JPH01197488A - 生理活性物質ｋｓｂ−１９３９化合物及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は殺虫、殺ダニ、駆虫作用を示す新規生理活性物
質ＫＳＢ−１９３９Ｓ、及びその製造法に関するもので
ある。

（従来の技術） 農業用薬剤は、高い収穫を安定的に確保する上で必要不
可欠なものであることは言及の余地のないことであるが
、作物及び土壌への残留を通して人体に体する毒性や環
境汚染の問題等を引き起こす可能性も否定出来ず、更に
安全性の高い農業用薬剤の開発が望まれている１本発明
者らは、より安全なＱ業を開発すべく、微生物生産物に
着目して研究を行なった。

これまでに微生物を起源とする殺虫性物質には、糸状菌
の生産する環状ペプチドであるデストルキシン〔アグリ
カルチュラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリイ
（ＡＨｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　　ａｎｄ　　Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　　第２６巻、　
第３６頁（１９６２年）〕、バチルス屈細菌の生産する
結晶性蛋白質であるデルタ−エンドトキシン〔ａ業と園
芸第４７巻。

第１１号、第１５０７頁（１９７２年）〕、放線菌の生
産するピロン系のピエリシジン〔アグリカルチュラル・
アンド・バイオロジカル・ケミストリイ第３０巻、第５
１７頁（１９６６年）〕、ピロリドンを母核とする電子
伝達１１ｆｌ害物質マクロテトロライド群にはいるテト
ラナクチン〔ジャーナル・アンチバイオチフス（Ｊｏｕ
ｒｒ＋ｎｌ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｌｃｓ）第２４Ａ巻、第
４１８頁（１９７１年）〕１本発明化合物に橘造が類似
したマクロライド系のミルベマイシン〔ザ・ジャーナル
・オン・アンチバイオチフス（Ｔｈａ　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）第２９巻、第７６頁
（１９７６年〕〕、アバメクチン類〔アンチミクロバイ
アル・エイジェンツ・アンド・ケモゼラビイ（Ａｎｔｉ
ｓｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｇｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｃｈａｍ
ｏｔｈａｒｐｙ）第１５巻、ｊ＠３６１頁（１’Ｊ７９
年））、ＬＬ−Ｆ２８２４９α〔ジャーナル゛オンケミ
カル°ソサイアテイ・ケミカル・コミニュケーション（
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈａ廁１ｃａｌ　５ｏｃｉｅ
ｔｙ　Ｃｈａ會１ｃａｌＣｏ＋＋ｗｕｎ１ｃａｔ１ｏｎ
）第４０２頁（１９８７年）〕が知られている。

（発明が解決しようとするｍ１ｌｌ） 本発明は、新規な天然生理活性物質を提供することを目
的とする。

（課題を解決するための手段） 本発明者らは、新規な微生物生産生理活性物質の探索を
目的に種々の土壌から菌株を分離し、その生産する代謝
産物について研究を続けた結果、土壌より新たに分離し
たＫＳＢ−１９３９株の培養物中に強力な殺虫、殺ダニ
及び駆虫作用を示す活性物質が生産されることを見い出
し、その生理活性物質を単層、採取することに成功した
。

すなわち１本発明の生理活性物質は 式 にて示される。

本発明の生理活性物質をＫＳＢ−１９３９Ｓ、と称する
。

本発明のＫＳＢ−１９３９Ｓ、は、下記の理化学的性質
を有する。

■物質の色　：無色 ■元素分析値：Ｃ：６９．３８％ Ｉｆ　　８．１３％ ０：２２．５０％ ■分子式　　：　Ｃｓ　ｔ　Ｈｓ　ｘ　Ｏ−■分子量　
　：　６４０　（ＦＡＢＭＳ）■紫外線吸収スペクトル
：第１図に示す。

■赤外線吸収スペクトル：第２図に示す。

■核磁気共鳴スペクトル：第３図に示す。

■呈色反応　ニジリカゲル簿層上で ヨウ素反応　＋、硫酸反応　＋、ニンヒドリン反応　−
。

アニスアルデヒド反応　−９塩化化第銑鉄応　−５２，
４−ジニトロフェニルヒドラジン反応　十■溶解性　　
：水に不溶、メタノール、アセトン、酢酸エチル、クロ
ロホルム、ヘキサンに可溶。

