JPH01252276A - 腸内有益菌増殖促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 又里宴巽量 技術分野 本発明はニンニクから得られる腸内有益菌の増殖促進活
性成分及びその用途に関するものである。

先行技術 ニンニクは中国、朝鮮、日本その他各国で栽培されてい
る多年生草木である。一般に強壮薬として知られており
、古くから健胃、発汗、利尿、去たん、殺菌および駆虫
薬として用いられている。

近年ニンニク成分の研究もさかんとなり、ガーリックオ
イルの抗血栓作用（特開昭５７−２０９２＋８号公報参
照）、血小板凝集抑制作用（Ｌａｎｃｅｔ、↓（８２１
２）。

１５０（１９８２））、タンパク画分の生体防御能亢進
作用（特開昭６１−１４０５２６号公報参照）あるいは
アルコール抽出画分の制ガン作用（特願昭６２−１３０
８４８号明細書参照）などの報告がある。

ところで、ヒトを含む多くの動物は、種々の細菌類と共
生しており、中でも腸内細菌、特に腸内有益菌は、ビタ
ミンや蛋白の合成、消化吸収の補助、外来菌の増殖防止
、免疫機能の亢進あるいは下痢、便秘または鼓腸等の改
善といった幅広い作用が知られている。

この様な腸内細菌の腸内におけるバランスは、宿主の年
齢、生理、細菌類間の相互作用、食物、薬剤や気候等の
影響によって変化し、特に腸内有益菌であるビフィズス
閑は加齢によって減少することが知られている。

一方で、加齢と共に優勢となってくる非有益菌あるいは
病原性菌は、アンモニア、硫化水素、アミン、フェノー
ル、発癌性物質その他毒素等を生産し、これらの産物は
下痢、便秘といった軽度の障害から発育障害、肝障害、
抵抗力の低下、癌といった重篤な障害をもたらすことも
知られている［詳細は（株）メディカルリサーチセンタ
ー編「ビフィズス菌Ｊ（１９７８年７月１日（株）ヤク
ルト本社発行）を参照されたい］。

この様な観点から、これら腸内有益菌の増殖は、ヒトを
含む多くの動物の健康維持および増進に大きく寄与する
と考えられ、腸内有益菌（例えば、ビフィズス菌あるい
は乳酸菌等）数を増加させるために種々のビフィズス菌
製剤、醗酵乳製品あるいは化学物質にンジンから分離さ
れた　４゛−ホスホパンテティン−８−スルホン酸ある
いはデホスホＣｏＡ　−Ｓ−スルホン酸）等が研究また
は開発されている。

また、近年、増殖促進物質としてショ糖にフラクトース
（果糖）が１〜３分子結合したフラクトオリボ糖が、こ
れら腸内細菌の増殖を促す物質として実用化されている
。

しかしながら、ニンニクの特定な成分に、この様な活性
があったことは、全く報告されてないのが現状である。

発明の概要 叉１ 本発明は新規な腸内有益閑の増殖促進活性成分の提供を
目的とし、ニンニク成分がこの作用を有するという発見
に基づくものである。

したがって、本発明による腸内有益菌の増殖促進活性成
分は、ニンニクから水または炭素数１〜４の含水または
非含水の低級アルコールにより抽出される成分から、さ
らに下記イ）および／または口）の工程を経て得られる
こと、を特徴とするものである。

イ）透析、ゲル濾過および限外濾過から選ばれる少なく
とも一つの手段に付して低分子化合物を分離除去するこ
と。

口）陰イオン交換クロマトグラフィーに付して吸着画分
を得ること。

また、本発明による整腸剤は、上記成分を有効成分とす
ること、を特徴とするものである。

さらに、本発明による食品および飼料は、上記成分を含
むこと、を特徴とするものである。

ガ末 ニンニクの特定の抽出成分にこのような生理活性があっ
たということは思いがけなかったことというべく、そし
て本発明による腸内有益閑の増殖促進活性成分およびこ
の成分を含む整腸剤、食品ならびに飼料の提供は言うま
でもなく、腸内有益閑の増殖を通じ、ヒトを含む動物の
健康維持、増進に対して有意義な貢献をなすものである
。

