JPH01191700A - 化学発光法によるアルカリホスフアターゼの測定法 - Google Patents
化学発光法によるアルカリホスフアターゼの測定法Info
- Publication number
- JPH01191700A JPH01191700A JP1544488A JP1544488A JPH01191700A JP H01191700 A JPH01191700 A JP H01191700A JP 1544488 A JP1544488 A JP 1544488A JP 1544488 A JP1544488 A JP 1544488A JP H01191700 A JPH01191700 A JP H01191700A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- alkaline phosphatase
- glucose
- reacting
- phosphate
- determination
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 title claims abstract description 18
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 4-aminophthalhydrazide Chemical compound O=C1NNC(=O)C=2C1=CC(N)=CC=2 HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 108010029942 microperoxidase Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 7
- HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229950010772 glucose-1-phosphate Drugs 0.000 claims abstract description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 4
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims abstract 5
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims abstract 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 5
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims abstract 5
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims abstract 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 9
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 abstract description 4
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- BCHIXGBGRHLSBE-UHFFFAOYSA-N (4-methyl-2-oxochromen-7-yl) dihydrogen phosphate Chemical compound C1=C(OP(O)(O)=O)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C BCHIXGBGRHLSBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MNIQECRMTVGZBM-UHFFFAOYSA-N 3-(1-methylpyrrolidin-2-yl)pyridine;7h-purin-6-amine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1NC=N2.CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 MNIQECRMTVGZBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）の新しい定
量測定法に関する。
量測定法に関する。
［従来の技術］
ＡＰは安定な酵素であり比較的高感度に定量できること
から、酵素免疫測定法の４５１識酵素として利用されて
いる。しかしながら、従来その定量法としては、０−ニ
トロフェニールホスフェートや４−メチルウンベリフェ
リルホスフェートのような比色基質又は蛍光基質を使用
した比色法又は蛍光法が広く使用されていた。本発明者
は基質としてニコチンアデニンヂヌクレオチドホスフェ
ート（ＮＡＤＰ）を使用する方法を先に発明した（第３
４回日本臨床病理学会総会）。
から、酵素免疫測定法の４５１識酵素として利用されて
いる。しかしながら、従来その定量法としては、０−ニ
トロフェニールホスフェートや４−メチルウンベリフェ
リルホスフェートのような比色基質又は蛍光基質を使用
した比色法又は蛍光法が広く使用されていた。本発明者
は基質としてニコチンアデニンヂヌクレオチドホスフェ
ート（ＮＡＤＰ）を使用する方法を先に発明した（第３
４回日本臨床病理学会総会）。
［発明の構成］
本発明者は、更にＡＰを定量する別途方法につき鋭意研
究を重ねていたが、グルコース−１−ホスフェート（Ｇ
Ｉ Ｐ）を基質とし化学発光法と組み合わせて行なう
該酵素の活性測定し法を見出して本発明を完成した。
究を重ねていたが、グルコース−１−ホスフェート（Ｇ
Ｉ Ｐ）を基質とし化学発光法と組み合わせて行なう
該酵素の活性測定し法を見出して本発明を完成した。
即ち本発明は、ＡＰを基質ＧＩＰと反応させて得られる
グルコースをＧＯＤと反応させ。
グルコースをＧＯＤと反応させ。
かくして生じたＨ、Ｏ□を化学発光法によって定量する
ことを特徴とするＡＰの測定法である。
ことを特徴とするＡＰの測定法である。
本発明の方法に使用される好ましい化学発光法としては
１例えばイソルミノール（Ｉ Ｌ）とマイクロペルオキ
シダーゼ（ｍ−ＰＯＤ）とを組み合わせた方法が挙げら
れる。
１例えばイソルミノール（Ｉ Ｌ）とマイクロペルオキ
シダーゼ（ｍ−ＰＯＤ）とを組み合わせた方法が挙げら
れる。
［実施例］
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
実施例
種々の濃度のＡＰの水溶液５μｌに、ＧＩＰ溶液（１０
ｍＭ、０．０５Ｍ ＤＥＡ緩衝液ＰＨ９，５） ５０μ
ｌを加え、４℃で１夜反応させる。次に酵素溶液（ＧＯ
Ｄ １．２５ Ｕ／ａｌ−０，１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ
８，０） ５０μｌを加えて３０分室温で反応させる。
ｍＭ、０．０５Ｍ ＤＥＡ緩衝液ＰＨ９，５） ５０μ
ｌを加え、４℃で１夜反応させる。次に酵素溶液（ＧＯ
Ｄ １．２５ Ｕ／ａｌ−０，１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ
８，０） ５０μｌを加えて３０分室温で反応させる。
反応停止は０．２Ｍ硫酸２５μｌで行い、その反応液１
００μｌを使用して発光測定をした。
００μｌを使用して発光測定をした。
反応液１００μｍをガラスチューブにとり、これにＩＬ
／ｍ−ＰＯＤの混液（２，４Ｘ １０−’Ｍ／Ｉ Ｘ
１０−’Ｍ、０．４Ｍ炭酸緩衝液ｐｌ（９，５） ５０
０μｍを加え、生じる発光をアロカルミネッセンスリー
ダー（待ち時間１５秒、積算時間６秒）で測定した。
／ｍ−ＰＯＤの混液（２，４Ｘ １０−’Ｍ／Ｉ Ｘ
１０−’Ｍ、０．４Ｍ炭酸緩衝液ｐｌ（９，５） ５０
