JPH0476459A - β―グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 - Google Patents
β―グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法Info
- Publication number
- JPH0476459A JPH0476459A JP2189524A JP18952490A JPH0476459A JP H0476459 A JPH0476459 A JP H0476459A JP 2189524 A JP2189524 A JP 2189524A JP 18952490 A JP18952490 A JP 18952490A JP H0476459 A JPH0476459 A JP H0476459A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lysate
- amebocyte
- glucan
- high specific
- specific property
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、カブトガニから得られるアメボサイト・ライ
セートに係わり、特にβ−グルカン類に対する特異性の
高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法に関す
るものである。
セートに係わり、特にβ−グルカン類に対する特異性の
高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法に関す
るものである。
されるアメボサイト・ライセートのダラム陰性菌表層物
質［エンドトキシン」 （リポポリサッカライド）によ
る凝固現象は、［リムルステスト」の一般名てエンドト
キシン特異的検出法として医学、薬学の領域で広く利用
されている。アメボサイト・ライセートの凝固を起こす
物質としてエンドトキシン以外にトリプシン様プロテア
ーゼ（トリプシン、トロンビン等）及びβ−グルカン類
（β−結合を有するグルコースポリマー及びその誘導体
）が知られている。
質［エンドトキシン」 （リポポリサッカライド）によ
る凝固現象は、［リムルステスト」の一般名てエンドト
キシン特異的検出法として医学、薬学の領域で広く利用
されている。アメボサイト・ライセートの凝固を起こす
物質としてエンドトキシン以外にトリプシン様プロテア
ーゼ（トリプシン、トロンビン等）及びβ−グルカン類
（β−結合を有するグルコースポリマー及びその誘導体
）が知られている。
アメボサイト・ライセートのエンドトキシンによる凝固
現象はエンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子によ
る凝固酵素前駆体の活性化と、活性型凝固酵素の働きに
よるコアギュローゲンの繊維状コアギュリンへの転換に
より起こることが明らかにされている。一方アメボサイ
ト・ライセートのβ−グルカンによる凝固現象が、β−
グルカン性凝固酵素前駆体活性化因子による凝固酵素前
駆体の活性化と、活性型凝固酵素の働きによるコアギュ
ローゲンの繊維状コアギュリンへの転換により起こり、
アメボサイト・ライセートに含まれるエンドトキシン性
凝固酵素前駆体活性化因子と、β−グルカン性凝固酵素
前駆体活性化因子が異なるものであることが、Ｍｏｒｉ
ｔａらにより報告され（ＦＩｌｉＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ
、 １２９．２．３１８−３２１）、硫酸化多糖類を担
体とする液体クロマトグラフィーを用いたβ−グルカン
性凝固酵素前駆体活性化因子の除去を特徴とする、エン
ドトキシンに対する特異性の高いアメボサイト・ライセ
ートの調製法が岩永らにより開示されている。（特開昭
５９−２７８２９）また本発明者らにより、スルホプロ
ピル基を吸着担体とする液体クロマトグラフィーにアメ
ボサイト・ライセートを付し、エンドトキシン性凝固酵
素前駆体活性化因子を特異的に吸着せしめる、β−グル
カン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート
の製造方法か開示されている。（特願昭６３−２９２４
９４号） 〔発明が解決しようとする課題〕 従来、β−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイ
