JPH01269492A - 耐熱性プロテアーゼの製造方法 - Google Patents
耐熱性プロテアーゼの製造方法Info
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- JPH01269492A JPH01269492A JP9663288A JP9663288A JPH01269492A JP H01269492 A JPH01269492 A JP H01269492A JP 9663288 A JP9663288 A JP 9663288A JP 9663288 A JP9663288 A JP 9663288A JP H01269492 A JPH01269492 A JP H01269492A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
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- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
耐熱性プロテアーゼは食品製造、洗浄剤製造、ペプチド
合成等の用途に使用可能であり、その有効な製造方法の
開発は極めて意義深いものである。
合成等の用途に使用可能であり、その有効な製造方法の
開発は極めて意義深いものである。
（従来の技術）
耐熱性プロテアーゼの製造方法は、通常、耐熱性プロテ
アーゼ生産菌を培養し、その分泌する耐熱性プロテアー
ゼを培養上澄液より単離し、精製するものである。しか
し、プロテアーゼの生産性が十分でないことから、近年
耐熱性プロテアーゼの生産に間予する遺伝子を含む組み
換え体プラスミドにより形質転換された形質転換株を用
いた耐熱性プロテアーゼの製造方法が開発されている。
アーゼ生産菌を培養し、その分泌する耐熱性プロテアー
ゼを培養上澄液より単離し、精製するものである。しか
し、プロテアーゼの生産性が十分でないことから、近年
耐熱性プロテアーゼの生産に間予する遺伝子を含む組み
換え体プラスミドにより形質転換された形質転換株を用
いた耐熱性プロテアーゼの製造方法が開発されている。
例えば、ジャーナル・オブ・ハクテリオロジ−（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第１５４
巻第８３１項（１９８３年）ではバチルス・ステアロザ
ーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｔｈｅｒ
ｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＵ２１の耐熱性プロテアーゼ遺伝
子を含む組み換え体プラスミドｐＮＰ２２により形質転
換されたバチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｕｂｔｉｌｔｓ）ＭＴ−２（ｐＮＰ２２）を用いた耐熱
性プロテアーゼの製造方法が報告されている。
ｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第１５４
巻第８３１項（１９８３年）ではバチルス・ステアロザ
ーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｔｈｅｒ
ｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＣＵ２１の耐熱性プロテアーゼ遺伝
子を含む組み換え体プラスミドｐＮＰ２２により形質転
換されたバチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｕｂｔｉｌｔｓ）ＭＴ−２（ｐＮＰ２２）を用いた耐熱
性プロテアーゼの製造方法が報告されている。
（発明が解決しようとする問題点）
耐熱性プロテアーゼ遺伝子を含む組み換え体プラスミド
により形質転換された微生物を用いるプロテアーゼの製
造方法は、その生産性において工業的に使用し得るもの
ではあるが、長時間（１００〜１５０時間）の培養を行
なうには、培養期間中に組み換え体プラスミドの微生物
からの欠落、或いは耐熱性プロテアーゼ遺伝子のプラス
ミドがらの欠失がしばしば起こるので、プロテアーゼの
生産性にばらつきが見られるため、より安定に製造する
方法が望まれていた。
により形質転換された微生物を用いるプロテアーゼの製
造方法は、その生産性において工業的に使用し得るもの
ではあるが、長時間（１００〜１５０時間）の培養を行
なうには、培養期間中に組み換え体プラスミドの微生物
からの欠落、或いは耐熱性プロテアーゼ遺伝子のプラス
ミドがらの欠失がしばしば起こるので、プロテアーゼの
生産性にばらつきが見られるため、より安定に製造する
方法が望まれていた。
（問題を解決するだめの技術的手段）
」１記の問題点を解決する方法として、本発明は、好熱