さらに付は加えれば、これら腸内有益菌を用いた物質の
生産あるいは実験的培養においても、重要な栄養源とし
て用いることができるであろう。

発明の詳細な説明 ２；ｔζ＝−グ 本発明でいうニンニクとは、ゆり科 （Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）、アリウム（Ａｌ　ｌ　ｉｕｍ
）属に属するアリウム・サティパム・リンネ（Ａｌｌｉ
ｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍ　Ｌ、）を指し、例えばオオニン
ニク（Ａｌｌｉｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍＬ、　ｆｏｒｍａ
　ｐｅｋｉｎｅｓｅ　Ｍａｋｉｎｏ）　　がこれにあた
る。

目的画分を取得すべく材料となる部分はとりわけ鱗茎部
（内部に分裂してできた通常５〜２０個の割球状形の小
鱗茎が入っている）が好ましく、これを乾燥するか、ま
たはそのままの状態で抽出に供することができる。

また、これらの植物を常法によって組織培養に付して、
その培養物を用いることもできる。

目的成分の取得 ニンニクの抽出および目的成分の取得は、基本的には植
物生薬の抽出に慣用される任意の手段により行なうこと
ができる。

先づ、抽出対象はニンニク植物体の任意の部分であるが
、その鱗茎部が最も好ましい。

そして、本発明による取得方法は、上記ニンニクを、水
または炭素数１〜４の含水または非含水の低級アルコー
ルにより抽出した後、このニンニク＝　７− 成分を、下記イ）および／または口）の工程に付すこと
から成るものである。特に好ましくは、イ）および口）
の工程をこの順序で行なうのがよい。

′こで抽剤として使用すべき低級アルコールは、炭素数
１〜４のもの（通常は１価アルコール）であり、特に好
ましいのはエタノールである。

抽出は加温下でも行うことができるが、常温下では抽出
時間が長く、数時間から数日程度が必要であることが普
通である。また、抽出効率を上げるために、対象植物体
は破砕したものであることが好ましいのは言うまでもな
い。

（イ）低分子物質の分離除去 上記抽出成分は、抽剤アルコールを留去した後、透析、
ゲル濾過、限外濾過あるいは逆浸透圧法などの任意の高
分子精製手段に付して上記抽出成分中に混在する低分子
物質やイオン等の不純物を分離除去することができる。

好ましくは透析、ゲル濾過および限外濾過から選ばれる
少なくとも一つの手段に付すのがよい。なお、本発明で
いう低分子化合物とは、分子量１万以下の有機および無
機−８＝ 物質をいう。

１）透析 透析は半透膜の分子ふるい効果を利用した高分子成分の
分離法の一つであり、半透膜としては一般に動物膜、セ
ロファン膜、コロジオン膜、ゼラチン膜等が繁用されて
いる。

本発明における透析も任意の公知手段を用いて行うこと
ができる。

２）ゲル濾過 ゲル濾過は、はぼ均一な孔径の三次元の網目構造を有し
ている高分子のゲル濾過剤を用いて分子量の異なる水溶
性高分子物質を分離除去する方法をいう。ゲル濾過剤と
しては、デキストランゲルし例えば　５ｅｐｈａｄｅｘ
　　（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌ
ｓ）］、ポリアクリルアミドゲル［例えばＢｉｏ　Ｇｅ
１（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａシｏｒｉｅｓ）］あ
るいはアガロースゲル［例えば５ｅｐｈａｒｏｓｅ　（
ファルマシア社製）１等任意のものを使用することがで
きる。

８）限外濾過 限外濾過は一定の大きさの孔をもった膜の両面に加圧ま
たは吸引により圧力差を加えることによって高分子成分
を分散媒かられける操作をいう。限外濾過膜としては、
透析の場合と同様にセロファン８莫、コロジオンｎ桑、
ゼラチン膜等を用いることができる。

（ロ）陰イオン交換クロマトクラフィーによる精製上記
処理液は、低湿下で減圧濃縮するかまたは凍結乾燥した
後、陰イオン交換クロマトグラフィーに付して目的画分
を吸着画分として得ることができる。

本発明でいう陰イオン交換クロマトグラフィーは、液相
中の陰イオンを取り入れて自己のもっている陰イオンを
放出する性質のある樹脂、例えば、ポリスチレンジビニ
ルベンゼン共重合体、ポリアミン、水　和酸化チタンま
たはセルロース等の任意の陰イオン交換体を用いて、溶
液中の陽イオン画分と陰イオン画分とを分離する方法を
いい、通常の公知手段をもちいておこなうことができる
。

