JPH01238534A - エンドトキシンの除去方法 - Google Patents
エンドトキシンの除去方法Info
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- JPH01238534A JPH01238534A JP63062007A JP6200788A JPH01238534A JP H01238534 A JPH01238534 A JP H01238534A JP 63062007 A JP63062007 A JP 63062007A JP 6200788 A JP6200788 A JP 6200788A JP H01238534 A JPH01238534 A JP H01238534A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6456—Plasminogen activators
- C12N9/6459—Plasminogen activators t-plasminogen activator (3.4.21.68), i.e. tPA
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
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- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、エンドトキシンの分離法に関し、特に注射に
適した高分子生理活性物質製剤を製造するだめのエンド
トキシンの分離除去法に関する。
適した高分子生理活性物質製剤を製造するだめのエンド
トキシンの分離除去法に関する。
より詳細には、目的のを用タンパク質及びエンドトキシ
ンを含む溶液を一旦、目的のタンパク質に特異的に反応
する物質を担持している担体に接触させて、そのタンパ
ク質を吸着させ、次いでアミノ化合物、例えば、アルギ
ニン、ベンツアミジン、尿素又は塩酸グアニジンを含有
する溶液で洗浄することによりエンドトキシンを除去し
、その後目的のタンパク質を回収する方法に関する。
ンを含む溶液を一旦、目的のタンパク質に特異的に反応
する物質を担持している担体に接触させて、そのタンパ
ク質を吸着させ、次いでアミノ化合物、例えば、アルギ
ニン、ベンツアミジン、尿素又は塩酸グアニジンを含有
する溶液で洗浄することによりエンドトキシンを除去し
、その後目的のタンパク質を回収する方法に関する。
〔従来技術と発明が解決しようとする課題３発熱物質は
極微量で恒温動物の体温を異常に上昇させる物質である
ｔ 発熱性物質には細菌性物質、炎症性物質、植物多糖体ま
たは血液型物質などが知られているが、これらの中で最
も発熱に関与する物質は細菌性のものであり、細蘭毒素
と称されており、一般に外毒素（Ｅｘｏ ｔｏｘ ｉｎ
）および内毒素（ｌｉｎｄｏｔｏｘｉｎ）に大別されて
いる。これら毒素のうち、ダラム陰性菌の細胞壁由来の
リポ多糖を主とするいわゆるＯ抗原としての内毒素が最
も発熱性が強力であり、−度混入すると除去するのが非
常に困難である。
極微量で恒温動物の体温を異常に上昇させる物質である
ｔ 発熱性物質には細菌性物質、炎症性物質、植物多糖体ま
たは血液型物質などが知られているが、これらの中で最
も発熱に関与する物質は細菌性のものであり、細蘭毒素
と称されており、一般に外毒素（Ｅｘｏ ｔｏｘ ｉｎ
）および内毒素（ｌｉｎｄｏｔｏｘｉｎ）に大別されて
いる。これら毒素のうち、ダラム陰性菌の細胞壁由来の
リポ多糖を主とするいわゆるＯ抗原としての内毒素が最
も発熱性が強力であり、−度混入すると除去するのが非
常に困難である。
また、注射薬におけるエンドトキシンによる汚染実態は
