含む血清溶液を検体として用いた試
験であり、十の数が多い程、感作担体の感度が高いこと
を示す。
ｆＸｙ６、 ０ − −７
、０ ＋７、５
＝ ８、０ − ９、０ ＋１０．０
＋ 判定不能上記第１表において、−
は凝集反応が生じなかったことを、そして＋は凝集反応
が生じたことを示す。また、対照試験とは、ＡＩＤＳ関
連ウィルス抗体を全く含まない血清希釈溶液を検体とじ
て用いた試験であり、この試験で十の結果を示すのは偽
反応である。一方、力価試験は抗ＨＩＶ−ｅｎ−ｖ（ｇ
ｐ４１）タンパク抗体又はＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ２
４）タンパク抗体を含む血清溶液を検体として用いた試
験であり、十の数が多い程、感作担体の感度が高いこと
を示す。
以上述べた如くして得られるＨＩＶ−ｐ２４及び／又は
ＨＩＶ−ｇｐ４１あるいはｐ４１で感作した担体粒子は
通常、凍結乾燥した状態で保存され、使用時に復元後、
間接凝集反応に供せられる。
ＨＩＶ−ｇｐ４１あるいはｐ４１で感作した担体粒子は
通常、凍結乾燥した状態で保存され、使用時に復元後、
間接凝集反応に供せられる。
本発明の感作担体粒子を用いる間接凝集反応によるＡＩ
ＤＳ関連ウィルス抗体の検出はそれ自体既知の間接凝集
反応法と全く同様にして行うことができ、例えばマイク
ロプレートのウェルに被検血清を入れてその希釈列を作
り、各ウェルに本発明の感作担体粒子を加えて混合し、
通常１〜２時間程度静置し、この感作担体粒子の凝集像
を観察して凝集の有無を判定することにより行われる。
ＤＳ関連ウィルス抗体の検出はそれ自体既知の間接凝集
反応法と全く同様にして行うことができ、例えばマイク
ロプレートのウェルに被検血清を入れてその希釈列を作
り、各ウェルに本発明の感作担体粒子を加えて混合し、
通常１〜２時間程度静置し、この感作担体粒子の凝集像
を観察して凝集の有無を判定することにより行われる。
より具体的に述べれば、感作担体粒子浮遊液をＡＩＤＳ
患者血清（検体）の二倍段階希釈液に９６穴マイクロプ
レートのウェルに等量ずつ加え、混合し、室温に静置す
る。１〜３時間後、各人を観察すると、希釈倍数の低い
穴には感作担体粒子が底−面に広がって、凝集像が見ら
れ、希釈倍数の高い所では、ボタン状となり凝集像が認
められない、一方、未感作担体粒子を用いた場合には低
希釈から高希釈の血清中いずれにも凝集像は見られない
。また、ＨＩ Ｖ抗体陰性ヒト血清について同様に検査
した場合には、感作担体粒子及び未感作担体粒子のいず
れを用いた場合にも凝集像は見られない。
患者血清（検体）の二倍段階希釈液に９６穴マイクロプ
レートのウェルに等量ずつ加え、混合し、室温に静置す
る。１〜３時間後、各人を観察すると、希釈倍数の低い
穴には感作担体粒子が底−面に広がって、凝集像が見ら
れ、希釈倍数の高い所では、ボタン状となり凝集像が認
められない、一方、未感作担体粒子を用いた場合には低
希釈から高希釈の血清中いずれにも凝集像は見られない
。また、ＨＩ Ｖ抗体陰性ヒト血清について同様に検査
した場合には、感作担体粒子及び未感作担体粒子のいず
れを用いた場合にも凝集像は見られない。
これにより、検体中に、感作担体粒子上のＨＩＶ−ｐ２
４又はＨＩＶ−ｇｐ４１あるいはｐ４１と特異的に反応
するＨＩＶ抗体［抗ＨＩ Ｖ −ｃｏｒｅ （ｐ２４
）タンパク抗体、抗ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１あ
るいはｐ４１）タンパク抗体など］が存在することが１
認できる。
４又はＨＩＶ−ｇｐ４１あるいはｐ４１と特異的に反応
するＨＩＶ抗体［抗ＨＩ Ｖ −ｃｏｒｅ （ｐ２４
）タンパク抗体、抗ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１あ
るいはｐ４１）タンパク抗体など］が存在することが１
認できる。
本発明の感作担体粒子は、ＡＩＤＳ関連ウィルス抗体検
出用試薬として、通常行なわれているように、未感作担
体、標準血清（対照用陽性血清）、検体希釈用溶液及び
必要に応じて感作粒子の凍結乾燥品熔解用溶液等と組合
わせることによりキット化して実用に供することができ
る。
