JPH01277496A - マクロライド化合物の製造方法 - Google Patents
マクロライド化合物の製造方法Info
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- JPH01277496A JPH01277496A JP1058075A JP5807589A JPH01277496A JP H01277496 A JPH01277496 A JP H01277496A JP 1058075 A JP1058075 A JP 1058075A JP 5807589 A JP5807589 A JP 5807589A JP H01277496 A JPH01277496 A JP H01277496A
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- hydrogen atom
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
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- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はマクロライド化合物の製造方法に関する。
英国特許明細書第２１６６４３６号およびヨーロッパ特
許明細書第１７０００６号には本発明者等が抗生物質５
５４１と指定した１群の物質であって、菌種ストレプト
マイセスサーモアルカエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ ｔｈｅｒｍｏａｒｃｈａｅｎｓｉｓ）およびスト
レプトマイセスシアネオグリセウスノンシアノゲヌス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｙａｎｅｏｇｒｉｓｅ
ｕｓ ｎｏｎ−ｃｙａｎｏｇｅｎｕｓ）に属する、抗
生物質５５４１生産菌株の発酵によって製造されうる物
質が記載されている。抗生物質Ｓ５４１は抗生活性特に
抗外部寄生虫、抗外部寄生虫、抗真菌、殺虫、殺線虫お
よび殺ダニ活性を有していて農業、園芸並びに動物およ
びヒトの健康のために使用するのに特に重要である。
許明細書第１７０００６号には本発明者等が抗生物質５
５４１と指定した１群の物質であって、菌種ストレプト
マイセスサーモアルカエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ ｔｈｅｒｍｏａｒｃｈａｅｎｓｉｓ）およびスト
レプトマイセスシアネオグリセウスノンシアノゲヌス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｙａｎｅｏｇｒｉｓｅ
ｕｓ ｎｏｎ−ｃｙａｎｏｇｅｎｕｓ）に属する、抗
生物質５５４１生産菌株の発酵によって製造されうる物
質が記載されている。抗生物質Ｓ５４１は抗生活性特に
抗外部寄生虫、抗外部寄生虫、抗真菌、殺虫、殺線虫お
よび殺ダニ活性を有していて農業、園芸並びに動物およ
びヒトの健康のために使用するのに特に重要である。
本発明者等は抗生物質５５４１化合物およびその化学誘
導体の新規製造方法を見出した。
導体の新規製造方法を見出した。
本発明の１つの特徴により、本発明者等は下記式（ｎ）
〔式中 Ｒ１はメチル、エチルまたはイソプロピル基で
あり Ｒ２は水素原子または基０Ｒ６（ここでＯＲ”は
ヒドロキシル基または２５個までの炭素原子を有する置
換ヒドロキシル基である）を示しそしてＲ３は水素原子
を示すかまたはＲ２およびＲ３はこれらが結合している
炭素原子と一緒になって＞ｃ＝ｏ、 ＞Ｃ＝ＣＨ２ま
たは＞Ｃ−Ｎ０Ｒ６（ここでＲ６は水素原子、Ｃ１−８
アルギル基またはＣ３−８アルケニル基を示しそして核
剤＞Ｃ−Ｎ０Ｒ６はＥ配置している）を示す〕の化合物
を適当な培地中で微生物または該微生物より誘導される
酵素または変換を行うことができる関係する酵素を含有
する微生物から誘導される調製物の存在下にインキュベ
−１・することからなる下記式■ 〔式中Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は前述の定義を有しそして
Ｒ４は水素原子またはメチル基である〕の化合物の製造
方法を提供する。
あり Ｒ２は水素原子または基０Ｒ６（ここでＯＲ”は
ヒドロキシル基または２５個までの炭素原子を有する置
換ヒドロキシル基である）を示しそしてＲ３は水素原子
を示すかまたはＲ２およびＲ３はこれらが結合している
炭素原子と一緒になって＞ｃ＝ｏ、 ＞Ｃ＝ＣＨ２ま
たは＞Ｃ−Ｎ０Ｒ６（ここでＲ６は水素原子、Ｃ１−８
アルギル基またはＣ３−８アルケニル基を示しそして核
剤＞Ｃ−Ｎ０Ｒ６はＥ配置している）を示す〕の化合物
を適当な培地中で微生物または該微生物より誘導される
酵素または変換を行うことができる関係する酵素を含有
する微生物から誘導される調製物の存在下にインキュベ
−１・することからなる下記式■ 〔式中Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は前述の定義を有しそして
Ｒ４は水素原子またはメチル基である〕の化合物の製造
方法を提供する。
本発明方法で使用するのに適当な微生物およびその抽出
物は、式（Ｉ［）の化合物を式（Ｉ）の化合物に変換し
うる微生物またはその抽出物の能力を証明するのに設計
された予備的な小規模試験によって同定されうる。式（
Ｉ）の化合物の生成はその反応混合物の適当なりロマト
グラフイー分析（例えば高性能液体クロマトグラフィー
）によって確認されうる。
物は、式（Ｉ［）の化合物を式（Ｉ）の化合物に変換し
うる微生物またはその抽出物の能力を証明するのに設計
された予備的な小規模試験によって同定されうる。式（
Ｉ）の化合物の生成はその反応混合物の適当なりロマト
グラフイー分析（例えば高性能液体クロマトグラフィー
）によって確認されうる。
本発明によればストレプトマイセス属およびその抽出物
の微生物が本発明方法で使用するのに特に適していると
いうことが見出された。
の微生物が本発明方法で使用するのに特に適していると
いうことが見出された。
本発明方法で使用するのに特に優れたストレプトマイセ
ス菌の例としてはストレプトマイセスサーモアルカエン
シス、ストレプトマイセスシアネオグリセウスノンシア