注射用蒸留水及び生理食塩液の約５０％からエンドトキ
シンを検出、輸液製剤については、９０％からエンドト
キシンが検出されている （昭医会誌、４６巻、１３〜
２５頁、１９８６）。
注射用蒸留水及び生理食塩液の約５０％からエンドトキ
シンを検出、輸液製剤については、９０％からエンドト
キシンが検出されている （昭医会誌、４６巻、１３〜
２５頁、１９８６）。
一方、高分子生理活性物質の製剤化の場合、高度の′ａ
縮を必要とする場合が多い。従って、原液中のエンドト
キシン量が極微量であっても、最終濃縮製剤中にはこれ
が同様に濃縮されており、注射時に発熱の副作用を示す
結果となる。
縮を必要とする場合が多い。従って、原液中のエンドト
キシン量が極微量であっても、最終濃縮製剤中にはこれ
が同様に濃縮されており、注射時に発熱の副作用を示す
結果となる。
エンドトキシンを除去又は失活させる方法として、熱、
酸、アルカリ、トリトンＸ−１００などの界面活性剤で
の処理、限外口過、酸化剤での酸化合成樹脂への吸着な
どが知られている。これらの方法の大部分は手間もかか
り、目的物質を失活させることも考えられる。
酸、アルカリ、トリトンＸ−１００などの界面活性剤で
の処理、限外口過、酸化剤での酸化合成樹脂への吸着な
どが知られている。これらの方法の大部分は手間もかか
り、目的物質を失活させることも考えられる。
このような状況下に本発明者らは種々研究を重ねた結果
、アミノ化合物、例えば、アルギニン、ベンツアミジン
、尿素又は塩酸グアニジン等がエンドトキシンと反応性
をもつことを見出し、このことを利用してエンドトキシ
ンを除去する方法を見出し、本発明を完成した。
、アミノ化合物、例えば、アルギニン、ベンツアミジン
、尿素又は塩酸グアニジン等がエンドトキシンと反応性
をもつことを見出し、このことを利用してエンドトキシ
ンを除去する方法を見出し、本発明を完成した。
本発明は、目的のタンパク質及びエンドトキシンを含む
溶液を一旦、そのタンパク質に特異的に反応する物質を
担持している担体に接触させて目的のタンパク質を吸着
させ、次いでアミノ化合物、例えば、アルギニン、ベン
ツアミジン、尿素又は塩酸グアニジン等を含有する溶液
で洗浄することによりエンドトキシンを除去し、その後
目的のタンパク質を？８離し、エンドトキシンを含まな
いタンパク質を取得する方法である。
溶液を一旦、そのタンパク質に特異的に反応する物質を
担持している担体に接触させて目的のタンパク質を吸着
させ、次いでアミノ化合物、例えば、アルギニン、ベン
ツアミジン、尿素又は塩酸グアニジン等を含有する溶液
で洗浄することによりエンドトキシンを除去し、その後
目的のタンパク質を？８離し、エンドトキシンを含まな
いタンパク質を取得する方法である。
本発明における有用タンパク質とは、医療用の目的で注
射薬として利用されるものを表わし、例えば、インシュ
リン、成長ホルモンなどの各種ホルモン製剤、ウロキナ
ーゼ、ｍｍプラスミノーゲン活性化因子などの酵素製剤
γ−グロブリンなどの血清タンパク質製剤、インターフ
ェロンなどの抗ウイルス製剤などが挙げられる。これら
のタンパク質はすべて生体由来のものである。
射薬として利用されるものを表わし、例えば、インシュ
リン、成長ホルモンなどの各種ホルモン製剤、ウロキナ
ーゼ、ｍｍプラスミノーゲン活性化因子などの酵素製剤
γ−グロブリンなどの血清タンパク質製剤、インターフ
ェロンなどの抗ウイルス製剤などが挙げられる。これら
のタンパク質はすべて生体由来のものである。
また今日、遺伝子組み換え技法または細胞融合の技術を
用い、有用タンパク質を生産させることが行われており
、使用される宿主細胞として大腸菌、枯草菌、酵母、動
物細胞が挙げられ、これら原料の収集過程、あるいは分