また、上記クロマトグラフィーに付して得られる吸着画
分は、無機の強酸−強塩基の塩、例えばＮａＣｌ、ＫＣ
Ｉ、Ｎａ２ＳＯ４，に２ＳＯ４等で処理してイオン強度
を変化させて回収することができる。

上記溶出液は、（イ）に示した方法により塩類を除いた
後に、低温で減圧濃縮するか、または凍結乾燥に付して
、目的とする成分を得ことができる。

腸内有益菌の増殖促進作用ならびに整腸：用本発明にお
ける腸内有益菌の増殖促進作用とは、腸内においてビタ
ミン合成、消化吸収の補助、病原菌または有害菌感染に
対する抵抗性の増強あるいは下痢、便秘または鼓腸の改
善作用等に関与する腸内有益菌の増殖促進作用を言い、
二次的にこれらの腸内有益菌の効果を期待できるもので
ある。

具体的には、バクテロイデス、ユウバクテリウム、ビフ
ィズス菌、乳酸菌、大腸菌（無毒株）あるいは腸球菌等
が上げられるが、主にビフィズス菌および乳酸菌に対す
る増殖促進作用である。

一方、本発明における整腸作用とは、便秘、下痢、局内
異常発酵または鼓腸等の小腸ならびに大腸間でのトラブ
ルを改善する作用を言う。

’１１１ｍ□剤及び食品ならびに飼料 本発明における整腸剤は前記ニンニク成分それ自体また
は適時製剤用の賦形剤、結合剤、希釈剤等と混合して成
るものであり、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、液剤ま
たは注射剤などの形態で経口的または非経口的に授与す
ることができる。なお、必要に応じて他の薬剤を調合さ
せてもよい。

また、一般の食品類として調製する場合は、該成分に任
意の賦形剤、食品添加物または香料等を添加して、粉末
、顆粒、塊状の固形食品あるいは飲料食品として加工す
ることができる。

さらに、飼料として調製する場合は、該成分を直接任意
の飼料に配合するか、上記と同様に粉末、顆粒、塊状あ
るいは液状とした後、配合して調製することができる。

また、飼料を本物質で被覆したものであってでもよい。

なお、ここで言う飼料とは、家畜またはペットを対象と
した動物用食料である。

なお、整腸剤として用いる場合のニンニク成分の投与量
は、年齢、体重、症状により適宜増減するが、経口的に
は通常成人、１日、ニンニク成分として１００ｍｇ〜１
０ｇ程度であり、さらに好ましくは５００ｍｇ〜５ｇ程
度である。本発明による好ましい具体例は、該成分と製
剤上の補助成分とからなるものである。なお、本薬剤を
人間以外の動物薬としても用いることができることは、
言うまでもない。

本発明におけるニンニク成分の毒性は、例えば、ニンニ
クの希エタノール抽出液（エキス分１４．５％。

アルコール数１．１８）のしＤ５ｏ値が、経口、腹腔お
よび皮下のいづれの投与経路においても、３０ｍ１／に
８以上であること（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔ
ｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｓｅｓ、９．５７
（１９８４））およびニンニクが食品として常用されて
いること、等により一般に低毒性である。

実験例 ニンニク成分の取得 適当な大きさに破砕したオオニンニクの鱗茎部２００ｇ
に２０％のエタノール４００ｍ１を加えて、室温で１５
時間以上の抽出をおこなった。

このニンニク抽出液を４０℃以下で、約８Ｑｍｌまで減
圧濃縮した後、ＭＷ　ｃｕｔ　ｏｆｆ　３５００の透析
チューブ（ＳＰＥＣＴＲＩＪＭ社製）に移し清水にて、
室温、−夜の透析をした後、凍結乾燥を行った。（収量
１２．１ｇ）。

得られた凍結乾燥物のうち約５．５８を０．０５Ｍのト
リス−塩酸緩衝液（ｐＨ８）で平衡化したＤＥＡＥ−Ｔ
ｏｙｏｐｅａｒｌ　６５０Ｍ（東ソー製）（樹脂量的１
９０ｍ　ｌ　）に付して該緩衝液で素通り画分を分離除
去した。吸着画分は、２ＭのＮａＣｌを含む０．０５Ｍ
）リス−塩酸緩衝液（ｐ１１８）約１０１００Ｏを用い
て溶出させ、これを前述のように透析して塩類等を除い
た後に、凍結乾燥して目的とする成分を得た（収量的５
２０ｍｇ）。該成分は水に溶りやすく、はとんどの有機
溶媒に不溶であった。