ト・ライセートを得るには、岩永らの方法に従いアメボ
サイト・ライセートを硫酸化多糖類を吸着担体とする液
体クロマトグラフィーに付して分画し、β−グルカン性
凝固酵素前駆体活性化因子と凝固酵素前駆体を組み合わ
せる方法、あるいは、北川らの方法にしたかい、アメボ
サイト・ライセートをスルホプロピル基を吸着担体とす
る液体クロマトグラフィーに付し、エンドトキシン性凝
固酵素前駆体活性化因子を除去する方法が用いられてき
た。しかしながら、岩永らの方法では高価で調製の面倒
な硫酸化多糖類を吸着担体とする液体クロマトグラフィ
ー用充填剤を使用しなければならないという問題点があ
り、北川らの方法ではβ−グルカン類を測定する際に高
価なペプチド性合成基質を使用しなければならないとい
う問題点があった。
現象はエンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子によ
る凝固酵素前駆体の活性化と、活性型凝固酵素の働きに
よるコアギュローゲンの繊維状コアギュリンへの転換に
より起こることが明らかにされている。一方アメボサイ
ト・ライセートのβ−グルカンによる凝固現象が、β−
グルカン性凝固酵素前駆体活性化因子による凝固酵素前
駆体の活性化と、活性型凝固酵素の働きによるコアギュ
ローゲンの繊維状コアギュリンへの転換により起こり、
アメボサイト・ライセートに含まれるエンドトキシン性
凝固酵素前駆体活性化因子と、β−グルカン性凝固酵素
前駆体活性化因子が異なるものであることが、Ｍｏｒｉ
ｔａらにより報告され（ＦＩｌｉＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ
、 １２９．２．３１８−３２１）、硫酸化多糖類を担
体とする液体クロマトグラフィーを用いたβ−グルカン
性凝固酵素前駆体活性化因子の除去を特徴とする、エン
ドトキシンに対する特異性の高いアメボサイト・ライセ
ートの調製法が岩永らにより開示されている。（特開昭
５９−２７８２９）また本発明者らにより、スルホプロ
ピル基を吸着担体とする液体クロマトグラフィーにアメ
ボサイト・ライセートを付し、エンドトキシン性凝固酵
素前駆体活性化因子を特異的に吸着せしめる、β−グル
カン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート
の製造方法か開示されている。（特願昭６３−２９２４
９４号） 〔発明が解決しようとする課題〕 従来、β−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイ
ト・ライセートを得るには、岩永らの方法に従いアメボ
サイト・ライセートを硫酸化多糖類を吸着担体とする液
体クロマトグラフィーに付して分画し、β−グルカン性
凝固酵素前駆体活性化因子と凝固酵素前駆体を組み合わ
せる方法、あるいは、北川らの方法にしたかい、アメボ
サイト・ライセートをスルホプロピル基を吸着担体とす
る液体クロマトグラフィーに付し、エンドトキシン性凝
固酵素前駆体活性化因子を除去する方法が用いられてき
た。しかしながら、岩永らの方法では高価で調製の面倒
な硫酸化多糖類を吸着担体とする液体クロマトグラフィ
ー用充填剤を使用しなければならないという問題点があ
り、北川らの方法ではβ−グルカン類を測定する際に高
価なペプチド性合成基質を使用しなければならないとい
う問題点があった。
本発明は、上述した従来技術の問題点を解消するために
提案されたもので、その目的はカブトガニの血リンパ液
より取得されるアメボサイトの抽出液（アメボサイト・
ライセート）より、エンドトキシン性凝固酵素前駆体活
性化因子を除去し、さらに内因性の凝固物質であるコア
ギュローゲンを添加することにより、β−グルカン類に
対する特異性の高いアメボサイト・ライセートの簡便な
調製法を提供することにある。
提案されたもので、その目的はカブトガニの血リンパ液
より取得されるアメボサイトの抽出液（アメボサイト・
ライセート）より、エンドトキシン性凝固酵素前駆体活
性化因子を除去し、さらに内因性の凝固物質であるコア
ギュローゲンを添加することにより、β−グルカン類に
対する特異性の高いアメボサイト・ライセートの簡便な
調製法を提供することにある。
本発明者らは、スルホプロピル基を吸着担体とするイオ
ン交換クロマトグラフィーにアメボサイト・ライセート
を付することにより得た、凝固物質であるコアギュロー
ゲンを含まないβ−グルカン類に対して特異性の高いア
メボサイト・ライセートに、コアギュローゲンを添加す
ることにより、β−グルカン類に対して特異性の高いア
