JPH01228497A

JPH01228497A - ２０―カルボキシプレグナン誘導体の製造方法

Info

Publication number: JPH01228497A
Application number: JP63053454A
Authority: JP
Inventors: Mitsugi Iida; 飯田　貢; Makoto Yoshihama; 誠吉浜
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 1988-03-09
Filing date: 1988-03-09
Publication date: 1989-09-12
Anticipated expiration: 2012-07-09
Also published as: JP2627915B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は医薬品および医薬品中間体として重要な２０−
カルボキシプレグナン８％　導体の製造方法に関する。

（従来の技術）多くの医療上の有用なステロイド化合物は、産業的には
、容易に入手可能でかつ安価な原料であるコレステロー
ルやβ−シトステロールより合成されることが多いこと
が、ケイ・キースリッヒ（Ｋ。

Ｋｉｅｓｌｉｃｈ、　Ｊ、　Ｂａ５ｉｃ　Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ、＋　２５＋　４６０１９８５））により示され
ている。

この合成過程で、コレステロールやβ−シトステロール
の側鎖を切断し、１７−オキソ化合物を得る方法がこれ
まで種々開発されてきた（Ｃ，Ｋ、　Ａ。

Ｍａｒｔｉｎ、　Ａｄｖ、　Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ、、　２５．２９（１９７７）およびに、　Ａｒ
ｉｍａら、　Ａｇｒ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　　
３３　＋　１６３６（１９６９））　　。

この１７−オキソ化合物は多くの性ホルモンやジウレテ
ィック・スピロラクトン等の合成中間体として極めて有
用である。

また、最近この１７−オキソ化合物の１７位に新たな側
鎖を化学的に付加し、新しい生物活性を有するステロイ
ド化合物を製造する方法が産業的に利用できるようにな
り、β−シトステロールより、アンドロスト−４−エン
−３，１７−ジオンを経てコルチコステロイドを合成し
ている（Ｇ、　Ｎｅｆｆ　ら、Ｃｈｅｍ、　Ｂｅｒ、、
　１１３　、１１８４（１９８０））。

また、微生物交換によるニストロジエンの生成例として
、ノルテストステロンを基質として、アルスロバクタ−
・シンプレックス（ＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒＳｉｍｐ
ｌｅｘ）を発酵させて、７５％収率でエストラジオール
を生成する等の報告がある（Ｋ、　Ｋｉｅｓｌｉｃｈ、
　Ｊ。

Ｂａ５ｉｃ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　２５．４６１（
１９８５））。

更に、本発明者らはコルチコステロイドの合成中間体を
発酵法により高率で得る微生物を探索し、コレステロー
ルやβ−シトステロールより・選択的に２０−カルボキ
シプレグナン誘導体（２ｏ−カルボキシープレグナ〜１
，４−ジエン−３−オン）を合成する菌株を得ている（
Ｍ、　ｌ１ｄａら、Ｊ。

Ｆｅｒｍｅｎｔ、Ｔｅｃｈ、、　６５　、５２５（１９
８７）、ロドコッカス・エクイ（ＭＩＬ−１０３７およ
びＫ−３株））。この２０−カルボキシプレグナン誘導
体は化学的方法で容易に４−デヒドロ・プロゲステロン
に変換できて、コルチコステロイド製造の重要な中間体
になるものである。

（発明が解決しようとする課題）前記の本発明者等が見出した発酵法による２０−カルボ
キシプレグナン誘導体の合成は選択性が良いものである
が、収量を一層上げることが課題であった。

本発明の目的は発酵法により２０−カルボキシプレグナ
ン誘導体を高収率、高収量で製造することである。

（課題を解決するための手段）本発明は、炭素数１０〜１９の高級直鎖飽和炭化水素及
び第二銅塩を添加した培地中に、ロドコッカス、エクイ
変異株Ｋ−３株（徽工研菌寄第９８８０号、Ｒｈｏｄｏ
ｃｏｃｃｕｓ　ｅｑｕｉ　ＭＩＬ−１０４５）　、また
はロドコッカス−エクイ　（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ　
ｅｑｕｉ　ＭＩＬ−１０３７）を接種培養し、基質とし
てコレスタン系ステロイド化合物を添加し反応させるこ
とを特徴とする２０−カルボキシプレグナン誘導体を製
造する方法である。

ロドコッカス・エクイ変異株Ｋ−３株の微生物学的性質
は、親株（ＭＩＬ　−１０３７）と同じであるが、ステ
ロイド類の微生物変換を行う際に、コレスタン系ステロ
イド化合物の側鎖を選択的に切断する性質を有している
。親株（Ｍ　ＩＬ−１０３７）はステロイド類の骨格ま
で分解し、ＣＯ□とＨ２Ｃにするため、変換体は得られ
ていない。従って、親株で変換を行う際には、この分解
阻害剤として、α、α′−ジピリジル等を用いている。

