JPH01254701A - β―１，６グルカン硫酸エステル、エイズ・ウィルス増殖抑制剤及びその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、β−１，６グルカン硫酸エステル、及びその
製法並びにこれを有効成分とするエイズ・ウィルス増殖
抑制剤に関するものである。

（従来技術及び問題点） 後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ、エイズ）はウィルス
が原因であり、このウィルスは一般に、ＨｕｍａｎＩｍ
ｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒｕｓ（ＨＩＶ）
と表現きれている。これはヒトレトロウィルスに属し、
このウィルスにより、リンパ球のヘルパーＴ細胞が破壊
され細胞性免疫不全となり、原虫、真菌、ウィルス、細
菌などによる日和見感染、カポシ肉腫などが発生するこ
とが知られている。

この疾患に対する治療剤は従来からいくつか報告きれて
いる。それらの多くは、ＨＩＶ中に含まれているレトロ
ウィルスの複製に重要な役割をもつ逆転写酵素活性を抑
制する作用を持つもので、例えば３゛−アジド−３゛−
デオキシチミジン、２’、３’−ジデオキシシチジン、
スラミン、又はＨＰＡ−２３などがある。

しかし、これらは副作用が強く、工業的な製造が困難で
あり、現状ではまだ決定的な治゛療薬は存在しないため
多くの有用な治療薬の開発が熱望されている。

ところで、硫酸化多糖類であるヘパリンやデキストラン
硫酸に抗ウィルス作用があることから、本発明者等は、
新規化合物であるβ−１，６グルカン硫酸エステルにＨ
ＩＶの増殖抑制効果があるか否かを検討したところ、本
物質がＨＩＶの増殖を著しく抑制することを発見した。

本発明はかかる事情の下に完成されたものである。

（発明の構成） 本発明に係る化合物は、次の一般式で表わきれるβ−１
，６グルカン硫酸エステル、及びその製剤上許容きれる
アルカリ付加塩である。

この化合物は、地衣より抽出して得られる多糖体を原料
として製造される。この場合の地衣の一つはＵｍｂｉｌ
ｉｃａｒｉａ　ｅｓｃｕｌｅｎｔａ　（Ｍｉｙｏｓｈｉ
）　Ｍｉｎｋｓ（＝Ｇｙｒｏｐｈｏｒａ　ｅｓｃｕｌｅ
ｎｔａ　Ｍｉｙｏｓｈｉ）　（和名：イワクケ）である
。この地衣より抽出して得られる多糖体はＧＥ−３と呼
ばれる。これはグルツースが直鎖状にβ−１，６結合し
た化合物であって、次式のようにその３位に１０：１の
割合でアセチル基を含有しているものである。

（但し、ＲはＨ：　Ｃ０ＣＨｓが１０＝１であることを
示す）このアセチル基は、これを硫酸エステル化する際
に脱離する。

一方、他の地衣として、同科ｔＪｍｂｉｌｉｃａｒｉａ
ｃｅａｅに属する近縁地衣Ｌａ５ａｌｌｉａ　ｐｕｓｔ
ｕｌａｔａ（Ｌ、　）Ｍ’ｅｒ（＝Ｕｍｂｉｌｉｃａｒ
ｉａ　ｐｕｓｔｕｌａｔａ（Ｌ、　）Ｈｏｆｆｍ、　）
がある。これより抽出詐れる多糖体であるｐｕｓｔｕｌ
ａｎは、やはりβ−１，６−グルカンであるが、上記の
ＧＥ−３と異なり３位にアセチル基を有しない。このｐ
ｕｓｔｕｌａｎは以下の式により表わされる。

本願化合物は、上記の地衣類から得られるＧＥ−３、又
はｐｕ３ｔｕｌａｎを硫酸エステル化することにより得
られる。

即ち、β−１，６グルカン硫酸エステルは、上記のＧＥ
−３、又はｐｕｓｔｕｌａｎを有機溶媒、例えばジメチ
ルホルムアミド、ホルムアミド、又はピリジン等に溶消
して、クロルスルホン酸、無水硫酸、或いはピリジン・
ＳＯ１錯体等を使用して硫酸エステル化することにより
得られるものである。また、β−１，６グルカン硫酸エ
ステルのアルカリ付加塩は、これを適応量のアルカリ剤
にて中和することにより得られる。

