JPH01235852A - 試薬の調製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の利用分野］ 本発明は、カブトガニの血球成分（Ａｍｏｅｂｏｃｙｔ
ｅＬｙｓａｔｅ）抽出液（以下、ＡＬ温溶液略記する。

）を原料とした、エンドトキシンに特異的な試薬の調製
方法に関する。

［発明の背景］ エンドトキシン（以下、ＥＴと略記する。）は主にダラ
ム陰性薗の細胞表、層中に存在するリボ多糖の一種であ
り、発熱物質（Ｐｙｒｏｇｅｎ）の一種としても知られ
る物質である。そのため、試料中のＥＴｍ度の測定は、
医学、薬学、微生物学の分野に於いて、重要なものの１
つとなっている。

現在のところ、このＥＴの測定法としては、ＡＬ温溶液
ＥＴによって活性化されて凝固する現象を利用した、所
謂リムルステストがその簡便性、費用が安価な点等から
広く利用されている。

しかしながら、このＡＬ温溶液ＥＴのみならず、カルボ
キシメチル化したβ−１，３−グルカンとも反応するこ
とが見出され［Ｋａｋｉｎｕｍａ　ｅｔ　ａｌ、、８ｉ
ｏｃｈｅ慣、　８ｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　
Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ、　刊且口。

４３４−４３９（１９８１）　］　、その現象は、ＡＬ
溶液中に存在するβ−１，３−グルカン（以下、ＧＬと
略記する。

）と反応して凝固反応を惹起する因子（以下、ＧＬ感受
性因子と略記する。）がＧＬ又はその誘導体と反応する
ことにより惹起されることが明らかにされた［岩永ら、
日本細菌学雑誌、都℃ｕ、７８１−８０３（＋９８３　
）　コ　。

そのため、現在市販されているリムルステストの大部分
は、ＥＴのみならずＧＬとも反応し、この測定法では試
料中に存在しているのがＥＴであるのかＧしてあるのか
或は両者の混合物であるのかをＩ１１定することは難し
く、その特異性が問題となっている。

このような問題点を解決すへ＜、ＡＬ浴溶液らＧＬ感受
性因子を除去してＥＴに特異的な試薬を調製する方法が
報告されている（特開昭５８−１３５１６号公報、特開
昭５９−２７８２８号公ｆＦ３）。しかしながら、これ
らに開示された方法は、何れもＡＬ浴溶液ゲル濾過法或
はヘパリン、デキストラン硫酸を結合させた担体を用い
たクロマトグラフィ等によって処理し、凝固酵素前駆体
の分画、ＧＬ感受性因子の分画及びＥＴと反応して凝固
反応を惹起する因子（以下、ＥＴ感受性因子と略記する
。）の分画に分離してＧＬ感受性因子の除去を行うと言
う極めて煩雑な操作を要する方法である。従って、分離
操作中にＡＬ浴溶液はその分画液がＥＴによる汚染を受
けるのを防止するためには、この操作を行うための専用
設備等が必要であり、しかも、最終的にＥＴに特異的な
試薬を得るには各分画を改めて適宜混合しなければなら
ないという欠点をも有していた。

［発明の目的］ 本発明は、上記した如き状況に鑑みなされたもので、Ａ
Ｌ浴溶液原料としてＥＴに特異的な試薬を得るための、
ＧＬ感受性因子の簡便で且つ効率の良い除去方法を提供
することを目的とする。

［発明の構成コ 上記目的を達成するために、本発明は下記の構成よりな
る。

ｒＡＬ溶液を、ＧＬを構成成分とする水不溶性の多糖類
又は／及びＧＬを構成成分とする多糖類の水不溶性の誘
導体、或はＧＬを構成成分とする多糖類又は／及びその
誘導体を不溶性担体上に固定化したものと一時的に接触
させた後、該ＡＬ溶ンαからＧＬを構成成分とする水不
溶性の多糖類又は／及びＧＬを構成成分とする多糖類の
水不溶性の誘導体、或はＧＬを構成成分とする多糖類又
は／及びその誘導体を不溶性担体上に固定化したものを
除去することを特徴とするＥＴに特異的な試薬の調製方
法。」 即ち、本発明者らは、ＡＬ浴溶液原料としたＥＴに特異
的な試薬を簡便に且つ効率良く調製する方法につき鋭意
研究の結果、ＡＬ浴溶液凝固させる物質として知られる
ＧＬを構成成分とする水不溶性の多糖類（以下、ＧＬＮ
ＳＰＳと略称する。）又は／及びＧＬを構成成分とする
多糖類（以下、ＧＬＰＳと略記する。）の水不溶性の誘
導体、或はＧＬＰＳ又は／及びその誘導体を不溶性担体
に固定化したものを大量にＡＬ溶液中に添加する等して
Ａ　Ｌ　Ｉｓ　＋ｉＩと接触させた後、該ＡＬ浴溶液ら
これらを除去すれば、ＥＴに特異的に反応する試薬が容
易に得られろことを見出し、本発明を完成するに至った
。

