JPH01249108A

JPH01249108A - 生体物質の脱塩方法

Info

Publication number: JPH01249108A
Application number: JP63075990A
Authority: JP
Inventors: Kiminobu Satou; 佐藤　公庸; Kazuo Ogawa; 和夫小川; Yoshiyuki Miyaki; 義行宮木
Original assignee: Tosoh Corp
Current assignee: Tosoh Corp
Priority date: 1988-03-31
Filing date: 1988-03-31
Publication date: 1989-10-04

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は生体物質を脱塩する方法に関するものであり、
医薬品などに用いる生体物質の分離・精製に利用される
ものである。

（従来の技術）従来、生体物質の脱塩にはゲル濾過法、透析法などが用
いられていた。しかしながら、ゲル濾過法は操作が繁雑
である上に大量処理に向かず、透析法はセルロースチュ
ーブなどを使用し分子の拡散により脱塩を行うために長
時間を要し、低濃度までの脱塩が困難であるという問題
点があった。

（発明が解決しようとする問題点）本発明の目的は生体物質を良好な回収率、活性収率で、
簡便に脱塩する方法を提供するものである。

（問題点を解決するための手段）本発明者らは上記問題点を解決するために鋭意検討を行
った結果、電気透析法を用いることにより生体物質を良
好な回収率、活性収率で、簡便に脱塩することができる
ことを見出だし本発明を完成するに至った。すなわち本
発明は、目的物である生体物質を含む脱塩対象液中に、
目的物のイオン交換膜への吸着を抑える又は目的物を安
定化させる共存物質を添加し電気透析を行うことを特徴
とする生体物質の脱塩方法である。

本発明における目的物質である生体物質とは、例えば酵
素、抗体、ホルモン、インヒビター、補酵素、ペプチド
、脂質、糖類など医薬品１食品添加などに利用されるも
のであり、これらの生体物質は通常水溶液で抽出精製さ
れるが、この際に塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸
アンモニウム。

リン酸塩、酢酸塩など塩が混入するので、脱塩操作が必
要となる。本発明は上記水溶液に生体物質のイオン交換
膜への吸廿を抑える又は生体物質を安定化させる共存物
質を添加し、電気透析し、生体物質の脱塩を行うもので
ある。

本発明において用いる共存物質は、（１）脱塩後、分離する必要があれば簡単に分離できる
性質を有し、（２）目的の生体物質の活性を消失させる相互作用を有
さない、ものであれば特に限定はしないが、目的物のイオン交換
膜への吸着を抑える共存物質としては、即製アルブミン
などの蛋白質、グリシルグリシルグリシンなどのオリゴ
ペプチド、ポリペプチド、Ｌ−リジン、Ｌ−フェニルア
ラニンなどのアミノ酸、界面活性剤などが挙げられ、目
的物を安定化させる物質としては、グリセリンなどの多
価アルコール、グルコース、サッカロースなどの糖、ポ
リエチレングリコールなどを例示することができる。上
記共存物質の添加量は、水溶液中の目的物の濃度の２倍
以上とすることが好ましく、更に好ましくは５倍以上で
ある。添加量が２倍より低い場合、本発明の効果が期待
できなくなるおそれがある。

本発明における電気透析は、通常行われる電気透析法と
同様に電極の間にアニオン交換膜とカチオン交換膜を交
互に組込んだ電気透析槽を用いて行う。透析槽に用いる
イオン交換膜としては炭化水素系のイオン交換膜とフッ
素系のイオン交換膜があり、いずれも用いることができ
るが、耐久性などの点からフッ素系のイオン交換膜を用
いることが好ましい。また本発明における電気透析での
好ましい電流密度は０．２〜５０　Ａ　／　ｄ　ｍ　２
であり、この範囲より電流密度が低い場合、脱塩時間が
長くなる傾向があり、高い場合イオン交換膜の劣化を早
めるおそれがある。更に塩対象液の塩濃度、温度が高い
程高い電流密度で脱塩が可能となる。

以上のとおり電気透析を行うことにより、生体物質の塩
濃度が１００　ｐｐｍ以下となるまで脱塩を行うことが
゛できる。

（実施例）以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例１第１図に示した電気透析槽１にアニオン交換膜５として
フッ素系アニオン交換膜（東ソー（株）製、イオン交換
容量片面が０．９１で、他面が０．６７ミリ当量／ｇ・
乾燥膜のパイレイヤー膜）カチオン交換膜６としてフッ
素系カチオン交換膜（デュポン社製、　Ｎａｒｌｏｎ３
２４　）を膜間距離が１１！＋！１となるように装着し
た。これらの膜の有効面積は８ｃシであった。また、陽
極７には不溶性電極である酸化金属被覆チタン、陰極８
にはステンレスを用いた。