焔スーイズス菌および乳酸菌の増殖促進作用Ｉ）ビフィ
ズス菌増殖促進効果 （１）実験方法 ビフィズス菌に対する増殖促進効果は被検菌として　Ｂ
ｉｆｉｄｏｂａｃｔｒｉｕｍ　ｂｉｆｉｄｕｍ　ＩＦｏ
　１４２５２株を用い、ＧＡＭブイヨン培地で検討をお
こなった。ここでいうＧＡＭブイヨン培地は以下に示す
培地である。

ロペプトン１０ｇ、ダイズペプトン３ｇ、プロテオース
ペプトン１０ｇ、消化血清末１３．５ｇ、酵母エキス５
ｇ、肉エキス２．２８肝臓エキス末１．２ｇ、ブドウ糖
３ｇ、リン酸二水素カリウム２．５ｇ、塩化ナトリウム
３ｇ、５ｏｌｕｂｌｅ　５ｔａｒｃｈ　５３、Ｌ−シス
ティン塩酸塩０．３ｇ、チオグリコール酸ナトリウム０
．３ｇ、水１ｅ、ｐＨ７，３Ｊ　　上記組成のＧＡＭブ
イヨン液体培地を用いビフィズス菌を３７℃、４日間嫌
気培養した。

嫌気培養にはＢＢＬガスパック１００嫌気システムを使
用した。

次にあらかじめ被検試料濃度が０．５％、０．２％、０
．１％（ｗｅｔ／ｖｏｌ）となる様に調製したＧΔ問ブ
イヨン液体培地を作り、これを５ｍｌずつ試験管に入れ
た。

これに先に前培養したビフィズス菌１００μｅを無菌的
に接種後、３７℃、４日間嫌気培養を行った。

嫌気培養は前述とおなしガスパックシステムを用いた。

４日間培養後菌数の増加を６００ｎｍにおける吸光度を
測定することによって増殖度を調べた。

（２）実験結果 上記実験結果は第１図に示した通りである（なお、○印
はコントロールの値を示す）。本ニンニク成分は少量で
強力なビフィズス菌増殖促進作用があることが明かとな
った。また、作用は濃度依存的であることも明かとなっ
た。

ＩＩ）の乳酸菌の増殖促進効果 （１）実験方法 乳酸菌に対する増殖促進効果は被検菌としてＬａｃｔｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　ＩＦＯ１
３９５１株を用い８０３培地で検討を行った。ここで用
いた８０３培地とは以下に示す組成の培地である。

「ポリペフトン１％、酵母エキス０．５％、グルコース
０．５％ラクトース０．２％、ツイーン８００．０５％
。

Ｍ２ＳＯ４・７Ｈ２００，１％ｐＨ７，０」上記組成の
８０３培地を用いて斜面培地により乳酸菌を３７℃、１
日間前培養を行った。

次に、あらかじめ被検試料濃度が０．５％、０．２％、
０゜１％（ｗｅｔ／ｖｏｌ）となる様に調製した８０３
培地を作り、これを５ｍｌずつ試験管に入れた。これに
先に前培＝　１６　＝ 養した乳酸菌１００μｌを接種後３７℃、４日間の培養
を行った。４日間培養後閑数の増加を６００ｎｍにおけ
る吸光度を測定することによって増殖度を調べた。

また、培地中の糖類による影響を調べるために８０３培
地からグルコースを除いた培地、ラクトースを除いた培
地についても調べた。

（２）実験結果 上記実験結果は第２図、第３図、第４図に示した通りで
ある（なお、○印はコントロールの値を示す）。いずれ
の場合も本ニンニク成分は少量で強力な乳酸菌増殖促進
作用があることが明がとなった。また、作用は濃度依存
的であることも明かとなった。

製　　剤　　化 実施例１ ニンニク成分１０５０ｇと結晶セルロース１４７０ｇ、
デンプン４５０ｇおよびステアリン酸マグ♀シュウム３
０８とを均一に混合し、叶う−コンバクタ〜にて圧縮成
形しｉこ。これを常法に従って整粒し、１包２ｇの分包
剤とした。