離精製を行なう過程で発熱性物質の混入を受けることが
しばしば経験される。
用い、有用タンパク質を生産させることが行われており
、使用される宿主細胞として大腸菌、枯草菌、酵母、動
物細胞が挙げられ、これら原料の収集過程、あるいは分
離精製を行なう過程で発熱性物質の混入を受けることが
しばしば経験される。
本発明の方法は、目的の高分子生理活性物質に適した精
製過程の中で適用されるものであり、つまり、各種クロ
マトグラフィーの中で使用されうる。例えば、イオン交
換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ア
フィニティークロマトグラフィー、吸着クロマトグラフ
ィーなどを使用する際−旦、高分子生理活性物質を吸着
させた後、含まれるエンドトキシンを洗浄工程で除去す
る。
製過程の中で適用されるものであり、つまり、各種クロ
マトグラフィーの中で使用されうる。例えば、イオン交
換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ア
フィニティークロマトグラフィー、吸着クロマトグラフ
ィーなどを使用する際−旦、高分子生理活性物質を吸着
させた後、含まれるエンドトキシンを洗浄工程で除去す
る。
洗浄液に含有させるアミノ化合物としては、例えば、ア
ルギニン、ベンツアミジン、尿素、塩酸グアニジン、ま
たはリジン、オルニチン、イプシロンアミノカプロン酸
等の塩基性アミノ酸、エチルアミノ、エチレンジアミノ
、エタノールアミノ、ヒドロキシルアミノ等のアミノ類
、アセトアミド、ベンツアミド等のアミド類、パラアミ
ノベンツアミジン等のアミジン類、メチル尿素、エチル
尿素等の尿素誘導体等が挙げられる。通常、アルギニン
、ベンツアミジン、尿素、または塩酸グアニジン等が多
用される。
ルギニン、ベンツアミジン、尿素、塩酸グアニジン、ま
たはリジン、オルニチン、イプシロンアミノカプロン酸
等の塩基性アミノ酸、エチルアミノ、エチレンジアミノ
、エタノールアミノ、ヒドロキシルアミノ等のアミノ類
、アセトアミド、ベンツアミド等のアミド類、パラアミ
ノベンツアミジン等のアミジン類、メチル尿素、エチル
尿素等の尿素誘導体等が挙げられる。通常、アルギニン
、ベンツアミジン、尿素、または塩酸グアニジン等が多
用される。
使用条件は用いるクロマトグラフィーの種類により異な
る。目的のタンパク質をｉ＄ Ｊ！しない条件で使用し
、エンドトキシンを除去した後、上記化合物を含まない
洗浄液でエンドトキシン除去の為に使用した化合物を洗
い去る。この後目的のタンパク質を？容離液で？８出す
る。
る。目的のタンパク質をｉ＄ Ｊ！しない条件で使用し
、エンドトキシンを除去した後、上記化合物を含まない
洗浄液でエンドトキシン除去の為に使用した化合物を洗
い去る。この後目的のタンパク質を？容離液で？８出す
る。
以上、タンパク質の精製過程の一つの工程でエンドトキ
シンを分離除去する方法について述べたがエンドトキシ
ン除去の為に使用される上記化合物は、他の使用法とし
て、これら化合物を不溶性担体に直接又は間隔子を介し
て結合してなる吸着体にパイロジエン含有溶液を接触さ
せてパイロジエンを該吸着体に吸着させることによりパ
イロジエンを除去することも可能である。
シンを分離除去する方法について述べたがエンドトキシ
ン除去の為に使用される上記化合物は、他の使用法とし
て、これら化合物を不溶性担体に直接又は間隔子を介し
て結合してなる吸着体にパイロジエン含有溶液を接触さ
せてパイロジエンを該吸着体に吸着させることによりパ
イロジエンを除去することも可能である。
本発明の方法によれば、非イオン性界面活性剤Ｔｒｉｔ
ｏｎ Ｘを用いたエンドトキシンの除去方法（ＩＩＳ１
’ａｔ Ｎｏ、４，４１２，９８５）のように、エンド