メボサイト・ライセートが、簡便に製造できるというこ
とを見出し本発明を完成した。
ン交換クロマトグラフィーにアメボサイト・ライセート
を付することにより得た、凝固物質であるコアギュロー
ゲンを含まないβ−グルカン類に対して特異性の高いア
メボサイト・ライセートに、コアギュローゲンを添加す
ることにより、β−グルカン類に対して特異性の高いア
メボサイト・ライセートが、簡便に製造できるというこ
とを見出し本発明を完成した。
即ち、本発明は、カブトガニから得られるアメボサイト
・ライセートを、スルホプロピル基を吸着担体とするイ
オン交換液体クロマトグラフィーに付し、エンドトキシ
ン性凝固酵素前駆体活性化因子を含まないβ−グルカン
類に対して特異性の高い画分を採取し、本画分にコアギ
ュローゲンを添加することにより、β−グルカン類に対
する特異性の高いアメボサイト・ライセートを製造する
方法にある。
・ライセートを、スルホプロピル基を吸着担体とするイ
オン交換液体クロマトグラフィーに付し、エンドトキシ
ン性凝固酵素前駆体活性化因子を含まないβ−グルカン
類に対して特異性の高い画分を採取し、本画分にコアギ
ュローゲンを添加することにより、β−グルカン類に対
する特異性の高いアメボサイト・ライセートを製造する
方法にある。
さらに本発明は、上記の製造方法により得られる、β−
グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセ
ートにある。
グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセ
ートにある。
この方法により得られるアメボサイト・ライセートは、
β−グルカンの検出におけるゲル化法及び比濁時間法に
おいて使用できるものであって、非常に有用なものであ
る。
β−グルカンの検出におけるゲル化法及び比濁時間法に
おいて使用できるものであって、非常に有用なものであ
る。
エンドトキシン試験法としてのゲル化法、及び比濁時間
法は、日本薬局方に記載されている方法であるが具体的
には次の通りである。
法は、日本薬局方に記載されている方法であるが具体的
には次の通りである。
ゲル化法はアメボサイト・ライセートと検体を容器に入
れアルミキャブを施しミキサーで１〜２秒間泡立てない
ように混合し３７°Ｃ１１時間放置する。次いで容器を
ゆっくりと１８０°Ｃ転倒させて内容物のゲルが落下す
るか否かを調べてβ−グルカンの検出を行う。このゲル
化法は分光光度計等の特別な機器を必要とせずかつ操作
手順か簡単な、完全な方法である。比濁時間法は検体と
アメボサイト・ライセートとのゲル化反応に伴う濁度変
化を波長６６０ｎｍにおける透過光量の変化として促え
るものである。透過光量の時間変化は反応開始後しばら
くラグがあり、ゲル化が始まると、その進行に伴って透
過光量は減少し、ゲル化完了と共に減少変化も止まる。
れアルミキャブを施しミキサーで１〜２秒間泡立てない
ように混合し３７°Ｃ１１時間放置する。次いで容器を
ゆっくりと１８０°Ｃ転倒させて内容物のゲルが落下す
るか否かを調べてβ−グルカンの検出を行う。このゲル
化法は分光光度計等の特別な機器を必要とせずかつ操作
手順か簡単な、完全な方法である。比濁時間法は検体と
アメボサイト・ライセートとのゲル化反応に伴う濁度変
化を波長６６０ｎｍにおける透過光量の変化として促え
るものである。透過光量の時間変化は反応開始後しばら
くラグがあり、ゲル化が始まると、その進行に伴って透
過光量は減少し、ゲル化完了と共に減少変化も止まる。
透過光量の反応初期の透過光量に対する割合をＲｔとし
、この透過光量比の変化に対してしきい値Ｒｔｈを設定
し、反応開始からＲｔがＲｔｈになるまでの時間をゲル
化時間Ｔｇとして読みとるものです。この比濁時間法は
専用の測定機を必要とするが操作は簡単でしかも定量性
のある方法である。
、この透過光量比の変化に対してしきい値Ｒｔｈを設定
し、反応開始からＲｔがＲｔｈになるまでの時間をゲル
化時間Ｔｇとして読みとるものです。この比濁時間法は
専用の測定機を必要とするが操作は簡単でしかも定量性
のある方法である。
本発明でいうアメボサイト・ライセートとは、イオン強
度０．０５以下のｐｌが中性付近である溶液、好ましく
はトリス−塩酸緩衝液でカブトガニのアメボサイトを抽
出して得られるものである。
度０．０５以下のｐｌが中性付近である溶液、好ましく
はトリス−塩酸緩衝液でカブトガニのアメボサイトを抽
出して得られるものである。
また、本発明で用いられるイオン交換クロマトグラフィ