［相］塩基性、ａ性、中性の区分：中性法にＫＳＢ−１
９３９Ｓ、の構造解析について説明する。

実施例に従って得られたＫＳＢ−１９３９Ｓ、の理化学
的性質、特に紫外線吸収スペクトル、プロトン及びカー
ボン核磁気共鳴スペクトルの解析から、この物質は１６
員マクロライド系物質であり１ｇｔ量分析データ（Ｅ’
Ｉ及びＦＡＢ）で確Ｕされた分子量６４０に該当する既
知のマクロライド物質はなくその新規性が推察できた。

本発明化合物と悶造的に近縁と考えられるミルベマイシ
ン類、アバメクチン類、ＬＬ−Ｆ２８２４９α等は、何
れもストレプトミセスに屑する放線菌の生産する殺虫性
マクロライドと称する物質であり、これらの構造解析に
関して、ミルベマイシンについては、アブストラクト・
ベーバーズ（Ａｂａｓｔｒａｃｔ　ｐａｐｅｒｓ）第３
０９〜３１６頁〔第１８回シンポジウム・ケミカル・ナ
チュラル・プロダクツ・キヨウト（Ｓｙｖｐｏｓｉｕｎ
　Ｃｈａｍｌｃａｌ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔ
ｓ＋　Ｋｙｏｔｏ）　　（１９７４年１０月１７〜１９
日開催）〕及びテトラヒドロン・レターズ（Ｔａｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎ　Ｌａｔｔｅｒｓ）第７１１−７１４頁（
１９７５年）に、アバメクチンレこついて、はジャーナ
ル・オン・アメリカン・ケミカル・ソサＩティ（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆ　ＡｍｅｒｉｃａｎＣｈａｍｉｃａｌ　
５ｏｅｉａｔｙ）第１０３６．第４２１６−４２２１頁
（１９８１年）に、また、ＬＬ−Ｆ２８２４９について
は、前述の文献に記載されている。

本発明のＫＳＢ−１９３９５，の諸データを、これら文
献に示された構造解析データを参考にして検討した結果
。

■基本骨格は、ザ・ジャーナル・オン・アンチバイオチ
フス第３３巻、第１１２１頁（１９８０年）に記載のラ
クトン環をもった前述の式（１）で示されるものである
こと、■マクロライド環の１３位には、アバメクチンに
みられる糖側鎖が存在しないこと。

■スビラ環上の２４位にメチル基及び２５位にエチル基
を有していること、 ■ＫＳＢ−１９３９Ｓ５の特徴は５４位の炭素につなが
る側鎖にあり、マクロライド環４位の炭素に３−メチル
−２＝ブテノイルオキシメチル基が連結していること、
が解析でき、前述の式（１）で示される新規物質と決定
した。

本発明のＫＳＢ−１９３９ｓ、の生産菌の一例としては
。

本発明者らによって和歌山系新宮市街の土壌から分離さ
れた放線菌ＫＳＢ−１９３９株がある。ＫＳＢ−１９３
９株の菌学的性質は１次の通りである。

本菌株の同定は１国際ストレプトミセス計画（Ｉ　Ｓ　
Ｐ）の方法とワックスマン氏の方法により、その記載は
ＩＳＰの例に準じて行なった。

（１）形態的性質 双生菌糸は、分岐しながら生長し、菌糸の分断は、観察
されない、気中菌糸は、グルコース・アスパラギン寒天
培地、オートミール寒天培地等で旺盛に着生し胞子形成
も良好である。気中菌糸は１分岐しながら空中に伸長し
短い主軸又は分枝上に胞子鎖を車軸分岐する。胞子鎖は
２通常コイル状螺旋を呈する。長期間培養すると、胞子
鎖先端が黒粘貿塊化し。

更に進んだ部分は、気中菌糸全体が黒褐色粘質塊化する
（グルコース・アスパラギン寒天培地、オートミール寒
天培地）。

胞子鎖の幅は２０．５ないし０．８ミクロン、胞子表面
は、シワ状（Ｖａｒｔｙ）を呈し胞子の区切りが不鮮明
なため、詳しい個々の胞子の形状及び連結数は、不明で
あるが１０胞子以上の連結が詔められる。また胞子は、
運動性を示さず、胞子嚢、菌核等は、ＩＩｌ祭されない
。

（２）ジアミノピメリン酸分析 全菌体加水分解物のＬＬ−ジアミノピメリン酸が認めら
れ細胞壁タイプＩ型である。

（３）各種培地における生育状態 培養３Ａ間目の生育状態は、第１表に示す通りである。

（４）生理的性質 ■生育温度範囲　　　　　　２０〜４０℃最適温度範囲
　　　　　　２５〜３５℃■ゼラチンの液化　　　　　
十 ■Ｒ粉の加水分解　　　　　十 ■脱脂牛乳の凝固　　　　　十 ペプトン化　　　　　　　十 ■メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地　　　　　　　　　　−ペプトン・イ
ースト・鉄寒天培地　　　−トリプトン・イースト・ブ
ロス　　　　−■硝酸塩の還元　　　　　　　　　　　
　十（５）各炭素源の同化性 （プリドハム・ゴドリーブ寒天培地上）Ｌ−アラビノー
ス、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトー
ス、シュクロース、Ｌ−ラムノース、ラフィノース、Ｄ
−マンニトール、Ｌ−イノシトールの全ての炭素源を同
化する。