本発明に用いることのできるＧＬＮＳＰＳ及びＧＬＰＳ
の水不溶性の誘導体としては、ＧＬＰＳ或はその誘導体
であって、Ａ　Ｌ溶液に不溶性のものであれは特に限定
されることなく用いることができる。更に具体的には、
ＧＬＰＳとして一般に知られている、例え゛ば各種細菌
類（例えば、Ａｌｃａ１ｉ３ｅｎｅｓ属、　Ｌａｍ１ｎ
ａｒｉａ属、　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属等）、酵
母類（例えば、　５ａｃｃｈａ　ｒｏｍｙｃｅｓ属等）
、キノコ類（例えは、シイタケ、スエヒロタケ、カワラ
タケ等）等の細胞壁から得られる天然の多糖、具体的に
は例えばカートラン、パキマン、スクレロタン。

レンチナン、シゾフィラン、コリオラン等、或は、藻類
（例えば、褐藻、ユーグレナ、ケイ藻等）の貯蔵性多糖
、具体的には例えばラミナラン、パラミロン等の中から
選択される水不溶性のもの、これらを加熱等の処理によ
り水不溶化したもの、これらに常法、例えば大有機化学
第１９巻、第７版、７０〜＋０１頁、小竹無二雄監修、
昭和４２年５月１０日。

朝倉書店等に記載された方法に準じてエチル基。

ブチル基等を導入することにより水不溶性誘導体とした
ものが好ましく挙げられ、これらを単独で用いる或は２
種以上組み合わせて用いる等は任意である。

また、本発明に於いては、上記した如きＧＬＰＳ及びそ
の誘導体を適当な不溶性担体上に固定化したものも、Ｇ
ＬＮＳＰＳ及びＧＬＰＳの水不溶性の誘導体と同様に利
用できることは言うまでもない。ＧＬＰＳ又はその誘導
体を固定化するために用いられる不溶性担体としては、
セルロース、アカロース、デキストラン、ポリアクリル
アミド、多孔性ガラス等、アフィニティクロマトグラフ
ィに於いて通常用いられる不溶性担体てあれは、何れも
使用可能であるが、中でもアガロースが特に好ましい。

アガロース系担体の具体的商品としては、セファローズ
（ファルマシア社商品名）、バイオゲルＡ　（８１０−
ＲＡＤ社商社名品名があり、デキストラン系のものとし
ては、セファデックス（ファルマシア社商品名）、セフ
ァクリル（ファルマシア社商品名）が、また、ポリアク
リルアミド系のものとしては、エンザフィックスＰ（和
光純薬工業（株）社製）、バイオゲルＰ　（ＢＩＯ−Ｒ
ＡＤ社商社名品名が夫々市販されているが、これらに限
定されるものではない。これらの不溶性担体にＧＬＰＳ
又はその誘導体を結合させるためには不溶性担体を活性
化させる必要があることは言うまでもない。不溶性担体
の活性化法は種々あり、特に限定されるものではないが
、例えは、エピクロルヒドリンで活性化する方法等が適
当なものとして挙げることができる。

本発明の調製法に於いて使用可能なＡＬ浴溶液しては、
リムルス（Ｌｉｍｕｌｕｓ）属、タキブレウス（Ｔａｃ
ｈｙｐ　ｌ　ｅｕｓ　）属或はカルシノスコルビウス（
Ｃａｒｃｉｎｏｓｃｏｒｐｉｕｓ）　＠に属するカブト
ガニの血球から抽出されたもので、ＥＴとの反応により
凝固反応が生しるものであれば特に限定されることなく
挙げられる。また、例えばＡ　ＣＣ（ＡＳＳＯＣＩＡＴ
ＥＳ　０ＦＣＡＰＥ　Ｃ０Ｄ）社、ヘマケム社、ＭＡＢ
社、マリンクロット社等により市販されているＡＬ浴溶
液凍結乾燥品をもとに調製したものも当然使用すること
が可能であることは言うまでもない。