ーは、北用らの特許に述べられているものと同様のもの
であり、イオン強度０．０５以下のｐＨが中性付近であ
る溶液、好ましくはトリス−塩酸緩衝液で平衡化したス
ルホプロピル基を吸着担体とするものである。この様な
イオン交換クロマトグラフィーに前記アメボサイト・ラ
イセートを付すことによりコアギュローゲンを含まない
β−グルカン類に特異的なアメボサイト・ライセートが
採取できる。
ーは、北用らの特許に述べられているものと同様のもの
であり、イオン強度０．０５以下のｐＨが中性付近であ
る溶液、好ましくはトリス−塩酸緩衝液で平衡化したス
ルホプロピル基を吸着担体とするものである。この様な
イオン交換クロマトグラフィーに前記アメボサイト・ラ
イセートを付すことによりコアギュローゲンを含まない
β−グルカン類に特異的なアメボサイト・ライセートが
採取できる。
また、本発明で用いられるエンドトキシン性凝固酵素前
駆体活性化因子を含まないコアギュローゲンとは、アメ
ホサイト・ライセードをイオン交換クロマトグラフィー
あるいは、ゲル濾過クロマトグラフィー等の方法で粗分
画して得たコアギュローゲン画分を更に精製する、ある
いは酸処理もしくは熱処理を施す等の方法でエンドトキ
シン性凝固酵素前駆体活性化因子を除去あるいは失活せ
しめたものである。この様にして得たコアギュローゲン
を、前記イオン交換クロマトグラフィーで得たβ−グル
カン類に対して特異性の高いアメボサイト・ライセート
に添加することによりβ−グルカン類に対して特異性の
高いゲル化法用あるいは比濁時間法用のアメボサイト・
ライセートを得ることができる。
駆体活性化因子を含まないコアギュローゲンとは、アメ
ホサイト・ライセードをイオン交換クロマトグラフィー
あるいは、ゲル濾過クロマトグラフィー等の方法で粗分
画して得たコアギュローゲン画分を更に精製する、ある
いは酸処理もしくは熱処理を施す等の方法でエンドトキ
シン性凝固酵素前駆体活性化因子を除去あるいは失活せ
しめたものである。この様にして得たコアギュローゲン
を、前記イオン交換クロマトグラフィーで得たβ−グル
カン類に対して特異性の高いアメボサイト・ライセート
に添加することによりβ−グルカン類に対して特異性の
高いゲル化法用あるいは比濁時間法用のアメボサイト・
ライセートを得ることができる。
上記コアギュローゲン添加量は最終製品のアメボサイト
・ライセート１ｍｌに対し蛋白質量として０、１■〜２
０■である。
・ライセート１ｍｌに対し蛋白質量として０、１■〜２
０■である。
次に本発明を実施例により説明する。但し本発明はこの
実施例により限定されるものではない。
実施例により限定されるものではない。
日本産カブトガニ（Ｔａｃｈｙｐｌｅｕｓ ｔｒｉｄｅ
ｎｔａｔｕｓ）血リンパ液よりアメボサイト２０ｇを無
菌的に採取し、このアメボサイトをｐＨ８，０の１０ｍ
Ｍトリス−塩酸緩衝液で抽出して得られたアメボサイト
・ライセート３００−を、ｐＨ８，０の２０ｍＭ トリ
ス−塩酸緩衝液で平衡化した５Ｐ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ
６５０Ｃ（東ソー株式会社製）カラムに加える。次い
で吸着されずに溶出され画分を回収し、エンドトキシン
に対しては反応せずβ−グルカンに対して濃度依存的に
反応する、コアギュローゲンを含まない画分を得る。
ｎｔａｔｕｓ）血リンパ液よりアメボサイト２０ｇを無
菌的に採取し、このアメボサイトをｐＨ８，０の１０ｍ
Ｍトリス−塩酸緩衝液で抽出して得られたアメボサイト
・ライセート３００−を、ｐＨ８，０の２０ｍＭ トリ
ス−塩酸緩衝液で平衡化した５Ｐ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ
６５０Ｃ（東ソー株式会社製）カラムに加える。次い
で吸着されずに溶出され画分を回収し、エンドトキシン
に対しては反応せずβ−グルカンに対して濃度依存的に
反応する、コアギュローゲンを含まない画分を得る。
更に本カラムを、５０ｍＭのＮａＣ１を含む２０ｍＭ
トリス塩酸緩衝液で洗浄した後、１２５ｍＭのＮａＣ１
を含む２０ｍＭ ）リス−塩酸緩衝液で溶出し、この溶
出液をを回収することにより、高純度のコアキュローゲ
ン画分２００ｍ１’を得る。このコアギュローゲン画分
を、６５℃で２０分間加温することにより、コアギュロ
ーゲンの凝固能を損なうことなく、コアギュローゲン画
分に微■混入しているエンドトキシン性凝固酸素前駆体
活性化因子を失活させる。このコアギュローゲン画分を
、前述の５Ｐ−Ｔｏｙｐｅａｒｌ ６５０Ｃ非吸着画分