実施例２ ニンニク成分１０５０ｇと結晶セＩｂＩ］−ヌ１４７０
ｇ、デンプン４５０８およびステアリン酸マグネシュウ
ム１５ｇとを均一に混合し、ローラーコンバクターにて
圧縮成形した。これを常法に従って整粒した後、ステア
リン酸マグネシュウム１５ｇを加え混合した。

この混合物を１錠当り５００ｍｇで打錠した。

実施例３ ニンニク成分１０５０ｇと乳糖１２００ｇ、結晶１＋印
１５７０ｇおよびステアリン酸マグネシュウム１５ｇと
を均一に混合し、スッラグ打錠機でスラッジとした。こ
れを整粒し、これにデンプン１５０ｇおよびステアリン
酸マグネシュウム１５ｇを混合し、１錠当り５００ｍｇ
で打錠した。

実施例４ ２０００ｍ１のビーカーに精製水約５００ｍ　ｌをとり
、ニンニク成分２３８ｇを溶解した。これに単シロッ月
０００ｍ１を加え、混和した後、ブチルパラベン０．２
４ｇを溶解したエタノール溶液１７ｍ１を加え、更に混
和した。これに精製水を加え、全量１７００ｍ１にした
後、メンフランフィルターで濾過した。この濾液を常法
に従って１ビン当り３０ｍ１充填した後、加熱滅菌を行
なって、シロップ剤とした。

実施例５ ２０００ｍ　ｌのビーカーに精製水約１０１００Ｏをと
り、ニンニク成分１０５ｇを溶解した。これに単シロッ
プ２００ｍ１を加えた。

これにブチルパラベン０．２１３を溶解した後、これに
精製水を加え、全量１５００ｍｌにした。これをメンフ
ランフィルターで濾過した後、との濾液を常法に従って
１ビン当り３０ｍ１充填した後、加熱滅菌を行なって、
ドリンク剤とした。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＣＡＭ培地におけるビフィズス閑の増殖促進
効果を示したグラフである。 第２図は、８０３培地における乳酸菌の増殖促進効果を
示したグラフである。 第３図は、８０３培地からグルコースを除いた培地にお
ける乳酸菌の増殖促進効果を示したグラフである。 第４図は、８０３培地からラクトースを除いた培地にお
ける乳酸菌の増殖促進効果を示したグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ニンニクから水または炭素数１〜４の含水または非
   含水の低級アルコールにより抽出される成分から、さら
   に下記イ）および／またはロ）の工程を経て得られる腸
   内有益菌の増殖促進活性成分。 イ）透析、ゲル濾過および限外濾過から選ばれる少なく
   とも一つの手段に付して低分子化合物を分離除去するこ
   と。 ロ）陰イオン交換クロマトグラフィーに付して吸着画分
   を得ること。 ２、腸内有用菌がビフィズス菌または乳酸菌から選ばれ
   たものである請求項１項に記載の増殖促進剤。 ３、ニンニクから水または炭素数１〜４の含水または非
   含水の低級アルコールにより抽出される成分から、さら
   に下記イ）および／またはロ）の工程を経て得られる成
   分を有効成分とする整腸剤。 イ）透析、ゲル濾過および限外濾過から選ばれる少なく
   とも一つの手段に付して低分子化合物を分離除去するこ
   と。 ロ）陰イオン交換クロマトグラフィーに付して吸着画分
   を得ること。 ４、ニンニクから水または炭素数１〜４の含水または非
   含水の低級アルコールにより抽出される成分から、さら
   に下記イ）および／またはロ）の工程を経て得られる成
   分を含む食品。 イ）透析、ゲル濾過および限外濾過から選ばれる少なく
   とも一つの手段に付して低分子化合物を分離除去するこ
   と。 ロ）陰イオン交換クロマトグラフィーに付して吸着画分
   を得ること。 ５、ニンニクから水または炭素数１〜４の含水または非
   含水の低級アルコールにより抽出される成分から、さら
   に下記イ）および／またはロ）の工程を経て得られる成
   分を含む飼料。 イ）透析、ゲル濾過および限外濾過から選ばれる少なく
   とも一つの手段に付して低分子化合物を分離除去するこ
   と。 ロ）陰イオン交換クロマトグラフィーに付して吸着画分
   を得ること。