本発明の調製法によりＥＴに特異的な試薬を得る方法と
しては、ＡＬ浴溶液、ＧＬＮＳＰＳ又は／及びＧＬＰＳ
の水不溶性の誘導体、或はＧＬＰＳ又は／及びその誘導
体を不溶性担体に固定化したものとを接触させた後に、
４へＬ溶液からＧＬＮＳＰＳ又は／及びＧＬＰＳの水不
溶性の誘導体、或はＧＬＰＳ又は／及びその誘導体を不
溶性担体に固定化したものを除去することができる方法
であれば、特に限定されることなく挙げられるが、例え
ばＡＬ浴溶液、ＧＬＮＳＰＳ又は／及びＧＬＰＳの水不
溶性の誘導体、或はＧＬＰＳ又は／及びその誘導体を不
溶性担体に固定化したものをＡＬ溶液中に添加して接触
させ、その後、濾過、遠心分離等の手法によフてＧＬＮ
ＳＰＳ又は／及びＧＬＰＳの水不溶性の誘導体、或はＧ
ＬＰＳ又は／及びその誘導体を不溶性担体に固定化した
ものを除去する、或は、ＧＬＮＳＰＳ又は／及びＧＬＰ
Ｓの水不溶性の誘導体、或はＧＬＰＳ又は／及びその誘
導体を不溶性担体に固定化したものを充填したカラムに
より、ＡＬ浴溶液処理する等の方法が挙げられる。

本発明の調製方法に於いて、ＡＬ浴溶液接触させるＧＬ
ＮＳＰＳ又は／及びＧＬＰＳの水不溶性の誘導体、或は
ＧＬＰＳ又は／及びその誘導体を不溶性担体に固定化し
たものの量としては、通常、ＡＬ溶液中に添加されたＧ
ＬＮＳＰＳ又は／及びＧＬＰＳの水不溶性の誘導体、或
はＧＬＰＳ又は／及びその誘導体を不溶性担体に固定化
したものに含まれるＧＬ又は／及びその誘導体の量がＡ
　Ｌ　ｉＷ液に刻してＯ，ｔＵハ２以上となるようにす
ればよい。

また、ＡＬ浴溶液ＧＬＮＳＰＳ又は／及びＣＬＰＳの水
不溶性の誘導体、或はＧＬＰＳ又は／及びその誘導体を
不溶性担体に固定化したものとを、接触させる場合のｐ
Ｈとしては、ＡＬ溶液中のＥＴ感受性因子及びＥＴとＥ
Ｔ感受性因子との反応により惹起される凝固反応に関与
する因子が失活しないｐｆ（であればよいが、通常、６
〜８の範囲が好ましく用いられる。また、接触させる場
合の温度としては、ＡＬ溶液中のＥＴ感受性因子及びＥ
ＴとＥＴ感受性因子との反応により惹起される凝固反応
に関与する因子が失活しない温度であればよいが、通常
、０〜４０℃、より好ましくは０〜ｌＯ°Ｃが用いられ
る。

ＡＬ溶液に添加する際の、或はＡＬ溶液の処理を行うカ
ラムの充填剤としてのＧＬＮＳＰＳ又は／及びＧＬＰＳ
の水不溶性の誘導体、或はＧＬＰＳ又は／及びその誘導
体を不溶性担体に固定化したものの形状としては特に制
限はなく、例えば、ＧＬＮＳＰＳ又は／及びＧＬＰＳの
水不溶性の誘導体をそのままで、或は、適当な形状、例
えばＧＬＰＳとしてカードランを用いる場合には特開昭
５２−５０３５２号公報に記載の方法に従ってビーズ状
に加工する等したものでもよい。

本発明の調製法により得られるＥＴに特異的な試薬を用
いたＥＴの測定法としては、試薬として本発明の調製法
により得られるＥＴに特異的な試薬を用いる以外は、Ａ
Ｌ溶液を用いた自体公知のＥＴ測定法に準じてこれを行
えばよく、使用されるその他の試薬等も自体公知のＥＴ
測定法に於いて用いられる試薬等に準じて、適宜選択し
て用いれはよい。ＡＬ溶液を用いた自体公知のＥＴ測定
法としては、例えばＡＬ溶液と試料を混合した後、適当
な温度で一定時間インキユベートし、凝固反応によるゲ
ル生成の有無を調べるゲル化転倒法、凝固に伴って生ず
る濁度を測定する比濁法、凝固に伴って生ずる濁度が一
定の値に達するまでの時間を測定する比濁時間分析法、
ＡＬ溶液の成分とＥＴとの反応に伴って活性化されるプ
ロテアーゼの活性を合成基質を用いて測定する合成基質
法等が挙げられるが、本発明の方法により得られるＥＴ
に特異的な試薬の適用範囲はこれらに限定されるもので
はなく、ＡＬ溶液とＥＴの反応を利用した測定方法であ
れば、何れにも適用可能である。