ノゲヌス、ストレプトマイセスアベルミチリス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）およびス
トレプトマイセス微生物スコビカス亜種オーレオラクリ
モサス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃ
ｕｓ ５ｕｂｓｐ、 ａｕｒｅｏ−Ｉａｃｒ ｉｍｏｓ
ｕｓ）の菌株を挙げることができる。適当な菌株の特に
好ましい例としてはストレプトマイセスサーモアルカエ
ンシスＮＣＩＢ １２２１２および１２２１３ （Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎｄ
ｕｓｔ−ｒｉａｌ ａｎｄ Ｍａｃ−４ｎｅ Ｂａｃｔ
ｅｒｉａ、 Ｔｏｒｒｙ Ｒｅ５ｅａｒｃｈＳｔａｔｉ
ｏｎ（英国アバーディーン）の永久培養菌収集所に１９
８６年３月６日付で寄託された〕並びにこれら菌株の突
然変異体、ストレプトマイセスアベルミチリスＡＴＣＣ
３１２７２および３１７８０並びにストレプトマイセス
ヒゲロスコピカス亜種オーレオラクリモサスＦＥＲＭ
Ｐ １４３８を挙げることができる。
ス菌の例としてはストレプトマイセスサーモアルカエン
シス、ストレプトマイセスシアネオグリセウスノンシア
ノゲヌス、ストレプトマイセスアベルミチリス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）およびス
トレプトマイセス微生物スコビカス亜種オーレオラクリ
モサス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃ
ｕｓ ５ｕｂｓｐ、 ａｕｒｅｏ−Ｉａｃｒ ｉｍｏｓ
ｕｓ）の菌株を挙げることができる。適当な菌株の特に
好ましい例としてはストレプトマイセスサーモアルカエ
ンシスＮＣＩＢ １２２１２および１２２１３ （Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎｄ
ｕｓｔ−ｒｉａｌ ａｎｄ Ｍａｃ−４ｎｅ Ｂａｃｔ
ｅｒｉａ、 Ｔｏｒｒｙ Ｒｅ５ｅａｒｃｈＳｔａｔｉ
ｏｎ（英国アバーディーン）の永久培養菌収集所に１９
８６年３月６日付で寄託された〕並びにこれら菌株の突
然変異体、ストレプトマイセスアベルミチリスＡＴＣＣ
３１２７２および３１７８０並びにストレプトマイセス
ヒゲロスコピカス亜種オーレオラクリモサスＦＥＲＭ
Ｐ １４３８を挙げることができる。
前記菌株の突然変異体は自然に生じることもあるしまた
は例えば英国特許明細書第２１６６４３６号およびヨー
ロッパ特許明細書第１７０００６号に記載の種々の方法
によっても生産されうる。
は例えば英国特許明細書第２１６６４３６号およびヨー
ロッパ特許明細書第１７０００６号に記載の種々の方法
によっても生産されうる。
本発明方法で使用するのに適当な酵素は極めて広範囲の
源から誘導されうる。しかしながら、前記ストレプトマ
イセス微生物が、式（ＩＩ）の化合物を式（Ｉ）の化合
物に変換することのできる特に適した酵素源を示す。
源から誘導されうる。しかしながら、前記ストレプトマ
イセス微生物が、式（ＩＩ）の化合物を式（Ｉ）の化合
物に変換することのできる特に適した酵素源を示す。
本発明方法の一態様において式（ＩＩ）の化合物を対応
する式（Ｉ）の５−Ｏｆ？’化合物に変換することは、
同化性の炭素源、窒素源および無機塩の存在下での前記
の菌を含有する発酵培地中に適当な溶媒中における式（
ＩＩ）の化合物を供給することによって実施されうる。
する式（Ｉ）の５−Ｏｆ？’化合物に変換することは、
同化性の炭素源、窒素源および無機塩の存在下での前記
の菌を含有する発酵培地中に適当な溶媒中における式（
ＩＩ）の化合物を供給することによって実施されうる。
同化性の炭素源、窒素源および無機質は単純または複合
いずれかの栄養源によって提供されうる。炭素源として
は一般的にグルコース、マルトース、デンプン、グリセ
ロール、糖蜜、デキストリン、ラクトース、スクロース
、フラクトース、カルボン酸、アミノ酸、グリセリド類
、アルコール類、アルカン類および植物油を挙げること
かできる。炭素源は一般に発酵培地の０．５〜１０重量
％からなる。
いずれかの栄養源によって提供されうる。炭素源として
は一般的にグルコース、マルトース、デンプン、グリセ
ロール、糖蜜、デキストリン、ラクトース、スクロース
、フラクトース、カルボン酸、アミノ酸、グリセリド類
、アルコール類、アルカン類および植物油を挙げること
かできる。炭素源は一般に発酵培地の０．５〜１０重量
％からなる。
窒素源としては一般的に大豆ミール、コーンステイープ
リカー、醸造室の可溶成分、酵母エキス、綿実ミール、
ヘプトン、粉砕ナツトミール、麦芽エキス、糖蜜、カゼ
イン、アミノ酸混合物、アンモニア（ガスまたは溶液）
、アンモニウム塩または硝酸塩を挙げることができる。
リカー、醸造室の可溶成分、酵母エキス、綿実ミール、
ヘプトン、粉砕ナツトミール、麦芽エキス、糖蜜、カゼ
イン、アミノ酸混合物、アンモニア（ガスまたは溶液）
、アンモニウム塩または硝酸塩を挙げることができる。
また尿素およびその他のアミドを使用することもできる
。窒素源は一般に発酵培地の０．１〜１０重量％からな
る。
。窒素源は一般に発酵培地の０．１〜１０重量％からな
る。
培地中に混入されうる栄養源の無機塩としてはすトリウ
ム、カリウム、アンモニウム、鉄、マダイ・シウム、亜
鉛、ニッケル、コバルト、７７ｆｆン、バナジウム、ク
ロム、カルシウム、銅、モリブデン、ホウ素、リン酸、
硫酸、塩素および炭酸の各イオンを生成しうる一般に用
いられる塩を挙げることができる。
ム、カリウム、アンモニウム、鉄、マダイ・シウム、亜
鉛、ニッケル、コバルト、７７ｆｆン、バナジウム、ク
ロム、カルシウム、銅、モリブデン、ホウ素、リン酸、
硫酸、塩素および炭酸の各イオンを生成しうる一般に用
いられる塩を挙げることができる。
過剰の発泡を抑制するために泡止剤を存在させてもよい
し、必要に応じて時々加えてもよい。
し、必要に応じて時々加えてもよい。
溶媒例えば水混和性有機溶媒（例えばアルコール例えば
メタノールまたはプロパン−２−オール、ジオール例え
ばプロパン−１，２−オールまたはブタン−１，３−オ
ール、ケトン例えばアセトン、ニトリル例えば′アセト
ニトリル、エーテル例えばテトラヒドロフランまたはジ
オキサン、置換アミド例えばジメチルホルムアミドまた
はジアルキルスルホキシド例えばジメチルスルホキシド
