JPH01174371A - 細胞融合チャンバ - Google Patents
細胞融合チャンバInfo
- Publication number
- JPH01174371A JPH01174371A JP62335700A JP33570087A JPH01174371A JP H01174371 A JPH01174371 A JP H01174371A JP 62335700 A JP62335700 A JP 62335700A JP 33570087 A JP33570087 A JP 33570087A JP H01174371 A JPH01174371 A JP H01174371A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- electrodes
- space
- dividing
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/02—Electrical or electromagnetic means, e.g. for electroporation or for cell fusion
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Electromagnetism (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は電気刺激を利用して細胞とおしを融合させるた
めに、細胞懸濁液を収容する空間に対向電極を備え、そ
の電極間に電圧を印加して細胞に電界を印加する細胞融
合チャンバに関するものである。
めに、細胞懸濁液を収容する空間に対向電極を備え、そ
の電極間に電圧を印加して細胞に電界を印加する細胞融
合チャンバに関するものである。
（従来の技術）
細胞融合チャンバでは細胞懸濁液を収容する空間に対向
電極を備えている。電極間に細胞懸濁液を入れ、細胞が
電極間の底部に沈澱した後に電界を印加する。細胞融合
をさせる場合は、初めに交流電界を印加して細胞に誘電
電気泳動を起こさせて細胞どおしを接触させ、その後、
高電圧直流パルス電界を印加することによって融合した
細胞に一過的膜破壊を生じさせて細胞どおしを融合させ
る。
電極を備えている。電極間に細胞懸濁液を入れ、細胞が
電極間の底部に沈澱した後に電界を印加する。細胞融合
をさせる場合は、初めに交流電界を印加して細胞に誘電
電気泳動を起こさせて細胞どおしを接触させ、その後、
高電圧直流パルス電界を印加することによって融合した
細胞に一過的膜破壊を生じさせて細胞どおしを融合させ
る。
（発明が解決しようとする問題点）
従来の細胞融合チャンバでは電極間の底面は１つである
。電極間に入れられた細胞懸濁液の細胞が全てその底面
上に沈澱するには時間がかかる。
。電極間に入れられた細胞懸濁液の細胞が全てその底面
上に沈澱するには時間がかかる。
また、全細胞が狭い底面上に沈澱すると細胞濃度が高く
なりすぎて交流電界により細胞どおしを接触させたとき
多数の細胞が接触してマルチペアとなり、健全な融合細
胞が得られにくくなる。細胞融合は一対の細胞が融合し
てシングルペアとなる方が好ましい。
なりすぎて交流電界により細胞どおしを接触させたとき
多数の細胞が接触してマルチペアとなり、健全な融合細
胞が得られにくくなる。細胞融合は一対の細胞が融合し
てシングルペアとなる方が好ましい。
本発明は、細胞懸濁液が収容される空間の電極間の底面
の面積を大きくすることによって、細胞が沈澱する時間
を短縮すると件もに、健全な融合細胞を多く得ることの
できる細胞融合チャンバを提供することを目的とするも
のである。
の面積を大きくすることによって、細胞が沈澱する時間
を短縮すると件もに、健全な融合細胞を多く得ることの
できる細胞融合チャンバを提供することを目的とするも
のである。
（問題点を解決するための手段）
本発明では、対向電極を備えて細胞懸濁液を収容できる
空間に、細胞融合処理時に互いに平行な複数の底面を形
成する絶縁物製の仕切り部材を備えた。
空間に、細胞融合処理時に互いに平行な複数の底面を形
成する絶縁物製の仕切り部材を備えた。
（作用）
対向電極間に仕切り部材が存在し、細胞懸濁液が収容さ
れた状態で仕切り部材の底面が水平となるように静置す
る。仕切り部材の底面の面積の合計は対向電極間のチャ