また、本発明の方法により得られた、ＥＴに特異的な試
薬は凍結保存により、或は凍結乾燥により安定に保存で
きるので、大量に調製した場合にはこれらの方法により
保存しておけばよい。

以下に実施例を挙げ、本発明をさらに具体的に説明する
が、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない
。

（実施例） 実施例　１．　カードランを用いた試薬の調製カードラ
ン（和光軸架工業（株）製）１ｇに注射用蒸留水１００
　ｍｌ　を加え、乾熱滅菌したガラスフィルターで濾過
した。この操作を、５回繰り返し、得られたカードラン
約１０　ｍｇを注射用蒸留水約１０ｍ１　に懸濁させた
。これをポアサイズ０．４５μｍのメンブランフィルタ
−で濾過した。リムルス属のカブトガニ由来のＡＬ溶液
の凍結乾燥品（以下、ＬＡＬと略記する。和光軸架工業
（株）販売、ゲル化感度：　０．５　ＥＵ＃ｗｌ、５ｍ
ｌ用。）を注射用蒸留水５　ｍｌで溶解して得たＬ　Ａ
　Ｌ　ｍ液を、このカードランが表面に付着したフィル
ターを用いて濾過し、目的とするＥＴに特異的な試薬（
以下、ＣＴ−ＬＡＬ溶液と略記する。）を得た。

実施例　２．　ザイモサンを用いた試薬の調製ザイモサ
ン（シグマ社製）１ｇに注射用蒸留水１００　ｍｌ　を
加え、乾熱滅菌したガラスフィルターで濾過した。この
操作を、１０回繰り返し、得られたザイモサン約１０ｍ
８を、ＬＡＬ　（和光軸架工業（株）販売、ゲル化感度
：　０．５　Ｅｕ／ｍｌ、５ｍｌ用。

）を注射用蒸留水５ｍｌで溶解して得たＬＡＬ溶液に懸
濁させた。これをポアサイズ０．４５μｍのメンブラン
フィルタ−で濾過し、目的とするＥＴに特異的な試薬（
以下、ＺＴ−ＬＡＬ溶液と略記する。

）を得た。

参考例１゜ （試Ｎ） 以下に示すカードラン溶液及びＥＴ溶液を試料とした。

・カードラン溶を夜 ＥＴを含まないカードラン（和光軸架工業（株）製）を
ＥＴを含まない５０　ｎ＋Ｍ水酸化ナトリウムに５　ｍ
ｇ／ｍｌ　となるように溶解した後、注射用蒸留水で適
宜希釈したものを使用した。

・ＥＴ溶液 大腸菌レファレンスエンドトキシン（和光軸架工業（株
）製、Ｅ、　ｃｏｌｉ　ＵＫＴ−８株由来のリボ多糖、
ｌバイアル当たりＦＤＡレファレンスエンドトキシンＥ
Ｃ−２として５００ｎ３相当量を含有、５ｍｌ用）を注
射用蒸留水５ｍｌで溶解した後、注射用蒸留水で適宜希
釈したものを使用した。

（測定操作法） 実施例ｘで調製したＣＴ−ＬＡＬ溶液０．１　＋ＩＩ＋
に０．１　ｍｌの試料を加え、良く混合した後、３７℃
で、トキシンメーターＥＴ−２０１（和光軸架工業（株
）製）を用いて、試料の透過光量が５％減少するまでの
時閘（以下、Ｔｇと略称する。）を測定した。

（結果） 横軸の各ＥＴ濃度の対数値に対応するＴｇの対数値を縦
軸に沿ってプロットした点を結んで得られた検量線を第
１図に一〇−で示す。尚、カードラン溶液を試料として
用いた場合には、いずれのカードラン濃度でも、８０分
以内に試料の透過光量が５％の減少を示さなかった。

比較例１゜ 参考例１に於いて使用したＣＴ−ＬＡＬｖＪ液の代りに
、実施例１で使用したのと同ロットのＬＡＬ溶液く以下
、未処理ＵＡＬ溶液と略称する。）を用いた以外は、参
考例１と同じ試料を用い、同様の測定操作法により測定
を行った。