）中の式（ＩＩ）の化合物は培養開始時にまたはより通
常的には該微生物の生長が進行している時例えば培養開
始後２〜４日目に加えることができる。
メタノールまたはプロパン−２−オール、ジオール例え
ばプロパン−１，２−オールまたはブタン−１，３−オ
ール、ケトン例えばアセトン、ニトリル例えば′アセト
ニトリル、エーテル例えばテトラヒドロフランまたはジ
オキサン、置換アミド例えばジメチルホルムアミドまた
はジアルキルスルホキシド例えばジメチルスルホキシド
）中の式（ＩＩ）の化合物は培養開始時にまたはより通
常的には該微生物の生長が進行している時例えば培養開
始後２〜４日目に加えることができる。
該微生物の培養は一般的には２０〜５０ ’Ｏ好ましく
は２５〜４０°Ｃの温度で行われそして望ましくは例え
ば振とうまたは撹拌によって激しく振動させかつ通気さ
せなから行う。培地には胞子形成した微生物の懸濁液少
量を最初に接種するのがよいが、しかし増殖の遅延を回
避するために該微生物の栄養接種物は胞子形態の微生物
を有する培地を少量接種することによって調製しついで
得られた栄養接種物を発酵培地に移すかまたはより好ま
しくはさらに増殖が行われる１つまたはそれ以上の種子
段階に移しそしてその後に主発酵培地に移すのがよい。
は２５〜４０°Ｃの温度で行われそして望ましくは例え
ば振とうまたは撹拌によって激しく振動させかつ通気さ
せなから行う。培地には胞子形成した微生物の懸濁液少
量を最初に接種するのがよいが、しかし増殖の遅延を回
避するために該微生物の栄養接種物は胞子形態の微生物
を有する培地を少量接種することによって調製しついで
得られた栄養接種物を発酵培地に移すかまたはより好ま
しくはさらに増殖が行われる１つまたはそれ以上の種子
段階に移しそしてその後に主発酵培地に移すのがよい。
この発酵は一般に５．５〜８．５好ましくは５．５〜７
．５のｐＨ範囲で行われる。
．５のｐＨ範囲で行われる。
一旦、式（ＩＩ）の化合物を通常は温和に混合させなが
ら培地に加えたら、その培養は所望の生産物が蓄積され
るように継続される。発酵ブロス中における生産物の存
在は、該ブロスの抽出物を高性能液体クロマトグラフィ
ーおよび２３８ｎｍでのｕｖ分光検査で調べることによ
り監視しうる。
ら培地に加えたら、その培養は所望の生産物が蓄積され
るように継続される。発酵ブロス中における生産物の存
在は、該ブロスの抽出物を高性能液体クロマトグラフィ
ーおよび２３８ｎｍでのｕｖ分光検査で調べることによ
り監視しうる。
生産物は英国特許明細書第２１６６４３６号および第２
１７６１８２号に記載されている慣用の単離および分離
の手法によって全発酵ブロスがら単離されうる。
１７６１８２号に記載されている慣用の単離および分離
の手法によって全発酵ブロスがら単離されうる。
本発明方法のさらに別の態様において式（Ｉｔ）の化合
物を対応する式（Ｉ）の５−ＯＲ’化合物に変換するこ
とは、適当な溶媒（例えば前記の水混和性有機溶媒）中
において式（１）の化合物を望ましくは緩衝溶液中にお
ける本発明の酵素調製物と例えば０９〜６０°好ましく
は２０°〜４０°例えば約２８°Ｃで合一してインキュ
ベートすることによって実施されうる。該反応は一般的
には３．５〜８．５例えば５．５〜７．５のｐＨで実施
される。所望により該反応はコファクター例えはＮＡＤ
ＨまたはＮＡＤＰＨの存在下で実施されうる。該反応が
完了した時すなわち式（ＩＩ）の化合物がもはや本発明
化合物に変換されなくなった時に（反応混合物の抽出物
を高性能液体クロマトグラフィーおよび２３８ｎｍでの
ｕｖ分光検査によって監視することにより決定される）
生産物を英国特許明細書第２１６６４３６号および第２
１７６１８２号に記載されている慣用の単離および分離
の手法によって回収する。
物を対応する式（Ｉ）の５−ＯＲ’化合物に変換するこ
とは、適当な溶媒（例えば前記の水混和性有機溶媒）中
において式（１）の化合物を望ましくは緩衝溶液中にお
ける本発明の酵素調製物と例えば０９〜６０°好ましく
は２０°〜４０°例えば約２８°Ｃで合一してインキュ
ベートすることによって実施されうる。該反応は一般的
には３．５〜８．５例えば５．５〜７．５のｐＨで実施
される。所望により該反応はコファクター例えはＮＡＤ
ＨまたはＮＡＤＰＨの存在下で実施されうる。該反応が
完了した時すなわち式（ＩＩ）の化合物がもはや本発明
化合物に変換されなくなった時に（反応混合物の抽出物
を高性能液体クロマトグラフィーおよび２３８ｎｍでの
ｕｖ分光検査によって監視することにより決定される）
生産物を英国特許明細書第２１６６４３６号および第２
１７６１８２号に記載されている慣用の単離および分離
の手法によって回収する。
本発明方法で用いる酵素は例えば栄養培地中において酵
素を生産する微生物の培養によって調製されうる。該酵
素の調製に適した栄養培地および発酵条件としては、微
生物の存在下における式（ＩＩ）の化合物からの式（Ｉ
）の化合物の製造について前述したことが適用される。
素を生産する微生物の培養によって調製されうる。該酵
素の調製に適した栄養培地および発酵条件としては、微
生物の存在下における式（ＩＩ）の化合物からの式（Ｉ
）の化合物の製造について前述したことが適用される。
必要とする酵素活性か最高に達する時間は勿論、使用す
る微生物によって変化するので最適な培養時間は用いら
れる個々の菌株でそれぞれ別個に決定するのか望ましい
。
る微生物によって変化するので最適な培養時間は用いら
れる個々の菌株でそれぞれ別個に決定するのか望ましい
。
酵素が細胞外酵素である微生物の場合には全細胞を除去
した後の液体培地または炉液を酵素源として使用するこ
とができる。酵素が細胞結合されている場合には、該酵
素は使用に際してそれら細胞を適当な緩衝液中に懸濁後
、慣用の方法例えば音波処理、ガラスビードでの粉砕、
均質化、分解酵素または清浄剤での処理によって放出さ
れることができる。
した後の液体培地または炉液を酵素源として使用するこ
とができる。酵素が細胞結合されている場合には、該酵
素は使用に際してそれら細胞を適当な緩衝液中に懸濁後
、慣用の方法例えば音波処理、ガラスビードでの粉砕、
均質化、分解酵素または清浄剤での処理によって放出さ
れることができる。
得られた調製物は、細胞破片を除去するかまたは除去し
ないかのいずれかの状態において酵素源として使用され
うる。しかしながら、慣用方法によって該酵素をさらに
精製する方が好ましい。イオン交換セルロースまたは親