性細菌由来の耐熱性プロテアーゼをコードする遺伝子が
染色体ＤＮＡ内に組み込まれた非好熱性細菌を用いて耐
熱性プロテアーゼを製造するものである。また、更には
好熱性細菌由来の耐熱性プロテアーゼをコードする遺伝
子が染色体ＤＮＡ内に組の込まれたバチルス・ズブチリ
ス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）を用いて耐熱
性プロテアーゼを製造するものである。
性細菌由来の耐熱性プロテアーゼをコードする遺伝子が
染色体ＤＮＡ内に組み込まれた非好熱性細菌を用いて耐
熱性プロテアーゼを製造するものである。また、更には
好熱性細菌由来の耐熱性プロテアーゼをコードする遺伝
子が染色体ＤＮＡ内に組の込まれたバチルス・ズブチリ
ス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）を用いて耐熱
性プロテアーゼを製造するものである。
本発明の好熱性細菌としては、バチルス・ステアロサー
モフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒ
ｍｏｐｈ−がある。
モフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒ
ｍｏｐｈ−がある。
本発明の好熱性細菌由来の耐熱性プロテアーゼとしては
、上記菌株から得たプロテアーゼであり、例えばバチル
ス・ステアロザーモフイラス属菌株由来の８０°Ｃにお
いて６０分間加温処理しても７０％以上の残存活性を示
す中性プロテアーゼ（特願昭６２−１９３４０９号）、
バチルス・ステアロサーモフィラスＮＣＡ １５０３の
産生ずるアルカリ性プロテアーゼなどがある。
、上記菌株から得たプロテアーゼであり、例えばバチル
ス・ステアロザーモフイラス属菌株由来の８０°Ｃにお
いて６０分間加温処理しても７０％以上の残存活性を示
す中性プロテアーゼ（特願昭６２−１９３４０９号）、
バチルス・ステアロサーモフィラスＮＣＡ １５０３の
産生ずるアルカリ性プロテアーゼなどがある。
本発明の好熱性細菌由来の耐熱性プロテアーゼをコード
する遺伝子とは」二記耐熱性プロテアーセをコードする
遺伝子、例えばバチルス・ステアロサーモフィラス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｂｉｌｕ
ｓ）ＴＩＥＬＮＥＴＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ、９４３９の生産
する耐熱性プロテアーゼをコードする遺伝子（特願昭６
２−１８４３２３号）、バチルス・ステアロサーモフィ
ラスＣ１１２］の中性フロテアーゼ遺伝子などがある。
する遺伝子とは」二記耐熱性プロテアーセをコードする
遺伝子、例えばバチルス・ステアロサーモフィラス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｂｉｌｕ
ｓ）ＴＩＥＬＮＥＴＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ、９４３９の生産
する耐熱性プロテアーゼをコードする遺伝子（特願昭６
２−１８４３２３号）、バチルス・ステアロサーモフィ
ラスＣ１１２］の中性フロテアーゼ遺伝子などがある。
前記耐熱性プロテアーゼをコードする遺伝子の上流には
、プロモーター・ＳＤ配列等の耐熱性プロテアーゼ遺伝
子の発現に必要な遺伝子配列が含まれている。
、プロモーター・ＳＤ配列等の耐熱性プロテアーゼ遺伝
子の発現に必要な遺伝子配列が含まれている。
本発明にある染色体ＤＮＡとは、非好熱性細菌のもつ染
色体１１ Ｎ Ｉ’ｌである。好ましくはバチルス・ズ
ブチリスの染色体ＤＮＡである。
色体１１ Ｎ Ｉ’ｌである。好ましくはバチルス・ズ
ブチリスの染色体ＤＮＡである。
染色体ＤＮＡへの上記遺伝子の組み込みは非好熱性細菌
の体内で行なわれる。
の体内で行なわれる。
耐熱性プロテアーゼ遺伝子が染色体ＤＮＡ内に組み込ま
れたバチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔ
ｉｌｉｓ）の取得方法を以下に順を追って述べる。
れたバチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔ
ｉｌｉｓ）の取得方法を以下に順を追って述べる。
（八）耐熱性プロテアーゼをコードする遺伝子ＤＮ八、
カナマイシンやテトラサイクリンなどの抗生物質を不活
化する酵素をコードする遺伝子ＤＮＡ及び宿主とするバ
チルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ）の染色体ＤＮＡを酵素的或いは機械的処理により塩
基数１〜１０ｋｂに切断したフラグメントＤＮＡを従来
の方法に従い調製後、水溶液中に混合し酵素（”Ｆ４Ｄ
ＮＡリガーゼ）を用いて連結する。
カナマイシンやテトラサイクリンなどの抗生物質を不活