上記の菌学的性質をインターナショナル・ジャーナル・
オン・システマチック・バクテリオロジー（■ｎｔｅｒ
ｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｉｍ
ａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｇｙ）第２２巻、第３０
７〜３１１頁（１９７２年）の記載を参照し同定を行っ
た結果。

ＫＳＢ−４９３９株は、シュクロース、ラフィノースの
同化の点で僅かに差を詔めるものの、基本性状（形態及
び各種培地での生育状態）がストレプトミセス・バイグ
ロスコピカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏ
ｓｃｏｐｌｃｕｓ）　　とよく一致することから。

ストレプトミセス・バイグロスコピカス　ＫＳＢ−１９
３９と命名しｆ：、ＫＳ［３−１９３９株は、Ｈａ相和
６２年６月２日付で微工研菌寄第９４３６号（ＦＥＲＭ
Ｐ−９４３６）として寄託されている。尚、ＫＳＢ−１
９３９株は、他の放線菌の場合にみられるように、その
性状が変化しやすい０例えば、ＫＳ［３−，１９３９株
又はこの株に出来する突然変異株（自然発生又は誘発性
）、形質融合体又は遺伝子組換え体であっても、ＫＳｎ
−１９３９株にその形質起源を依存しＫＳＢ−１９３Ｏ
Ｓ、を生産するものは総て本発明に使用出来る。

また１本発明の製造法は、ＫＳＢ−１９３９株の培養と
培養物からの生理活性物質のＪｌｌ＋出、希製からなる
。

すなわち、培養に当ってＫＳＢ−１９３９株を通常の微
生物が利用しうろ栄養物を含有する培地で培養する。栄
養源としては、従来放線菌の培養に利用されている公知
のものが使用できろ６例えば、炭素源として、グルコー
ス、グリセリン、マルトース、ラクトース、水＆＋、デ
キストリン、澱粉、動植物油等を使用できる。またｇ素
源としては、ビースト、大豆粉、／ＪＸ麦胚芽、コーン
ステイープリカー、落花生粉、綿実粉。

ペプトン、肉エキス、酵母エキス、硫酸アンモニウム、
硝酸ソーダ、９素等が使用できる。その他、必要に応じ
て、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム
、コバルト。

塩！＋１ＡＭ、硫酸及びその他のイオンを生成すること
が出来る無機塩類を添加することも有効である。また菌
の発育を助け、ＫＳＢ−１９３９Ｓ、の生産を促進する
ような有機物及び無機物を適男に添加することも出来る
。

培養法としては、好気的条件下での培養法、特に深部タ
ンク培養法が最も適している。培養に適当な温度は、１
５〜３７℃であるが、多くの場合、２６〜３０℃付近で
培養する。

ＫＳＢ−１９３９ｓ、の生産は、培地や培養条件により
異なるが、浸透培養、タンク培養とも５〜１０日の間で
その培養が最高に達する。

このようにして生産されたＫＳＢ−１９３９Ｓ、はその
理化学的性質に従って培養物から抽出、精製することが
可能であるが、特に以下の方法により効率的に抽出、精
製出来る。

すなわち、ＫＳＢ−１９３９５ｓの大部分は培養菌体中
に生産されるので、培養物は濾過又は遠心分離によって
菌体を分離し、菌体を分離し、菌体をアセトン又はアル
コールで抽出し、抽出液を減圧濃縮後、酢酸エチル、ク
ロロホルムのような転溶性溶剤に転溶させるか、いきな
り培養物又は濃縮液を前述のような転溶性溶剤にて抽出
する。転溶液を濃縮乾燥させるとＫＳＢ−１９３９５，
を含む粉末又は油状の粗製品を得ることが出来る。

