JPH01181797A - Ｄ−スレオ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は一般式 （ここにＲｌ　、　Ｒ２は同一または相異なって水素、
メチル、ベンジル基を示し　Ｒｌ　、　ＲＺがメチレン
基で置換されて五員環を形成してもよい。）で表される
ラセミ−スレオ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル
）セリン誘導体（以下、ラセミースレオードーブス誘導
体と略す。）のＬ体のみを、微生物酵素の作用を利用し
て１．対応するプロトカテキュアルデヒド誘導体と、グ
リシンに立体特異的に分解し、Ｄ−スレオードーブス誘
導体のみを製造しようとする方法に関する。

本発明で製造するＤ−スレオードーブス誘導体は医薬品
として有用なり一スレオードーブス（特開昭５１−３２
５４０号公報）合成の重要な中間体である。

（従来の技術） Ｄ−スレオードープスは従来、プロトカテキュアルデヒ
ド誘導体とグリシンを強アルカリ下で縮合して得られる
ラセミースレオードーブス誘導体を化学的に光学分割し
、得られた０体のカテコール部分の保護基を化学的に除
去することにより合成されていた（特開昭５８−１２１
２５８号公報、特開昭５８−２１６１４６号公報）。し
かしながら、この方法は（１）光学分割剤として用いる
光学活性アミンが高価であり、操作が複雑で収率が悪い
、（２）残りの光学対掌体をラセミ化させる必要がある
、などの理由で工業的製造法としては有利な方法とは言
えない。

（発明が解決しようとする問題点） そこで、本発明者らは、ラセミースレオードープス誘導
体のＬ体のみを立体特異的にプロトカテキュアルデヒド
誘導体とグリシンに分解すれば、高価な光学分割剤の必
要もなく選択的にＤ−スレオードーブスの合成中間体で
あるＤ−スレオードーブス誘導体を得ることができると
考えた。この方法にかかわる不斉分解を用いる製造法、
特に微生物を用いる方法は、従来全く知られておらず新
規なものである。また、微生物による分解の結果、生成
したプロトカテキュアルデヒド誘導体とグリシンは、反
応液中から回収できるので、再度、前記の化学的合成法
でラセミースレオードーブス誘導体に縮合し、リサイク
ルさせれば、煩雑なラセミ化を行わずに無駄な（Ｄ−ス
レオードーブス誘導体を得ることができる。

（問題点を解決するための手段） そこで本発明者らは、前記微生物を用いる選択的なり一
スレオードーブス誘導体の合成方法を確立すべく鋭意研
究し、ラセミースレオードーブス誘導体のＬ体を立体特
異的にプロトカテキュアルデヒド誘導体とグリシンに分
解する微生物を広く自然界に求め、その結果、ある種の
微生物に分解能力があることを見出し、本発明に到達し
た。

すなわち本発明は、ラセミースレオードープス”誘導体
のＬ体のみを微生物を用いて分解し、選択的にＤ−スレ
オードーブス誘導体を得、これより、医薬品として有用
なり一スレオードーブスを製造することを目的とするも
のである。

本発明に使用される微生物は、Ｌ−スレオードーブス誘
導体を分解する能力があれば特に限定されるものではな
いが、就中、バチルス属、コリネバクテリウム属、アル
スロバクタ−属、シュードモナス属、モナスカス属、ノ
イロスポラ属、フサリウム属、ギベレラ属、ビソクラミ
ス属に属する微生物よりなる群Ｘより選ばれた少なくと
も１種の微生物を用いれば良好な結果が得られる。これ
らの微生物を培養するための培地は、使用する菌株によ
り多少異なるが、本発明の方法に関与する酵素の生成に
はさほど複雑な条件を必要としないため、はとんど全て
の培養基質は使用可能である。