このようにして得られた上記β−１，６グルカン硫酸エ
ステル、及びその製剤上許容されるアルカリ付加塩は、
以下の実験例に示すように顕著なエイズ・ウィルス増殖
抑制作用を有するので、極めて有効なエイズ・ウィルス
増殖抑制剤として」いられることが期待される。

またβ−１，６グルカン硫酸エステルは極めて低毒性で
、かつ副作用が少ない利点もあり、通常は、その製剤上
許容される塩、即ちβ−１，６グルカン硫酸エステルの
アルカリ塩、例えばβ−１，６グルカン硫酸エステルナ
トリウム塩の形でエイズ患者に投与することが可能であ
る６ 投与する方法としては経口、或いは非経口のいずれをも
選択でき、また投与量は患者の年齢、症状等により異な
るが、一般には、経口投与では成人−日当り５００　ｍ
ｇの範囲で用いることにより、所期の効果が期待できる
。

剤形は、製剤上許容される無害の、一種或いは数種の賦
形剤、例えばＲ酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、乳
糖、バレイショデンブン、アルギン酸ナトリウム、ケイ
酸マグネシウム、炭酸カルシウム、ヒドロキシプロピル
セルロース等を配剤°し、常法により散剤、顆粒剤、糖
衣錠、及びカプセル剤等とすることができる。

非経口の場合の投与量は、一般には、成人−日当り３０
０　ｍｇの範囲で用いられる。注射剤の場合の溶媒は、
例えば生理食塩液、或いは５％ブドウ糖液が適当である
。

以下にβ−１，６グルカン硫酸エステルのエイズ・ウィ
ルス増殖抑制作用についての薬理試験例、及び製造実施
例を掲げるが、本発明がこれらに限定されるものでない
ことは勿論である。

［薬理試験例］ エイズ・ウィルス増殖抑制作用 （材料） （Ｄ細胞とウィルス 感染細胞はＭｏ１ｔ−４細胞を用いた。ウィルスはＭｏ
１ｔ−４／Ｈ工Ｖ産生株より得たものを使用した。

（り被験薬 β−１，６−グルカン硫酸エステルナトリウム塩［Ｉ］
感染細胞の変性抑制実験 この実験は、本願化合物のＭｏ１ｔ−４細胞に対するＨ
ＩＶの感染細胞変性の抑制効果に関するものであり、ア
ガロースなしの培養条件において実施した。

２Ｘ１０’個のＭｏ１ｔ−４細胞に、６Ｘ１０”ＰＦＵ
のＨＩＶを感染きせ、種々の濃度のβ−１，６−グルカ
ン硫酸エスチルナトリウム生理食塩水溶液をカロえて、
３日間、抗生物質と１０％胎児ウシ血清を含むＲＰＭ１
１６４０培養液で培養した。

その後、上記培養液を攪拌して半量ずつに分割し、一方
に培養液に混和した種々の濃度のβ−１゜６−グルカン
硫酸エステルナトリウム水溶液を加え、さらに２日間培
養した。また他方の半量をトリバンブルー排除法で生細
胞数を計測した。

対照として、非感染細胞にも同様の実験を行なった。

トリバンブルー排除法により、５日間の培養において、
β−１，６−グルカン硫酸エステルナトリウム７．８〜
２５０μｇ／ｍ　ｌの用量で抑制がみもれた。

その結果を第１図に示す。

第１図は、ＨＩＶ非感染細胞、及び）（ＩＶ感染細胞の
増殖に対し、β−１，６−グルカン硫酸エステルナトリ
ウムの及ぼす影響を表わす。図中、夫々、囮はＨＩＶ非
感染細胞、口はＨＩＶ感染細胞を示す。ｆ（ＩＶ感染細
胞は、７．８〜２５０μｇ／ｍｆ！、の濃度のβ−１，
６−グルカン硫酸エステルナトリウムにより変性が抑制
きれ、増殖することがわかる。