変異株では、この阻害剤を必要としない利点がある。

本発明において基質として用いられるコレスタン系ステ
ロイド化合物の好ましい例としてβ−シトステロールお
よびコレステロールが挙げられる。

本発明に用いられる高級直鎖飽和炭化水素としては、例
えばｎ−デカン、ｎ−ウンデカン、ｎ−ドデカン、ｎ−
トリデカン、ｎ−テトラデカン、ｎ−ペンタデカン、ｎ
−ヘキサデカン、ｎ−ヘキサデカン、ｎ−オクタデカン
、ｎ−ノナデカン、等が挙げられ、特に好ましいのはｎ
−ヘキサデカンである。

ｎ−ヘキサデカンは、炭素数１６の直鎖飽和炭化水素（
ＣＨ３（ＣＨ２）　＋　ａＣｔ、ｓ）であり、−船釣に
炭化水素を資化する微生物の培地に炭素源として用いら
れる。本発明に用いる菌株は、本来、この炭化水素資化
性菌であり、ｎ−ヘキサデカンは、この菌の生育に最適
な炭化水素である。

本発明に用いる第二銅塩は、−価陽イオンや、Ｃａ　２
　＋等に比較して、ｎ−ヘキサデカンとの相乗効果が認
られる。好ましい銅塩としては塩化第二銅、酢酸第二銅
、リン酸第二銅が挙げられる。

（発明の効果）本発明の方法によれば、培地中に高級直鎖飽和炭化水素
及び第二銅塩を添加することにより、２０−カルボキシ
プレグナン８１ｂ　’＋Ｓ体を、従来よりも高収率、高
収量で製造することができる。

（実施例）以下、実施例に基づき本発明を具体的に説明する。

グルコース５．０ｇ、肉エキス５．０ｇ、コーンステイ
ブリカー１０．０ｇ　、　ＫｚＨＰ　０４２．Ｏｇを蒸
留水ｉｏｏ。

ｍｌに溶解し、ｐ）ｌを７．２に調整した。

このようにして得られた組成の培地１００　ｍｌにｎ−
ヘキサデカンを１％となるように添加し、この培地にロ
ドコッカス・エクイＫ−３株を２艷接種して、２７℃の
温度にて２２時間振とう培養（２２Ｏｒ、ｐ。

ｍ、）を行った。

培養終了後、基質としてβ−シトステロールを上記フラ
スコに５０■添加し、さらに７日間上記と同様の条件で
反応を行った。

この培養液を硫酸でｐｎｚ、ｏに合わせ、等量の酢酸エ
チルで抽出し、ロータリーエバポレーターで減圧濃縮を
行った。この抽出物をジアゾメタンを用いてメチル化し
、ｏｖ−１カラムを用いたガスクロマトグラフィーにて
温度２３０℃で定量分析を行った。

尚、内部標準として５α−コレスタンを用いた。

比較のために、培地中に添加物のない場合、及びｎ−ヘ
キサデカンのみを添加した場合についても、同様の方法
で培養を行った。

この様にして得られた結果を法衣に示す。

ｎ−ヘキサデカン及び塩化銅を添加した場合、無添加の
場合に比較して約２．４倍、ｎ−ヘキサデカン添加の場
合に比較して約１．４倍の２０−カルボキシ−プレグナ
−１，４−ジエン−３−オンを生成した。

表１なし　　　　　　　　３８．０■／ｆ　　　（１００％
）ｎ−ヘキサデカン１６８．４　　　　　　（１８０％
）ｎ−ヘキサデカン　　９２．８　　　　　（２４４％
）１）１％添加　　２）　　０．００００７％添加３）
２０−カルボキシ−プレグナ−１，４−ジエン−３−オ
ン

Claims

【特許請求の範囲】

（１）炭素数１０〜１９の高級直鎖飽和炭化水素及び第
二銅塩を添加した培地中に、ロドコッカス・エクイ変異
株Ｋ−３株（微工研菌寄第９８８０号、Ｒｈｏｄｏｃｏ
ｃｃｕｓｅｑｕｉＭＩＬ−１０４５）を接種培養し、基
質としてコレスタン系ステロイド化合物を添加し反応さ
せることを特徴とする２０−カルボキシプレグナン誘導
体を製造する方法。
（２）コレスタン系ステロイド化合物がβ−シトステロ
ールである請求項１記載の２０−カルボキシプレグナン
誘導体を製造する方法。
（３）炭素数１３〜１９の高級直鎖飽和炭化水素及び第
二銅塩を添加した培地中に、ロドコッカス・エクイ（Ｒ
ｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｅｑｕｉＭＩＬ−１０３７）を接
種培養し、基質としてコレスタン系ステロイド化合物を
添加し反応させることを特徴とする２０−カルボキシプ
レグナン誘導体を製造する方法。
（４）コレスタン系ステロイド化合物がβ−シトステロ
ールである請求項３記載の２０−カルボキシプレグナン
誘導体を製造する方法。