と混合し濃縮して、β−グルカン類に対して特異的に反
応するゲル化法及び比濁時間法用のアメボサイト・ライ
セー） １００ｍＡ’を得る。
トリス塩酸緩衝液で洗浄した後、１２５ｍＭのＮａＣ１
を含む２０ｍＭ ）リス−塩酸緩衝液で溶出し、この溶
出液をを回収することにより、高純度のコアキュローゲ
ン画分２００ｍ１’を得る。このコアギュローゲン画分
を、６５℃で２０分間加温することにより、コアギュロ
ーゲンの凝固能を損なうことなく、コアギュローゲン画
分に微■混入しているエンドトキシン性凝固酸素前駆体
活性化因子を失活させる。このコアギュローゲン画分を
、前述の５Ｐ−Ｔｏｙｐｅａｒｌ ６５０Ｃ非吸着画分
と混合し濃縮して、β−グルカン類に対して特異的に反
応するゲル化法及び比濁時間法用のアメボサイト・ライ
セー） １００ｍＡ’を得る。
本調製物を用いてのβ−グルカンの定量法は以下のとお
りである。試料０．１ｍｊ、本調製物０．１ ｍｌを直
径１０ｍｍの試験管中で混合した後、トキシンメーター
ＥＴ２０８Ｍ （和光純薬工業株式会社製）を用いて３
７°Ｃて試料の透過光量が５％減少するまでの時間（以
下Ｔｇと略称する）を測定した。反応開始後１時間経過
したならば試験管を静かに１８０度転倒させ、ゲルの形
成の存無を、 １８０度転倒させても崩れないゲルを形
成したものを士、１８０度転倒させると崩れるものを−
として判定した。結果を第１表に示す。試料中のβ−グ
ルカン濃度を求めるには、試料の代わりに既知濃度のβ
−グルカンを用いて、同様の操作でＴｇを求めることに
より作成した検量線にあてはめることでβ−グルカン濃
度を求めることができる。
りである。試料０．１ｍｊ、本調製物０．１ ｍｌを直
径１０ｍｍの試験管中で混合した後、トキシンメーター
ＥＴ２０８Ｍ （和光純薬工業株式会社製）を用いて３
７°Ｃて試料の透過光量が５％減少するまでの時間（以
下Ｔｇと略称する）を測定した。反応開始後１時間経過
したならば試験管を静かに１８０度転倒させ、ゲルの形
成の存無を、 １８０度転倒させても崩れないゲルを形
成したものを士、１８０度転倒させると崩れるものを−
として判定した。結果を第１表に示す。試料中のβ−グ
ルカン濃度を求めるには、試料の代わりに既知濃度のβ
−グルカンを用いて、同様の操作でＴｇを求めることに
より作成した検量線にあてはめることでβ−グルカン濃
度を求めることができる。
なお標準物質としてカードランを用いて作成した検量線
を第１図に、ゲル化判定の結果を第２図に示す。また本
調製物がエンドトキシンに対しては反応しないことを示
すために、試料の代わりに既知濃度のエンドトキシンを
用いた場合の結果を第２図及び第２表に示す。
を第１図に、ゲル化判定の結果を第２図に示す。また本
調製物がエンドトキシンに対しては反応しないことを示
すために、試料の代わりに既知濃度のエンドトキシンを
用いた場合の結果を第２図及び第２表に示す。
本発明品のカードランに対するゲル化判定の結果第２表
本発明品のエンドトキシンに対する
ゲル化判定の結果
比較例として５Ｐ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ６５０Ｃに付
す前のアメボサイト・ライセートについて、上述の方法
で作成したカードランに対する検量線を第３図に、また
５Ｐ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ６５０Ｃに付す前のアメボ
サイト・ライセートがエンドトキシンに対して感受性を
有することを示すために、エンドトキシンに対して上述
の方法で測定した結果を第４図に示す。第２図と第４図
を比較すると明らかなように、アメボサイト・ライセー
トより得られる本調製物は従来のアメボサイト・ライセ
ートと異なり、β−グルカンに対して濃度依存的に反応
しエンドトキシンに対しては反応性を示さないものであ
る。
す前のアメボサイト・ライセートについて、上述の方法
で作成したカードランに対する検量線を第３図に、また
５Ｐ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ６５０Ｃに付す前のアメボ
サイト・ライセートがエンドトキシンに対して感受性を
有することを示すために、エンドトキシンに対して上述
の方法で測定した結果を第４図に示す。第２図と第４図
を比較すると明らかなように、アメボサイト・ライセー
トより得られる本調製物は従来のアメボサイト・ライセ
ートと異なり、β−グルカンに対して濃度依存的に反応
しエンドトキシンに対しては反応性を示さないものであ