トキシンと相互作用する物質についてはエンドトキシン
除去効果が低く、その上、界面活性剤を除去し難いとい
う欠点を有するが、この欠点は改善される。
ｏｎ Ｘを用いたエンドトキシンの除去方法（ＩＩＳ１
’ａｔ Ｎｏ、４，４１２，９８５）のように、エンド
トキシンと相互作用する物質についてはエンドトキシン
除去効果が低く、その上、界面活性剤を除去し難いとい
う欠点を有するが、この欠点は改善される。
以下実施例について説明する。なお、エンドトキシンの
検出はリムルス法（Ｈａｅｍｏｓｔａ−ｓｉｓ＋ ７
＋１８３、１９８７）を用いて行った。
検出はリムルス法（Ｈａｅｍｏｓｔａ−ｓｉｓ＋ ７
＋１８３、１９８７）を用いて行った。
実施例１
ポウズ（Ｂｏｗｅｓ）メラノーマ細胞（八ＴＣＣＣＲＬ
１４２４Ｇ３６１ ）を１０％熱不活性化（５６°Ｃ
１３０分間）胎児牛血清を補充したＲＰＭＩ−１６４０
組織培養媒体中で培養後、培養物を一度洗い血清を含ま
ない媒体中で２４時間培養後、媒体を集め収穫液とした
。収＋ｉ液１０２を適当な方法で部分精製したｉｔｓプ
ラスミノーゲンアクチベータ−（ｔ−ＰＡ）水溶液を出
発物質とした。本溶？ｆｌのｐＨは７〜８、活性はＩ
Ｘ１０’ｌＵ／ｍ１であった。また、この溶液のエンド
トキシン含量はリムルス試験法で約２０ｎｇ／ｒｄ（Ｅ
、ｃｏｌｉ Ｏ，５５：Ｂ５相当）であった。
１４２４Ｇ３６１ ）を１０％熱不活性化（５６°Ｃ
１３０分間）胎児牛血清を補充したＲＰＭＩ−１６４０
組織培養媒体中で培養後、培養物を一度洗い血清を含ま
ない媒体中で２４時間培養後、媒体を集め収穫液とした
。収＋ｉ液１０２を適当な方法で部分精製したｉｔｓプ
ラスミノーゲンアクチベータ−（ｔ−ＰＡ）水溶液を出
発物質とした。本溶？ｆｌのｐＨは７〜８、活性はＩ
Ｘ１０’ｌＵ／ｍ１であった。また、この溶液のエンド
トキシン含量はリムルス試験法で約２０ｎｇ／ｒｄ（Ｅ
、ｃｏｌｉ Ｏ，５５：Ｂ５相当）であった。
この／８？ｅｌ ２０ ｍｌをＦ、Ｊ、Ｊｏｕｂｅｒｔ
らの方法（Ｈｏｐｐｅ−Ｓｏｌ−ｙｅｒｓ’Ｚ、Ｐｈ
１ｇ５ｉｄ Ｃｈａｍ、３６２．５３１〜５３８．１９
８１）に従って精製したエリスリナトリプシンインヒビ
ター（ＥＴＩ）をアガロース樹脂に固定化したＥＴＩ−
アガロース（５■ＥＴＩ／ｄ樹脂）２戚に通した。
らの方法（Ｈｏｐｐｅ−Ｓｏｌ−ｙｅｒｓ’Ｚ、Ｐｈ
１ｇ５ｉｄ Ｃｈａｍ、３６２．５３１〜５３８．１９
８１）に従って精製したエリスリナトリプシンインヒビ
ター（ＥＴＩ）をアガロース樹脂に固定化したＥＴＩ−
アガロース（５■ＥＴＩ／ｄ樹脂）２戚に通した。
続いて、０．５Ｍアルギニン及び０．１Ｍ食塩を含む５
０ｍＭのＮａＨｚＰＯａ−ＮａＯＨｐＨ９，５２０ｍｆ
ｆ１さらに蒸留水１０ｄで洗浄した。素通し液中のｔ−
ＰＡ活性は添加総量の約５χであった。
０ｍＭのＮａＨｚＰＯａ−ＮａＯＨｐＨ９，５２０ｍｆ
ｆ１さらに蒸留水１０ｄで洗浄した。素通し液中のｔ−
ＰＡ活性は添加総量の約５χであった。
続いて、０．１Ｍ食塩を含む０．１Ｍ Ｎａ１ｌｚＰＯ
ａ−ＨｓＰＯ４ｐ）Ｉ２．８５ ｍｌでｔＰＡを溶出す
るとほぼ定量的にｔＰＡが回収でき、かつエンドトキシ
ン含量はリムルス試験法で１０ｐｇ／ｍＡ！以下であり
、はぼ完全にエンドトキシンフリーの製剤が得られた。
ａ−ＨｓＰＯ４ｐ）Ｉ２．８５ ｍｌでｔＰＡを溶出す
るとほぼ定量的にｔＰＡが回収でき、かつエンドトキシ
ン含量はリムルス試験法で１０ｐｇ／ｍＡ！以下であり
、はぼ完全にエンドトキシンフリーの製剤が得られた。
実施例２
実施例１と同様に調製された出発物質を用い、この？８
液２０ｄを抗ヒトｔＰＡモノクローナル抗体をアガロー
スに固定化したα−ｔＰＡアガロース（１０ｍｇａ−ｔ
ＰＡ／ｍｌ樹脂）５０ｒｄに通した。続いて０．１Ｍベ