和吸着剤もしくはその他の吸着剤例えば水酸化リン灰石
を用いるバッチまたはカラムクロマトグラフィーを用い
るのが好都合である。さらに該酵素は濃縮されうるかま
たはモレキュラーシーブ法例えば限外か過もしくは塩析
によってさらに精製されうる。一般に精製操作中ｐＨは
３〜１１の範囲に維持するのが望ましい。
ないかのいずれかの状態において酵素源として使用され
うる。しかしながら、慣用方法によって該酵素をさらに
精製する方が好ましい。イオン交換セルロースまたは親
和吸着剤もしくはその他の吸着剤例えば水酸化リン灰石
を用いるバッチまたはカラムクロマトグラフィーを用い
るのが好都合である。さらに該酵素は濃縮されうるかま
たはモレキュラーシーブ法例えば限外か過もしくは塩析
によってさらに精製されうる。一般に精製操作中ｐＨは
３〜１１の範囲に維持するのが望ましい。
該酵素はそれを適当なマトリックスまたはマトリックス
中において不溶化させるがまたは取り込ませることによ
って固定化形態で用いられうる。従って該酵素の抽出物
は別法として不活性な無機または有機ポリマーに結合ま
たは連結されるか、繊維上もしくはその中にまたは膜も
しくはポリマー例えばポリアクリルアミドゲル上もしく
はそれらの中に取り込まれるが、イオン交換樹脂上に吸
着され、例えばグルタルアルデヒドのような試薬と交叉
結合されまたは例えばビードのような表面膜中に吸蔵さ
れうる。固定化酵素は該酵素をその後に再使用しうるバ
ッチ法並びに該固定化酵素を含有するカラムに基質を通
過させる連続流法の両手法においてを利に用いることが
できる。
中において不溶化させるがまたは取り込ませることによ
って固定化形態で用いられうる。従って該酵素の抽出物
は別法として不活性な無機または有機ポリマーに結合ま
たは連結されるか、繊維上もしくはその中にまたは膜も
しくはポリマー例えばポリアクリルアミドゲル上もしく
はそれらの中に取り込まれるが、イオン交換樹脂上に吸
着され、例えばグルタルアルデヒドのような試薬と交叉
結合されまたは例えばビードのような表面膜中に吸蔵さ
れうる。固定化酵素は該酵素をその後に再使用しうるバ
ッチ法並びに該固定化酵素を含有するカラムに基質を通
過させる連続流法の両手法においてを利に用いることが
できる。
式（Ｉ）の化合物中に存在する場合の基Ｒ５はアシル基
例えば式Ｒ’ＣＯ−またはＲ’０ＣＯ−またはＲ７０Ｃ
５−（ここでＲ７は脂肪族、芳香脂肪族または芳香族基
例えばアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアル
キル、アルアルキルもしくはアリール基である）、ホル
ミル基、上述したＲ７で定義したような基Ｒ８、基Ｒ’
５Ｏ２−（ここでＲ９はＣ１□アルキルまたはＣ６−ｔ
ｏアリール基である）、シリル基、環式または非環式ア
セタール基、基−Ｃｏ（ＣＨ２）ｎｃＯ□Ｒ” （ここ
でＲＩＯは水素原子またはＲ７について前述した基であ
りそしてｎは０、ｌまたは２を示す）または基Ｒ”Ｒ１
２ＮＣＯ−（ここでＲ１１およびＲ１２はそれぞれ独立
して水素原子もしくはＣ１□アルキル基を示す）を表す
ことができる。
例えば式Ｒ’ＣＯ−またはＲ’０ＣＯ−またはＲ７０Ｃ
５−（ここでＲ７は脂肪族、芳香脂肪族または芳香族基
例えばアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアル
キル、アルアルキルもしくはアリール基である）、ホル
ミル基、上述したＲ７で定義したような基Ｒ８、基Ｒ’
５Ｏ２−（ここでＲ９はＣ１□アルキルまたはＣ６−ｔ
ｏアリール基である）、シリル基、環式または非環式ア
セタール基、基−Ｃｏ（ＣＨ２）ｎｃＯ□Ｒ” （ここ
でＲＩＯは水素原子またはＲ７について前述した基であ
りそしてｎは０、ｌまたは２を示す）または基Ｒ”Ｒ１
２ＮＣＯ−（ここでＲ１１およびＲ１２はそれぞれ独立
して水素原子もしくはＣ１□アルキル基を示す）を表す
ことができる。
Ｒ７またはＲ８かアルキル基である場合、それらは例え
ばさらにまた置換されていてもよいｃｌ−８アルキル基
例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｌ−プロピル、
ｎ−ブチル、１−ブチル、ｔ−ブチルまたはｎ−ヘプチ
ルであることができる。Ｒ７が置換されたアルキル基で
ある場合、それは例えば１個またはそれ以上例えば２個
または３個のハロゲン原子（例えば塩素もしくは臭素原
子）またはカルボキシ、Ｃ１−４アルコキシ（例えばメ
トキシ、エトキシ）、フェノキシまたはシリルオキシ基
によって置換されうる。Ｒ８が置換されたアルキル基で
ある場合、それはシクロアルキル例えばシクロプロピル
基によって置換されうる。
ばさらにまた置換されていてもよいｃｌ−８アルキル基
例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｌ−プロピル、
ｎ−ブチル、１−ブチル、ｔ−ブチルまたはｎ−ヘプチ
ルであることができる。Ｒ７が置換されたアルキル基で
ある場合、それは例えば１個またはそれ以上例えば２個
または３個のハロゲン原子（例えば塩素もしくは臭素原
子）またはカルボキシ、Ｃ１−４アルコキシ（例えばメ
トキシ、エトキシ）、フェノキシまたはシリルオキシ基
によって置換されうる。Ｒ８が置換されたアルキル基で
ある場合、それはシクロアルキル例えばシクロプロピル
基によって置換されうる。
Ｒ７およびＲ８がアルケニルまたはアルキニル基である
場合、それらは２〜８個の炭素原子を有するのが好まし
い。Ｒ７およびＲ８がシクロアルキル基である場合、そ
れらは例えばＣ３−１２シクロアルキル例えばＣ３−７
シクロアルキル例えばシクロペンチル基であるのがよい
。
場合、それらは２〜８個の炭素原子を有するのが好まし
い。Ｒ７およびＲ８がシクロアルキル基である場合、そ
れらは例えばＣ３−１２シクロアルキル例えばＣ３−７
シクロアルキル例えばシクロペンチル基であるのがよい
。
Ｒ７およびＲ８がアラルキル基である場合それらはアル
キル部分に１〜６個の炭素原子を有するのが好ましく、
そしてアリール基は炭素環式または複素環式であること
かできかつ４〜１５個の炭素原子を有するのが好ましく
例えば例とじてはフェニル基を挙げることかできる。こ
のような基の例としてはフェンＣ１−６アルキル例えば
ベンジル基を挙げることができる。
キル部分に１〜６個の炭素原子を有するのが好ましく、
そしてアリール基は炭素環式または複素環式であること