（結果） 横軸の各ＥＴ１度の対数値に対応するＴｇの対数値を縦
軸に沿ってプロットした点を結んで得られた検量線を第
１図ｉこ−・−で示す。また、横軸の各カードラン濃度
の対数値に対応するＴｇの対数値を縦軸にプロットした
点を結んで得られた検ｆＩｌ線を、第２図に−・−で示
す。

第１図より明らかな如く、ＥＴ溶液を試料とした場合に
は、ＣＴ−ＬＡＬ溶液及び未処理ＬＡＬ溶液の何れを試
薬として用いた場合でも、良好な直線性を示す検量線が
得られた。

また、第２図より明らかな如く、未処理ＬＡＬ溶液はカ
ードラン溶液とも反応して、良好な直線性を示す検量線
が得られることが判る。

以上の結果から明らかな如く、本発明の方法によってＡ
Ｌ溶液を処理することにより、ＥＴに特異的な試薬が得
られることが判る。

参考例２゜ 参考例１で調製したエンドトキシン１．５　ＥＩＪ／ｍ
ｌを含む試料（試料−１）、及びカードラン２０ｎ８／
ｍｌを含む試料とエンドトキシン３．ＯＥυ／ｍｌを含
む試料とを等量混合したもの（試料−２）を試料として
参考例１と同様の測定操作法ξこよりをｉｌｌ定した結
果を表１に示す。

比較例２゜ 参考例２に於いて使用したＣ　Ｔ　−Ｌ　Ａ　Ｌ　溶液
の代りに、実施例１て使用したのと同口・ソトの未処理
ＬＡＬ溶液を用いた以外は、参考例２と同じ試料を用い
、同様の測定操作法により測定を（テつた結果を表１に
併せて示す。

表１ 表１の結果から明らかな如く、試薬としてＣＴ−ＬＡＬ
を用いた場合には、ＥＴ溶液に更にカードランを添加し
た場合でも、ＴｇはＥＴ溶液により得られるそれと同等
の値が得られる、即ちＣＴ−ＬＡＬはカードランとは反
応しないことが判る。

また、試薬として未処理ＬＡＬ溶液を用いて測定を行っ
た場合には、ＥＴ溶液に更にカードランを添加すること
により、Ｔｇが非常に短縮される、即ち未処理ＬＡＬ溶
液がカードランとも反応することが判る。

参考！Ｉ！　３　。

（試料） 参考例１と同し。

（測定試薬） 実施例２て得られたＺＴ−ＬＡＬ溶ン夜１＋ｎｌに、０
．４５Ｍ　Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２
−アミノエタンスルホン１ｍ　（Ｎ、Ｎ−Ｂｉｓ（２−
ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈＮ−Ｂ１５（２−ｈｙｄｒｏｘｙ
ｅｔｈｙｌ）−２−ａ　ａｃｉｄ）緩衝液（ｔｌＫ７．
５）　１　ｍｌ及び基質溶液［１，０２ｍＭ　Ｂｏｃ−
Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−［（４−Ｎ−ｅｔｈ
ｙｌ−Ｎ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏ
ａｎｉｌ　ｉｎｅ］（和光軸架工業（株）製）　、２．
２５　ｍＭジエチルアニリン及び０．１２　Ｍ塩化マグ
ネシウム含有］１ｍｌを加えて測定試薬とした。

（測定操作法） 測定試薬０．２　ｍｌに試料　０．１　ｍｌを加え、良
く混合し、３７°Ｃて３０分間反応させた後、０．１７
ＩＸのメタ過ヨウ素酸ナトリウムと０．２５　Ｘのラウ
リル硫酸すトリウム（ＳＤＳ）を含む反応停止液１ｍｌ
　を加えて反応を停止し、反応液の７３０　ｎｍにおけ
る吸光度を測定した。

（結果） 横軸の各ＥＴａ度に対して得られた吸光度を縦軸に沿っ
てプロットした点を結ぶことにより得られた検量線を第
３図に示す。また、横軸の各カードラン濃度にヌ１して
得られた吸光度を縦軸に沿ってプロットした点を結ぶこ
とにより得られた検量線を、第４図に示す。

第３図及び第４図より明らかな如く、本発明の方法によ
り得られたＺＴ−ＬＡＬは、ＥＴとは反応して良好な直
線性を有する検量関係を示したが、カートランではいず
れの１度でも反応しなかった。