０μｍを加え、生じる発光をアロカルミネッセンスリー
ダー（待ち時間１５秒、積算時間６秒）で測定した。
このようにして得られたＡＰの検量線を第１図に示した
。
。
［発明の効果］
本発明によりＡＰの化学発光による高感度な定量測定が
可能となったので、該酵素を標識酵素とした酵素免疫測
定法がより一層使用し易くなった。
可能となったので、該酵素を標識酵素とした酵素免疫測
定法がより一層使用し易くなった。
第１図は、アルカリホスファターゼの化学発光法による
検量線を示したものであり、縦軸は発光強度（カウント
／６秒）を示し、横軸は検体試料中に含まれたアルカリ
ホスファターゼの量を示す。図中（）内の数字は、ＣＶ
％（ｎ＝５）を示す。
検量線を示したものであり、縦軸は発光強度（カウント
／６秒）を示し、横軸は検体試料中に含まれたアルカリ
ホスファターゼの量を示す。図中（）内の数字は、ＣＶ
％（ｎ＝５）を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）を基質グルコース
−１−ホスフェート（ＧＩＰ）と反応させて得られるグ
ルコースをグルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ）と反応さ
せ、生じた過酸化水素を化学発光法によって定量するこ
とを特徴とするアルカリホスファターゼの測定法。 ２、化学発光法がイソルミノール（ＩＬ）とマイクロペ
ルオキシダーゼ（ｍ−ＰＯＤ）とを組み合わせたもので
ある請求項１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1544488A JP2651175B2 (ja) | 1988-01-26 | 1988-01-26 | 化学発光法によるアルカリホスフアターゼの測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1544488A JP2651175B2 (ja) | 1988-01-26 | 1988-01-26 | 化学発光法によるアルカリホスフアターゼの測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01191700A true JPH01191700A (ja) | 1989-08-01 |
| JP2651175B2 JP2651175B2 (ja) | 1997-09-10 |
Family
ID=11888979
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1544488A Expired - Lifetime JP2651175B2 (ja) | 1988-01-26 | 1988-01-26 | 化学発光法によるアルカリホスフアターゼの測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2651175B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103728287A (zh) * | 2014-01-10 | 2014-04-16 | 福建医科大学 | 纳米氧化铜模拟过氧化物酶测定葡萄糖的荧光分析方法 |
-
1988
- 1988-01-26 JP JP1544488A patent/JP2651175B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103728287A (zh) * | 2014-01-10 | 2014-04-16 | 福建医科大学 | 纳米氧化铜模拟过氧化物酶测定葡萄糖的荧光分析方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2651175B2 (ja) | 1997-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Huang et al. | Fluorometric enzymatic determination of total cholesterol in serum | |
| CA1201369A (en) | Catalyzed colorimetric and fluorometric substrates for peroxidase enzyme determinations | |
| US4492754A (en) | Composition and method for the determination of hydrogen peroxide | |
| JPH02174695A (ja) | 酵素酸化によるアナライトの比色定量方法および試剤、およびそのための還元発色性電子受容体 | |
| HU181089B (en) | Process and reagent for enzymatical determining enzyme substrates | |
| EP0575515B1 (en) | Stabilization of enzyme containing reagent composition for determination of an analyte | |
| US3862012A (en) | Quantitative determination of uric acid | |
| WO1992021777A1 (en) | Determination of penicilloic acids | |
| JPH07121901B2 (ja) | 新規な尿素誘導体及びこれを発色成分として用いる測定法 | |
| JPH0739397A (ja) | 塩素イオンの定量方法 | |
| RU2122740C1 (ru) | Способ определения мочевины в биологических жидкостях и набор реактивов для его осуществления | |
| JPH01191700A (ja) | 化学発光法によるアルカリホスフアターゼの測定法 | |
| JPH01191699A (ja) | 化学発光法によるアルカリホスフアターゼの測定方法 | |
| Matsuda et al. | Fluorometric method for assay of kallikrein-like arginine esterases | |
| Björkhem et al. | A simple, fully enzymic bioluminescent assay for triglycerides in serum. | |
| Kuan et al. | An alternative method for the determination of uric acid in serum | |
| Kamoun et al. | Ultramicromethod for determination of plasma uric acid. | |
| JPS60210998A (ja) | 無機リン酸塩の酵素学的測定用試験組成物、試験具及び試験方法 | |
| JPH0191797A (ja) | 化学発光法によるアルカリホスファターゼの測定法 | |
| CA1206077A (en) | Sensitive enzymatic creatinine assay | |
| IE47123B1 (en) | Analytical device | |
| SU1041568A1 (ru) | Реагент дл определени аденозин-5-трифосфата | |
| KR0134132B1 (ko) | 당화효소 혼재시의 당전이효소의 역가측정방법 | |
| JPH06339398A (ja) | ナトリウムイオンの定量方法 | |
| WO1994023061A1 (fr) | Procede pour mesurer des ions sodium |