かできかつ４〜１５個の炭素原子を有するのが好ましく
例えば例とじてはフェニル基を挙げることかできる。こ
のような基の例としてはフェンＣ１−６アルキル例えば
ベンジル基を挙げることができる。
Ｒ７およびＲ８がアリール基である場合それらは炭素環
式または複素環式であることができかつ４〜１５個の炭
素原子を有するのが好ましい。例としてはフェニル基が
挙げられる。
式または複素環式であることができかつ４〜１５個の炭
素原子を有するのが好ましい。例としてはフェニル基が
挙げられる。
Ｒ５が基Ｒ９５Ｏ２−である場合それは例えばメチルス
ルホニルまたはｐ−トルエンスルホニル基であるのがよ
い。
ルホニルまたはｐ−トルエンスルホニル基であるのがよ
い。
Ｒ５が環状アセタール基である場合それはテトラヒドロ
ピラニル基の場合のように例えば５〜７環負を有するこ
とができる。
ピラニル基の場合のように例えば５〜７環負を有するこ
とができる。
Ｒ５がシリル基を表すかまたはＲ７がシリルオキシ置換
基を含有する場合には、該シリル基は同一または相異な
ることができそしてアルキル、アルケニル、アルコキシ
、シクロアルキル、アラルキル、アリールおよびアリー
ルオキシ基から選択される３個の基を担持することがで
きる。
基を含有する場合には、該シリル基は同一または相異な
ることができそしてアルキル、アルケニル、アルコキシ
、シクロアルキル、アラルキル、アリールおよびアリー
ルオキシ基から選択される３個の基を担持することがで
きる。
このような基は前述の定義を有することができ、特に例
としてはメチル、ｔ−ブチルおよびフェニル基を挙げる
ことができる。このようなシリル基の特に好ましい例は
トリメチルシリルおよびｔ−ブチルジメチルシリルであ
る。
としてはメチル、ｔ−ブチルおよびフェニル基を挙げる
ことができる。このようなシリル基の特に好ましい例は
トリメチルシリルおよびｔ−ブチルジメチルシリルであ
る。
Ｒ５が基−Ｃｏ（ＣＨ２）。Ｃ０２Ｒ１０を示す場合そ
れは例えば基−ＣＯＣ０２Ｒ”または−Ｃ，Ｏ（、Ｈ２
ＣＨ２Ｃ０２ＲＩＣ′（、： コでＲＩ Ｇは水素原子
またはＣｌ−４アルキル基（例えばメチルもしくはエチ
ル）を示す）であることができる。
れは例えば基−ＣＯＣ０２Ｒ”または−Ｃ，Ｏ（、Ｈ２
ＣＨ２Ｃ０２ＲＩＣ′（、： コでＲＩ Ｇは水素原子
またはＣｌ−４アルキル基（例えばメチルもしくはエチ
ル）を示す）であることができる。
Ｒ５が基Ｒ”Ｒ１２ＮＧＯ−を示す場合、Ｒ１１および
Ｒ１２は例えばそれぞれ独立していて、水素原子または
メチルもしくはエチル基であることができる。
Ｒ１２は例えばそれぞれ独立していて、水素原子または
メチルもしくはエチル基であることができる。
Ｒ６か０１−、アルキル基である場合それは例えばメチ
ル、エチル、ｎ−プロピル、ｌ−プロピル、。−ブチル
、１−ブチルまたはｔ−ブチル基であることができるが
、メチル基が好ましい。
ル、エチル、ｎ−プロピル、ｌ−プロピル、。−ブチル
、１−ブチルまたはｔ−ブチル基であることができるが
、メチル基が好ましい。
Ｒ６がＣａ−５アルケニル基を示す場合それは例えばア
リル基であることができる。
リル基であることができる。
本発明方法によって製造されうる式（Ｉ）の好ましい化
合物はＲ１がイソプロピルである化合物からなる。
合物はＲ１がイソプロピルである化合物からなる。
本発明方法によって製造されうる式（Ｉ）の重要な化合
物としてはＲ２がヒドロキシまたはエトキシ基を示しそ
してＲ３が水素原子を示すか：またはＲ２およびＲ３が
それぞれ水素原子を示すか；またはＲ２およびＲ３がそ
れらの結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ−０、
＞ｃ＝ｃｎ２または＞Ｃ＝ＮＯＣＨ３を示ず化合物を挙
げることができる。
物としてはＲ２がヒドロキシまたはエトキシ基を示しそ
してＲ３が水素原子を示すか：またはＲ２およびＲ３が
それぞれ水素原子を示すか；またはＲ２およびＲ３がそ
れらの結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ−０、
＞ｃ＝ｃｎ２または＞Ｃ＝ＮＯＣＨ３を示ず化合物を挙
げることができる。
本発明方法によって製造されうる特に重要な式（Ｉ）の
化合物は、 Ｒ１が゛イソプロピルであり、Ｒ２およびＲ３がそれら
の結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝ＮＯＣＨ
３を示しそしてＲ４が水素原子である化合物、 Ｒ１かイソプロピルでありそしてＲ２、Ｒ３およびＲ′
か水素原子である化合物並びに Ｒ１かイソプロピルであり、Ｒ２がヒドロキシでありそ
してＲ３およびＲ４か水素原子である化合物である。
化合物は、 Ｒ１が゛イソプロピルであり、Ｒ２およびＲ３がそれら
の結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝ＮＯＣＨ
３を示しそしてＲ４が水素原子である化合物、 Ｒ１かイソプロピルでありそしてＲ２、Ｒ３およびＲ′
か水素原子である化合物並びに Ｒ１かイソプロピルであり、Ｒ２がヒドロキシでありそ
してＲ３およびＲ４か水素原子である化合物である。
Ｒ１がメチル、エチルまたはイソプロピル基であり Ｒ
２がヒドロキシル基でありモしてＲ３力水素原子である
式（ＩＩ）の化合物は英国特許明細書第２１８７７４２
Ａ号に記載されている。その他の式（ＩＩ）の化合物は
ヨーロッパ特許明細舎弟０２３８２５８− Ａ１号に記
載されている。
２がヒドロキシル基でありモしてＲ３力水素原子である
式（ＩＩ）の化合物は英国特許明細書第２１８７７４２
Ａ号に記載されている。その他の式（ＩＩ）の化合物は
ヨーロッパ特許明細舎弟０２３８２５８− Ａ１号に記
載されている。
以下に本発明を製造例および実施例によって説明する。
全ての温度は０Ｃでありａ′″はリットルを意味する。
以下の実施例中、ｈｐｌｃ （高性能液体クロマトグラ
フィー）は特記しない限り０．５ｍＱ１分の速度で溶離
剤としてアセトニトリル／水（３、１）を用いる５ｐｈ
ｅｒｉｓｏｒｂ Ｓ５０ＤＳ−２（１５０ｍｍ Ｘ ２
．１ｍｍ）のカラム上で実施された。カラム流出液は質
量スペクトル特性記述用のＥ、１．条件下においてフイ
ンニガン（Ｆｉｎｎｉｇａｎ）移動ベルトでフィンニガ
ンＭＡＴ ４５００質量分析計に連結された。以下に製
造の化合物は知られた親、パフアクタ−″すなわちファ
クターＡに基づいて命名されている。ファクターＡ（英