ンバの底面の面積よりも大きい。細胞懸濁液中の細胞は
仕切り部材の底面上に沈澱する。
れた状態で仕切り部材の底面が水平となるように静置す
る。仕切り部材の底面の面積の合計は対向電極間のチャ
ンバの底面の面積よりも大きい。細胞懸濁液中の細胞は
仕切り部材の底面上に沈澱する。
細胞沈澱後、所定の電気融合の処理を施す。
（実施例）
第１図から第３図に一実施例を表わす。第１図、第２図
は垂直断面図であり、第３図は水平断面図である。第１
図は第３図のＡ−Ａ線位置で切断した状態を表わし、第
２図は第３図のＢ−Ｂ線位置で切断した状態を表わし、
第３図は第１図のＣ−Ｃ線位置で切断した状態を表わし
ている。
は垂直断面図であり、第３図は水平断面図である。第１
図は第３図のＡ−Ａ線位置で切断した状態を表わし、第
２図は第３図のＢ−Ｂ線位置で切断した状態を表わし、
第３図は第１図のＣ−Ｃ線位置で切断した状態を表わし
ている。
１は円筒形の樹脂製ボディであり、その底部には透明ガ
ラス製の底板２が接着されている。底板２上には一対の
対向電極３−１．３−２が接着されている。
ラス製の底板２が接着されている。底板２上には一対の
対向電極３−１．３−２が接着されている。
電極３−１．３−２はその対向面の底部側の面３ａがと
もに底板２の面に対して垂直になるように加工され、か
つ、互いに平行になるように位置決めされている。電極
３−１．．３−２の対向面の上部の面３ｂはともに外方
向に向って開くように傾斜している。
もに底板２の面に対して垂直になるように加工され、か
つ、互いに平行になるように位置決めされている。電極
３−１．．３−２の対向面の上部の面３ｂはともに外方
向に向って開くように傾斜している。
電極３−１，３−２とボディ１の間は絶縁製樹脂４で充
填され、この樹脂４によって電極３−１゜３−２がボデ
ィｌに接着され、さらに底板２もボディ１に接着されて
いる。
填され、この樹脂４によって電極３−１゜３−２がボデ
ィｌに接着され、さらに底板２もボディ１に接着されて
いる。
電極３−１．３−２にはそれぞれボディ１の外部に設け
られた端子５−１．５−２がボディ１を貫通して接続さ
れている。
られた端子５−１．５−２がボディ１を貫通して接続さ
れている。
ボディｌの外壁の上部にはネジが設けられている。６は
ボディ１の上部開口を閉じる蓋であり、蓋６にもボディ
１のネジと噛み合うネジが設けられている。
ボディ１の上部開口を閉じる蓋であり、蓋６にもボディ
１のネジと噛み合うネジが設けられている。
７は絶縁製樹脂にてなる仕切り部材であり、仕切り部材
７は第４図に示されるように下部に電極３−１．３−２
間の空間に挿入される仕切り板８が複数枚設けられてい
る。仕切り板８が設けられている仕切り部材の本体側は
、第４図で仕切り板８から本体側に向って広がるような
傾斜面８ａ’＋８８をもっている。
７は第４図に示されるように下部に電極３−１．３−２
間の空間に挿入される仕切り板８が複数枚設けられてい
る。仕切り板８が設けられている仕切り部材の本体側は
、第４図で仕切り板８から本体側に向って広がるような
傾斜面８ａ’＋８８をもっている。
仕切り部材７は、第２図に示されるように電極３−１．
３−２間に挿入される。仕切り板８の先端は底板２の面
に接触してその面と直交する。仕切り部材７の基端面７
ｂは蓋６をボディ１にネジ止めすることによって蓋６の
裏面で押しつけられ、仕切り板８の先端が底板４に押し
つけられるとともに、傾斜面７ａ、７ａが電極３−１．
３−２の傾斜面３ｂ、３ｂにそれぞれ押しつけられて電
極間３−１．３−２で細胞懸濁液を収容する空間を密閉
し、かつ、各仕切り板８でその空間を仕切る。
３−２間に挿入される。仕切り板８の先端は底板２の面
に接触してその面と直交する。仕切り部材７の基端面７
ｂは蓋６をボディ１にネジ止めすることによって蓋６の
裏面で押しつけられ、仕切り板８の先端が底板４に押し
つけられるとともに、傾斜面７ａ、７ａが電極３−１．
３−２の傾斜面３ｂ、３ｂにそれぞれ押しつけられて電
極間３−１．３−２で細胞懸濁液を収容する空間を密閉
し、かつ、各仕切り板８でその空間を仕切る。
次に、本実施例を用いた細胞融合操作を説明する。
蓋６がボディ１から取り外され、仕切り部材７も取り外
された状態で、電極間３−１．３−２の空間に細胞懸濁
液９を入れる。
された状態で、電極間３−１．３−２の空間に細胞懸濁
液９を入れる。