−例をあげれば、炭素源としては、グルコース、フラク
トース、シュークロース、マルトース、澱粉、糖蜜、グ
リセリンなどの糖質および糖アルコール、クエン酸、酢
酸、フマール酸などの有機酸、エタノール、プロパツー
ルなどのアルコールなど、窒素源としては、硫酸アンモ
ニウム、塩化アンモニウムなどの無機アンモニウム化合
物および有機アンモニウム化合物、尿素、硝酸カリウム
、アンモニア水などの窒素化合物、ペプトン、肉エキス
、カザミノ酸、コーンスチープリカー、酵母エキス、ア
ミノ酸などの含窒素有機化合物など、無機塩類としては
、リン酸第−カリウム、リン酸第二カリウム、硫酸マグ
ネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カルシウムなどが用い
られるが、もちろん、これらに限定されるものではない
。さらに、場合によりスレオニンを培地に添加すること
により、より分解活性が高められることがある。

この培地に菌株を接種し、好気的または嫌気的に培養す
る。培養温度は好ましくは２０℃〜４０℃、ＰＨは好ま
しくは４〜８である。通常２〜６日の培養で菌を生育さ
せる。

基質のラセミースレオードーブス誘導体は、培養初期か
ら培地に加えておいてもよいし、数回に分けて添加する
方法が良い結果を与える場合もある。さらに、培養液か
ら取り出した菌体をラセミースレオードーブス誘導体を
含有する反応系に加えて反応させてもよい。アセトンパ
ウダー化、超音波処理、界面活性剤処理、トルエン・エ
タノール処理などの前処理で基質の細胞膜透過性を同上
させた菌体を用いてもよい。菌体破砕液や固定化菌体を
用いてもよく、反応系に界面活性剤を０．１〜Ｑ、５ｗ
／ｖ％添加する方法が良い結果を与える場合もある。ピ
リドキシン、ピリドキサール、ピリドキサール−５−リ
ン酸を反応系に添加することによって、反応が高められ
ることがある。

反応はｐＨ５〜９、好ましくは７〜８、温度２０〜４０
°Ｃ１好ましくは２５〜３０℃で行う。

反応時間は６〜６０時間が適当であるが、菌種によって
、これらの反応条件を適宜選択することが必要である。

さもないと、Ｌ一体の分解が不完全であったり、Ｌ一体
のみならずＤ−スレオードープス誘導体までも、分解さ
れる恐れがあるためである。

反応混合物中に残ったＤ−スレオードーブス誘導体を単
離するには、イオン交換樹脂、溶媒抽出などの常法によ
り行う、単離後、塩化アルミニウム、臭化アルミニウム
、三塩化ホウ素などのルイス酸で処理することにより、
容易に、目的とするＤ−スレオードーブスを得ることが
できる。

なお一般式（１）で表されるＤ−スレオードーブス誘導
体のＲＩ　、　Ｒｔがともに水素の場合は、Ｄ−スレオ
ードーブスそのものであるため、基質にラセミースレオ
ードーブスを用いて本発明の方法を行えば、単離、ルイ
ス酸による処理を行わずとも、反応混合物中から直接Ｄ
−スレオードーブスを得ることができる。