粗製品は、ＫＳＢ−１９３９Ｓ、を含む複数の殺虫性Ｉ
！１＃物質の混合物として得られるため、脂溶性物質の
精製に通常用いられる公知の方法１例えばシリカゲル、
アルミナ等の担体を用いたカラムクロマトグラフィーに
より分画精製することが必要である。このクロマトグラ
フィーの条件の選択により本発明のＫＳＢ−１９３９Ｓ
５を高収率でかつ高純度で得ることが出来るが、更に、
純化界を採取する場合には、精製品のＭｙ！Ｊ又は逆層
カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーによる分画
が有効である。この他にゲル濾過法、吸着剤を用いた分
画法、結晶化等の方法の採用も可能である。

次に、実施例を挙げて具体的に説明するが本物質の製造
法はこれに限定されるものではない。

実施例　Ｉ ＫＳＢ−１９３９株の継代スラントからその１片を、麦
芽エキス１．０％、酵母エキス０．４％、グルコース０
．４％。

脱脂大豆０．２％の組成からなる種培養培地１００ｍＱ
を入れた５００ｍＡ三角フラスコに移し、振どう培養機
にて、２８℃で３日１１１１種培養を行った１次にｌｉ
ｔ粉３％、酵母エキス０゜５％、コーンスチーブリ力−
０．５％、燐酸二カリウム０．２％、硫酸マグネシュウ
ム０．０５％、プロナール５０２（１２逍：東邦化学工
業株式会社）０．０５％の組成からなる２゜Ｑの生産用
培地をジャーファーメンタ−に入れ、滅菌冷却後、１１
Ｍ述の種培養液を接種し、通気量２０１２／毎分１、培
養温度２８℃１回転数１５０回転／毎分の条件にて９日
間培養を行った。培養終了後、セライトを助剤として吸
引濾過を行い、菌体を集めた。ａ菌体を１０Ｑのアセト
ンに分散させ、１時間撹拌して抽出を行った後、濾過に
より清澄なアセトン液を回収した１次いで減圧濃縮にて
アセトンを除去し、水２００ｍａにて残留物を洗い集め
た後、酢酸エチル５００ｍＱにて２回転溶抽出を行った
。酢酸エチル転溶成約１αに無水硫酸ナトリウム５０ｇ
を加えて脱水し、減圧濃縮して酢酸エチルを外し油状物
質的６ｇを回収した。クロロホルム９５重量部に重量５
部のアセトンを加えた展開液少量に油状物質を溶解し。

内径５０ｍｍ、高さ６５０ｍｍのカラムを用いてシリカ
ゲルクロマトグラフィーを行った。２Ｏｍｊｌずつに分
取したフラクションの活性画分を集め、減圧乾燥を行う
ことによりＫＳＢ−１９３９５，の２２％を含有する混
合粗精製粉末９０ｍｇを採取した。

実施例　２ 実施例　１に記載した粗製品５０ｍｇを２ｍｆｉのアセ
トニトリルに溶解し、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍの
ＯＤＳカラムをセットした分取用高速液体クロマトグラ
フィーに注入した。８０％アセトニトリル１０ｍ１１／
毎分を溶出液として流し、２４０ｍｍの紫外部吸収によ
り検出してＫＳＢ−１９３９Ｓ、の活性画分を採取し１
分画液を濃縮乾固することにより純度６５％のＫＳＢ−
１９３９Ｓ５含有物１５ｍｇを得た。更に、内径２０ｍ
ｍ、長さ２５０ｍｍのシリカゲルカラムをセットし九分
取用液体クロマトグラフィーにＫＳＢ−１９３９Ｓ、の
６５％含有物をヘキサン１ｍｊｌに溶解注入しヘキサン
及びイソプロピルアルコールの混合液（９８：２）で展
開してＫＳＢ−１９３９５，画分を集め減圧乾燥するこ
とにより純化界８．５ｍｇを採取した。

以下余白 本発明化合物を殺虫殺ダニ剤として使用するには１本発
明化合物それ自体で用いてもよいが、通常は担体、界面
活性剤、分散剤又は補助剤等を配合して常法により、粉
剤、水和剤。

乳剤、微粒剤又は粒剤等に製剤して使用する。担体とし
ては。

タルク、ベントナイト、クレー、カオリン、珪藻土、ホ
ワイトカーボン、バーミュライト、消石灰、珪砂、ｍ安
、尿素等の固体担体及びトルエン、メチルエチルケトン
、メチルナフタリン、イソプロピルアルコール、キシレ
ン、シクロヘキサノン等の散体担体が挙げられる。界面
活性剤及び分散剤としては１例えば、ジナフチルメタン
ジスルホン酸塩、アルコール硫酸エステル塩、アルキル
アリールスルホン酸塩、リグニンスルホン酸塩、ポリオ
キシエチレングリコールエーテル。

ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、ポリオ
キシエチレンソルビタンモノアルキレート等が挙げられ
る。補助剤としてカルボキシメチルセルロース、ポリエ
チレングリコール、アラビアゴム等が挙げられる。これ
らの製剤は、適宜な一度に希釈して散布するか、又はｉ
ｉ！接施用する。

次に本発明の製剤例を挙げて具体的に説明する。下記製
剤例中の％は１重量百分率を示す。

製剤例１　粉　剤 ＫＳＢ−１９３９５，０，５％、珪藻土５％及びクレー
９４゜５％を均一に混合し粉砕して粉剤とした。

製剤例２　水和剤 ＫＳＢ−１９３９３，２％、珪藻±５３％、クレー４０
％、ジナフチルメタンジスルホン醜ナトリウム２％及び
リグニンスルホン酸ナトリウム３％を均一に混合し粉砕
して水和剤とした。

製剤例３　乳　剤 ＫＳＢ−１９３９Ｓ、５％、キシレン３０％、ポリオキ
シエチレンアルキルアリールエーテル１１％、アルキル
ベンゼンスルホン酸カルシウム４％及びメチルナフタリ
ン５０％を均一に溶解して乳剤とした。

製剤例４　粒　剤 ＫＳＢ−１９３９Ｓ５０，５％、ラウリルアルコール硫
酸エステルのナトリウム塩２％、リグニンスルホン酸ナ
トリウム５％、カルボキシメチルセルロース ％を均一に混合粉砕する．この混合物１００重量部に水
２０重量部を加えて練合し、押出式造粒機を用いて１４
〜３２メツシユの粒状に加工したのち、乾燥して粒剤と
した。

（発明の効果） 本発明化合物は，農業用殺虫殺ダニ剤，殺虫性医薬品，
家畜・ペット用駆虫剤，防虫・防蟻剤，衛生ｍ殺虫殺ダ
ニ剤として有用である．本発明化合物は，構造の類似し
た公知物質であるアパメクチンと比較しても優れた殺虫
活性を示すものである。

次に本発明化合物の奏する効果を試験例を挙げて具体的
に説明する。

試験例１　ナミハダニ殺成虫試験 径５５ｍｍのポリエチレン製カップに水を注ぎ、中心に
径１０ｍｍの穴を開けた蓋をし、蓋の穴から脱脂綿を垂
らして水を吸い上げるようにした後、蓋の上にろ紙をの
せ、その上にインゲンのリーフディスクを２枚置き，デ
ィスクに常に水が供給されるようにした．毛筆を用いて
リーフディスク当り１０頭のナミハダニ雌成虫を接種し
，２４時間後に異常虫を取り除き、製剤例２に準じて調
製した水和剤を所定１度に希釈し，薬液が２ｍｇ／ａｍ
’相当量となるように散布した。

試験は，２連にて行い，薬剤処理２日後に実体顕微鏡に
てダニの生死を判定し．下記の計算式により補正死出率
を算出した．尚、アバメクチンは．Ｃ−０７６−Ｂｌａ
　（８０％以上）及びＣ−０７６−Ｂｉｂ　（２０％以
下）の混合物を比較剤として供試した．結果を第２表に
示す。

試験例２　トビイロウンカ殺虫試験 製剤例２に準じて調製した水和剤を所定濃度に水で希釈
ル・これに稲茎葉を浸漬し風乾した後，試験管に入れた
．その中にトビイロウンカ幼虫１０１７ｊ［を放ち，脱
脂綿で詮をして２５℃の恒温にて５日間飼育した．試験
は，２連にで行い．飼育後の死出率を算出した．結果を
第３表に示す。

試験例３　ニカメイチュウ殺虫試験 製剤例２に準じてＦＩＩＩＩした水和剤を所定濃度に水
で希釈し。

これに稲芽出し籾を浸漬し風乾した後，径５５ｍｍのポ
リエチレン製カップに入れた．その中にニカメイチュウ
３齢幼虫１０１？［を放ち、２５℃の恒温にて５日間飼
育した．試験は、２連にて行い．飼育後の死出率を算出
した．結果を第４表に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は．ＫＳＢ−１９３９Ｓ５の紫外線吸収スペクト
ルを、第２図は、ＫＳＢ−１９３９５，の赤外線吸収ス
ペクトルを，第３図は、ＫＳＢ−１９３９Ｓ．のプロト
ン核磁気共鳴スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ にて表されるＫＳＢ−１９３９Ｓ＿５化合物。 （４）ストレプトミセス属に属するＫＳＢ−１９３９Ｓ
   ＿５化合物の生産菌を培養し、培養物から当該化合物を
   採取することを特徴とする当該化合物の製造法。