る。
本方法により、エンドトキシンに対しては反応せず、β
−グルカン類に対する特異性の高いゲル化法あるいは比
濁時間法用のアメボサイト・ライセートを容易に得るこ
とができる。
−グルカン類に対する特異性の高いゲル化法あるいは比
濁時間法用のアメボサイト・ライセートを容易に得るこ
とができる。
本方法により取得されるアメボサイト・ライセートを用
いてのβ−グルカン類の定量は、高価な合成基質を用い
る必要が無く、操作の煩雑な比色操作を行う必要もない
非常に簡便な方法である。
いてのβ−グルカン類の定量は、高価な合成基質を用い
る必要が無く、操作の煩雑な比色操作を行う必要もない
非常に簡便な方法である。
本方法によるアメボサイト・ライセートの調製物は、エ
ンドトキシンに対しては反応せず、β−グルカンに対し
ては濃度依存的に高感度に反応するため、β−グルカン
類に対する特異性の高い高感度な定量用試薬として利用
可能である。さらに、β−グルカンは真菌類の菌体成分
であるので、β−グルカンの定量による真菌症の診断薬
としても利用可能である。本調製物はβ−グルカン性の
抗癌剤（クレスチン、レンチナンなと）とも反応するた
め、これらの抗癌剤の血中濃度の測定にも利用可能であ
る。
ンドトキシンに対しては反応せず、β−グルカンに対し
ては濃度依存的に高感度に反応するため、β−グルカン
類に対する特異性の高い高感度な定量用試薬として利用
可能である。さらに、β−グルカンは真菌類の菌体成分
であるので、β−グルカンの定量による真菌症の診断薬
としても利用可能である。本調製物はβ−グルカン性の
抗癌剤（クレスチン、レンチナンなと）とも反応するた
め、これらの抗癌剤の血中濃度の測定にも利用可能であ
る。
第１図は標準物質としてカードランを用いて作成した検
量線、第２図は実施例において得られたβ−グルカン類
に対して特異性の高いアメボサイト・ライセートがエン
ドトキシンに対して反応しないことを示す図、第３図は
５Ｐ−ＴｏｙｏＪ）ｅａｒｌ ６５０Ｃに付す前のアメ
ボサイト・ライセートについてカードランを標準物質と
して作成した検量線、第４図は５Ｐ−Ｔｏｙｏｐｅａｒ
ｌ ６５０Ｃに付す前のアメボサイト・ライセートがエ
ンドトキシンに対して感受性を有することを示す図であ
る。 （ｆｌ ば） 第２図 エンドトキシン濃度（ｇ／Ｊ）
量線、第２図は実施例において得られたβ−グルカン類
に対して特異性の高いアメボサイト・ライセートがエン
ドトキシンに対して反応しないことを示す図、第３図は
５Ｐ−ＴｏｙｏＪ）ｅａｒｌ ６５０Ｃに付す前のアメ
ボサイト・ライセートについてカードランを標準物質と
して作成した検量線、第４図は５Ｐ−Ｔｏｙｏｐｅａｒ
ｌ ６５０Ｃに付す前のアメボサイト・ライセートがエ
ンドトキシンに対して感受性を有することを示す図であ
る。 （ｆｌ ば） 第２図 エンドトキシン濃度（ｇ／Ｊ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、カブトガニのアメボサイト・ライセートをスルホプ
ロピル基を吸着担体とするイオン交換液体クロマトグラ
フィーに付し、エンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化
因子を含む画分を除去したものに、カブトガニコアギュ
ローゲンを添加することを特徴とする、β−グルカン類
に対する特異性の高いアメボサイト・ライセートの調製
方法。 ２、請求項１記載の製造方法で得られるβ−グルカン類
に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2189524A JP2560139B2 (ja) | 1990-07-19 | 1990-07-19 | βーグルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2189524A JP2560139B2 (ja) | 1990-07-19 | 1990-07-19 | βーグルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0476459A true JPH0476459A (ja) | 1992-03-11 |
| JP2560139B2 JP2560139B2 (ja) | 1996-12-04 |
Family