脱塩対象液としてトリス塩酸緩衝液によりＩ）＋１８に
２ｇされたＩＭの塩化ナトリウムを含む０、０２５＋＊
ｇ／　１０ｍｌのＬＤＩ（（乳酸脱水素酵素）の混合溶
液を用いた。この脱塩対象液に牛血清アルブミン（ＢＳ
Ａ）を０．００１．０．００２．０．０１、Ｏｏ　０２
重量％添加したものを各々電気透析による脱塩に徴した
。

脱塩は上記水溶液１０１を送液ポンプ１５により４０１
／分の流速で循環し、電極液として５％硫酸ナトリウム
水溶液２０１を同流速で電極液送液ライン１３により循
環し、温度２０〜２５℃。

０．３への定電流で行った。

脱塩率９０％となったところで脱塩を終了し、脱塩前と
脱塩後の酵素活性量を測定し回収率を求めた。その結果
を表１に示す。表１よりＢＳＡを添加することにより、
大幅にＬＤＨの回収率が向上することがわかる。

なお、脱塩率は脱塩前の脱塩対象液の電気伝導度を測定
し、脱塩を開始してからの対象液の電気伝導度との比か
ら塩の残存率を求め、この値から脱塩率を求めた。脱塩
率は全ての対象液において４６±１分であった。

表１実施例２脱塩対象液をＧＯＴ　（グルタミン酸−オキザロ酢酸ト
ランスアミナーゼ）　、ＢＳＡの濃度を０、Ｏｉ５重量
％とした以外は実施例１と同様の方法で脱塩を行った。

その結果を表２に示す。表２よりＢＳＡの添加により大
幅にＧＯＴの回収率が向上することがわかる。

表２実施例３脱塩対象液をＰＬＯ（プラスミノーゲン）、ＢＳＡの濃
度を０．００１ｆｆｉ量％とした以外は実施例１と同様
の方法で脱塩を行った。その結果を表３に示す。表３よ
りＢＳＡの添加により大幅にＰＬＯの回収率が向上する
ことがわかる。

表３実施例４脱塩対象液をインヒビターであるＡＴＩＩＩ　（アンチ
トロンビンｍ）、ＢＳＡの濃度を０．００１重量％とし
た以外は実施例１と同様の方法で脱塩を行った。その結
果を表４に示す。表４よりＢＳＡの添加により大幅にＡ
ＴＩ［［の回収率が向上することがわかる。

表４実施例５共存物質としてＢＳＡのかわりにアミノ酸とした以外は
実施例１と同様の方法で脱塩を行った。

アミノ酸はＬ−Ｐｈｅ（Ｌ−フェニルアラニン）、Ｌ−
Ｌｙｓ（Ｌ−リジン）を用いた。脱塩の結果を表５に示
す。表５よりアミノ酸の添加により大幅にＬＤＨの回収
率が向上することがわかる。

表５実施例６共存物質としてＢＳＡのかわりに多価アルコールのグリ
セリンとした以外は実施例１と同様の方法で脱塩を行っ
た。脱塩の結果を表６に示す。表６よりグリセリンの添
加により大幅にＬＤＨの回収率が向上することがわかる
。

表６実施例７共存物質としてＢＳＡのかわりにエチレングリコールと
した以外は実施例１と同様の方法で脱塩を行った。脱塩
の結果を表７に示す。表７よりエチレングリコールの添
加により大幅にＬＤＨの回収率が向上することがわかる
。

表７実施例８脱塩率９９，９％以上まで脱塩を行った以外は実施例１
と同様の方法で脱塩を行った。その結果を表８に示す。

このときの塩の濃度は５０　ｐｐｍ以下であった。

表８（発明の効果）以上のべたとおり、本発明によれば良好な回収率、活性
収率で、簡便に生体物質の脱塩を行うことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明に用いる電気透析槽の一実施悪様を示す
概略図である。図中１・・・電気透析槽　　　　２・・・対象液脱塩室３・
・・陽極室　　　　　　４・・・陰極室５・・・アニオ
ン交換膜　　６・・・カチオン交換膜７・・・陽極　　
　　　　　８・・・陰極９・・・直流電源　　　　１０
・・・対象液槽１１・・・電極液Ｆａ　　　　１２・・
・対象液送液ライン１３・・・電極液送液ライン１４．
１５・・・送液ポンプ１６・・・電気型導度測定セル１７・・・電気電導度計１８・・・ポンプコントローラー１９・・・電流計　　　　　２０・・・コンピューター
２１・・・表示パネル

Claims

【特許請求の範囲】

（１）目的物である生体物質を含む脱塩対象液中に、目
的物のイオン交換膜への吸着を抑える又は目的物を安定
化させる共存物質を添加し電気透析を行うことを特徴と
する生体物質の脱塩方法。