ンツアミジン及び１Ｍ食塩を含む０．０５Ｍ リン酸緩
衝液ｐＨ７，５２００ｍさらに蒸留水１００ｍｊ！で洗
浄した。
液２０ｄを抗ヒトｔＰＡモノクローナル抗体をアガロー
スに固定化したα−ｔＰＡアガロース（１０ｍｇａ−ｔ
ＰＡ／ｍｌ樹脂）５０ｒｄに通した。続いて０．１Ｍベ
ンツアミジン及び１Ｍ食塩を含む０．０５Ｍ リン酸緩
衝液ｐＨ７，５２００ｍさらに蒸留水１００ｍｊ！で洗
浄した。
素通し液中のｔＰＡ活性は、はぼ検出されなかった。続
いて０．１−食塩を含むＯ，ＬＭ Ｎａ）Ｉ２ＰＯａ−
１１３ＰＯ４ｐＨ２，５５０ｍでｔＰＡを溶出した。添
加総量の約８５％のｔＰＡが回収でき、かつエンドトキ
シン含量はリムルス試験法でエンドトキシンは認められ
なかった。
いて０．１−食塩を含むＯ，ＬＭ Ｎａ）Ｉ２ＰＯａ−
１１３ＰＯ４ｐＨ２，５５０ｍでｔＰＡを溶出した。添
加総量の約８５％のｔＰＡが回収でき、かつエンドトキ
シン含量はリムルス試験法でエンドトキシンは認められ
なかった。
実施例３
ヒト血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ社製）１０■を０．１
＋’１食塩を含む０．０２Ｍ リン酸緩衝液ｐＨ６，０
５ｍｆｆ１に溶解した。
＋’１食塩を含む０．０２Ｍ リン酸緩衝液ｐＨ６，０
５ｍｆｆ１に溶解した。
このン容ン夜のエンドトキシン含量は、リムルス試験法
で約２０ｎｇ／ ｍｆｆ１（Ｅ、ｃｏｌｉ Ｏ，５５：
Ｂ５相当）であった。
で約２０ｎｇ／ ｍｆｆ１（Ｅ、ｃｏｌｉ Ｏ，５５：
Ｂ５相当）であった。
この溶液を上記緩衝液で平衡化したレッド−セフ７０−
ス（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ） ２ ｍｌに通した。続いて０．５Ｍ尿素を含む上
記緩衝液２０ｍ１ｌさらに上記緩衝液２０ｍ２で洗浄し
た後、１．０Ｍ食塩を含む０．０５Ｍ ＮａｔｌｚＰＯ
，−ＮａＯＨｐＨ９，５Ｌｏｖｇで７容出した。タンパ
ク質の回収率は約９０％であり、リムルス試験法でのエ
ンドトキシン含量は１０ｐｇ／ｄ以下であっ実施例４ ヒト血漿を適当な方法で部分精製したインターアルファ
ートリプシンインヒビター溶液（３Ｍ食塩を含む釦リン
酸緩衝液ｐＨ６，８）を出発物質とした。
ス（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ） ２ ｍｌに通した。続いて０．５Ｍ尿素を含む上
記緩衝液２０ｍ１ｌさらに上記緩衝液２０ｍ２で洗浄し
た後、１．０Ｍ食塩を含む０．０５Ｍ ＮａｔｌｚＰＯ
，−ＮａＯＨｐＨ９，５Ｌｏｖｇで７容出した。タンパ
ク質の回収率は約９０％であり、リムルス試験法でのエ
ンドトキシン含量は１０ｐｇ／ｄ以下であっ実施例４ ヒト血漿を適当な方法で部分精製したインターアルファ
ートリプシンインヒビター溶液（３Ｍ食塩を含む釦リン
酸緩衝液ｐＨ６，８）を出発物質とした。
本１ｇ ｌ＆のインターアルファートリプシンインヒビ
ター含量は０．７ｍｇ／！ｄ（酵素免疫法（ＥＩＡ）に
よる〕であり、またエンドトキシン含量は、リムルス試
験法で約４０ｎｇ／ｍ（Ｅ、ｃｏｌｉ Ｏ，５５： Ｂ
５相当）であった。
ター含量は０．７ｍｇ／！ｄ（酵素免疫法（ＥＩＡ）に
よる〕であり、またエンドトキシン含量は、リムルス試
験法で約４０ｎｇ／ｍ（Ｅ、ｃｏｌｉ Ｏ，５５： Ｂ
５相当）であった。
この溶液３ｄをフェニールセファロース５Ｉｄに通した
。続いて０．釘グアニジン塩酸及び３Ｍ食塩を含む０．
０５Ｍ ＮａＨｚＰＯｎ ｐＨ６，８５０ｙｄ、さらに
３Ｍ食塩を含む０．０５Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４ｐＨ６，８
５０ｔａｉｌで洗浄した。
。続いて０．釘グアニジン塩酸及び３Ｍ食塩を含む０．