ID=16242732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2189524A Expired - Lifetime JP2560139B2 (ja) | 1990-07-19 | 1990-07-19 | βーグルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2560139B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996006858A1 (en) * | 1994-09-01 | 1996-03-07 | Seikagaku Corporation | (1→3)-β-D-GLUCAN-BINDING PROTEIN, ANTIBODY THAT RECOGNIZES THE PROTEIN, AND USE OF THE PROTEIN AND ANTIBODY |
| CN1293383C (zh) * | 2005-01-13 | 2007-01-03 | 丁友玲 | 一种临床检测试剂的制备方法 |
| CN102326082A (zh) * | 2009-02-19 | 2012-01-18 | 兴和株式会社 | 凝固蛋白原原料及其制造方法、使用它测定来自生物的生理活性物质的方法和测定装置 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6245530A (ja) * | 1985-08-23 | 1987-02-27 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 肝実質細胞増殖因子 |
| JPH0218080A (ja) * | 1988-07-06 | 1990-01-22 | Matsushita Electric Works Ltd | 立体面への印刷方法 |
| JPH02138193A (ja) * | 1988-11-21 | 1990-05-28 | Taiyo Fishery Co Ltd | β−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 |
-
1990
- 1990-07-19 JP JP2189524A patent/JP2560139B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6245530A (ja) * | 1985-08-23 | 1987-02-27 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 肝実質細胞増殖因子 |
| JPH0218080A (ja) * | 1988-07-06 | 1990-01-22 | Matsushita Electric Works Ltd | 立体面への印刷方法 |
| JPH02138193A (ja) * | 1988-11-21 | 1990-05-28 | Taiyo Fishery Co Ltd | β−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996006858A1 (en) * | 1994-09-01 | 1996-03-07 | Seikagaku Corporation | (1→3)-β-D-GLUCAN-BINDING PROTEIN, ANTIBODY THAT RECOGNIZES THE PROTEIN, AND USE OF THE PROTEIN AND ANTIBODY |
| CN1293383C (zh) * | 2005-01-13 | 2007-01-03 | 丁友玲 | 一种临床检测试剂的制备方法 |
| CN102326082A (zh) * | 2009-02-19 | 2012-01-18 | 兴和株式会社 | 凝固蛋白原原料及其制造方法、使用它测定来自生物的生理活性物质的方法和测定装置 |
| US8790885B2 (en) | 2009-02-19 | 2014-07-29 | Kowa Company, Ltd. | Coagulogen raw material, process for producing the same, and method and apparatus for measuring physiologically active substance of biological origin using the same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2560139B2 (ja) | 1996-12-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3524120B2 (ja) | 前処理剤、前処理方法、前処理された試料による測定法、測定用キット及び試料の判定方法 | |