国特許明細書第２１６６４３６号に記載）はＲ１がイソ
プロピル基であり Ｒ２がヒドロキシル基でありそして
Ｒ３およびＲ４が水素原子である式（Ｉ）の化合物であ
る。
フィー）は特記しない限り０．５ｍＱ１分の速度で溶離
剤としてアセトニトリル／水（３、１）を用いる５ｐｈ
ｅｒｉｓｏｒｂ Ｓ５０ＤＳ−２（１５０ｍｍ Ｘ ２
．１ｍｍ）のカラム上で実施された。カラム流出液は質
量スペクトル特性記述用のＥ、１．条件下においてフイ
ンニガン（Ｆｉｎｎｉｇａｎ）移動ベルトでフィンニガ
ンＭＡＴ ４５００質量分析計に連結された。以下に製
造の化合物は知られた親、パフアクタ−″すなわちファ
クターＡに基づいて命名されている。ファクターＡ（英
国特許明細書第２１６６４３６号に記載）はＲ１がイソ
プロピル基であり Ｒ２がヒドロキシル基でありそして
Ｒ３およびＲ４が水素原子である式（Ｉ）の化合物であ
る。
中間体 １
５−ケトファクターＡ
これは英国特許明細書第２１８７７４２Ａ号の実施例２
に記載のようにして製造された。
に記載のようにして製造された。
中間体 ２
５．２３−ジケトファクターＡ
これはヨーロッパ特許明細舎弟２３８２５８ Ａ１号の
実施例２に記載のようにして製造された。
実施例２に記載のようにして製造された。
−２３＝
中間体 ３
５〜ケトファクターＡ２３〜エチルエーテルこれはヨー
ロッパ特許明細舎弟２３８２５８ ＡＩ号の実施例７に
記載のようにして製造された。
ロッパ特許明細舎弟２３８２５８ ＡＩ号の実施例７に
記載のようにして製造された。
中間体 ４
５−ケｉ・ファクターＡ２３−ヘミオキザレート５−ケ
トファクターＡ （３３０＋＋＋ｇ）、微粉化炭酸カル
シウム（２００＋＋＋ｇ）および塩化オキザリル（０，
０７ｍ１２）を乾燥ジクロロメタン（５＋ｎ＋２）中に
おい−ｒｌＯ分間−緒に撹拌した。次に２Ｎ塩酸Ｃ４ｍ
Ｑ）ついで５分後に酢酸エチルを加えた。有機相を集め
、乾燥しそして蒸発させ、その残留物をジイソプロピル
エーテル中に溶解した。この溶液を石油エーテル（沸点
４０〜６０°）で希釈して標記化合物を白色の綿状固形
物（２６２ｍｇ）として沈澱させｌこ。
トファクターＡ （３３０＋＋＋ｇ）、微粉化炭酸カル
シウム（２００＋＋＋ｇ）および塩化オキザリル（０，
０７ｍ１２）を乾燥ジクロロメタン（５＋ｎ＋２）中に
おい−ｒｌＯ分間−緒に撹拌した。次に２Ｎ塩酸Ｃ４ｍ
Ｑ）ついで５分後に酢酸エチルを加えた。有機相を集め
、乾燥しそして蒸発させ、その残留物をジイソプロピル
エーテル中に溶解した。この溶液を石油エーテル（沸点
４０〜６０°）で希釈して標記化合物を白色の綿状固形
物（２６２ｍｇ）として沈澱させｌこ。
（ａ ）に４＋１２０°（ｃ Ｏ，６、ＣＨｃＱ３）、
λＥｔ０Ｈ２４ｏｎｍａｘ （Ｅ’ ４２５）、ｖ ｍａｘ（ＣＨＢｒ３） ３４４
０（ＯＨ）、１８００（ＧＯ，Ｈ二量体）、１７２０（
エステル）、および１６７６ｃｍ ’Ｃａ 。
λＥｔ０Ｈ２４ｏｎｍａｘ （Ｅ’ ４２５）、ｖ ｍａｘ（ＣＨＢｒ３） ３４４
０（ＯＨ）、１８００（ＧＯ，Ｈ二量体）、１７２０（
エステル）、および１６７６ｃｍ ’Ｃａ 。
β−不飽和ケトン）、ａ （ｃＤｃＱ３） ： ６．５
２（狭イｍ。
２（狭イｍ。
ＩＨ）、５．０７（ｑ、 ３Ｈｚ、 ＩＨ）、３．７
８（ｓ、 ＩＨ）、１．８３（Ｓ。
８（ｓ、 ＩＨ）、１．８３（Ｓ。
３Ｈ）、および０．７１（ｄ、 ７Ｈ，、３Ｈ）。
中間体 ５
５−ケト２３（Ｅ）−メトキシイミノファクターＡこれ
はヨーロッパ特許明細舎弟２３８２５８ Ａ１号の実施
例１６に記載のようにして製造された。
はヨーロッパ特許明細舎弟２３８２５８ Ａ１号の実施
例１６に記載のようにして製造された。
実施例 １
（ａ）ストレプトマイセスサーモアルカエンシスＮＣＩ
Ｂ １２２１３の胞子懸濁液（０，１ｍＱ）［英国特許
明細書第２１８７７４２Ａ号の実施例２においてストシ
ブ）・マイセスサーモアルカエンシスＮＣＩＢ １２０
１５に関して記載されているようにして調製された〕を
用いて下記の培地Ａ （２，５ｍ４）培地Ａ
〔 Ｄ−グルコース
２．５麦芽デキストリンＭＤ ３０Ｅ（Ｒｏｑｕｅｔ
ｔｅ（英国）社製） ２５．０Ａｒｋａｓｏｙ ５
０（英国のＡｒｋａｄｙ社製）
１２．５糖蜜 １．５ に２ＨＰ０． ０．１２５炭酸カル
シウム １．２５Ｍ
０ＰＳ（３−（Ｎ −−ＥルホＩＪ ｙ ）プロパンス
ルホン酸） ２１．０〔蒸留水を加えて全量をＩ＋
２にし、ｐＨはオートクレーブに入れる前に５Ｎ Ｎａ
ＯＨで６．５に調整する〕を含有するフラスコに接種し
た。
Ｂ １２２１３の胞子懸濁液（０，１ｍＱ）［英国特許
明細書第２１８７７４２Ａ号の実施例２においてストシ
ブ）・マイセスサーモアルカエンシスＮＣＩＢ １２０
１５に関して記載されているようにして調製された〕を
用いて下記の培地Ａ （２，５ｍ４）培地Ａ
〔 Ｄ−グルコース
２．５麦芽デキストリンＭＤ ３０Ｅ（Ｒｏｑｕｅｔ
ｔｅ（英国）社製） ２５．０Ａｒｋａｓｏｙ ５
０（英国のＡｒｋａｄｙ社製）
１２．５糖蜜 １．５ に２ＨＰ０． ０．１２５炭酸カル
シウム １．２５Ｍ
０ＰＳ（３−（Ｎ −−ＥルホＩＪ ｙ ）プロパンス
ルホン酸） ２１．０〔蒸留水を加えて全量をＩ＋
２にし、ｐＨはオートクレーブに入れる前に５Ｎ Ｎａ
ＯＨで６．５に調整する〕を含有するフラスコに接種し
た。
この培養液を２５０ｒｅｖ／分で作動する回転振とう器
上で３１’において４日間インキュベートし、その際に
ジメチルスルホキシド（０，０５ｍ０．）中に入れた中
間体１ （１ｍｇ）を加えた。この培養液をさらに３１
’で２４時間インキュベートシついで遠心分離（約１１
００００ｒｐ／ １０分）し、上澄み液を取り出しそし
て残留物にメタノール（１，ｌｌ１ｍｆｆ）ヲ加えた。
上で３１’において４日間インキュベートし、その際に
ジメチルスルホキシド（０，０５ｍ０．）中に入れた中
間体１ （１ｍｇ）を加えた。この培養液をさらに３１
’で２４時間インキュベートシついで遠心分離（約１１
００００ｒｐ／ １０分）し、上澄み液を取り出しそし
て残留物にメタノール（１，ｌｌ１ｍｆｆ）ヲ加えた。
得られた懸濁液を室温に１時間放置しついで遠心分離し
た。上澄み液をｈｐｌｃにより分析したところ、この試
験試料中には式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基で
あり Ｒ２がヒドロキシル基であり、Ｒ３が水素原子で