０５Ｍ ＮａＨｚＰＯｎ ｐＨ６，８５０ｙｄ、さらに
３Ｍ食塩を含む０．０５Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４ｐＨ６，８
５０ｔａｉｌで洗浄した。
素通し液中のインターアルファートリプシンインヒビタ
ーは添加総量の約１０％であった。
ーは添加総量の約１０％であった。
続いて０．０５Ｍ ＮａＨｚＰＯ４溶液ｐＨ９，５２０
ｍｌでインターアルファートリプシンインヒビターた。
ｍｌでインターアルファートリプシンインヒビターた。
インターアルファートリプシンインヒビターは添加総量
の約８０％が回収でき、かつエンドトキシン含量はリム
ルス試験法で１０ｐｇ／ｍｆｆ１以下であった。
の約８０％が回収でき、かつエンドトキシン含量はリム
ルス試験法で１０ｐｇ／ｍｆｆ１以下であった。
実施例５
ヒト血漿からブルーセファロース及びイオン交換樹脂を
用いて精製したα−プロテイナーゼインヒビター溶液（
０，１５？Ｉ食塩を含む０．０５Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７
，３）を出発物質とした。
用いて精製したα−プロテイナーゼインヒビター溶液（
０，１５？Ｉ食塩を含む０．０５Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７
，３）を出発物質とした。
本溶液のα−プロテイナーゼインヒビター含量は１．２
ｍｇ／ｍであり、またエンドトキシン含量はリムルス試
験法で約５０ｎｇ／ｄ（Ｅ、ｃｏｌｉ Ｏ，５５： Ｂ
５相当）であった。
ｍｇ／ｍであり、またエンドトキシン含量はリムルス試
験法で約５０ｎｇ／ｄ（Ｅ、ｃｏｌｉ Ｏ，５５： Ｂ
５相当）であった。
この溶液５０１Ｒ１を樹脂（ＣＩ−セファロース（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａＦｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）） Ｉ
ｇ当たり５．Ｑ ｐ ｍｏｌｅのアルギニンを固定化し
たアルギニン−セファロース５ｄに通した。
ａｒｍａｃｉａＦｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）） Ｉ
ｇ当たり５．Ｑ ｐ ｍｏｌｅのアルギニンを固定化し
たアルギニン−セファロース５ｄに通した。
通過液におけるα−プロテイナーゼインヒビターの回収
量はほぼ１００％であり、エンドトキシン含量はリムル
ス試験法で約３０ｐｇ／ｄであった。
量はほぼ１００％であり、エンドトキシン含量はリムル
ス試験法で約３０ｐｇ／ｄであった。
特許出願人 三井東圧化学株式会社
Claims (1)
- １、エンドトキシンを含有する有用タンパク質の水溶液
を一旦、そのタンパク質に特異的に反応する物質を担持
させた担体に接触させてタンパク質を吸着させ、次いで
アミノ化合物を含有する溶液で洗浄してエンドトキシン
を除去し、目的のタンパク質を溶離することを特徴とす
るエンドトキシンの除去方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63062007A JPH01238534A (ja) | 1988-03-17 | 1988-03-17 | エンドトキシンの除去方法 |
| EP19890302603 EP0333474A3 (en) | 1988-03-17 | 1989-03-16 | Process for the selective removal of endotoxin |
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