次に、第２図に示されるように仕切り部材７を電極３−
１．３−２間に入れ、蓋６をボディ１にネジ止めする。
１．３−２間に入れ、蓋６をボディ１にネジ止めする。
これにより、細胞懸濁液９はボディ１、電極３−１．３
−２、底板２及び仕切り部材７によって密閉され、かつ
、仕切り板８により複数の空間に区切られた状態となる
。
−２、底板２及び仕切り部材７によって密閉され、かつ
、仕切り板８により複数の空間に区切られた状態となる
。
その後、仕切り板８が水平方向になるように、例えば第
１図で端子の設けられている側が上になるようにチャン
バを立てる。
１図で端子の設けられている側が上になるようにチャン
バを立てる。
その状態でチャンバを静置すると、各仕切り板８上に細
胞が沈澱してくる。細胞が沈澱して安定した頃を見計ら
って端子５−１〜５−２から、初めに交流電圧を印加し
て細胞どおしを接触させ、その後所定の高電圧直流パル
スを印加して細胞融合を起こさせる。
胞が沈澱してくる。細胞が沈澱して安定した頃を見計ら
って端子５−１〜５−２から、初めに交流電圧を印加し
て細胞どおしを接触させ、その後所定の高電圧直流パル
スを印加して細胞融合を起こさせる。
細胞融合処理終了後は、チャンバを図に示されるように
横方向に戻し、蓋６を取り外し、仕切り部材７も取り外
して細胞懸濁液９を回収する。
横方向に戻し、蓋６を取り外し、仕切り部材７も取り外
して細胞懸濁液９を回収する。
第５図は本発明をセル型チャンバに適用した実施例を表
わす。
わす。
１０はチャンバのボディ、１１−１．１１−２は対向電
極、１４は電＠１ｌ−１，１１−２をボディ１ｏに接着
する絶縁製樹脂である。
極、１４は電＠１ｌ−１，１１−２をボディ１ｏに接着
する絶縁製樹脂である。
対向電極１１−１．１１−２間には互いに平行な仕切り
板を複数個有する仕切り部材１２が入れられている。電
極１１−１．１１−２の対向面は垂直方向を向き、仕切
り部材１２の仕切り板は水平方向を向いている。
板を複数個有する仕切り部材１２が入れられている。電
極１１−１．１１−２の対向面は垂直方向を向き、仕切
り部材１２の仕切り板は水平方向を向いている。
電極間１１−１．１１−２には細胞懸濁液９が入れられ
、細胞が仕切り部材１２の各仕切り板上に沈澱した後に
細胞融合のための所定の電気処理が施される。
、細胞が仕切り部材１２の各仕切り板上に沈澱した後に
細胞融合のための所定の電気処理が施される。
仕切り部材１２は、例えば第６図に示されるように互い
に平行になるように一体化された、例えば樹脂製のもの
であり、細胞懸濁液はその仕切り部材１２と電極１１−
１．１１−２の隙間又は仕切り部材１２とボディ１０の
隙間を通って上部から注ぎ込むことができる。
に平行になるように一体化された、例えば樹脂製のもの
であり、細胞懸濁液はその仕切り部材１２と電極１１−
１．１１−２の隙間又は仕切り部材１２とボディ１０の
隙間を通って上部から注ぎ込むことができる。
細胞懸濁液９を注入するために、又例えば第６図に示さ
れるように、各仕切り板に孔１３をあ番プ、その孔１３
を経て細胞懸濁液９を注入するようにしてもよい。
れるように、各仕切り板に孔１３をあ番プ、その孔１３
を経て細胞懸濁液９を注入するようにしてもよい。
（発明の効果）
本発明では、対向電極を備えて細胞懸濁液を収容できる
空間に、細胞融合処理時に互いに平行な複数の底面を形
成する絶縁物製の仕切り部材を備えたので、対向電極間
で細胞が沈澱することのできる底面の面積が増え、細胞
の沈澱に要する時間が短かくなって所定の融合処理時間
を短縮することができる。
空間に、細胞融合処理時に互いに平行な複数の底面を形
成する絶縁物製の仕切り部材を備えたので、対向電極間
で細胞が沈澱することのできる底面の面積が増え、細胞
の沈澱に要する時間が短かくなって所定の融合処理時間
を短縮することができる。
また、細胞は底面上に適当な密度で安定して沈澱し、細
胞の融合数を高めることができる。
胞の融合数を高めることができる。
また、塩濃度が高いときの細胞懸濁液の対流を抑え、融
合を容易に行なうことができる。
合を容易に行なうことができる。
第１図は一実施例を表わす垂直断面図、第２図も同実施
例を表わす垂直断面図、第３図は同実施例の水平断面図
であり、第１図は第３図のＡ−Ａ線位置で切断した状態
を表わし、第２図は第３図のＢ−Ｂ線位置で切断した状
態を表わし、第３図は第１図のＣ−Ｃ線位置で切断した