化する酵素をコードする遺伝子ＤＮＡ及び宿主とするバ
チルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ）の染色体ＤＮＡを酵素的或いは機械的処理により塩
基数１〜１０ｋｂに切断したフラグメントＤＮＡを従来
の方法に従い調製後、水溶液中に混合し酵素（”Ｆ４Ｄ
ＮＡリガーゼ）を用いて連結する。
（Ｂ）上記（八）で連結されたＤＮＡを用いて、バチル
ス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ
）を常法に従い形質転換し、抗生物質耐性を示す形質転
換体を選択する。
ス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ
）を常法に従い形質転換し、抗生物質耐性を示す形質転
換体を選択する。
（Ｃ）上記（Ｂ）で得られた形質転換体をプロテアーゼ
生産用の培地に植菌し、１０〜１５０時間培養後、上澄
液のプロテアーゼ活性を測定することにより、耐熱性プ
ロテアーゼ遺伝子が染色体ＤＮＡに組め込まれ、耐熱性
プロテアーゼを生産するバチルス・ズブチリス（Ｂａｃ
目１ｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）を取得する。
生産用の培地に植菌し、１０〜１５０時間培養後、上澄
液のプロテアーゼ活性を測定することにより、耐熱性プ
ロテアーゼ遺伝子が染色体ＤＮＡに組め込まれ、耐熱性
プロテアーゼを生産するバチルス・ズブチリス（Ｂａｃ
目１ｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）を取得する。
形質転換体を培養する方法は通気培養で温度は２５〜３
７°Ｃ時間は１００〜１５０時間である。培養物から耐
熱性プロテアーゼを採取する方法としては培養終了液を
集め、遠心分離或いは濾過分離によって菌体を除いた上
清液より塩析、イオン交換樹脂、その他の公知の方法を
組み合わせることにより行われる。
７°Ｃ時間は１００〜１５０時間である。培養物から耐
熱性プロテアーゼを採取する方法としては培養終了液を
集め、遠心分離或いは濾過分離によって菌体を除いた上
清液より塩析、イオン交換樹脂、その他の公知の方法を
組み合わせることにより行われる。
（効果）
耐熱性プロテアーゼ遺伝子が染色体ＤＮＡに組み込まれ
たバチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔ
−ｉ ｌ ｉｓ）を使用することにより、耐熱性プロテ
アーゼ遺伝子を含む組み換え体プラスミドを保持するバ
チルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌ
ｉｓ）に比べ、長時間（１００〜１５０時間）の培養を
行なった際に、耐熱性プロテアーゼの生産性が上昇し、
同一の培養条件における生産性のばらつきも減少する。
たバチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔ
−ｉ ｌ ｉｓ）を使用することにより、耐熱性プロテ
アーゼ遺伝子を含む組み換え体プラスミドを保持するバ
チルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌ
ｉｓ）に比べ、長時間（１００〜１５０時間）の培養を
行なった際に、耐熱性プロテアーゼの生産性が上昇し、
同一の培養条件における生産性のばらつきも減少する。
このため、耐熱性プロテアーゼをより効率よく製造する
ことが可能である。
ことが可能である。
（実施例）
以ｒ、本発明を実施例により更に詳しく説明するが、本
発明は何らこれらに限定されるものではない。
発明は何らこれらに限定されるものではない。
（１） バチルス・ステアロリ゛−モフィラス（ｌｌ
ａｃ−ｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉ
ｌｕｓ） ＴＩＥＬＮＩｊ ＦＩＥＲＭ暑〕 Ｎ
ｏ。
ａｃ−ｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉ
ｌｕｓ） ＴＩＥＬＮＩｊ ＦＩＥＲＭ暑〕 Ｎ
ｏ。
９４３９の耐熱性中性プロテアーゼ遺伝子を含む組み換
え体プラスミドｐｓｐ１２４ （塩基数１９．３ｋｂ、
カナマイシン耐性）〔第１図］を常法に従い調製する（
′特願昭６２−１１Ｅ３２３号）。制限酵素ＥｃｏＲＩ
で切断し、耐熱性中性プロテアーゼ遺伝子（９５］、ｂ
）及びカナマイシン不活化酵素遺伝子（７５９ｂ）を含
む８ 、６’に’ ｂの直鎖状Ｄ Ｎ Ａ約１０１１８
を核酸回収器（ＥＬＩＣＡ−Ｖｌ、 Ｗａｋａ−ｍｏｒ
ｉ製）を用いて調製した。
え体プラスミドｐｓｐ１２４ （塩基数１９．３ｋｂ、
カナマイシン耐性）〔第１図］を常法に従い調製する（
′特願昭６２−１１Ｅ３２３号）。制限酵素ＥｃｏＲＩ