（実施例） 以下実施例によって、本発明をより詳細に説明するが、
本発明は実施例により限定されるものではない。

実施例１ ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．２％、ＫＨ。

ＰＯ，０，１％、Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏａ　０．０５％、Ｌ−
グルタミン酸０．１％、Ｄ−スレオニン０．２％を含む
ｐＨ６の液体培地５００−に、斜面培地からアルスロバ
クタ−・ウレアファシェンスＩＦＯ１２１４０の種菌を
１白金耳接種し、２８℃で３日間振盪培養した。培養液
を遠心分離して得た生菌体をＤＬ−スレオ−３−（３，
４−メチレンジオキシフェニル）セリン０．７％、ピリ
ドキサール−５−リン酸０、０　Ｏ１％、Ｔｗｅｅｎ−
８００，１％を含むｐＨ７，０の０．１Ｍリン酸カリ緩
衝液５．０ＯｍＺに懸濁し、２８°Ｃで２日間振盪した
。反応液から遠心分離で菌体を取り除いた上滑の基質残
存量を高速液体クロマトグラフィーで定量すると、反応
開始時の４９％存在していた。次に、上記反応上清５０
０ｄを塩酸でｐＨ１以下に調整し、生じた沈澱をｔア別
した。その炉液に強酸性陽イオン交換樹脂ダウエックス
５０Ｗ−Ｘ８　（Ｈ型）を１００ｄ加え、室温で１時間
撹拌し残存しているスレオ−３−（３，４−メチレンジ
オキシフェニル）セリンを吸着させた。炉別水洗した樹
脂に１００ゴのＩＮアンモニア水を加え１時間撹拌後、
その炉液を減圧乾固し、生じた乾固物を適量のＩＮ塩酸
に溶かし比旋光度を測定したところ、Ｄ−スレオ−３−
（３，４−メチレンジオキシフェニル）セリンが残存し
ていることがわかった。（（ｒ）Ｍ’　＝＋２８．７　
（Ｃ＝１．０、Ｉ　Ｎ　−ＨｆＪ）、ｍ、ｐ、１５８°
Ｃ０なお、原料の０体をベースにしたＤ−スレオ−３−
（３，４−メチレンジオキシフェニル）セリンの収率は
９８％であった。

実施例２〜１１ 第１表に示す種菌を用いた以外は、実施例１と同様に行
い、反応上清中に残存している基質を高速液体クロマト
グラフィーで定量したところ、第１表の結果を得た。比
旋光度測定の結果から何れも０体であることを確認した
。

第１表 実施例１２〜１４ 一般式（１）におけるＲ’、Ｒ”が、ともに水素（イ）
、ともにメチル基（ロ）、ともにベンジル基（ハ）であ
る基質を用いて、第２表に示す種菌を用いて反応を行っ
た。反応条件、その他の処理は実施例１と同様にして行
い第２表に示す結果を得た。

第２表 （発明の効果） 本発明によれば、ラセミースレオードーブス誘導体を微
生物と反応させるだけの簡単な工程で光学活性なり一ス
レオードーブス誘導体を製造することができる。また、
分解によって生じたプロトカテキュアルデヒド誘導体と
グリシンを再び縮合させれば、本発明にかかわる酵素反
応の基質であるラセミースレオードーブス誘導体が得ら
れ、再利用することができる。従来、Ｄ−スレオードー
ブスを得るには光学分割、ラセミ化などの繁雑な操作が
必要であるという不利な点があったが、本方法によりこ
れらが改善される。

すなわち本発明は、微生物を用いる新規なり一スレオー
ドーブス誘導体の製造法を提供するものであり、本発明
を工業的に実施することにより、医薬品として有用なり
一スレオードーブスの中間原料を安価に得ることができ
る。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （ここにＲ＾１，Ｒ＾２は同一または相異なって水素、
   メチル、ベンジル基を示し、Ｒ＾１，Ｒ＾２がメチレン
   基で置換されて五員環を形成してもよい。）で表される
   ラセミ−スレオ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル
   ）セリン誘導体のＬ体を、微生物を用いて対応するプロ
   トカテキュアルデヒド誘導体と、グリシンに立体特異的
   に分解することを特徴とするＤ−スレオ−３−（３，４
   −ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体の製造法。
2. （２）微生物が、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、コ
   リネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
   属、アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属
   、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏ−ｍｏｎａｓ）属、モ
   ナスカス（Ｍｏｎａｓｃｕｓ）属、ノイロスポラ（Ｎｅ
   ｕｒｏｓｐｏｒａ）属、フサリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ
   ）属、ギベレラ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ）属、ビソクラ
   ミス（Ｂｙｓｓｏｃｈ−ｌａｍｙｓ）属に属する微生物
   よりなる群より選ばれた少なくとも１種の微生物である
   特許請求の範囲（１）記載の方法。