出用試薬として、通常行なわれているように、未感作担
体、標準血清（対照用陽性血清）、検体希釈用溶液及び
必要に応じて感作粒子の凍結乾燥品熔解用溶液等と組合
わせることによりキット化して実用に供することができ
る。
尚、本発明にむいてはｐ４１をｇｐ４１に対して便宜上
使用したものであるが、正確にはｇｐ４１から糖の脱落
したタンパクを指すものである。
使用したものであるが、正確にはｇｐ４１から糖の脱落
したタンパクを指すものである。
［実 施 例］
次に実施例により、本発明の感作担体粒子の調製法及び
それを用いた間接凝集反応テストについてさらに具体的
に説明する。
それを用いた間接凝集反応テストについてさらに具体的
に説明する。
実施例 １
（１） ＨＩＶ−ｅｎｖ（ｇｐ４１）タンパク抗原感
作担体粒子の調製 特開昭５８−１１３７５４号公報の実施例１に記載され
た方法に従って製造したゼラチン粒子を５ ｐｐｍのタ
ンニン酸を含むｐＨ７，２の０．１５Ｍ リン酸塩緩衝
生理食塩液（以下０．１５ＭＰＢＳ （ｐＨ７，２）と
略記する）中に粒子濃度が２．５％になるように分散さ
せ、３７゛Ｃで１０分間加温した。この粒子を遠心分離
して回収し、生理食塩液で３回遠心分離法で洗浄してか
ら０゜１５Ｍ ＰＢＳ （ｐＨ８，０）に５％になる
ように分散させた。
作担体粒子の調製 特開昭５８−１１３７５４号公報の実施例１に記載され
た方法に従って製造したゼラチン粒子を５ ｐｐｍのタ
ンニン酸を含むｐＨ７，２の０．１５Ｍ リン酸塩緩衝
生理食塩液（以下０．１５ＭＰＢＳ （ｐＨ７，２）と
略記する）中に粒子濃度が２．５％になるように分散さ
せ、３７゛Ｃで１０分間加温した。この粒子を遠心分離
して回収し、生理食塩液で３回遠心分離法で洗浄してか
ら０゜１５Ｍ ＰＢＳ （ｐＨ８，０）に５％になる
ように分散させた。
ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１）タンパク抗原を０．
１５Ｍ ＰＢＳ （ｐＨ８，０）で２０Ｍｇ／ｌＩ
Ｉ！！になるように希釈し、前記のタンニン酸処理粒子
分散液に等容のこの希釈液を混合して３７°Ｃで９０分
間加温し、粒子にＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１）タ
ンパク抗原を感作させた。この感作粒子を生理食塩液で
３回遠心洗浄してから浮遊分散液（リン酸水素二ナトリ
ウム・１２水塩１，９２０ｇ、リン酸二水素カリウム０
．２９１ｇ、塩化ナトリウム０．４３８ｇ、アラビアゴ
ム０．２５ｇ、グリシン１．５ｇ、アジ化ナトリウム０
．１ｇ及び正常家兎血清１．０ｍｌを全量１００ｍｊ！
になるように、精製水に溶解した液）に分散させた。こ
の分散液を凍結乾燥し、ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４
１）タンパク抗原感作ゼラチン粒子の凍結乾燥品を得た
。
１５Ｍ ＰＢＳ （ｐＨ８，０）で２０Ｍｇ／ｌＩ
Ｉ！！になるように希釈し、前記のタンニン酸処理粒子
分散液に等容のこの希釈液を混合して３７°Ｃで９０分
間加温し、粒子にＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１）タ
ンパク抗原を感作させた。この感作粒子を生理食塩液で
３回遠心洗浄してから浮遊分散液（リン酸水素二ナトリ
ウム・１２水塩１，９２０ｇ、リン酸二水素カリウム０
．２９１ｇ、塩化ナトリウム０．４３８ｇ、アラビアゴ
ム０．２５ｇ、グリシン１．５ｇ、アジ化ナトリウム０
．１ｇ及び正常家兎血清１．０ｍｌを全量１００ｍｊ！
になるように、精製水に溶解した液）に分散させた。こ
の分散液を凍結乾燥し、ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４
１）タンパク抗原感作ゼラチン粒子の凍結乾燥品を得た
。
（２） ｗ！、検体希釈用溶液の調製リン酸水素二ナ
トリウム・１２水塩１．９２０ｇ１リン酸二水素カリウ
ム０．２９１ｇ、塩化ナトリウム０．４３８ｇ、アラビ
アゴム０．２５ｇ。
トリウム・１２水塩１．９２０ｇ１リン酸二水素カリウ
ム０．２９１ｇ、塩化ナトリウム０．４３８ｇ、アラビ
アゴム０．２５ｇ。
アジ化ナトリウム０．１５ｇ、を全ＪＲ１００ｍ７！に