で切断し、耐熱性中性プロテアーゼ遺伝子（９５］、ｂ
）及びカナマイシン不活化酵素遺伝子（７５９ｂ）を含
む８ 、６’に’ ｂの直鎖状Ｄ Ｎ Ａ約１０１１８
を核酸回収器（ＥＬＩＣＡ−Ｖｌ、 Ｗａｋａ−ｍｏｒ
ｉ製）を用いて調製した。
（２）バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕ
ｂｔｉｌｉｓ）ＭＴ−２の染色体ＤＮＡを常法に従い調
製し７、制限酵素１ｉ ｃ、 ｏ Ｒｌで処理後核酸回
収器により１〜１ｏ ｋｂ＝のフラグメントＤＮＡ約５
０ｍｇを調製した。
ｂｔｉｌｉｓ）ＭＴ−２の染色体ＤＮＡを常法に従い調
製し７、制限酵素１ｉ ｃ、 ｏ Ｒｌで処理後核酸回
収器により１〜１ｏ ｋｂ＝のフラグメントＤＮＡ約５
０ｍｇを調製した。
（３） 上記（＋）、 （２）で得られたＤＮＡを混
合し、１ｍＭＡＴＰ、 １０ｍ Ｍジチオスレイトール
の存在下にＩＯＵのＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて４°Ｃ
２１２時間のＤ Ｎ Ａ鎮の連結反応を行なった。
合し、１ｍＭＡＴＰ、 １０ｍ Ｍジチオスレイトール
の存在下にＩＯＵのＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて４°Ｃ
２１２時間のＤ Ｎ Ａ鎮の連結反応を行なった。
（４） 上記（３）の反応液を用いてバチルス・ズブ
チリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＭＴ−
２をコンピテント・セル法により形質転換し、１％カゼ
イン、 ０．０００４％カナマイシン及び１．５％寒天
を含む培地に広げた。３７°Ｃ，２日間でコロニーを形
成させ、耐熱性中性プロテアーゼの分泌によりコロニー
の周囲に形成されるハローによって生産菌を選択した。
チリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＭＴ−
２をコンピテント・セル法により形質転換し、１％カゼ
イン、 ０．０００４％カナマイシン及び１．５％寒天
を含む培地に広げた。３７°Ｃ，２日間でコロニーを形
成させ、耐熱性中性プロテアーゼの分泌によりコロニー
の周囲に形成されるハローによって生産菌を選択した。
（５） 上記（４）で得られた耐熱性中性プロテアー
ゼ生産１７Ｓ地を、プロテアーゼ生産培地（１％カゼイ
ン１１％グルコース、０．２％酵母エキス０．０２％硫
酸マグネシウｌ１．０．０２％塩化カルシウム。
ゼ生産１７Ｓ地を、プロテアーゼ生産培地（１％カゼイ
ン１１％グルコース、０．２％酵母エキス０．０２％硫
酸マグネシウｌ１．０．０２％塩化カルシウム。
０．００２％硫酸亜鉛、 ０．０００４％カナマイシン
。
。
ｐＨ７，０） ５滅を２０威容試験管に分注したものに
１白金耳植菌し３０°Ｃで１００時間培養後上澄液のプ
ロテアーゼ活性を測定することにより、生産性の最も高
い株（ＩＫ−２５）を選抜した。
１白金耳植菌し３０°Ｃで１００時間培養後上澄液のプ
ロテアーゼ活性を測定することにより、生産性の最も高
い株（ＩＫ−２５）を選抜した。
＝ ７−
（６） Ｉ Ｋ −２５とＭＴ−２（ｐｓＰ１２４）
を、１５ｍ２容試験管に分注した２ ｍＱのプロテアー
ゼ生産１７Ｓ地に１白金耳摺種し、３０°Ｃ，３０時間
振盪培養した後、５００ｍρ容坂に１フラスコに分注し
た５０ｍＦ、のプロテアーゼ生産ｉｆＨ地に］ ｍｊ！
植菌し、３０’Ｃ，１００時間振盪培養した。
を、１５ｍ２容試験管に分注した２ ｍＱのプロテアー
ゼ生産１７Ｓ地に１白金耳摺種し、３０°Ｃ，３０時間
振盪培養した後、５００ｍρ容坂に１フラスコに分注し
た５０ｍＦ、のプロテアーゼ生産ｉｆＨ地に］ ｍｊ！
植菌し、３０’Ｃ，１００時間振盪培養した。
計５回同様の培養を行ない、ＩＫ−２５とＭＴ−２（ｐ
ＳＰ１２４）の培養力価を比較した（第１表〕。その結
果、ＩＬ２５の力価はＭＴ−２（ｐｓＰＩ２４）の力価
の１．２〜１．７倍の値を示し、各培養間の力価のばら
つきもＩＫ−２５の方が小規模であった。
ＳＰ１２４）の培養力価を比較した（第１表〕。その結
果、ＩＬ２５の力価はＭＴ−２（ｐｓＰＩ２４）の力価
の１．２〜１．７倍の値を示し、各培養間の力価のばら
つきもＩＫ−２５の方が小規模であった。
第 １ 表
第１回 １１．３ ９．１１第２回
１０．９ ６．４８第３回 １２゜１
９．３２第４回 １１．８ ７．９
０第５回 １２，５ １０．２５（発明の
効果） 本発明を用いれば耐熱性プロテアーゼを効率よく製造す
ることが可能となる。
１０．９ ６．４８第３回 １２゜１
９．３２第４回 １１．８ ７．９
０第５回 １２，５ １０．２５（発明の
効果） 本発明を用いれば耐熱性プロテアーゼを効率よく製造す
ることが可能となる。
第１図は組の換え体プラスミｌ”ｐｓＰ＋２４の制限酵
素地図である。実施例で用いた直鎖状ＤＮＡに当たる部