ありモしてＲ４が水素原子である化合物〔３，３％−生
産物に変換された添加出発物質の％として表示〕の存在
が英国特許明細書第２１６６４３６号に記載の基準試料
との比較によって示された。
た。上澄み液をｈｐｌｃにより分析したところ、この試
験試料中には式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基で
あり Ｒ２がヒドロキシル基であり、Ｒ３が水素原子で
ありモしてＲ４が水素原子である化合物〔３，３％−生
産物に変換された添加出発物質の％として表示〕の存在
が英国特許明細書第２１６６４３６号に記載の基準試料
との比較によって示された。
（ｂ）ストレプトマイセスアベルミチリスＡＴＣＣ３１
７８０および中間体１を用いて前記（ａ）の実験を繰り
返して抽出物を得、それをｈｐｌｃ分析にかけたところ
式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基であり Ｒ２が
ヒドロキシル基であり Ｒ３が水素原子でありそしてＲ
４が水素原子である化合物〔８，６％−前記（ａ）の場
合と同じ基準の％表示〕の存在が示された。
７８０および中間体１を用いて前記（ａ）の実験を繰り
返して抽出物を得、それをｈｐｌｃ分析にかけたところ
式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基であり Ｒ２が
ヒドロキシル基であり Ｒ３が水素原子でありそしてＲ
４が水素原子である化合物〔８，６％−前記（ａ）の場
合と同じ基準の％表示〕の存在が示された。
（ｃ）前記（ａ）と同様にして中間体ｌをストレプトマ
イセスサーモアルカエンシスＮＣＩＢ １２２１２．！
＝ともにインキュベートしたが、ただしその培養液は新
しい部分の前記同一培地（２，５ｍ１２）に接種するの
に前記のようにしてインキュベートした３日後培養液を
使用（０，１ｍ０．を移した）して培地Ａに加えられた
胞子懸濁液から調製された。２日後この上記培養液に中
間体ｌ （ジメチルスルホキシド０．０５ｍ（２中に入
れたｌ ｍｇ）を加えそしてその培養液をさらに２日間
インキュベートシ、ついで採集し、抽出しそして前記（
ａ）のようにして分析した。試験試料のｈｐｌｃ分析は
式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基であり Ｒ２が
ヒドロキシル基であり Ｒ１１が水素原子でありそして
Ｒ４が水素原子である化合物〔５，１％−％は前記（ａ
）の場合と同一の基準により表示されている〕の存在を
示した。
イセスサーモアルカエンシスＮＣＩＢ １２２１２．！
＝ともにインキュベートしたが、ただしその培養液は新
しい部分の前記同一培地（２，５ｍ１２）に接種するの
に前記のようにしてインキュベートした３日後培養液を
使用（０，１ｍ０．を移した）して培地Ａに加えられた
胞子懸濁液から調製された。２日後この上記培養液に中
間体ｌ （ジメチルスルホキシド０．０５ｍ（２中に入
れたｌ ｍｇ）を加えそしてその培養液をさらに２日間
インキュベートシ、ついで採集し、抽出しそして前記（
ａ）のようにして分析した。試験試料のｈｐｌｃ分析は
式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基であり Ｒ２が
ヒドロキシル基であり Ｒ１１が水素原子でありそして
Ｒ４が水素原子である化合物〔５，１％−％は前記（ａ
）の場合と同一の基準により表示されている〕の存在を
示した。
実施例 ２
（ａ）ストレプトマイセスサーモアルカエンシスＮＣＩ
Ｂ １２２１３の胞子懸濁液〔実施例１に記載のように
して調製した〕を用いて培地Ａ （２５ｍｆｆ）を含有
する２５０ｍ１２振とうフラスコに接種した。この培養
液を２５０ｒｅｖ／分で作動する回転振とぅ器上におい
て２８°で２日間インキュベートしｊこ。２日後この培
養液の一部分（５１１１１２）を５０ｍ（２振とぅフラ
スコに加えそしてメタノール中に溶解した中間体の２０
ｍｇ／ｍＱ溶液（５０μＱ）を加えた。この培養液を同
一条件下でさらに２〜３日間インキュベートしついで等
容量のメタノールで処理した。
Ｂ １２２１３の胞子懸濁液〔実施例１に記載のように
して調製した〕を用いて培地Ａ （２５ｍｆｆ）を含有
する２５０ｍ１２振とうフラスコに接種した。この培養
液を２５０ｒｅｖ／分で作動する回転振とぅ器上におい
て２８°で２日間インキュベートしｊこ。２日後この培
養液の一部分（５１１１１２）を５０ｍ（２振とぅフラ
スコに加えそしてメタノール中に溶解した中間体の２０
ｍｇ／ｍＱ溶液（５０μＱ）を加えた。この培養液を同
一条件下でさらに２〜３日間インキュベートしついで等
容量のメタノールで処理した。
得られた懸濁液を１時間振とうしそして遠心分離した。
上澄み液をｈｐｌｃ／質量分析法によって分析した。保
持時間３分でのピークは、英国特許明細書第２１７６１
８２号に記載の基準試料との比較により式（１）におい
てＲ１がイソプロピルであり、Ｒ２およびＲ３がそれら
の結合している炭素原子と一緒になって〉Ｃ−０を示し
そしてＲ４が水素原子である化合物に特徴的である質量
スペクトルを有した。
持時間３分でのピークは、英国特許明細書第２１７６１
８２号に記載の基準試料との比較により式（１）におい
てＲ１がイソプロピルであり、Ｒ２およびＲ３がそれら
の結合している炭素原子と一緒になって〉Ｃ−０を示し
そしてＲ４が水素原子である化合物に特徴的である質量
スペクトルを有した。
（ｂ）ストレプトマイセスサーモアルカエンシスＮＣＩ
Ｂ １２２１３および中間体３を用いて前記（ａ）の実
験を繰り返して抽出物を得、それをｈｐｌｃ／質量分光
計分析（溶離剤としてアセトニトリル／水９：１を使用
）したところ式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基で
あり、Ｒ２がエトキシ基であり、Ｒ３が水素原子であり
そしてＲ４が水素原子である化合物の存在が英国特許明
細書第２１７６１８２号に記載の基準試料との比較によ
って示されｌこ。
Ｂ １２２１３および中間体３を用いて前記（ａ）の実
験を繰り返して抽出物を得、それをｈｐｌｃ／質量分光
計分析（溶離剤としてアセトニトリル／水９：１を使用
）したところ式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基で
あり、Ｒ２がエトキシ基であり、Ｒ３が水素原子であり