なるように精製水に溶解して血清希釈溶液とした。
なるように精製水に溶解して血清希釈溶液とした。
（３） キットの調製
感作担体粒子の凍結乾燥品のほかに抗原未感作担体粒子
の凍結乾燥品及び対照用陽性血清の凍結乾燥品も別途に
羽製し、感作粒子溶解用溶液及び被験血清希釈用溶液を
組合わせ、抗ＨｒＶ−ｅｎｖ（ｇｐ４１）タンパク抗体
検出用試薬キットとした。
の凍結乾燥品及び対照用陽性血清の凍結乾燥品も別途に
羽製し、感作粒子溶解用溶液及び被験血清希釈用溶液を
組合わせ、抗ＨｒＶ−ｅｎｖ（ｇｐ４１）タンパク抗体
検出用試薬キットとした。
実施例 ２
（１） ＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ ２４）タンパク抗
原感作担体粒子の調製 実施例１で用いたＨ Ｉ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１
）タンパク抗原の代わりにＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ
２４）タンパク抗原（セントコア社製）を用い、同様な
操作をくり返すことにより感作担体粒子を調製した。
原感作担体粒子の調製 実施例１で用いたＨ Ｉ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１
）タンパク抗原の代わりにＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ
２４）タンパク抗原（セントコア社製）を用い、同様な
操作をくり返すことにより感作担体粒子を調製した。
（２） キットの調製
実施例１と同様な試薬を用いＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ
２４）タンパク抗体検出用試薬キットとした。
２４）タンパク抗体検出用試薬キットとした。
実施例 ３
実施例１及び２で得られた試薬キットを用い、各種被検
血清について間接凝集反応テストを行なった。
血清について間接凝集反応テストを行なった。
得られた結果を下記第２表に示す。
上記第２表に示す結果より、本発明に従うＨＩＶ−ｅｎ
ｖ （ｇｐ４１）タンパク抗原感作担体粒子及びＨＩ
Ｖ−ｃｏｒｅ（ρ２４）タンパク抗原怒作粒子を用いた
間接凝集反応は、抗ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１）
タンパク抗体及び抗ＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ ２４）
タンパク抗体の検出において、ウェスタンプロット法と
比べ同等の検出感度及び特異性を有することがわかる。
ｖ （ｇｐ４１）タンパク抗原感作担体粒子及びＨＩ
Ｖ−ｃｏｒｅ（ρ２４）タンパク抗原怒作粒子を用いた
間接凝集反応は、抗ＨＩ Ｖ−ｅｎｖ （ｇｐ４１）
タンパク抗体及び抗ＨＩ Ｖ−ｃｏｒｅ （ｐ ２４）
タンパク抗体の検出において、ウェスタンプロット法と
比べ同等の検出感度及び特異性を有することがわかる。
［発明の効果］
本発明の試薬を用いれば、間接凝集反応により、多数の
検体を簡便な操作で迅速に測定することができる。例え
ば、螢光抗体法あるいは酵素抗体法の場合、検査開始か
ら結果がでるまで洗浄も加え回数の操作を必要とするが
、本発明の試薬を用いた場合、希釈血清に加えるだけで
、あとは結果がでるまで静置しておけばよく、非常に簡
便である。
検体を簡便な操作で迅速に測定することができる。例え
ば、螢光抗体法あるいは酵素抗体法の場合、検査開始か
ら結果がでるまで洗浄も加え回数の操作を必要とするが
、本発明の試薬を用いた場合、希釈血清に加えるだけで
、あとは結果がでるまで静置しておけばよく、非常に簡
便である。
また、結果の判定には特殊な器材を何ら必要とせず肉眼
で判定することができる。これらの点は、多数の検体の
検査に通している。
で判定することができる。これらの点は、多数の検体の
検査に通している。
ＡＩＤＳ関連ウィルス抗体が検出された場合、ＡＩＤＳ
関連ウィルスを体内に保有していると考えられるので、
本発明の試薬を用い、ＡＩＤＳ関連ウィルス抗体の有無