分を黒線で示している。ＥｃｏＲＩはニジエリシア・コ
リ（Ｅａｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）由来の制限酵
素、ＢａｍＨＩ はバチルス・アミロリヶファシェンス
（Ｂａｃｉｌｌｉｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅ
ｎｓ）由来の制限酵素、Ｋｍｒはカナマイシン不活化酵
素遺伝子、Ｎｐｒは耐熱 。 性中性プロテアーゼ遺伝子をそれぞれ意味している。 特許出願人 東洋紡績株式会社
素地図である。実施例で用いた直鎖状ＤＮＡに当たる部
分を黒線で示している。ＥｃｏＲＩはニジエリシア・コ
リ（Ｅａｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）由来の制限酵
素、ＢａｍＨＩ はバチルス・アミロリヶファシェンス
（Ｂａｃｉｌｌｉｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅ
ｎｓ）由来の制限酵素、Ｋｍｒはカナマイシン不活化酵
素遺伝子、Ｎｐｒは耐熱 。 性中性プロテアーゼ遺伝子をそれぞれ意味している。 特許出願人 東洋紡績株式会社
Claims (1)
- 好熱性細菌由来の耐熱性プロテアーゼをコードする遺伝
子が染色体ＤＮＡに組み込まれた非好熱性細菌を培養し
、該培養物から耐熱性プロテアーゼを採取することを特
徴とする耐熱性プロテアーゼの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9663288A JPH01269492A (ja) | 1988-04-19 | 1988-04-19 | 耐熱性プロテアーゼの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9663288A JPH01269492A (ja) | 1988-04-19 | 1988-04-19 | 耐熱性プロテアーゼの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01269492A true JPH01269492A (ja) | 1989-10-26 |
Family
ID=14170212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9663288A Pending JPH01269492A (ja) | 1988-04-19 | 1988-04-19 | 耐熱性プロテアーゼの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01269492A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03198779A (ja) * | 1989-12-27 | 1991-08-29 | Shokuhin Sangyo Kouso Kinou Henkan Gijutsu Kenkyu Kumiai | 中性プロテアーゼ２遺伝子、プレプロ型中性プロテアーゼ２遺伝子、新規な組み換え体ｄｎａ、及び中性プロテアーゼ２の製造法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59205996A (ja) * | 1983-04-28 | 1984-11-21 | ジェネックス・コーポレイション | 蛋白質ａの生産方法 |
| JPS59205983A (ja) * | 1983-04-28 | 1984-11-21 | ジエネツクス・コ−ポレイシヨン | 異種遺伝子を原核微生物で発現させる方法 |
-
1988
- 1988-04-19 JP JP9663288A patent/JPH01269492A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59205996A (ja) * | 1983-04-28 | 1984-11-21 | ジェネックス・コーポレイション | 蛋白質ａの生産方法 |
| JPS59205983A (ja) * | 1983-04-28 | 1984-11-21 | ジエネツクス・コ−ポレイシヨン | 異種遺伝子を原核微生物で発現させる方法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03198779A (ja) * | 1989-12-27 | 1991-08-29 | Shokuhin Sangyo Kouso Kinou Henkan Gijutsu Kenkyu Kumiai | 中性プロテアーゼ２遺伝子、プレプロ型中性プロテアーゼ２遺伝子、新規な組み換え体ｄｎａ、及び中性プロテアーゼ２の製造法 |
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