そしてＲ４が水素原子である化合物の存在が英国特許明
細書第２１７６１８２号に記載の基準試料との比較によ
って示されｌこ。
（Ｃ）ストレプトマイセスサーモアルカエンシスＮＣＩ
Ｂ １２２１３および中間体４を用いて前記（ａ）の
実験を繰り返して抽出物を得、それをｈｐｌｃ分析した
ところ式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基であり、
Ｒ２が基−０ＣＯＣＯ２Ｈであり、Ｒ３が水素原子であ
りそしてＲ４が水素原子である化合物の存在が英国特許
明細書第２１７６１８２号に記載の基準試料との比較に
よって示された。
Ｂ １２２１３および中間体４を用いて前記（ａ）の
実験を繰り返して抽出物を得、それをｈｐｌｃ分析した
ところ式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基であり、
Ｒ２が基−０ＣＯＣＯ２Ｈであり、Ｒ３が水素原子であ
りそしてＲ４が水素原子である化合物の存在が英国特許
明細書第２１７６１８２号に記載の基準試料との比較に
よって示された。
（ｄ）ストレプトマイセスサーモアルカエンシスＮＣＩ
Ｂ １２２１３および中間体５を用いて前記（ａ）の
実験を繰り返して抽出物を得、それをｈｐｌｃ分析した
ところ式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基であり、
Ｒ２およびＲ３がそれらの結合している炭素原子と一緒
になって＞Ｃ−Ｎ０ＣＨ８を示しそしてＲ１が水素原子
である化合物の存在が英国特許明細書第２１９２６３０
Ａ号に記載の基準試料との比較によって示された。
Ｂ １２２１３および中間体５を用いて前記（ａ）の
実験を繰り返して抽出物を得、それをｈｐｌｃ分析した
ところ式（Ｉ）においてＲ１がイソプロピル基であり、
Ｒ２およびＲ３がそれらの結合している炭素原子と一緒
になって＞Ｃ−Ｎ０ＣＨ８を示しそしてＲ１が水素原子
である化合物の存在が英国特許明細書第２１９２６３０
Ａ号に記載の基準試料との比較によって示された。
分析用ｈｐｌｃから単離された試料のＥ、 ！、質量分
光測定からは６３９において分子イオンが得られそして
６２Ｌ ５２７．５１１．４９６．４４８．４３４．３
６８．２６４．２４８および１５１において特徴的な断
片が得られた。
光測定からは６３９において分子イオンが得られそして
６２Ｌ ５２７．５１１．４９６．４４８．４３４．３
６８．２６４．２４８および１５１において特徴的な断
片が得られた。
特許出願人 アメリカン・サイアナミツド・カンパニ
ー
ー
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）下記式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） 〔式中、Ｒ＾１はメチル、エチルまたはイソプロピル基
であり、Ｒ＾２は水素原子または基ＯＲ＾５（ここでＯ
Ｒ＾５はヒドロキシル基または２５個までの炭素原子を
有する置換ヒドロキシル基である）を示しそしてＲ＾３
は水素原子を示すかまたはＲ＾２およびＲ＾３はこれら
が結合している炭素原子と一緒になって▲数式、化学式
、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があります
▼または▲数式、化学式、表等があります▼ （ここでＲ＾６は水素原子、Ｃ＿１＿−＿８アルキル基
またはＣ＿３＿−＿８アルケニル基を示しそして該基▲
数式、化学式、表等があります▼ＮＯＲ＾６はＥ配置し
ている）を示す〕の化合物を適当な培地中で微生物また
は該微生物より誘導される酵素または変換を行うことが
できる関係する酵素を含有する微生物から誘導される調
製物の存在下にインキュベートすることからなる下記式
I ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中Ｒ＾１、Ｒ＾２およびＲ＾３は前述の定義を有し
そしてＲ＾４は水素原子またはメチル基である〕の化合
物の製造方法。 ２）微生物がストレプトマイセスサーモアルカエンシス
、ストレプトマイセスシアネオグリセウスノンシアノゲ
ヌス、ストレプトマイセスアベルミチリスまたはストレ
プトマイセスヒグロスコピカス亜種オーレオラクリモサ
スの菌株である請求項１記載の方法。 ３）微生物がストレプトマイセスサーモアルカエンシス
ＮＣＩＢ１２２１２および１２２１３並びにこれら菌株
の突然変異体、ストレプトマイセスアベルミチリスＡＴ
ＣＣ３１２７２または３１７８０またはストレプトマイ
セスヒグロスコピカス亜種オーレオラクリモサスＦＥＲ
ＭＰ１４３８である請求項１記載の方法。 ４）同化性の炭素源、窒素源および無機塩の存在下に該
微生物を含有する発酵培地中に適当な溶媒中における式
（II）の化合物を供給することからなる請求項１記載の
方法。 ５）５．５〜７．５のｐＨおよび２５〜４０℃の温度に
おいて実施する請求項１記載の方法。 ６）式（ I ）および式（II）においてＲ＾１がイソプ
ロピル基である請求項１記載の方法。 ７）式（ I ）および式（II）においてＲ＾２がヒドロ
キシまたはエトキシ基でありそしてＲ＾３が水素原子で
あるか；またはＲ＾２およびＲ＾３が各々水素原子を表
すか；またはＲ＾２およびＲ＾３がこれらの結合してい
る炭素原子と一緒になって▲数式、化学式、表等があり
ます▼、▲数式、化学式、表等があります▼または▲数
式、化学式、表等があります▼を表す請求項１記載 の方法。 ８）式（ I ）において、 Ｒ＾１がイソプロピルであり、Ｒ＾２およびＲ＾３がこ
れらの結合している炭素原子と一緒になって▲数式、化
学式、表等があります▼を表しそしてＲ＾４が水素原子
であるか； Ｒ＾１がイソプロピルであり、Ｒ＾２、Ｒ＾３およびＲ
＾４が水素原子であるか；または Ｒ＾１がイソプロピルであり、Ｒ＾２がヒドロキシであ
りそしてＲ＾３およびＲ＾４が水素原子である；請求項
１記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
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| GB888805978A GB8805978D0 (en) | 1988-03-14 | 1988-03-14 | Process |
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