また、カードラン２０　ｎｇ／ｍｌを含む試料とＥＴｌ
、ＯＥｌ／ｍｌ　を含む試料を等量混合したものを試料
として測定を行ったところ、反応液の７３０　ｎｍにお
ける吸光度は０．１１５８となり、Ｅ　Ｔ　Ｏ，５ＥＵ
／ｍｌのみを含む試料を測定した場合の吸光度（０，４
５０）とほぼ同じ（直となった。

これらの結果から明らかな如く、ＺＴ−ＬＡＬは、カー
ドランには反応せず、ＥＴによってのみ活性化がおこる
ことが判る。

（発明の効果） 以上述べた如く、本発明は、ＡＬ溶液を原料とした、Ｅ
Ｔに特異的な測定試薬を、簡便で且つ効率良く、しかも
ＡＬ溶液中の成分の分画、再構成等の特殊な操作を行う
ことなく調製し得る方法を提供するものであり、斯業に
貢献するところ大なる発明である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、参考例１及び比較例１に於いて得られたエン
ドトキシン（以下、ＥＴと略記する。）の検量線を示し
、横軸の各ＥＴ濃度（ＥＵ／ｍｌ）に対して得られた透
過光量が５％減少するまでの時間（分）（以下、Ｔｇと
略記する。）を縦軸に沿ってプロットした点を結んだも
のである。図中、−〇−は参考例１により得られた結果
を、−・−は比較例１により得られた結果を夫々示す。 第２図は、比較例１に於いて得られたカードランの検量
線を示し、横軸の各カードラン濃度（ｎｇ／ｌ）に対し
て得られたＴｇを縦軸に沿ってプロットした点を結んだ
ものである。 第３図は、参考例３に於いて得られたＥＴの検量線を示
し、横軸の各ＥＴａ度（ＥＵ／ｍｌ）に対して得られた
７３０ｎｍの吸光度を縦軸に沿ってプロットした点を結
んだものである。 第４図は、参考例３に於いて得られたカートランの検量
線を示し、横軸の各カードラン濃度（ｎｇ／ｍ１）に対
して得られた７３０ｎｍの吸光度を縦軸に沿ってプロッ
トした点゛を結んだものである。 特許出願人　　和光純薬工業株式会社 手続補正帯 平成元年６月１２日 昭和６３年特許願第６２１４２号 ２、発明の名称 試薬の調製方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 〒　５４１ 住所　大阪府大阪市中央区道修町三丁目１番２号「平成
元年２年１３日住居表示変更」 連絡先　特許課（東京）置０３−２７０−８５７１５、
補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６、補正の内容 （１）明細書２頁６行目から７行目にかけて記載の「リ
ポ多糖の一種であり、」を「リボ多糖でありヨと補正す
る。 （２）明細書６頁８行目に記載のｒ　Ｌａｍ１ｎａｒｉ
ａ属ｔ」を削除する。 （３）明細書８頁１８行目から１９９行目かけて記載の
「阿ＡＢ社、マリンクロフト社等」をｒ　Ｗｂｉｔ、ｔ
ａｋｅｒＢｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ社等」と補正する。 以上 手続補正帯 １、事件の表示 昭和６３年特許願第６２１４２号 ２、発明の名称 試薬の調製方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 〒　５４１ 住所　大阪府大阪市中央区道修町三丁目１番２号「平成
元年２年１３日住居表示変更」 ５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６、補正の内容 （１）明細書１０頁１１行目に記載＜７）　ｒｏ、ＩＷ
／Ｖ％以上」ヲｒｏ、ｏＩＷ／Ｖ％以上、更ニ好まシ＜
　Ｌｔｏ、ＩＷ／Ｖ％Ｊ３上」と補正する。 以上

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）カブトガニ血球成分抽出液を、β−１，３−グル
   カンを構成成分とする水不溶性の多糖類又は／及びβ−
   １，３−グルカンを構成成分とする多糖類の水不溶性の
   誘導体、或はβ−１，３−グルカンを構成成分とする多
   糖類又は／及びその誘導体を不溶性担体上に固定化した
   ものと一時的に接触させた後、該カブトガニ血球成分抽
   出液からβ−１，３−グルカンを構成成分とする水不溶
   性の多糖類又は／及びβ−１，３−グルカンを構成成分
   とする多糖類の水不溶性の誘導体、或はβ−１，３−グ
   ルカンを構成成分とする多糖類又は／及びその誘導体を
   不溶性担体上に固定化したものを除去することを特徴と
   するエンドトキシンに特異的な試薬の調製方法。