| Smith et al. | Colorimetric method for the assay of heparin content in immobilized heparin preparations | |
| Obayashi et al. | A new chromogenic endotoxin-specific assay using recombined limulus coagulation enzymes and its clinical applications | |
| JPH0715474B2 (ja) | エンドトキシンの測定法 | |
| EP0491047A1 (en) | Method for determining (1- 3)-beta-d-glucan | |
| JP3322700B2 (ja) | 固相系反応用エンドトキシン特異的測定剤 | |
| US5474984A (en) | Horseshoe crab amebocyte lysate factor G activation inhibitor | |
| US8790885B2 (en) | Coagulogen raw material, process for producing the same, and method and apparatus for measuring physiologically active substance of biological origin using the same | |
| US5047353A (en) | Process for preparing reagent for measuring endotoxin | |
| CA2726741A1 (en) | Method of assaying physiologically active substance of biological origin, kit for assaying physiologically active substance of biological origin and apparatus for assaying physiologically active substance of biological origin | |
| EP1021463A1 (en) | Factor g reduced amebocyte lysates for detection of bacterial endotoxins | |
| JP2560139B2 (ja) | βーグルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 | |
| JPH02138193A (ja) | β−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 | |
| EP0598903B1 (en) | (1-3)-beta-d-glucan assaying agent | |
| JP3614849B2 (ja) | 前処理剤、前処理方法、前処理された試料による測定法、測定用キット及び試料の判定方法 | |
| JP2688773B2 (ja) | エンドトキシンの不活化方法 | |
| JPH0324628B2 (ja) | ||
| JPS5927828A (ja) | アメボサイト・ライゼートの調製方法 | |
| JP3822974B2 (ja) | エンドトキシン特異的ライセートの製造方法 | |
| JP2701916B2 (ja) | β―グルカンに対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその調製方法 | |
| CN109323996B (zh) | 一种真菌检测试剂盒 | |
| JP3040184B2 (ja) | （１→３）−β−Ｄ−グルカン用測定剤 | |
| Obayashi | A new endotoxin-specific assay | |
| JPH02216462A (ja) | エンドトキシンに対する特異性の高いアメボサイト・ライセート | |
| JPS5928474A (ja) | カブトガニのアメボサイト・ライゼ−ト中に存在する凝固系阻害因子の採取法 |