を検査することにより、接触及び輸血などによる感染を
防止しうるので臨床上非常に有用である。
関連ウィルスを体内に保有していると考えられるので、
本発明の試薬を用い、ＡＩＤＳ関連ウィルス抗体の有無
を検査することにより、接触及び輸血などによる感染を
防止しうるので臨床上非常に有用である。
特許出願人 冨士レビオ株式会社
Claims (1)
- ＨＩＶ核タンパク及び／又はＨＩＶ外殻タンパクをｐ
Ｈ７．３〜８．５において感作した担体粒子からなるこ
とを特徴とする後天性免疫不全症候群関連ウィルス抗体
検出用間接凝集反応試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62326774A JP2587969B2 (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | ウイルス抗体検出用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62326774A JP2587969B2 (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | ウイルス抗体検出用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01169360A true JPH01169360A (ja) | 1989-07-04 |
| JP2587969B2 JP2587969B2 (ja) | 1997-03-05 |
Family
ID=18191546
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62326774A Expired - Lifetime JP2587969B2 (ja) | 1987-12-25 | 1987-12-25 | ウイルス抗体検出用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2587969B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04175657A (ja) * | 1990-11-08 | 1992-06-23 | Tokuyama Soda Co Ltd | 免疫学的凝集反応試薬の製造方法及び免疫学的凝集反応粒子溶解用液 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6457171A (en) * | 1987-05-01 | 1989-03-03 | Kenburitsuji Baiosaiensu Corp | Detection of antibody against human immune failure virus by agglutination of antigen cover latex |
-
1987
- 1987-12-25 JP JP62326774A patent/JP2587969B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6457171A (en) * | 1987-05-01 | 1989-03-03 | Kenburitsuji Baiosaiensu Corp | Detection of antibody against human immune failure virus by agglutination of antigen cover latex |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04175657A (ja) * | 1990-11-08 | 1992-06-23 | Tokuyama Soda Co Ltd | 免疫学的凝集反応試薬の製造方法及び免疫学的凝集反応粒子溶解用液 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2587969B2 (ja) | 1997-03-05 |
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