状態を表わしている。第４図は同実施例における仕切り
部材を示す斜視図、第５図は本発明をセル型チャンバに
適用した実施例を表わす垂直断面図、第６図は同実施例
における仕切り部材を示す斜視図である。 １．１０・・・・・・ボディ、 ２・・・・・・底板、 ３−１．３−２．１１−１．１１−２・・・・・・対向
電極、 ７．１２・・・・・・仕切り部材、 ８・・・・・・仕切り板、 ９・・・・・・細胞懸濁液。 特許出願人 株式会社島津製作所
例を表わす垂直断面図、第３図は同実施例の水平断面図
であり、第１図は第３図のＡ−Ａ線位置で切断した状態
を表わし、第２図は第３図のＢ−Ｂ線位置で切断した状
態を表わし、第３図は第１図のＣ−Ｃ線位置で切断した
状態を表わしている。第４図は同実施例における仕切り
部材を示す斜視図、第５図は本発明をセル型チャンバに
適用した実施例を表わす垂直断面図、第６図は同実施例
における仕切り部材を示す斜視図である。 １．１０・・・・・・ボディ、 ２・・・・・・底板、 ３−１．３−２．１１−１．１１−２・・・・・・対向
電極、 ７．１２・・・・・・仕切り部材、 ８・・・・・・仕切り板、 ９・・・・・・細胞懸濁液。 特許出願人 株式会社島津製作所
Claims (1)
- 対向電極を備えて細胞懸濁液を収容できる空間を形成し
、前記空間にあって細胞融合処理時に互いに平行な複数
の底面を形成する絶縁物製の仕切り部材を備えた細胞融
合チャンバ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62335700A JPH01174371A (ja) | 1987-12-29 | 1987-12-29 | 細胞融合チャンバ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62335700A JPH01174371A (ja) | 1987-12-29 | 1987-12-29 | 細胞融合チャンバ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01174371A true JPH01174371A (ja) | 1989-07-10 |
Family
ID=18291504
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62335700A Pending JPH01174371A (ja) | 1987-12-29 | 1987-12-29 | 細胞融合チャンバ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01174371A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993002178A1 (en) * | 1991-07-22 | 1993-02-04 | Schmukler Robert E | Apparatus and methods for electroporation and electrofusion |
| JP2005520542A (ja) * | 2002-03-20 | 2005-07-14 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ，インコーポレイティド | エレクトロポーレションチャンバ |
-
1987
- 1987-12-29 JP JP62335700A patent/JPH01174371A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993002178A1 (en) * | 1991-07-22 | 1993-02-04 | Schmukler Robert E | Apparatus and methods for electroporation and electrofusion |
| JP2005520542A (ja) * | 2002-03-20 | 2005-07-14 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ，インコーポレイティド | エレクトロポーレションチャンバ |
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