一方、非感９！細胞に対するβ−１，６−グルカン硫酸
エステルナトリウムの細胞変性効果は、８ｍｇ／ｍ１以
上であった。

［■コウィルス抗原の検出 感染細胞について、抗）ＩＩＶ抗体陽性血清を使用した
間接螢光抗体法を行なった。β−１゜６−グルカン硫酸
エステルナトリウムは、３１μｇ／ｍｌ！の濃度範囲に
おいてＨＩＶ抗原陽性細胞の出現を１０％以下に抑制し
た。これより低いｅ度では、次第に陽性細胞の割合が増
加した。

その結果を第１図に示す。折れ線（□）は、各種の濃度
におけるＨＩＶ陽性細胞の割合を％で示す。

急性毒性試験 β−１，６−グルカン硫酸エステルナトリウムをｄｄＹ
マウスにツイテ、４００〜１，０００　ｍｇ／ｋｇ（７
）ｉ？ｔｌ囲で非経口投与（静注及び膜性）したところ
金側生残した。したがって、本化合物は極めて低毒性で
ある。

［実施例コ β−１，６−１’ルカン硫酸エステルナトリウム塩の製
造 （１）　Ｕｍｂｉｌｉｃａｒｉａ　ｅｓｃｕｌｅｎｔ、
ａ（Ｍｉｙｏｓｈｉ）Ｍｉｎｋｓより抽出して得られる
ＧＥ−３，５００ｍｇをジメチルホルムアミドに溶解し
、冷却攪拌させながらクロルスルホン酸の適−１（０，
５ｒｎｊ２）を少量ずつ加え、数時間反応きせる。反応
液に適量の水を加え透析膜を用いて流水により透析を行
ない反応副産物及び過剰の試薬を除去する。得られた透
析内液を減圧濃縮し、ＬＨ−２０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ社
製、商標名）を樹脂として使用してゲルろ過にて請製を
行ない、ＩＮ水酸化ナトリウム試液で中和し、ナトリウ
ム塩とした。次いでこれを凍結乾燥するとほぼ定量的に
β−１，６−グルカン硫酸エステルナトリウム塩が得ら
れる。（２）物性 ａ、冷水に可溶、通常有機溶媒に不溶 す５分子量約２００．０００ （Ｔ（ＰＬＣを使用したＧＰＣ法による。標準品として
プルランを使用） Ｃ６比旋光度［α］み０−２５．０”　（ｃ＝ｏ、３３
水）ｄ、赤外線吸収スペクトル（工Ｒ） １２４０ｃｍ−’（Ｓ＝０）、　９１０ｃｍ−’（β結
合〉。

８２０ｃｒｎ−’　（ｅ配座） ｆ、　Ｓ含量　１３．６％

【図面の簡単な説明】

図面は、実験例におけるＭｏ１ｔ−４Ｎｏ、８に対する
変性抑制効果の実験、及びウィルス抗原の検出実験の結
果を示す図である。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるβ−１，６グルカン硫酸エステル、及びその
   製剤上許容されるその塩。
2. （２）特許請求の範囲第１項記載の化合物を有効成分と
   して含有するエイズ・ウィルス増殖抑制剤。
3. （３）β−１，６グルカン多糖体を硫酸エステル化する
   ことを特徴とする、一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるβ−１，６グルカン硫酸エステルの製造方法
   。
4. （４）β−１，６グルカン多糖体を硫酸エステル化した
   後、これを適応量のアルカリ剤にて中和することを特徴
   とする、一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるβ−１，６グルカン硫酸エステルのアルカリ
   塩の製造方法。
5. （５）β−１，６グルカン多糖体をクロルスルホン酸、
   無水硫酸、又はピリジン・ＳＯ＿３錯体により硫酸エス
   テル化する特許請求の範囲第３項、又は第４項に記載の
   β−１，６グルカン硫酸エステルのアルカリ塩の製造方
   法。